第三章 研究方法與步驟
第五節 實施方法與步驟
本研究受試者必須於每階段增補前、後（間隔五週）採集空腹血液，進行安 靜狀態之健康效益評估，隨後進行漸增負荷運動至力竭，在力竭瞬間及運動後 24小時（運動隔日），採集血液樣本進行抗氧化能力與血液生化觀察值分析。
一、實驗前準備階段 (一) 儀器之校正與準備
1. 原地固定型自行車：測驗前先調整受試者座椅高度，以受試者能將自行車 曲柄踩踏至與地面垂直，且膝部能保持自然微彎之舒適狀態為標準，並記 錄座椅高度，之後測驗均固定此座椅高度。
2. 血液採集相關材料：本研究靜脈血採集由合格專業人員採用留置針及空針 等器具進行採集，實驗前確認備妥酒精棉、採血針、血液收集試管，並確 認無菌醫材之包材完整性、清潔與可用性。
30
3. 運動至力竭判定相關器具：本研究運動至力竭判定需使用伯格自覺量表與 無線心跳錶及一般身體量測所需之血壓計、體脂計，實驗前確認數量充足、
完整可用與清潔乾淨。
(二) 受試者之準備
實驗前向受試者說明整個實驗目的及流程與方法，並發給每位受試者同意 書及受試者須知後，回答受試者所提出之疑問，請受試者在個資授權書及同意 書上簽名，表示願意參加本實驗。
每次測驗前再向受試者詳述測驗程序、方法及相關細節及注意事項，實驗 期間隨時觀察受試者健康狀況及回答受試者的疑問，並要求受試者：
1. 實驗期間禁止喝酒、吸煙及不得服用其他抗氧化或運動增補劑，盡量維持 平常之飲食與作息習慣。
2. 測驗前24小時避免飲用含咖啡因之飲料，如：咖啡、茶及其他，並禁止從 事任何過度激烈運動。
3. 每次測驗前1日夜間22：00時後禁食（空腹至少8小時），測驗當日07:00時
穿著運動服裝到達實驗地點，進行血液樣品採集及一般身體量測。
4.全體受試者先實施首次評估，於增補前測量含力竭性耐力運動測試評估後，
再以隨機方式均分為蝦紅素組與安慰劑組。
5. 第一階段增補五週後，請受試者繳回剩餘的實驗食品，而後暫停食用五週，
確保食用實驗品代謝排空。將受試者交叉互換組別，再發給第二階段測試 食品與進行增補實驗之前、後測。
二、實驗步驟
(一) 安靜狀態量測：
1. 基礎身體量測:受試者到達實驗室先確認基本資料表，休息10分鐘後實施 收縮壓、舒張壓、心跳等檢測及BMI、體重、體脂肪、基礎代謝率等量測。
2. 血液樣本採集：由合格專業人員以留置針採集靜脈血，收集檢測空腹時之
31
血糖、尿酸、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、三酸 甘油酯、乳酸、丙二醛等分析樣品。
(二)運動至力竭測驗
1. 運動前安靜狀態測量：受測者於空腹血液樣本採集完成後，於不受干擾 的環境休息10分鐘，測量血壓、心跳率。
2. 運動至力竭:先將腳踏車座椅、把手調整至適合受試者的位置，遞增負荷 運動測驗以每分鐘增加負荷的方式進行，起始負荷為50w、每分鐘增加15w，
直到受試者接近衰竭為止。運動力竭判定的標準為下列三項條件中有一個 達到，包括(1)受試者無法維持每分鐘所設定之負荷達10秒以上；(2)心跳 率達到最大心跳率之90％(最大心跳率＝220－年齡)；(3)受試者運動伯格 自覺量表（Borg's scale）達18以上。
運動自覺量表 6
7 非常非常輕 8
9 非常輕
10
11 頗輕
12
13 有些累
14
15 累
16
17 非常累
18
19 非常非常累 20
3. 運動至力竭瞬間測驗：受試者運動至力竭於原地進行動態恢復及休息，
32
並由靜脈留置針採集MDA、血糖、尿酸、三酸甘油酯、乳酸等檢驗血液 樣品；並於休息30分鐘後測量乳酸、血壓、脈搏、體重及基礎代謝率。
4. 運動隔日檢測：運動至力竭收集血液樣本後，給予受試者飲食及依組別 開始補充實驗物質，當日受試者恢復日常作息與飲食，惟夜間22：00 時起再次禁食，隔日07:00時返回實驗室，再次採集空腹血液樣本，檢 驗丙二醛、尿酸及血糖。
(三) 血液樣本分析
本研究受試者於每一階段實驗增補蝦紅素或安慰劑之增補前、後（五週）， 由合格專業人員採集空腹靜脈血，採集血液樣本以每分鐘3000rpm進行10分 鐘之離心，並按檢驗需求分裝於試管、冷藏、盡快送達檢驗單位，各檢驗項目 血液樣本處理方式：
1. 丙二醛（MDA）：以市售試劑組（Cayman, Thiobarbituric Acid Reactive Substances）進行分析。檢測原理是利用TBA與MDA於高溫環境下反應形 成MDA-TBA，透過吸光值檢測含量。其操作方法略以取100μL血漿加入 50μL 8.1% SDS反應10分鐘，依序加入200μL 0.2% BHT、600μL 0.8%
TBA-acetic acid，沸水浴加熱1小時後，冷卻至室溫終止反應，加入400μL Butanol：Pyridine（15：1）混合均勻，於4℃下以3000 rpm離心10分鐘，
回溫至室溫，取上清液測量533 nm吸光值。使用EDTA試管、收集血漿3ml、
冷藏，參考區間男：0.5 ~ 1.2、女：0.4 ~ 1.1 nmol/mL，檢查方法EIA，臨 床意義為活性氧破壞細胞膜與脂質而引發過氧化作用。
2. 血糖（Glucose, Fasting）：使用BECKMAN COULTER Unicel DxC 800分 析儀，氧氣速率法（oxygen rate method）。以NAF管採集血清或血漿0.5 ml，
檢體需在檢體抽取後30分鐘內儘速離心，並取出血清或血漿，以避免細胞 進行葡萄糖代謝（室溫中每小時約會降低約7%的葡萄糖濃度）。
3.尿酸（Uric acid）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）：
33
使用BECKMAN COULTER Unicel DxC 800分析儀，時間終點反應法
（Timed-endpoint method）。以一般血清管採集血清每項0.5 ml檢驗，檢
體不得重複冰凍、解凍。
4.總膽固醇（Total Cholesterol）、三酸甘油酯（Triglyceride；TG）：使用 BECKMAN COULTER Unicel DxC 800分析儀，生化比色法。以一般血清 管採集血清每項0.5 ml檢驗，檢體勿重複冰凍、解凍。
表3-1、血液樣本收集檢體量及容器一覽表
項目 檢體量
(ml) 容器 檢查方法 參考區間
MDA 丙二醛
血漿
( 3 ) EDTA EIA 男:0.5 ~ 1.2
女:0.4 ~ 1.1nmol/mL Glucose, Fasting
飯前血糖
血清
( 0.5 ) NaF 生化比色法 <100 mg/dL Uric acid
尿酸
血清
( 0.5 ) 一般 生化比色法 3.0-7.0 mg/dL Total Cholesterol
總膽固醇
血清
( 0.5 ) 一般 生化比色法 120-200 mg/dL HDL-C
高密度脂蛋白
血清
( 0.5 ) 一般 Direct method
男:≧40 mg/dL 女:≧50 mg/dL LDL-C
低密度脂蛋白
血清
( 0.5 ) 一般 Direct
method ≦130 mg/dL Triglyceride(TG)
三酸甘油酯
血清
( 0.5 ) 一般 生化比色法 <150 mg/dL
(四) 增補方法
受試者在實驗期間維持正常運動、作息與飲食模式，避免攝取其他增補品。
本次實驗，蝦紅素組於每日早晚餐後各增補含8mg蝦紅素膠囊1顆，合計每 日增補蝦紅素16mg；安慰組則以相同方法攝取安慰劑膠囊。增補期間，研究 者以電話聯絡的方式，提醒按時服用，以掌握受試者的增補情況。
34