BAB II TINJAUAN PUSTAKA
H. Kerangka pemikiran
Keterangan : Variable yang diteliti : Variable yang tidak diteliti
BAB III
METODE PENELITIAN A. Jenis penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental dibidang farmasi bahan alam berdasarkan uji mikrobilogi.
B. Waktu dan tempat penelitian
Penelitian ini dilakukan pada tanggal 14 Agustus – 22 Agustus 2019 bertempat di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Akademi Farmasi Santo Fransiskus Xaverius Maumere.
C. Alat dan bahan
1. Alat yang digunakan
Alat yang digunakan antara lain : autoklaf, bunsen, batang pengaduk, bejana maserasi, cawan petri, corong, erlemeyer, gelas ukur, inkubator , jarum ose, jangka sorong, mikro pipet, pinset, rotary evaporator , tabung reaksi, timbangan analitik,blender
2. Bahan yang digunakan
Bahan yang digunakan adalah, sebagai berikut : aluminium foil, aquadest, biakan bakteri Escherichia coli, cefixime 100 mg, daun bidara laut, daun mengkudu, etanol 70 %, kertas saring, borer steril,kertas perkamen, label, medium Nutrien Agar, NaCl fisiologis, BaCl3, H2SO4, spidol.
30
D. Prosedur penelitian
1. Penyiapan sampel penelitian a. Pengambilan sampel
Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) diperoleh di Kelurahan Kota Uneng, Kecamatan Alok, Kabupaten Sikka, Nusa Tenggara Timur. Sampel diambil saat tumbuhan sudah berbuah. Daun yang diambil adalah daun yang sudah tua, tidak berwarna kuning dan tidak ditumbuhi jamur. Pengambilan sampel dilakukan pada pagi hari 08.00 – 10.00
b. Pengolahan sampel
Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) yang telah diambil, disortasi basah, dicuci dibawah air mengalir hingga bersih dan dikeringkan dengan cara dijemur dibawah sinar matahari dan ditutupi dengan kain hitam agar daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) tidak terkena cahaya matahari secara langsung, kemudian diserbukkan dengan cara diblender (Sari,2018).
c. Ekstraksi sampel penelitian dengan cara maserasi
Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) yang telah diserbukkan ditimbang masing - masing sebanyak 250 gram dimasukkan kedalam bejana maserasi lalu ditambahkan etanol sebanyak 2 liter hingga simplisia tersebut terendam, biarkan selama 24 jam ditempat yang tanpa pemaparan
sinar matahari sambil sesekali diaduk, selanjutnya di saring kedalam wadah penampung dan dipisahkan antara ampas dan filtrat. Filtrat yang diperoleh kemudian diuapkan hingga diperoleh ekstrak kental etanol.
2. Pembuatan ekstrak kental bebas etanol
Ekstrak kental etanol yang telah diuapkan ditambahkan dengan aquadest sebanyak 20 ml, kemudian diuapkan sampai kering dan menghasilkan ekstrak kental bebas etanol (Sari,2018).
3. Pembuatan sampel penelitian
Ekstrak kental bebas etanol yang diperoleh kemudian dibuat dalam konsentrasi 5%, 10% dan 15%. Untuk konsentrasi 5% ditimbang sebanyak 0,25 gram kombinasi daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) kemudian dilarutkan dalam 5 ml aquadest, konsentrasi 10% ditimbang 0,5 gram ekstrak dan dilarutkan dalam 5 ml pelarut dan untuk konsentrasi 15% ditimbang 0,75 gram ekstrak kemudian dilarutkan dalam 5 ml aquadest (Sari,2018).
4. Sterilisasi alat
Strelisasi alat dilakukan dengan cara mencuci alat – alat yang diperlukan dengan menggunakan detergen selama 15 – 30 menit. Alat – alat dikeringkan dengan posisi terbalik diudara terbuka. Setelah kering dibungkus dengan kertas perkamen. Alat dan bahan yang akan digunakan dalam suatu uji aktivitas antibakteri harus bebas dari adanya mikroba maka disterilkan terlebih dahulu sebelum digunakan dalam percobaan.
Media pertumbuhan disterilkan di autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit dan alat-alat gelas yang digunakan disterilkan di oven pada suhu 170oC selama 1 jam. Jarum ose dan pinset disterilkan dengan cara dibakar dengan nyala Bunsen (Sari,2018).
5. Pembuatan medium Nutrient Agar
Medium Nutrient Agar adalah media pertumbuhan untuk bakteri yang memiliki konsistensi seperti agar terbuat dari:
- Pepton from meat 5,0 g
- Meat extract 3,0 g
- Agar-agar 12,0 g
- Air suling 1000 mL
Ditimbang 20 g Nutrient Agar, kemudian disuspensikan ke dalam air suling sebanyak 1L, lalu dipanaskan sampai bahan larut sempurna, disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit (Sari,2018)
6. Pembuatan larutan standar Mc. Farland 0,5
Larutan BaCl2 1% sebanyak 0,05 ml dicampur dengan larutan H2SO4
1% sebanyak 9,95 ml dan dikocok homogen (Muhardika, dkk 2017 : 129).
7. Penyiapan mikroba uji a. Pembiakan Bakteri
1) Peremajaan bakteri
Satu koloni bakteri diambil dengan menggunakan jarum ose steril, lalu ditanam pada media Nutrient Agar miring dengan cara
menggores. Kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 370C selama 24 jam (Muhardi, dkk 2017 : 129).
2) Pembuatan suspensi bakteri
Biakan Escherichia coli dalam media Nutrient Agar miring diambil secara aseptik sebanyak satu ose, kemudian dimasukkan dalam 5 mL NaCl fisiologis dan kocok hingga homogen sampai diperoleh kekeruhan yang sesuai dengan standar Mc Farland 1,5 x 108 CFU/ml, kemudian diinkubasi kedalam inkubator pada suhu 370C selama 24 jam (Muhardi, dkk 2017 : 129).
8. Pembuatan kontrol (Kumayas, dkk, 2015 : 36 ) a. Pembuatan kontrol negatif
Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan menggunakan aquadest, dengan cara membuat larutan stok aquadest dengan mengambil sebanyak 5 ml aquadest kemudian dimasukkan kedalam tabung reaksi, tutup dengan aluminium foil. Kontrol negatif digunakan sebagai pembanding dan pelarut untuk pembuatan kontrol positif.
b. Pembuatan kontrol positif
Kontrol positif dibuat dari sediaan obat cefixime 100 mg. Diambil kapsul cefixime dibuka kemasannya kemudian ditimbang serbuknya sebanyak 0,6 g setara dengan 2,5 % larutan cefixime. Kemudian serbuk cefixime dilarutkan dalam 10 ml aquadest lalu dikocok homogen.
9. Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi lubang sumuran. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan tiga kali pengulangan,dimana setiap cawan petri yang telah diinokulasikan bakteri dibuat 5 lubang sumuran di daerah kontrol positif, kontrol negatif, konsentrasi 5%, 10%, dan 15% dengan diameter 5 mm dan kedalaman 4 mm menggunakan borer steril. Kemudian pada masing – masing lubang sumuran dimasukan 5 ҏL berbagai konsentrasi ekstrak, kontrol positif, kontrol negatif. Inkubasi dilakukan pada suhu 370C selama 24 jam. Diukur diameter daerah hambat (zona bening) dengan menggunakan jangka sorong di sekitar lubang sumuran (Nurjannah,2017).
E. Analisis data
Data dari hasil pengujian uji aktivitas kombinasi daun bidara laut (Ziziphus mauritiana L.) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) terhadap diameter zona hambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dianalisis secara statistika menggunakan metode regreasi linear sederhana.
hubungan antara kosentarsi (%) dan zona hambat (mm)
Tabel 4.1 Hasil penelitian uji aktivitas kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) terhadap
(Sumber : Data Primer Penelitian)
Gambar 4.1 Grafik hubungan konsentrasi (%) dengan diameter zona hambat (mm)
(Sumber : Data Primer Penelitian)
36
B. Pembahasan
Bakteri Escherichia coli merupakan organisme penghuni usus besar, hidupnya dalam kolon manusia dan diduga berperan dalam pembentukan vitamin K yang berperan dalam proses pembekuan darah. Escherichia coli juga bisa menyebabkan infeksi yang cukup serius karena dapat menghasilkan racun yang mampu merusak dinding dari usus kecil yang mengakibatkan kram perut, diare yang bercampur dengan darah, hingga muntah – muntah (Karmelia, 2016). Infeksi yang disebabkan oleh bateri ini dapat dicegah dengan pemberian obat kimia maupun obat herbal. Pada penelitian ini digunakan kombinasi daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) untuk menghambat pertumbuhan bakteri Escheichia coli karena daun mengkudu (Morinda citrifolia L) memiliki senyawa flavonoid yang bekerja dengan menghambat pembentukan dinding sel dan mendenaturasi protein mikroba (Widiana,dkk 2011). Sedangkan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) memiliki senyawa saponin yang bekerja dengan mengganggu tegangan permukaan dinding sel. Saat tegangan permukaan terganggu zat antimikroba akan dengan mudah masuk kedalam sel dan akan mengganggu metabolisme hingga terjadi kematian sel bakteri (Taufiq,2017).
Proses ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini adalah metode maserasi. Metode maserasi digunakan karena metode ini cocok untuk simplisia segar, kering atau serbuk yang zat aktifnya tidak tahan terhadap proses pemanasan serta pengerjaan dan peralatannya mudah dan sederhana
(BPOM,2012 :10). Ekstrak kental daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) yang diperoleh kemudian dibebas etanolkan dengan cara ditambahkan dengan aquadest sebanyak 20 ml, kemudian diuapkan sampai kering dan menghasilkan ekstrak kental bebas etanol.
Metode yang digunakan yaitu metode difusi lubang sumuran karena metode ini merupakan metode umum yang praktis, mudah dilakaukan, biaya yang relatif murah, peralatan yang digunakan lebih mudah (Nurjannah,2017).
Media yang digunakan pada penelitian ini adalah media Nutrien Agar karena media ini merupakan media yang paling umum digunakan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri. Penanaman suspensi bakteri Escherichia coli pada media Nutrient Agar menggunakan jarum ose steril. Dalam penanaman suspensi bakteri harus diperhatikan dengan baik karena akan berpengaruh pada hasil penelitian. Jika pengambilan suspensi bakteri terlalu banyak atau pertumbuhan bakteri pada media terlalu tebal dapat menyebabkan diameter zona hambat yang terbentuk kecil. Pada penelitian ini jumlah bakteri yang diambil adalah satu jarum ose dari suspensi bakteri 150 x 106 CFU/ml.
Hasil uji aktivitas kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) terhadap bakteri Escherichia coli diperoleh diameter zona hambat pada konsentrasi 5% (8,4 mm), konsentrasi 10% (15,56 mm), konsentrasi 15% (22,06 mm). Berdasarkan kriteria kekuatan daya hambat menurut Rahmani, dkk 2017 maka zona hambat
antibakteri kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) dengan konsentrasi 5% (8,4 mm) termasuk kategori sedang, konsentrasi 10% (15,56 mm ) termasuk kategori kuat dan 15% (22,06) termasuk kategori sangat kuat, serta kontrol positif pada penelitia ini yaitu 27,03 mm termasuk kategori sangat kuat. Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini adalah Cefixime karena bakteri Escherichia coli sensitif terhadap cefixime dan salah satu dari kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) memiliki mekanisme kerja yang sama dengan cefixime yaitu dapat menghambat pembentukan dinding sel bakteri.
Pada penelitian ini digunakan aquadest sebagai pengencer kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) karena sifatnya yang polar dan tingkat kelarutannya tinggi sehingga ketika direaksikan dengan kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) akan larut sempurna dan aquadest juga digunakan sebagai control negatif. Hasil yang diperoleh dari uji kontrol negatif adalah 0 mm hal tersebut menunjukkan bahwa aquadest tersebut benar – benar tidak mengandung senyawa yang dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Hal tersebut dapat mendukung hasil penelitian dan meyakinkan bahwa adanya hambatan terhadap pertumbuhan bakteri Eschericjia coli tersebut murni dari senyawa antibakteri yang dihasilkan oleh kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L).
Berdasarkan table 4.1 menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak daun daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) yang di uji terhadap bakteri Escherichia coli menunjukkan daya hambat yang efektif karena diameter zona hambat yang dihasilkan lebih dari 10 mm.
Setelah dibuat persamaan regresi linear diperoleh Y = 1,68 + 1,366X, R = 0,99 dan R2 = 0,98, dan uji t diperoleh nilai t hitung(22,3489) > t tabel(12,7062). Hal ini menunjukkan terdapat hubungan yang signifikan antara konsentrasi dengan diameter zona hambat, sehingga jika semakin besar konsentrasi kombinasi ekstrak daun daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) maka semakin besar pula zona hambat yang terbentuk disekitar lubang sumuran.
BAB V PENUTUP A. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa :
1. Kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) pada konsentrasi 5% (8,4mm), 10% (15,5,6 mm) dan 15% (22,06 mm) memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli
2. Konsentrasi kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) yang paling optimal dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli adalah konsentrasi 15% dengan rata – rata diameter zona hambat sebesar 22,06 mm kekuatan daya antibakteri konsentrasi 15% sebanding dengan kontrol (+) yaitu dikategorikan sangat kuat namun diameter zona hambat kontrol positif Cefixime masih lebih besar yaitu 27,03 mm.
3. Berdasarkan persamaan regresi linear Y = 1,68 + 1,366X, R = 0,99 dan R2
= 0,98, dan uji t diperoleh nilai t hitung(22,3489) > t tabel(12,7062). Hal ini menunjukkan terdapat hubungan yang signifikan antara konsentrasi kombinasi daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) dengan diameter zona hambat dimana semakin besar konsentrasi kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) maka semakin besar pula zona hambat yang terbentuk disekitar lubang sumuran.
41
B. SARAN
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui aktivitas antibakterinya terhadap bakteri pathogen lainnya dari kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L).
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan membuat bentuk sediaan dari ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L).
DAFTAR PUSTAKA
BPOM Tim. 2012. Pedoman Teknologi Formulasi Sediaan Berbasis Ekstrak.
BPOM RI : Jakarta
Farmakope Indonesia. Edisi III. 1979. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Jakarta.
Janah. M. 2018. Uji aktivitas antikanker ekstrak dan fraksi daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) terhadap sel kanker payudara (T47D) melalui metode MMT. Fakultas sains dan teknologi universitas islam negeri maulana malik Ibrahim. Malang.
Kameswari M. S, dkk. 2013. Perasan Daun Mengkudu (Morinda citrifolia) Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli secara In Vitro.
Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Udayana.
Karmila. 2016. Daya hambat ekstrak daun mengkudu (morinda citrifolia l.) terhadap pertumbuhan bakteri penyebab diare. Fakultas Sains dan Teknologi UIN Alauddin. Makassar.
Kumayas. A.R, dkk. 2015. Jurnal ilmiah farmasi “Aktivitas antibakteri dan karakteristik gugus fungsi dari tunikata polycarpa aurata” FMIPA UNSRAT. Manado.
Lukman, A. 2016. Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun kemangi (Ocimum sanctumL)terhadap bakteri patogen dengan metode klt bioautografi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
Muhardi, dkk. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Tanaman ObatSuku Musi di Kabupaten Musi Banyuasin, Sumatera Selatan.Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Ogan Ilir Nirawat. C. 2016. uji daya hambat ekstrak daun dan buah mengkudu (morinda
citrifolia) terhadap pertumbuhan bakteri escherichia coli sebagai penunjang praktikum mata kuliah mikrobiologi. Fakultas Tarbiyah dan Keguruan Program Studi Pendidikan Biologi. Banda Aceh.
Nurjannah Rezqi 2017. Uji aktivitas bakteri metode difusi sumuran. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia Politeknik Kesehatan. Banjarmasin.
Rahman. R. A, dkk. 2017. Uji daya hambat filtrate zat metebolit lactobacillus plantarum terhadap pertumbuhan dhiggela dysenteriae secara invitro.
Fakultas kedokteran UPN Veteran. Jakarta selatan
Sari, D.L.2018. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirsak Muda DanTua(Annona muricata L)Terhadap Staphylococcus aureus. Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Medan
Suriaman E, dkk. 2017. skrining aktivitas antibakteri daun kelor (moringa oleifera), daun bidara laut (strychnos ligustrina blume), dan amoxicilin terhadap bakteri patogen staphylococcus aureus. Dosen Prodi D III Analis Kesehatan, Akademi Analis Kesehatan. Malang.
Wahyuni D.K,dkk. 2016. Toga Indonesia. Airlangga University Press. Surabaya.
Widiana. R, dkk. 2011. Daya hambat ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) terhadap bakteri penyebab diare. Program studi pendidikan biologi STKIP PGRI. Sumatra barat.
Serbuk simplisia daun mengkudu dan daun bidara laut masing – masing 250 g
Pengambilan sampel
Maserat Ampas
Ekstrak kental
LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema kerja uji aktivitas kombinasi ekstrak daun mengkudu (morinda citrifolia l ) dan daun bidara laut (ziziphus maurtiana l) terhadap pertumbuhan bakteri escherichia coli
Diambil di kelurahan Kota Uneng, Kec.Alok, Kab. Sikka Diambil pada pagi hari sekitar pukul 08.00 - 10.00
Dipisahkan dari pengotoran (sortasi basah) Dicuci dibawah air mengalir, dikeringkan
dengan cara dijemur dan ditutupi dengan kain hitam
Diserbukkan (diblender)
Dimaserasi dengan etanol 70% sebanyak 2 L, selama 24 jam sesekali diaduk
Disaring
45 Pengolahan sampel
Simplisia
suspensi bakteri
Bakteri yang telah diremajakan
Uji aktivitas antibakteri
Kosentrasi 5%, 10% dan 15%
Biakan murni bakteri 3. Pembuatan sampel penelitian
Ditimbang ekstrak etanol kental sebanyak 0,25 g (5%), 0,5 g (10%) dan 0,75 g (15%) Dilarutkan dalam 5 ml aquadest
4. Bagan Pengujian aktivitas antibakteri
Diambil biakan murni bakteri Escherichis coli sebanyak satu jarum ose steril
Ditanamkan biakan pada media Nutient Agar miring dengan cara menggores
Di inkubasi pada suhu 370C selama 24 jam
Diambil bakteri yang telah diremajakan pada media NA miring sebanyak satu jarum ose steril
Disuspensikan dalam 5 ml NaCl Diinkubasi 370C selama 24 jam
Diambil satu jarum ose bakteri yang telah disuspensikan kemudian digores pada cawan petri yang berisi NA dengan cara zig – zag
Pada setiap cawan petri yang telah diinokulasi bakteri dibuat 5 lubang sumuran didaerah K (-), K (+),
konsentrasi 5%, konsentrasi 10%, konsentrasi 15% dengan diameter 5 mm dan kedalaman 4 mm menggunakan borer steril
Masing – masing lubang sumuran di masukan 5 ҏL berbagai konsentrasi ekstrak, kontrol positif dan negatif Diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam
Diukur diameter daerah hambat (zona bening) dengan menggunakan jangka sorong
Ekstrak etanol kental dibuat dalam 3 kosentrasi
Lampiran 2. Perhitungan konsentrasi uji aktivitas kombinasi ekstrak daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) dan daun mengkudu (Morinda citrifolia L) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia colli
a. Konsentrasi ekstrak 5 % dengan larutan stok 5 ml V1 x C1 = V2x C2
b. Konsentrasi ekstrak 10 % dengan larutan stok 5 ml V1 x C1 = V2 x C2
c. Konsentrasi ekstrak 15 % dengan larutan stok 5 ml V1 x C1 = V2 x C2
C1 = Konsentrasi larutan standar (mg/ml) V2 = Volume larutan yang dibuat (ml)
C2 = Konsentrasi larutan yang dibuat (mg/ml)
Lampiran 3. Perhitungan kontrol positif obat cefixime 100 mg Dibuat larutan stok 2,5 %
V1 x C1 = V2x C2
100 ml x 6 g = 10 ml x C2
C2 = 10 𝑚
100 𝑚𝑙 𝑋 2,5𝑔
C2 = 25 𝑚𝑙/𝑔 = 0,25 gram = 250 mg
100 𝑚𝑙
Bobot cefixime yang ditimbang = Bobotcefiximex Bobot 1 kapsul cefixime
Bobot sediaan
= 250 mgx 0,24 gram
100 mg
= 0,6 gram Keterangan :
V1 = Volume larutan standar (ml)
C1 = Konsentrasi larutan standar (mg/ml) V2 = Volume larutan yang dibuat (ml)
C2 = Konsentrasi larutan yang dibuat (mg/ml)
Lampiran 4. Surat ijin penelitian
Lampiran 5. Perhitunganregresi linear rata- rata diameter zona hambat uji aktivitas kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L.) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L.) terhadap
pertumbuhan bakteri Escherichia coli
Dimana Y = daerah hambat X = konsentrasi (%)
𝑎 =
Ƹy−b (Ƹx)n ∑XY − ∑X ∑Y
√[1050 − 900][2397,952 − 2117,84]
204,9
T hitung =𝑟 √𝑛−2
√1−𝑟2
0,999 √3 − 2
=
√1 − 0,998 0,999 √1
=
√1 − 0,998
= 0,999
√0,002 = 0,999
0,0447 = 22, 3489
Ttabel = (α/2, df) α = 0,05, df = n – k= 3 – 2= 1
= 0,05/2 (1)
= 0,025 (1)
= 12,70620
Uji signifikan = t hitung> t tabel
= 22,3489 > 12,7062
= Signifikan
Lubang sumuran
15%
5%
Zona bening
K -
10%
Bakteri
K +
Lampiran 6. Hasil pengujian aktivitas kombinasi ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L) dan daun bidara laut (Ziziphus maurtiana L) terhadap bakteri Escherichia coli
Zona hambat cawan petri I
Zona bening 15%
K+
K- 5%
Bakteri 10%
Lubang sumuran
Zona hambat cawan petri II
5% Bakter
K- 10%
K+
15%
Zona bening Lubang sumuran
Cawan petri III
Lampiran 7. Uraian Bahan
1. Asam sulfat (FI. Edisi III Tahun 1979 hal, 58) Nama resmi : ACIDUM SULFURIDUM Nama lain : Asam sulfat
Rumus molekul : H2SO4
Pemerian : Cairan jernih seperti minyak, tidak berwarna, bau sangat tajam dan korosif.
Kelarutan : Dapat bercampur dengan air dan dengan etanol, dapat menimbulkan panas.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat Kegunaan : Zat tambahan
2. Air suling (FI. Edisi III Tahun 1979 hal, 96) Nama resmi : AQUA DESTILLATA Nama lain : Air suling
Rumus molekul : H2O
Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak mempunyai rasa.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik Kegunaan : Sebagai pelarut
3. Barium klorida (FI. Edisi III.Tahun 1979, hal 656) Nama resmi : BARRII CHLORIDUM
Nama lain : Barium klorida Rumus kimia : BaC2
Berat molekul : 208,236
Pemerian : Tidak berwarna
Kelarutan : Larut dalam 5 bagian air Khasiat : Preaksi
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat 4. Etanol (FI. Edisi III Tahun 1979 hal, 65)
Nama resmi : AETHANOLUM Nama lain : Alkohol
Rumus molekul : C2H6O
Pemerian : Cairan tidak berwarna, jernih, mudah menguap, bau khas, rasa panas.
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform P dan dalam eter P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya, jauh dari nyala api.
Kegunaan : Zat tambahan
5. NaCl (FI. Edisi III. Tahun 1979.hal 403) Nama resmi : NATRIUM CLORIDA Nama lain : Natrium klorida
Rumus molekul : NaCl
Pemerian : Hablur heksahedral, tidak berwarna atau serbuk putih, tidak berbau, rasa asin.
Kelarutan : Larut dalam 2,8 bagian air mendidih, dan dalam lebih
kurang 10 bagian gliserol P, sukar larut dalam etanol (95%) P
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
Khasiat : Sumber ion klorida dan ion natrium
Lampiran 8. Tabel distribusi t (df = 1 – 40)
Lampiran 9. Surat bebas penelitian dari laboran
Lampiran 10. Dokumentasi
Penimbangan serbuk simplisia Pencampuran sampel dengan pelar
Perendaman selama 24 jam Penyaringan
Penguapan Ekstrak kental
Pembuatan media nutrient agar Suspensi bakteri skala 150 X 106
Penuangan NA pada media Inokulasi bakteri pada cawan petri
Pengamatan zona hambat Pengukuran zona hambat