Konsentrasi (% w/w) Diameter penghambatan (mm) Rata-rata diameter penghambatan (mm) Ln konsentrasi Kuadrat zona penghambatan (mm2) Ulangan 1 Ulangan 2 10 3.23 - 4.12 - 3.68 2.30 13.5056 20 6.4 6.52 6.37 6.27 6.32 3.00 39.9424 28 8.83 7.55 7.37 - 7.78 3.33 60.5284
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan (mm2) dan X = Ln konsentrasi
y = 44.719x - 90.375 R2 = 0.9891 0 10 20 30 40 50 60 70 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 l n k o n se n t r a si
Kurva (iv). Penentuan nilai MIC ekstrak methanol jintan hitam terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa
Y = 44.719X - 90.375 Jika Y=0; X= 2.0209
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5455 (Mt) MIC = 0.25*Mt
MIC = 0.25*7.5455
Lampiran 1. Skema tahapan penelitian
Digiling
Didistilasi uap Ulangan Direfluks dengan pelarut air Ulangan Direfluks dengan pelarut etanol
(100 ºC, 2 jam) (100 ºC, 3 jam) (80 ºC, 2 jam) (80 ºC, 3 jam)
Disaring Disaring
Direfluks dengan pelarut organik (heksana, etil asetat, metanol)
(60 ºC, 3 jam dan 2 jam)
dikeringkan dikeringkan
(oven vakum) (oven vakum)
Dihembus gas N2
Ditimbang
Jintan hitam
Bubuk jintan hitam
Minyak atsiri (Komponen volatil)
Ampas
(Komponen non-volatil)
Ekstrak
Ampas Ampas Ekstrak
•Dianalisa aktivitas antimikroba •Dianalisa kualitatif komponen alkaloid, flavonoid, terpenoid&steroid, saponin, tanin
Ekstrak heksan, ekstrak metanol, ekstrak etil asetat
Ekstrak pekat Ekstrak pekat
•Dianalisa aktivitas antimikroba
•Dianalisa kualitatif komponen alkaloid,
flavonoid, terpenoid&steroid, saponin, tanin
•Dianalisa aktivitas antimikroba
•Dianalisa kualitatif komponen alkaloid,
Lampiran 2. Diagram alir persiapan kultur bakteri dan uji konfirmasi jumlah mikroba
Diambil satu ose
Dimasukkan ke dalam 10 ml NB steril Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC
Diambil 1 ml
Dimasukkan ke dalam 9 ml NB steril Diinkubasi 24 jam, suhu 37 ºC
Diamati kekeruhannya
Keruh Agak bening Dipipetl 1 ml Dipipet 1 ml
Dimasukkan ke dalam Dimasukkan ke dalam
9 ml pengencer steril 9 ml pengencer steril
Dilakukan pengenceran dari 101-108 Dilakukan pengenceran dari 100-105
Dipipet masing-masing 1ml Dipipet masing-masing 1 ml
dari pengenceran 105-108 dari pengenceran 100-105
Masing-masing dimasukkan Masing-masing dimasukkan
ke dalam cawan petri steril ke dalam cawan petri steril
Dituang agar
Didiamkan hingga agar membeku Diinkubasi 48 jam, 37 ºC
Diamati dan dihitung jumlah koloni
Ditentukan jumlah µl NB yang akan dimasukkan ke dalam 25 ml NA cair
( A ) Kultur bakteri
Lampiran 3. Diagram alir uji difusi sumur
Dipipet sejumlah A (sesuai hasil pada persiapan kultur)
Dimasukkan ke dalam botol berisi 25 ml NA cair steril Dituang ke dalam cawan petri steril
Dibiarkan beku Dibuat 4 lubang/sumur
Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl Ditetesi 50 µl DMSO lar antibiotik sampel sampel
Diinkubasi 37 ºC, 24 jam Diamati dan diukur area penghambatan tiap sumur
Ditentukan ekstrak yang akan diuji nilai MIC Kultur mikroba yang telah disegarkan
Lampiran 4. Contoh perhitungan penentuan jumlah mikroba
Jumlah mikroba umur 24 jam = 108 sel/ml NB.
Jumlah sel yang diinginkan dalam agar (NA) = 105 sel/ml agar
Jumlah agar dalam 1 cawan = 25 ml
Jumlah NB (yang mengandung 108 sel) yang dimasukkan = 105 sel / ml NA x 25 ml NA
108 sel / ml NB
= 25 x 10-3 ml NB
Lampiran 5. Hasil uji konfirmasi metode hitungan cawan
Jenis bakteri Jumlah sel bakteri yang
digunakan saat pengujian
Bacillus cereus 2.1 x 108
Escherichia coli 3.9 x 108
Salmonella Typhimurium 6.2 x 108
Pseudomonas aeroginosa 4.1 x 108 Staphylococcus aureus 4.2 x 108
Lampiran 8. Contoh perhitungan rendemen
•Rendemen ekstrak etanol
Bobot jintan hitam halus = 34.58 gr Bobot ekstrak etanol pekat = 2.9005 gr
Rendemen ekstrak etanol = Bobot ekstrak etanol pekat x 100 Bobot jintan hitam halus
= (2.9005/34.58) x 100
= 8.39 %
•Rendemen ekstrak etil asetat
Bobot ampas ekstrak heksan = 18.60 gr Bobot ekstrak etil asetat pekat = 0.9454 gr
Rendemen ekstrak etil asetat = Bobot ekstrak etil asetat pekat x 100 Bobot ampas ekstrak heksan
= (0.9454/18.60) x 100
= 5.08 %
•Rendemen ekstrak metanol
Bobot ampas ekstrak etil asetat = 21.92 gr Bobot ekstrak metanol pekat = 1.8855 gr
Rendemen ekstrak metanol = Bobot ekstrak metanol pekat x 100 Bobot ampas ekstrak etil asetat
= (1.8855/21.92) x 100
Lampiran 9. Hasil penghitungan standar eror (SE) Mikroba Simbol Bacillus cereus 1 Escherichia coli 2 Salmonella Typhimurium 3 Pseudomonas aeroginosa 4 Staphylococcus aureus 5
Ek st r ak ai r 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 1 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA1 2 1. 6500000 0. 1500000 MI KROBA2 2 0 0 MI KROBA3 2 0 0 MI KROBA4 2 2. 9250000 0. 0250000 MI KROBA5 2 3. 3700000 0. 1900000 - - -
Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 2 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA1 2 5. 3150000 0. 1350000 MI KROBA2 2 1. 6700000 0. 0200000 - - -
Ek st r ak et anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 3 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA3 3 5. 2000000 0. 1903506 MI KROBA4 3 7. 0533333 0. 2167436 MI KROBA5 3 9. 3366667 0. 3075350 - - -
mi ny ak _at si r i 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 4 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA1 3 6. 0666667 0. 1748650 MI KROBA2 3 3. 2500000 0. 2250185 MI KROBA3 3 4. 2300000 0. 4063250 MI KROBA4 3 2. 2866667 0. 2265931 MI KROBA5 3 7. 3600000 0. 3340659 - - -
Eks t r ak heks an 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 5 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA1 3 2. 0800000 0. 4600000 MI KROBA2 3 0 0 MI KROBA3 3 0 0 MI KROBA4 3 3. 7166667 0. 8264449 MI KROBA5 3 4. 0233333 0. 3608478 - - -
Ek st r ak et i l _as et at 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 6 Var i abl e N Mean St d Er r or
- - - MI KROBA1 3 3. 0366667 0. 7033570 MI KROBA2 3 2. 1466667 0. 1894143 MI KROBA3 3 4. 1900000 0. 3652853 MI KROBA4 3 5. 0700000 0. 4772141 MI KROBA5 3 3. 1700000 0. 2151743 - - -
Ek st r ak met anol 14: 10 Tues day, Dec ember 10, 1996 7
Var i abl e N Mean St d Er r or - - - MI KROBA1 3 4. 1766667 0. 7096556 MI KROBA2 3 0 0 MI KROBA3 3 3. 0800000 0. 2454248 MI KROBA4 3 5. 5633333 0. 4318307 MI KROBA5 3 4. 3333333 0. 4935698 - - -
Lampiran 10. Hasil analisis ragam
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 1 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Cl ass Lev el I nf or mat i on Cl as s Lev el s Val ues EKSTRAK 6 1 2 3 4 5 6 MI KROBA 5 1 2 3 4 5
Number of obs er vat i ons i n dat a set = 83
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 2 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Dependent Var i abl e: DI AMETER
Sour ce DF Sum of Squar es Mean Squar e F Val ue Pr > F Model 29 437. 87556667 15. 09915747 37. 36 0. 0001 Er r or 53 21. 41883333 0. 40412893
Cor r ec t ed Tot al 82 459. 29440000
R- Squar e C. V. Root MSE DI AMETER Mean 0. 953366 17. 70784 0. 63571136 3. 59000000
Sour ce DF Type I SS Mean Squar e F Val ue Pr > F EKSTRAK 5 175. 75671308 35. 15134262 86. 98 0. 0001 MI KROBA 4 156. 46550143 39. 11637536 96. 79 0. 0001 EKSTRAK* MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001 Sour ce DF Type I I I SS Mean Squar e F Val ue Pr > F EKSTRAK 5 152. 72013515 30. 54402703 75. 58 0. 0001 MI KROBA 4 158. 82907781 39. 70726945 98. 25 0. 0001 EKSTRAK* MI KROBA 20 105. 65335216 5. 28266761 13. 07 0. 0001
Lampiran 11. Hasil uji lanjut Duncan Ekstrak Simbol Ekstrak air 1 Ekstrak etanol 2 Minyak atsiri 3 Ekstrak heksan 4
Ekstrak etil asetat 5 Ekstrak metanol 6 Mikroba Simbol Bacillus cereus 1 Escherichia coli 2 Salmonella Typhimurium 3 Pseudomonas aeroginosa 4 Staphylococcus aureus 5
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 3 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Dunc an' s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER
NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he ex per i ment wi s e er r or r at e
Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129 WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal . Har moni c Mean of c el l s i z es = 13. 52601 Number of Means 2 3 4 5 6 Cr i t i cal Range . 4903 . 5157 . 5325 . 5446 . 5539 Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent . Duncan Gr oupi ng Mean N EKSTRAK A 6. 0569 13 2 B 4. 6387 15 3 C 3. 5227 15 5 C 3. 4307 15 6 D 1. 9640 15 4 D 1. 5890 10 1
Rancangan Fak t or i al Ac ak Lengkap 4 08: 45 Fr i day, Dec ember 20, 1996 Gener al Li near Model s Pr oc edur e
Dunc an' s Mul t i pl e Range Test f or v ar i abl e: DI AMETER
NOTE: Thi s t es t c ont r ol s t he t ype I compar i sonwi s e er r or r at e, not t he ex per i ment wi s e er r or r at e
Al pha= 0. 05 df = 53 MSE= 0. 404129 WARNI NG: Cel l s i z es ar e not equal . Har moni c Mean of c el l s i z es = 16. 58537 Number of Means 2 3 4 5 Cr i t i c al Range . 4428 . 4657 . 4808 . 4918
Means wi t h t he s ame l et t er ar e not s i gni f i c ant l y di f f er ent . Duncan Gr oupi ng Mean N MI KROBA A 5. 3771 17 5 B 4. 5247 17 4 C 3. 7506 16 1 D 2. 9471 17 3 E 1. 2206 16 2
Lampiran 13. Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella Typhimurium Konsentrasi (% w/w) Diameter penghambatan (mm) Rata-rata diameter penghambatan (mm) Ln konsentrasi Kuadrat zona penghambatan (mm2) Ulangan 1 Ulangan 2 10 5.87 5.8 6.48 7.23 6.35 2.30 40.3225 20 8.97 8.82 8.87 8.98 8.91 3.00 79.3881 30 8.8 8.62 8.67 8.5 8.65 3.40 74.8225 40 8.55 8.58 7.43 7.6 8.04 3.69 64.6416 50 8.55 8.13 9.07 7.73 8.37 3.91 70.0569
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan (mm2) dan X = Ln konsentrasi
y = 15.118x + 16.537 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 1 2 3 4 5 ln konsentrasi k u a dr a t z ona ha m b a t ( mm)
Kurva (i) Penentuan nilai MIC ekstrak etanol jintan hitam terhadap bakteri Salmonella
Typhimurium Y = 15.118X + 16.537 Jika Y=0; X= -1.09386
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 0.3349 (Mt) MIC = 0.25*Mt
MIC = 0.25*0.3349
Lampiran 14. Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus cereus Konsentrasi (% w/w) Diameter penghambatan (mm) Rata-rata diameter penghambatan (mm) Ln konsentrasi Kuadrat zona penghambatan (mm2) Ulangan 1 Ulangan 2 10 4.83 5.3 4.13 4.43 4.68 2.30 21.8556 20 8.8 9.77 7.9 8.2 8.67 3.00 75.1111 30 8.33 8.52 9.17 8.77 8.69 3.40 75.6175 40 11.15 11.93 10.32 10.22 10.90 3.69 118.9009 50 12.37 11.63 10.03 10.2 11.06 3.91 122.2867
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan (mm2) dan X = Ln konsentrasi
y = 62.27x - 120.25 R2 = 0.9367 0 20 40 60 80 100 120 140 0 1 2 3 4 5 ln konsentrasi k u a dr a t z ona ha mba t (m m)
Kurva (ii) Penentuan nilai MIC minyak atsiri jintan hitam terhadap bakteri Bacillus cereus
Y = 62.27X – 120.25 Jika Y=0; X= 1.931106
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 6.897138 (Mt) MIC = 0.25*Mt
MIC = 0.25*6.897138
Lampiran 15. Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri Staphylococcus aureus Konsentrasi (% w/w) Diameter penghambatan (mm) Rata-rata diameter penghambatan (mm) Ln konsentrasi Kuadrat zona penghambatan (mm2) Ulangan 1 Ulangan 2 10 3.67 3.72 4.33 3.40 3.78 2.30 14.2884 20 4.82 4.57 5.67 4.5 4.89 3.00 23.9121 30 4.63 5.15 4.45 5.63 4.96 3.40 24.6016 40 7.3 6.82 6.27 6.9 6.82 3.69 46.5124 50 9.23 7.3 7.7 7.73 7.99 3.91 63.8401
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan (mm2) dan X = Ln konsentrasi
y = 27.903x - 56.322 0 10 20 30 40 50 60 70 0 1 2 3 4 5 l n k ons e nt r a s i
Kurva (iii). Penentuan nilai MIC ekstrak etil asetat jintan hitam terhadap bakteri
Staphylococcus aureus
Y = 27.903X – 56.322 Jika Y=0; X= 2.0185
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5269 (Mt) MIC = 0.25*Mt
MIC = 0.25*7.5269
Lampiran 16. Penentuan nilai MIC ekstrak metanol jintan hitam terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa Konsentrasi (% w/w) Diameter penghambatan (mm) Rata-rata diameter penghambatan (mm) Ln konsentrasi Kuadrat zona penghambatan (mm2) Ulangan 1 Ulangan 2 10 3.23 - 4.12 - 3.68 2.30 13.5056 20 6.4 6.52 6.37 6.27 6.32 3.00 39.9424 28 8.83 7.55 7.37 - 7.78 3.33 60.5284
Keterangan : Nilai yang ditampilkan merupakan hasil pembulatan.
Y = a + bX ; Y = Kuadrat zona penghambatan (mm2) dan X = Ln konsentrasi
y = 44.719x - 90.375 R2 = 0.9891 0 10 20 30 40 50 60 70 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 l n k o n se n t r a si
Kurva (iv). Penentuan nilai MIC ekstrak methanol jintan hitam terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa
Y = 44.719X - 90.375 Jika Y=0; X= 2.0209
X = Ln konsentrasi, jadi konsentrasi = 7.5455 (Mt) MIC = 0.25*Mt
MIC = 0.25*7.5455
DAFTAR PUSTAKA
Achyad, D. E. dan R. Rasyidah. 2000. Jintan Hitam (Nigella sativa L.).
www.asiamaya.com. [20 Januari 2006].
Adawiyah, D. R. 1998. Kajian pengembangan metode ekstraksi komponen
antimikroba biji buah atung (Parinarium glaberium Hassk.). Tesis.
Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Ahmad, I. dan A. Z. Beg. 2001. Antimicrobial and phytochemical studies on 45 Indian medicinal plants against multi-drug resistant human pathogens. Journal of Ethnopharmacology. 74:113-123.
Ahmad, I., Z. Mehmood, dan F. Mohammad. 1998. Screening of some Indian medicinal plants for their antimicrobial properties. Journal of Ethnopharmacology. 62:183-193.
Al-hebshi, N., M. Al-haroni, dan N. Skaug. 2005. In vitro antimicrobial and resistance-modifying activities of aqueous crude khat extracts against oral
microorganisms. Archives of Oral Biology. www.bora.uib.no/bitstream.
[12 Agustus 2006].
Aligiannis, N., E. Kalpoutzakis, S. Mitaku, dan I. B. Chinou. 2001. Composition and antimicrobial activity of the essential oils of two Origanum spesies. Journal of Agricultural Food Chemistry. 49:4168-4170.
Al-Jabre, S., O. M. Al-Akloby, A. R. Al-Qurashi, N. Akhtar, A. Al-Dossary, dan
M. A. Randhawa. 2003. Thymoquinone, an active principle of Nigella
sativa, inhibited Aspergillus niger. Pakistan Journal Medical Research, 42 (3). www.pmrc.org.pk. [15 Agustus 2006].
Al-Saleh, I. A., G. Billedo, dan I. I. El-Doush. 2006. Levels of selenium, DL-α- tocopherol, DL- -tocopherol, all-trans-retinol, thymoquinone and thymol in different brands of Nigella sativa seeds. Journal of Food Composition and Analysis. 19:167-175.
Anonim. 2006a. Nigella sativa. www.en.wikipedia.com. [13 Maret 2006].
Anonim. 2006b. Chemical analysis of Black seed Oil. www.blackseed.com. [20
Maret 2006].
Anonim. 2006c. Essential Oil. www.wikipedia.com. [9 November 2006].
Apriantono, A., D. Fardiaz, N. L. Puspitasari, S. Yasni dan S. Budiyanto. 1989. Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. Bogor, IPB Press.
Ardiansyah. 2001. Teknik ekstraksi komponen antimikroba andaliman (Zanthoxylum acanthopodicum) dan antarasa (Litsea cubeba). Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Babayan, V. K., D. Koottungal dan G. A. Halaby. 1978. Proximate analysis, fatty
acid and amino acid composition of Nigella sativa L. seeds. Journal of
Food Science. 43:1314-1315.
Badan Pengawas Obat dan Makanan RI (Badan POM RI). 2005. Foodwatch Sistem Keamanan Pangan Terpadu. Sekretariat Jenderal Jejaring Intelijen Pangan, Jakarta.
Baird-Parker, T. C. 2000. Staphylococcus aureus. Di dalam : Lund, B. M., Baird-
Parker, T. C., dan G. W. Gould (eds.). The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Belitz, H. D. dan W. Grosch. 1999. Food Chemistry. Springer-Verlag, Berlin.
Bloomfield, S. F. 1991. Methods for assesing antimicrobial activity. Di dalam Denyer S. P. dan W. B. Hugo. (eds.). Mechanism of Action of Chemical Biocides their Study and Exploitation. Blackwell Scientific Publication, London.
Branen A. L. dan P. J. Davidson. 1993. Antimicrobials in Foods. Marcel Dekker, New York.
Cahattopadhyay, D., K. Maiti, A. P. Kundu, M. S. Chakraborty, R. Bhadra, S. C.
Mandal, dan A. B. Mandal. 2001. Antimicrobial activity of Alstonia
macrophylla : a folklore of bay islands. Journal of Ethnopharmacology. 77:49-55.
Coconut Coast Handmade Soap Co. 2006. Steam Distillation. www.ccnphawaii.com.htm. [20 September 2006].
D’Aoust J. Y. 2000. Samonella. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould (eds.). The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Donmez, A. A. dan B. Mutlu. 2004. A new species of Nigella (Ranunculaceae)
from Turkey. Botanical Journal of the Linnean Society. 146 : 251-255.
Dorman H. J. D. dan S. G. Deans. 2000. Antimicrobial agents from plants : antibacterial activity of plant volatile oils. Journal of Applied Microbiology. 88 : 308-316.
Faizi S, R. A. Khan, S. Azher, S. A. Khan, S. Tauseef, dan A. Ahmad. 2003. New
antimicrobial alkaloids from the roots of Polyalthia longifolia var.
Fardiaz, S., Suliantari, dan R. Dewanti. 1987. Bahan Pengajaran Senyawa Antimikroba. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor.
Fardiaz, S. 1989. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pangan. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi, IPB, Bogor.
---. 1992. Mikrobiologi Pangan. Gramedia, Jakarta.
Garigga, M., M. Hugas, T. Aymerich dan J. M. Monfort. 1993. Bacteriocinogenic
Activity of Lactobacilli from Fermentation Sausages. Journal of Applied
Microbiology. 7:142-148.
Granum, P. E. dan T. C. Baird-Parker. 2000. Bacillus species. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould (eds.). The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Harbone, J.B. 1996. Metode Fitokimia. Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Terjemahan. K. Padmawinata dan I. Soediro. Penerbit ITB, Bandung.
Hart, H. 1983. Kimia Organik : Suatu kuliah singkat. Terjemahan. S. Achmadi. Penerbit Erlangga, Jakarta.
Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid II. Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta.
Hinton, A. dan K. D. Ingram. 2000. Use of oleic acid to reduce the population of the bacterial flora of poultry skin. Journal Food Protection. 9:1282-1286.
Hirasa, K. dan M. Takemasa. 1998. Spice Science and Technology. Marcell Dekker, Inc., New York.
Houghton P. J. dan A. Raman. 1998. Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural Extracts. Chapman and Hall, London.
Hu J. P. , N. Takahashi, dan T. Yamada. 2000. Coptidis rhizoma inhibits growth and proteases of oral bacteria. Oral Dis. 6:297—302.
Hutapea, J. R. 1994. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (III). Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Depkes RI.
Javidnia, K., R. Miri, R. B. Najafi, dan N. K. Jahromi. 2003. A preliminary study
on the biological activity of Daphne mucronata Royle. DARU, 11 (1).
www.diglib.tums.ac.ir. [28 Juli 2006].
Ji, Y. L. , S. K. Yong dan H. S. Dong. 2002. Antimicrobial synergistic effect of
linolenic acid and monoglyceride against Bacillus cereus and
Ketaren, S. 1987. Minyak Atsiri Jilid 1. UI Press, Jakarta.
Koster, S. K. 2001. Distillation. www.ulwax.edu.htm. [20 September 2006].
Lambert, R. J. W., P. N. Skandamis, P. J. Coote, dan G. J. E. Nychas. 2001. A study of the minimum inhibitory concentration of action oregano essential oil, thymol and carvacrol. Journal of Applied Microbiology. 91:453-462.
Leelapornpisid, P., S. Chansakao, T. Ittiwittayawat, S. Pruksakorn. 2006.
Antimicrobial activity of herbal extracts on Staphylococus aureus and
Propionibacterium acnes. www. actahort.com.
Lund, B. M., T. C. Baird-Parker, dan G. W. Gould. 2000. The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
Mattjik, A. A. dan M. Sumertajaya. 2000. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab. IPB Press, Bogor.
Mashhadian, N. V. dan H. Rakhshandeh. 2005. Antibacterial and antifungal effects of Nigella sativa extracts against S. aureus, P.aeroginosa, and C. albicans. Pakistan Journal Medical Science. 21 (1):47-52. www.pjms.com. [28 Juli 2006].
Meral, G. dan N. U. Karabay. 2002. In vitro antibacterial activities of three hypericum species from west anatolia. Turkish Electronic Journal of Biotechnology. http://www.biyotekder.hacettepe.edu.tr/dergi.html. [28 Juli 2006].
Moyler, D. A. 1994. Spices Recent Advances. Di dalam Charalambous (Ed.). Spices, Herbs and Edible Fungi. Elsevier, Amsterdam.
Naidu, A. S. 2000. Natural Food Antimicrobial Systems. CRC Press, New York.
Nair, R. dan S. Chanda. 2006. Activity of some medicinal plants against certain
pathogenic bacterial strains. Indian Journal of Pharmacology.
www.findarticles.com. [28 Juli 2006].
Nikaido, H. dan M. Vaara. 1985. Molecular basis of bacterial outer membran permeability. Microbiology Review. 49:1-32.
Prescott, L. M., J. P. Harley, dan D. A. Klein. 2003. Microbiology. Mc Graw-Hill, Singapore.
Pelczar, M. J. and R. D. Reid. 1979. Microbiology. Mc. Graw Hill Book Co., New York.
Roller, S. 2003. Natural Antimicrobials for Minimal Processing of Foods. CRC Press, New York.
Rota, C., J.J. Carraminana, J. Burillo, A. Herrera. 2004. In vitro antimicrobial activity of essential oils from aromatic plants against selected foodborne pathogens. Journal of Food protection. 67:1252-1256.
Scalbert, A. 1991. Antimicrobial properties of tannins. Phytochemistry Review. 30 (12): 3875-3883.
Singh, G., P. Marimuthu, H. S. Murali, dan A. S. Bawa. 2005. Antioxidative and antibacterial potentials of essential oils and extracts isolated from various spice materials. Journal of Food Safety. 25:130-145.
Still, D. W. 2002. Bioengineering and Breeding Approaches. Dalam : Phytochemicals in Nutrition and Health. Meskin, M. S, W. R Bidlack, A. J. Davies, S. T. Omeya (Eds.). CRC Press, USA, pp. 122-127.
Syamani, F. A. 2001. Kajian ekstraksi oleoresin jinten hitam (Nigella sativa L.). Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Thongson, C., P. M. Davidson, W. Mahakarnchanakul dan J. Weiss. 2004. Antimicrobial activity of ultrasound-assisted solvent-extracted spices. Letters in Applied Microbiology. 39:401-406.
Tiwari, R. P., S. K. Bharti, H. D. Kaur, R. P. Dikshit & G. S. Hoondal. 2005. Synergistic antimicrobial activity of tea & antibiotics. Indian Journal Medical Research. 122:80-84.
WHO. 2005. Food safety and foodborne illness. www.who.int.com. [27 Maret
2006].
Willshaw, G. A., T. Cheasty, dan H. R. Smith. 2000. Escherichia coli. Di dalam : Lund, B. M., Baird-Parker, T. C., dan G. W. Gould (eds.). The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland.
WordNet. 2006. Extraction. www.answers.com/extraction. [20 November 2006].
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. KESIMPULAN
Biji jintan hitam mengandung senyawa antimikroba yang bersifat volatil dan non-volatil dengan berbagai kepolaran. Senyawa antimikroba biji jintan hitam memiliki kelarutan tinggi pada pelarut semi polar, yaitu etanol dan etil asetat, sedikit larut dalam pelarut polar dan pelarut non-polar. Keefektifan masing-masing senyawa antimikroba tergantung pada jenis bakteri yang dihambat.
Ekstrak biji jintan hitam menunjukkan aktivitas antimikroba dengan spektrum yang luas terutama pada ekstrak etanol, minyak atsiri dan ekstrak etil asetat karena dapat menghambat semua bakteri uji. Diameter penghambatan terbesar ekstrak etanol dan minyak adalah dalam menghambat
pertumbuhan Staphylococcus aureus, sedangkan diameter penghambatan
terbesar ekstrak etil asetat adalah dalam menghambat pertumbuhan
Pseudomonas aeruginosa. Ekstrak air dan ekstrak heksan kurang efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji. Ekstrak air dan ekstrak heksan
tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan
Salmonella Typhimurium. Ekstrak metanol tidak dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli.
Nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC) ekstrak etanol terhadap
Salmonella Typhimurium adalah 0.084 % (w/w). Nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC) minyak atsiri terhadap Bacillus cereus adalah 1.72%
(w/w). Nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC) ekstrak etil asetat
terhadap Staphylococcus aureus adalah 1.88 % (w/w). Nilai Minimum
Inhibitory Concentration (MIC) ekstrak metanol terhadap Pseudomonas aeruginosa adalah 1.88 % (w/w). Pada minyak atsiri terdeteksi adanya komponen fenol dan terpenoid. Uji fitokimia pada ekstrak etanol menunjukkan adanya komponen fenol dan steroid. Pada ekstrak etil asetat terdeteksi adanya fenol dan flavonoid.
B. SARAN
Penelitian yang telah dilakukan hingga saat ini masih banyak kekurangan dan perlu diteliti lebih lanjut antara lain :
• Untuk mengetahui komponen penyusun dari masing-masing ekstrak yang
menunjukkan aktivitas antimikroba yang baik, perlu dilakukan identifikasi
fitokimia dengan metode High Performance Layer Chromatoraphy
(HPLC).
• Optimalisasi proses ekstraksi untuk memperoleh rendemen minyak atsiri
dan ekstrak jintan hitam yang tinggi, yaitu dengan mencoba metode ekstraksi yang lain atau melakukan beberapa perubahan pada parameter ekstraksi, seperti suhu dan jenis pelarut.
• Penentuan nilai MIC dengan metode pengenceran untuk memperoleh nilai
MIC yang lebih tepat.
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebelum dilakukan uji aktivitas antimikroba, dilakukan penghitungan jumlah sel mikroba pada umur 24 jam agar terdapat jumlah sel mikroba yang sama pada setiap cawan. Senyawa antimikroba yang terdapat di dalam ekstrak biji jintan hitam diperoleh dengan cara distilasi uap, ekstraksi tunggal menggunakan air dan etanol serta ekstraksi bertingkat menggunakan pelarut organik dengan tingkat kepolaran berbeda. Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi bertingkat adalah heksan teknis, etil asetat teknis, dan metanol teknis. Bahan yang diekstrak secara bertingkat menggunakan pelarut organik adalah biji jintan hitam yang telah dihilangkan minyak atsirinya.
Ekstrak yang diperoleh dari proses distilasi uap adalah minyak atsiri, sedangkan ekstrak yang diperoleh dari ekstraksi tunggal menggunakan pelarut adalah ekstrak air dan ekstrak etanol. Ekstrak yang diperoleh dari ekstraksi bertingkat menggunakan pelarut adalah ekstrak heksan, ekstrak heksan-etil asetat, dan ekstrak heksan-etil asetat-metanol. Ekstrak heksan-etil asetat selanjutnya disebut sebagai ekstrak etil asetat dan ekstrak heksan-etil asetat-metanol selanjutnya disebut sebagai ekstrak metanol. Pada masing-masing ekstrak tersebut dilakukan uji aktivitas antimikroba menggunakan metode difusi agar. Ekstrak yang menunjukkan aktivitas antimikroba dengan spektrum luas, akan diuji nilai
Minimum Inhibitory Concentration (MIC) terhadap bakteri tertentu dan diidentifikasi secara kualitatif komponen fitokimia-nya.
A. PENGHITUNGAN JUMLAH MIKROBA PADA UMUR 24 JAM
Penghitungan jumlah mikroba dilakukan terhadap semua kultur mikroba yang digunakan dalam penelitian ini. Metode yang digunakan adalah metode hitungan cawan. Prinsip dari metode hitungan cawan adalah menumbuhkan sel mikroba yang masih hidup pada medium agar, sel tersebut akan berkembang biak membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop (Fardiaz, 1992). Dengan menggunakan metode hitungan cawan, jumlah sel mikroba yang digunakan dapat diketahui dengan lebih pasti karena yang dihitung adalah sel yang
memang benar-benar masih hidup. Berikut ini adalah hasil penghitungan jumlah sel bakteri uji pada umur 24 jam.
Tabel 7. Jumlah sel mikroba pada umur 24 jam
Jenis mikroba Jumlah mikroba umur 24 jam
Bacillus cereus 5.3 x 108
Staphylococcus aureus 1.2 x 108
Esherichia coli 4.5 x 108
Salmonella Typhimurium 5.4 x 108
Pseudomonas aeruginosa 1.2 x 108
Dari Tabel 7, dapat diketahui bahwa jumlah sel masing-masing mikroba
pada umur 24 jam adalah sekitar 108 sel/ml NB. Jumlah mikroba yang
diinginkan untuk dimasukkan ke dalam agar (NA) adalah 105 sel/ml agar
sehingga perlu dilakukan pengenceran hingga 1/1000 kali. Cara penentuan