Pengaruh Formula Ekstrak 4 Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus

(1)

ABSTRACT

ANDREW BABTISTA MANIK. The Effects of 4 Medicinal Plants Extract Formula on Phagocytic Activity and Capacity of Chicken Peritoneal Macrophage Challenged with Staphylococcus aureus. Under direction of BAMBANG PONTJO PRIOSOERYANTOand MAWAR SUBANGKIT.

The purpose of this research is to observe the effects of four medicinal plants extract formulas (Temulawak/Curcuma xanthorriza Roxb., Temu Ireng/Curcuma aureginosa Roxb., Meniran/Phyllanthus niruri Linn., and Sambiloto/Andographis paniculata Nees) on chicken’s peritoneal macrophage activity and capacity by counting the number of active macrophage and the number of phagocytised bacteria. Fifteen heads of day old chick were divided into five groups with various treatments. The treatments were; (1) F1: extract combination of Temulawak, Temu Ireng, Meniran, and Sambiloto; (2) F2: extract combination of Temulawak, Temu Ireng, and Meniran; (3) F3: formula Temulawak and Temu Ireng; (4) F4: extract combination of Meniran and Sambiloto; and (5) untreated as control. The chikens were treated for 28 days. Result showed that all combinations of plant extract formula treatment increased the activity and capacity of chicken peritoneal macrophage compared to the control group. For activity, group F3 was the best result (p<0.01), while for capacity the group F4 give the highest response (p<0.01). In general we concluded that combination of Meniran and Sambiloto (group F4) was the best combination on chicken peritoneum macrophage activity and capacity.

(2)

RINGKASAN

ANDREW BABTISTA MANIK.Pengaruh Formula Ekstrak 4 Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus. Dibimbing oleh BAMBANG PONTJO PRIOSOERYANTOdan MAWAR SUBANGKIT.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek dari formula 4 ekstrak tanaman (Temulawak/Curcuma xanthorriza Roxb., Temu Ireng/Curcuma aureginosa Roxb., Meniran/Phylanthus niruri Linn., dan Sambiloto/Andographis paniculata) terhadap aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum ayam broiler terhadap bakteri. Lima belas ayam dibagi dalam lima kelompok yang diberikan perlakuan. Kelompok perlakuan tersebut adalah; (1) F1: kombinasi ekstrak Temulawak, Temu Ireng, Sambiloto, dam Meniran; (2) F2: kombinasi ekstrak Temulawak, Temu Ireng, dan Meniran; (3) F3: kombinasi ekstrak Temulawak dan Temu Ireng;(4) F4: kombinasi ekstrak Sambiloto dan Meniran; (5) tanpa pemberian ekstrak sebagai kontrol. Broiler diberikan formulasi ekstrak selama 28 hari. Pada hari terakhir perlakuan, kelompok broiler yang diberikan formula ekstrak tanaman diinfeksi dengan bakteri Staphylococcus aureus dan setelah 2 jam dinekropsi untuk mengambil cairan peritoneumnya. Hasil uji statistika menunjukkan aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag yang berbeda nyata dengan kelompok kontrol. Kombinasi Meniran dan Sambiloto menunjukkan hasil aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag yang paling baik.

(3)

PENGARUH FORMULA EKSTRAK 4 TANAMAN

TERHADAP AKTIVITAS DAN KAPASITAS FAGOSITOSIS

MAKROFAG PERITONEUM AYAM YANG DITANTANG

DENGAN BAKTERI

Staphylococcus aureus

ANDREW BABTISTA MANIK

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(4)

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER

INFORMASI

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi Pengaruh Formula Ekstrak 4

Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum

Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus adalah karya saya

dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa

pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau

dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain

telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian

akhir skripsi ini.

Bogor, September 2012

(5)

ABSTRACT

ANDREW BABTISTA MANIK. The Effects of 4 Medicinal Plants Extract Formula on Phagocytic Activity and Capacity of Chicken Peritoneal Macrophage Challenged with Staphylococcus aureus. Under direction of BAMBANG PONTJO PRIOSOERYANTOand MAWAR SUBANGKIT.

The purpose of this research is to observe the effects of four medicinal plants extract formulas (Temulawak/Curcuma xanthorriza Roxb., Temu Ireng/Curcuma aureginosa Roxb., Meniran/Phyllanthus niruri Linn., and Sambiloto/Andographis paniculata Nees) on chicken’s peritoneal macrophage activity and capacity by counting the number of active macrophage and the number of phagocytised bacteria. Fifteen heads of day old chick were divided into five groups with various treatments. The treatments were; (1) F1: extract combination of Temulawak, Temu Ireng, Meniran, and Sambiloto; (2) F2: extract combination of Temulawak, Temu Ireng, and Meniran; (3) F3: formula Temulawak and Temu Ireng; (4) F4: extract combination of Meniran and Sambiloto; and (5) untreated as control. The chikens were treated for 28 days. Result showed that all combinations of plant extract formula treatment increased the activity and capacity of chicken peritoneal macrophage compared to the control group. For activity, group F3 was the best result (p<0.01), while for capacity the group F4 give the highest response (p<0.01). In general we concluded that combination of Meniran and Sambiloto (group F4) was the best combination on chicken peritoneum macrophage activity and capacity.

(6)

RINGKASAN

ANDREW BABTISTA MANIK.Pengaruh Formula Ekstrak 4 Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus. Dibimbing oleh BAMBANG PONTJO PRIOSOERYANTOdan MAWAR SUBANGKIT.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek dari formula 4 ekstrak tanaman (Temulawak/Curcuma xanthorriza Roxb., Temu Ireng/Curcuma aureginosa Roxb., Meniran/Phylanthus niruri Linn., dan Sambiloto/Andographis paniculata) terhadap aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum ayam broiler terhadap bakteri. Lima belas ayam dibagi dalam lima kelompok yang diberikan perlakuan. Kelompok perlakuan tersebut adalah; (1) F1: kombinasi ekstrak Temulawak, Temu Ireng, Sambiloto, dam Meniran; (2) F2: kombinasi ekstrak Temulawak, Temu Ireng, dan Meniran; (3) F3: kombinasi ekstrak Temulawak dan Temu Ireng;(4) F4: kombinasi ekstrak Sambiloto dan Meniran; (5) tanpa pemberian ekstrak sebagai kontrol. Broiler diberikan formulasi ekstrak selama 28 hari. Pada hari terakhir perlakuan, kelompok broiler yang diberikan formula ekstrak tanaman diinfeksi dengan bakteri Staphylococcus aureus dan setelah 2 jam dinekropsi untuk mengambil cairan peritoneumnya. Hasil uji statistika menunjukkan aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag yang berbeda nyata dengan kelompok kontrol. Kombinasi Meniran dan Sambiloto menunjukkan hasil aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag yang paling baik.

(7)

© Hak Cipta milik IPB, tahun 2012

Hak Cipta dilindungi Undang-Undang

Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik, atau tinjauan suatu masalah, dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan yang wajar IPB.

(8)

PENGARUH FORMULA EKSTRAK 4 TANAMAN

TERHADAP AKTIVITAS DAN KAPASITAS FAGOSITOSIS

MAKROFAG PERITONEUM AYAM YANG DITANTANG

DENGAN BAKTERI

Staphylococcus aureus

ANDREW BABTISTA MANIK

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan pada

Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(9)

Judul : Pengaruh Formula Ekstrak 4 Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus

Nama Mahasiswa : Andrew Babtista Manik

NIM : B04070034

Disetujui

Prof. Drh. Bambang Pontjo P, MS, Ph.D, APVet. Drh. Mawar Subangkit Ketua Anggota

Diketahui

Drh. H. Agus Setyono, MS, Ph.D, APVet. Wakil Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

(10)

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala

berkat dan kasih sayangNya sehingga skripsi yang berjudul “Pengaruh Formula

Ekstrak 4 Tanaman terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag

Peritoneum Ayam yang Ditantang dengan Bakteri Staphylococcus aureus” telah

diselesaikan. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat memperoleh gelar

sarjana Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.

Penghargaan dan ucapan terima kasih penulis ucapkan kepada Prof. Drh.

Bambang Pontjo Priosoeryanto, MS, Ph.D. APVet. dan Drh. Mawar Subangkit

selaku dosen pembimbing tugas akhir yang telah banyak memberikan ilmunya

dan menyediakan waktunya untuk membimbing penulis; Om Jes n fam, Keluarga

tercinta, Bapak, Mama, Ravo broth, Indra, Alex, Yeni, Rose, Tumanggor Fam,

Bou Bregda dan Priskila atas cinta yang tak terkira dan dukungan selama masa

studi; Bagian Patologi, Departemen Klinik, Reproduksi dan Patologi (KRP) FKH

– IPB yang telah memfasilitasi penelitian ini; Dr. Drh. Elok Retnani, MSi. selaku

dosen pembimbing akademik dan Ibu Drh. Risa Tiuria Priosoeryanto, MS, Ph.D.

atas semua nasehat, perhatian, kebersamaan yang diberikan; Olivia Sianturi,

Nagabajara Gori, Adit, dan Chandra Can selaku teman sepenelitian; Gianuzzi,

Sperma Community, Istana Ceria Fams, Bang Vio, Meichris, Mato, Arif, Leo,

Lidya Manik, Elsye Minar, Sheila, Dora, Marjan, 44 emergency band, Saldy

Rajes, Inong Devi, dan Domi Miller atas keceriaannya; Keluarga Sopo dan

Gamasintan. Kebersamaan ini tak akan terlupakan.

Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca.

Bogor, September 2012

(11)

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Medan pada tanggal 25 Agustus 1989 sebagai anak

pertama dari lima bersaudara dari pasangan Haojahan Manik dan Edita

Tumanggor. Penulis menempuh pendidikan sekolah dasar di SD Negeri 02

Siborongborong Tapanuli Utara pada tahun 1995 dan lulus pada tahun 2000.

Penulis melanjutkan pendidikan ke SMP Negeri 1 Siborongborong Tapanuli Utara

dan lulus pada tahun 2004. Pada tahun yang sama penulis melanjutkan pendidikan

di SMA N 1 Siborongborong dan lulus pada tahun 2007. Penulis masuk di IPB

melalui jalur USMI dan resmi menjadi mahasiswa IPB pada tahun 2007. Penulis

memilih Program Studi Kedokteran Hewan sebagai pilihan pertama di perguruan

tinggi IPB. Selama menjadi mahasiswa, penulis aktif di UKM sepak bola,

organisasi KEMAKI, PNS, anggota Divisi Himpunan Minat dan Profesi Satwa

(12)

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR ISI ... x

DAFTAR TABEL ... xi

DAFTAR GAMBAR ... xii

PENDAHULUAN ...1

Latar Belakang ...1

Tujuan ...2

Manfaat ...2

TINJAUAN PUSTAKA ...3

Temulawak ...3

Temu Ireng ...4

Sambiloto ...5

Meniran ...6

Makrofag dan Staphylococcus aureus ...8

METODE PENELITIAN ...10

Waktu dan Tempat Penelitian ...10

Bahan dan Peralatan ...10

Persiapan Kandang Penelitian ...10

Penyediaan Ekstrak ...11

Pemberian Ekstrak ...11

Vaksinasi ...11

Perlakuan penelitian ...11

Pembuatan Sediaan Ulas Cairan Peritoneum ...14

Pengamatan Mikroskopi ...14

Pengolahan Data ...14

HASIL DAN PEMBAHASAN ...15

Hasil ...15

Pembahasan ...16

KESIMPULAN DAN SARAN ...20

Kesimpulan ...20

Saran ...20

DAFTAR PUSTAKA ...2₁

(13)

xi

DAFTAR TABEL

Halaman 1 Kelompok perlakuan penelitian yang diberikan ekstrak tanaman ... 12

2 Aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum ayam yang diberikan

(14)

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Temulawak ... 3

2 Temu Ireng ... 5

3 Sambiloto ... 5

4 Meniran ... 7

5 Perkembangan beberapa jenis sel yang berperan dalam sistem imun... 8

6 Alur perlakuan penelitian pemberian ekstrak 4 tanaman pada broiler ... 13

(15)

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Ayam merupakan sumber produk pangan asal hewan yang memiliki

kandungan gizi protein tinggi dan memiliki cita rasa yang enak, hal tersebut

menyebabkan produk pangan asal ayam menjadi pilihan utama masyarakat

sebagai sumber protein sehari-hari. Hal lain yang mendukung produk pangan asal

ayam menjadi pilihan utama adalah produk tersebut diterima oleh hampir semua

golongan agama, harga yang relatif terjangkau dan masa panen yang relatif

singkat dibandingkan jenis hewan yang lain. Permasalahan dalam peternakan

ayam adalah banyaknya jenis penyakit yang dapat mengganggu kesehatan ayam

dan berpengaruh pada proses perkembangan dan produksi ayam seperti turunnya

berat badan ayam, turunnya produksi telur, dan kematian sehingga apabila

permasalahan tersebut tidak dapat diatasi maka tingginya kebutuhan akan ayam

sebagai sumber protein hewani tidak dapat terpenuhi. Hal tersebut akan sangat

merugikan, seperti pengaruhnya terhadap kesehatan masyarakat dan menyebabkan

terjadinya kenaikan harga yang akan memberatkan konsumen.

Pada industri peternakan ayam, pemberian vaksin dan obat merupakan cara

yang masih dianggap efektif dalam penanganan penyakit ayam, namun demikian

saat ini cara tersebut mengalami kendala seiring terjadinya perubahan lingkungan

seperti suhu, kepadatan, kelembaban, dan ditambah oleh faktor dari dalam seperti

permasalahan nutrisi dan stres yang menyebabkan turunnya sistem kekebalan

ayam tersebut. Hal lain yang menyebabkan kurang efektifnya penanganan

penyakit pada ayam adalah terjadinya mutasi pada agen penyakit seperti virus dan

adanya resistensi bakteri terhadap antibiotik tertentu. Keadaan ini menyebabkan

masalah yang baru dan dibutuhkan pengembangan lebih lanjut terhadap

penanganan kesehatan ayam secara umumyang baik dan benar.

Indonesia memiliki berbagai jenis tanaman obat dan telah dikembangkan

untuk dimanfaatkan menjadi obat oleh masyarakat Indonesia. Saat ini manfaat

kandungan dari tumbuhan obat tersebut telah diteliti untuk mengobati penyakit

pada hewan dan diharapkan dapat membantu dalam mengatasi masalah kesehatan

(16)

Tujuan

Penelitian ini bertujuan untuk melihat efek dari formulasi ekstrak tanaman

Temulawak, Temu Ireng, Sambiloto, dan Meniran terhadap respon fagositosis

makrofag pada ayam broiler yang diinfeksi dengan bakteri.

Manfaat

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai

potensi imunomodulator dari formula 4 tanaman obat asal Indonesia yaitu

(17)

TINJAUAN PUSTAKA

Temulawak

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb) merupakan Genus terpenting dalam famili Zingiberaceae. Tinggi tanaman dapat mencapai 2 m atau lebih,

rimpang tanaman berukuran besar, bercabang-cabang, dan berwarna coklat

kemerahan atau kuning tua yang dapat dilihat pada Gambar 1. Daging rimpang

berwarna oranye tua atau kecoklatan, beraroma tajam yang menyengat, dan

rasanya pahit (Supriadi 2008).

Taksonomi Temulawak menurut Supriadi (2008) adalah:

Kingdom : Plantae

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Monocotyledonae

Ordo : Zingiberales

Famili : Zingiberaceae

Genus : Curcuma

Spesies : Curcuma xanthorrhiza Roxb.

.

Gambar 1 Temulawak

Kandungan aktif dalam Temulawak antara lain minyak atsiri, zat warna

curcumin, felandrena, tumerol, dan pati (Ravindran et al. 2007). Kandungan minyak atsiri dalam rimpang terdiri dari mirsen, p-toluil methyl kabinol, curcumin, desmetoxy curcumin, bidesmethyl curcumin, felandren, sabinen, sineol, borneol, zingiberen, turmeron, atlanton, artumeron, ksantorizol, dan germakron

(18)

dalam antimikroba. Temulawak telah diuji untuk melawan beberapa strain dari

bakteri dan fungi (Chauhan et al. 2003). Ekstrak dari rhizoma tersebut efektif untuk melawan Fusarium oxysporium, Aspergillus niger, A. nidulans dan Alternaria solani dan bakteri seperti Staphylococcus albus, Escherichia coli dan Pseudomonas pyocyanea (Leal et al. 2003).

Menurut Kim et al. (2003) sifat antimikroba dari rimpang dapat melawan Botrytis cineria, Erysiphe Graminis, Phytophthora infestan, Puccinia recondite, Pyricularia oryzae dan Rhizoctonia solani. Minyak esensial dari rimpang bersifat aktif dalam melawan bakteri Gram-positif yang bersifat patogen seperti S. aureus, S. epidermidis dan bakteri Gram-negatif seperti E. coli, P. aeroginosa, Salmonella thypi. Analisis senyawa aktif Temulawak menunjukkan bahwa artumerone, turmerone dan curlone merupakan senyawa utama dalam melawan bakteri(Singh et al. 2002).

Temu Ireng

Temu Ireng (Curcuma aeroginosa Roxb) merupakan tanaman tahunan yang biasanya hidup di bawah naungan tanaman lain. Batang tanaman ini merupakan

batang semu yang tingginya bisa mencapai 2 m, warna batang hijau atau cokelat

gelap dengan daun berwarna hijau gelap dan bagian tengah berwarna ungu

kemerahan. Rimpang Temu Ireng terbentuk dengan sempurna dan memiliki

percabangan yang banyak serta cukup keras (Kurniawan 2011). Penampakan luar

rimpang berwarna kuning, mengkilap dan ujungnya berwarna merah muda yang

dapat dilihat pada Gambar 2.

Taksonomi Temu Ireng menurut Kurniawan (2011) adalah:

Kingdom : Plantae

Kelas : Liliopsida

Ordo : Zingiberales

Genus : Curcuma

(19)

5

Gambar 2 Temu Ireng

Kandungan dari Temu Ireng terdiri dari pati, damar, lemak, minyak atsiri

dengan kadar 2%, amilum, tanin, dan mineral (Kurniawan 2011). Ekstrak rimpang

Temu Ireng mengandung minyak atsiri, tanin, kurkumol, kurkumenol,

isokurkumenol, kurzerenon, kurdion, kurkumalakton, germakron, α, ß, γ-elemene, inderazulene, curcumin, demethyoxycurcumin, saponin, bisdemetyoxycurcumin, monoterpene, sesquiterpene, flavonoid dan alkaloid (Widowati 2007). Kandungan flavonoid, senyawa saponin, dan curcumin pada Temu Ireng telah dibuktikan memiliki sifat antibakteri dan imunomodulator (Singh et al. 2002, Agung dan Sriningsih 2006).

Sambiloto

Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) merupakan tanaman tegak yang dapat mencapai tinggi 0.4-1 m yang dapat tumbuh pada ketinggian kurang dari

700 m di atas permukaan laut (Gambar 3).

(20)

Taksonomi Sambiloto menurut Aji (2009) adalah:

Kingdom : Plantae

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Scrophulariales

Famili : Acanthaceae

Genus : Andrographis

Spesies : Andrographis paniculata Nees.

Komponen aktif yang terkandung dalam tanaman ini bervariasi tergantung

dari asalnya, akar Sambiloto mengandung andrographin, andrographolide. Bagian daun mengandung andrographolide dalam jumlah tertinggi yaitu sebesar 2.3%, sedangkan bagian bijinya mengandung androrapholide dalam jumlah paling sedikit (Saxena et al. 2000). Berdasarkan penelitian Rao et al. (2004), Sambiloto juga mengandung flavonoid antara lain 5,7,2',3'-tetramethoxyflavanone dan 5-hydroxy-7,2',3'-trimethoxyflavone. Berdasarkan hasil penelitian, Andrographis paniculata mengandung berbagai zat aktif laktone yang terdiri dari deoxyandrographolide, didehydroandrographolide, andrographolide, neoandrographolide, 14-deoxy-11-12- dan homoandrographolide. Selain itu, juga terdapat flavonoid alkane, keton, aldehid, mineral, dan damar.Melalui penelitian

tersebut Sambiloto diduga terlibat dalam mekanisme pertahanan tubuh (Saxena et al. 2000).

Meniran

Meniran adalah tumbuhan semusim, tegak dengan tinggi mencapai 1 m.

Batang tumbuhan berbentuk bulat, tidak berbulu, licin, hijau keunguan, diameter

rata-rata 3 mm. Daunnya majemuk berseling, berwarna hijau dengan anak daun

15-24 helai, berbentuk bulat telur, tepi rata, pangkal membulat, dan ujung tumpul

seperti yang terlihat pada Gambar 4. Daun kelopaknya berbentuk bintang,

mahkota bunga berwarna putih. Buahnya kotak bulat dan berwarna hijau

keunguan. Biji buah Meniran kecil, keras, berbentuk ginjal dan berwarna coklat

(21)

7

Taksonomi Meniran menurut Soenanto (2009) adalah:

Kingdom : Plantae

Ordo : Euphorbiales

Famili : Euphorbiaceae

Genus : Phyllanthus

Spesies : Phyllanthus niruri Linn.

Gambar 4 Meniran

Kandungan kimia Meniran antara lain lignan (filantin, hipofilantin, nirantin,

linitetratin), flavonoid (quercetin, quecitrin, isoquercitin, astragalin, rutin, kaempferol-4, rhamnophynoside), alkaloid, triterpenoid, asam lemak (asam ricinocleat, asam linoleat, asam linolenat), vitamin C, kalium, damar, tanin (Permadi 2006). Akar dan daun tanaman ini kaya akan senyawa flavonoid, dan

bijinya mengandung asam lemak, saponin, kalium, damar dan zat samak

(Kurniasari 2006). Senyawa tersebut mampu meningkatkan sistem kekebalan

tubuh hingga mampu menangkal serangan virus, bakteri atau mikroba lainnya.

Hasil penelitian yang telah dilakukan Agung dan Sriningsih (2006) membuktikan

(22)

Makrofag dan Staphylococcus aureus

Respon kekebalan non spesifik pertama kali dilakukan oleh makrofag dan

sel-sel fagosit lainnya dalam sistem retikuloendotelial, termasuk monosit dan sel

neutrofil polimorfonuklear dalam darah. Fungsi utama sel makrofag adalah

memfagositosis senyawa asing atau zat yang berasal dari diri sendiri yang sudah

tua atau mati, juga berperan dalam reaksi peradangan. Beberapa jenis sel seperti

makrofag dalam kelenjar getah bening juga berfungsi dalam merepresentasikan

antigen kepada limfosit sebagai permulaan dari respon kekebalan (Radji 2010).

Proses perkembangan sel yang berperan dalam sistem imun dapat dilihat pada

Gambar 5.

Gambar 5 Perkembangan beberapa jenis sel yang berperan dalam sistem imun

(Radji 2010).

Makrofag berasal dari sel induk dalam sumsum tulang yang melalui monosit

sebagai sel antara, sel tersebut menjadi dewasa dan akhirnya menjadi makrofag

jaringan. Makrofag yang teraktivasi akan meningkatkan jumlah granula lisosom,

lebih banyak mitokondria dan kapasitas yang lebih besar untuk memfagosit

partikel yang tersaji. Penggabungan vakuola fagositik (fagosom) dengan lisosom

menghasilkan fagolisosom, tempat dimana mekanisme pembunuhan mikroba

dikonsentrasikan. Makrofag yang teraktivasi membunuh mikroba yang difagosit

(23)

9

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram-positif berbentuk kokus tunggal, berpasangan, bergerombol seperti buah anggur dan berbentuk rantai

dalam biakan cair, nonmotil, dan tidak membentuk spora. S. aureus tumbuh dengan baik pada berbagai media bakteriologi di bawah suasana aerobik atau

mikroaerofilik. Tumbuh dengan cepat pada suhu 37 0C dan pembentukan pigmen

terbaik adalah pada suhu kamar 27-35 0C. Patogenitas bakteri ini dapat

menyebabkan hemolisis darah, koagulasi plasma, dan menghasilkan berbagai

enzim ekstraseluler dan toksin dan ciri khas yang membedakan dari spesies yang

(24)

METODE PENELITIAN

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan Februari 2011 sampai November 2011.

Kegiatan pemeliharaan dan perlakuan hewan coba dilaksanakan di Fasilitas

Kandang Hewan Percobaan Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian

Bogor. Pembuatan sediaan ulas cairan peritoneum dilaksanakan di Laboratorium

Histopatologi Bagian Patologi, Departemen Klinik Reproduksi dan Patologi,

Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.

Bahan dan Peralatan

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ayam pedaging strain

Cobb sebanyak 15 ekor, vaksin ND live Lassota™ , CAPRIVAC-IBD Inter® live vaccine, vaksin AI killed Medivac®. Kebutuhan harian ayam seperti air minum, pakan Sinta®, lampu sebagai penghangat, dan sekam sebagai alas kandang,

ekstrak Temulawak, Temu Ireng, Meniran, Sambiloto, suspensi bakteri S. aureus nonprotein A (105 cfu/ml). Peralatan yang digunakan pada penelitian ini adalah

alat pemeliharaan dan perlakuan ayam seperti 4 petak kandang baterai, dan spuit

beserta jarum untuk vaksinasi, spuit (tanpa jarum) 1 ml untuk mencekok ekstrak

pada ayam, alat nekropsi seperti scalpel, gunting, pinset, alat untuk pembuatan preparat ulas cairan peritoneum seperti spuit, kaca obyek, metanol 100%, dan pewarna Giemsa 10%.

Persiapan Kandang Penelitian

Kandang ayam dibuat menurut sistem lantai (litter) dengan panjang 110 cm, lebar 40 cm dan tinggi 45 cm. Seluruh dinding dan lantai ruangan percobaan

dikapur dengan kapur tembok berwarna putih, didesinfeksi dengan desinfektan

kelompok fenol sintetik dan difumigasi dengan gas formalin 5% v/v sehari

(25)

11

Penyediaan Ekstrak

Ekstrak tanaman obat yang digunakan adalah ekstraksi tanaman

Temulawak, Sambiloto, dan Temu Ireng dengan pelarut etanol dan ekstraksi

tanaman Meniran dengan pelarut air. Pembuatan ektraksi dan formula dari

kombinasi tanaman obat diperoleh dari Pusat Studi Biofarmaka, Institut Pertanian

Bogor.

Pemberian Ekstrak

Penyajian ekstrak herbal untuk tiap kelompok perlakuan dilakukan dengan

melarutkan ekstrak yang telah dipersiapkan dalam aquades dengan menggunakan

stirrer. Pemberian ekstrak herbal pada setiap kelompok ayam disesuaikan dengan rataan bobot badan ayam. Setiap hari, tiap kelompok ayam dicekok dengan

masing-masing formula ekstrak tanaman obat dengan menggunakan spuit(tanpa

jarum). Aturan pencekokan adalah 1 kali sehari setiap pukul 16.00 WIB selama 28

hari.

Vaksinasi

Semua kelompok ayam percobaan diberikan vaksinasi setelah masa adaptasi

selama empat hari telah selesai. Semua kelompok ayam divaksinasi dengan vaksin

ayam divaksin ND live Lassota™ secara tetes hidung dan mata, CAPRIVAC IBD live vaccine secara oral, dan divaksin AI killed Medivac® dengan injeksi subkutan dengan dosis 0.2 ml.

Perlakuan penelitian

Penelitian ini menggunakan ayam pedaging atau broiler (strain Cobb) yang berumur 1 hari dengan bobot badan seragam. Sebelum perlakuan dimulai, ayam

diistirahatkan dan diadakan masa adaptasi selama 4 hari untuk mengembalikan

kondisi ayam dari stres karena pemindahan dan transportasi, dan pada hari ke-3

dilakukan penimbangan bobot badan pada seluruh ayam. Selama masa ini seluruh

ayam diberikan vitamin lewat air minum. Tabel 1 berikut menjelaskan kelompok

(26)

Tabel 1 Kelompok perlakuan penelitian yang diberikan ekstrak tanaman

Perlakuan Keterangan Kontrol 3 ekor ayam divaksin ND live Lassota™, CAPRIVAC

IBD-Inter® live vaccine, AI killed vaccine Medivac®, dan diberi aquades (1 ml).

F1 3 ekor ayam divaksin ND live Lassota™, CAPRIVAC IBD live

vaccine, divaksin AI killed Medivac® dan diberi formula

Temulawak, Meniran, Sambiloto, dan Temu Ireng (1 ml).

Temulawak, Meniran dan Temu Ireng (1 ml).

Temulawak dan Temu Ireng (1 ml).

F4 3 ekor ayam divaksin ND live Lassota™, CAPRIVAC IBD live vaccine, divaksin AI killed Medivac® diberi formula Meniran dan Sambiloto (1 ml).

Sebelum dibagi dalam kelompok perlakuan, bobot ayam tiap kelompok

perlakuan ditimbang dan dihitung bobot rata-ratanya untuk menghitung dosis

pemberian formula tanaman obat. Seluruh ayam dibagi ke dalam 5 kelompok

ayam sesuai dengan perlakuan yang akan dilaksanakan sebagai berikut:

1. Kelompok kontrol adalah kelompok ayam yang diberikan aquades.

2. Kelompok F1 adalah kelompok ayam yang akan diberikan formula kombinasi

ekstrak Temulawak, Meniran, Sambiloto, dan Temu Ireng.

ekstrak Temulawak, Meniran, dan Temu Ireng.

ekstrak Temulawak dan Temu Ireng.

(27)

13

Skema perlakuan yang dilakukan dalam penelitian dapat dilihat pada

Gambar 6.

Gambar 6 Alur perlakuan penelitian pemberian ekstrak 4 tanaman pada broiler

Pada hari ke-5 masa perlakuan seluruh kelompok ayam diberikan ekstrak

herbal sesuai dengan formulasi yang telah ditentukan kecuali pada kelompok

kontrol yang tidak diberikan ektrak herbal. Pada hari ke-4 seluruh kelompok ayam

diberikan vaksin ND live dengan metode diteteskan pada mata. Pada hari ke-11 dilanjutkan dengan pemberian vaksin IBD live dengan metode dicampurkan dengan air minum. Pada hari ke-15 adalah pemberian vaksin terakhir pada seluruh

kelompok ayam, yaitu pemberian vaksin AI killed dengan metode injeksi subkutan. Pada hari ke-21 dilanjutkan dengan penimbangan pada seluruh ayam.

Pada hari ke-32 adalah masa pemberian ekstrak terakhir pada setiap kelompok

ayam. Pada hari ke-33, semua ayam dari tiap kelompok diinfeksi dengan bakteri

S. aureus nonprotein A secara intraperitoneum dengan dosis 1 cc yang

mengandung partikel bakteri 105 cfu/ml dan dibiarkan selama 2 jam. Setelah 2 jam

ayam tersebut dibunuh dengan cara disembelih dengan pisau tajam, setelah itu

ayam ditelentangkan dan dilanjutkan dengan penyayatan pada kedua

selangkangan kemudian dikuakkan sampai jaringan subkutis dada dan perut dapat

terlihat. Setelah terkuak, dilakukan penyayatan pada otot perut sepanjang tulang

(28)

dan diambil cairan dari ruang peritoneum tersebut dengan menggunakan spuit

dengan jarum.

Pembuatan Sediaan Ulas Cairan Peritoneum

Cairan peritoneum yang telah diambil diteteskan di atas gelas obyek dan

diulaskan dengan merata pada permukaannya, kemudian difiksasi dengan metanol

100% selama 5 menit. Preparat tersebut dilanjutkan dengan proses pewarnaan

Giemsa 10% selama 25 menit dengan cara meneteskan pewarna Giemsa 10% di

atas permukaan gelas obyek kemudian dibilas dengan aquades dan ditiriskan

hingga permukaangelas obyek mengering.

Pengamatan Mikroskopi

Pengamatan dilakukan dengan mikroskop cahaya dengan perbesaran 100x

menggunakan minyak emersi dan software MacBiophotonicImageJ® (Rasban 2006). Objek pengamatan adalah sel makrofag, yaitu sel-sel makrofag yang

memiliki aktivitas fagositosis terhadap bakteri S. aureus dan sel-sel makrofag yang tidak memiliki aktivitas fagositosis. Aktivitas fagositosis diperoleh dari

persentase perbandingan sel-sel makrofag yang aktif memfagosit bakteri dalam 50

sel makrofag. Kapasitas fagositosis diperoleh dari perbandingan jumlah total

bakteri yang difagosit dibagi dengan 50 (jumlah sel makrofag yang diamati).

Pengolahan Data

Data yang disajikan berupa data kuantitatif yaitu jumlah sel makrofag aktif

dalam 50 makrofag dan jumlah bakteri dalam 50 makrofag yang aktif. Data diolah

dengan program SPSS 16. One Way ANOVA digunakan membandingkan setiap formula dan uji lanjut Duncan digunakan untuk membandingkan aktivitas dan

(29)

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

Pengaruh dari formula ekstrak herbal terhadap sistem imunitas tubuh ayam

dapat diperoleh dengan melihat aktivitas dan kapasitas makrofag peritoneum

ayam yang telah ditantang dengan injeksi S. aureus nonprotein A secara intraperitoneum. Melalui pengamatan mikroskopi dengan menggunakan

mikroskop cahayadiperoleh gambaran seperti yang disajikan pada Gambar 7.

Gambar 7 Makrofag peritoneum broiler dengan pewarnaan Giemsa 10% (perbesaran 1000x). Bar 10 µm

Aktivitas rata-rata fagositosis pada kelompok ayam perlakuan yang diberi

formulasi ekstrak tanaman Temulawak, Temu Ireng, Meniran, dan Sambiloto

disajikan pada Tabel 2 berikut.

Tabel 2 Aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag peritoneum ayam yang diberikan 4 ekstrak tanaman.

Formula Aktivitas fagositosis (%) Kapasitas fagositosis

Kontrol 15.2 ± 3.12a 3.90 ± 1.59a

Formula 1 59.2 ± 17.97b 5.85 ± 2.03a

Formula 2 81.8 ± 16.07c 5.86 ± 2.16a

Formula 3 82.8 ± 15.73c 5.66 ± 1.54a

Formula 4 70.4 ± 16.27bc 10.33 ± 4.02b

(30)

Berdasarkan hasil uji statistika yang dapat dilihat pada lampiran 2, semua

kelompok ayam yang diberikan formula ekstrak tanaman dari Temulawak, Temu

Ireng, Meniran, Sambiloto secara peroral selama 28 hari, menunjukkan terjadinya

peningkatan aktivitas dari fagositosis makrofag yang berbeda secara signifikan

dengan kelompok kontrol. Aktivitas fagositosis makrofag paling tinggi

ditunjukkan oleh kelompok F3, yaitu kelompok ayam yang diberikan ekstrak

Temulawak dan Temu Ireng. Hasil uji statistika yang terlihat pada lampiran 4,

kapasitas makrofag pada kelompok F4 (ayam yang diberikan ekstrak tanaman

Sambiloto dan Meniran) menunjukkan terjadinya peningkatan kapasitas

fagositosis paling besar dan berbeda secara signifikan dengan kelompok kontrol,

sedangkan kapasitas fagositosis makrofag pada kelompok F1, F2, dan F3

menunjukkan peningkatan kapasitas fagositosis makrofag yang tidak signifikan

dengan kelompok kontrol.

Pembahasan

Senyawa aktif dalam tanaman diketahui memiliki kemampuan untuk

menghambat pertumbuhan bakteri baik secara langsung maupun tidak langsung.

Penghambatan secara langsung terjadi melalui mekanisme penghambatan

pertumbuhan bakteri, sedangkan secara tidak langsung dengan peningkatan sistem

kekebalan tubuh. Beberapa kajian ilmiah telah dilakukan untuk melihat

mekanisme yang terjadi secara in vitro maupun in vivo terhadap penghambatan bakteri.

Kajian yang dilakukan oleh Meilisa (2009) menunjukkan bahwa senyawa

aktif dalam Temulawak mampu menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella thypi, Klebsiella pneumonia, Escherichia coli, dan Bacillus cereus secara in vitro. Melalui penelitian tersebut juga diketahui bahwa bakteri Gram-negatif lebih

sensitif terhadap senyawa aktif dalam Temulawak. Berdasarkan kajian yang

dilakukan oleh Sufriyanto dan Indradji (2005) diketahui bahwa senyawa fenol

mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus karena kemampuannya untuk berpenetrasi pada dinding sel serta merusaknya.

Lebih lanjut lagi Siswandono dan Soekardjo (1995) menjelaskan bahwa

(31)

17

melalui mekanisme adsorbsi yang melibatkan ikatan hidrogen dengan gugus

fenol. Pada kadar rendah, kompleks protein yang terdapat pada dinding sel bakteri

berikatan dengan fenol yang ikatannya lemah dan segera mengalami peruraian

diikuti oleh penetrasi fenol ke dalam sel dan menyebabkan presipitasi serta

denaturasi protein plasma. Pada kadar tinggi fenol mempengaruhi permeabilitas

membran sel sehingga menimbulkan kebocoran dan kehilangan senyawa

intraseluler. Selain merusak dinding sel, mekanisme lain yang mungkin terjadi

yaitu dengan proses denaturasi protein sel bakteri, menghambat fungsi selaput sel

(transpor zat antar sel) dan menghambat sintesis asam nukleat (Purwanti 2007).

Senyawa aktif terutama golongan fenol yang diperoleh dari tanaman Temulawak,

Meniran, Sambiloto dan Temu Ireng pada penelitian diduga mempengaruhi

terjadinya kerusakan dinding sel bakteri yang mempermudah terjadinya

fagositosis. Dengan rusaknya dinding sel dari bakteri maka makrofag dapat

bekerja lebih optimal.

Respon imun tubuh nonspesifik terhadap infeksi dari luar seperti

mikroorganisme, dijalankan oleh sel radang seperti makrofag, heterofil, Natural Killer cell, dan Killer cell. Proses fagositosis diawali dengan kemotaksis yang

dimulai dari pergerakan heterofil yang dipengaruhi oleh rangsangan kimia dari

produk bakteri. Pada dinding bakteri S. aureus terdapat antigen polisakarida, peptidoglikan (polimer polisakarida yang mengandung subunit-subunit yang

bergabung membentuk eksoskeleton yang kaku pada dinding sel). Struktur

peptidoglikan dinding sel bakteri ini dapat dirusak oleh lisosim. Infeksi yang

terjadi akan membentuk interleukin-1 dan proses opsonisasi oleh makrofag akan

mengundang reaksi kimia dari sel leukosit polimorfonuklear. Reaksi kimia ini

akan mengaktifasi komplemen dan endotoksin.

Bakteri S. aureus mengandung komponen protein A yang dapat menyebabkan terhambatnya fagositosis, sehingga pada penelitian ini infeksi pada

ayam dilakukan dengan menggunakan suspensi dari biakan bakteri tanpa protein

A 105 cfu/ml yang telah diseleksi sebelumnya. Hal ini dilakukan dengan tujuan

proses fagositosis tidak terhambat dan dapat diamati hasilnya. Proses fagositosis

dimulai dengan opsonisasi, adanya rangsangan kimia dari bakteri dan akan

(32)

antibodi akan melapisi bakteri tersebut. Proses tersebut akan membuat bakteri

tersebut rentan terhadap fagositosis. Ruangan yang telah berisi bakteri ini akan

berinvaginasi ke dalam sitoplasma dan akan melepaskan diri dari bagian luar

membran sel untuk membentuk fagosom. Penggabungan antara fagosom dengan

lisosim yang akan melepaskan enzim proteolitik, akan membentuk fagolisosom

yang akan menghancurkan struktur bakteri melalui proses endositosis. Pada saat

heterofil mengalami keterbatasan energi dan enzim, heterofil akan membantu

meningkatkan pengumpulan makrofag pada daerah yang terinfeksi tersebut untuk

melanjutkan proses fagositosis terhadap bakteri yang telah dilemahkan oleh

proses sebelumnya (Radji 2010). Pada makrofag unggas terdapat reseptor untuk

Fc dan juga C3b yang dapat meningkatkan kemampuannya untuk memakan

partikel baik melalui proses opsonisasi ataupun non opsonisasi, sehingga

memungkinkan adanya perpaduan kombinasi proses fagositosis yang lebih cepat

dan efektif terhadap bakteri. Tingkat efektifitas fagositosis dapat dilihat dari

jumlah makrofag yang aktif yang berasal dari suplai monosit dan jumlah bakteri

dalam lumen sitoplasma makrofag aktif tersebut (Radji 2010).

Pada pengamatan preparat ulas cairan peritoneum ayam yang diberi formula

ekstrak tanaman herbal yaitu ekstrak etanol tanaman Temulawak, Temu Ireng,

Sambiloto dan ekstrak Meniran dengan pelarut air menunjukkan pengaruh yang

signifikan terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag. Hal tersebut

membuktikan bahwa kandungan minyak atsiri yaitu yaitu senyawa kurkuminoid,

artumerone, turmerone, dan curlone dari ekstrak rimpang Temulawak dan senyawa flavonoid, saponin, dan senyawa kurkuminoid dari Temu Ireng

merupakan senyawa utama dalam melawan bakteri Gram-positif yang bersifat

patogen seperti S. aureus (Singh et al. 2002, Agung dan Sriningsih 2006). Senyawa metabolit sekunder dari ekstrak Meniran yaitu flavonoid, lignin,

isolignan, dan alkaloid yang telah dibuktikan berpengaruh dalam peningkatan

sistem imun tubuh (Agung dan Sriningsih 2006), memberikan efek positif

terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag terhadap bakteri S. aureus. Ekstrak etanol Sambiloto yang mengandung flavonoid dan aglycons dari diterpenoid menunjukkan terjadinya peningkatan aktivitas fagositosis makrofag.

(33)

19

Saxena et al. (2000), bahwa Sambiloto berpengaruh dalam mekanisme pertahanan tubuh.

Kapasitas fagositosis makrofag ditunjukkan oleh rata-rata jumlah bakteri

yang terdapat dalam lumen makrofag. Hasil analisis statistik yang dapat dilihat

pada lampiran 4 menunjukkan kapasitas fagositosis terbesar terdapat pada

makrofag aktif kelompok F4, yang diberikan formulasi ekstrak etanol Sambiloto

yang dikombinasikan dengan ekstrak Meniran dengan pelarut air. Besarnya

kapasitas fagositosis makrofag diduga karena kandungan lignin, isolignan dan

alkaloid dari Meniran dan senyawa aglycons dari diterpenoid Sambiloto, yang tidak dikombinasikan dengan ekstrak etanol Temulawak dan Temu Ireng yang

mengandung senyawa kurkuminoid. Perbedaan yang tidak signifikan pada

kelompok F1, F2, dan F3 terhadap kelompok kontrol pada hasil uji statistik

P>0.01 (dapat dilihat pada lampiran 4) mungkin membutuhkan waktu inkubasi

yang lebih lama (> 2 jam) untuk mengetahui kapasitas fagositosis peritoneum

yang lebih maksimal. Peningkatan fagositosis makrofag diduga terjadi karena

adanya pengaruh senyawa ekstrak yang diberikan terhadap tingkat ionisasi dan

akumulasi pada lisosom (Aryanti 2001), fusi fagosom makrofag, kompartemen

lisosom, sekresi reactive oxygen intermediate (ROI) yang merupakan hasil ledakan respirasi (respiratory burst), produksi reactive nitrogen intermediate (RNI) melalui jalur sitotoksik NOS2-dependent. ROI dan IFN diinduksi oleh TFN dan INF. Ledakan respirasi mengakibatkan meningkatnya kebutuhan akan O2 dan

menghasilkan anion superoksida (O2-) dan hidrogen peroksida (H2O2), kedua hasil

tersebut memiliki aktivitas mikrobisidal (Tjahajati et al. 2004).

Hasil pada penelitian ini diharapkan dapat membantu pencegahan dan

penanggulangan kasus penyakit dalam industri peternakan ayam. Faktor penting

yang mendukung dalam kesuksesan penanganan penyakit yang harus tetap

dijalankan adalah pemberian formula obat yang teratur, kebersihan dan sanitasi

lingkungan dan personal, kepadatan populasi ayam yang seimbang dengan luas

(34)

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan

Pada hasil uji statistik pemberian ekstrak etanol tanaman Temulawak, Temu

Ireng, Sambiloto dan ekstrak Meniran dengan pelarut air selama 28 hari pada

broiler berpengaruh terhadap peningkatan respon fagositosis makrofag

peritoneum broiler. Pemberian formula ekstrak etanol tanaman obat Temulawak

yang dikombinasikan dengan Temu Ireng menunjukkan aktivitas fagositosis

makrofag peritoneum broiler yang paling tinggi. Pada hasil uji statistik, pemberian

formula ekstrak etanol tanaman obat Sambiloto yang dikombinasikan dengan

ekstrak Meniran dengan pelarut air menunjukkan kapasitas fagositosis makrofag

peritoneum broiler yang paling besar.

Saran

Dibutuhkan penelitian dengan uji tantang bakteri patogen lain yang sering

(35)

21

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 2002. Budi Daya Secara Organik Tanaman Obat Rimpang. Martha Tilaar Innovation Center. Depok: Penebar Swadaya.

Agung EW, Sriningsih. 2006. Efek protektif ekstrak etanol herba Meniran Meniran (Phyllanthus niruri L.) terhadap aktivitas dan kapasitas makrofag peritoneum tikus. Artocarpus 2:91-96.

Aji W. 2009. Uji aktivitas antioksidan tablet effervescent kombinasi ekstrak etanol daun dewa daru (Egenia uniflora L) dan herbal Sambiloto

(Andrographis paniculata Ness) dengan metode DPPH [skripsi]. Surakarta:

Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Aryanti F. 2001. Pengaruh imunomodulator pemberian antibiotika Enrofloksasin, Oksitetrasiklin, dan Tilmikosin terhadap gambaran ulas darah putih, aktivitas dan kapasitas fagositosis sel fagosit peritoneum ayam broiler (Gallus domesticus Strain Hybro) [skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.

Brooks GF, Butel JS dan Morse SA. 2005. Mikrobiologi Kedokteran edisi 1. Jakarta : Salemba Medika.

Chauhan UK, Soni P, Shrivasta R, Martur KC, dan Khadikar PV. 2003. Antimicrobial acitivities of the Curcuma longa Linn. Oxidation Commun (26): 266-270.

Kim MK, Choi GJ dan Lee HS. 2003. Fungicidal property of Curcuma longa L. rhizome-derrived curcumin against phytopathogenic fungi in a greenhouse. J Agric. Food Chem. (51) 1578-1581.

Kurniasari. I. 2006. Metode cepat penentuan flavonoid total Meniran (Phyllanthus [niruri) berbasis teknik spektometri inframerah dan kemometrik [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.

Kurniawan A. 2011. Aktivitas Antioksidan dan Potensi Hayati dari Kombinasi Ekstrak Empat Jenis Tanaman Obat Indonesia. [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.

Leal PF et al. 2003. Funcional properties of spice extracts obtained via supercritical fluid extraction. J. Agric. Food Chem. (69) 523-526.

(36)

Mitchell, Kumar, Abbas, dan Fausto. 2006. Pocket Companion to Robbins & Cotran Pathologic Basis of Diease, 7th edition. New York: Elsevier Inc.

Permadi. A. 2006. Tanaman Obat Pelancar Air Seni. Bogor:Penebar Swadaya.

Purwanti E. 2007. Senyawa bioaktif tanaman Sereh (Cymbopogon nardus) ekstrak kloroform dan etanol serta pengaruhnya terhadap mikroorganisme penyebab diare [skripsi]. Malang: Fakultas Pendidikan Biologi dan Ilmu Pendidikan, Jurusan Pendidikan Biologi, Universitas Muhammadiyah Malang.

Radji M. 2010. Imunologi dan Virologi. Jakarta: PT. IFSI.

Rao YK, Vimalamma G, Rao CV, dan Tzeng YM. 2004. Flavonoids and andrographolides from Andrographis paniculata. Phytochemistry, Augustus 1; 65(16): 2317-21.

Rasban W. 2006. Macbiophotonic microscopy [terhubung berkala]. http://www.macbiophotonic.ca/imagej/ [11 Juli 2011].

Ravindran PN, Babu KN, dan Sivaraman K. 2007. Turmeric the Genus Curcuma. New York: CRC press.

Saxena S et al.. 2000. High-performance thin layer chromatographic analysis of hepatoprotective diterpenoids from Andrographis paniculata. Phytochem Anal 11(1) 34-36.

Singh R, Chandra R, Bose M dan Luthra PM. 2002. Antibacterial activity of

Curcuma longa rhizoma extract on pathogenic bacteria. Current Science

(83) 737-740.

Siswandono dan Soekarjo B. 1995. Kimia Medicinal. Surabaya: Airlangga University.

Soenanto H. 2009. 100 Resep Sembuhkan Hipertensi, Asam Urat, dan Obesitas. Jakarta: Gramedia.

Sufririyanto dan Indraji M. 2005. Uji in vitro dan in vivo ekstrak campuran Mengkudu (Morinda citrifolia) dan Bawang Putih (Allium sativum) pada sapi penderita mastitis sub klinis.

Animal Production

(7):101-105.

Supriadi D. 2008. Optimalisasi ekstraksi kurkuminoid Temulawak (Curcuma

Xanthorriza Roxb [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.

(37)

23

Widowati L. 2007. Pemanfaatan Tanaman Obat. Jakarta: Puslitbang Farmasi. DepkesRI.

(38)

(39)

25

Lampiran 1 Hasil uji ANOVA terhadap aktivitas fagositosis makrofag yang diberikan formula ekstrak tanaman obat.

ANOVA

Aktivitas

Jumlah kuadrat db Jumlah rataan F Sig.

Antar kelompok 30932.480 4 7733.120 35.063 .000 Dalam kelompok 9924.800 45 220.551

Total 40857.280 49

Lampiran 2 Hasil uji lanjut Duncan terhadap aktivitas fagositosis makrofag yang diberikan formula ekstrak tanaman obat

Duncan

Formula N

Subset for alpha = 0.01

1 2 3

Kontrol 10 15.2000

Formula 1 10 59.2000

Formula 4 10 70.4000 70.4000

Formula 2 10 81.8000

Formula 3 10 82.8000

Sig. 1.000 .099 .084

Lampiran 3 Hasil uji ANOVA terhadap kapasitas fagositosis makrofag yang diberikan formula ekstrak tanaman obat.

ANOVA

Kapasitas

Jumlah kuadrat Db Rataan kuadrat F Sig.

Antar kelompok 228.046 4 57.012 9.562 .000

Dalam kelompok 268.294 45 5.962

(40)

Lampiran 4 Hasil uji lanjut Duncan terhadap kapasitas fagositosis makrofag yang diberikan formula ekstrak tanaman obat.

Duncan

Formula N

Subset for alpha = 0.01

1 2

Kontrol 10 3.9000

Formula 3 10 5.6600

Formula 1 10 5.8500

Formula 2 10 5.8600

Formula 4 10 10.3300

(41)