43
Lampiran 1. Komposisi dan Prosedur Pembuatan Medium
1.
Medium Starch Casein Nitrat (SCN)
Bahan
g/L
Soluble starch
10
Kasein
1
2.
Medium cair Yeast Extract Malt Extract (YEME)(Nurkanto et al., 2008)
Bahan
g/L
3.
Medium cair Oatmeal(Nurkanto et al., 2008)
Bahan
g/L
Oatmeal
komersial
20
Yeast extract
1
4.
Medium Starch Agar (SA)(Bridson, 1998)
Bahan
g/L
Meat extract
3
44
5.
Medium Urea Broth (UB)(Bridson, 1998)
Bahan
g/L
Yeast extract
0,1
Dipotassium hydrogen phosphate
9,5
Potassium dihydrogen phosphate
9,1
Urea
20,0
Phenol red
0,01
Akuades
1000 mL
pH akhir 6,8 ± 0,2
6.
Medium Sulfide Indole Motility (SIM)(Bridson, 1998)
Bahan
g/L
Tryptone
20
Peptone
6,1
Ferrous ammonium sulphate
0,2
Sodium thiosulphate
0,2
Agar
3,5
Akuades
1000 mL
pH akhir 7,3 ± 0,2
7.
Medium Tryptone Soya Agar (TSA)(Bridson, 1998)
Bahan
g/L
8.
Medium Basal
Bahan
Dalam 1 L
Prosedur Pembuatan Medium
Semua bahan dilarutkan dalam akuades sampai volume 1000 mL. Larutan
dididihkan dan terus diaduk hingga homogen. Kemudian pH medium diukur, apabila
terlalu asam ditambahkan NaOH dan apabila terlalu basa ditambahkan HCl. Medium
dimasukkan dalam labu Erlenmeyer dan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu
121
oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.
45
Lampiran 2. Spesifikasi Peralatan dan Bahan
1.
Alat
No Nama Alat Merek/Tipe Kegunaan Tempat
1 Cawan petri IWAKI Pyrex®,
Japan Menumbuhkan biakan Lab. Mikrobiologi
2 Tabung reaksi IWAKI Pyrex®,
Japan Uji-uji biokimiawi Lab. Mikrobiologi
3 Mikropipet Socorex, Swiss Mengambil larutan dengan
volume 1000 µl Lab. Mikrobiologi
4 Tip Biologix,
Amerika Memindahkan larutan Lab. Mikrobiologi
5 Labu Erlenmeyer IWAKI Pyrex®,
Japan Tempat pembuatan media Lab. Mikrobiologi
6 Gelas ukur IWAKI Pyrex®,
Japan Mengukur volume cairan Lab. Mikrobiologi
7 Beaker glass IWAKI Pyrex®,
Japan Tempat preparasi media Lab. Mikrobiologi
8 Optilab Miconos Mengamati struktur hifa
isolat dan untuk foto Lab. Mikrobiologi
9 Pipet tetes Stera, Indonesia Mengambil larutan yang
volumenya tidak diketahui Lab. Mikrobiologi
10 pH meter
Thermo electron coorpoeation/ Russel RL060P
Mengukur derajat keasaman
larutan atau media Lab. Mikrobiologi
11 Timbangan analitik
Tipe EO 2140 (Ohaus Co,, USA)
Mengukur massa bahan Lab. Mikrobiologi
12 Refrigerated
centrifuge
Hitachi-himac
CR7 Sentrifugasi Lab. Riset
13 Mikroskop cahaya Olympus C110 Mengamati mikromorfologi
isolat Lab. Mikrobiologi
14 Mikroskop stereo Olympus SZ30 Mengamati morfologi koloni
isolat Lab. Mikrobiologi
15 Autoklaf
Sterilisasi bahan dan alat Lab. Mikrobiologi
16 Oven Memmert Mengeringkan kertas saring
dan miselium Lab. Mikrobiologi
17 Hotplate dan stirrer
bar
Ika® C-MAG HS 10
Menghomogenkan media
atau larutan Lab. Mikrobiologi 18 Desikator - Menstabilkan suhu Lab. Mikrobiologi
19 Inkubator Memmert Memeram biakan pada suhu
terkontrol Lab. Mikrobiologi
20 Rotary evaporator Stuart RE300 Menguapkan pelarut Lab. Riset
21 Spektrofotometer Shimidzu/ UV 1800
Menentukan maksimum
pigmen Lab. Biokimia
22 Pembakar spirtus - Menciptakan suasana aseptis Lab. Mikrobiologi
23 Bor gabus - Membuat cetakan isolat
berukuran seragam Lab. Mikologi 24 Rak tabung reaksi - Meletakan tabung reaksi Lab. Mikrobiologi 25 Jarum inokulum - Inokulasi biakan Lab. Mikrobiologi
26 Sprayer alkohol Nagata Untuk kerja aseptis Lab. Mikrobiologi
27 Object glass Sail brand Untuk pengamatan Lab. Mikrobiologi
46
mikromorfologi pada mikroskop cahaya
28 Cover glass Sail brand Pasangan object glass Lab. Mikrobiologi
29 Corong - Untuk memudahkan
memasukkan larutan Lab. Mikrobiologi
30 Kulkas National®
model B22AF Menyimpan media Lab. Mikrobiologi
31 Microwave Menumaster Memanaskan media Lab. Mikrobiologi
32 Kompor Listrik Rinai Proses Sokletasi Lab. Biokimia
33 Soxhlet extractor Pyrex Ekstraksi pigmen Lab. Biokimia
2.
Bahan
No, Nama bahan Spesifikasi Kegunaan
1 Isolat aktinomisetes Isolat uji
2 Medium SCN 2000 ml Sebagai medium produksi pigmen isolat aktinomisetes
3 Medium YEME 600 ml Sebagai medium produksi pigmen isolat aktinomisetes
4 Medium Oatmeal 600 ml Sebagai medium produksi pigmen isolat aktinomisetes
5 Medium SA 100 ml Untuk uji hidrolisis amilum
6 Medium Urea Broth 50 ml Untuk uji kemampuan menghasilkan urease
7 Medium PA 100 ml Untuk uji hidrolisis protein 8 Medium MM + lemak 100 ml Untuk uji hidrolisis lipid 9 Medium SIM 50 ml Untuk uji produksi H2S
10 Medium TSA 50 ml Sebagai medium tumbuh isolat aktinomisetes
11 Medium Basal 600 ml Untuk uji penggunaan karbohidrat 12 Galaktosa 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi 13 Sukrosa 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi 14 Raffinosa 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi 15 Mannitol 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi 16 Arabinosa 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi 17 Xylosa 1 g Bahan karbohidrat untuk uji biokimiawi
18 KNO3 0,1 g Sebagai sumber nitrat
19 NaOH 2 N Untuk menaikan pH larutan
20 HCl 2 N Untuk menurunkan pH larutan
21 Nystatin Sebagai antijamur
22 Larutan A (asam sulfanilat) 10 ml Reagen dalam uji reduksi nitrat 23 Larutan B (alfanaftilamin) 10 ml Reagen dalam uji reduksi nitrat 24 Lugol’s iodine 10 ml Reagen dalam uji hidrolisis amilum 25 Serbuk Zn Indikator dalam uji reduksi nitrat
26 Alkohol 70% Desinfektan
27 Etil asetat Pelarut
28 Etanol 90% Pelarut
29 Kertas Whatman No, 1 Untuk menyaring miselium aktinomisetes
30 Alumunium foil Penutup tabung
31 Spirtus Bahan pengisi Bunsen
32 Kapas Pembuat sumbat
33 Tisu Membersihkan atau mengeringkan alat
34 Label Labeling
35 Wrapper Pelapis
47
Lampiran 3. Pengamatan Makroskopis Aktinomisetes
Isolat
Hari ke-
Koloni tampak atas
Koloni tampak bawah
K-4B
7
14
U3-3B
7
14
48
Lampiran 4. Tabel Pengamatan Morfologi Koloni Aktinomisetes
1.
Isolat K-4B
Karakteristik Hari ke-
2 4 6 8 10 12 14
Bentuk circular circular circular irregular irregular irregular irregular
Permukaan mengkilap mengkilap dan berbeludru
berbeludru berbubuk berbubuk berbubuk berbubuk
Elevasi flat crateriform crateriform flat raised raised raised
Margin entire entire entire undulate undulate undulate undulate
Miselium aerial putih putih krem krem krem krem krem
Miselium substrat kuning kuning kemerahan merah merah merah merah merah
Gambar atas koloni
Gambar bawah koloni
49
2.
Isolat U3-3B
Karakteristik Hari ke-
2 4 6 8 10 12 14
Bentuk circular circular circular circular circular circular circular
Permukaan berbeludru berbeludru berbubuk berbubuk berbubuk berbubuk Berbubuk
Elevasi convex convex convex convex convex convex convex
Margin entire entire entire entire entire entire entire
Miselium aerial putih putih abu-abu muda abu-abu abu-abu abu-abu abu-abu
Miselium substrat kuning muda kuning muda kuning kuning-oranye kuning-oranye kuning-oranye kuning-oranye Gambar atas koloni
Gambar bawah koloni
50
Lampiran 5. Gambar Hasil Uji Biokimiawi
Uji
K-4B
U3-3B
Hidrolisis
Amilum
Hidrolisis Lipid
Hidrolisis Kasein
Hidrolisis Urea
Kontrol
Kontrol
51
Reduksi Nitrat
Produksi H
2S
Penggunaan
Raffinosa
Penggunaan
Arabinosa
Kontrol
K-4B
U3-3B
Kontrol
Kontrol
52
Penggunaan
Galaktosa
Penggunaan
Mannitol
Penggunaan
Sukrosa
Penggunaan
53
Lampiran 6.Produksi Pigmen pada Berbagai Medium Pertumbuhan
1.
Isolat K-4B
Medium
Hari ke-7
Hari ke-14
Hari ke-21
SCN
YEME
Oatmeal
54
2.
Isolat U3-3B
Medium
Hari ke-7
Hari ke-14
Hari ke-21
SCN
YEME
Oatmeal
55
Lampiran 7.Proses Ekstraksi Pigmen Aktinomisetes
1.
Isolat K-4B
Medium
pH 12
Setelah sentrifugasi
pH 2
SCN
YEME
Oatmeal
56
2.
Isolat U3-3B
Medium
pH 12
Setelah sentrifugasi
pH 2
SCN
YEME
Oatmeal
57
Lampiran 8. Tabel Biomassa Miselium Aktinomisetes
Isolat
Medium
Bobot awal
(g)
Bobot akhir
(g)
Biomassa
(g)
K-4B
SCN
0,0292
1,5792
1,5500
YEME
0,0292
1,2127
1,2127
Oatmeal
0,0292
1,5094
1,5094
U3-3B
SCN
0,0285
1,7111
1,6825
YEME
0,0285
2,3044
2,2759
Oatmeal
0,0285
2,2887
2,2602
58
Lampiran 9.Tabel Bobot Pigmen Intraseluler dan Ekstraseluler Aktinomisetes
1.
Pigmen Intraseluler
Isolat
Medium
Miselium (g)
Miselium setelah
ekstraksi (g)
Oatmeal
1,5094
0,7915
0,7179
U3-3B
SCN
1,6825
1,2473
0,4352
YEME
2,2759
1,7638
0,5121
Oatmeal
2,2602
1,7528
0,5074
2.
Pigmen Ekstraseluler
Isolat
Medium
Endapan (g)
Endapan setelah
ekstraksi (g)
Oatmeal
0,1247
0,0621
0,0626
U3-3B
SCN
0,0693
0,0226
0,0467
YEME
0,1863
0,1007
0,0856
Oatmeal
0,2590
0,1036
0,1554
59
Lampiran 10. Tabel Perbandingan Warna Ekstrak Pigmen dengan Standar
Warna Universal
Isolat
Medium
60
Lampiran 11. PanjangGelombang Maksimum Pigmen Aktinomisetes
Isolat
Medium
maks
(nm)
Intraseluler
Ekstraseluler
pH 4
pH 7
pH 10
K-4B
SCN
525,00
523,00
523,00
526,50
YEME
523,00
523,00
523,00
527,50
Oatmeal
523,50
523,00
523,00
526,00
U3-3B