Isolasi Senyawa Flavanon Dari Daun Sirsak

ISOLASI SENYAWA FLAVANON DARI DAUN SIRSAK ISOLASI SENYAWA FLAVANON DARI DAUN SIRSAK (

( An Annonona na mumuriricacatata _{L.) DAN UJI ANTIOKSIDAN DENGAN METODE L.) DAN UJI ANTIOKSIDAN DENGAN METODE} SPEKTROFOTOMETRI DAN PEREAKSI DPPH

SPEKTROFOTOMETRI DAN PEREAKSI DPPH

PROSEDUR PENELITIAN PROSEDUR PENELITIAN daun sirsak  daun sirsak 

Penyiapan Sape!

Penyiapan Sape!

Sebanyak

Sebanyak 1 1 kg kg sampel sampel yang yang segar segar dari dari daun daun sirsak sirsak ini ini disortasdisortasi i basahbasah yakni dipisahkan dari pengotor atau bagian yang tidak diinginkan, tahap ini yakni dipisahkan dari pengotor atau bagian yang tidak diinginkan, tahap ini d i

d il al ak uk uk ak an n s es ec ac ar a r a m an um an ua la l. . S eS ette le la h a h i ti tu , u , s as ammp ep el l d i d i c uc uc i c i b eb errs is ih h u nu nt ut uk  k   men

menghighilanlangkagkan n penpengotgotor or yayang ng mamasisih h tertersisisasa. . KemKemudiudian an sasampempel l dirdirajaajangng dengan menggunakan pisau atau alat yang bukan logam seperti kaca atau dengan menggunakan pisau atau alat yang bukan logam seperti kaca atau  p

 pisisauau st staiainlnlesess s ststeeel el . Proses pengeringan tidak dilakukan karena yang diambil. Proses pengeringan tidak dilakukan karena yang diambil  p

 padada a ppeneneelilititian an inini i adadaalalah h sisimpmplilisisia a bbaasasah h dadari ri dadaun un ttuumbmbuhuhan an sisirsrsaak.k. I"en#i$i%a&i Me#a'!i# Se%n"e*

I"en#i$i%a&i Me#a'!i# Se%n"e*

Pengujian fitokimia dilakukan dengan pemeriksaan alkaloid (Culvenor nd Pengujian fitokimia dilakukan dengan pemeriksaan alkaloid (Culvenor nd !it"gerald, 1#$%&, flavonoida (Simes, '.'.., )elbourne, 1#*#&, terpenoid, !it"gerald, 1#$%&, flavonoida (Simes, '.'.., )elbourne, 1#*#&, terpenoid,  p

 pememeeririksksaaan an sasapoponinin, n, SSteteroroidid, , sasappononin in dadan n sesennyaya++a a ffenenol ol (S(Simimeses, , '.'.'.'..,., )elbourne, 1#*#&. asil yang diperolah adalah sebagai berikut 

)elbourne, 1#*#&. asil yang diperolah adalah sebagai berikut  Ta'e! +

Ta'e! +. asil -dentifikasi )etabolit Sekunder . asil -dentifikasi )etabolit Sekunder  )

)eettaabboolliit t SSeekkuunnddeerr PPeerreeaakkssii aassiill 

llkkaallooiidd PPeerreeaakkssi i ))aayyeer  r   ,, !

!llaavvoonnooiidd ))ggCCll ,, !

!eennoolliikk !!eeCCll%% ,,

/

/eerrppeennooiidd 00iieebbeerrmmaannnn22uurrcchhaarrdd --S

Stteerrooiidd 00iieebbeerrmmaannnn22uurrcchhaarrdd --S

--E%&#*a%&i "an F*a%&ina&i

3 au n s ir sa k 1 k g d al am k ea da an s eg ar y an g t el ah d ir aj an g l al u dimaserasi dengan menggunakan metanol sebanyak %4 selama 5 hari 6 17 0. Kemudian disaring, didapat ampas dan sari metanol, sari metanol diuapkan dengan rotary evaporator  sehingga didapatkan ekstrak kental yang bebas dari metanol, kemudian ditimbang didapat ekstrak kental sebanyak 88,9 g. Setelah i tu , d ie nc er ka n d en ga n a ir h an gg at % 77 ml k ed al am e ks tr ak k en ta l t ad i kemudian disaring dengan kapas.

3iperoleh fraksi air, fraksi air diambil 177 ml kemudian dilarutkan dengan asam asetat *: sebanyak *7 ml lalu dikocok dan dienaptuangkan, kemudian dibasakan dengan amoniak pekat kurang lebih 17ml hingga p 17, selanjutnya larutan difraksinasi dengan larutan 3C) % 4 %77 ml maka didapatkan fraksi diklormetana (3C)& basa, selanjutnya disaring dengan  ;a8S<5 e ks ik atu s. ! ra ks i d iu ap ka n d en ga n rotary evaporator  sehingga didapatkan ekstrak kering dari fraksi 3C) basa dengan berat 7,1%$$ g. Kemudian fraksi air yang tersisa, dinginkan, dimasukkan ke dalam corong  pis ah , kem udi an di ta mb ah kan hek sa n seb an ya k %7 7ml , dik oc ok den ga n

corong pisah selama 1* menit, setelah didiamkan maka akan terbentuk 8 lapisan didalam larutan tersebut dimana bagian atas heksan dan lapisan  ba+ ah fr ak si air, lap is an hek sa n dip is ahk an . !ra ks i ai r kem bali dik oco k 

d en ga n h ek sa n 8 4 % 77 m l. K um pu la n f ra ks i h ek sa n d is ar in g d en ga n  ;a8S<5  eksikatus, kemudian diuapkan dengan rotary evaporator , maka akan didapatkan ekstrak kering heksan, dengan berat 1,5$1=g. Sisa fraksi air, dimasukkan ke dalam corong pisah, kemudian ditambahkan 3C) sebanyak  %77 ml, dikocok dengan corong pisah selama 1* menit, setelah didiamkan maka akan terbentuk 8 lapisan didalam larutan tersebut dimana bagian atas fraksi air dan lapisan ba+ah larutan 3C) (3iklormetana&, lapisan 3C) dipisahkan. !raksi air kembali dikocok dengan 3C) 8 4 %77 ml. Kumpulan f ra ks i 3C), di sa ring de ng an ; a8S<5 eksikatus, kemudian diuapkan dengan rotary evaporator , maka didapatkan ekstrak kering 3C), dengan  ber at 1,1 79=g

Kemudian sisa fraksi air, dimasukkan ke dalam corong pisah, kemudian ditambahkan etil asetat sebanyak %77 ml, dikocok dengan corong pisah selama 1* menit, setelah didiamkan maka akan terbentuk 8 lapisan didalam larutan tersebut dimana bagian atas larutan etil asetat dan lapisan ba+ah fraksi air, lapisan etil asetat dipisahkan. !raksi air kembali dikocok dengan e ti l a se ta t 8 4 % 77 m l. K ump ul an f ra ks i e ti l a se ta t d is ar in g d en ga n  ;a8S<5 eksikatus, kemudian diuapkan denganrotary evaporator , maka

didapatkan ekstrak etil asetat kering, dengan berat 8,7=5 g

I"en#i$i%a&i F!ani" "an a!%a!i" "en/an KLT

/ujuan melakukan identifikasi flavonoid dan alkaloid dengan K0/  pre pa ra tif ad ala h un tu k me ngeta hui pad a ek st ra k ke ri ng ma na ya ng

I"en#i$i%a&i F!ani" "en/an KLT

>kstrak kering dilarutkan sedikit dengan pelarut masingmasing lalu ditotolkan pada plat K0/ silika gel !8* 5  dengan ukuran panjang * cm dan lebar 1 cm. !ase gerak yang digunakan ialah asam asetat *: air (1#& dalam 17 ml dan 3C) metanol (98&. !ase gerak dimasukkan dalam chamber  lalu dijenuhkan, masukkan K0/ yang sudah ditotol biarkan terjadi elusi, kemudian diangkat plat K0/ dengan menggunakan pinset sebelum batas atas plat k er in gk an . S et el ah k er in g d it ot ol ka n ! eC l% a ta u s it ru s b or at d en ga n menggunakan kapas lalu pelat dilihat di ba+ah lampu ?@, positif flavonoid ditunjukkan bercak +arna hitam atau kuning pada plat (arbone, '. 2., 1#9=&. I"en#i$i%a&i A!%a!i" "en/an KLT

>kstrak kering dilarutkan sedikit dengan pelarut masingmasing lalu ditotolkan pada plat K0/ silika gel !8* 5  dengan ukuran panjang * cm dan lebar 1 cm. !ase gerak yang digunakan ialah campuran metanol larutan ammonia 8*: (877 %& dalam 17 ml dan 3C) )etanol (98& dalam 17ml. !ase gerak dimasukkan dalam chamber lalu dijenuhkan, dimasukkan K0/ yang sudah ditotol biarkan terelusi. 3iangkat K0/ dengan menggunakan  pin se t se bel um bat as at as pla t ke ri ng ka n. Set ela h keri ng di to tolk an pere ak si 3ragendorff dengan menggunakan kapas lalu plat dilihat di ba+ah lampu ?@. Positif alkaloid ditunjukkan bercak +arna jingga dengan latar belakang kuning. Selain fase gerak diatas bisa juga digunakan fase gerak campuran metanol diklormetana (3jamal, 8717&.

Ta'e! 0. asil -dentifikasi Senya+a )etabolit Sekunder dengan K0/ Silika Ael A!8* 5dan Pengujian dengan Sianidin /est

F*a%&i A!%a!i" (P. 3ragendorff )

F!ani" Fen!i%   (Fe1!2)

( Si #* & ' * a# ) S ia ni "i n Te& #

neksan - - - -3C) , - -, ->til setat - , , 3C) basa , - -

-U3i A%#ii#a& An#i%&i"an Den/an Me#"e DPPH Pe'a#an Rea/en DPPH

Serbuk 3PP ditimbang lebih kurang #,9*=* mg menggunakan timbangan analitik dimasukkan ke dalam labu ukur 8*7ml dilarutkan dalam 177 ml metanol destilat, kemudian dikocok sampai larutan homogen ber+arna violet. Kemudian metanol destilat diteteskan ke dalam labu hingga batas volume 8*7 ml. 0abu ditutup rapat dengan penutupnya, kemudian dikocok  sampai larutan homogen ber+arna violet, sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 177B). Pengerjaannya dilakukan ditempat yang terlindung dari cahaya.

Pen/%*an Pan3an/ Ge!'an/ Se*apan Ma%&i DPPH

0 ar ut an 3 PP  y an g t el ah d ib ua t d ip ip et s eb an ya k % ,9 m l d an ditambahkan 7,8 ml metanol mengunakan pipet mikro. 0arutan 3PP dikocok   pel an hi ngga homo gen dan dib ia rk an se la ma %7 me nit di te mp at ya ng

terlindung dari cahaya. 0arutan campuran 3PP dengan metanol dimasukkan ke dalam kuvet dan diuji serapannya menggunakan alat spektrofotometri dan s er ap an l ar ut an d iu ku r d en ga n s pe kt ro fo to me tr i v is ib el p ad a p an ja ng gelombang 577977 nm. )aka didapatkan panjang gelombang *1*,9 nm dengan bsorbansi 7,=18.

Penen#an I145 F*a%&i E#i! A&e#a# Dan Si*&a%  Pe'a#an La*#an Sape!

!raksi ekstrak kering ditimbang sebesar 17 mg (untuk 3C) dan etil asetat&, dan ditimbang 7,* mg (untuk etil asetat&, di dalam vial 17 ml yang telah dinolkan pada timbangan analitik. Setelah itu dilarutkan dengan metanol * ml, vial digoyang sampai larutan uji telah homogen, metanol diteteskan ke dalam vial hingga 17ml yang segera ditutup rapat, vial dikocok secara bolak   bal ik sam pai la ru ta n te la h ho mo ge n se ca ra vi su al . 3il ak uk an pemi peta n ke du a

sebanyak *ml, larutan uji tersebut dimasukkan ke dalam vial kedua dan dilarutkan dengan metanol hingga 17ml. 3ilakukan pemipetan sampai didapatkan * konsentrasi. Konsentrasi larutan uji yang didapatkan dari kelima  pen ge nce ra n te rs ebu t adal ah se be sa r 1, 7,*, 7, 8*, 7, 18 *, 7,7 $8 *, dan

7,7%18* mgml. Sementara 3C) basa ditimbang $ mg yang dilarutkan dalam $ ml metanol destilat yang segera ditutup rapat, vial dikocok secara bolak   bal ik sam pai la ru ta n te la h ho mo ge n se ca ra vi su al . 3il ak uk an pemi peta n ke du a

sebanyak % ml, larutan uji tersebut dimasukkan ke dalam vial kedua dan dilarutkan dengan metanol hingga $ ml, dilakukan pengenceran sampai * konsentrasi, dibuat dengan konsentrasi yang sama dengan fraksi etil asetat dan 3C).

Penen#an A%#ii#a& An#i%&i"an

3ipipet 7,8 ml masingmasing larutan sampel dengan berbagai konsentrasi, dimasukan kedalam vial, ditambah %,9 ml larutan 3PP 177B), dihomogenkan dan dibiarkan selama %7 menit ditempat gelap. Serapan diukur  dengan spektrofotometri ?@@is pada panjang gelombang serapan maksimum 3PP yakni *1*,9 nm. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan sebanyak  dua kali pengulangan untuk masingmasing konsentrasi larutan sampel k em ud ia n d ia na li sa d en ga n r eg re si d an k or el as i i nh ib is i ( -& t er ha da p konsentrasi

)enurut riyanto ci t . rmala (877#&, tingkat kekuatan antioksidan senya+a uji menggunakan metode spektofotometri dengan pereaksi radikal  beb as 3PP dap at di go lo ng kan me nu ru t nil ai IC *7 .

Ta'e! 2. bsorbansi Sari 3C), Sari >til setat dan Sari 3C) 2asa Pada 2erbagai Konsentarasi

Konsentrasi (ppm&

bsorbansi

3C) 3C) basa >til asetat

1777 7.1%$ 7.7$ 7.7%=

*77 7.891 7.18= 7.7*$

8*7 7.57= 7.%1$ 7.7==

18* 7.5=$ 7.55$ 7.79$

$8,* 7.*8$ 7.*1= 7.119

Ta'e! 6. ubungan Konsentrasi Sari 3C), Sari >til setat dan Sari 3C) 2asa dengan 3ata asil ?ji ntioksidan

Konsentrasi (ppm&

Persen -nhibisi Sampel

3C)(:& 3C) basa(:& >til asetat(:&

1777 97,9## #1,*=% #5,97% *77 $7,*%5 98,1$% #8,1%5 8*7 58,9%= **,$19 9#,19* 18* %%,15$ %=,%*# 9=,#81 $8,* 8$,185 8=,%99 9%,58= Y Pe*&aaan y  7.7*=4 D 8$.*8 y  7.7$=4 D %8.9% y  7.7174 D 9*.*1 R 0 EF  7,#=7 EF  7,95# EF  7.985

Ta'e! 4. ubungan Konsentrasi Sari >til setat dengan 3ata asil ?ji ntioksidan

Konsentrasi (ppm& bsorbansi Persen -nhibisi

(:& G Persamaan E   8 *7ppm 7,111 95,51 G  1.$*14 D 7.77* 7,##% 8*ppm 7,555 %=,$5 18,*ppm 7,*$# 87,795 $,8*ppm 7,$5% #,$#1 %,18*ppm 7,$*5 9,15$

I&!a&i F!ani" F*a%&i E#i! A&e#a# "en/an K*a#/*a$i K! "an KLT P*epa*a#i$ 

K*a#/*a$i K! F*a%&i E#i! A&e#a# Dan Si*&a% 

-solasi senya+a dilakukan terhadap fraksi etil asetat daun sirsak  dengan menggunakan metoda kromatografi kolom, yang sebelumnya dianalisa dengan K0/ menggunakan fase diam silika gel A! 8*5, fasa gerak metanol dan diklorometana (3C)& dengan perbandingan tertentu. Sebagai penampak   ber cak di gu nak an lam pu ?@ de ng an pa nj an g ge lo mb an g 8*5 nm, se tel ah

didapatkan pelarut yang cocok untuk memisahkan komponenkomponen yang a da d al am s en ya +a t er se bu t, s el an ju tn ya d il ak uk an p em is ah an s ec ar a kromatografi kolom. Pada pemisahan a+al ini pelarut yang digunakan sebagai fase gerak adalah campuran pelarut yang memiliki perbandingan tertentu.

Pelarut yang digunakan adalah gerak metanol dan diklorometana. !raksi etil asetat sebanyak 577mg dikromatografi vakum cair ( fl ash ch romat og ra ph y& dengan fase diam silika gel $7 ukuran 5%$7 Bm dan fase geraknya metanol dan diklorometana (3C)&. Silika gel disuspensikan dengan metanol dan diklorometana. Suspensi silika gel dimasukkan kedalam kolom berupa tabung kaca yang ujungnya terdapat kapas dan pastikan silika di dalam kolom menjadi padat sambil diketokketok dan tidak ada rongga udara. Sampel disiapkan secara preabsorbsi dengan melarutkannya dalam metanol dan 3C). ?sahakan sampel harus benarbenar melarut pada fase gerak. Sampel yang telah larut dimasukkan merata ke dalam kolom kromatografi kemudian dielusi dengan fase gerak yang kepolarannya ditingkatkan secara bertahap. Pengelusi yang digunakan sebagai berikut

)etanol  3iklormetana 1  # 577ml

)etanol  3iklormetana 8  9 177ml

)etanol  3iklormetana 8,*  =,* 177ml

!raksi yang keluar ditampung dengan vial yang volumenya ratarata 87ml, maka didapatkan dari perbandingan metanol  diklormetana 1  # sebanyak 8= v ia l, p er ba nd in ga n m et an ol  d ik lo rm et an a 8  9 s eb an ya k $ v ia l sementara perbandingan fase gerak metanol  diklormetana 8,*  =,* sebanyak  $ vial. Setelah itu tiap fraksi dimonitor dengan K0/ menggunakan eluen metanol  diklormetan (89&, (%=&, (8,*=,*& dengan penampak bercak lampu ?@ 8*5 nm, reagennya amoniak dan sitrus borat. !raksi dengan pola K0/ yang sama atau besar E f nya yang sama yakni 7,=* digabung yakni pada subfraksi vial 88% (1#&. Selanjutnya diuapkan dengan rotary evaporator dan ditimbang beratnya, didapat berat  11$,9 mg, senya+a hasil kolom ini dinamakan senya+a 3SK. Kemudian vial %1%% (89& digabung untuk fase gerak (%=& dan vial %=%# (8,* =,*& digabung untuk fase gerak (**&. ;amun untuk fase gerak kolom metanol  3C) dengan perbandingan (89& dan (8,*  =,*& tidak diidentifikasi lebih lanjut.

Ga'a* +. Profil K0/ asil >lusi dari Kromatografi Kolom pada !ase Aerak  )etanol  3iklormetana (3C)& (89&

K*a#/*a$i Lapi& Tipi& P*epa*a#i$ (Ha*'*ne7 +89:)

!raksi etil asetat yang telah didapatkan dari pemisahan dengan menggunakan kromatografi kolom pada perbandingan fase gerak metanol diklormetana (1#&, dimana fraksi yang dikumpulkan memiliki E f  yang relatif  s am a d ig ab un g k em ud ia n d iu ap ka n d en ga n rotary evaporator  sehingga didapatkan ekstrak kering selanjutnya ditimbang didapatkan berat 11$,9 mg, kemudian dilakukan dilakukan pemisahan lanjutan dengan kromatografi lapis tipis (K0/& preparatif untuk mendapatkan senya+a yang lebih murni lagi, diambil sedikit dari ekstrak yang ada, dilarutkan dengan metanol. Kemudian ekstrak yang telah larut ditotolkan pada plat K0/ dengan ukuran $,* 4 $,* cm. 2ercak yang terbentuk berupa pita, dengan menggunakan pipa kapiler. Kemudian dikeringkan dan dikembangkan dengan fase gerak untuk K0/  pre pa ra tif in i ad ala h met an ol  di kl or me ta na den gan per ba nd in gan 8 9. Pla t K0/ yang telah terelusi dilihat dilampu ?@ dengan panjang gelombang 8*5 nm. )aka akan terlihat bercak berupa pita, kemudian dari plat K0/ ini digunting sedikit untuk diuji penampak bercak dengan menggunakan iodium, amoniak, sitrus borat, !eCl%, pereaksi 3ragendorff. Sebagiannya dikerok dari  pla t K0/, kemu di an die ks tr ak si deng an fa se ger ak ya ng sa ma , lal u di sa ri ng dengan kaca masir. asil ekstraksi diuapkan dengan rotary evaporator s eh in gg a d id ap at ka n e ks tr ak k er in g h as il p em is ah an d en ga n kromatografi preparatif disebut dengan senya+a 3S dengan berat *,8 mg. Kemudian dihitung E f  nya maka didapatkan 7,=. Senya+a hasil isolasi berupa serbuk amorf ber+arna putihoranye.

Ta'e! ;. asil Pengujian )etabolit Sekunder dari K0/ Preparatif Pada !ase Aerak )etanol  3iklormetan (89& dengan Penampak Harna

)etabolit Sekunder Penampak 2ercak asil

lkaloid Pereaksi 3ragendroff 

!lavonoid Sitrus 2orat D

!enolik !eCl% D

Ga'a* 2. asil Pengujian )etabolit Sekunder dari K0/ Preparatif Pada !ase Aerak )etanol  3iklormetan (89& dengan Penampak Harna

Pen/3ian An#i%&i"an "a*i Ha&i! E!&i F*a%&i K*a#/*a$i K!

>kstrak etil asetat hasil dari fraksi kromatografi kolom (Senya+a 3SK& dilakukan pengujian antioksidan dengan menggunakan metode 3PP, untuk  menentukan -C*7 dari senya+a yang sedikit lebih murni.

Pe'a#an Rea/en DPPH

Serbuk 3PP ditimbang lebih kurang #,9*=* mg menggunakan t im ba ng an a na li ti k d im as uk ka n k e d al am l ab u u ku r 8 *7 ml k em ud ia n dilarutkan dalam 177 ml metanol destilat, kemudian dikocok sampai larutan homogen ber+arna violet. Kemudian metanol destilat diteteskan ke dalam labu hingga batas volume 8*7 ml. 0abu ditutup rapat dengan penutupnya, k em ud ia n d ik oc ok s am pa i l ar ut an h om og en b er +a rn a v io le t, s eh in gg a

diperoleh larutan dengan konsentrasi 177B). Pengerjaannya dilakukan ditempat yang terlindung dari cahaya.

Pene#an Pan3an/ Ge!'an/ Se*apan Ma%&i DPPH

0 ar ut an 3 PP  y an g t el ah d ib ua t d ip ip et s eb an ya k % ,9 m l d an ditambahkan 7,8 ml metanol mengunakan pipet mikro. 0arutan 3PP dikocok   pel an hi ngga homo gen dan dib ia rk an se la ma %7 me nit di te mp at ya ng

terlindung dari cahaya. 0arutan campuran 3PP dengan metanol dimasukkan ke dalam kuvet dan diuji serapannya menggunakan alat spektrofotometri dan s er ap an l ar ut an d iu ku r d en ga n s pe kt ro fo to me tr i v is ib el p ad a p an ja ng gelombang 577977 nm. )aka didapatkan panjang gelombang *1*,7 nm dengan bsorbansi 7,#15.

Penen#an I145 "a*i F*a%&i Ha&i! K*a#/*a$i K! (Senya<a DSK)

Pe'a#an La*#an Sape!

Senya+a 3SK ditimbang sebesar * mg di dalam vial yang telah dinolkan pada timbangan analitik. Setelah itu dilarutkan dengan metanol 8,* ml, vial digoyang sampai larutan uji telah homogen. )etanol diteteskan ke dalam vial hingga *ml yang segera ditutup rapat. @ial dikocok secara bolak   bal ik sam pai la ru ta n te la h ho mo ge n se ca ra vi su al .

3ilakukan pemipetan kedua sebanyak 8,* ml, larutan uji tersebut dimasukkan ke dalam vial kedua dan dilarutkan dengan metanol hingga *ml. 3ilakukan  pen ge nce ra n hi ngga ko ns ent ra si kel ima . Ko ns en tr as i la ru ta n uj i ya ng didapatkan dari kelima pengenceran tersebut adalah sebesar 1, 7,*, 7,8*, 7,18*, 7,7$8*, 7,7%18* dan 7,71*$8* mgml. Senya+a pembanding digunakan vitamin C, dengan konsentrasi yang sama dengan larutan uji.

Penen#an A%#ii#a& An#i%&i"an

3ipipet 7,8 ml masingmasing larutan sampel dengan berbagai konsentrasi, dimasukan kedalam vial, ditambah %,9 ml larutan 3PP 177B), dihomogenkan dan dibiarkan selama %7 menit ditempat gelap. Serapan diukur  dengan spektrofotometer ?@@is pada panjang gelombang serapan maksimum 3PP yakni *1*nm. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan sebanyak satu kali pengujian untuk masingmasing konsentrasi larutan sampel. ktifitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan radikal 3PP melalui perhitungan persentasi inhibisi serapan 3PP, kemudian dihitung - C* 7 d en ga n m en gg un ak an p ers am aa n l in ie r y an g d id ap at ka n d ar i  per ba nd in gan gar is lur us anta ra ko ns ent ra si da n per se n in hi bis i. Kemu dia n

dilakukan perbandingan dengan senya+a pembanding vitamin C.

Ta'e! :. ubungan Konsentrasi Senya+a 3S dengan 3ata asil ?ji

ntioksidan Konsentrasi

(ppm& bsorbansi

Persen Peredaman

(:& G Persamaan I E 

8

8*7 7,7%9 #*,958 G  7.8194 D 55.58 EF  7.#$1 18* 7,1#% =9,995

%1.8* 7,5*9 5#,9#7

1*.$8* 7,5#* 5*,958

Ta'e! 9. ubungan Konsentrasi @itamin C dengan 3ata asil ?ji ntioksidan

Konsentrasi

(ppm& bsorbansi

Persen Peredaman

(:& G Persamaan I E 

8 8*7 7,78# #$,98= y  7.8%=4 D 55.5# EF  7.95# 18* 7,11* 9=,51= $8,* 7,%55 $8,%$% %1,8* 7,58% *%,=1# 1*,$8* 7,*=$ %$,#9

Spe%#*$#e#*i UV-VIS "an Spe%#*$#e#*i IR 

I"en#i$i%a&i Spe%#* UV-Vi& "a*i Ha&i! KLT P*epa*a#i$ 

Sebanyak 1 mg senya+a 3S dilarutkan dalam *ml metanol, kemudian diukur serapannya dengan Spektrofotometri dengan panjang gelombang 877 sampai 977 nm. 3ari pengukuran akan diketahui J maks senya+a flavonoid.

I"en#i$i%a&i $!ani" *ni "en/an Spe%#*$#e#*i IR 

Sebanyak 1 mg senya+a 3S flavonoidantosianin murni digerus dengan K2r murni dalam lumpang, kemudian pelet K2r. 3ari spektrum -E  dapat dilihat bilangan gelombang semua pita serapan yang muncul, data s pe kt ru m - E s en ya +a k em ud ia n d ib an di ng ka n d en ga n d at a r ef er en si flavonoid.

HASIL DAN PEM=AHASAN

/elah dilakukan isolasi sebuah senya+a antioksidan dari daun sirsak 

( An no na mu ri ca ta 0 .& y an g d ih ar ap ka n t id ak me nye ba bk an p en ya kit

 par ki nso n. Pr ose s ek st ra ks i dil aku kan se car a ma se ra si me ngg unak an pel aru t m et an ol . S ar i m et an ol d iu ap ka n d en ga n rotary evaporator , k em ud ia n diencerkan dengan air dan kemudian difraksinasi berturutturut dengan dengan nheksan, diklormetana, etil asetat kemudian dengan diklormetana dalam suasana basa. -dentifikasi senya+a metabolit sekunder pada masing masing fraksi menggunakan kromatografi lapis tipis seperti terlihat pada /abel 1 dan pengujian antioksidan dengan metode spektrofotometri @-S menggunakan pereaksi radikal 3PP seperti terlihat pada /abel 8. Pemisahan senya+a pada fraksi aktif antioksidan dengan kromatografi kolom dengan fasa diam silika gel $7 dan fasa gerak campuran diklormetana  metanol

dengan kepolaran meningkat dan K0/ preparatif dengan fasa diam Silika gel A!8* 5, dengan fasa gerak campuran diklormetana  metanol (89&. -dentifikasi

senya+a hasil isolasi dilakukan dengan metoda spektrofotometri ?@ dan Spektrofotometri -E.

?ji aktifitas antioksidan ekstrak diklormetana, etil asetat, diklormetana

dalam suasana basa menunjukkan -C*7 berturutturut 511,#8#, %7,898, dan

8 *$ ,% pp m. S ed an gk an i de nt if ik as i d en ga n K 0/ e ks tr ak d ik lo rm et an a, etilasetat, diklormetana dalam suasana basa menunjukkan kandungan kimia golongan alkaloid, flavonoid dan fenolik.

!raksi etil asetat yang mengandung flavonoid dan tidak mengandung alkaloid selanjutnya diisolasi dengan K0/ preparatif dengan fasa diam Silika

gel$7 d an fasa g erak c ampu ran d ik lo rmet an a  me ta no l (9 8 &. Pi ta

kromatogram dengan Ef 7,=* dikerok dan diekstraksi dengan metanol,

kemudian diuapkan dengan rotary evaporator   dan didapatkan suatu senya+a

flavonoid berupa serbuk amorf dengan +arna putih kekuningan. Spektrum ?@ flavonoid hasil isolasi dalam etanol menunjukkan J maksimal 88% nm dan 8=#,* nm. Sedangkan hasil spektrum -E menunjukan adannya gugus <, gugus C, gugus C<, gugus CC, gugus C<. Pengujian antioksidan senya+a hasil isolasi dengan metoda spektrofotometri @-S dengan pereaksi

radikal 3PP menunjukkan -C*7 8 *, $ p pm s ed an gk an - C*7 dari senya+a

 pem ban di ng vi ta mi n C me mb eri kan -C*7 9,8* ppm.

2erdasarkan pengujian dengan penampak bercak sitrus borat, fraksi etil

a se tat me ng an du ng sen ya+ a flav on oid sed an gk an d ar i da ta po la

spektrofotometri ?@ dan spektrofotometri -E yang dihasilkan, kemudian dibandingkan dengan literatur, senya+a hasil isolasi termasuk senya+a flavonoid diduga golongan flavanon, dan memiliki aktivitas antioksidannya kuat.

KESIMPULAN

1. 3 ar i p em er ik sa an p en da hu lu an m et ab ol it s ek un de r p ad a d au n s ir sa k  

( A. mu ric ata 0.& menunjukan hasil positif alkaloid, flavonoid, fenolik.

8.  as il m as er as i 1 k g d au n s ir sa k ( A. mu ri ca ta 0.& segar dengan metanol

didapatkan ekstrak kental 88,9 g. >kstrak kental difraksinasi dengan n heksan, diklormetana, etil asetat dan diklormetana dalam suasana basa, didapatkan ekstrak kering berturutturut 1,5$1=, 1,179=, 8,7=5 dan 7,1%$$g.

%. 3ari pengujian aktivitas antioksidan pada fraksi diklormetana, etil asetat

dan diklormetana dalam suasana basa, didapatkan -C*7 ber tu ru t tu ru t 511,#8 #,

%7,898, dan 8*$,% ppm. Sehingga didapatkan fraksi etil asetat yang memiliki aktivitas antioksidan kuat (*7 ppm&

5. !raksi etil asetat daun sirsak pada pengujian pendahuluan antioksidan

m em il ik i a kt iv it as p al in g t in gg i d ar i f ra ks i y an g l ai n. 3 en ga n - C*7 

%7,898ppm. Sedangkan !raksi etil asetat daun sirsak yang telah lakukan  pem is aha n de ng an kro ma to gra fi kolo m (s en ya +a 3S K& me mi li ki akti vit as

antioksidan kuat (*7 ppm& dengan -C*7  8*, $ppm, sedangkan -C*7vitamin

C8%,8*ppm.

*. 2erdasarkan hasil identifikasi yang diperoleh dari spektrofotometri ?@ dan

-E, bah+a flavonoid senya+a 3S dari daun sirsak ( A. mu ri ca ta  0.& diduga

senya+a golongan flavanon yang memiliki panjang gelombang maksimum 88% nm dan 8=#,*nm dan memiliki gugus fungsi <, C<, CC, C, dan gugus fungsi C<.

DAFTAR PUSTAKA

rmala, ). ).. 877#. Day a An ti ok si da n Fr ak si Ai r Ek st rak He rb a Ken ik ir (Cosmos caudatus . 2. K.& dan Profil K0/, kripsi, %#, !akultas !armasi ?niversitas -slam -ndonesia, Gogyakarta.

3jamal, Eusjdi. 8717. !r in si p"! ri ns ip Da sar Is ola si da n Id en tif ik asi. Padang ?niversitas 2aiturrahman.

Culvenor, C. C. ', dan '. S, !it"gerald. 1#$%. A Fi el d #e th od fo r Al ka lo id c reen in g of !l an t . '. Pharm Sci.

Aritter,E.'., '.). 2obbit, dan . >. Sch+arting. 1##1. !e ng ant ar Kr om ato gr afi $ %er bi ta n

kedua, diterjemahkan oleh Kosasih padma+inata. 2andung  -/2.

arborne, '.2.. 1#9=. #e to de Fi to kim ia $ !e nun tu n Ca ra #o de rn #e ng an al is a %umb uh an. /erjemahan K.Padma+inata. >disi --. -/2 Press. 2andung a laman =$

-deasanti. 1##*. %elaah enya&a Fenolik Daun irsak$ Annona muricata '.$ Annonaceae. 3ept. !armasi -/2 2andung.

)c0aughlin.8779. !a &"p a& and Ca nce r An no na ce ous Ac et og en in fr om Dis co ve ry to Co me rc ia l   !r od uc ts, 3epartment of )edicinal Chemistry and )olecular Pharmacology, School of 

Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Purdue ?niversity $ =1(=&1%11L1%81.

)ohanty, Sambeet et al , An no na mu ric ata () ra vio la *+ %o, ic or th er ap eu ti c$ -a tu ra l !r od uct  Communications, 8779M%(1&%1%%&.

Simes, '. ', et al. 1#*#. An Au st ra lia n !h ay to chem ic al urv ey ap on in s an d Ea st er   Aus tr al ia n Flo &e ri ng !l ant$ Co mm on &e al th ci nti fi c and In du str ia l e sea rch

/rgani0ation.ustralia

Goungson, Eobert. 877*. An tio ksi da n + #a nfa at 1itamin C da n E bag i Ke se ha ta n. 'akarta  rcan.