Media Kultur Bakteri

MEDIA KULTUR BAKTERI MEDIA KULTUR BAKTERI

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran at! Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran at! at makanan "nutrisi# yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya$

at makanan "nutrisi# yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya$

Mikroorganisme meman%aatkan nutrisi media berupa molekul!molekul kecil yang dirakit Mikroorganisme meman%aatkan nutrisi media berupa molekul!molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel$ Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat untuk menyusun komponen sel$ Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme men&adi kultur murni dan &uga memanipulasi komposisi media mikroorganisme men&adi kultur murni dan &uga memanipulasi komposisi media  pertumbuhannya$

 pertumbuhannya$

Bahan!bahan media pertumbuhan Bahan!bahan media pertumbuhan '$ Bahan dasar

'$ Bahan dasar

( air ")*+# sebagai pelarut ( air ")*+# sebagai pelarut ( agar "dari rumput laut# yang b

( agar "dari rumput laut# yang ber%ungsi untuk pemadat media$ Agar sulit didegradasier%ungsi untuk pemadat media$ Agar sulit didegradasi oleh mikroorganisme pada umumnya dan mencair pada suhu ,- o.$

oleh mikroorganisme pada umumnya dan mencair pada suhu ,- o.$

( gelatin &uga memiliki %ungsi yang sama seperti agar$ /elatin adalah polimer asam ( gelatin &uga memiliki %ungsi yang sama seperti agar$ /elatin adalah polimer asam amino yang diproduksi dari kolagen$ Kekurangannnya adalah lebih banyak &enis mikroba amino yang diproduksi dari kolagen$ Kekurangannnya adalah lebih banyak &enis mikroba yang mampu menguraikannya dibanding agar$

yang mampu menguraikannya dibanding agar$

( 0ilica gel1 yaitu bahan yang mengandung natrium silikat$ 2ungsinya &uga sebagai ( 0ilica gel1 yaitu bahan yang mengandung natrium silikat$ 2ungsinya &uga sebagai  pemadat media$ 0ilica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi

 pemadat media$ 0ilica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi mikroorganisme autotro% obligat$

mikroorganisme autotro% obligat$ *$ 3utrisi atau at makanan *$ 3utrisi atau at makanan

Media harus mengandung unsur!unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu Media harus mengandung unsur!unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu  berupa unsur makro seperti .1 )1 +1 31 45 unsur mikro seperti 2e1 Mg dan unsur  berupa unsur makro seperti .1 )1 +1 31 45 unsur mikro seperti 2e1 Mg dan unsur  pelikan6trace element$

 pelikan6trace element$

( 0umber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senya7a organik atau ( 0umber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senya7a organik atau

anorganik esuai dengan si%at mikrobanya$ 8asad heterotro% memerlukan sumber karbon anorganik esuai dengan si%at mikrobanya$ 8asad heterotro% memerlukan sumber karbon organik antara lain dari karbohidrat1 lemak1 protein dan asam organik$

organik antara lain dari karbohidrat1 lemak1 protein dan asam organik$

( 0umber nitrogen mencakup asam amino1 protein atau senya7a bernitrogen lain$ ( 0umber nitrogen mencakup asam amino1 protein atau senya7a bernitrogen lain$ 0e&umlah mikroba dapat menggunakan sumber 3 anorganik seperti urea$

0e&umlah mikroba dapat menggunakan sumber 3 anorganik seperti urea$ ( 9itamin!:itamin$

( 9itamin!:itamin$ ;$ Bahan tambahan ;$ Bahan tambahan

Bahan!bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke medium dengan tu&uan Bahan!bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke medium dengan tu&uan tertentu1 misalnya phenol red "indikator asam basa# ditambahkan

 perubahan p) akibat produksi asam organik hasil metabolisme$ Antibiotik ditambahkan untuk menghambat pertumbuhan mikroba non!target6kontaminan$

,$ Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media

( Agar1 agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan1 granula atau bubuk dan terbuat dari  beberapa &enis rumput laut$ Kegunaannya adalah sebagai pemadat "gelling# yang pertama kali digunakan oleh 2ra7 < =alther )esse untuk membuat media$ 8ika dicampur dengan air dingin1 agar tidak akan larut$ Untuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi1

 pencairan dan pemadatan berkali!kali atau sterilisasi yang terlalu lama dapat menurunkan kekuatan agar1 terutama pada p) yang asam

( 4eptone1 peptone adalah produk hidrolisis protein he7ani atau nabati seperti otot1 li:er1 darah1 susu1 casein1 lactalbumin1 gelatin dan kedelai$ Komposisinya tergantung pada

 bahan asalnya dan bagaimana cara memperolehnya$

( Meat e>tract$ Meat e>tract mengandung basa organik terbuat dari otak1 limpa1 plasenta dan daging sapi$

( ?east e>tract$ ?east e>tract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alcohol$ ?east e>tract mengandung asam amino yang lengkap < :itamin "B comple>#$

( Karbohidrat$ Karbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan gas dari karbohidrat$ 8enis karbohidrat yang umumnya digunkan dalam amilum1 glukosa1 %ruktosa1 galaktosa1 sukrosa1 manitol1 dll$ Konsentrasi yang ditambahkan untuk analisis %ermentasi adalah @1-!'$

Macam!Macam Media 4ertumbuhan '$ Medium berdasarkan si%at %isik 

( Medium padat yaitu media yang mengandung agar '- sehingga setelah dingin media men&adi padat$$

( Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar @1;!@1, sehingga men&adi sedikit kenyal1 tidak padat1 tidak begitu cair$ Media semi solid dibuat dengan tu&uan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna &ika tergoyang$ Misalnya bakteri yang tumbuh pada media 3%B "3itrogen %ree Bromthymol Blue# semisolid akan membentuk cincin hi&au kebiruan di ba7ah permukaan media1 &ika media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur$ 0emisolid &uga bertu&uan untuk mencegah6menekan di%usi oksigen1 misalnya pada media 3itrate Broth1 kondisi anaerob atau sedikit oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini &uga diharuskan tumbuh merata d iseluruh media$ ( Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar1 contohnya adalah 3B "3utrient Broth#1 LB "Lactose Broth#$

*$ Medium berdasarkan komposisi

( Medium sintesis yaitu media yang komposisi at kimianya diketahui &enis dan takarannya secara pasti1 misalnya /lucose Agar1 Mac .onkey Agar$

( Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti1 misanya 4DA "4otato De>trose Agar# yang mengandung aga r1 dekstrosa dan ekstrak kentang$ Untuk bahan ekstrak kentang1 kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senya7a penyusunnya$

( Medium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya1 misalnya Tomato 8uice Agar1 Brain )eart In%usion Agar1 4ancreatic E>tract$

;$ Medium berdasarkan tu&uan ( Media untuk isolasi

Media ini mengandung semua senya7a esensial untuk pertumbuhan mikroba1 misalnya  3utrient Broth1 Blood Agar$

( Media selekti%6penghambat

Media yang selain mengandung nutrisi &uga ditambah suatu at tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan

mikroba yang diinginkan$ .ontohnya adalah Luria Bertani medium yang ditambah Amphisilin untuk merangsang E$coli resisten antibotik dan menghambat kontaminan yang peka1 Ampiciline$ 0alt broth yang ditambah 3a.l , untuk membunuh

0treptococcus agalactiae yang toleran terhadap garam$ ( Media diperkaya "enrichment#

Media diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah1 serum1 kuning telur$ Media diperkaya &uga bersi%at selekti% untuk mikroba tertentu$ Bakteri yang ditumbuhkan dalam media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi sederhana untuk berkembang biak1 tetapi membutuhkan komponen kompleks1 misalnya Blood Tellurite Agar1 Bile Agar1 0erum Agar1 dll$

( Media untuk perema&aan kultur 

Media umum atau spesi%ik yang digunakan untuk perema&aan kultur ( Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesi%ik$

Media ini digunakan unutk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba$ .ontohnya adalah Kosers .itrate medium1 yang digunakan untuk mengu&i kemampuan menggunakan asam sitrat sebagai sumber karbon$

( Media untuk karakterisasi bakteri

Media yang digunakan untuk mengetahui kemempuan spesi%ik suatu mikroba$ Kadang! kadang indikator ditambahkan untuk menun&ukkan adanya perubahan kimia$ .ontohnya adalah 3itrate Broth1 Lactose Broth1 Arginine Agar$

( Media di%erensial

Media ini bertu&uan untuk mengidenti%ikasi mikroba dari campurannya berdasar karakter spesi%ik yang ditun&ukkan pada media di%erensial1 misalnya T0IA "Triple 0ugar Iron Agar# yang mampu memilih Enterobacteria berdasarkan bentuk1 7arna1 ukuran koloni dan perubahan 7arna media di sekeliling koloni$$

4embuatan 3utrient Agar dan 3utrient Broth ( 4embuatan 3utrient Agar 

C Timbang komponen medium dengan menggunakan timbangan analitis untuk :olume yang diinginkan sesuai dengan komposisi berikut

 Bee% e>tract ; g  4eptone - g  Agar '- g

 Akuades s$d '@@@ ml

C Akuades sebanyak '@@ ml dibagi men&adi dua satu bagian untuk melarutkan Bee% e>tract dan peptone dan sebagian lagi untuk melarutkan agar$ 0ebaiknya air untuk melarutkan agar lebih banyak 

C Larutkan agar pada sebagian air tersebut dengan mengaduk secara konstan dan diberi  panas$ Dapat menggunakan kompor gas atau hot plate stirrer "&angan sampai o:erheat1

karena akan terbentuk busa dan memuai sehingga tumpah#$

C 0ementara itu sebagian akuades digunakan untuk melarutkan peptone dan bee% e>tract1 cukup dengan pengadukan$

C 0etelah keduanya larut1 larutan dituangkan ke larutan agar dan diaduk sampai homogen$ Kemudian p) media diukur dengan mencelupkan kertas p) indikator$ 8ika p) tidak netral maka dapat ditambahkan ).l63a+)$

C 0etelah itu media dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer dan disterilisasi dengan autokla%$

C Tuang media steril ke ca7an petri steril secara aseptis$ 8ika diinginkan media tegak atau miring pada point ke -1 media langsung dituang ke tabung kemudian disterilisasi$

( 4embuatan 3utrient Broth

Komposisi untuk media 3B sama dengan 3A tetapi tidak memakai agar sebagai

 pemadat$ 4roses pembuatannyapun lebih sederhana1 tinggal melarutkan peptone dan bee% e>tract kemudian ditampung dalam labu Erlenmeyer atau tabung reaksi dan siap

disterilisasi$ 4roses pembuatan ini tidak memerlukan panas1 peptone dan bee% e>tract akan mudah larut sempurna pada air suhu kamar &ika diaduk 

4embuatan 4otato De>trose Agar "4DA#

C Timbang komponen media dengan menggunakan timbangan analitis untuk :olume yang diinginkan sesuai dengan komposisi berikut

 4otato6kentang ; g  4eptone - g

 Agar '- g

 Akuades s$d '@@@ ml

 "sebelum ditimbang1 sebaiknya kentang dikupas dan diiris kecil!kecil#

C Rebus kentang dalam sebagian akuades tadi selama '!; &am sampai lunak1 kemudian diambil ekstraknya dengan menyaring dan memerasnya menggunakan kertas saring lalu ditampung di Beaker glass baru$

C Agar dilarutkan dengan )ot 4late 0tirrer dalam -@ ml akuades lalu setelah larut dapat ditambahkan dekstrosa dan dihomogenkan lagi$

C 0etelah semua larut1 ekstrak kentang dan agar!dekstrosa dicampur dan dihomogenkan$ Atur p) media men&adi -!F dengan meneteskan ).l63a+)$

C Media dituang ke dalam Erlenmeyer atau ke tabung reaksi kemudian siap untuk disterilisasi$

Take %rom 

http66ekmon!saurus$blogspot$com6*@@G6''6bab!*!media!pertumbuhan$html MEDIA 4ERTUMBU)A3 BAKTERI

Media ber%ungsi untuk menumbuhkan mikroba1 isolasi1 memperbanyak &umlah1 mengu&i si%at!si%at %isiologi dan perhitungan &umlah mikroba1 dimana dalam proses pembuatannya harus disterilisasi dan menerapkan metode aseptis untuk menghindari kontaminasi pada media$ Berikut ini beberapa media yang sering digunakan secara umum dalam

mikrobiologi$ Lactose Broth

Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran koli%orm dalam air1 makanan1 dan produk susu1 sebagai kaldu pemerkaya "pre!enrichment broth# untuk 0almonellae dan dalam mempela&ari %ermentasi laktosa oleh bakteri pada umumnya$ 4epton dan ekstrak bee% menyediakan nutrien esensial untuk memetabolisme bakteri$ Laktosa menyediakan sumber karbohidrat yang dapat di%ermentasi untuk organisme koli%orm$ 4ertumbuhan dengan pembentukan gas adalah presumpti:e test untuk koli%orm$ Lactose broth dibuat dengan komposisi @1; ekstrak bee%5 @1- pepton5 dan @1-

laktosa$

EMBA "Eosin Methylene Blue Agar#

Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistime7aan mengandung laktosa dan

 ber%ungsi untuk memilah mikroba yang mem%ermentasikan laktosa seperti 0$ aureus1 4$ aerugenosa1 dan 0almonella$ Mikroba yang mem%ermentasi laktosa menghasilkan koloni dengan inti ber7arna gelap dengan kilap logam$ 0edangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak ber7arna$ Adanya eosin dan metilen blue membantu

memperta&am perbedaan tersebut$ 3amun demikian1 &ika media ini digunakan pada tahap a7al karena kuman lain &uga tumbuh terutama 4$ Aerugenosa dan 0almonella sp dapat menimbulkan keraguan$ Bagaiamanapun media ini sangat baik untuk mengkon%irmasi  bah7a kontaminan tersebut adalah E$coli$

Agar EMB "le:ine# merupakan media padat yang dapat digunakan untuk menentukan  &enis bakteri coli dengan memberikan hasil positi% dalam tabung$ EMB yang

menggunakan eosin dan metilin bklue sebagai indikator memberikan perbedaan yang nyata antara koloni yang meragikan laktosa dan yang tidak$ Medium tersebut

mengandung sukrosa karena kemempuan bakteri koli yang lebih cepat meragikan sukrosa daripada laktosa$ Untuk mengetahui &umlah bakteri coli umumnya digunakan tabel

)opkins yang lebih dikenal dengan nama M43 "most probable number# atau tabel 84T "&umlah perkiraan terdekat#1 tabel tersebut dapat digunakan untuk memperkirakan &umlah  bakteri coli dalam '@@ ml dan @1' ml contoh air$

 3utrient Agar 

 3utrien agar adalah medium umum untuk u&i air dan produk dairy$ 3A &uga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selekti%1 dalam artian mikroorganisme heterotro%$ Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari ekstrak bee%1 pepton1 dan agar$ 3a merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti u&i biasa dari air1 se7age1 produk pangan1 untuk

memba7a stok kultur1 untuk pertumbuhan sampel pada u&i b akteri1 dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni$

Untuk komposisi nutrien adar adalah eksrak bee% '@ g1 pepton '@ g1 3a.l - g1 air desitilat '$@@@ ml dan '- g agar6L$ Agar dilarutkan dengan komposisi lain dan disterilisasi dengan autokla% pada '*'H. selama '- menit$ Kemudian siapkan 7adah sesuai yang dibutuhkan$  3utrient Broth

 3utrient broth merupakan media untuk mikroorganisme yang berbentuk cair$ Intinya sama dengan nutrient agar$ 3utrient broth dibuat dengan cara sebagai berikut$

'$Larutkan - g pepton dalam G-@ ml air distilasi6akuades$

*$Larutkan ; g ekstrak daging dalam larutan yang dibuat pada langkah pertama$ ;$Atur p) sampai 1@$

,$Beri air distilasi sebanyak '$@@@ ml$ -$0terilisasi dengan autokla%$

MR0A "deMann Rogosa 0harpe Agar#

MR0A merupakan media yang diperkenalkan oleh De Mann1 Rogosa1 dan 0hape "'JF@# untuk memperkaya1 menumbuhkan1 dan mengisolasi &enis Lactobacillus dari seluruh  &enis bahan$ MR0 agar mengandung polysorbat1 asetat1 magnesium1 dan mangan yang

diketahui untuk beraksi6bertindak sebagai %aktor pertumbuhan bagi Lactobacillus1 sebaik nutrien diperkaya MR0 agar tidak sangat selekti%1 sehingga ada kemungkinan

4ediococcus dan &enis Leuconostoc serta &enis bakteri lain dapat tumbuh$ MR0 agar mengandung

'$4rotein dari kasein '@ g6L *$Ekstrak daging G1@ g6L ;$Ekstrak ragi ,1@ g6L ,$D "# glukosa *@ g6L -$Magnesium sul%at @1* g6L F$Agar!agar ', g6L

$dipotassium hidrogen phosphate * g6L G$T7een G@ '1@ g6L

J$Diamonium hidrogen sitrat * g6L '@$3atrium asetat - g6L

''$Mangan sul%at @1@, g6L

MR0B merupakan media yang serupa dengan MR0A yang berbentuk cair6broth$ Dari enidchemicals$com

Trypticase 0oy Broth "T0B#

T0B adalah media broth diperkaya untuk tu&uan umum1 untuk isolasi1 dan penumbuhan  bermacam mikroorganisme$ Media ini banyak digunakan untuk isolasi bakteri dari

spesimen laboratorium dan akan mendukung pertumbuhan mayoritas bakteri patogen$ Media T0B mengandung kasein dan pepton kedelai yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen lainnya yang membuatnya men&adi media bernutrisi untuk bermacam mikroorganisme$ Dekstrosa adalah sumber energi dan natrium klorida mempertahankan kesetimbangan osmotik$ Dikalium %os%at ditambahkan sebagai bu%%er untuk

mempertahankan p)$ 4late .ount Agar "4.A#

4.A digunakan sebagai medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi di atas  permukaan$ 4.A dibuat dengan melarutkan semua bahan "casein enymic hydrolisate1

yeast e>tract1 de>trose1 agar# hingga membentuk suspensi **1- g6L kemudian disterilisasi  pada autokla% "'- menit pada suhu '*'H.#$ Media 4.A ini baik untuk pertumbuhan total

mikroba "semua &enis mikroba# karena di dalamnya mengandung komposisi casein enymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast mensuplai :itamin B kompleks$

A4DA

Media A4DA ber%ungsi untuk menumbuhkan dan menghitung &umlah khamir dan yeast yang terdapat dalam suatu sampel$ Khamir dan yeast akan tumbuh dengan optimal pada media yang sesuai$ Adanya asam tartarat dan p) rendah maka pertumbuhan bakteri terhambat$ A4DA dibuat dengan merebus kentang selama ' &am6,- menit1 agar

dilelehkan dalam -@@ ml air$ .ampurkan ekstrak kentang dalam agar lalu ditambahkan glukosa dan diaduk rata$ 4ada A4DA &adi ini &uga ditambah asam tartarat$

4otato De>trose Agar "4DA#

4DA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidenti%ikasi yeast dan kapang$ Dapat &uga digunakan untuk enumerasi yeast dan kapang dalam suatu sampel atau produk makanan$ 4DA mengandung sumber karbohidrat dalam &umlah cukup yaitu terdiri dari *@ ekstrak  kentang dan * glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri$ .ara membuat 4DA adalah mensuspensikan ;J g media dalam ' liter air yang telah didestilasi$ campur dan panaskan serta aduk$

Didihkan selama ' menit untuk melarutkan media secara sempurna$ 0terilisasi pada suhu '*'H. selama '- menit$ Dinginkan hingga suhu ,@!,-H. dan tuang dalam ca7an petri dengan p) akhir -1F@1*$

9RBA "9iolet Red Bile Agar#

9RBA dapat digunakan untuk perhitungan kelompok bakteri Enterobactericeae$ Agar 9RBA mengandung :iolet kristal yang bersi%at basa1 sedangkan sel mikroba bersi%at asam$ Bila kondisi terlalu basa maka sel akan mati$ Dengan 9RBA dapat dihitung &umlah  bakteri E$coli$ Bahan!bahan yang dibutuhkan untuk membuat 9RBA adalah yeast

ekstrak1 pepton1 3a.l1 empedu1 glukosa1 neutral red1 kristal :iolet1 agar#$ Bahan!bahan tersebut kemudian dicampur dengan ' liter air yang telah didestilasi$ 4anaskan hingga mendidih sampai larut sempurna$ Dinginkan hingga -@!F@H.$ 4indahkan dalam tabung

sesuai kebutuhan1 p) akhir adalah 1,$ .ampuran garam bile dan kristal :iolet

menghambat bakteri gram positi%$ ?east ekstrak menyediakan :itamin B!kompleks yang mendukung pertumbuhan bakteri$ Laktosa merupakan sumber karbohidrat$ 3eutral red sebagai indikator p)$ Agar merupakan agen pemadat$

4/?A

Media ini ber%ungsi untuk isolasi1 enumerasi1 dan menumbuhkan sel khamir$ Dengan adanya dekstrosa yang terkandung dalam media ini1 4/?A dapat digunakan untuk mengidenti%ikasi mikroba terutama sel khamir$ Untuk membuatnya1 semua bahan

dicampur dengan ditambah .a.+; terlebih dahulu sebanyak @1- g lalu dilarutkan dengan akuades$ Kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer dan disumbat dengan kapas lalu

disterilisasi pada suhu '*'H. selama '- menit$ 4osted by Li 4artic at @G 4M