Lampiran 1 Ethical Clearance

(1)

(2)

(3)

Lampiran 2 Formulir Informed consent

FORMULIR INFORMED CONSENT

“KOMPARASI EFEKTIVITAS PEMBERIAN SUPLEMEN ANTIOKSIDAN TERHADAP KADAR MALONDIALDEHID (MDA) SERUM MAHASISWI

EKSTENSI GIZI MASYARAKAT IPB”

Setelah memperoleh penjelasan tentang latar belakang, tujuan, prosedur, kemungkinan manfaat dan risiko serta jawaban atas pertanyaan saya yang diberikan oleh Tim Peneliti, maka saya

Nama : ... Umur : ... Jenis Kelamin : ... Tlp/HP : ... Alamat : ... : ...

Dengan ini menyatakan dengan penuh kesadaran bersedia/tidak

bersedia* untuk berpartisipasi sebagai subjek penelitian. Untuk itu saya

bersedia untuk mengikuti tahapan penelitian: 1) Mengkonsumsi suplemen antioksidan (vitamin C/vitamin E/multivitamin-mineral), 2) Diambil sampel darah sebanyak 5 cc untuk analisis kadar MDA serum. Kesediaan tersebut dengan catatan semua data mengenai diri saya dirahasiakan, dan bila suatu ketika dalam masa penelitian saya dirugikan dalam bentuk apapun karena penelitian ini saya berhak membatalkan persetujuan ini.

Bogor, ... 2011

Yang membuat pernyataan Subjek Penelitian

( )

Mengetahui,

Saksi Peneliti

( ) ( )

(4)

Lampiran 3 Kuesioner

BIODATA MAHASISWI PROGRAM EKSTENSI IPB Ketentuan Pengisian:

Mohon di isi dengan keadaan yang sebenar-benarnya, menggunakan huruf KAPITAL Keterangan: *) di isi dengan tanda silang

1. Nama :………

2. Jurusan :………

3. Tempat, Tgl lahi :………,………...

4. Jenis Kelamin*) : Laki-laki Perempuan

5. Agama*) :………

6. Tinggi dan Berat Badan : tinggi badan:…….cm, berat badan: ……..kg 7. Pekerjaan Orangtua*)

- Ayah : PNS/Pegawai BUMN Swasta lainnya, sebutkan…… - Ibu : PNS/Pegawai BUMN Swasta lainnya, sebutkan…… 8. Pendidikan Orangtua*) :

- Ayah : SD SMP SMA Diploma S1/S2/S3 - Ibu : SD SMP SMA Diploma S1/S2/S3 9. Riwayat Kesehatan *)

Asma Magh Thypus lainnya, sebutkan:……… 10. Riwayat kesehatan keluarga*)

- Ayah : Hipertensi Kolesterol Obese lainnya, sebutkan:… - Ibu : Hipertensi Kolesterol Obese lainnya, sebutkan:… 11. Kebiasaan merokok : Tidak Ya, jumlah batang/hari……… 12. Kebiasaan Konsumsi (dalam 1 bulan terakhir):

a. Supplement*) : Tidak Ya, sebutkan:…… b. Obat-obatan dijual bebas*) : Tidak Ya, sebutkan:…… No:

(5)

c. Makanan sumber vitamin C, vitamin E, Cu, Se, dan Zn Jenis Makanan 1-2 kali/hari ≥3 kali/hari 1-2 kali/minggu ≥3 kali/minggu Jumlah 1. Jeruk 2. Nenas 3. Rambutan 4. Pepaya 5. Tomat 6. Jambu biji 7. Daun singkong 8. Daun katuk 9. Daun melinjo 10. Sawi 11. Kembang kol 12. Kacang-kacangan 13. Daging sapi 14. Telur 15. Susu 16. Kerang 17. Unggas 18. Coklat 19. Ikan laut 20. Udang 21. Hati d. Makanan hewani Jenis Makanan 1-2 kali/hari ≥3 kali/hari 1-2 kali/minggu ≥3 kali/minggu Jumlah 1. Mc.D/ KFC/PH 2. Sosis 3. Nugget 4. Kornet 5. Daging ayam 6. Daging sapi 7. Ayam goreng 8. Ikan bakar 9. Ikan goreng 10. Sate 11. …………

(6)

e. Makanan Nabati Jenis Makanan 1-2 kali/hari ≥3 kali/hari 1-2 kali/minggu ≥3 kali/minggu Jumlah 1. Tempe goreng 2. Tahu goreng 3. kc tanah 4. kc kedele 5. kc ijo 6. ………. 7. ……….

f. Buah dan Sayur Jenis Makanan 1-2 kali/hari ≥3 kali/hari 1-2 kali/minggu ≥3 kali/minggu Jumlah 1. Apel 2. Jeruk 3. Tomat 4. Pepaya 5. Mangga 6. Semangka 7. Jambu biji 8. Pisang 9. Nenas 10. Anggur 11. Wortel 12. Bayam 13. Sawi 14. ………

g. Makanan berlemak & berminyak Jenis Makanan 1-2 kali/hari ≥3 kali/hari 1-2 kali/minggu ≥3 kali/minggu Jumlah 1. Gorengan 2. Mie/nasi goreng 3. Jeroan 4. Soto santan/gulai 5. Cake/ bolu manis 6. Martabak manis 7. Cokelat

8. Bakso 9. Mie ayam

(7)

Lampiran 4 Food Record 7x24 jam

KONSUMSI PANGAN SAMPEL

Nama sampel : ………

Umur : ……… tahun

Berat badan : ……… kg

Tinggi badan : ……… m

Pola konsumsi makan secara kuantitatif

Hari ke- Waktu makan Menu Makanan

Bahan makanan URT Gram Keterangan Pagi Selingan 1 Siang Selingan 2 Malam Selingan 3

(8)

Lampiran 5 Prosedur Pembuatan Reagen

Larutan Trichloroacetic acid (TCA) 20%

Bahan :

a. TCA 20 gram

b. Aquades bebas ion 100 ml Prosedur :

a. Masukkan TCA ke dalam labu ukur, larutkan dengan 100 ml aquades bebas ion.*

b. Kocok hingga homogen.

Larutan Tiobarbituric acid (TBA) 0.67%

Bahan :

c. TBA 0.67 gram

d. Asam asetat (CH3COOH) 100 ml Prosedur :

e. Masukkan TBA ke dalam erlenmeyer, larutkan dengan 100 ml Asam asetat (CH3COOH) sambil dipanaskan dalam penangas air dan diaduk.** c. Kocok hingga homogen.

* TCA yang berfungsi untuk mengendapkan protein, karena itu harus hati-hati dalam melarutkannya, jangan sampai mengenai tangan.

(9)

Lampiran 6 Prosedur pembuatan standar dan kurva standar MDA

Larutan standar Tetraetoksipropan (TEP)

Bahan :

a. TEP 12,5 mikro liter b. Aquades bebas ion 100 ml Prosedur :

c. Pipet TEP sebanyak 12,5 mikroliter, larutkan dalam 100 ml aquades bebas ion.**

(10)

Prosedur Pembuatan Standar

Gambar 10 Diagram alir prosedur pembuatan standar MDA Pipet 10 ml larutan TEP

Larutkan dengan 100 ml aquades bebas ion dalam erlenmeryer

0 ml 0.1 ml 0.2 ml 0.3 ml 0.4 ml 0.5 ml 1 ml

pipet larutan ke dalam tabung reaksi sebanyak

tambahkan aquades bebas ion sebanyak

1 ml 0.9 ml 0.8 ml 0.7 ml 0.6 ml 0.5 ml 0 ml

Masukkan ke penangas mendidih selama ± 15 menit

Dinginkan

Tambahkan larutan TBA 0,67% sebanyak 2 ml

(11)

Lampiran 7 Data kadar MDA

Tabel 11 Kadar malondialdehide plasma awal pada berbagai kelompok perlakuan intervensi suplemen antioksidan

No.

Kelompok Perlakuan

Kontrol Vitamin C Vitamin E Multivitamin

MDA nmol/mL MDA nmol/mL MDA nmol/mL MDA nmol/mL

1. 15.00 20.00 30.00 32.00 2. 22.00 18.00 26.00 21.00 3. 20.00 32.00 18.00 21.50 4. 30.00 38.00 29.00 26.00 5. 30.00 19.00 32.00 17.00 6. 21.00 32.00 16.50 19.00 X 23.00 26.50 25.25 22.75 ± SD ±5.93 ±8.53 ±6.51 ±5.44

Tabel 12 Kadar malondialdehide plasma akhir pada berbagai kelompok perlakuan intervensi suplemen antioksidan

No.

Kelompok Perlakuan

Kontrol Vitamin C Vitamin E Multivitamin

MDA nmol/mL MDA nmol/mL MDA nmol/mL MDA nmol/mL

1. 17.00 18.50 14.00 14.50 2. 22.00 17.00 12.50 12.50 3. 18.00 14.50 13.00 14.50 4. 35.00 16.00 7.00 13.50 5. 28.50 9.50 13.00 11.00 6. 24.00 11.00 8.50 9.50 X 24.08 14.42 11.33 12.58 ± SD ±6.785 ±3.51 ±2.86 ±2.01

(12)

Lampiran 8 Hasil Uji Statistik

Oneway

Descriptives

N Mean Std. Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum

Lower Bound Upper Bound

MDAawal Vitamin E 6 25.25 6.510 2.658 18.42 32.08 16 32 Vitamin C 6 26.50 8.526 3.481 17.55 35.45 18 38 Multivitamin 6 22.75 5.438 2.220 17.04 28.46 17 32 Kontrol 6 23.00 5.933 2.422 16.77 29.23 15 30 Total 24 24.38 6.454 1.317 21.65 27.10 15 38 MDAakhir Vitamin E 6 11.33 2.858 1.167 8.33 14.33 7 14 Vitamin C 6 14.42 3.513 1.434 10.73 18.10 10 18 Multivitamin 6 12.58 2.010 .821 10.47 14.69 10 14 Kontrol 6 24.08 6.785 2.770 16.96 31.20 17 35 Total 24 15.60 6.450 1.317 12.88 18.33 7 35 Perubahan Vitamin E 6 -13.92 6.484 2.647 -20.72 -7.11 -22 -5 Vitamin C 6 -12.08 9.473 3.867 -22.02 -2.14 -22 -1 Multivitamin 6 -10.17 4.239 1.730 -14.61 -5.72 -18 -6 Kontrol 6 1.08 2.728 1.114 -1.78 3.95 -2 5 Total 24 -8.77 8.354 1.705 -12.30 -5.24 -22 5 T-Test

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 MDAawal 24.38 24 6.454 1.317

(13)

Paired Samples Test

Paired Differences

t df Sig. (2-tailed)

Mean Std. Deviation Std. Error Mean

95% Confidence Interval of the Difference

Lower Upper

Pair 1 MDAawal – MDAakhir 8.771 8.354 1.705 5.243 12.298 5.144 23 .000

Perbedaan Awal-Akhir (Vitamin E) T-Test

Perbedaan Awal-Akhir (Vitamin C) T-Test

Paired Differences

Lower Upper

Paired Differences

Lower Upper

(14)

Perbedaan Awal-Akhir (Multivitamin)

Paired Differences

Lower Upper

Perbedaan Awal-Akhir (Kontrol)

Paired Differences

Lower Upper

Pair 1 MDAawal – MDAakhir -1.083 2.728 1.114 -3.946 1.779 -.973 5 .375

ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

MDAawal Between Groups 58.875 3 19.625 .436 .729

Within Groups 899.250 20 44.962

Total 958.125 23

MDAakhir Between Groups 604.031 3 201.344 11.409 .000

Within Groups 352.958 20 17.648

Total 956.990 23

Perubahan Between Groups 819.031 3 273.010 6.947 .002

Within Groups 785.958 20 39.298

(15)

Multiple Comparisons

LSD

Dependent

Variable (I) Perlk (J) Perlk Mean Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound

MDAawal Vitamin E Vitamin C -1.250 3.871 .750 -9.33 6.83

Multivitamin 2.500 3.871 .526 -5.58 10.58 Kontrol 2.250 3.871 .568 -5.83 10.33 Vitamin C Vitamin E 1.250 3.871 .750 -6.83 9.33 Multivitamin 3.750 3.871 .344 -4.33 11.83 Kontrol 3.500 3.871 .377 -4.58 11.58 Multivitamin Vitamin E -2.500 3.871 .526 -10.58 5.58 Vitamin C -3.750 3.871 .344 -11.83 4.33 Kontrol -.250 3.871 .949 -8.33 7.83 Kontrol Vitamin E -2.250 3.871 .568 -10.33 5.83 Vitamin C -3.500 3.871 .377 -11.58 4.58 Multivitamin .250 3.871 .949 -7.83 8.33

MDAakhir Vitamin E Vitamin C -3.083 2.425 .218 -8.14 1.98

Multivitamin -1.250 2.425 .612 -6.31 3.81 Kontrol -12.750* 2.425 .000 -17.81 -7.69 Vitamin C Vitamin E 3.083 2.425 .218 -1.98 8.14 Multivitamin 1.833 2.425 .459 -3.23 6.89 Kontrol -9.667* 2.425 .001 -14.73 -4.61 Multivitamin Vitamin E 1.250 2.425 .612 -3.81 6.31 Vitamin C -1.833 2.425 .459 -6.89 3.23 Kontrol -11.500* 2.425 .000 -16.56 -6.44 Kontrol Vitamin E 12.750* 2.425 .000 7.69 17.81 Vitamin C 9.667* 2.425 .001 4.61 14.73

(16)

Multivitamin 11.500* 2.425 .000 6.44 16.56

Perubahan Vitamin E Vitamin C -1.833 3.619 .618 -9.38 5.72

Multivitamin -3.750 3.619 .313 -11.30 3.80 Kontrol -15.000* 3.619 .001 -22.55 -7.45 Vitamin C Vitamin E 1.833 3.619 .618 -5.72 9.38 Multivitamin -1.917 3.619 .602 -9.47 5.63 Kontrol -13.167* 3.619 .002 -20.72 -5.62 Multivitamin Vitamin E 3.750 3.619 .313 -3.80 11.30 Vitamin C 1.917 3.619 .602 -5.63 9.47 Kontrol -11.250* 3.619 .006 -18.80 -3.70 Kontrol Vitamin E 15.000* 3.619 .001 7.45 22.55 Vitamin C 13.167* 3.619 .002 5.62 20.72 Multivitamin 11.250* _3.619 _.006 _3.70 _18.80

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Duncan

MDAawal Duncan

Perlk N

Subset for alpha = 0.05 1 Multivitamin 6 22.7500a Control 6 23.0000a vitamin E 6 25.2500a vitamin C 6 26.5000a Sig. .386

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

MDAakhir Duncan

Perlk N

Subset for alpha = 0.05

1 2 vitamin E 6 11.3333 a multivitamin 6 12.5833a vitamin C 6 14.4167a Control 6 24.0833b Sig. .243 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

(17)

Perubahan Duncan

Perlk N

Subset for alpha = 0.05

1 2 vitamin E 6 -13.9167 vitamin C 6 -12.0833 multivitamin 6 -10.1667 Control 6 1.0833 Sig. .339 1.000 Konsumsi Pangan Descriptives

N Mean Std. Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

Energi Control 6 1.5087E3 366.25437 1.49523E2 1124.3063 1893.0271 1009.00 2122.00

vitamin C 6 1.6505E3 386.78508 1.57904E2 1244.5939 2056.4061 1103.00 2040.00

vitamin E 6 1.4118E3 210.78085 86.05092 1190.6324 1633.0343 1147.00 1665.00

Multivitamin 6 1.5150E3 294.28897 1.20143E2 1206.1627 1823.8373 1080.00 1841.00

Total 24 1.5215E3 312.57319 63.80374 1389.5119 1653.4881 1009.00 2122.00 Protein Control 6 51.6333 12.53390 5.11694 38.4798 64.7869 38.50 74.50 vitamin C 6 56.8833 12.85479 5.24795 43.3931 70.3736 38.10 72.00 vitamin E 6 48.0500 7.75339 3.16531 39.9133 56.1867 35.40 54.70 Multivitamin 6 48.2000 11.16906 4.55975 36.4788 59.9212 28.40 57.50 Total 24 51.1917 11.12087 2.27004 46.4957 55.8876 28.40 74.50 VitE Control 6 3.6167 1.42607 .58219 2.1201 5.1132 2.20 6.10 vitamin C 6 3.5667 1.01522 .41446 2.5013 4.6321 2.70 5.40 vitamin E 6 3.1000 .96540 .39412 2.0869 4.1131 2.10 4.80 Multivitamin 6 3.4500 1.14848 .46886 2.2447 4.6553 1.90 5.30 Total 24 3.4333 1.09452 .22342 2.9712 3.8955 1.90 6.10 VitC Control 6 49.7167 30.91908 12.62266 17.2691 82.1643 14.00 86.90

(18)

vitamin C 6 45.1333 18.41604 7.51832 25.8069 64.4598 16.00 71.00 vitamin E 6 39.3667 44.06244 17.98842 -6.8740 85.6074 12.90 126.80 Multivitamin 6 31.9167 13.67676 5.58351 17.5638 46.2695 19.30 51.00 Total 24 41.5333 28.11550 5.73905 29.6612 53.4055 12.90 126.80 Zinc Control 6 5.7667 1.65610 .67610 4.0287 7.5046 3.70 8.70 vitamin C 6 6.5000 1.59750 .65218 4.8235 8.1765 4.00 8.70 vitamin E 6 5.2500 .92682 .37837 4.2774 6.2226 3.70 6.20 Multivitamin 6 5.5333 1.18265 .48282 4.2922 6.7745 3.60 6.70 Total 24 5.7625 1.36599 .27883 5.1857 6.3393 3.60 8.70 Cu Control 6 .8333 .34448 .14063 .4718 1.1948 .50 1.50 vitamin C 6 1.7833 2.41944 .98773 -.7557 4.3224 .50 6.70 vitamin E 6 .7167 .07528 .03073 .6377 .7957 .60 .80 Multivitamin 6 .7167 .17224 .07032 .5359 .8974 .40 .90 Total 24 1.0125 1.23088 .25125 .4927 1.5323 .40 6.70 ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Energi Between Groups 173248.333 3 57749.444 .557 .650

Within Groups 2073897.667 20 103694.883

Total 2247146.000 23

Protein Between Groups 308.462 3 102.821 .811 .503

Within Groups 2536.037 20 126.802

Total 2844.498 23

VitE Between Groups .977 3 .326 .245 .864

Within Groups 26.577 20 1.329

Total 27.553 23

VitC Between Groups 1062.610 3 354.203 .414 .745

Within Groups 17118.463 20 855.923

Total 18181.073 23

Zinc Between Groups 5.155 3 1.718 .910 .454

(19)

Cu Between Groups 4.808 3 1.603 1.067 .385

(20)

Lampiran 9 Dokumentasi Penelitian

Pengambila darah sampel sebelum dan setelah intervens

1 ml plasma

Tambahkan Larutan TCA 20%, dingin sebanyak 1 ml

Divortex Disentrifuge selama 10 menit (3000

(21)

Terbentuk endapan protein

pipet supernatan 1 ml

Tambahkan 2 ml TBA Masukkan ke penangas mendidih

selama ± 15 menit sampai terentuk warna merah muda

Dinginkan dengan air es

Masukkan dalam kuvet (blangko dan sampel)

Baca pada panjang gelombang 532 nm