Efektifitas Pemberian Soyghurt yang Mengandung Bakteri Asam Laktat dalam Memperbaiki Kerusakan Jaringan Hati Mencit (Mus musculus L.) yang Dipapar Timbal

(1)

(2)

Lampiran B. Ringkasan Kegiatan Penelitian

Pembuatan Susu Kedelai Pembuatan Starter Soyghurt

Inokulasi

Inkubasi

Pemeriksaan Kadar SGOT/SGPT Hewan Percobaan

Kultur Soyghurt II

Suhu 40 oC, 6 jam

Soyghurt III

Suhu 40 oC, 8 jam Soyghurt I

Suhu 40 oC, 4 jam

Penghitungan Jumlah Koloni dan Identifikasi Bakteri

Pemeriksaan Makroskopis Hati dan

(3)

Lampiran C. Skema Perlakuan Hewan Coba

Mencit (Mus musculus L.) N= 28 ekor

Aklimatisasi selama 1 minggu

Secara random dibagi dalam 4 kelompok

K

Aquadest 0,5 ml Selama 14 h

Pada hari ke-15, 7 ekor mencit dari tiap-tiap kelompok didekapitasi

K 7 ekor

P1 7 ekor

P2 7 ekor

P3 7 ekor

P1

Timbal 0,5 ml Selama 14 h

P2

Soyghurt 0,5 ml Selama 14 h

P3

Timbal 0,5 ml + Soyghurt 0,5 ml Selama 14 h

Dilakukan pemeriksaan:

- Berat hati

- Makroskopis hati (warna, konsistensi, struktur permukaan)

- Kadar SGOT dan SGPT

(4)

Lampiran D. Diagram Alir Pembuatan Starter Soyghurt (Koswara, 2006)

Susu bubuk 80 g + gula 2%

Dilarutkan dengan air mendidih pada suhu 90 oC sebanyak 500 ml selama 30 menit

Suhu diturunkan sampai 40-45 oC

Diinokulasikan dengan yoghurt komersial 4% atau kultur murni S.thermophilus dan L.bulgaricus

Diinkubasi pada suhu 40 oC selama 8 jam

(5)

Lampiran E. Diagram Alir Pembuatan Susu Kedelai (Yudhi, 2008)

1 kg kacang kedelai disortasi dan dicuci bersih

Direndam dalam air yang mengandung NaHCO3 0,5%

selama 8 jam, cuci dan ditiriskan

Kedelai dimasukkan ke dalam air mendidih dgn suhu 80-90 oC selama 30 menit, ditiriskan dan

dikupas kulitnya

Diblender dengan air panas 90 oC (jumlah air 6:1) sampai

menjadi bubur Disaring, filtrat

ditampung ampasnya dibuang

Filtrat dipanaskan 80-90 oC selama 30 menit menit, didinginkan sampai

suhu 40 oC

(6)

Lampiran F. Diagram Alir Pembuatan Soyghurt (Koswara, 2006)

Susu kedelai 435 ml + susu bubuk 65 g

Ditambah gula pasir 2%

Inokulasi dengan kultur starter 4%

Diaduk sampai larut

Dimasukan dalam wadah ditutup dengan plastik poliethilen dan dilubangi

Diinkubasi pada suhu 40 oC (4 jam, 6 jam, 8 jam)

(7)

Lampiran G. Reaksi Karbohidrat dari Genus Lactobacillus (Buchanan dan Gibbons, 1974) N

o

Jenis Karbohidrat

S p e c i e s

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

1 Amygladin - + + - - - + - + - + + + - -

2 Arabinose - - - d - -

3 Cellobiose - + + - - - + - + + + + + + -

4 Fructose + + + + + # + + + + + + + + +

5 Galactose # # + + - + + + + + + + + + +

6 Glucose (acid) + + + + + + + + + + + + + + +

7 Glucose (gas) - - - -

8 Gluconate - - - + + + + + + +

9 Lactose - + - + + + + + # + + # + d -

10 Maltose d + + + - + + + d - + + + + +

11 Mannitol - - - + + - + + + - +

12 Mannose + + + + - + + + + + + + + + +

13 Melezitose - - - + - + - d - -

14 Melibiose - - - d + - - - - + - d

15 Raffinose - - - d + - - - - + - d

16 Rhamnose - - - +

17 Ribose - - - + + + + + + -

18 Salicin - + + + - - + - + + + + + + d

19 Sorbitol - - - + + + + - + - d

20 Sucrose + + + + - - + + d - + + + - +

21 Trehalose - + + + - # + + + - + + + - -

22 Xylose - - - + d - -

23 Esculin - + + # - - + # + - + - + + d

Keterangan: (1) L. delbrueckii, (2) L. leichmannii, (3) L. jensenii, (4) L. lactis, (5) L. bulgaricus, (6) L. helveticus, (7) L. acidophilus, (8) L. salivarius, (9) L. casei, (10) L. casei subsp. tol erans, (11) L. casei subsp. pseudoplantarum, (12) L. xylosus, (13) L. plantarum, (14) L. curvatus,

(8)

Lampiran H. Pola Fermentasi Gula oleh Bakteri Asam Laktat (Safitri, 2010)

N o

Jenis Gula

S p e c i e s

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 Glycerol - - - + +

2 Arabinose _- _- _- _- _- _- _- _- ₊ ₊

3 Ribose _- ₊ _- _- ₊ ₊ _- ₊ _- _-

4 Silose _- _- _- _- ₊ ₊ _- ₊ ₊ ₊

5 Glucose + + + + + + + + + +

6 Fructose ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ _- _-

7 Mannose ₊ ₊ _- ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊

8 Sorbose - + - - - -

9 Sorbitol _- ₊ _- _- _- _- _- _- _- _-

10 Rhamnose _- _- _- _- _- ₊ ₊ ₊ _- _-

11 Amygladin - + - - + + + - - -

12 Arbutine _- ₊ _- _- ₊ ₊ ₊ ₊ _- _-

13 Esculine ₊ ₊ _- ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊

14 Salicine ₊ ₊ _- _- ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊

15 Manitol - + - - + - - - + -

16 Maltose ₊ ₊ _- ₊ ₊ _- _- _- ₊ ₊

17 Lactose _- ₊ ₊ ₊ ₊ _- _- _- ₊ ₊

18 Galactose + + - - + + + + - -

19 Gelatin _- _- _- _- _- _- _- _- _- _-

20 Trehalose ₊ ₊ _- _- ₊ ₊ ₊ ₊ _- _-

21 Cellobiose + + - - + + + + + +

22 Sacharose ₊ ₊ _- ₊ ₊ _- _- _- ₊ ₊

23 Melezitose _- ₊ _- _- _- _- _- _- ₊ _-

24 Inulin _- _- _- _- ₊ _- _- _- _- _-

25 Raffinose - - - - + - - - + -

26 Gluconat ₊ _- _- _- _- _- _- _- _- _-

27 Adonitol ₊ _- _- _- _- _- _- _- _- _-

28 Indol - - - -

29 Urease _- _- _- _- _- _- _- _- _- _-

(9)

Lampiran I. Reaksi Karbohidrat dari Genus Streptococcus (Buchanan dan

Gibbons, 1974)

Spesies

Streptococcus

Pertumbuhan Hidrolisa

10 oC 45 oC Gelatin Pati

S. thermophilus - + - +

S. salivarius - + - -

S. lactis + - - -

S. cremoris + - - -

Reaksi Karbohidrat

S. thermophilus S. salivarius S. lactis S. cremoris

Glucose + + + +

Fructose + + + +

Lactose + + + +

Sucrose + + + +*

Trehalose - + + +/-

Maltose - + + +*

Inulin - + - -

Glycerol - - - -

Manitol - - + +*

Sorbitol - - - -

Salicin - + +/- +/-

Raffinose +* + - +*

Xylose +* - + -

Arabinose +* - + -

Esculin - + d d

(10)

Test of Homogeneity of Variance a,b

1.891 3 24 .158

.576 3 24 .636

.576 3 18.251 .638

1.818 3 24 .171

1.866 3 24 .162

1.557 3 24 .226

1.557 3 19.747 .231

1.896 3 24 .157

4.134 3 24 .017

2.371 3 24 .096

2.371 3 21.036 .099

4.085 3 24 .018

Based on Mean Based on Median Based on Median and with adjusted df Based on trimmed mean Based on Mean Based on Median Based on Median and with adjusted df Based on trimmed mean Based on Mean Based on Median Based on Median and with adjusted df Based on trimmed mean

Berat Hati

SGOT

SGPT

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

%kerusakan is constant whenKelompok =K. It has beenomitted. a.

%kerusakan is constant whenKelompok =P2. It has beenomitted. b.

Tests of Normality b,c

.249 7 .200 * .844 7 .108

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Kolmogorov-Smirnov a Shapiro-Wilk

This is a lower bound of the true significance. *.

Lilliefors Significance Correction a.

% kerusakan is constant when Kelompok = K. It has been omitted. b.

% kerusakan is constant when Kelompok = P2. It has been omitted. c.

Lampiran J. Tabel Uji Statistik

(11)

ANOVA

.011 3 .004 4.969 .008

.018 24 .001

.029 27

475064.0 3 158354.667 283.161 .000

13421.714 24 559.238

488485.7 27

Squares df Mean Square F Sig.

Multiple Comparisons

Bonferroni

.02429 .01451 .643 -.0174 .0660

-.02714 .01451 .442 -.0689 .0146

.01714 .01451 1.000 -.0246 .0589

-.02429 .01451 .643 -.0660 .0174

-.05143* .01451 .010 -.0931 -.0097

-.00714 .01451 1.000 -.0489 .0346

.02714 .01451 .442 -.0146 .0689

.05143* .01451 .010 .0097 .0931

.04429* .01451 .033 .0026 .0860

-.01714 .01451 1.000 -.0589 .0246

.00714 .01451 1.000 -.0346 .0489

-.04429* .01451 .033 -.0860 -.0026 -303.14286* 12.64050 .000 -339.4855 -266.8002 -12.85714 12.64050 1.000 -49.1998 23.4855 -215.42857* 12.64050 .000 -251.7712 -179.0859 303.14286* 12.64050 .000 266.8002 339.4855 290.28571* 12.64050 .000 253.9431 326.6284 87.71429* 12.64050 .000 51.3716 124.0569 12.85714 12.64050 1.000 -23.4855 49.1998 -290.28571* 12.64050 .000 -326.6284 -253.9431 -202.57143* 12.64050 .000 -238.9141 -166.2288 215.42857* 12.64050 .000 179.0859 251.7712 -87.71429* 12.64050 .000 -124.0569 -51.3716 202.57143* 12.64050 .000 166.2288 238.9141 (J) Kelompok

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval

The mean difference is s ignificant at the .05 level. *.

Kruskal-Wallis Test

(12)

T e s t S t a t i

Mann-Whitney Test

Ranks

7 4.00 28.00

7 11.00 77.00

14

N Mean Rank Sum of Ranks

T e s t S t a t is t icb 7 10.36 72.50 14

(13)

T e s t S t a t is t icb

7 11.00 77.00

14

7 11.00 77.00

7 4.00 28.00

(14)

7 11.00 77.00 7 4.00 28.00

7 11.00 77.00

14

(15)

Derajat Kerusakan Kruskal-Wallis Test

Ra nks derajat kerusak an

N Mean Rank

Te st S tatisticsa,b

25.036

Groupi ng V ariable: Kelompok b.

Mann-Whitney Test

Ranks

7 4.00 28.00

7 11.00 77.00

14

(16)

Te st S tatisticsb Mann-W hit ney U

W ilcox on W Z

As ymp. Si g. (2-tailed) Ex act Sig. [2*(1-tai led Sig.)]

derajat kerusakan

Not correct ed for ties. a.

Te st S tatisticsb

24.500 52.500 .000 1.000

1.000a Mann-W hit ney U

W ilcox on W Z

derajat kerusakan

Ranks

7 4.00 28.00 7 11.00 77.00 14

(17)

W ilcox on W Z

derajat kerusakan

Ranks

7 11.00 77.00 7 4.00 28.00

.000 28.000 -3. 435 .001

.001a Mann-W hit ney U

W ilcox on W Z

derajat kerusakan

(18)

W ilcox on W Z

derajat kerusakan

Ranks

7 4.00 28.00

7 11.00 77.00

14

.000 28.000 -3. 500 .000

.001a Mann-W hit ney U

W ilcox on W Z

derajat kerusakan

(19)

Lampiran K. Hasil Uji Morfologi dan Fisiologi Bakteri Asam Laktat

Gambar 1. Uji Pewarnaan Gram: A. Streptococcus thermophilus

B. Lactobacillus bulgaricus

Gambar 2. Uji Motilitas Gambar 3. Uji Katalase

A. Streptococcus thermophilus B. Lactobacillus bulgaricus

Gambar 4. Uji Indol Gambar 5. Uji TSIA

A B A B

A B

(20)

Gambar 6. Uji Sitrat Gambar 7. Uji Reduksi Nitrat A. Streptococcus thermophilus B. Lactobacillus bulgaricus

Gambar 8. Uji Sitrat Gambar 9. Uji Reduksi Nitrat

Gambar 10. Jumlah Koloni Bakteri pada Fermentasi C. Koloni bakteri pada cawan Petri

D. Koloni bakteri fermentasi 4 jam E. Koloni bakteri fermentasi 6 jam

F. Koloni bakteri fermentasi 8 jam

A _B

A _B A B

D

F E

(21)

Lampiran L. Dokumentasi Penelitian

Gambar 11. A. Yoghurt komersial “Bio Kul” dan starter soyghurt B. Soyghurt pada fermentasi 4, 6, 8 jam

Gambar 12. A. Mencit (Mus musculus L.) jantan B. Gambaran organ insitu mencit

Gambar 13. A. Pengambilan sampel darah dari jantung dan organ hati B. Fiksasi organ hati dengan buffer formalin

Gambar 14. A. Automatic analyzer untuk pemeriksaan SGOT/SGPT B. Sampel darah di masukkan ke Analyzer Automatic

A B

B A

A B

(22)

Gambar 15. A. Penjernihan dengan xilol

B. Tissue processing (alat pemrosesan jaringan PA)

Gambar 16. A. Pengirisan dengan mikrotom

B. Infiltrasi sampel dalam media paraffin

Gambar 17. A. Alat untuk penempelan sediaan pada objek gelas B. Pewarnaan dengan Hematoksilin-Eosin

Gambar 18. A. Sampel dalam media parafin

B. Preparat histologi hati mencit yang siap diamati A

A A A A

B B B