A N IK SULFIYAH
USAHA PERCOBAAN
INDUKSI PEMBENTUKAN SOLASODINA PADA KALUS SOLANUM INDICUM L
FAKULTAS FARMASli UNIVER6ITAS AIRLANGGA S U R A B A Y A
1889
USAHA PERCOBAAN
INDUKSI PEMBENTUKAN SOLASODINA PADA KALUS SOLANUM INDICUM L
S K R I P S I
DIBUAT UNTUK MEMENUHI TUGAS AKHIR MENCAPAI GELAR SARJANA FARMASI
PAD A FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA
1 9 8 9
Oleh
ANIK SULFIYAH 0 5 8 4 1 0 6 7 7
Disctujui oleh pembimbing :
\
P e r s e m b a h a n u n t u k Ibu B a pa k, K a k a k dan A d i k
terc i n t a .
K A T A P E N G A N T AH
S e g a l a p u j i dan r a s a s y u k u r k e h a d h i r a t A l l a h S . U . T . a t a s r a h m a t , t a u f i k dan h i d a y a h n y a s e h i n g g a tu gas s k r i p s i ini d a p a t s e l e s a i .
S k r i p s i ini d i b u a t u n t u k m e m e n u h i s a l a h sa t u p e r s y a - r a t a n g u n a m e n c a p a i g e l a r S a r j a n a F a r m a s i pa d a F a k u l t a s F a r m a s i Univ/ersitas A i r l a n g g a S u r a b a y a .
S a y a yakin, s k r i p s i ini d a p a t rarnpung b e r k a t b a n t u a n dan b i m b i n g a n y a n g t e l a h s ay a t e r i m a s e l a m a m e n g i k u t i k u l i a h m a u p u n pa da s a a t p e n y u s u n a n s k r i p s i in’i, k a r e n a i- tu s u d a h s e l a y a k n y a l a h k a l a u p a d a k e s e m p a t a n ini s a y a me- n y a m p a i k a n t e r i m a k a s i h y a n g tak t e r h i n g g a k e p a d a :
- Ibu Dra. L e s t a r i R a h a y u MS dan B a p a k DR. G u n a u a n In- d r a y a n t o y a n g t e l a h m e l u a n g k a n w a k t u u n t u k m e m b e r i - kan b i m b i n g a n , s a r a n dan d o r o n g a n m o r i l y a n g s a n g a t b e r h a r g a d a l a m p e l a k s a n a a n h i n g g a p e n y e l e s a i a n dar i s k r i p s i ini.
- B a p a k DR. N o o r C h o l i z . Z. s e l a k u k e t u a j u r u s a n Bi o - l o g i F a r m a s i F a k u l t a s F a r m a s i U n i u e r s i t a s A i r l a n g g a y a n g te la h m e m b e r i k a n k e s e m p a t a n dan f a s i l i t a s u n t u k m e l a k u k a n p e n e l i t i a n di l a b o r a t o r i u m 0 i o t e k n o l o g i . - B a p a k D o s e n p e n g u j i y a n g t el ah b e r k e n a n memerik'sa
dan m e n e r i m a s k r i p s i ini.
- S t a f D o s e n F a k u l t a s F a r m a s i U n i v e r s i t a s A i r l a n g g a y a n g t e l a h m e m b e r i k a n b e k a l p e n g e t a h u a n s e l a m a b e l a - jar di k a m p u s U N A I R t e r c i n t a .
- B a p ak , Ibu dan s e l u r u h k e l u a r g a y a n g b a n y a k m e m b e r i -
kan b a n t u a n dan d o r o n g a n s e r t a d o ’a r e s t u n y a h i n g g a s e l e s a i n y a s k r i p s i ini.
- S e m u a p i h a k y a n g t i d a k d a p a t s a y a s e b u t k a n s a t u per- s a t u y ang t e l a h m e m b a n t u d e m i k e l a n c a r a n s k r i p s i ini, S e m o g a Al l a h S. U. T. m e m b e r i k a n b a l a s a n yan g m e l i m p a h a t a s s e m u a b a n t u a n y a n g t e l a h d i b e r i k a n . Amin.
S u r a b a y a , D e s e m b e r 1989
ii
D A F T A R ISI
H a l a m a n
KAT A P E N G ANT AR ... ... i
D A F T A R ISI ... ... iii
D A F T A R T A B E L ... ... v
D A F T A R C A N B A R ... vi
D A F T A R L A M P I R A N ... ... vii
D A F T A R S I N G K A T A N ... ... vi i i B AB I : P E N D A H U L U A N ... 1. L a t a r b e l a k a n g . . ... ... 1
2. T u j u a n p e n e l i t i a n ... ... 4
BAB II : T I N J A U A N P U S T A K A ... * ... 1. K u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n ... ... 5
2. F a k t o r - f a k t o r y a n g m e m p e n g a r u h i p e r t u m b u h a n dan p r o d u k s i m e t a b o - lit s e k u n d e r p a d a k u l t u r j a r i ngan t a n a m a n ... . ... ...6
2.1. P e n g a r u h l i n g k u n g a n ... ...6
2.2. P e n g a r u h k o m p o n e n m e d i a ... ... 7
2.2 .1. S u k r o s a * ...8
2.3. P e n g a r u h b i o l o g i s ...8
3. S o l a n u m i n d i c u m L ... ... 10
4. S t e r o i d . • » * • • • • • • • • » » • • • • • • • • * • 10 4.1. P e n g g o l o n g a n s e n y a u a s t e r o i d . 11 4.2. K e g u n a a n s t e r o i d ... ... 11
4.3. S o l a s o d i n a ... 12
5. K l o r o f i l ... ... 12
5.1. T i n j a u a n t e n t a n g k l o r o f i l .... 12
5.2. F a k t o r - f a k t o r yan g m e m p e n g a r u hi p e m b e n t u k a n k l o r o f i l pa da k u l t u r kal us ... ... 14
iii
5.3. Car a p e n e t a p a n kad ar k l o r o f i l . 16
6 . K r o m a t o g r a f i l a p i s a n tipis ... ... 17
S A B III : B A H AN , A L A T DAN' N E T O D E P E N E L I T I A N . . 1. B a h a n ... 19
1.1* K al us . ... ... 19
1.2. B a h a n k i m i a ... ... 19
1.3. Aga r . . ... ... 19
1.4. M e d i a . ... ... 19
2. A l a t ... ... 20
3. M e t o d e ... ... 20
3.1. P e m b u a t a n l a r u t a n s t o k ... ... 20
3.2. P e m b u a t a n m e d i a ... ... 21
3.3. P e m i n d a h a n d a n p e n a n a m a n k a l u s 21 3.4. P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s kalu s. 22 3.5. P e m e r i k s a a n p e r t u m b u h a n ka lu s. 22 3.6. P e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l ... ... 22
3.7. E k s t r a k s i s o l a s o d i n a d a r i k a lus ... ... 23
3.8. I d e n t i f i k a s i s o l a s o d i n a d e n g a n KLT ... ... 23
3.9. I d e n t i f i k a s i s t e r o i d l a i n n y a - d e n g a n KLT ... ... 24
B A B Iy ; H A S H P E N E L IT IAN ... 1. P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s ka l u s •• 25 2. P e n g a m a t a n p e r t u m b u h a n k a l u s ... 26
3. P e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l t o t a l . 28 4. P e m e r i k s a a n e k s t r a k d e n g a n KLT.. 28
BAN U : P E M B A H A S A N ... '... ... 32
B A B VI : K E 5 I M P U L A N ... ... 35
B AB VII : S A R A N - S A R A N ... ... 36
R I N G K A S A N ... ... 37 D A F T A R P U S T A K A ... ... 3B
D A F T A R T A B E L
H a l a m a n 1. P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s k a l u s Solarium i n d i -
c u m L ... ... ... 25 2. In de k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s dar i ma-
s i n g - m a s i n g m e d i a p a d a t i a p - t i a p p a s a s i ... 26 3. Ka d a r k l o r o f i l t o t a l k a l u s d a r i m a s i n g - m a -
s i n g m e d i a ... ... ... 23 4. H a s i l k r o m a t o g r a f i l a p i s a n t i p i s d e n g a n fa-
se g e r a k k l o r o f o r m - m e t a n o l = 1 9 : 1 da n pe-
n a m p a k n o d a d r a g e n d o r f ... 29 5. H a s i l k r o m a t o g r a f i l a p i s a n t i p i s d e n g a n fa-
se g e r a k n - h e k s a n a - e t i l a s e t a t * B : 2 da n
p e n a m p a k n o d a a n i s a l d e h i d a -... 30
v/
D A F T A R G A H B A R
H a l a m a n 1. K u r v a p e r t u m b u h a n ka lu s ... 9 2. S t r u k t u r m o l e K u l inti s t e r o i d ... ✓ 11
• 3. S t r u k t u r s o l a s o d i n a ... 12 A. K a l u s S o l a n u m i n d i c u m L y a n g di t u m b u h k a n
p a d a m e d i a A, B dan C ... . 25 5. G r a f i k i n d ek s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a lu s
d a r i m e d i a A p a d a t i a p - t i a p p a s a s i ... . 27 6 . G r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a lu s
d a r i m e d i a B p a d a t i a p - t i a p p a s a s i ... 27 7. G r a f i k i n d ek s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a lu s
d a r i m e d i a C p a d a t i a p - t i a p p a s a s i ... ^27 8 . G r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a ka l u s
d a r i m a s i n g - m a s i n g m e d i a p a d a p a s a s i I..* 27 9. G r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s
d a r i m a s i n g - m a s i n g m e d i a p a d a p a s a s i II..* 27 10. G r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s
d a r i m a s i n g - m a s i n g m e d i a p a d a p a s a s i III. 27 11* G r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a lu s
d a r i m a s i n g - m a s i n g m e d i a p a d a p a s a s i IV • 27 12. G r a f i k k a d a r k l o r o f i l t o t a l k a l u s y a n g di
t u m b u h k a n p a d a m a s i n g - m a s i n g m e d i a ... 28 13. G a m b a r s k e m a t i s h a s i l KLT d e n g a n fase g e
r a k k l o r o f o r m - m e t a n o l = 19 : 1 d a n p e n a m -
p a k n o d a d r a g e n d o r f ... 30 14. G a m b a r s k e m a t i s h a s i l KLT d e n g a n fase g e
r a k n - h e k s a n a - e t i l a s e t a t = 8 : 2 ; fa se g e r a k k l o r o f o r m - e t i l a s e t a t = 9 : 1 da n
p e n a m p a k n o d a a n i s a l d e h i d a ... 31
vi
UAf"TAF< L A M P IRAN
H a 1 a m a n K o m p o s i s i k i m i n u i modi;. MS* ... . 41 S k e m a e k s t r a k s i s o l a s o d i n a d a r i k al us S o -
l a n u m i n d i c u m L ... 43 K o m p o s i s i p e n a m p a k n o d a a n i s a l d e h i d a ... 44 H a s i l p e r h i t u n g a n " A n a l y s e s of V a r i a n c e " . . 45 B i o s i n t e s a s o l a s o d i n a ... 46 P e n e n t u a n p a n j a n g g e l o m b a n g m a k s i m u m ... 47
vii
D A F T A R S I N G K A T A N
MS : M u r a s h i g e a n d S k o o g
2 , 4 D : 2, 4 f - D i c h l o r o p h e n o x y a c e t i c A c i d G A ^ : G i b e r e l l i c A c i d
p . a . : Pra a n a l i s a
IP : I n d e k s P e r t u m b u h a n
KLT : K r o m a t o g r a f i L a p i s a n T i p i s
v i i i
BAB I P E N D A H U L U A N
1 • L a t a r b e l a k a n q
S a t u di a n t a r a b e b e r a p a b e n t u k m e t a b o l i t s e k u n d e r a d a l a h s t e r o i d . S t e r o i d m e m i l i k i p e r a n a n p e n t i n g se- ba'gai b a h a n b a k u o b a t k o n t r a s e p s i , s e l a i n b e r p e r a n a n s e b a g a i b a h a n b a k u o b a t - o b a t v i t a m i n , h o r m o n , s t e r o i d j a n t u n g ( k a r d e n o l i d a ) , dan l a i n - l a i n , S t e r o i d ini u- m u m n y a d i i s o l a s i d a r i t a n a m a n S o l a n u m sp, D i o s c o r e a sp dan C o s t u s sp (1).
K e b u t u h a n a k a n h o r m o n s t e r o i d m a k i n m e n i n g k a t se- j a l a n d e n g a n b e r t a m b a h n y a j u m l a h p e n d u d u k , s e h i n g g a da lam b e b e r a p a ta h u n m e n d a t a n g , k e m u n g k i n a n a k a n k e k u r a - n g a n b a h a n u n t u k s u m b e r b a h a n b a k u h o r m o n s t e r o i d .
K e s u l i t a n - k e s u l i t a n d a l a m m e m p r o d u k s i s e n y a u a s t e r o i d d a r i t a n a m a n , a n t a r a lain d i s e b a b k a n o l e h se- m a k i n b e r k u r a n g n y a s u m b e r a l a m t k e s u l i t a n m e l a k u k a n k u l t i v a s i , u a k t u k u l t i v a s i y a n g lam a s e r t a b i a y a pro - d u k s i y a n g m a h a l . P e n e r a p a n m e t o d e •-k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n d a r i b i d a n g d i o t e k n o l o g i a n t a r a la in b e r t u j u a n u n t u k m e n g a t a s i k e s u l i t a n - k e s u l i t a n t e r s e b u t ,
B e r b e d a d e n g a n m e t o d e k o n v e n s i o n a l , m e t o d e k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n ini m e m p u n y a i b e b e r a p a k e u n t u n g a n a n ta ra l.iin : k o n d i s i d a p a t d i k e n d a l i k a n s e h i n g g a d a p a t d i h a s i l k a n p r o d u k t e r t e n t u s e s u a i d e n g a n y a n g d i i n g i n - kan, b e b a s d a r i p e n g a r u h m i k r o b a dan i n se kt a, dan d a p a t d i t a n a m di m a n a s a j a t a n p a h a r u s t e r g a n t u n g pa da
- 1 -
i k l i m dan l e t a k g e o g r a f i s (2 ).
B a n y a k s e k a l i p u b l i k a s i - p u b l i k a s i y a n g m e l a p o r k a n t e n t a n g p r o d u k s i d a n k a n d u n g a n m e t a b o l i t s e k u n d e r d a r i 'k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n , dan b e b e r a p a m e t a b o l i t s e k u n
de r yan.g b e r h a s i l di p r o d u k s i d e n g a n m e t o d e k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n ini a n t a r a la i n : s t e r o i d , a l k a l o i d , p o l i f e n o l dan p i g m e n - p i g m e n t e r t e n t u (3).
S o l a s o d i n a s e b a g a i b a h a n b a k u o b a t k o n t r a s e p s i , s u d a h b e r h a s i l p u l a d i p r o d u k s i d a l a m k u l t u r k a lu s S o larium l a c i n i a t u m Ait, S o l a n u m e l e a q n i f o l i u m C a v , dan S o l a n u m d u l c a m a r a L, n a m u n t i d a k m a m p u d i p r o d u k s i ol e h k u l t u r k a l u s S o l a n u m i n d i c u m L.
C h a n d l e r d a n D o d d s (4), m e l a p o r k a n b a h u a pa da k u l t u r k a lu s S o l a n u m l a c i n i a t u m A i t m a m p u di p r o d u k s i s o l a s o d i n a s e b a n y a k 0 , 5 -1 ,0 m g / g b e r a t k e r i n g dan ter- n y a t a d e n g a n m e n g i n d u k s i t e r j a d i n y a d i f e r e n s i a s i *'isel m a k a p r o d u k s i s o l a s o d i n a d a p a t d i t i n g k a t k a n ,
E m k e dan E i l e r t (5), m e l a p o r k a n b a h u a d a l a m p r o s es b i o s i n t e s a s o l a s o d i n a t e r n y a t a ada h u b u n g a n a n t a r a k a d a r s o l a s o d i n a d e n g a n d i f e r e n s i a s i se l dan k a d a r k l o r o f i l , s e p e r t i y a n g d i l a p o r k a n p a d a p e r c o b a a n k u l tur k a lu s S o l a n u m d u l c a m a r a L. S e m a k i n b a n y a k kad ar k l o r o f i l , s e m a k i n m e n i n g k a t k a d a r s o l a s o d i n a y a n g di- d a p a t k a n . P a d a k u l t u r k a l u s S o l a n u m d u l c a m a r a L ya ng m e n g a n d u n g k l o r o f i l s e b a n y a k 1,02 + 0,1 ; 0 , 3 B + 0,05;
o, 1 ♦ 0 , 0 2 m g / g b e r a t ker in g, didapa.tkan s o l a s o d i n a s e b a n y a k 22 0 + 40 ; 130 + 30 ; 5 6 + 1 2 ug/g b e r a t k e ring, dan k a d a r s o l a s o d i n a ini d i d a p a t k a n le b i h b a n y a k
- 2 -
lag i pa da k u l t u r ka l u s yan g m e n g a l a m i d i f e r e n s i a s i sel y a i t u s a m p a i 0 , 3 5 +_ 0 , 0 7 m g / g b e r a t kerin g.
H e m p e r h a t i k a n h a s i l p e n e l i t i a n - p e n e l i t i a n t e r s e - but, m a k a d i d u g a k e t i d a k m a m p u a n k u l t u r ka l u s S o l a n u m - i n d i c u m L d a l a m m e m b e n t u k s o l a s o d i n a k a r e n a g e n - g e n y a n g b e r t a n g g u n g j a u a b t e r h a d a p p e m b e n t u k a n s o l a s o d i n a t i d a k t e r e k s p r e s i k a n , dan e k s p r e s i g e n - g e n ini di pe - n g a r u h i o l e h a d a n y a d i f e r e n s i a s i sel, k l o r o f i l dan la- i n - l a i n . A t a u k e m u n g k i n a n lain s o l a s o d i n a t e l a h ter- b e n t u k , n a m u n k a r e n a t i d a k a d a n y a s e l - s e l k h u s u s seb a- g a i t e m p a t a k u m u l a s i , m a k a s o l a s o d i n a t e r s e b u t s e g e r a d i u r a i k a n (6 ),
M e n i m b a n g h a l - h a l t e r s e b u t di-atas da n h a s i l p e n e - l i t i a n p e n d a h u l u a n u n t u k p e m b e n t u k a n k a lu s d a r i eks- p l a n S o l a n u m i n d i c u m L o l e h P u r u a n t o , S (7) y a n g m e n g - h a s i l k a n k a l u s b e r u a r n a h i j a u , s e r t a apa y a n g d i k a t a - kan o l e h H e i n s t e i n (8 ) b a h u a s e t e l a h m e n d a p a t k a n k u l tu r k a l u s d e n g a n p e r t u m b u h a n y a n g c e p a t , l a n g k a h yang b a i k s e l a n j u t n y a a d a l a h m e n c o b a m e n g i n d u k s i a t a u m e l i - h a t p r o d u k t i v i t a s k a n d u n g a n s e n y a u a k i m i a a l a m i k a l u s t e r s e b u t , m a k a p a d a p e n e l i t i a n ini d i c o b a u n t u k m e n g i n d u k s i p e m b e n t u k a n s o l a s o d i n a p a d a k u l t u r k a lu s S o l a n u m i n d i c u m L d e n g a n ca ra m e n u r u n k a n ka d a r s u k r o s a p a da m e d i a p e r t u m b u h a n n y a , d a l a m h a l ini m e d i a M u r a s h i g e dan S k o o g y a n g d i m o d i f i k a s i d e n g a n h o r m o n k i n e t i n 2 ppm, 2,4 D 0, 5 p p m da n GA-j 0 , 5 ppm, k a r e n a d e n g a n m e d ia ini d i d a p a t k a n k al u s S o l a n u m i n d i c u m L d e n g a n in- d e k s p e r t u m b u h a n ya n g t e r b a i k (7).
- 3 -
P e n u r u n a n k a d a r s u k r o s a ini d i m a k s u d k a n u n t u k me- (m a c u s e l - s e l k a lu s «ga r m e l a k u k a n p r o s e s ' f o t o s i n t e s a d a l a m u s a h a n y a u n t u k m e m e n u h i k e b u t u h a n i a k a n s u m b e r kar b o n, d i m a n a ini b e r a r t i s e l - s e l k a lu s akan m e m b e n - t u k k l o r o f i l l e b i h b a n y a k a g a r p r o s e s f o t o s i n t e s a da- p a t b e r l a n g s u n g , l*arena k l o r o f i l m e r u p a k a n k a t a l i s a t o r y a n g p e n t i n g p a d a p r o s e s f o t o s i n t e s a , dan s e p e r t i ? di- k e t a h u i b a h u a ada k o r e l a s i a n t a r a k a d a r k l o r o f i l d e n g a n s o l a s o d i n a (9).
2. T u j u a n p e n e l i t i a n
P e n e l i t i a n ini b e r t u j u a n u n t u k m e n g i n d u k s i perji- b e n t u k a n s o l a s o d i n a p a d a k u l t u r k a lu s S o l a n u m i n d i c u m L, d e n g a n ca ra m e r u b a h - r u b a h k a d a r s u k r o s a y a n g d i t a m - b a h k a n pa da m e d i a N u r a s h i g e dan S k o o g y a n g d i m o d i f i k a - si d e n g a n h o r m o n k i n e t i n 2 ppm, 2, 4 D 0, 5 p p m dan GA^
0 , 5 p p m .
- 4 -
B A B II
T I N J A U A N P U S T A K A
1• K u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n
K u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n d a p a t d i d e f i n i s i k a n s e b a - g a i b a g i a n / j a r i n g a n t a n a m a n y a n g t e l a h d i p i s a h k a n d a r i t a n a m a n a s a l n y a dan d i t u m b u h k a n d a l a m k e a d a a n s t e r i l p a d a s u a t u m e d i a b u a t a n s e h i n g g a s e l - s e l n y a m a m p u tum- buh dan m e n g a d a k a n p e m b e l a h a n - p e m b e l a h a n (2 ).
M e t o d e k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n di da sari- ol'eh teo- ri s e l d a r i S c h u a n dan S c h l e i d e n y a n g m e n y a t a k a n b a h u a s e l h e u a n d a n s e l t a n a m a n m e r u p a k a n s a t u a n b i o l o g i s t e r k e c i l y an g m a m p u m e l a k u k a n a k t i v i t a s h i d u p s e p e r t i m e t a b o l i s m e , r e p r o d u k s i dan t u m b u h ; t e o r i d a r i T.H.
M o r g a n ya n g m e n g e m u k a k a n s i f a t t o t i p o t e n s i d a r i s u a t u se l d i m a n a se l m a m p u b e r k e m b a n g m e n j a Q i o r g a n i s m e (1 0 ,
1 1).
D i b a n d i n g k a n d e n g a n m e t o d e k o n v e n s i o n a l , m e t o d e k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n ini m e m p u n y a i b e b e r a p a k e u n t u - n g a n a n t a r a lain (2 ) : k o n d i s i d a p a t d i k e n d a l i k a n s e h i n g g a d a p a t d i h a s i l k a n p r o d u k t e r t e n t u s e s u a i d e n g a n y a n g d i i n g i n k a n , b e b a s d a r i p e n g a r u h m i k r o b a da n in- s e k t a , dan d a p a t d i t a n a m di m a n a s aj a t a n p a i h a r u s t er - g a n t u n g p a d a i k l i m ds n l e t a k g e o g r a f i s .
D e n g a n a d a n y a k e u n t u n g a n - k e u n t u n g a n t e r s e b u t m a k a t e h n i k k u l t u r j a r i n g a n d a p a t d i k e m b a n g k a n u n t u k t u j u a n a n t a r a lain (2 ) :
- W e m p r o d u k s i s e n y a u a - s e n y a u a t e r t e n t u y a n g b e r g u n a
- 5 -
p a d a b i d a n g f a r m a s i / m e d i s .
- B i o t r a n s f a r m a s i s e n y a u a - s e n y a u a t e r t e n t u m e n j a d i s e n y a u a y a n g d a p a t d i g u n a k a n d a l a m b i d a n g f a r m a - s i / m e d i s .
- M e m p r o d u k s i s e n y a u a s p e s i f i k ( s e p e r t i e n z i m , bi o - s i n t e s a infcermediet, dan l a i n - l a i n ) .
- S e l e k s i s t r a i n - s t r a i n t a n a m a n u n g g u l u n t u k d i p a - kai p a d a b i d a n g p e r t a n i a n dan h o r t i k u l t u r a (ter- m a s u k fus i sel, m a n i p u l a s i g e n e t i k a ) .
- M u l t i p l i k a s i t a n a m a n s e c a r a c e p a t dan s e r a g a m .
F a k t o r - f a k t o r y a n g m e m p e n q a r u h i p e r t u m b u h a n d a n p r o - d u k s i m e t a b o l i t s e k u n d e r p ad a k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n .
B e b e r a p a f a k t o r y a n g d a p a t m e m p e n g a r u h i p e r t u m b u h a n dan p r o d u k s i m e t a b o l i t s e k u n d e r p ad a m e t o d e k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n a n t a r a lai n :
2.1* P e n o a r u h l i n q k u n q a n
L i n g k u n g a n y a n g b e r p e n g a r u h itu a n t a r a l a i n : a . C a h a y a .
C a h a y a d a p a t m e m p e n g a r u h i k e c e p a t a n p e r t u m b u h a n , u a r n a dan b e n t u k k a lu s. S e b e g a i con- toh k u l t u r s u s p e n s i H a p l o p a p p u s g r a v i s ( s e p e r ti y a n g d i l a p o r k a n ole h B l e k e r l y da n S t e u a r t ) d e n g a n p e n c a h a y a a n d i h a s i l k a n ka l u s y a n g kom- p a k s e d a n g k a n d a l a m k e a d a a n g e l a p d i h a s i l k a n k a l u s ya n g r a p u h (3).
b . T e m p e r a t u r .
P e r t u m b y h a n k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n me- m e r l u k a n t e m p e r a t u r t e r t e n t u . P ad a t e m p e r a t u r
y a n g t e r l a l u t i n g g i a k a n m e n g a k i b a t k a n p e n g u a - pan d a r i m e d i a s e h i n g g a m e n g g a n g g u p e r t u m b u h a n kalu s. S e c a r a u m u m k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n a- kan t u m b u h b a i k p ad a t e m p e r a t u r 2 0 - 3 0 ° C , d e n g a n t e m p e r a t u r o p t i m a l 2 6 - 2 7 ° C (3),
c * E H
P a d a u m u m n y a u n t u k p e r t u m b u h a n k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n , pH d i a t u r a n t a r a 5 , 0 - 6 , 5 .
T u l e c k e , at al (3), m e l a p o r k a n h a s i l -peneliti- a n n y a p a d a e m p a t k u l t u r d e n g a n m e n g g u n a k a n em- p a t m a c a m m e d i a , t e r n y a t a pH ya n g o p t i m a l u n t uk p e r t u m b u h a n k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n a n t a r a 5 , 5 - 5 ,6 .
2.2. P e n g a r u h k o m p o n e n m e d i a *
K u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n d a p a t ' d i t u m b u h k a n p a d a m e d i a pa da t, m e d i a c a i r a t a u f e r m e n t o r / bi- o r e a k t o r , d e n g a n p e r s y a r a t a n t e r t e n t u u n t u k m e d i a ya ng d i p a k a i n y a . K o m p o s i s i n o r m a l m e d i a y a n g di- p a k a i p a d a d a s a r n y a t e r d i r i d a r i (2 ) :
- s u m b e r k a r b o n : s u k r o s a , g l u k o s a , lak- tosa, dan fr u k t o s a . - m a k r o e l e m e n a n o r g a n i k : NO^r NH^, P0^, K, Ca,
Ng, s o 4 .
- m i k r o e l e m e n a n o r g a n i k : b e r m a c a m - m a c a m l o g a m b e r a t s e p e r t i Co, Cu, fOo.
- v i t a m i n - v i t a m i n : t h i a m i n , p i r i d o k s i n , n i k o t i n a m i d , m - i n o s i -
- 7 -
to 1 .
- f i t o h o r m o n : g o l o n g a n s i t o k i n i n , a- u k s i n dan g i b e r e l i n . 2.2. 1. S u k r o s a
S e m u a m e d i a m e m e r l u k a n g u l a s e b a g a i s u m b e r k a r b o n dan e n e r g i , Dar i b e b e r a p a p e r c o b a a n d a p a t d i k e t a h u i t e r n y a t a s u k r o s a m e r u p a k a n k a r b o h i d r a t y a n g t e r b a i k u n t u k sel t a n a m a n , dan h a m p i r s e m u a k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n m e n u n j u k k a n p e r t u m b u h a n yan g o p t i m a l p a d a p e n g g u n a a n d i s a k a r i d a ini.
P e n a m b a h a n k a r b o h i d r a t y a n g s e s u a i d a l a m m e d i a k u l t u r jar ingan ’ t a n a m a n me.nyebabkan p e r t u m b u h a n se l k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n . K a d a r g u l a y a n g b e r l e b i h a n ak a n m e n g h a m b a t p e m b e n t u k a n k l o r o f i l , s e d a n g k a n p e m b e n t u kan k l o r o f i l m e n i n g k a t p a d a k e a d a a n ke ku - r a n g a n g u l a . M e k a n i s m e h a m b a t a n ini ma s i h b e l u m d i m e n g e r t i d e n g a n j e la s (9).
2.3. P e n q a r u h b i o l o q i s
A k t i v i t a s b i o l o g i s , t e r m a s u k b i o s i n t e s a ole h k u l t u r j a r i n g a n t a n a m a n pa d a u m u m n y a b e r k a i t a n d e n g a n k e c e p a t a n p e r t u m b u h a n sel, k a r e n a a d a n y a h u b u n g a n a n t a r a p r o d u k m e t a b o l i t d e n g a n u m u r sel.
D a l a m k a i t a n n y a d e n g a n p r o d u k s i m e t a b o l i t da l am sel d e n g a n p e r t u m b u h a n kalus , ku r v a y a n g d i h a s i l k a n m d n g i k u t i s a l a h s a t u d a r i tiga m a c a m po-
la b e r i k u t (6 ) :
- 8
1 . p e m b e n t u k a n m e t a b o l i t p a r a l e l d e n g a n p e r t u m b u h a n sel.
2 . p e m b e n t u k a n m e t a b o l i t d i p e r l a m b a t h i n g g a p e r t u m b u h a n sel b e r h e n t i .
3. p e m b e n t u k a n m e t a b o l i t t e r j a d i s e t e l a h lag p h a s e .
K al us t u m b u h s e l a m a p e r i o d e u a k t u t e r t e n t u , b i a s a n y a s e l a m a dua m i n g g u s a m p a i k i r a - k i r a tiga b u l an . P a d a a k h i r n y a ak a n d i c a p a i u k u r a n o p t i m u m d a n p e r t u m b u h a n a ka n m e n u r u n . H a l t e r s e b u t d i se - b a b k a n m a k i n b e r k u r a n g n y a n u t r i s i a t a u d e h i d r a s i m e d i a , t e r b e n t u k n y a m e t a b o l i t b e r a c u n , h a b i s n y a o k s i g e n s e l in t i j a r i n g a n (12). K u r v a p e r t u m b u h a n k a l u s s e l a l u m e n g h a s i l k a n b e n t u k "S". K e c e p a t a n p e r t u m b u h a n m e n c a p a i m a k s i m a l s e t e l a h fa s e l i n i e r dan m e n j a d i k o n s t a n p a d a fase s t a s i o n e r (G am ba rl )
| -.s tas ion er
r v
/ p.on -ingkatan
k e c e p a t a n
*
a
/ l i n i e r/
.c i
t
u a k t u
G a m b a r 1. K u r v a p e r t u m b u h a n k a lu s 3. S o l a n u m i n d i c u m L
9 -
S o l a n u m i n d i c u m L
H e r u p a k a n t a n a m a n y a n g b a n y a k d i t a n a m u n t u k di am - bil b u a h n y a dan b a n y a k t e r d a p a t di p u l a u D a v a o , (vU n d a - nau, R o c k y b l u f f s , India s e r t a C h i n a dan M e l a y u (13) • T a n a m a n ini d i k e n a l d e n g a n n a m a u m u m t a lo ng p i p i t , ta- l on g n a - p u t i (tag), dan i n di an n i g h t s h a d e (Eng) (13), s e r t a d i k e n a l d e n g a n n a m a d a e r a h t e r o n g ng or , t e r o n g p e u h e u r (jaua) dan t e r o n g s i a m (melay u) (14).
S o l a n u m i n d i c u m L m e n g a n d u n g s o l a s o d i n a p a d a ba- g i a n akar, b u a h dan d a u n n y a , y a i t u 0 , 3 2 % b e r a t k e r i n g p a d a b a g i a n d a u n dan 0 ,2 - 1 ,Q% b e r a t k e r i n g p a d a b a g i a n b u a h n y a (15). S e l a i n m e n g a n d u n g s o l a s o d i n a t a n a m a n ini j u g a m e n g a n d u n g d i o s g e n i n y a n g t e r d a p a t p a d a da un , b u ah d an s t e n i s d a r i t a n a m a n (15).
P u n t a m b e k a r dan K r i s h n a (13), m e l a p o r k a n b a h u a p a d a t a n a m a n S o l a n u m i n d i c u m L j ug a m e n g a n d u n g s i t o s t e r o l dan k a m p e s t e r o l .
S i s t e m a t i k a S o l a n u m i n d i c u m L m e n u r u t E n g l e r (16) a d a l a h s e b a g a i b e r i k u t :
D i v i s i : S p e r m a t o p h y t a A n a k d i v i s i ; A n g i o s p e r m a e Ke l a s : D i c o t y l e d o n a e B a n g s a : S o l a n a l e s S u k u : S o l a n a c e a e M a r g a : S o l a n u m
J en i s : S o l a n u m i n d i c u m S t e r o i d
S t e r o i d m e r u p a k a n t u r u n a n d a r i p e r h i d r o s i k l o p e n -
t a n o f e n a n t r e n , s u a t u m o l e k u l y an g m e r u p o k a n fus i da ri tiga s i k l o h e k s a n a dan s a t u s i k l o p e n t a n a , d e n g a n 17 bu- ah a t o m k a r b o n (17). S t r u k t u r m o l e k u l i n t i s t e r o i d je- nuh, y a n g d i s e b u t g o n a n ini d a p a t d i l i h a t pada g a m b a r 2
.
G a m b a r 2. S t r u k t u r m o l e k u l int i s t e r o i d .
4.1. P e n q q o l o n q a n s e n y a u a s t e r o i d
B e r d a s a r k a n s t r u k t u r n y a , s e n y a u a s t e r o i d di- b a g i m e n j a d i dua g o l o n g a n y a i t u (18) :
a. s e n y a u a s t e r o i d d e n g a n j u m l a h a t o m C t i d a k l e b i h d a r i 2 1 , d i s e b u t s t e r o i d s e d e r h a n a .
b. s e n y a u a s t e r o i d yan g m e m p u n y a i a t o m C le b i h d a r i 2 1 , m i s a l n y a : s t er o l , a s a m - a s a m em p ed u, v i t a m i n D, g l i k o s i d a j a nt un g, a a p o g e n i n . dan a l k a l o i d s t e r o i d .
4.2. K e q u n a a n s t e r o i d
P e n g g u n a a n s t e r o i d s a n g a t luas, m i s a l n y a se- b a g a i b a h a n b a k u o b a t k o n t r a s e p s i , a n t i i n f l a m a s i ( k o r t i k o s t e r o i d ) , a n t i al e r g i , i m p o t e n s i , dan Ia
i n - l a i n (19). B a h a n b a k u t e r s e b u t s e b a g i a n b e s a r b e r s s a l d a r i t a n a m a n y a i t u b e r u p a d i o s g e n i n dan s o l a s o d i n a .
4.3. S o l a s o d i n a .
11 -
4.3. S o l a s o d i n a
S o l a s o d i n a a d a l a h s e n y a u a s t e r o i d a l k a l o i d , ya n g m e m i l i k i s t r u k t u r m o l e k u l y a n g s a m e d e n g a n d i o s g e n i n , k e c u a l i s a t u a t o m N d a l a m s o l a s o d i n a d i g a n t i o le h a t o m 0 p a d a d i o s g e n i n .
R u m u s m o l e k u l s o l a s o d i n a a d a l a h ^2 7 ^ 3 ^ 2 ^ d e n g a n b e r a t m o l e k u l 41 3 ,6 2.
S o l a s o d i n a l a r u t b e b a s d a l a m b e n z e n a , pi ri - din a, k l o r o f o r m , l a r u t d a l a m a l k o h o l dan a s e t o n , d an s e d i k i t l a r u t d a l a m air s e r t a ' p r a k t i s t i d a k
l a r u t o a l a m e t e r (20).
S o l a s o d i n a y an g m e r u p a k a n b a h a n b a k u o b a t - o - b a t k o n t r a s e p s i , b a n y a k t n r d a p a t p a d a t a n a m a n So- l a n u m sp.
B i o s i n t e s a s o l a s o d i n a p a d a t a n a m a n d a p a t di- l i h a t p a d a l a m p i r a n 5, s e d a n g k a n s t r u k t u r d a r i s o l a s o d i n a dajbat d i l i h a t p a d a g a m b a r b e r i k u t .
ti
5. K l o r o f il
5.1. Tin.jauan t e n t a n q k l o r o f i l
S i f a t f i s i o l o g i y a n g h a n y a d i m i l i k i ole h ta
n a m a n i a l a h k e m a m p u a n n y a u n t u k m e n g g u n a k a n zat k a r b o n
12 -
d a r i u d a r a u n t u k d i u b a h m e n j a d i b a h a n o r g a n i k - d a n d i a s i m i l a s i d i d a l a m tu bu h t a n a m a n, y a n g p r o s e s n y a d a p a t d i j e l a s k a n s e b a g a i b e r i k u t : m u l a - m u l a zat- zat a n o r g a n i k H2 0 dan C O 2 o l e h k l o r o f i l d i u b a h m e n j a d i zat o r g a n i k k a r b o h i d r a t d e n g a n p e r t o l o - n g a n sin ar . P e n g u b a h a n e n e r g i s i n a r m e n j a d i e n er - gi k i m i a ( k a r b o h i d r a t ) dan k e m u d i a n p e n g u b a h a n e- n e r g i k i m i a ini m e n j a d i e n e r g i k e r j a p a d a p e r i s tiua p e r n a f a s a n d a l a m t u b y h t a n a m a n , dan l a i n - l a - i n r, m e r u p a k a n r a n g k a i a n p r o s e s y a n g d i n a m a k a n f o t o s i n t e s a dan p e r i s t i u a ini t i d a k ak an b e r l a n g - s u n g t a n p a a d a n y a k l o r o f i l dan d a r i s i n i t e r l i h a t b a h u a k l o r o f i l m e r u p a k a n zat a n t a r a y a n g p e n t i n g d a l a m p r o s e s f o t o s i n t e s a (2 1 ).
P e r i s t i u a f o t o s i n t e s a d a p a t d i n y a t a k a n d e n g a n p e r s a m a a n r e a k s i k i m i a s e b a g a i b e r i k u t (2 1 ):
2 H 2 0 + C 02 + c a h a y a (CH2 0) + H 2 0 + 0 2 K l o r o f i l t e r d a p a t s e b a g a i b u t i r - b u t i r h i j a u d i d a l a m k l o r o p l a s y a n g u m u m n y a b e r b e n t u k oval.
R u m u s b a n g u n n y a b e r u p a s u a t u c i n c i n ya ng t e r d i r i d a r i e m p a t p i r o l ( t e t r a p y r o l s ) d e n g a n Mg s e b a g a i inti.
P a d a t a n a m a n t i n g g i t e r d a p a t 2 m a c a m k l o r o - fil y a i t u : k l o r o f i l - a , C ^ ^ H ^2 ^ 5 N^rng, yan g ber- u a r n a h i j a u tua dan k l o r o f i l - b , C55 H 7 0 D 6 N 4 riQ V an9 b e r u a r n a h i j a u m ud a. K e d u a n y a m e m p u n y a i s t r u k t u r yan g h a m p i r s e r u p a , h a n y a b e r b e d a p a d a g u g u s a n a-
- 13
l i f a t i s ya ng m e l e k a t p a d a r a n t a i s a m p i n g t e t r a p y - r o l e .
K l o r o f i l t i d a k l a r u t d a l a m air, t e t a p i l a r u t d a l a m e t a n o l , m e t a n o l , eter, a s e t o n dan k l o r o f o r m . F a k t o r - f a k t o r ya ng m e m p e n g a r u h i p e m b e n t u k a n k l o r o f i l p a d a k u l t u r k a l u s .
P e m b e n t u k a n k l o r o f i l p a d a k a l u s d i p e n g a r u h i ol eh b e r b a g a i k o n d i s i dan n u t r i s i kalus, a n t a r a
la in :
a • I n t e n s i t a s da n k u a l i t a s c a h a y a .
K l o r o f i l d i r a n g s a n g p e m b e n t u k a n n y a ol eh c a h a y a d e n g a n i n t e n s i t a s l e bi h d a r i 1 0 . 0 0 0 lx.
S e b a g a i c o n t o h : p e n i n g k a t a n i n t e n s i t a s c a h a y a d a r i 6 0 0 lx m e n j a d i 6 . 0 0 0 lx d a p a t menirigkat- kan k a d a r k l o r o f i l k a l u s t e m b a k a u d a r i 30 g m e n j a d i 60 g k l o r o f i l per g r a m b e r a t . b a s a h (20). K u a l i t a s c a h a y a m e r u p a k a n f a k t o r p e n t i n g lain d a l a m p e r k e m b a n g a n k l o r o p l a s d a r i k u l t u r sel t a n a m a n . P ad a t a n a m a n , s i s t i m p i g m e n y an g b e r t a n g g u n g j a u a b t e r h a d a p d i f e r e n s i a s i k l o r o p las, m e m b e r i k a n r e s p o n t e r h a d a p c a h a y a b i r u d an m e r a h . P a d a k u l t u r s e l d a r i t a n a m a n t i n g g i p e r k e m b a n g a n k l o r o p l a s dan p e m b e n t u k a n k l o r o
fil t e r j a d i p a d a c a h a y a biru. (2 0 ) b . K a r b o h id ra t
P e m b e n t u k a n k l o r o f i l d i h a m b a t p a d a keada- an d i m a n a k a d a r g u l a p a d a m e d i a k u l t u r berle- b ih an , s e d a n g k a n p e m b e n t u k a n k l o r o f i l mening*
kat p a d a k e a d a a n k e k u r a n g c n gu la . N a m u n ■ m e k a - n i s m e d a r i e f e k ini m a s i h b e l u m d i m e n g e r t i d e
n g a n j e l a s (2 0 ).
c. F i t o h o r m o n .
F i t o h o r m o n p e n t i n g u n t u k p e r t u m b u h a n d i f e r e n s i a s i sel. S i t o k i n i n m e r u p a k a n h o r m o n p e n t i n g u n t u k s i n t e s a k l o r o f i l p a d a k u l t u r se l t e m b a k a u (20). K i n e t i n m e m p u n y a i e f e k y a n g me- n g u n t u n g k a n t e r h a d a p d i f e r e n s i a s i sel, k a r e n a d a p a t m e n s t i m u l a s i r e p l i k a s i dan m a t u r a s i klo- r o f o r m t a n p a m e n g i n d u k s i p e m b e l a h a n s e l (2 0 ).
d. K o m p o s i s i gas d a l a m t e m p a t k u l t u r .
K o m p o s i s i gas d a l a m t e m p a t k u l t u r m e m p e n g a r u h i p e r t u m b u h a n sel dan p e m b e n t u k a n k l o r o fil. E t i l e n d i l a p o r k a n m e n g h a m b a t p e m b e n t u k a n k l o r o f i l p a d a s u s p e n s i s e l s p i n a c , n a m u n e f e k ini d a p a t d i h i l a n g k a n d e n g a n m e n a m b a h k a n gas k a r b o n d i o k s i d a d a l a m a t m o s f i r k u l t u r (2 0 ).
e . N u t r i s i k u l t u r
M e d i a M u r a s h i g e dan S k o o g t e r n y a t a m e r u p a k a n m e d i a ya n g p a l i n g s e s u a i u n t u k p e r t u m b u han dan p e m b e n t u k a n k l o r o f i l k a l u s y a n g b e r a - s a l d a r i b e r b a g a i je n i s t a n a m a n (20). P e m b e n tu k a n k l o r o f i l m e n u r u n p a d a k e a d a a n k e k u r a n g a n n i t r o g e n , s e d a n g k a n p a d a p e n i n g k a t a k a da r fos- fat d a l a m m e d i a k u l t u r m e m p u n y a i e f e k m e n g u n - t u n g k a n u n t u k p e r t u m b u h a n dan p e m b e n t u k a n k l o r o f i l b e r b a g a i k u l t u r s el (2 0 ).
- 15 -
5.3* C a r a p e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l
Ada b e b e r a p a c a r a p e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l a n t a r a lain :
1 . 2 g r a m b a h a n d i e k s t r a s i dua k a l i d e n g a n a s e t o n 8 0% s a m p a i d i d a p a t k a n . v o l u m e 1 0 'ml, d e n g a n m e n g g u n a k a n h o m o g e n i s e r ( u l t r a - t u r r a x ) .
E k s t r a k d i u k u r k a d a r n y a d e n g a n s p e k t r o f o t o m e - ter p ad a p a n j a n g g e l o m b a n g 645 n m dan 66 3 n m , d e n g a n m e n g g u n a k a n p e r s a m a a n A r n o n C i t e d . in J a c o b i (5).
2. B a h a n s e g a r d i t u m b u k d a l a m m o r t i r a t a u di ma- s u k k a n k e d a l a m m a s e r a t o r d e n g a n m e n a m b a h k a n a- s e t o n a t a u m e t a n o l . E k s t r a k s i ' b a h a n t e r s e b u t s a m p a i s e m u a u a r n a p a d a j a r i n g a n t e r l e p a s . T a m b a h k a n k a l s i u m k a r b o n a t u n t u k m e n c e g a h ter- b e n t u k n y a p h e o p h y t i n , k e m u d i a n e k s t r a k di sa- r i n g d e n g a n p e n y a r i n g b u c h n e r , dan b i l a s d e n g a n a s e t o n a t a u m e t a n o l y a n g b a r u s a m p a i tak b e r u a r n a . E k s t r a k dan h a s i l p e m b i l a s a n d i u k u r v o l u m e n y a dan s i m p a n d a l a m l e m a r i es. T e n t u k a n k a d a r n y a d e n g a n s p e k t r o f o t o m e t e r p a d a p a n j a n g g e l o m b a n g 645 n m d a n 6 6 3 nm.
K a d a r k l o r o f i l d a p a t d i h i t u n g d e n g a n p e r s a m a a n (2 2) :
T o t a l k l o r o f i l * 2 0 , 2 A c/,c + 8,02
/ / i\ °45 9 * 663
(mg/ml)
d i m a n a : dan A g g ^ a d a l a h . a b s o r b s n p a d a p a n j a n g g e l o m b a n g 645 nm dan 6 6 3 nm .
- 16 -
6 ♦ K r o m a t o q r a f i l a p i s a n tipis
K r o m a t o g r a f i a d a l a h t e h n i k p e m i s a h a n ■ .zat ya n g b e r d a s a r k a n p a d a p e r b e d a g n k e c e p a t a n m i g r a s i d a r i ma- s i n g - m a s i n g k o m p o n e n n y a p a d a fa se d i a m d i b a u a h p e n g a - ruh s u a t u e l u e n (p el ar ut ) y a n g b e r ^ e r a k a t a u fase b e r - g e r a k . T e h n i k k r o m a t o g r a f i y a n g p o p u l e r d e u a s a ini u n t uk a n a l i s a ki mi a, b a i k b i d a n g f a r m a s i , k e d o k t e r a n ma- u p u n d i b i d a n g - b i d a n g y a n g lain, a d a l a h k r o m a t o g r a f i l a p i s a n ti pis (KLT).
KLT bis a d i g u n a k a n u n t u k a n a l i s a k u a l i t a t i f , ku- a n t i t a t i f dan i s o l a s i h a s i l k a n d u n g a n . B e b e r a p a k e u n - t u n g a n KLT ini a n t a r a lain (23,24) :
- k o n s e n t r a s i zat y s n g d i s e l i d i k i r e l a t i f kecil.
- u a k t u y a n g d i b u t u h k a n s i n g k a t
- l e b i h b a n y a k m a c a m a d s o r b e n m a u p u n e l u e n y a n g d a p a t d i p a k a i .
- pe ka, dan p e m i s a h a n s e m p u r n a .
- p e n y e m p r o t a n d e n g a n p e r e a k s i a s a m - a s a m k u a t ta k me- n i m b u l k a n m a s a l a h .
- k e p e k a a n n o d a k r o m a t o g r a m 1 0 - 1 0 0 k a l i 'd i b a n d i n g k a n d e n g a n k r o m a t o g r a f i k e r t a s s e t e l a h p e n y e m p r o t a n .
- b i s a d i p a k a i u n t u k m e t o d e i s o l a s i k a n d u n g a n d a l a m j u m l a h c u k u p b es ar .
M e k a n i s m e t e r j a d i n y a p e m i s a h a n d a p a t b e r d a s a r k a n p r i n s i p a d s o r p s i , p a r t i s i , p e r t u k a r a n ion, m a u p u n fil- tras i. Jenis y a n g p a l i n g s e r i n g <_ d i g u n a k a n a d a l a h p r i n s i p a d s o r p s i d a n p a r t i s i . P r o s e s p e m i s a h a n s e c a r a a d s o r p s i d a p a t d i j e l a s k a n s e b a g a i b e r i k u t : j ik a c a m -
- 17 -
p u r a n t e r s e b u t . f'lolekul-molekul zat y a n g d i a d s o r p s i p a l i n g lem ah o l e h f a s e d i a m a k a n t e r b a u a k e a t a s oleh f a s e g e r a k , s e h i n g g a m e m b e r i k a n n o d a p a l i n g atas, se- d a n g k a n roolekul-mo l e k u l zat y a n g d i a d s o r p s i p a l i n g ku- at o l e h fa s e d i a m a kan m e m b e r i k a n n o d a p a l i n g bauah .
I d e n t i f i k a s i d a r i k o m p o n e n - k o m p o n e n s e n y a u a y a n g t e r p i s a h p a d a l a p i s a n t i p i s d a p a t d i k e t a h u i d e n g a n ca- ra m e m b a n d i n g k e n n y a d e n g a n s e n y a u a - s e n y a u a s t a n d a r t y a n g d i k r o m a t o g r a f i p a d a l e m p e n g yan g sama, d e n g a n m e n g g u n a k a n p e r e a k s i p e n a m p a k n o d a y a n g s e s o a i a t a u m e n g g u n a k a n l a m p u u l t r a v i o l e t , dan d e n g a n c a r a m e n g u - kur h a r g a R ^ n y a ( R e t a n d a t i o n f a c t o r ) , d i m a n a :
j a r a k y a n g d i t e m p u h ol eh k o m p o n e n R f =
j a r a k y a n g d i t e m p u h o l e h p e l a r u t
18 -
B A B III
B AHAN, A L A T DAN M E T O D E P E N E L I T I A N
1. B a h a n
■ 1 • 1• Kalus
Kalus S o l a n u m i n d i c u m L d i p e r o l e h d a r i la bo - r a t o r i u m B i o t e k n o l o g i F a r m a s i , F a k u l t a s F a r m a s i , U n i v e r s i t a s A i r l a n g g a S u r a b a y a , y a n g d i p e r b a n y a k s e n d i r i .
1.2# B a h a n k i m i a
S e m u a b a h a n k i m i a y a n g d i g u n a k a n d a l a m pe r- c o b a a n ini a d a l a h p r o d u k s i E. M e r c k D a r m s t a d t d e n g a n d e r a j a t " p r o a n a l i s a ” k e c u a l i d i s e b u t k a n l a in. H o r m o n k i n e t i n d a r i F l u k a dan h o r m o n 2 , 4 D d a r i S i g m a . S t a n d a r t n - s i t o s t e r o l * d a n s o l a s o d i n a d i p e r o l e h d a r i l a b o r a t o r i u m B i o t e k n o l o g i F a r m a s i , F a k u l t a s F a r m a s i , U n i v e r s i t a s A i r l a n g g a S u r a b a y a . 1.3. Ag ar
A g a r y a n g d i g u n a k a n a d a l a h B a c t o agar, D i f c o C e n t r i f i e d , D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t M i c h i g a n USA.
1.4. M e d i a
M e d i a y an g d i g u n a k a n p a d a p e n e l i t i a n ini a- da l p h m e d i a M u r a s h i g e dan S k o o g y a n g d i m o d i f i k a s i d e n g a n h o r m o n k i n e t i n 2 ppm, 2 , 4 D 0 , 5 ppm, dan GA ^ 0,5 ppm. K o m p o s i s i m e d i a s e c a r a l e n g k a p ter-
tera p a d a l a m p i r a n 1 .
D a l a m p e n e l i t i a n ini m a c a m m e d i a y a n g d i g u -
19
n a k a n ada 3 ma ca m, s e p e r t i y a n g t e r t e r a d i b a u a ’i in i .
M e d i a M e d i a k a da r
d a s a r MS* d e n g a n s u k r o s a ( % )
A 3
B 1,5
C 0
K e t e r a n g a n :
MS' ss m e d i a M u r a s h i g e dan S k o o g y a n g d i m o d i - f i k a s i d e n g a n h o r m o n k i n e t i n 2 ppm, 2, 4 D 0 , 5 p p m dan G A3 0 , 5 pp m (la mp i- r an 1 ).
2. A l a t
- L a m i n a r a i r f l o w c a b i n e t " D a l t o n m o d e l FA 11 -2 2 C l e a n B e n c h P V C - 7 5 0 - A P G " , u n t u k p e n g e r j a a n a s e p t i s .
- A u t o k l a f d e n g a n k a p a s i t a s v o l u m e 25 l i t e r ( A m e r i c a n - A u t o c l a v e U A F Co Inc), u n t u k s t e r i l i s a s i m e d i a .
- pH m e t e r F i s h e r , u n t u k m e n g a t u r pH m e d i a . - T i m b a n g a n a n a l i t i k .
- B o t o l ku lt u r , d i a m e t e r 4 cm, t i n g g i 7 cm.
- L e m p e n g j ad i K i e s e l g e l 60 F 254, E. M e r c k . 3. M e t o d e
3.1. P e m b u a t a n l a r u t a n s t o k
t a r u t a n s t o k d i b u a t s e s u a l d e n g a n y a n g t e r tera p a d a l a m p i r a n 1 , d e n g a n m e n g g u n a k a n p e l a r u t A q u a d e s t , k e c u a l i u n t u k :
- 20 -
k i n e t i n : d i l a r u t k a n d a h u l u d e n g a n l a r u t a n H c l 0 ,5 N s e d i k i t d e m i s e d i k i t s a m p a i l a r u t k e m u d i a n d i t a m b a h a q u a d e s t s a m p a i 1 l i ter.
2 , 4 D : d i l a r u t k a n d a h u l u d e n g a n e t a n o l - s e c u - k u p n y a s a m p a i t e p a t l a r u t k e m u d i a n d i t a m b a h a q u a d e s t s a m p a i 1 liter.
3.2. P e m b u a t a n m e d i a
P e m b u a t a n m e d i a d i l a k u k a n s e s u a i d e n g a n m e tod e M u r a s h i g e (25) d e n g a n c a r a s e b a g a i b e r i k u t : m a s i n g - m a s i n g l a r u t a n s t o k d i a m b i l d a l a m k o n s e n - t r a s i y a n g s e s u a i ( l i h a t l a m p i r a n 1 ) dan d i c a m p u r j a d i sa tu , k e m u d i a n d i t a m b a h •d e n g a n m y o - i n o s i t o l , d a n s u k r o s a . M e d i a MS d i a t a s s e l a n j u t n y a d i t a m b a h d e n g a n air s u l i n g ( a q u a d e s t ) s a m p a i d i p e r o l e h la
r u t a n m e d i a + 950 ml. S e t e l a h .pH m e d i a d i a t u r 5,7 d e n g a n p e n a m b a h a n l a r u t a n H c l 0,1 N dan l a r u t a n N a O H 0,1. N , d i t a m b a h k a n a g a r dan a i r s a m p a i d i d a p a t k a n s a t u l i t e r l a r u t a n m e d i a . L a r u t a n ini s e l a n j u t n y a d i p a n a s k a n s a m b i l d i a d u k • s a m p a i l a r u t a n m e n d i d i h . L a r u t a n d i t u a n g k e d a l a m b o t o l - k u l t u r dan d i t u t u p d e n g a n a l u m i n i u m foi l dan di- s t e r i l k a n d a l a m a u t o k l a f s u h u 12 1° C s e l a m a 20 me*
nit.
3.3. P e m i n d a h a n d a n p e n a n a m a n ka lu s
P e m i n d a h a n dan p e n a n a m a n k a l u s d i l a k u k a n d a lam k o t a k p e m i n d a h b e r a l i r a n u d a r a ( l a m i n a r a i r f l o w c a b i n e t ) ya n g t e l a h d i b e r s i h k a n d e n g a n a l k o -
21 -
h o i 70 ^. L a m p u UV d i n y a l a k a n s e l a m a 1 0 - 2 0 m e n i t , dan b o t o l d i m a s u k k a n d a l a m l a m i n a r a i r f l o w . Se te - lah t ut u p b o t o l d i b u k a dan m u l u t b o t o l di f l a m b e r s e l a n j u t n y a , d e n g a n m e n g g u n a k a n s c a l p e l s t e r i l , k al u s d i p i n d a h k a n k e d a l a m m e d i a b a r u s e b a n y a k 1 - 2 g r a m , lalu m u l u t b o t o l d i f l a m b e r dan ■’d i t u t u p ra- p a t d e n g a n a l u m i n i u m foil.
3.4. P e m e r i k s n a n m a k r o s k o p i s ka l u s
P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s ka l u s m e l i p u t i c/arna ka l u s dan d i f e r e n s i a s i sel ya n g t e r j a d i p a d a ka - l u s.
3.5. P e m e r i k s a a n p e r t u m b u h a n kal us
P a r a m e t e r p e r t u m b u h a n k a l u s y a n g d i g u n a k a n p a d a p e r c o b a a n ini a d a l a h i n d e k s p e r t u m b u h a n y a n g d i n y a t a k a n s e b a g a i b e r i k u t :
. B e r a t b a s a h k a l u s a k h i r Ann IP * ______________________________ .x 100
B e r a t b a s a h k a l u s au a l
B e r a t b a s a h k a l u s a u a l a d a l a h h a s i l d a r i b e r a t b o t o l b e r i s i m e d i a dan kal us ya ng b a r u d i p i n - dah d i k u r a n g i b e r a t b o t o l b e r i s i m e d i a , s e d a n g k a n B e r a t b a s a h k a l u s a k h i r a d a l a h h a s i l p e n i m b a n g a n d a r i k a l u s y a n g t e l a h d i t u m b u h k a n s e l a m a 3 m i n g g u
dan t e l a h d i b e r s i h k a n d a r i m e d i a n y a . '3.6. P e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l
P e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l d a r i k a l u s S o l a n u m - i n d i c u m L d i l a k u k a n d e n g a n c a r a s e b a g a i b e r i k u t : d i t i m b a n g 5 g r a m k a l u s segar, d i m a s u k k a n k e d a l a m mo r t i r , la l u d i t a m b a h 0 , 1 g r a m k a l s i u m k a r b o n a t ,
- 22 -
da n d i g e r u s . T a m b a h k a n a s e t o n dan l a k u k a n e ks - t r a k s i s a m p a i s e m u a s e m u a u a r n a h i j a u p a d a k al us t er l e p a s , l al u s a r i n g dan m a s u k k a n k e d a l a m la b u u k u r 25 ml. C u c i r e s i d u s a m p a i t i d a k b e r u a r n a . F i l t r a t d i t a m b a h a s e t o n s a m p a i d i d a p a t k a n v o l u m e 25 ml lalu k o c o k s a m p a i h o m o g e n . T e n t u k a n k a d a r k l o r o f i l d e n g a n s p e k t r o f o t o m e t e r r p a d a .panjang g e l o m b a n g 645 n m dan 6 6 3 nm.
K a d a r k l o r o f i l d a p a t d i h i t u n g d e n g a n p e r s a m a a n (2 2 ) :
T o t a l k l o r o f i l = 2 0 , 2 A ^ ^ + 8 ,0 2 (m g /m 1 )
d i m a n a : ^ 5 4 5 dan A ^ ^ a d a l a h a b s o r b a n p a d a p a n j a n g g e l o m b a n g 645 n m dan 6 6 3 nm.
3.7. E k s t r a k s i s o l a s o d i n a k a r i ka lu s (25)
D i t i m b a n g 5 g r a m kalus, d i h i d r o l i s a d e n g a n H cl 2 N p a d a s u h u 10 0° C s e l a m a s a t u jam, k e m u d i a n d i d i n g i n k a n dan d i b a s a k a n d e n g a n l a r u t a n N a O H 1 N s a m p a i pH 10. S a r i n g dan r e s i d u d i k e r i n g k a n d a l a m l e m a r i p e n g e r i n g dari s e l a n j u t n y a . d i e k s t r a k s i , ‘de- n g a n k l o r o f o r m 40 ml s e l a m a dus k a l i s e t e n g a h jam.
E k s t r a k k l o r o f o r m d i p e k a t k a n dan (lianalisa d e n g a n KLT.
3.8. I d e n t i f i k a s i s o l a s o d i n a d e n q a n KLT
K r o m a t o g r a f i l a p i s a n t i g i s d i l a k u k a n d e n g a n l e m p e n g j a d i k i e s e l g e l 60 F2 5 4 d e n g a n r p e n a m p a k n o d a d r a g e n d o r f . P e l a k s a n a a n KLT d e n g a n c a r a s e b a g a i b e r i k u t : E k s t r a k k l o r o f o r m d i t o t o l k a n pad a
- 23 -
l ' ^ : e n g d e n g a n m e n g g u n a k a n pip a k a p i l e r , lal u bi- a r k a n k e r i n g d i u d a r a , dan d i l a k u k a n e l u a s i d e n g a n k l o r o f o r m - m e t a n o l = 1 9 : 1 dan d i s e m p r o t d e n g a n p e n a m p a k n o d a d r a g e n d o r f , U a r n a n o d a dan h a r g a R^.
y a n g t e r j a d i d i b a n d i n g k a n d e n g a n p e m b a n d i n g . 3.9. I d e n t i f i k a s i s t e r o i d l a i n n y a d e n o a n KLT
E k s t r a k k l o r o f o r m d i t o t o l k a n p a d a l e m p e n g d e n g a n m e n g g u n a k a n pipa. k a p i l e r , la l u b i a r k a n k e r i n g d i u d a r a , da n d i l a k u k a n e l u a s i d e n g a n n - h e k - s a n a - e t i l a s e t a t = 8 : 2 d a n k l o r o f o r m - e t i l ase- tat = 9 : 1 . d a n d i s e m p r o t d e n g a n p e n a m p a k n od a a n i s a l d e h i d a ( l a m p i r a n 3). L e m p e n g h a s i l kr.oma- t o g r a f i s e l a n j u t n y a di^anaskan.. d a l a m o v e n p a d a s u h u 1 0 0 - 1 0 5 qC s e l a m a 5 - 1 0 m e n i t . U a r n a n o d a da n h a r g a R^-nya d i b a n d i n g k a n d e n g a n p e m b a n d i n g .
- 24 -
B A B IV H A S I L P E N E L I T I A N
1 . P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s kal us
T a b e l 1. P e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i s kal us S o l a n u m iridi- c u m L
M e d i a U a r n a D i f e r e n s i a s i sel
A h i j a u t i d a k t e r j a d i
B h i j a u t i d a k t e r j a d i
C h i j a u mu d a t i d a k t e r j a d i
G a m b a r 4. K a lu s S o l a n u m i n d i c u m L pada m e d i a A, B da n C.
- 25 -
2. P e n o a m a t a n p e r t u m b u h a n k al us
T a b e l 2 . Inde ks p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s d a r i ma- s i n g - m a s i n g m e d i a pa d a t i a p - t i a p pas as i.
M e d i a
Indek s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a ka l u s t i a p p a s a s i p a s a s i
I II III IV
A
3 2 9 , 3 5 + 4 8 , 9 6
(n=5)
3 4 2 , 1 4 + 4 9 , 2 3
(n=5)
4 3 6 , 6 5 + 3 9 , 4 4
(n-4)
4 3 6 , 8 7 + 30, 15 (n = 4)
B
3 6 6 , 9 7 + 20 ,7 1
(n = 5)
4 8 3 , 7 7 + 3 7 , 0 5
(n = 4)
563, 56
"56, 16 (n = 4 )
5 7 3 , 3 1 + 1 3 7 , 5 4
(n = 5)
C
1 9 4 , 4 6 + 2 5 , 8 8
(n = 3 )
1 5 9 , 9 2 + 2 9 , 8 2
(n = 4)
1 5 0 , 9 9 + 4 8 , 4 0
(n=4)
1 5 7 , 1 3 + 2 2 , 6 9
(n = 4)
In d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s d a r i m a s i n g - m a - s i n g m e d i a p a d a t i a p - t i a p p a s a s i d a p a t d i l i h a t p ad a t a b e l 2 d i a t a s , s e l a n j u t n y a d a r i t a b e l 2 d i b u a t g r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k a l u s d a r i m a s i n g - m a s i n g m e di a p a d a t i a p - t i a p p a s a s i d a n g r a f i k i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a k al us p a d a t i a p - t i a p pa sa s i , u n t u k m a s i n g - m a - s i n g m e d i a , y a n g d a p a t d i l i h a t pada g a m b a r 5 s a m p a i 11.
- 26 -
l»oeuKaniMuiuiitkiin
* 6i » 6ir I . C ttfIk i*d iH »•»>>•
t fl'l a < i l x « . » t ln « »•< !• » ♦ « » »••••■ '•
! *•
! w
''/■'////
'////'
* 1
• / /.
I
I'////
/ ////
V/4 6\
• • r
« • r I m i i i I e i « i i u p' I Ii i ( i n t i ,
• tilii
• i n .
(ImI *H|» € piift lliA'Hir Mini, 10, Cfffh I ( | ] V|
M«m r.rtj m**ii nt.
C**tiM i i , C n M k ] a if # ^« (,»t * i 1 u «
- 27 -
3• P e n e t a p a n k a d a r k l o r o f i l t ot al
T a b e l 3. K a d a r k l o r o f i l t o t a l k a l u s d a r i m a s i n g - m a s i n g m e d i a .
* M e d i a
&
K a da r k l o r o f i l t o t a l (mg/g b e r a t ke ri n g )
A 0 , 1 2 4 + 0 , 0 0 0
B 0, 160 + 0 , 0 0 3
C 0, 109 + 0 , 0 3 4
S e c a r a s t a t i s t i k a , ad a p e r b e d a a n y a n g b e r m a k n a a n t a r a k a d a r k l o r o f i l t o t a l d a r i k a l u s yan g d i t u m b u h k a n p a d a m e d i a A, 0 dan C ( = 5 , 2 5 ; ^ - 5 , 1 4 , p a d a P = 0 , 0 5 ). P e r h i t u n g a n d a p a t d i l i h a t p a d a l a m p i r a n 4 s e d a n g k a n g a m b a r g r a f i k k a d a r k l o r o f i l t o t a l d a r i k a lus y a n g d i t u m b u h k a n p a d a m a s i n g - m a s i n g m e d i a d a p a t di l i h a t pad a g a m b a r 1 2 .
4. I d e n t i f i k a s i e k s t r a k d e n g a n k r o m a t o g r a f i l a p i s a n tip is H a s i l k r o m a t o g r a f i l a p i s a n t ip is d e n g a n fa s e ge- r a k k l o r o f o r m - m e t a n o l = 1 9 : 1 dan p e n a m p a k n o d a dr a- g e n d o r f d a p a t d i l i h a t p a d a t a b e l 4, s e d a n g k a n h a s i l KLT d e n g a n fase g e r a k n - h e k s a n a - e t i l a s e t a t - 8 : 2 , dan fase g e r a k k l o r o f o r m - e t i l a s e t a t = 9 : 1 d e n g a n p e n a m p a k n o d a a n i s a l d e h i d a d a p a t d i l i h a t p a d a t a b e l 5, d e n g a n g a m b a r s k e m a t i s y a n g d a p a t d i l i h a t pa d a g a m b a r 13 dan 14.
- 28
G a m b a r 12. G r a f i k k a d a r k l o r o f i l total ka- lus d a r i m a s i n g - m a s i n q me di a.
T a b e l 4. H a s i l k r o m a t o g r a f i l a p i s a n tipis d e n g a n fase g e r a k k l o r o f o r m - m e t a - n ol dan p e n a m p a k n o d a d r a g e n d o r f .
S a m p e l u a r n a n o d a R f
E k s t r a k d a r i k a l u s m e dia A , B dan C .
P e m b a n d i n g s o l a s o d i n a . j i n g g a Q t45
T a b e l 5. H a s i l k r o m a t o g r a f i l a p i s a n ti p i s d e n g a n fa
se g e r a k n - h e k s a n a - e t i l a s e t a t = 8 : 2 dan fase g e r a k k l o r o f o r m - e t i l a s e t a t d e n g a n p e n a m p a k n o d a an is a l d e h i d a .
fas e g e r a k
• p e m b a n d i n g fi-sitosterol.
u a r n a n o d a R f u a r n a n od a R f .
n - h e k s a n a - e t i l a s e - tat = 8 : 2
u n g u m ud a u n g u
b i r u
b i r u h i j a u
0 , 5 9 0 , 3 9 0 , 2 1 0 , 18
u n g u 0 , 3 9
k l o r o f o r m - e t i l a s e tat - 9: 1
b i r u u n g u u n g u
h i j a u k o t o r
0, 62 0 , 4 3 0, 19
u n g u 0 , 4 3
♦
K e t e r a n g a n ;
P = p e m b a n d i n g s o l a s o d in a
fi, B, C = e k s t r a k k a lus m e d i a A, B dan C.
G a m b a r 13. S k e m a t i s k r o m a t o g r a m .
- 30 -
5 4 3 2 1
0
I
a a p c
G a m b a r 14. S k e m a t i s k r o m a t o g r a m .
K e t e r a n g a n :
I * fase g e r a k n - h e k s s n a - e t i l a s e t a t = 0 : 2 II = fflse g e r a k k l o r o f o r m - e t i l a s e t a t = 9 : 1 A, B, C - u k s t r a k d a r i k a l u s m e d i a A, B dan C.
- 31
BA B \t P E MB A H A 5 A N
D a r i p e n g a m ^ t a n t e r h a d a p p e r t u m b u h a n k a l u s S o l a n u m - i n d i c u m L trernyata d n p ^ t d i k e t a h u i b n h u a p e r t u m b u h a n k a lus S o l a n u m i n d i c u m L t i d a k h o m o g e n dan ini d a p a t d i l i h a t d a r i i n d e k s p e r t u m b u h a n r a t a - r a t a n y a y a n g m e m p u n y a i h a r g a s t a n d a r d e v i a s i ya n g b es a r , s e h i n g g a p e n g a r u h p e n u r u n a n k a d a r s u k r o s a t e r h a d a p p e r t u m b u h a n k a lu s S o l a n u m i n d i c u m L ini t i d a k d a p a t d i a m a t i d e n g a n jel as .
H a s i l p e n g a m a t a n t e r h a d a p k a d a r k l o r o f i l t o t a l dar i k a l u s y a n g d i t u m b u h k a n p a d a m a s i n g - m a s i n g . m e d i a , d e n g a n p e r h i t u n g a n s t a t i s t i k a , d a p a t d i s i m p u l k a n b a h u a t e r n y ^ t a acia p e r b e d a a n k a d a r k l o r o f i l d a r i k a l u s s e b a g a i p e n g a r u h d a r i p e n u r u n a n k a d a r s u k r o s a d a l a m m e d i a p e r t u m b u h a n n y a •
P a d a p e n e l i t i a n ini, k a d a r k l o r o f i l ‘t o t a l d i h i t u n g h a n y a p a d a p a n j a n g g e l o m b a n g 663 nm, k a r e n a ' p a n j a ng ge- l o m b a n g 6 45 nm t i d a k t e r a m a t i (liha t l a m p i r a n 6 ). H a l ini m u n g k i n d i s e b a b k a n k a d a r k l o r o f i l y a n g t e r l a l u s e d i k i t , a t a u k a r e n a a d a n y a z a t - z a t lain, k a r e n a itu k a d a r r e l a t i f k l o r o f i l d i e s t i m a s i k a n s e b a g a i k a d a r k l o r o f i l total.
P a d a ka l u s y a n g d i t u m b u h k a n p a d a m e d i a B y a i t u m e d i a d e n g a n k a d a r s u k r o s a 1,5/6 d i d a p a t k a n k a d a r k l o r o f i l yan g p a l i n g tinggi,' karena. p a d a .kadar s u k r o s a ini b a g i ka lu s S o l a n u m i n d i c u m L m e r u p a k a n k o n s e n t r a s i y a n g p a l i n g se s u - ai u n t u k d a p a t m e m a c u s e l - s e l k a l u s aga,r m e l a k u k a n p r o s e s f o t o s i n te sr j , y ang b e r a r t i j u g a a k a n m e m a c u p e m b e n t u k a n k l o r o f i l , k a r e n a k l o r o f i l m e r u p a k a n k a t a l i s a t o r p e n t i n g
- 32 -
p a d a p r o s e s f o t o s i n t e s a * P a d a kal us ya ng d i t u m b u h k a n p a da m e d i a A, y a i t u m e d i a d e n g a n k a d a r s u k r o s a b a g i k a lus k a d a r s u k r o s a ini b e r l e b i h a n , s e h i n g g a j u s t r u me n g - h a m b a t p e m b e n t u k a n k l o r o f i l . P a d a kal us y a n g d i t u m b u h k a n pad a m e d i a C, kad ar k l o r o f i l y a n g d i d a p a t leb ih kecil/s.e- d i k i t d a r i p a d a k a d a r k l o r o f i l d a r i k a l u s y an g d i t u m b u h k a n p a d a m e d i a A dan B, k a r e n a pad a m e d i a C ini, s u m b e r kar- bon y a n g d i p e r l u k a n u n t u k m e m a c u t e r j a d i n y a f o t o s i n t e s a t i d a k ada s a m a s ek » l i .
H a s i l p e n e l i t i a n t e r d a h u l u m e n u n j u k k a n b a h u a o pa d a k u l t u r s u s p e n s i dan k u l t u r k a l u s S o l a n u m l a c i n i a t u m • Ait, k u l t u r k a l u s S o l a n u m e l e a q n i f o l i u m d a n k u l t u r k a l u s S o l a n u m d u l c a m a r a L m a m p u m e m b e n t u k s o l a s o d i n a * . s t e r o i d -spe- s i f i k . t a n a m a n a s a l n y a . D a r i p e n e l i t i a n p a d a k u l t u r ka lu s S o l a n u m d u l c a m a r a L d a p a t d i k e t a h u i b a h u a p a d a ka l u s ya ng m e n g a n d u n g k l o r o f i l 0 , 1 + 0 , 0 2 m g / g b e r a t k e r i n g t e r n y a - ta s u d a h m a m p u m e m b e n t u k s o l a s o d i n a d e n g a n k a d a r 56 + 12 u g / g b e r a t k e r i n g (5), t e t a p i pad a k u l t u r k a lu s S o l a n u m - i n d i c u m L ya ng m e n g a n d u n g k l o r o f i l 0 , 1 6 + 0 , 0 0 3 m g / g b e r at ke r i n g , t e r n y a t a t i d a k m a m p u m e m b e n t u k s o l a s o d i n a dan
ini d a p a t d i k e t a h u i d a r i h a s i l i d e n t i f i k a s i d e n g a n KLT.
H a s i l i d e n t i f i k a s i d e n g a n KLT d a r i e k s t r a k s i k a l u s y a n g b e r a s a l d a r i m e d i a n e r t u m b u h a n A, B dan C m e m b e r i k a n p r o f i l n o d a ya n g sflma. A d a n y a n o d a b e r u a r n a- u n g u ya ng m e m o u n y a i h a r g a R p yan g s a m a d e n g a n p e m b a n d i n g fi-sitoste- rol m e n u n j u k k a n a d a n y a s e n y a u a s t e r o l pa da k u l t u r ka lu s S o l a n u m i n d i c u m H .
P a d a k u l t u r k a l u s S o l a n u m i n d i c u m L t i d a k d i t e m u k a n
- 33 -
