LAPORAN RESMI LAPORAN RESMI PRAKTIKUM BIOKIMIA PRAKTIKUM BIOKIMIA II.. JJUUDDUUL L :: “ DIALISIS” “ DIALISIS” IIII.. TTUUJJUUAANN:: 1.
1. MemMemahamahami pri prinsinsip kip kerjerja dia dialyalysissis 2.
2. MemMemisaisahkan Ethkan EtBr darBr dari DNA i DNA daldalam agaam agarsrse gele gel !.
!. MengganMengganti "#ti "#$$er $$er lar#tlar#tan pran prtein tein melalmelal#i dia#i dialisilisiss II
III.I. DADATTA A PEPENGNGAMAMAATTAAN DAN DAN PEN PERHRHITITUNUNGAGANN P
PEERRLLAAKKUUAANN HHAASSIIL L PPEENNGGAAMMAATTAANN A.
A. PENYIPENYIAPAPAN AN KANTOKANTONG NG DIALISDIALISISIS Memtng mem"ran dialisis sepanjang % Memtng mem"ran dialisis sepanjang %
&m lal# mem"#ndel pada salah sat# &m lal# mem"#ndel pada salah sat#
#j#ngnya #j#ngnya
Mere"#s mem"rane dengan 1mM ED'A Mere"#s mem"rane dengan 1mM ED'A
(p)*+, selama 1- menit (p)*+, selama 1- menit
Mem"ilas mem"rane dengan a#ades Mem"ilas mem"rane dengan a#ades
Mere"#s kem"ali mem"rane dalam 1mM Mere"#s kem"ali mem"rane dalam 1mM
ED'A selama 1- menit ED'A selama 1- menit
Mem"iarkan mem"ran dingin dan Mem"iarkan mem"ran dingin dan menyimpannya dalam lemari es menyimpannya dalam lemari es
// MMeemm""rranane de diiaallyyssiiss "er"ent#k seperti "er"ent#k seperti plasti& dan "er0arna plasti& dan "er0arna "ening (transparan, "ening (transparan, // NaNatrtrii#m #m "i"ikakarr""nanat t
"ening "ening
// EEDD''A A ""eenniinngg // AA##aaddees s ""eenniinngg
// ''eer"r"enentt#k #k mmemem"r"rananee dialysis siap pakai dialysis siap pakai B.
B. MEMEMBMBUAUAT T BUBUFFFFER ER a
a.. BBUUFFFFEER R AA 1
1.. MMeemm""##aat t ))!!33) 1M dan33) 1M dan
)
)!!33Na 1M se"anyak masing/33Na 1M se"anyak masing/
masing %-- mL masing %-- mL 2.
2. MeMem"m"#a#at 4 jt 4 jenenis is "#"#$$$$er er AA B B##$$$$eerr ))!!33)33) 1M %(mL, 1M %(mL, ) )!!33Na33Na 1M (mL, 1M (mL, 1 1 1155%% %% 2 2 11++%% 11%% ! ! 114466 !!44 6 6 11--22 55++ B#$$er B#$$er A A p) p) 7 etanl7 etanl 1 1 !! BBaa## menyengat8 menyengat8 "ening "ening 2 2 !! BBaa## menyengat menyengat "ening "ening ! ! !! BBaa##
% %5 161 4 15 1+1 b. BUFFER B 1. Mem"#at 9 2):36 1M dan 9)2:36 1M se"anyak masing/masing %--mL
2. Mem"#at 4 jenis "#$$er B B#$$er 9 2):36 1M (mL, 9)2:36 1M (mL, 1 !8% 548% 2 +8% 518% ! 1582 +-8+ 6 !+81 4185 % 418% !+8% 4 +484 1!86 menyengat8 "ening 6 % Ba# asam8 "ening % 4 Ba# 0angi8 "ening 4 4 Ba# 0angi8 "ening B#$$er B p) 7 etanl 1 4 'idak "er"a#8 ker#h 2 4 'idak "er"a#8 ker#h ! 4 'idak "er"a#8 ker#h 6 4 'idak "er"a#8 ker#h % ; 2 lapisan8 ker#h dan "ening 4 + 'idak "er"a#8 ker#h
C. MENGGANTI BUFFER DENGAN DIALISIS
Mengisi mem"ran dengan "#$$er B se"anyak % mL kem#dian mem"#ndel
mem"ran
Memas#kkan mem"rane ke dalam "#$$er A dan menyimpannya dalam $ree<er !/6 hari
Menyetirrer mem"rane dan "#$$er A selama = 1 menit sampai hmgen
Mengam"il 2 tetes lar#tan dalam mem"ran dan menam"ahkan 2 tetes etanl
Mem"#ndel mem"ran dan memas#kkan dalam "#$$er B serta menyimpannya dalam
$ree<er
Menyetirrer mem"rane dan "#$$er B selama = 1 menit sampai hmgen
Mengam"il 2 tetes lar#tan dalam mem"ran dan menam"ahkan 2 tetes >eS36
B#$$er A "ening B#$$er B "ening
/ ?arna lar#tan8
mem"rane8 dan etanl "ening
/ ?arna lar#tan8
mem"rane8 dan >eS36
ker#h dan tak "er"a#
I@. :EMBA)ASAN
'#j#an dari per&"aan dialisis adalah memahami prinsip kerja dialisis8 memisahkan EtBr dari DNA dalam agarse gel dan mengganti "#$$er lar#tan prtein melal#i dialisis. Nam#n #nt#k t#j#an yang ked#a tidak dilak#kan.
Dialisis mer#pakan salah sat# teknik pemisahan tert#a #nt#k preparasi sampel8 pem#rnian dan karakterisasi "imlek#l. :rinsip kerjanya memisahkan mlek#l terlar#t "erdasarkan #k#ran
mlek#lnya melal#i s#at# mem"ran "erpri. Lar#tan dalam air yang mengand#ng &#ran makrmlek#l dan mlek#l ke&il ditempatkan dalam mem"ran "erpri yang ked#a #j#ngnya di"#ndel agar lar#tan tidak t#mpah kel#ar. Mem"ran terse"#t kem#dian direndam dalam 0adah "esar "erisi "#$$er "erkek#atan inik rendah. m#mnya makrmlek#l "er#k#ran le"ih "esar
dari 1---- Da tidak "erdi$#si kel#ar mem"ran8 sedangkan mlek#l/mlek#l ke&il akan lel#asa "erdi$#si melal#i pri/pri mem"ran.
Aki"atnya knsentrasi mlek#l ke&il di dalam mem"ran akan "erk#rang. 9esetim"angan "ergant#ng pada l#me dan ter&apai setelah 6 sampai 4 jam. Setelah kesetim"angan ter&apai8 "#$$er dalam 0adah diganti yang "ar# dan jika dialisis dilanj#tkan knsentrasi mlek#l ke&il di
dalam mem"ran akan menjadi semakin "erk#rang.
Dialisis adalah metde yang sederhana8 m#rah dan e$ekti$8 paling sering dig#nakan #nt#k menghilangkan garam dan mlek#l ke&il lainnya dari lar#tan makrmlek#l ata# #nt#k mengganti "#$$er prtein. Selama pemisahan dan pem#rnian "imlek#l8 mlek#l ke&il ditam"ahkan #nt#k pengendapan selekti$ ata# melar#tkan mlek#l/mlek#l ke&il yang diinginkan. nthnya prtein sering diendapkan dengan penam"ahan pelar#t rganikCgaram seperti ammni#m ata# natri#m s#l$at. Akan tetapi kehadiran pelar#t rganik ata# garam terse"#t "iasanya menggangg# pem#rnian le"ih lanj#t dan karakterisasi sehingga har#s dihilangkan.
Dalam per&"aan ini8 "#$$er yang dig#nakan adalah "#$$er asetat dan "#$$er $s$at. B#$$er ata# "iasa dise"#t lar#tan penyangga adalah s#at# lar#tan yang dapat mempertahankan p) pada kisarannya. ika pada s#at# lar#tan penyangga ditam"ah sedikit asama ata# sedikit "asa ata#
dien&erkan8 maka p) lar#tan relati$ tidak "er#"ah. Dalam kehid#pan sehari/hari "#$$er sangat penting peranannya dalam reaksi/reaksi "ikimia dan dalam "idang "iteknlgi. B#$$er
memiliki "anyak ma&am dan jenis. Sehingga dalam memilih "#$$er8 yang har#s diperhatikan adalah p) ptim#m serta si$at/si$at "ilgisnya. Banyak jenis "#$$er yang memiliki pengar#h terhadap sistem "ilgis8 aktiitas en<im8 s#"strat8 ata# k$aktr. Se"agai &nth8 "#$$er $s$at dapat meng#rangi aktiitas dari "e"erapa meta"lik e n<im termas#k kar"ksilase.
B#$$er adalah lar#tan yang terdiri dari &#ran asam ata# "asa lemah dan garamnya. p) lar#tan "#$$er dapat dihit#ng dengan persamaan )an dersn/)assel"al&h
p) * p9 7 lg
:er&"aan dialisis ini dilak#kan melal#i ! tahap8 yait#
A. :ENIA:AN 9AN'3NF DIALISIS
:rinsip kerja dari tahap ini adalah memtng mem"ran dialisis se"esar % &m8 kem#dian di"#ndel pada salah sat# #j#ngnya. Lal# mere"#s mem"ran dengan 2G ("C, natri#m "ikar"nat dan 1 mM ED'A (p) * +, selama = 1- menit. Saat pere"#san mem"ran dalam ED'A ini dihar#skan mengg#nakan lateks dan penjepit kay# karena si$at lar#tan ED'A yang karsingenik. Selanj#tnya mem"ilas mem"ran dengan ak#ades dan mere"#s mem"ran kem"ali dalam 1 mM ED'A selama 1- menit. 'erakhir mem"iarkan mem"ran dingin dan menyimpannya dalam lemari es #nt#k per&"aan selanj#tnya. Dari tahap ini didapat mem"ran dialisis yang siap pakai. 9em#dian lar#tan ED'A dalam per&"aan memiliki $#ngsi #nt#k mem"#ka pri/pri mem"ran dan mempreparasi mem"ran.
B. :EMBA'AN B>>EH
Ada 2 jenis "#$$er yang dig#nakan dalam per&"aan ini8 yait# "#$$er A dan "#$$er B. B#$$er A mer#pakan "#$$er asetat yang di"#at dari lar#tan )!33) 1M di&#r dengan
lar#tan )!33Na 1M dengan kmpsisi l#me yang "er"eda "eda. 9em#dian masing
masing dari lar#tan "#$$er terse"#t di#k#r p)nya mengg#nakan indikatr #niersal. Setelah it# mengam"il 2 tetes dari lar#tan "#$$er A terse"#t dan ditam"ah dengan 2 tetesetanl
Buffer A CH3COOH M !"#$ CH3COONa M !"#$ %H Se&e#a' ()&a"ba' a#*+'+# Per,+baa- Te+r) 1 15% % ! !8- Ba# menyengat8 "ening 2 1+% 1% ! !84 Ba# menyengat8 "ening ! 146 !4 ! 68- Ba# menyengat8 "ening
6 1-2 5+ % 684 Ba#asam8"ening
% %5 161 4 %8- Ba#0angi8 "ening
4 15 1+1 4 %84 Ba#0angi8 "ening
Sedangkan "#$$er B mer#pakan "#$$er phsphat yang di"#at dari &#ran lar#tan 9 2):36 1M dengan lar#tan 9)2:36 1M dengan kmpsisi l#me "er"eda/"eda kem#dian
masing/masing dari lar#tan "#$$er terse"#t di#k#r p)nya mengg#nakan indikatr #niersal. Setelah it#8 mengam"il 2 tetes dari lar#tan "#$$er B #nt#k di#ji dengan 2 tetes >eS36
Buffer B K HPO/ M !"#$ KHPO/ M !"#$ %H Se&e#a' ()&a"ba' FeSO/ Per,+baa- Te+r) 1 !8% 548% 4 %86 'idak "er"a#8 ker#h 2 +8% 518% 4 %8+ 'idak "er"a#8 ker#h ! 1582 +-8+ 4 482 'idak "er"a#8 ker#h 6 !+81 4185 4 484 'idak "er"a#8
ker#h
% 418% !+8% ; ;8- 2 lapisan8 ker#h
dan "ening
4 +484 1!86 + ;84 'idak "er"a#8 ker#h
)asil peng#k#ran p) per&"aan "aik pada "#$$er A ma#p#n "#$$er B men#nj#kkan adanya ketidakses#aian dengan teri. )al ini dim#ngkinkan pada per&"aan dig#nakan indikatr #niersal8 "#kan mengg#nakan p) meter sehingga p) yang di#k#r k#rang ak#rat. Nam#n se&ara k#alitati$8 p) per&"aan meningkat seiring dengan penam"ahan garam ses#ai dengan teri yang ada. B#$$er A dan "#$$er B yang di"#at dig#nakan #nt#k per&"aan selanj#tnya.
>#ngsi penam"aha alkhl adalah #nt#k #ji adanya "#$$er A sedangkan penam"ahan >eS36 adalah #nt#k #ji adanya "#$$er B
. :ENFFAN'IAN B>>EH DENFAN DIALISIS
:ada tahap ini8 prinsip dasarnya adalah mengganti "#$$er dalam mem"ran melal#i dialisis dengan "#$$er lain. Langkah kerja yang dilak#kan yait# dengan mengisis mem"ran dialisis dengan "#$$er B se"anyak % ml kem#dian men#t#p dengan di"#ndel (jangan sampai "&r,. Lal# memas#kkannya ke dalam gelas "eker "erisi "#$$er A8 men#t#pnya dan menyimpan dalam $ree<er selama !/6 hari. Setelah disimpan8 mem"ran dan "#$$er A di stirer selama 1 menit sampai hmgen. Lal# mengam"il 2 tetes lar#tan dalam mem"ran dan menetesinya dengan alkhl 2 tetes. )asilnya8 lar#tan dalam mem"ran setelah ditetesi alkhl adalah "ening dan "er"a# alkhl. )al ini men#nj#kkan "ah0a prses dialisis s#dah "erhasil dimana "#$$er B dalam mem"ran telah "erganti dengan "#$$er A di"#ktikan dengan
Selanj#tnya mem"ran di"#ndel lagi dan memas#kkannya ke dalam "#$$er B lal# menyimpannya lagi dalam $ree<er selama 1 hari. Setelah disimpan8 mem"ran dan "#$$er B di stirer selama 1 menit hingga hmgen. Lal# mengam"il 2 tetes lar#tan dalam mem"ran dan menetesinya dengan >eS36 2 tetes. )asilnya8 lar#tan dalam mem"ran setelah ditetesi >eS36
adalah ker#h dan tidak "er"a#. )al ini men#nj#kkan "ah0a prses dialisis telah "erhasil8 dimana "#$$er A dalam mem"ran telah "erganti dengan "#$$er B di"#ktikan dengan #ji >eS36 psiti$.
@. 9ESIM:LAN
1. Dialisis adalah salah sat# teknik pemisahan tert#a #nt#k preparasi sampel8 pem#rnian8 dan karakterisasi "imlek#l
2. B#$$er adalah s#at# lar#tan yang dapat mempertahankan p) ketika ditam"ahkan asam ma#p#n "asa ata# dilak#kan pengen&eran
!. :rinsip kerja dialisis adalah memisahkan mlek#l terlar#t "erdasarkan #k#ran mlek#l melal#i s#at# mem"rane "erpri
6. B#$$er yang dig#nakan dalam per&"aan adalah "#$$er asetat dan $s$at %. )asil peng#k#ran p)
4. Semakin "anyak l#me garam yang ditam"ahkan8 maka semakin tinggi nilai p)
;. :enam"ahan etanl "er$#ngsi #nt#k #ji adanya "#$$er A dengan ditandai adanya "a# sedangkan penam"ahan >eS36 "er$#ngsi #nt#k #ji adanya
"#$$er yang ditandai adanya keker#han
B#$$er B p) 1 4 2 4 ! 4 6 4 % ; 4 +
