ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSISEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Dari Fraksi Semipolar Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih (Artocarpus altilis Park) Serta Efek Sitotoksiknya terhadap Sel HeLa.

i

ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI

SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG

KLUWIH (Artocarpus altilis

Park) SERTA EFEK

SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa

SKRIPSI

Oleh :

KURNIA ANTIK APSARI K 100 030 065

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI

SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG

KLUWIH (Artocarpus altilis

Park) SERTA EFEK

SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta

Oleh:

KURNIA ANTIK APSARI K 100 030 065

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

iii

PENGESAHAAN SKRIPSI

Berjudul :

ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI

SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG

KLUWIH (Artocarpus altilis

Park) SERTA EFEK

SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa

Oleh :

KURNIA ANTIK APSARI K 100 030 065

Dipertahankan dihadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta

Pada tanggal : 2 Juli 2007

Mengetahui, Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta Dekan,

Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt

Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping

( Dr. Muhtadi, M.Si) (Peni Indrayudha, S.F., Apt)

Penguji :

1. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.

2. Indah Purwantini, M.Si., Apt

3. Dr. Muhtadi, M.Si

M O TTO DA N PERSEM BA H A N

ϖ _{“Jadikanlah engkau sum ber tam bang kebaikan dan m aafkan}

segala kesalahan yang m enyakitkan, sesungguhnya engkau dapat

m elihat apa yang engkau lakukan dan dapat m endengar apa yang engkau ucapkan” (abu Ishaq as S abi’i)

ϖ _{“Yaitu orang-orang yang berim an dan hati m ereka m enjadi}

tentram dengan m engingat A llah. Ingatlah, hanya dengan

m engingat A llah-lah hatim enjaditentram ” (Q S .A r Ra’d :28)

ϖ _{“H idup adalah perjuangan tanpa henti-henti tak ada yang jatuh}

dari langit dengan cum a-Cum a, sem ua usaha dan doa serta

kem enangan hari ini bukanlah kem enangan esok hari, kegagalan hari inibukanlah kegagalan esok hari”(KhalilGibran )

Ya Alloh, Karya kecilku ini kupersembahkan kepada-Mu Semoga Engkau terima sebagai amal sholih Hingga setiap kemudahan menambah kesyukuran Dan setiap kesukaran menjadi penghapus dosa

Kepada Ibuku yang sudah jauh dariku

Terima kasih atas do’a, cinta serta

curahan kasih sayangnya

Untuk Bapak dan mama T erima kasih telah memberikan semua yang terbaik untukku memberikan do’a disetiap hembusan nafasku dan telah membanting tulang untuk menghidupi dan mendidik putra-putrinya

Buatadikku Astidan kakakku tersayang, Terim akasih atas dukungan,do’a,m otivasinya.

Buat teman-teman dan sahabat-sahabatku Dimanapun engkau berada yang telah memberikan Aku keceriaan dimanapun aku berada.

v

DEKLARASI

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang dipublikasikan atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima sebagai persyaratan penyelesaian studi pada Universitas lain, kecuali pada bagian-bagian tertentu yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik secara akademik maupun hukum.

Surakarta, Juli 2007 Penulis

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan hidayah-Nya bagi kita semua dan senantiasa memberikan petunjuk dan kekuatan sehingga penulisan skripsi dengan judul ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa dapat terselesaikan dengan baik.

Selesainya skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan banyak pihak, pada kesempatan ini dengan kerendahan hati dan penghargaan yang tulus, penulis mengucapkan banyak terima kasih sebesar-besarnya kepada:

1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta yang telah bersedia meluangkan waktu, tenaga dan pikiran.

2. Drs. Muhtadi, M.Si selaku dosen Pembimbing I yang telah meluangkan waktu untuk memberikan petunjuk, bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat penulis butuhkan.

3. Peni Indrayudha, S.F., Apt selaku Dosen Pembimbing II yang telah bersedia memberikan bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat penulis butuhkan sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik.

vii

5. Indah Purwantini, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji II yang telah bersedia meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji skripsi ini.

6. Team skripsi Uswatun, Rika, Salasiah, Karin terimakasih atas kebersamaannya.

7. Buat semua keluargaku yang aku sayangi terima kasih atas curahan cinta dan kasih sayangnya, nasehat yang diberikan, serta doa dan bantuannya.

8. Buat Fajar terimakasih atas motivasi, bantuan, doa dan dukungannya yang telah diberikan.

9. Anak-anak Nawiyuma : Mbak Eva, Mbak Rini, Ariva, Ika, Dewi, Dede, Vita, Ulil, aMy, Widhy, Ina terimakasih atas dukungan dan kebersamaannya. 10. Buat Haphe yang setia menemaniku, terima kasih atas bantuan, do’a, serta

waktu yang telah diberikan.

11. Mbak Santi, Fitria, Dewi, Ita, Nurma, Hafid, Erna, Iphe, Fani, Yuni, Inayah, Novi, Dian, Ery terimakasih atas motivasi dan bantuannya.

12. Pak Bayu, pak Toni, pak Rahmat,pak Man dan mbak Atin terimakasih atas bantuannya hingga terselesainya skripsi ini.

13. Kepada pihak-pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah banyak membantu hingga terselesainya skripsi ini.

Penulis menyadari skripsi ini tidak lepas dari kekurangan dan jauh dari kesempurnaan. Walaupun demikian, penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi perkembangan dan kemajuan ilmu Farmasi.

Surakarta , Juli 2007

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL DEPAN ...i

HALAMAN SAMPUL DALAM ...ii

HALAMAN PENGESAHAN ...iii

HALAMAN MOTTO DAN PERSEMBAHAN ... iv

HALAMAN DEKLARASI ... v

KATA PENGANTAR ...vi

DAFTAR ISI ...viii

DAFTAR GAMBAR ...xi

DAFTAR TABEL...xiii

DAFTAR LAMPIRAN ... xiv

DAFTAR SINGKATAN... xv

INTISARI ... xvi BAB I. PENDAHULUAN ...Error! Bookmark not defined.

A. Latar Belakang Masalah...Error! Bookmark not defined.

B. Perumusan Masalah ...Error! Bookmark not defined.

C. Tujuan Penelitian ...Error! Bookmark not defined.

D. Tinjauan Pustaka...Error! Bookmark not defined.

1. Artocarpus altilisPark ...Error! Bookmark not defined.

2. Uraian Flavonoid ...Error! Bookmark not defined.

3. Metode Ekstraksi ...Error! Bookmark not defined.

4. Kromatografi Lapis Tipis ...Error! Bookmark not defined.

ix

6. Kanker ...Error! Bookmark not defined.

7. KankerCervix...Error! Bookmark not defined.

8. Sel HeLa ...Error! Bookmark not defined.

9. Uji Sitotoksik ...Error! Bookmark not defined.

10. Spektrofotometri Ultraviolet...Error! Bookmark not defined.

11. Spektrofotometri Infra merah ...Error! Bookmark not defined.

E. Keterangan Empiris ... 24 BAB II. METODE PENELITIAN...Error! Bookmark not defined._Toc170696933 A. Jenis Penelitian ...Error! Bookmark not defined.

B. Variabel penelitian ...Error! Bookmark not defined.

C. Bahan dan alat...Error! Bookmark not defined.

D. Jalannya Penelitian...Error! Bookmark not defined.

E. Cara Analisis ...Error! Bookmark not defined.

BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN...Error! Bookmark not defined.

A. Determinasi TanamanArtocarpus altilisParkError! Bookmark not defined.

B. Pengumpulan, pengeringan, dan pembuatan serbukError! Bookmark not defined.

C. Ekstraksi ...Error! Bookmark not defined.

D. Fraksinasi dan Isolasi ...Error! Bookmark not defined.

D. Uji Sitotoksik dengan Metode MTTAssayError! Bookmark not defined.

E. Kromatografi Lapis Tipis...Error! Bookmark not defined.

F. Spektrofotometri IR ...Error! Bookmark not defined.

A. Kesimpulan...Error! Bookmark not defined.

B. Saran...Error! Bookmark not defined.

DAFTAR PUSTAKA ...Error! Bookmark not defined.

xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Kerangka dasar flavonoid beserta penomorannya (Markham, 1988).Error! Bookmark not d

Gambar 2. Diagram spektrometer (Sastrohamidjojo, 1991).Error! Bookmark not defined.

Gambar 3. Skema fraksinasi dan isolasi ekstrak metanol kulit batang kluwihError! Bookmark not defin

Gambar 4. Skema uji sitotoksik hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 5. Profil kromatogram hasil KCV 1 dengan fase gerak n-heksana:etilasetat (7:3) ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 6. Profil kromatogram hasil KCV 2 dengan Fase Gerak kloroform:metanol (9,5:0,5)...Error! Bookmark not defined.

Gambar 7. Profil Kromatogram fraksi no.1–20 dengan fase gerak kloroform:etilasetat (9:1) ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 8. Profil Kromatogram fraksi no.20–45 dengan fase gerak kloroform:etilasetat (9:1) ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 9. Profil Kromatogram fraksi no.45–71 dengan fase gerak kloroform:etilasetat (9:1) ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 10. Profil kromatogram untuk mengecek kemurnian: (A) dengan fase gerak kloroform:etilasetat (9:1), (B) dengan fase gerak heksana:etilasetat (2:8), dan (C) dengan fase gerak kloroform:metanol (9:1)...Error! Bookmark not defined.

Gambar 11. Kristal Formazan ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 13. Sel HeLa sebelum diberi perlakuan dan sel HeLa setelah diberi perlakuanError! Bookmark

Gambar 14. Grafik regresi antara konsentrasi vs persen sel hidupError! Bookmark not defined.

Gambar 15. Grafik regresi antara log konsentrasi vs nilai probitError! Bookmark not defined.

Gambar 16. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang kluwih ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 17. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang kluwih ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 18. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang kluwih ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 19. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang kluwih ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 20. Hasil Spektrofotometri IR ...Error! Bookmark not defined.

Gambar 21. Grafik spektra UV dan tabel yang menyatakan panjang gelombang dan absorbansi. ...Error! Bookmark not defined.

xiii

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Daftar bilangan gelombang dari berbagai jenis ikatan .Error! Bookmark not defined.

Tabel 2. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 1 isolat fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan fase gerak n-heksana-etilasetat (7:3) ...Error! Bookmark not defined.

Tabel 3. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 2 isolat fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batng kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan fase gerak kloroform-etilasetat (9,5:0,5)...Error! Bookmark not defined.

Tabel 4. Pengaruh Berbagai Konsentrasi DMSO terhadap % sel Hidup sel HeLa ...Error! Bookmark not defined.

Tabel 5. Hasil Uji Sitotoksik Isolat Fraksi semipolar Ekstrak Metanol kulit batang kluwih (Artocarpus altilisPark) terhadap sel HeLa dengan metode MTT.

...Error! Bookmark not defined.

Tabel 6. Data Konsentrasi dan Probit Akibat Pemberian Isolat Fraksi semipolar Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih pada Sel HeLa dengan Metode MTT ...Error! Bookmark not defined.

Tabel 7. Hasil analisis KLT dibawah sinar UV254 dan UV366....Error! Bookmark not defined.

Tabel 9. Hasil Analisis KLT dengan Pereaksi semprot Dragendorff ...Error! Bookmark not defined.

Tabel 10. Hasil analisis KLT dengan Pereaksi semprot Lieberman Burchard ...Error! Bookmark not defined.

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi. ...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 2. Gambar Tanaman Kluwih...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 3. Alat ELISA reader...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 4. Alat Kromatografi Cair Vakum (KCV)...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 5. Alat Kromatografi Kolom Tekan (KKT)...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 6. Perhitungan Kepadatan Stock sel HeLa. ...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 7. Data Absorbansi sel HeLa dengan Metode MTT assay. ...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 8. Data Uji Sitotoksisitas terhadap sel HeLa ...Error! Bookmark not defined.

Lampiran 9. Perhitungan IC50...Error! Bookmark not defined.

DAFTAR SINGKATAN

DMSO :Dimethil Sulfokside

DNA :Deoxyribo Nucleic Acid

ELISA :Enzim Linked Immunosorbent Assay

FBS :Fetal Bovine Serum

HPV :Human Papilloma Virus

IC :Inhibitory Concentration

MTT : (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)

PBS :Phospat Buffer Saline

RPMI :Rosewell Park Memorial Institute

SDS :Sodium Dodecyl Sulphat

xvii

INTISARI

Kanker merupakan salah satu penyakit penyebab kematian utama di dunia, sedangkan kanker cervix masih menempati urutan pertama penyakit yang paling banyak menyerang wanita di Indonesia. Oleh karena itu dilakukan penelitian dengan tujuan untuk mengetahui senyawa hasil isolasi fraksi semipolar dari ekstrak metanol kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park) yang berefek sitotoksik terhadap sel HeLa.

Preparasi ekstrak dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut metanol dan dilanjutkan dengan fraksinasi menggunakan kromatografi cair vakum. Hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park) diuji efek sitotoksiknya terhadap sel HeLa dengan metode MTT dengan konsentrasi 0,78ì g/ml; 1,56ì g/ml; 3,12ì g/ml; 6,25ì g/ml; 12,50 ì g/ml. Kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dibaca absorbansinya dengan ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Kemudian deteksi senyawa dalam isolat dilakukan dengan analisis KLT, pembacaan spektrofotometri UV, dan spektrofotometri IR.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HeLa dengan IC50 sebesar 19,24 ì g/ml. Berdasar hasil analisis KLT, spektrum UV dan spektrum IR menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih mengandung senyawa flavonoid yang khas untuk golongan flavanon yang berefek sitotoksik terhadap sel HeLa.