ABSTRAK
EFEK SARI KUKUSAN BROKOLI (Brassica oleracea L. var italica) TERHADAP EKSPRESI SIKLOOKSIGENASE-2 (COX-2) PADA MENCIT
GALUR BALB/c MODEL KANKER KOLOREKTAL
Chesny Stevani Ardento,2016.
Pembimbing I : Teresa L. Wargasetia, Dr., S.Si.,M.Kes., PA(K)) Pembimbing II : Jeanny Ervie Ladi, M.Kes, dr.,PA.
Latar Belakang Kanker kolorektal merupakan keganasan pada kolon dan rektum yang dapat disebabkan komplikasi jangka panjang pada inflammatory bowel disease (IBD). Penghambatan COX-2 diduga merupakan mekanisme yang penting dalam menghambat progresi IBD dan kanker kolorektal. Brokoli (Brassica oleracea L. var italica) adalah sayuran yang memiliki kandungan antioksidan, antiinflamasi, dan antikanker yang tinggi.
Tujuan Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek sari kukusan brokoli terhadap penurunan ekspresi COX-2 pada mencit model kanker kolorektal.
Metode Desain penelitian ini adalah eksperimental sungguhan dengan rancangan acak lengkap. Penelitian ini menggunakan 4 kelompok (n=7) mencit galur Balb/c jantan. Kelompok kontrol negatif diberi akuades, kelompok kontrol brokoli diberi brokoli, kelompok AOM+DSS diberi AOM dan DSS, dan kelompok perlakuan brokoli diberi AOM, DSS, dan brokoli. Semua mencit dikorbankan pada akhir penelitian yaitu hari ke-69 untuk dideteksi ekspresi COX-2 pada masing-masing kolon mencit dengan metode RT-PCR. Analisis data menggunakan ANAVA satu arah, dilanjutkan Tukey HSD dengan α=0,05.
Hasil Penelitian menunjukkan bahwa kelompok perlakuan brokoli memiliki rerata ekspresi COX-2 yang lebih rendah secara bermakna dibandingkan kelompok AOM +DSS (p=0,001). Tidak ada perbedaan ekspresi COX-2 yang bermakna antara kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol brokoli, dan kelompok perlakuan brokoli (p>0,005).
Simpulan Sari kukusan brokoli dapat menurunkan ekspresi COX-2 pada kolon mencit model kanker kolorektal.
Kata Kunci : inflammatory Bowel Disease, kanker kolorektal, COX-2, brokoli
ABSTRACT
THE EFFECT OF STEAMED BROCCOLI’S (Brassica oleracea L. var italica) ESSENCE TOWARDS CYCLOOXYGENASE-2 (COX-2) EXPRESSION IN
COLORECTAL CANCER BALB/c MICE MODEL
Chesny Stevani Ardento, 2016.
1st supervisor : Teresa L. Wargasetia, Dr., S.Si., M.Kes., PA(K)) 2nd supervisor : Jeanny Ervie Ladi, M.Kes,dr., PA.
Background Colorectal cancer is a malignancy in colon and rectum which can be caused by a long term complication of inflammatory bowel disease (IBD). Inhibition of cyclooxygenase-2 (COX-2) is assumed to be an important mechanism in inhibit IBD and colorectal cancer progression. Broccoli (Brassica oleracea L. var italica) is a vegetable which contains large amount of antioxidant, anti-inflammatory and anticancer.
Objective This research was conducted to study the effect of steamed broccoli’s essence towards COX-2 expression in colorectal cancer mice model.
Methods The design of this research was a real experimental research with a completely randomized design. This research used four groups (n=7) Balb/c male mice. The negative control group was given aquadest, broccoli control group was given broccoli, AOM+DSS group was given AOM and DSS, and broccoli treatment group was given AOM, DSS, and broccoli. At the end of experiment (D-69), all mice were humanly sacrificed and their COX-2 expression in colons were detected using RT-PCR method. Analysis data using one-way ANOVA, followed by Tukey HSD with α = 0.05.
Results The research showed that average of COX-2 expression of brocoli treatment group was significantly lower than AOM + DSS group (p=0,001). There is no significant difference of COX-2 expression between negative control group, broccoli control group, and broccoli treatment group (p>0.005).
Conclusion Steamed broccoli’s essence can decrease COX-2 expression in colorectal cancer mice model.
Keywords: inflammatory bowel disease, Colorectal Cancer, COX-2, Broccoli
DAFTAR ISI
1.2Identifikasi Masalah ... 2
1.3Maksud dan Tujuan Penelitian ... 3
1.4Manfaat Penelitian ... 3
1.5Kerangka Pemikiran dan Hipotesis Penelitian ... 3
1.5.1 Kerangka Pemikiran ... 3
1.5.2 Hipotesis Penelitian ... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1Kolon ... 6
2.1.1 Anatomi Kolon ... 6
2.1.2 Histologi Kolon ... 7
2.2Inflammatory Bowel Disease ... 8
2.3Colitis-associated Cancer (CAC) ... 9
2.4Inflamasi dan Kanker... ... .... 10
2.5Siklooksigenase-2 (COX-2) terhadap kanker kolorektal ... 11
2.6Model Hewan Kanker Kolorektal ... 12
2.7Brokoli ... 13
BAB III BAHAN DAN METODE PENELITIAN 3.1Alat dan Bahan / Subjek Penelitian ... 16
3.1.1 Alat dan Bahan ... 16
3.1.2 Subjek Penelitian ... 17
3.1.3 Tempat dan Waktu Penelitian ... 17
3.2Metode Penelitian ... 17
3.2.1 Desain Penelitian ... 17
3.2.2 Variabel Penelitian ... 18
3.2.2.1 Definisi Konsepsional Variabel ... 18
3.2.2.2 Definisi Operasional Variabel ... 18
3.2.3 Perhitungan Besar Sampel ... 19
3.2.4 Prosedur Kerja ... 20
3.2.4.1 Pengumpulan Bahan... 20
3.2.4.2 Persiapan Bahan Uji ... 20
3.2.4.3 Persiapan Hewan Coba ... 20
3.2.4.4 Sterilisasi Alat ... 21
3.2.4.5 Pelaksanaan Penelitian ... 21
3.2.5 Cara Pemeriksaan ... 23
3.2.5.1 Isolasi RNA ... 23
3.2.5.2 Pembuatan cDNA... 24
3.2.5.3 Amplifikasi Gen COX-2 dan HPRT ... 24
3.2.6 Metode Analisis ... 26
3.2.6.1 Hipotesis Statistik ... 26
3.2.6.2 Kriteria Uji ... 27
3.2.7 Aspek Etik ... 27
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian ... 28
4.1.1 Ekspresi COX-2 Kolon Mencit ... 28
4.1.2 Analisis Statistik ... 30
4.2 Pembahasan ... 32
4.3 Uji Hipotesis ... 34
BAB V SIMPULAN DAN SARAN 5.1 Simpulan ... 35
5.2 Saran ... 35
DAFTAR PUSTAKA ... 36
LAMPIRAN ... 39
RIWAYAT HIDUP ... 46
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Taksonomi Brokoli (Brassica oleracea L. var Italica) ... 15
Tabel 4.1 Persentase Ekspresi COX-2 Kolon ... 29
Tabel 4.2 Hasil Uji ANAVA Ekspresi COX-2 ... 30
Tabel 4.3 Hasil Uji Beda Rerata Tukey HSD ... 31
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.1 Skema Kerangka Pemikiran ... 5
Gambar 2.1 Anatomi Kolom ... 6
Gambar 2.2 Histologi Kolon ... 7
Gambar 2.3 Perbedaan CD dan UC ... 8
Gambar 2.4 Colitis Associated Colon Cancer ... 9
Gambar 2.5 Tahapan Inflamasi terhadap Kanker Kolorektal ... 11
Gambar 2.6 Hubungan COX-2 terhadap Karsinogenesis ... 12
Gambar 2.7 Brokoli (Brassica oleracea L. var italica) ... 13
Gambar 2.8 Peran Sulforaphane terhadap COX-2 ... 15
Gambar 4.1 Gambar Elektroforesis Ekspresi COX-2 dan HPRT... ... 28
Gambar 4.2 Grafik Rerata Persentase Ekspresi COX-2 ... 32
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Dokumentasi ... 39
Lampiran 2. Perhitungan Dosis ... 41
Lampiran 3. Hasil Pengukuran Ekspresi COX-2 dan HPRT ... 42
Lampiran 4. Hasil Analisis Rerata Ekspresi COX-2 ANAVA ... 43
Lampiran 5. Hasil Analisis Rerata Ekspresi COX-2 Tukey HSD ... 44
Lampiran 6. Surat Keputusan Komisi ETIK Penelitian ... 45
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1Latar Belakang Penelitian
Kanker kolorektal adalah suatu penyakit yang mana sel-sel pada kolon atau
rektum menjadi abnormal dan membelah tanpa terkontrol membentuk sebuah
massa tumor. Kanker kolorektal merupakan keganasan terbanyak ketiga dan
penyebab kematian akibat kanker terbanyak keempat di dunia. Di Indonesia
jumlah pasien kanker kolorektal menempati urutan ke-9. Penyebab kanker
kolorektal adalah interaksi antara faktor lingkungan seperti gaya hidup dan faktor
genetik. Sekitar 70–75% kanker kolorektal terletak pada daerah rektosigmoid.
Insidensi puncak untuk kanker kolorektal adalah usia 60 hingga 70 tahun. Kurang
dari 20% kasus terjadi pada usia kurang dari 40 tahun, dan bila ditemukan pada
usia muda perlu dicurigai adanya sindrom poliposis, atau kolitis ulseratif, suatu
kondisi inflamasi kronis pada traktus gastrointestinal. (Tatuhey et al., 2012)
Inflammatory Bowel Disease (IBD) merupakan suatu kondisi inflamasi kronis
pada traktus gastrointestinalis. Terdapat dua penyakit yang dikenal sebagai
inflamasi pada usus yaitu Chron’s Disease dan ulcerative colitis (UC). Kedua
penyakit ini mempunyai kesamaan, tetapi memperlihatkan gejala klinik yang
berbeda. Baik CD maupun UC adalah inflamasi kronis berulang yang idiopatik.
CD adalah penyakit autoimun yang mengenai setiap bagian saluran cerna dari
esofagus sampai anus, tetapi paling sering usus halus bagian distal dan kolon,
sedangkan UC adalah penyakit peradangan kronis yang terbatas pada kolon dan
rektum (Kumar et al, 2005; Rowe et al., 2011). IBD merupakan suatu kondisi
inflamasi kronis yang disebabkan oleh kerentanan genetik, peran flora usus,
meningkatnya rekruitmen dan retensi efektor, neutrofil, dan respon sel T pada
saluran cerna sehingga mengativasi sitokin-sitokin proinflamasi yang dapat
meningkatkan risiko timbulnya kanker kolorektal (Kumar et al, 2010)
Inflamasi kronis juga dapat mengaktivasi NF-κB yang merupakan jalur yang
umum untuk aktivasi dan produksi dari berbagai mediator termasuk sitokin dan
2
kemokin. NF-κB juga memodulasi resistensi terhadap kematian sel terprogram
(apoptosis). Mediator-mediator yang mengaktivasi jalur ini adalah sitokin
proinflamasi seperti Tumor necrosis factor alpha (TNF-α), Siklooksigenase-2
(COX-2), interleukin-6 (IL-6) dan produk mikroba seperti lipopolisakarida (LPS)
(Mueller et al., 2013). Pada kanker kolorektal ternyata COX-2 meningkat dan
(Greenhough et al.,2009).
Siklooksigenase-2 (COX-2) adalah enzim yang berperan dalam mengubah
asam arakhidonat menjadi prostaglandin. Produk akhir dari COX-2 inilah yang
berkonstribusi terhadap berbagai faktor biologis dalam memicu pertumbuhan
tumor. COX-2 juga berperan sebagai immunosuppressan yang menyebabkan
penurunan aktivitas sitotoksik, COX-2 juga menghambat terjadinya apoptosis,
serta meningkatkan aktivitas dari matrix metalloproteinases (MMPs) sehingga
resiko tumorigenesis meningkat dan menyebabkan invasi serta metastasis tumor
(Nilanjan Ghosh, 2010).
Brassica oleracea var. italica (brokoli) merupakan salah satu tanaman yang
mudah didapat di Indonesia dengan harga relatif terjangkau. Brokoli termasuk ke
dalam famili brassicaceae yang mengandung sulforaphane, flavonoid, vitamin
dan mineral dalam kadar tinggi yang dapat digunakan sebagai antioksidan,
antimikroba, anti-inflamasi, serta anti kanker (Hwang & Lim, 2014; McCance,
2010; Mueller et al., 2013; Owis 2015). Sulforaphane yang terdapat pada
Brassica oleracea dapat digunakan sebagai anti inflamasi dan anti kanker dengan
menekan ekspresi cyclooxygenase-2 (COX-2) serta TNF-α (Hwang & Lim, 2014).
Berdasarkan hal-hal di atas perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui
peranan brokoli terhadap ekspresi COX-2 pada mencit yang diinduksi kanker
kolorektal dengan AOM dan DSS.
1.2Identifikasi Masalah
Apakah sari kukusan brokoli (Brassica oleracea L. var italica) dapat
menurunkan ekspresi COX-2 pada mencit galur Balb/c model kanker kolorektal.
3
1.3Maksud dan Tujuan Penelitian
Maksud penelitian adalah untuk mengetahui pengaruh penghambatan kukusan
sari brokoli (Brassica oleracea L. var italica) terhadap perkembangan kanker
pada mencit kanker kolorektal.
Tujuan penelitian adalah untuk mengukur dan menilai peranan brokoli
(Brassica olearacea L. var italica) dalam menurunkan ekspresi COX-2 pada
mencit model kanker kolorektal dengan menggunakan RT-PCR.
1.4Manfaat Karya Tulis Ilmiah
Manfaat akademis adalah memperluas wawasan dan pengetahuan dalam
bidang farmakologi yaitu pengaruh brokoli (Brassica oleracea L. var italica)
terhadap penurunan ekspresi COX-2 pada mencit model kanker kolorektal.
Manfaat praktis adalah memberikan informasi mengenai manfaat brokoli
terhadap penyakit kanker kolorektal sebagai preventif.
1.5Kerangka Pemikiran dan Hipotesis
1.5.1 Kerangka Pemikiran
Kanker kolorektal adalah suatu penyakit yang mana sel-sel pada kolon atau
rektum menjadi abnormal dan membelah tanpa terkontrol membentuk sebuah
massa tumor. Kanker kolorektal merupakan keganasaan yang menduduki
peringkat ke-9 di Indonesia. (Tatuhey et al., 2012).
Inflammatory bowel disease merupakan inflamasi kronis pada traktus
gastrointestinalis, terdapat dua penyakit UC maupun CD yang dapat
meningkatkan risiko kanker kolorektal, inflamasi kronis yang terjadi pada kolon
dan rektum dapat memicu aktivasi NF-κB yang akan melepaskan sitokin
proinflamasi seperti TNF-α, COX-2, IL-6, dan produk mikroba seperti
4
lipopolisakarida (LPS). Pada kanker kolorektal terdapat peningkatan ekspresi
COX-2. (Kumar et al, 2010; Mueller et al., 2013).
COX-2 merupakan enzim yang membantu asam arakidonat menjadi
prostaglandin yang penting dalam perkembangan tumor
Berbagai penelitian mengenai kanker, menginduksi mencit menggunakan
AOM dan DSS sehingga timbul beberapa efek secara histologis seperti displasia,
polip, adenoma, dan adenocarcinoma. Mencit galur Balb/c merupakan mencit
yang paling sensitif untuk model kanker kolorektal dibandingkan mencit galur
c3G/He dan DBA/2 (Tanaka, 2012).
Pada penelitian terhadap mencit yang diinduksi kanker dengan AOM dan DSS,
didapatkan bahwa ekspresi gen COX-2 meningkat; diketahui pula bahwa
pemberian OAINS akan menyebabkan penurunan ekspresi COX-2 (Popivanova
et al., 2008; Greenhough et al., 2009).
Brokoli merupakan tanaman yang memiliki banyak kegunaan dari banyaknya
aktivitas yang dihasilkannya. Brokoli memiliki aktivitas antioksidan, antibakteri,
antihelmintik, antikanker, anti nyeri, antiinflamasi, uterorelaksan, hepatoprotektif,
kardioprotektif, gastroprotektif dan imunomodulator. Dari berbagai zat yang
terkandung dalam brokoli, Sulforaphane merupakan zat dalam famili
Brassicaceae yang paling sering diteliti. Sulforaphane diketahui memiliki
aktivitas antioksidan , anti-inflamasi, antibakterial, antifungal dan juga antikanker.
Sulforaphane akan mengaktivasi Nrf-2 yang dapat menghambat aktivasi NF-kB
sehingga dapat menekan ekspresi COX-2. (Lin et al., 2008; Stewart &
McDougall, 2012; Hwang & Lim, 2014; Dhiman et al., 2015; Owis, 2015).
Brokoli yang diberikan dalam bentuk brokoli kukus. Pengukusan merupakan
proses pengolahan yang paling baik karena tidak banyak menyebabkan perubahan
terhadap kandungan zat gizi dan antioksidan. Selain itu pemasakan secara dikukus
menunjukkan kandungan antioksidan yang lebih tinggi. Aktivitas antioksidan
brokoli mentah adalah 1,1 mmol Trolox/100 gram, sedangkan brokoli kukus 3,51
mmol Trolox/100gram. Pengukusan menyebabkan penghancuran dinding sel dan
pelepasan antioksidan dari kompleks protein yang terdapat dalam matriks
5
tanaman sehingga antioksidan pada brokoli kukus lebih tinggi dibandingkan
brokoli mentah (Anna Pods, 2005; Monika et al., 2011).
1.5.2 Hipotesis Penelitian
Sari kukusan brokoli (Brassica oleracea L. var italica) menurunkan ekspresi COX-2 mencit galur Balb/c model kanker kolorektal.
Kanker kolorektal
DSS+ AOM
Inflamasi pada mukosa colon
NF-B
COX-2
IBD Glucoraphanin pada
Sulforaphane
Nrf2
Enzim antioksidan
Myrosinase
Gambar 1.1 Skema Kerangka Pemikiran Penelitian
35 BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Dari hasil penelitian ini maka dapat disimpulkan bahwa pemberian kukusan
sari brokoli dapat menurunkan ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2) pada kolon
mencit model kanker kolorektal.
5.2 Saran
Untuk penelitian selanjutnya perlu diketahui mengenai mekanisme NF-kB dengan menggunakan sari kukusan brokoli pada mencit model kanker kolorektal.
EFEK SARI KUKUSAN BROKOLI (
Brassica oleracea L. var
italica
) TERHADAP EKSPRESI SIKLOOKSIGENASE-2
(COX-2) PADA MENCIT GALUR BALB/c
MODEL KANKER KOLOREKTAL
KARYA TULIS ILMIAH
Karya Tulis Ini Dibuat Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
CHESNY STEVANI ARDENTO
1310224
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS KRISTEN MARANATHA
BANDUNG
vi
KATA PENGANTAR
Puji Syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas kasih karunia-Nya untuk penelitian dan penulisan karya tulis ilmiah ini dapat terselesaikan dengan baik. Karya tulis ini dibuat sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran di Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Maranatha, Bandung.
Pada kesempatan ini saya ingin menyampaikan rasa terima kasih sebesar –
besarnya kepada banyak pihak yang telah membantu dan memberi dukungan kepada saya dalam menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini, khususnya kepada :
1. Teresa L. Wargasetia, Dr., S.Si., M.Kes., PA (K), selaku pembimbing utama dan pembimbing pendamping yang sabar, penuh pengertian dalam membimbing penelitian dan penulisan karya tulis ini. Terima kasih atas waktu dan tenaga yang diberikan serta kesabarannya dalam membimbing saya untuk menyelesaikan penelitian dan seluruh karya tulis ilmiah ini. 2. dr. Jeanny Ervie Ladi, M.Kes., PA selaku pembimbing pendamping yang
sabar, dalam membimbing penelitian dan penulisan karya tulis ini. Terima kasih atas waktu dan tenaga yang diberikan serta kesabarannya dalam membimbing saya untuk menyelesaikan karya tulis ilmiah ini.
3. dr. Khie Khiong, S.Si., M.Si., M.Pharm. Sc.Ph.D.,PA(K) Terima kasih atas waktu dan tenaga serta nasehat dan kesabaran yang beliau berikan selama membimbing saya dari awal penelitian hingga selesai.
4. Teman-teman yang ikut kerja sama dan membantu penelitian ini dari awal hingga selesai : Ni Putu Jiesthisia, Claudia Tamara Gunawan, dan Magdalena Devi.
5. Bapak Wasto, selaku staf lab Biologi yang selalu membantu saya dan
memberi nasihat kepada saya dari awal penelitian hingga akhir.
vii
7. Ketiga kakak saya, Dennis Ardento,Mario Ardento, dan Malvin Ardento yang selalu memberikan semangat dan nasehat kepada saya untuk selalu semangat belajar.
8. Sahabat-sahabat yang telah membantu saya dari awal masuk FK hingga penelitian ini selesai Susanty Gazali, Vilia Ruthy, Karina Larasati, Chriszencia Siswanto, Ayunda Prameswari, Utin Dewi, Shinta Koastin, Emanuella Tamara, Estheresia, Veronica Shinta, Astriani Silaban, dan Shely Fitrika terima kasih untuk doa dan kepercayaan sampai hari ini.
Akhir kata saya berharap Karya Tulis Ilmiah ini dapat bermanfaat bagi pihak-pihak yang membutuhkan baik pembaca, peneliti, penulis, fakultas dan khususnya perkembangan ilmu kedokteran.
Bandung, November 2016
36
DAFTAR PUSTAKA
American Cancer Society. 2011. Colorectal cancer facts and figures. 2011-2013. Atlanta:ACS.
Anna P. 2005. Natural antioxidants capacity of Brassica vegetables. Institute of Technical Biochemistry, Faculty of Biotechnology adn Food Science,
Technical University of Lod’dz. LWT 40 (2007):1-11. Doi :10.1016/j.lwt.
2005.07.023.
Dhiman I., Prashar Y., Kalia K., Gill N.S. Therapeutic and nutritional value Of Brassica oleracea L. var. italica (broccoli): a review. International Journal of Universal Pharmacy and Bio Sciences, 2015; 4(4):22-33.
Drake R., Wayne A., Adam W. Gray’s Basic Anatomy, 2014. Elsevier Sergei
L.G., Greten F.R., Karin M. 2010. Immunity, Inflamation, and cancer. Cell.140: 883-899.
Eroschenko V.P. diFiore Atlas Of Histology with Functional Correlation,11th
Ed. 2008. Lippincott Williams & Wilkins/Wolters Kluwer Healt Inc., USA.
Gandamihardja S., Wirakusumah F. F., Shabib N., Sastramiharadja S. H., Aziz F. 2010. Peran Sikooksigenase dalam Pertumbuhan Kanker. 42(4) : 169-74.
Goldfard M. 2012. Analysis of casein using two-dimensional electrophoresis, Western blot, and computer imaging. Adv Exp Med Biol 501: 535-539.
Gommeaux J., Cano C., Garcia S., Gironella M., Pietri S., Culscasi M. et al.2007. Colitis and colitis-associated cancer are exacerbated in mice deficiency for tumor protein 53- induced nuclear protein 1. Mol,Cell Biol. 27 (6):2215-28.
Guerrero-Beltrán C. E., Mukhopadhyay P., Horváth B., Rajesh M., Tapia E., García T. I., Pedraza-Chaverri J., Pacher P. Sulforaphane, a natural constituent of broccoli, prevents cell death and inflammation in nephropathy.
Biochem. 2012; 23(5): 494–500.
Haggar F.A., Boushey R. P. 2009. Colorectal Cancer ,Epydemiology: Incidence,
Mortality, Survival, and Risk Factors. Clin Colon Rectal Surgery. 22:191–7.
37
Hwang J. H., Lim S. B. Antioxidant and anti-inflammatory activities of broccoli florets in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Prev. Nutr. Food Sci. 2014;19(2):89-97.
Iniquez M. A., Rodriguez A., Volpert O. V., Fresno M., Redondo J. M. Cyclooxygenase-2: a therapeutic target in angiogenesis. Tred Mol Med. 2003; 9: 73-8.
I Gusti D., Ida B. P., Infammatory Bowel Disease. 1: 4876- 7312.
Kumar V., Abbas A.K., Fausto N., Mitchell R. 2010. Robbin Basic Pathology .8th
edition. Philadelphia. 611-616;617-630.
Laroui H., Ingersoll S. A., Liu H. C., Baker M. T., Ayyadurai S., Charania M. A., Laroui F., Yan Y., Sitaraman S. V., Merlin D. Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in mice by forming nano-lipocomplexes with medium-chain-length fatty acids in the colon. PLoS One, 2012; 7(3): e32084.
Lin W., Karin M. 2007. A cytokine-mediated link between innate immunity, inflammation, and cancer. J Clin Invest. 117(5) : 1175-83.
Lisiane B. M., James M., Bugni, and Stephanie L. Green contributed equally to
this work. 2008. DNA damage induced by chronic inflammation contributes
to colon carcinogenesis in mice . J Clin Invest. 118:2516-2525.
Liu C. & Crawford J. M. Saluran Cerna. Dalam Robbins & Cotran Dasar Patologis Penyakit. Editor: Rachman LY. Edisi 7. 2010. Penerbit Buku
Kedokteran EGC. Hal. 868.
Loukanov T., Kirilov M., Mueller K. 2010. Localization of cyclooxgenase-2 in human colorectal cancer. 33(1):E22-9.
Meira L. B, Bugni J. M., Green S. L., Lee C., Pang B., Borenshtein D. 2008. DNA
damage induced by chronic inflammation contributes to colon
carcinogenesis in mice. JCI.118(7): 2516:25.
Monika K, Leva B, Salli F. 2011. Perbedaan Pengaruh Pemberian Brokoli (Brassica Oleracea) Organik dan Brokoli Non-Organik Kukus terhadap Kadar malondialdehid plasma pada tikus jantan galur wistar yang diinduksi aloksan monohidrat. Jurnal Medika Planta. Vol. 1 No. 3: 49-60.
38
Mueller K, Blum NM, Mueller AS. Examination of the anti-inflammatory, antioxidant, and xenobiotic-inducing potential of broccoli extract and various essential oils during a mild DSS-induced colitis in rats. ISRN Gastroenterology. 2013; 2013: 710856.
Nilanjan G., R.C., Vivekananda M., Subhash C. M. 2010. Cox-2 as a target for Cancer Chemotherapy. Intitute of Pharmacology Polish Academy of
Sciences. 62: 233 – 244.
Owis A. I. Broccoli; the green beauty: a review. J. Pharm. Sci. & Res. 2015; 7(9): 696-703.
Popivanova B. K., Kitamura K., Wu Y., Kondo T., Kagaya T., Kaneko S., et al.
2008. Blocking TNF-α in Mice Reduces Colorectal Carcinogenesis Associated
with Chronic Colitis. The Journal of Clinical Investigation. Vol. 118 (2): 560-570.
Rosenberg D., Giardina C., Tanaka T. 2009 Mouse models for study of colon carcinogenesis. Carcinogenesi. 30(20): 183-96.
Seno H., Oshima M., Ishikawa T., Oshima H., Takaku K., Chiba T., et al.
Cyclooxygenase-2 and prostaglandin E2 receptor Ep-2 dependent
angiogenesis in APC knockout mice. Nat Med. 2001; 7:1048-51.
Stewart D. & McDougall G. The brassicas – an undervaluated nutritional dan
health beneficial plant family. Food & Health Innovation Service. 2012.
Tanaka T. 2012 Preclinical Cancer Chemoprevention Studies Using Animal Model of Inflammation-associated Colorectal carcinogenesis 2012, 4, 673-700.
Tatuhey W., Nikijuluw H., Mainase J. Karakteristik Kanker Kolorektal di RSUD Dr. M. Haulussy Ambon tahun 2012;4(2):150-157.
Tortora G.J. & Derrickson B. Principles of Anatomy & Physiology. Editor:
Roesch B. 13th Ed. 2013. John Wiley & Sons, Inc.
Turner J. R., Kumar V., Abbas A. K., Fausto N., & Aster J.C. (2010). The Gastrointestinal Tract. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease 8th ed. Philadelphia, Saunders Elsevier.
39
Ullman T. A., H. Itzkowitz S.H. Intestinal inflammation and Cancer Gastroenterology Volume 140, Issue 6, Pages 1807-1816.e1 (May 2011) DOI: 10.1053 /j.gastro.2011.01.057.
