Uji Aktivitas Hepatoprotektor Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah (Allium cepa L. Corium) terhadap Mencit Jantan yang Diinduksi Parasetamol

(1)

(2)

Lampiran 2.

Gambar simplisia kulit bawang merah

Sebelum dikeringkan

(3)

(4)

Lampiran 4.

Bagan alur penelitian

Serbuk simplisia

(534,8 g)

Ampas

Maserat

dimaserasi menggunakan

etanol 96%yang telah

didestilasi

Ekstrak

kental

diuapkan menggunakan

rotary evaporator

• Hasil skrining fitokimia

simplisia

• Penetapan kadar air

simplisia

• Penetapan kadar sari larut

dalam air simplisia

• Penetapan kadar sari larut

dalam etanol simplisia

• Penetapan kadar abu total

simplisia

• Penetapan kadar abu tidak

larut asam simplisia

dilakukan skrining

fitokimia dan karakterisasi

simplisia

dilakukan skrining

fitokimia dan karakterisasi

ekstrak

• Hasil skrining fitokimia ekstrak

• Penetapan kadar air ekstrak

• Penetapan kadar abu total

ekstrak

• Penetapan kadar abu tidak larut

asam esktrak

dilakukan uji aktivititas

hepatoprotektor

(lihat di halaman selanjutnya)

(5)

Lampiran 4 (lanjutan)

. Bagan alur penelitian

24 ekor mencit jantan

Normal :

tanpa

perlakuan

(4 ekor)

Kontrol negatif

: Na-CMC

0,5%

(4 ekor)

Kontrol

positif: rutin

20 mg/kg bb

(4 ekor)

diberikan perlakuan selama 14 hari

secara per oral

diberikan parasetamol 1 g/kg bb secara

per oral 6 jam setelah pemberian

perlakuan terakhir

Darah

_Hati

dilakukan pengamatan

makroskopik

dibuat preparat histologi

dilakukan pengamatan

mikroskopik

di

sentrifuge

Serum

diukur ALT dan

AST

Hasil

didislokasi di leher pada hari ke 15

(6)

Lampiran 5

. Gambar mikroskopik serbuk simplisia kulit bawang merah pada

perbesaran 10 x 40

Mikroskopik serbuk simplisia kulit bawang merah pada perbesaran 10 x 40

Keterangan : 1 = serabut sklerenkim

2 = parenkim berisi tetesan minyak

3 = kristal kalsium oksalat bentuk prisma

4 = trakea dengan penebalan bentuk tangga

1

2

3

(7)

Lampiran 6.

Perhitungan karakterisasi simplisia kulit bawang merah dan

EEKBM

Perhitungan Penetapan Kadar Air dari Simplisia Kulit Bawang Merah dan

EEKBM

No

Simplisia

Ekstrak

Berat (g)

Kadar Air (mL)

Berat (g)

Kadar Air (mL)

1 5,003

0,05

5,007

0,05

2 5,008

0,5

5,018

0,10

3 5,010

0,05

5,012

0,10

Simplisia

1. % Kadar Air I =

0,05

5,003

x100% = 1,00%

2. % Kadar Air II =

0,5

5,008

x100% = 9,98%

3. % Kadar Air III =

0,05

5,010

x100% = 1,00%

% Kadar Air Rata-Rata =

0,99+ 9,98+ 0,99

3 = 4,00%

Ekstrak

1. % Kadar Air I =

0,05

5,007

x100% = 1,00%

2. % Kadar Air II =

0,10

5,018

x100% = 2,00%

3. % Kadar Air III =

0,10

5,012

x100% = 2,00%

4. % Kadar Air Rata-Rata =

3,94+ 3,99 + 3,99

3 = 1,67%

% Kadar air=

volume air (mL)

(8)

Lampiran 6.(lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar sari larut air dari simplisia kulit bawang merah

No

Berat Sampel (g)

Berat Sari (g)

1.

2.

3. 5,002

5,002

5,001

0,060

0,067

0,072

% Kadar Sari Larut Etanol =

Berat Sari

Berat Sampel

x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I =

0,060

5,002

x

100

20 x100% = 6,00%

2. % Kadar Sari II =

0,067

5,002

x

100

20 x100% = 6,70%

3. % Kadar Sari III =

0,072

5,001

x

100

20 x100% = 7,20%

% Kadar Sari Larut Air Rata-Rata =

6,00%+7,00% + 7,19%

3

(9)

Lampiran 6.(lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol dari simplisia kulit bawang merah

No

Berat Sampel (g)

Berat Sari (g)

1.

2.

3. 5,001

5,002

5,001

0,126

0,127

0,131

% Kadar Sari Larut Air =

Berat Sari

Berat Sampel

x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I =

0,126

5,001

x

100

20 x100% = 12,60%

2. % Kadar Sari II =

0,127

5,002

x

100

20 x100% = 12,70%

3. % Kadar Sari III =

0,131

5,001

x

100

20 x100% = 13,09%

% Kadar Sari Larut Etanol Rata-Rata =

12,60%+ 12,70% + 13,09%

3

(10)

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar abu total dari serbuk simplisia kulit bawang merah

dan EEKBM

No

Simplisia

Ekstrak

Berat (g)

Kadar Abu (g)

Berat (g)

Kadar Abu (g)

1 2,041

0,228

2,022

0,080

2 2,030

0,300

2,035

0,081

3 2,015

0,255

2,038

0,065

Simplisia

1. % Kadar Abu Total I =

0,028

2,041

x100% = 4,75%

2. % Kadar Abu Total II =

0,300

2,030

x100% = 14,78%

3. % Kadar Abu Total I =

0,255

2,015

x100% = 12.65%

% Kadar Abu Total Rata-Rata =

4,75%+ 3,46% +4,12%

3 = 12,66%

Ekstrak

1. % Kadar Abu Total I =

0,080

2,022

x100% = 3,40%

2. % Kadar Abu Total II =

0,081

2,035

x100% = 3,80%

3. % Kadar Abu Total I =

0,065

2,038

x100% = 3,19%

% Kadar Abu Total Rata-Rata =

3,40%+3,80% +3,19%

3 = 3,47%

% kadar abu total =

berat abu

(g)

(11)

% Kadar abu tidak larut asam =

berat abu tidak larut asam

berat sampel

x 100 %

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam dari serbuk simplisia kulit

bawang merah dan EEKBM

No

Simplisia

Ekstrak

Berat (g)

Kadar Abu (g)

Berat (g)

Kadar Abu (g)

1 2,041

0,071

2,022

0,002

2 2,030

0,070

2,035

0,008

3 2,015

0,057

2,038

0,005

Simplisia

1. % Kadar Abu Total I =

0,071

2,041

x100% = 3,47%

2. % Kadar Abu Total II =

0,070

2,030

x100% = 3,45%

3. % Kadar Abu Total I =

0,057

2,015

x100% = 2,83%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata =

3,47%+3,45% + 2,83%

3 = 3,25%

Ekstrak

1. % Kadar Abu Total I =

0,002

2,022

x100% = 0,10%

2. % Kadar Abu Total II =

0,008

2,035

x100% = 0,39%

3. % Kadar Abu Total I =

0,005

2,038

x100% = 0,24%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata =

0,10%+0,39% + 0,24%

(12)

(13)

Lampiran 8.

Gambar mencit jantan dan proses pengambilan darah dari jantung

dan organ hati mencit jantan

kiri: organ hati yang normal, kanan: organ hati yang mengalami

nekrosis akibat induksi parasetamol

(14)

Lampiran 9.

Volume maksimum sesuai jalur pemberian dan konversi dosis.

1. Tabel volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada hewan

uji (Harmita dan Radji, 2008)

Jenishewanuji

Volume maksimal (ml) sesuai jalurpemberian

iv.

im.

ip.

sc.

po.

2. Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Harmita dan Radji,

(15)

Lampiran 10.

Perhitungan Dosis

1. EEKBM 300 mg/kg bb

Berat badan mencit

= 20 g

Dosis pemberian

=

20 g

�

300 mg

1000

= 6 mg

Dosis EEKBM 300 mg/kg bb adalah dosis yang terkandung dalam 1 kg berat

badan sebanyak 300 mg. Volume dosis maksimum untuk mencit adalah 10

mL/kg (Laboratory Animal Resources Center of Oregon State University, 2011)

atau 1 mL/100 g (BPOM., RI., 2014), maka

300 ��

10 mL

=

30 ��

1 mL

,

sehingga volume

yang diberikan secara per oral :

6 ��

30 mg

x 1 mL

=

0,2 mL.

2. EEKBM 450 mg/kg bb

Dosis pemberian

=

20 g

�

450 mg

1000

= 9 mg

450 �� 10 mL

=

45 ��

1 mL

,

makavolume yang diberikan secara per oral :

9 ��

45 mg

x 1 mL

=

0,2 mL.

3. EEKBM 600 mg/kg bb

Dosis pemberian

=

20 g

�

600 mg

1000

= 12 mg

600 �� 10 mL

=

60 ��

(16)

12 ��

60 mg

x 1 mL

=

0,2 mL.

4. Rutin 20 mg/kg bb

Dosis pemberian

=

20 g

�

20 mg

1000

= 0,4 mg

20 �� 10 mL

=

2 ��

1 mL

,

maka

volume yang diberikan secara per oral :

0,4 ��

2 mg

x 1 mL

=

0,2 mL.

5. Parasetamol 1000 mg/kg bb

Dosis pemberian

=

20 g

�

1000 mg

1000

= 20 mg

1000 �� 10 mL

=

100 ��

1 mL

,

maka

volume yang diberikan secara per oral :

20 ��

100 mg

x 1 mL

=

0,2 mL.

6. Volume pemberian suspensi Na CMC 0,5%

Na CMC 0,5% merupakan suspensi pembawa untuk suspensi EEKBM,

parasetamol dan rutin yang berfungsi untuk menjaga suspensi tetap stabil dan

homogen, sehingga Na CMC 0,5% berfungsi sebagai kontrol pelarut. Larutan uji

diberikan kepada hewan dalam suspensi Na CMC 0,5% sebanyak 0,2 mL,

(17)

(18)

Lampiran 12

. Data analisis ALT secara statistik SPSS

One WayANOVA

ANOVA

Nilai ALT

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 4202870.423 5 840574.085 114.926 .000

Within Groups 131652.770 18 7314.043

Total 4334523.193 23

95% Confidence

Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

kontrol negatif

(Na CMC 0,5%) 4

1369.875 202.4000 101.2000 1047.812 1691.938 1201.6 1664.2

(kontrol positif)

(19)

Post Hoc Test

Multiple Comparisons

Nilai ALT

Tukey HSD

(I) Kelompok Perlakuan

(J) Kelompok Perlakuan

Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound

Upper Bound

tanpa perlakuan kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-1230.1000* 60.4733 .000 -1422.286 -1037.914

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

-54.0000 60.4733 .943 -246.186 138.186

EEKBM 300

mg/kg BB -575.4000

* _60.4733 _.000 _-767.586 _-383.214

EEKBM 450

mg/kg BB -388.2250

*

60.4733 .000 -580.411 -196.039

EEKBM 600

mg kg BB -173.9250 60.4733 .090 -366.111 18.261

kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

tanpa

perlakuan 1230.1000

* _60.4733 _.000 _1037.914 _1422.286

1176.1000* 60.4733 .000 983.914 1368.286

EEKBM 300

mg/kg BB 654.7000

*

60.4733 .000 462.514 846.886

EEKBM 450

mg/kg BB 841.8750

*

60.4733 .000 649.689 1034.061

EEKBM 600

mg kg BB 1056.1750

* _60.4733 _.000 _863.989 _1248.361

tanpa

perlakuan 54.0000 60.4733 .943 -138.186 246.186

-1176.1000* 60.4733 .000 -1368.286 -983.914

EEKBM 300

mg/kg BB -521.4000

*

60.4733 .000 -713.586 -329.214

EEKBM 450

mg/kg BB -334.2250

*

60.4733 .000 -526.411 -142.039

EEKBM 600

mg kg BB -119.9250 60.4733 .389 -312.111 72.261

(20)

Nilai ALT

Tukey HSD

Mean

Lower Bound

Upper Bound

EEKBM 300 mg/kg BB

tanpa

perlakuan 575.4000

*

60.4733 .000 383.214 767.586

-654.7000* 60.4733 .000 -846.886 -462.514

EEKBM 450 mg/kg BB

tanpa

perlakuan 388.2250

* positif) rutin 20 mg/kg BB

perlakuan 173.9250 60.4733 .090 -18.261 366.111

-1056.1750* 60.4733 .000 -1248.361 -863.989

119.9250 60.4733 .389 -72.261 312.111

EEKBM 300

mg/kg BB -401.4750

* _60.4733 _.000 _-593.661 _-209.289

EEKBM 450

mg/kg BB -214.3000

* _60.4733 _.024 _-406.486 _-22.114

(21)

Homogeneous Subsets

Nilai ALT

Tukey HSDa

Kelompok Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

tanpa perlakuan 4 139.775

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB 4 193.775

EEKBM 600 mg kg BB 4 313.700

EEKBM 450 mg/kg BB 4 528.000

EEKBM 300 mg/kg BB 4 715.175

kontrol negatif (Na CMC 0,5%) 4 1369.875

Sig. .090 .059 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

(22)

Lampiran 13

. Data analisis AST secara statistik SPSS

One WayANOVA

Descriptives

Nilai AST

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper

Bound

Tanpa perlakuan 4 210.850 29.9527 14.9763 163.189 258.511 187.2 252.5

Kontrol negatif

(Na CMC 0,5%) 4 2086.350 354.7269 177.3635 1521.900 2650.800 1826.0 2609.4

kontrol positif

(rutin 20 mg/kg

bb)

4 354.225 34.5524 17.2762 299.244 409.206 313.2 390.7

EEKBM 300

mg/kg bb 4 1051.000 47.1434 23.5717 975.984 1126.016 991.5 1105.5

EEKBM 450

mg/kg bb 4 803.400 39.9008 19.9504 739.909 866.891 745.0 832.0

EEKBM 600

mg/kg bb 4 472.950 19.6544 9.8272 441.675 504.225 449.0 496.6

Total 24 829.796 654.6488 133.6296 553.362 1106.230 187.2 2609.4

ANOVA

Nilai AST

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 9460627.632 5 1892125.526 85.926 .000

Within Groups 396369.277 18 22020.515

(23)

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons Nilai AST

Tukey HSD

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Tanpa perlakuan Kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-1875.5000 104.9298 .000 -2208.970 -1542.030

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

-143.3750 104.9298 .745 -476.845 190.095

EEKBM 300

mg/kg bb -840.1500

*_{104.9298 .000 -1173.620} _-506.680

EEKBM 450

mg/kg bb -592.5500

*

104.9298 .000 -926.020 -259.080

EEKBM 600

mg/kg bb _{-262.1000 104.9298 .176} _-595.570 _71.370

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

Tanpa

perlakuan 1875.5000

*_{104.9298 .000} _1542.030 _2208.970

1732.1250* 104.9298 .000 1398.655 2065.595

EEKBM 300

mg/kg bb 1035.3500

*

104.9298 .000 701.880 1368.820

EEKBM 450

mg/kg bb 1282.9500

*_{104.9298 .000} _949.480 _1616.420

EEKBM 600

mg/kg bb 1613.4000

*_{104.9298 .000} _1279.930 _1946.870

Tanpa

perlakuan 143.3750 104.9298 .745 -190.095 476.845

-1732.1250* 104.9298 .000 -2065.595 -1398.655

EEKBM 300

mg/kg bb -696.7750

*

104.9298 .000 -1030.245 -363.305

EEKBM 450

mg/kg bb -449.1750

*

104.9298 .005 -782.645 -115.705

EEKBM 600

(24)

Nilai AST

Tukey HSD

Mean

perlakuan 840.1500

*

104.9298 .000 506.680 1173.620

-1035.3500* 104.9298 .000 -1368.820 -701.880

kontrol positif (rutin 20 mg/kg

mg/kg bb 578.0500

*_{104.9298 .000} _244.580 _911.520

EEKBM 450 mg/kg bb Tanpa

perlakuan 592.5500

*_{104.9298 .000} _259.080 _926.020

-1282.9500* 104.9298 .000 -1616.420 -949.480

perlakuan 262.1000 104.9298 .176 -71.370 595.570

-1613.4000* 104.9298 .000 -1946.870 -1279.930

118.7250 104.9298 .862 -214.745 452.195

EEKBM 300

mg/kg bb -578.0500

*

104.9298 .000 -911.520 -244.580

EEKBM 450

mg/kg bb -330.4500 104.9298 .053 -663.920 3.020

(25)

Homogeneous Subsets

Nilai AST

Tukey HSDa

Kelompok Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3 4

Tanpa perlakuan 4 210.850

bb)

4 354.225

EEKBM 600 mg/kg bb 4 472.950 472.950

EEKBM 450 mg/kg bb 4 803.400 803.400

EEKBM 300 mg/kg bb 4 1051.000

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%) 4 2086.350

Sig. .176 .053 .222 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.