Potensi antibakteri propolis lebah Trigona spp asal Bogor

(1)

ABSTRAK

ADE JAMALUDIN SUNNY. Potensi Antibakteri Propolis

Trigona

spp asal

Bogor. Dibimbing oleh A.E. ZAINAL HASAN dan I MADE ARTIKA.

Propolis merupakan resin yang dikumpulkan lebah madu dari berbagai bagian

tumbuhan. Penelitian terhadap contoh propolis dari berbagai tempat menunjukan

keanekaragaman dalam komposisi kimiawinya. Komposisi kimiawi propolis ini

bergantung kepada jenis flora yang terdapat pada tempat pengambilannya. Hal ini

memberikan kemungkinan adanya perbedaan aktivitas antibakteri dari

masing-masing contoh.

(2)

ABSTRACT

ADE JAMALUDIN SUNNY. Potency of Bogor

Trigona spp Propolis as an

Antibacterial Subtance. Under direction A.E. ZAINAL HASAN and I MADE

ARTIKA.

Propolis contains resinous substances collected by honey bees from various

plant sources. Analysis of numerous samples from different geographic regions

led to the disclosure that the chemical composition of propolis is highly variable

depends on the specificity of the local flora at the site of collection and thus on the

geographic and climatic characteristics of this site. This fact results in the striking

diversity of propolis chemical composition, especially of propolis originating

from tropical regions.

(3)

PENDAHULUAN

Propolis merupakan produk dari sarang lebah yang sudah sejak lama digunakan sebagai antiseptik dan obat luka. Hasil penelitian modern menunjukkan bahwa propolis dapat berfungsi sebagai anti-imflamasi, pengobatan serangan jantung, diabetes, kanker, antifungal, antibakteri, dan antioksidan (Hegazi & El Hady 2001). Perkembangan penelitian terhadap propolis ini menarik untuk dicermati karena kandungan kimiawi propolis berbeda-beda antara suatu daerah dengan daerah lain.

Perbedaan vegetasi lingkungan tempat hidup lebah madu sangat berpengaruh terhadap kandungan kimiawi propolis. Walaupun demikian ternyata kandungan kimiawi yang berbeda-beda ini tidak serta-merta memberikan perbedaan terhadap aktivitas biologisnya (Bankova 2005). Sebagai contoh, hasil analisis tentang aktivitas antibakteri terhadap propolis yang berasal Eropa, Brazil, dan Amerika tengah yang dilakukan oleh Povova et al. (2004). Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa terdapat kemiripan aktivitas antibakteri dari semua contoh yang diuji kecuali yang berasal dari Amerika Selatan yang aktivitasnya lebih rendah. Kemiripan aktivitas antibakteri cukup mengherankan mengingat kimiawi propolis dari Brazil dan Eropa sangatlah berbeda. Penelitian lain yang dikerjakan oleh Banksota

et al. (2000) terhadap 4 contoh propolis yang berasal dari Brazil, Peru, Belanda, dan China menunjukkan bahwa semua propolis tersebut memiliki aktivitas antiradikal bebas yang relatif sama, kecuali yang berasal dari Peru yang aktivitasnya lebih kecil.

Kemiripan aktivitas biologis dari propolis yang berbeda kandungan kimiawinya ini merupakan hal yang menakjubkan. Penelitian terhadap propolis ini sangat penting untuk terus dilanjutkan untuk memberikan informasi yang detail tentang aktivitas biologis yang dimiliki propolis dalam hubungannya dengan kandungan kimiawinya yang beragam. Salah satu aktivitas biologis yang perlu mendapat perhatian adalah aktivitas antibakterinya. Penentuan senyawa antibakteri dari alam ini setidaknya dapat memberikan sebuah solusi terhadap kekhawatiran terhadap efek samping dari senyawa antibakteri sintetik.

Indonesia sebagai negara yang memiliki keanekaragaman hayati yang sangat kaya. Keanekaragaman ini memberikan tempat hidup yang berbeda-beda bagi lebah Trigona

spp, yang secara tidak langsung membuat

kandungan kimiawi propolis di suatu daerah dengan daerah lain tidak sama. Perbedaan inilah yang kemudian menjadi dasar penelitian untuk mempelajari aktivitas biologis dari propolis yang berasal dari Bogor, terutama aktivitas antibakterinya.

Penelitian bertujuan untuk memberikan informasi tentang aktivitas antibakteri dari propolis yang berasal dari daerah Bogor. Hipotesis penelitian adalah propolis yang berasal dari Bogor mempunyai aktivitas antibakteri dan berpotensi sebagai zat antibakteri alternatif. Manfaat penelitian ini adalah memberikan pengetahuan dan penjelasan propolis yang berasal daerah Bogor dapat dimanfaatkan sebagai zat antibakteri.

TINJAUAN PUSTAKA

Lebah madu Trigona spp

Lebah madu Trigona spp (Gambar 1), yang dalam bahasa daerah sering disebut klanceng, lanceng (Jawa), teweul (sunda) (Perum Perhutani 1986), merupakan salah satu serangga sosial yang hidup berkelompok membentuk koloni. Satu koloni lebah ini berjumlah 300-80.000 lebah. Trigona spp banyak hidup di daerah tropis dan subtropis, antara lain seperti di Amerika Selatan, setengah Afrika bagian selatan, dan Asia Selatan dan Asia Tenggara (Free 1982).

Trigona spp diklasifikasikan dalam divisi

Animalia, filum Arthropoda kelas Insecta,

ordo Hymenoptera, famili Apidae, genus

Trigona, dan spesies Trigona spp (Sihombing 1997).

Lebah Trigona spp merupakan salah satu

stingless bee atau lebah yang tidak memiliki sengat. Trigona spp memiliki sengat sisa, namun tidak digunakan sebagai alat pertahanan. Lebah ini akan menggigit musuhnya atau membakar kulit musuhnya dengan larutan basa. Organ vital (mata, hidung, dan telinga) musuh akan dikelilingi oleh lebah lain dalam satu koloninya. Lebah ini juga dilengkapi sistem kekebalan untuk menyerang serangga pengganggun lain (Free 1982).

Lebah Trigona spp lebih banyak mencari makan di pagi hari dibandingkan dengan di sore hari. Trigona sppdengan ukuran tubuh 5 mm mempunyai jarak terbang sekitar 600 m. Jarak terbang ini dipengaruhi oleh ukuran tubuh lebah, lebah yang lebih besar daripada

(4)

PENDAHULUAN

Propolis merupakan produk dari sarang lebah yang sudah sejak lama digunakan sebagai antiseptik dan obat luka. Hasil penelitian modern menunjukkan bahwa propolis dapat berfungsi sebagai anti-imflamasi, pengobatan serangan jantung, diabetes, kanker, antifungal, antibakteri, dan antioksidan (Hegazi & El Hady 2001). Perkembangan penelitian terhadap propolis ini menarik untuk dicermati karena kandungan kimiawi propolis berbeda-beda antara suatu daerah dengan daerah lain.

Perbedaan vegetasi lingkungan tempat hidup lebah madu sangat berpengaruh terhadap kandungan kimiawi propolis. Walaupun demikian ternyata kandungan kimiawi yang berbeda-beda ini tidak serta-merta memberikan perbedaan terhadap aktivitas biologisnya (Bankova 2005). Sebagai contoh, hasil analisis tentang aktivitas antibakteri terhadap propolis yang berasal Eropa, Brazil, dan Amerika tengah yang dilakukan oleh Povova et al. (2004). Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa terdapat kemiripan aktivitas antibakteri dari semua contoh yang diuji kecuali yang berasal dari Amerika Selatan yang aktivitasnya lebih rendah. Kemiripan aktivitas antibakteri cukup mengherankan mengingat kimiawi propolis dari Brazil dan Eropa sangatlah berbeda. Penelitian lain yang dikerjakan oleh Banksota

et al. (2000) terhadap 4 contoh propolis yang berasal dari Brazil, Peru, Belanda, dan China menunjukkan bahwa semua propolis tersebut memiliki aktivitas antiradikal bebas yang relatif sama, kecuali yang berasal dari Peru yang aktivitasnya lebih kecil.

Kemiripan aktivitas biologis dari propolis yang berbeda kandungan kimiawinya ini merupakan hal yang menakjubkan. Penelitian terhadap propolis ini sangat penting untuk terus dilanjutkan untuk memberikan informasi yang detail tentang aktivitas biologis yang dimiliki propolis dalam hubungannya dengan kandungan kimiawinya yang beragam. Salah satu aktivitas biologis yang perlu mendapat perhatian adalah aktivitas antibakterinya. Penentuan senyawa antibakteri dari alam ini setidaknya dapat memberikan sebuah solusi terhadap kekhawatiran terhadap efek samping dari senyawa antibakteri sintetik.

Indonesia sebagai negara yang memiliki keanekaragaman hayati yang sangat kaya. Keanekaragaman ini memberikan tempat hidup yang berbeda-beda bagi lebah Trigona

spp, yang secara tidak langsung membuat

kandungan kimiawi propolis di suatu daerah dengan daerah lain tidak sama. Perbedaan inilah yang kemudian menjadi dasar penelitian untuk mempelajari aktivitas biologis dari propolis yang berasal dari Bogor, terutama aktivitas antibakterinya.

Penelitian bertujuan untuk memberikan informasi tentang aktivitas antibakteri dari propolis yang berasal dari daerah Bogor. Hipotesis penelitian adalah propolis yang berasal dari Bogor mempunyai aktivitas antibakteri dan berpotensi sebagai zat antibakteri alternatif. Manfaat penelitian ini adalah memberikan pengetahuan dan penjelasan propolis yang berasal daerah Bogor dapat dimanfaatkan sebagai zat antibakteri.

TINJAUAN PUSTAKA

Lebah madu Trigona spp

Lebah madu Trigona spp (Gambar 1), yang dalam bahasa daerah sering disebut klanceng, lanceng (Jawa), teweul (sunda) (Perum Perhutani 1986), merupakan salah satu serangga sosial yang hidup berkelompok membentuk koloni. Satu koloni lebah ini berjumlah 300-80.000 lebah. Trigona spp banyak hidup di daerah tropis dan subtropis, antara lain seperti di Amerika Selatan, setengah Afrika bagian selatan, dan Asia Selatan dan Asia Tenggara (Free 1982).

Trigona spp diklasifikasikan dalam divisi

Animalia, filum Arthropoda kelas Insecta,

ordo Hymenoptera, famili Apidae, genus

Trigona, dan spesies Trigona spp (Sihombing 1997).

Lebah Trigona spp merupakan salah satu

stingless bee atau lebah yang tidak memiliki sengat. Trigona spp memiliki sengat sisa, namun tidak digunakan sebagai alat pertahanan. Lebah ini akan menggigit musuhnya atau membakar kulit musuhnya dengan larutan basa. Organ vital (mata, hidung, dan telinga) musuh akan dikelilingi oleh lebah lain dalam satu koloninya. Lebah ini juga dilengkapi sistem kekebalan untuk menyerang serangga pengganggun lain (Free 1982).

Lebah Trigona spp lebih banyak mencari makan di pagi hari dibandingkan dengan di sore hari. Trigona sppdengan ukuran tubuh 5 mm mempunyai jarak terbang sekitar 600 m. Jarak terbang ini dipengaruhi oleh ukuran tubuh lebah, lebah yang lebih besar daripada

(5)

yang memiliki nektar dengan kandungan gula yang tinggi. Lebah ini akan memberitahukan keberadaan sumber nektar pada lebah lain dalam koloninya dengan menggunakan suatu tarian. Jenis lebah Trigona yang lain ada yang menandai sumber makanannya dengan menggunakan feromon dari kelenjar mandibular yang dikenali oleh lebah lain dalam satu koloni (Free 1982).

Gambar 1 Lebah madu Trigona spp (Brisbane Insects 2010).

Koloni lebah madu terdiri atas kasta reproduktif (lebah ratu dan lebah jantan) dan kasta nonreproduktif (lebah pekerja). Setiap kasta atau golongan memiliki keunikan anatomis, fisiologis dan dan fungsi biologis yang berbeda-beda (sifat polimorfisme). Di dalam satu koloni lebah hanya terdapat satu ekor ratu yang berukuran paling besar dan bertugas hanya menghasilkan telur, beberapa ratus lebah jantan (drone) yang berfungsi mengawini lebah ratu perawan, dan beberapa puluh ribu lebah pekerja, serta ditambah telur, larva, dan pupa (Sihombing 1997). Semua pekerjaan di dalam koloni dilakukan oleh lebah pekerja. Berdasarkan tempat berlangsungnya tempat pekerjaan, tugas lebah dibagi menjadi 2 golongan, yaitu tugas di dalam sarang dan di luar sarang serta pembagian tugasnya berdasarkan umur.

Propolis

Propolis merupakan resin lengket yang terdapat pada sarang lebah (Hegazi & El Hady 2001). Resin ini dikumpulkan oleh lebah pekerja dari kuncup, kulit tumbuhan atau bagian-bagian lain dari tumbuhan. Resin-resin yang diperoleh dari bermacam-macam tumbuhan ini dicampur dengan saliva dan enzim lebah sehingga berbeda dari resin asalnya lebah menggunakan resin ini untuk berbagai keperluan (Gojmerac 1993).

Propolis ini telah digunakan dalam jangka waktu yang lama dalam pengobatan tradisional di berbagai negara tidak kurang sejak 3000 tahun sebelum Masehi. Beberapa peneliti telah mengonfirmasi tentang kegunaan propolis ini. Propolis dapat berfungsi sebagai

anti-imflamasi, antibakteri, antikanker, antifungi antivirus, dan antioksidan (Hegazi & El Hady 2001).

Gojmerac (1983) menyatakan bahwa propolis mengandung bahan campuran kompleks malam, resin, balsam, minyak, dan sedikit pollen. Komposisinya bervariasi tergantung dari tumbuhan asal. Propolis juga mengandung zat aromatik, zat wangi, dan berbagai mineral. Propolis dan jumlah senyawa-senyawanya menunjukkan berma-cam-macam efek biologis dan aktivitas farmakologis. Lebih dari 200 senyawa yang terkandung di dalam propolis sudah diketahui (Khismatullina 2005).

Banyak peneliti yang percaya bahwa senyawa-senyawa kimia yang bertanggung jawab besar terhadap aktivitas biologis propolis adalah asam kafeat, flavonoid, dan ester fenolat (Katircioglu & Mercan 2006). Flavonoid berperan dalam pewarnaan tumbuhan. Sekurang-kurangnya ada 38 jenis flavonoid yang termasuk flavonol (galanin, kaemferol, quersetin), dan flavonon (pinobanksin), serta flavon (chrysin, acacetin, apigenin, ermanin). beberapa senyawa fenolat yang terkandung di dalam propolis adalah hidroksisinamat, asam sinamat, vanilin, benzin alkohol, asam benzoat, kafeat, kumarat, serta asam ferulat. Nilai nutrisi propolis sangat kecil, yaitu berasal dari protein, asam amino, mineral, dan gula, serta vitamin dalam jumlah kecil seperti vitamin A, B1, B2, B6, C, dan E (Khismatullina 2005).

Kemampuannya sebagai antibakteri tidak terlepas dari senyawa-senyawa aktif yang terdapat di dalamnya. Senyawa aktif yang memberikan efek antibakteri adalah

pinochebrin, pinobanksin, asam kafeat, dan asam ferulat. Senyawa antifunginya adalah

pinochebrin, pinobanksin, asam kafeat, lutseolin, dan quersetin. Zat aktif yang diketahui bersifat antibiotik adalah asam ferulat. Zat ini efektif terhadap bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Asam ferulat juga berperan dalam pembekuan darah sehingga dapat dimanfaatkan untuk mengobati luka dan diberikan dalam bentuk salep (Winingsih 2004 diacu dalam Lasmayanty 2008).

(6)

agalactiae dengan menghambat pembelahan sel. Mereka juga melihat indikasi bahwa propolis mengganggu organisasi sel dan membran sel.

Kondisi Geografis Asal Propolis

Propolis dikumpulkan lebah dari berbagai macam bagian tanaman. Oleh karena itu komposisi kimiawi resin ini sangat bergantung kepada jenis tanaman yang dijadikan asal resin tersebut. Lingkungan yang berbeda dengan jenis vegetasi yang berbeda akan secara tidak langsung memberikan kandungan kimiawi propolis yang berbeda pula (Bankova & Marcucci, 2000). Pebedaan musim pada suatu tempat umumnya tidak menyebabkan perbedaan kandungan kimiawi propolis. Musim yang berbeda hanya menyebabkan perbedaan kuantitas zat kimia yang ada dalam propolis (Bankova et al. 1998).

Propolis yang dipakai dalam penelitian berasal dari Kota Bogor. Kota Bogor terletak pada ketinggian 190 sampai 330 meter dari permukaan laut. Udaranya relatif sejuk dengan suhu udara rata-rata setiap bulannya adalah 26°C dan kelembaban udaranya kurang lebih 70%. Suhu rata-rata terendah di Bogor adalah 21.8°C, paling sering terjadi pada bulan Desember dan Januari. Arah mata angin dipengaruhi oleh angin muson. Bulan Mei sampai Maret dipengaruhi angin muson barat (Pemerintahan Kota Bogor 2009)

Kemiringan Kota Bogor berkisar antara 0-15% dan sebagian kecil daerahnya mempunyai kemiringan antara 15–30%. Jenis tanah hampir di seluruh wilayah adalah latosol coklat kemerahan dengan kedalaman efektif tanah lebih dari 90 cm dan tekstur tanah yang halus serta bersifat agak peka terhadap erosi. Bogor terletak pada kaki Gunung Salak dan Gunung Gede, sehingga sangat kaya akan hujan orografi. Angin laut dari Laut Jawa yang membawa banyak uap air masuk ke pedalaman dan naik secara mendadak di wilayah Bogor sehingga uap air langsung terkondensasi dan menjadi hujan. Hampir setiap hari turun hujan di kota ini dalam setahun (70%) sehingga dijuluki "Kota Hujan". Keunikan iklim lokal ini dimanfaatkan oleh para perencana kolonial Belanda dengan menjadikan Bogor sebagai pusat penelitian botani dan pertanian, yang diteruskan hingga sekarang (Pemerintahan Kota Bogor 2009).

Iklim basah Bogor ini memungkinkan berbagai macam tumbuhan dapat hidup di dalamnya. Hal ini yang kemudian menjadi awal pembentukan vegetasi yang unik bagi lebah. Vegetasi seperti inilah yang

menyediakan bahan-bahan untuk pembentukan propolis sarang lebah.

Bakteri Uji

Bakteri merupakan protista prokariot bersel tunggal yang sangat beragam dan terdapat di mana-mana. Dinding sel merupakan salah satu komponen utama sel yang memberikan bentuk serta kekuatan pada sel prokariot. Berdasarkan komposisi dan struktur dinding selnya, bakteri dibagi ke menjadi 2 golongan, yaitu bakteri Gram negatif dan bakteri Gram positif. Perbedaan keduanya dapat dilihat dengan menggunakan pewarnaan Gram. Bakteri Gram positif memberikan warna ungu atau biru, sedangkan bakteri Gram negatif berwarna merah (Pelczar & Chan 1988).

Bacillus subtilis

Bakteri yang Gram positif ini berbentuk batang besar dengan flagel peritrik. Bakteri ini bersifat anaerob dan anaerob fakultatif. Bakteri yang hidup dengan menggunakan sumber C dan N sebagai sumber pertumbuhan ini, berukuran 0.5 -2.5 x 1.2-2.0 μm dengan suhu optimum 25-37°C. bakteri ini sering ditemukan di tanah, air, dan udara (Gambar 2).

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan termasuk famili

Micrococaceae. Bentuknya kokus dengan diameter 0.5-1.5 µm. bakteri ini ditemukan dalam bentuk tunggal, berpasangan, atau bergerombol seperti anggur. Bakteri ini bersifat patogen, nonmotil, tidak berspora, tidak berkapsul, hidup secara anaerob fakultatif, tetapi tumbuh cepat pada keadaan aerob. Suhu optimum pertumbuhanya adalah 30-37°C. koloni bakteri ini menghasilkan warna putih, kuning, atau kuning orange (Pelczar & Chan 1988; Lay & Hastowo 1992).

Eschericia coli

Eschericia coli merupakan penghuni normal saluran pencernaan manusia dan hewan berdarah panas. Biasanya tidak patogenik, tetapi dapat menimbulkan infeksi. Bila memasuki kandung kemih, dapat menyebabkan sistisis. Bakteri ini sering digunakan sebagai indikator kualitas air. Beberapa galur tertentu dapat menyebabkan gastroentritis, disentri pada manusia, dan diare (Pelczar & Chan 1988).

Bakteri E. coli termasuk ke dalam famili

(7)

yang termasuk bakteri Gram negatif yang tidak berspora ini tumbuh baik pada pH 7.0-7.5, dengan suhu optimum 37ºC. Koloni E. coli

menghasilkan warna putih kekuningan, dan permukaan bergelombang di atas agar (Fardiaz 1983). Bakteri ini bersifat nonmotil dan hidup secara anaerob fakultatif (Holt et al. 1994).

Pseudomonas aeruginosa

Bakteri ini merupakan bakteri Gram negatif. Bakteri ini berbentuk lurus melengkung, berukuran 0.5-1.0 x 1.5-5.0 µm (Gambar 4). Bakteri ini hidup secara aerob, motil dengan flagel polar, tidak berspora, koloninya tidak teratur, serta suhu optimum pertumbuhannya 37ºC.

Bakteri ini dapat tumbuh pada media umum, dapat hidup di dalam air suling dan tumbuh baik pada media Nitrogen dengan bermacam-macam senyawa karbon. Habitatnya di air dan tanah, terdapat pada kulit, membran mukosa, dan tinja. Pada manusia yang sehat, bakteri ini ditemukan dalam usus halus 10-15%. Bakteri ini juga sering kali merupakan pencemar dan penyebab terjadinya infeksi (Felczar & Chan 1988; Fardiaz 1989; Holt et al.. 1994).

Antibakteri

Bahan antimikrob merupakan bahan kimia yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikrob. Berdasarkan kelompok metabolismenya, antimikrob meliputi anti-bakteri, antifungi, antivirus, dan antiprotozoa (Koolman 1997). Antibakteri adalah zat yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri dan digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi (Pelczar & Chan 1988).

Berdasarkan cara kerjanya, antibakteri dibedakan menjadi bakterisidal dan bakteriostatik. Antibakteri yang bersifat bakterisidal adalah zat yang bekerja untuk mematikan bakteri, sedangkan bakteriostatik bekerja untuk menghambat pertumbuhannya. Beberapa zat antibakteri bersifat bakteriostatik pada konsentrasi rendah, dan bersifat bakterisidal pada konsentrasi tinggi (Koolman 1997).

Gambar 2 Hasil pewarnaan Gram terhadap

Bacillus subtilis (Todar 2008).

Gambar 3 Bentuk kapsul E. coli (Stirm & Molbert 1970).

Menurut Koolman (1997), berdasarkan selektifitas dan pengaruh penghambatan terhadap bakteri, antibakteri terbagi menjadi antibakteri berspetrum sempit dan antibakteri berspektrum luas. Antibakteri berspektrum sempit mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Gram tertentu, sedangkan yang berspektrum luas dapat menghambat pertumbuhan bakteri baik Gram positif maupun Gram negatif.

Mekanisme kerja antibakteri dapat terjadi melalui beberapa cara, yaitu : 1) kerusakan pada dinding sel, 2) perubahan permeabilitas sel, dan 3 menghambat sintesis protein dan asam nukleat (Koolman 1997).

Banyak faktor dan keadaan yang dapat mempengaruhi kerja antibakteri, antara lain konsentrasi antibakteri, jumlah bakteri, spesies bakteri, adanya bahan organik, suhu, dan pH (Pelczaar & Chan 1988). Antibiotik adalah senyawa khas yang dihasilkan oleh organisme atau merupakan turunannya termasuk analognya yang dibuat secara sintetik, yang dalam kadar rendah mampu menghambat proses penting dalam kehidupan satu spesies atau lebih mikroorganisme (Siswandono & Soekardjo 1995).

Salah satu jenis antibiotik adalah ampisilin. Ampisilin merupakan jenis antibiotik turunan penisilin dan merupakan senyawa antibakteri berspektrum luas dan bersifat bakterisidal. Ampisilin tahan terhadap asam, tetapi tidak tahan terhadap penisilinase (Gambar 5).

Gambar 4 Hasil foto Pseudomonas aeruginosa

(8)

Gambar 5 Struktur kimia Ampisilin.

Mekanisme kerja ampisilin di dalam sel bakteri adalah menghambat pembentukan dinding sel dengan cara mencegah bergambungnya asam N-asetilmuramat. Ampisilin digunakan untuk pengobatan infeksi saluran nafas dan saluran seni, gonorhoe,

gastrosentritis, meningitis, dan infeksi tipoid (Siswandono & Soekardjo 1995).

BAHAN DAN METODE

Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang dibutuhkan adalah 140 gram propolis kasar Trigona spp yang berasal dari Bogor, Jawa Barat, bakteri Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, E. coli, Pseudomonas aeruginosa, NaCl teknis, pepton, ekstrak yeast, glukosa, agar bakto, etanol 70%, propilen glikol teknis, akuades dan pereaksi-pereaksi dalam uji fitokimia.

Alat-alat yang digunakan adalah laminar air flow cabinet, inkubator, autoklaf, autopipet, alumunium foil, kapas, cawan Petri, vortex, alat-alat gelas, dan rotavapor.

METODE PENELITIAN

Ekstraksi Propolis

Propolis diekstraksi dengan metode Matienzo dan Lamorena (2004). Ekstraksi dilakukan dengan maserasi menggunakan etanol 70% sebagai pelarutnya. Sejumlah 140,58 gram propolis kasar Trigona spp direndam dalam 500 mL etanol 70%. Suspensi tersebut ditutup dan dikocok dengan shaker

selama 1 minggu dalam ruang gelap. Setelah 1 minggu filtrat disaring, lalu residunya dimaserasi kembali. Selanjutnya, fitrat diambil setiap hari selama 1 minggu atau sampai filtrat terakhir jernih.

Seluruh filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotavapor pada suhu 45ºC. Setelah itu, ekstrak pekat yang dilarutkan dalam propilen glikol sebanyak 1 kali volumenya, sehingga konsentrasi murni propolis sebesar 50% dari total ekstrak propolis.

Analisis Fitokimia

Analisis fitokimia dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa aktif pada ekstrak propolis secara kualitatif. Analisis fitokimia ini dilakukan berdasarkan metode Harborne (1987). Identifikasi yang dilakukan adalah uji flavonoid dan senyawa fenolik, uji tanin, uji minyak atsiri, uji steroid/triterpenoid, uji saponin, uji alkaloid, uji glikosida, uji gula pereduksi. Contoh propolis yang digunakan ialah ekstrak propolis yang telah diencerkan dengan akuades.

Uji flavonoid dan senyawa fenolik. Contoh propolis dengan pengenceran 1:2 dilarutkan dalam metanol lalu dipanaskan pada suhu 50°C. Filtrat ditambah larutan NaOH atau asam sulfat pekat. Warna merah atau jingga yang terbentuk akibat penambahan NaOH menunjukkan adanya senyawafenolik hidrokuinon dan merah akibat penambahan asam sulfat pekat menunjukkan adanya flavonoid. Pembanding yang digunakan ialah buah pinang.

Uji tanin. Contoh propolis dengan pengenceran 1:10 ditambah 1:2 mL FeCl3 10%. Jika terbentuk warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin. Pembanding adalah daun teh.

Uji minyak atsiri. Contoh propolis dilarutkan dengan alkohol lalu diuapkan hingga kering. Jika berbau aromatis spesifik, maka contoh mengandung minyak atsri.

Uji triterpenoid dan steroid. Contoh propolis dengan pengenceran 1:10 dipanaskan dengan etanol. Filtratnya diuapkan alu ditambah eter. Lapisan eter ditambah dengan pereaksi Liebermann Burchard (3 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat). Terbentuk warna hijau atau biru menunjukkan adanya steroid warna merah atau ungu menunjukkan adanya senyawa triterpenoid. Pembanding yang digunakan adalah kuning telus.

Uji saponin. Contoh propolis dengan pengeceran 1:10 dikocok selama 5 menit. Busa yang terbentuk setinggi tidak kurang dari 1 cm dan tetap stabil setelah didiamkan selama 15 menit menunjukkan adanya saponin. Pembanding yang digunakan adalah buah klerak.

(9)