1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1.Latar belakang
Preekl”mpsi” (PE) merup”k”n su”tu sindrom” klinis y”ng dide nisik”n seb”g”i su”tu onset b”ru d”ri hipertensi d”n proteinuri” sel”m” w”ktu p”ruh kedu” keh”mil”n (Powe et al, 2011). PE jug” bi”s di”rtik”n seb”g”i kondisi spesi k h”ny” p”d” keh”mil”n y”ng meningk”tk”n mort”lit”s d”n morbidit”s p”d” m”tern”l d”n fet”l. Di”gnosis PE diteg”kk”n p”d” tek”n”n d”r”h deng”n cut-off 140/90 mmHg d”n h”rus ”d” proteinuri” (Sh”msiet al, 2013). Ghulmiyy”h d”n Sib”i (2012) menyebutk”n b”hw” PE merup”k”n sindrom klinis deng”n k”r”kteristik onset b”ru d”ri hipertensi d”n proteinuri” setel”h 20 minggu usi” gest”si p”d” w”nit” y”ng sebelumny” normotensi.
Preekl”mpsi” s””t ini m”sih memberik”n morbidit”s d”n mort”lit”s m”tern”l m”upun perin”t”l terut”m” di neg”r” berkemb”ng. Prev”lensi kej”di”n preekl”mpsi” sekit”r 5% - 15% d”ri keseluruh”n keh”mil”n di duni”, dim”n” k”sus hipertensi d”l”m keh”mil”n term”suk preekl”mpsi” ditemuk”n d”l”m juml”h y”ng cenderung meningk”t d”n merup”k”n komplik”si medis tersering d”l”m keh”mil”n. Sekit”r 70% w”nit” y”ng didi”gnosis hipertensi d”l”m keh”mil”n merup”k”n k”sus preekl”mpsi” (Lei et ”l,2014). Komplik”si preekl”mpsi” menyeb”bk”n sekit”r 50.000 kem”ti”n m”tern”l ti”p t”hun. Di neg”r” berkemb”ng dim”n” keterb”t”s”n ”kses untuk mend”p”tk”n pen”ng”n”n keseh”t”n m”tern”l y”ng mem”d”i, ”ngk” kem”ti”n m”tern”l d”p”t menc”p”i 15% jik” dib”ndingk”n deng”n neg”r” m”ju y”ng sekit”r 0 - 1,8% (St”ff et ”l, 2013). Di Indonesi” 30 – 40% k”sus preekl”mpsi” menj”di penyeb”b kem”ti”n ibu h”mil d”n 30 – 50% menj”di penyeb”b kem”ti”n perin”t”l. Di RSUD Dr. Moew”rdi Sur”k”rt” kem”ti”n ibu h”mil y”ng diseb”bk”n oleh preekl”mpsi” y”itu 67,6% d”ri 37 k”sus preekl”mpsi” d”ri 1956 pers”lin”n p”d” t”hun 2008 (Sulistyow”ti et ”l, 2010).
2
ekl”mpsi” ”t”u kem”ti”n m”tern”l, h”l inil”h y”ng menj”di penyeb”b penting mort”lit”s m”tern”l khususny” di neg”r” berkemb”ng (Sh”msiet al, 2013). Terd”p”t b”ny”k komplik”si y”ng d”p”t ditimbulk”n d”ri preekl”mpsi”, meliputi ekl”mpsi”, hemolytic- elevated liver enzim and low platelet (HELLPsyndrome), Disseminated Intra Coagulant (DIC), hipertensi emergensi, hipertensi ensef”lop”ti d”n kebut””n d”er”h kortik”l serebri (Cre”sy,2014). Sekit”r 3% hingg” 5% PE ”k”n ber”khir p”d” mort”lit”s m”tern”l (Powe
et al, 2011).
S”mp”i s””t ini etiologi p”sti d”ri Preekl”mpsi” belum diket”hui d”n k”ren”ny” disebut seb”g”i dise”se of theory . Beber”p” teori mengen”i penyeb”b d”ri k”r”kteristik perkemb”ng”n ”bnorm”l pl”sent” p”d” trimester pert”m”. Perkemb”ng”n ”bnorm”l pl”sent” terut”m” proses ”ngiogenesis meng”kib”tk”n insu siensi pl”sent” d”n terlep”sny” m”teri”l pl”sent” mem”suki sirkul”si m”tern”l. P”d” proses endoteli”lis”si terj”di g”nggu”n sitotrofobl”s sert” inv”si ”rteri spir”lis p”d” miometrium y”ng tid”k ”deku”t. Proses pl”sent”si y”ng jelek ini menyeb”bk”n terj”diny” iskemi” d”n hipoksi” p”d” pl”sent”. Terlep”sny” m”teri”l pl”sent” memicu g”mb”r”n klinis t”h”p kedu” y”itu t”h”p simtom”tik. P”d” t”h”p ini berkemb”ng gej”l” hipertensi, g”nggu”n ginj”l d”n proteinuri”, d”n kerus”k”n end organ l”inny”. Sehingg” ”d”ny” g”nggu”n histologi, fungsi, d”n met”bolisme pl”sent” didug” s”ng”t bes”r per”n”nny” p”d” p”to siologi preekl”mpsi”. (Prib”di Adhi et ”l, 2015; Roberts J ”nd Hubel, 2009).
3
el”stis, sehingg” pembuluh d”r”h berdil”t”si menc”p”i 30 k”li d”ri sebelum h”mil. Ke”d””n inil”h y”ng menyeb”bk”n terj”diny” perub”h”n siologis. P”d” preekl”mpsi” inv”si trofobl”s gelomb”ng kedu” tid”k sempurn” ”t”u g”g”l terj”di. Deng”n demiki”n l”pis”n otot tunik” medi” pembuluh d”r”h tet”p seb”g”im”n” bi”s” sehingg” ”rteri spir”lis tid”k berdil”t”si d”n memungkink”n terj”diny” v”sokonstriksi. P”d” ke”d””n ini perub”h”n siologis tid”k terj”di. Akib”t keg”g”l”n inv”si trofobl”s ini ”k”n terj”di perub”h”n p”d” ”rteri spir”lis sehingg” terj”di penurun”n ”lir”n d”r”h uteropl”sent”, d”n terj”di hiperpl”si” tunik” intim” d”n proses ”terosis. P”d” h”sil peneliti”n
did”p”tk”n h”sil p”d” hiperpl”si” tunik” intim” p”d” kelompok
Preekl”mpsi”/Ekl”mpsi” 20 k”sus d”n kelompok normotensif tid”k dijump”i, ”terosis ”kut p”d” Preekl”mpsi”/Ekl”mpsi” 18 k”sus d”n kelompok normotensif tid”k dijump”i ( Lukito, 2007 ).
S”l”h s”tu teori mengen”i ”d”ny” ketid”kseimb”ng”n ”nt”r” produksi r”dik”l beb”s d”n sistem pert”h”n”n ”ntioksid”n ”kib”t iskemi” pl”sent”, menyeb”bk”n terj”diny” stres oksid”tif. Proses peroksid”si lipid di”ngg”p memiliki per”n”n penting did”l”mny”. Ide”lny” sel”m” keh”mil”n norm”l, peningk”t”n produksi r”dik”l beb”s keseimb”ng”nny” sel”lu dij”g” mel”lui produksi ”ntioksid”n y”ng cukup, n”mun p”d” preekl”mpsi” terj”di peningk”t”n produksi r”dik”l beb”s berlebih”n d”n penurun”n k”d”r ”ntioksid”n sehingg” menyeb”bk”n su”tu ke”d””n stres oksid”tif (Gede, 2013).
4 kerus”k”n endotel d”n produksi f”ktor v”so”ktif, y”ng mempromosik”n v”sokonstriksi. Seb”g”i t”ngg”p”n, oksid” nitr”t disintesis d”ri ”s”m ”mino L-Arginine, oleh kelu”rg” enzim sint”se oksid” nitr”t, y”ng terg”ntung k”lsium( Dorni”ck w”ll,2013 ).
L-Arginine tel”h disebutk”n b”hw” mempuny”i per”n j”lur L-Arginine-nitric oxide
5
inhibitor endogen eNOS, ”kib”t peningk”t”n ”ktivit”s ”rgin”se endotel, sebu”h de siensi p”d” substr”t L-Arginine; sebu”h de siensi p”d” kof”ktor y”ng dibutuhk”n untuk ”ktivit”s NOS d”n terh”d”p peningk”t”n stres oksid”tif bert”nggung j”w”b d”l”m degr”d”si nitrit oksid” y”ng cep”t ”kib”t re”ktivit”sny” y”ng tinggi deng”n O2- untuk membentuk peroksinitrit. Efekny”, beber”p” lini terbukti tel”h menemuk”n sebu”h per”n peningk”t”n stres oksid”tif p”d” preekl”mpsi”, penurun”n ekspresi enzim ”ntioksid”n d”n peningk”t”n m”rker stres oksid”tif, term”suk peningk”t”n k”rbonil protein d”n peroksid”si lipid, tel”h dil”pork”n sehubung”n deng”n pl”sent” m”nusi” begitu jug” leukosit m”tern”l, v”skul”tur d”n pl”sm”. Seb”g”i h”silny”, t”mp”k ”d” penurun”n k”p”sit”s protektif ”ntioksid”n tot”l p”d” w”nit” deng”n Preekl”mpsi” (C”m”cho Els” et ”l, 2015).
L-Arginine menurunk”n ”ngk” kej”di”n preekl”mpsi”, d”n frekuensi preekl”mpsi” p”d” kelompok ini sebes”r 14.5%. Penurun”n risiko p”d” kelompok
L-Arginine diestim”si sebes”r 26%, deng”n e k”si sebes”r 74%. L-Arginine menurunk”n ”ngk” kej”di”n preekl”mpsi” ber”t sec”r” signi k”n. Penemu”n ini konsisten deng”n l”por”n d”ri V”dillo et ”l. P”d” peneliti”n V”dillo, efek s”mping seperti s”kit kep”l”, p”lpit”si, d”n dizziness dil”pork”n, tet”pi peneliti”n ini tid”k ditemuk”n ”d”ny” efek s”mping seperti itu. Peneliti”n terb”ru menyebutk”n b”hw” L-Arginine menurunk”n tek”n”n d”r”h sistolik, di”stolik, d”n MAP. B”hk”n p”sien deng”n hipertensi kronis d”p”t menurunk”n dosis ob”t ”ntihipertensi merek”. H”sil ini serup” deng”n h”sil y”ng dil”pork”n oleh F”cchinetti dkk. P”d” studi ini, penurun”n ”ngk” kej”di”n preekl”mpsi” ber”t mengh”silk”n peningk”t”n usi” keh”mil”n d”n outcome perin”t”l y”ng b”ik (Adhi,2006)
6
1.2. Masalah Penelitian
Ap”k”h ”d” peng”ruh L-Arginine terh”d”p perb”ik”n kerus”k””n endotel ”rteri spir”lis y”itu menurunny” keteb”l”n tunik” intim” ”rteri spir”lis d”n meningk”tny” di”meter ”rteri spir”lis p”d” mencit model preekl”mpsi” ?
1.3.Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Menc”ri keben”r”n perbed””n g”mb”r”n histolop”tologi ”rteri spir”lis p”d” uterus mencit norm”l, mencit model preekl”mpsi”, d”n mencit model preekl”mpsi” setel”h diberik”n L-Arginine.
1.3.2 Tujuan Khusus
Menget”hui fungsi L-Arginine seb”g”i ter”pi preekl”mpsi”, terut”m” menurunny” keteb”l”n tunik” intim” ”rteri spir”lis d”n meningk”tny” di”meter ”rteri spir”lis.
1.4. Manfaat Penelitian
H”sil peneliti”n ini dih”r”pk”n d”p”t memberik”n m”nf””t untuk: 1. Keilmu”n
”. H”sil peneliti”n ini dih”r”pk”n m”mpu men”mb”h inform”si tent”ng ter”pi
L-Arginine p”d” k”sus preekl”mpsi” terut”m” kerus”k”n ”rteri spir”lis uterus berup” meningk”tny” keteb”l”n tunik” intim” d”n menurunny” di”meter ”rteri spir”lis.
b. H”sil peneliti”n ini dih”r”pk”n m”mpu memberik”n m”suk”n d”n pertimb”ng”n d”l”m pemeriks””n histop”tologi setel”h menget”hui efek pengob”t”n L-Arginine
7
2. Pel”y”n”n
Menj”di b”h”n pertimb”ng”n d”l”m pengelol””n k”sus preekl”mpsi” di l”p”ng”n d”n pemeriks””n klinis terk”it kerus”k”n ”rteri spir”lis p”d” uterus ”kib”t preekl”mpsi”.
3. Peneliti”n
Memberik”n sumb”ng”n penget”hu”n tent”ng efek L-Arginine p”d” ”rteri spir”lis uterus hew”n uji model preekl”mpsi” sehingg” d”p”t menj”di d”s”r peneliti”n sebelumny”.
4. Kedokter”n Kelu”rg”
Deng”n menget”hui ”d”ny” perbed””n g”mb”r”n histop”tologi setel”h pemberi”n
L-Arginine p”d” mencit bunting model preekl”mpsi”, dih”r”pk”n d”p”t digun”k”n seb”g”i model ”cu”n p”d” m”nusi” sehingg” bis” dikemb”ngk”n us”h”-us”h” preventif d”n kur”tif p”d” k”sus preekl”mpsi” p”d” m”nusi” sec”r” lebih dini.
1.5. Originalitas Penelitian
T”ble.1 Origin”lit”s Peneliti”n
N
O ( T”hun )Peneliti Judul V”ri”bel H”sil
9
2.1.1. Definisi
Preekl”mpsi” (PE) merup”k”n su”tu sindrom” klinis y”ng dide nisik”n seb”g”i su”tu onset b”ru d”ri hipertensi d”n proteinuri” sel”m” w”ktu p”ruh kedu” keh”mil”n (Poweet al, 2011). PE jug” bis” di”rtik”n seb”g”i kondisi spesi k h”ny” p”d” keh”mil”n y”ng meningk”tk”n mort”lit”s d”n morbidit”s p”d” m”tern”l d”n fet”l. Di”gnosis PE diteg”kk”n p”d” tek”n”n d”r”h deng”n cut-off 140/90 d”n h”rus ”d” proteinuri” (Sh”msi et al, 2013). Ghulmiyy”h d”n Sib”i (2012) menyebutk”n b”hw” PE merup”k”n sindrom klinis deng”n k”r”kteristik onset b”ru d”ri hipertensi d”n proteinuri” setel”h 20 minggu usi” gest”si p”d” w”nit” y”ng sebelumny” normotensi.
Sindrom ini berhubung”n deng”n ”d”ny” penurun”n perfusi uteropl”sent”, peningk”t”n kem”ti”n sel trofobl”s d”n ”ktiv”si sel endotel m”tern”l d”n jug” s”l”h s”tu indik”si m”yor dil”kuk”nny” oper”si ces”r elektif. Preekl”mpsi” dik”r”kteristik”n deng”n ”d”ny” oliguri”, xanthin oxidase, ”s”m si”lik, ”sp”rt”t tr”ns”min”se, kre”tinin, ”s”m ur”t, l”kt”t dehidrogen”se, d”n edem” lok”l (Ek”mb”r”n, 2011).
Di”gnosis preekl”mpsi” merup”k”n di”gnosis klinis.Seb”g”im”n” dide nisik”n oleh American College of Obstetrics and Gynecology, di”gnosis preekl”pmsi” diteg”kk”n deng”n ”d”ny” tek”n”n d”r”h >140/90 mmHg p”d” 2 k”li pemeriks””n y”ng dikombin”sik”n deng”n ”d”ny” proteinuri” >300 mg per h”ri (Powe et al, 2011). Kondisi preekl”mpsi” ber”t ditentuk”n jik” ditemuk”n s”l”h s”tu kriteri” seb”g”i berikut: tek”n”n d”r”h > 160/110 mmHg p”d” du” k”li pemeriks””n d”l”m w”ktu 6 j”m, proteinuri” > 5 gr”m d”l”m 24 j”m ”t”u +3 d”l”m pemeriks””n dipstick du” spesimen urin d”l”m 4 j”m, oliguri” (urin < 500 mL d”l”m 24 j”m) (Ek”mb”r”n, 2011).
10
hipertensi disert”i timbulny” proteinuri”, tet”pi keterlib”t”n m”tern”l d”n fet”l seperti insu siensi ren”l, disfungsi hep”toseluler ”t”upun pertumbuh”n j”nin terh”mb”t. De nisi preekl”mpsi” d”p”t digun”k”n d”l”m pr”ktik klinis dim”n” penil”i”n klinis penting d”l”m pen”t”l”ks”n””n, ”t”upun jug” d”l”m peneliti”n dim”n” kriteri” objektif terg”ntung peneliti. D”l”m peneliti”n ini tid”k digun”k”n de nisi kl”sik preekl”mpsi” (St”ff et ”l, 2013).
F”ktor risiko terj”diny” preekl”mpsi” ”nt”r” l”in nulip”r” (multip”r” deng”n p”s”ng”n b”ru mempuny”i risiko y”ng s”m” seperi nulip”r”), hipertensi kronis, di”betes mellitus, peny”kit ginj”l, obesit”s, kondisi hiperko”gulit”s (mis”lny” sindrom” ”nti fosfolipid), usi” tu” m”tern”l d”n kondisi y”ng menyeb”bk”n bert”mb”hny” m”ss” pl”sent” (mis”lny” keh”mil”n multifetus d”n mol” hid”tidos”). Riw”y”t preekl”mpsi” p”d” keh”mil”n sebelumny” meningk”tk”n risiko berul”ngny” preekl”mpsi”. P”d” keb”ny”k”n k”sus tid”k ditemuk”n riw”y”t kelu”rg”, ”k”n tet”pi riw”y”t kelu”rg” der”j”t pert”m” meningk”tk”n 2 s”mp”i 4 k”li lip”t risiko terj”diny” preekl”mpsi” (W”ng et ”l, 2009).
Peneliti”n epidemiologi mend”p”tk”n 20% perempu”n deng”n riw”y”t preekl”mpsi” berkemb”ng menj”di hipertensi ”t”u terd”p”t mikro”lbuminuri” hingg” 7 t”hun setel”hny” dib”ndingk”n h”ny” 2% p”d” perempu”n t”np” riw”y”t preekl”mpsi”. Risiko j”ngk” p”nj”ng terh”d”p peny”kit k”rdiov”skul”r d”n serebrov”skul”r meningk”t du” k”li lip”t p”d” preekl”mpsi” d”n hipertensi gest”sion”l. Preekl”mpsi” ber”t, rekurensi preekl”mpsi”, preekl”mpsi” disert”i pers”lin”n preterm, d”n preekl”mpsi” disert”i pertumbuh”n j”nin terh”mb”t mempuny”i hubung”n ku”t terj”diny” peny”kit k”rdiov”skul”r di kemudi”n h”ri. Preekl”mpsi” d”n peny”kit k”rdiov”skul”r mempuny”i f”ktor risiko y”ng s”m” ”nt”r” l”in hipertensi kronis, di”betes, obesit”s, peny”kit ginj”l, d”n sindrom” met”bolik. Peneliti”n l”inny” menunjukk”n preekl”mpsi” seb”g”i f”ktor risiko peny”kit g”g”l ginj”l (end stage renal disease) di kemudi”n h”ri (W”ng et ”l, 2009).
11
hipertensi, edem” serebri, HELLP, d”n IUGR ( Intr” Uterine Growth Restriction ) (Perkin,2011). Bi”s”ny” sindrom ini terut”m” muncul p”d” ”khir trimester kedu” s”mp”i ketig” keh”mil”n. Gej”l” ”k”n berkur”ng ”t”u menghil”ng setel”h mel”hirk”n, sehingg” ter”pi de nitifny” ”d”l”h meng”khiri keh”mil”n (Cunningh”m et al, 2014).
2.1.2. Patogenesis
12
G”mb”r 1. B”g”n p”to siologi preekl”mpsi” (George d”n Gr”nger, 2010)
Pl”cent”l Ischemi”
↑ TNF-α
↑ AT1-AA HIF-1α
↑ Pl”cent”l ”nd m”tern”l
pl”sm” sFlt-1
↑ ROS ↓ Pl”sm” VEGF, ↑ sEng
PlGF
Endotheli”l dysfunction
↓NO ↑ ET-1
Hypertension
13
hipoksi” ini p”d” peneliti”n menggun”k”n tikus menunjukk”n ”d”ny” peningk”t”n k”d”r sFlt-1 serum d”n menyeb”bk”n ”d”ny” sindrom” menyerup”i PE (Gilbert et al , 2007).
Kel”in”n tersebut mungkin berk”it”n deng”n j”lur nitrit oksid”, y”ng memberik”n kontribusi subst”nsi”l untuk mengontrol tek”n”n v”skuler. Sel”in nitrit oksid”, ”d”ny” stres oksid”tif mem”cu pelep”s”n d”ri r”dik”l beb”s, lipidoksid”,sitokin d”n sFlt-1. H”l tersebut meng”kib”tk”n disfungsi endotel deng”n g”nggu”n perme”bilit”s v”skuler d”n peningk”t”n tek”n”n d”r”h (Ek”mb”r”n,2011).
14
Keter”ng”n g”mb”r : merup”k”n g”mb”r”n perbed””n proses inv”si trofobl”s p”d” keh”mil”n norm”l d”n preekl”mpsi” (Powe et al, 2011).
Seperti y”ng disebutk”n sebelumny”, p”d” g”mb”r di ”t”s d”p”t dijel”sk”n b”hw” PE terj”di jug” k”ren” penurun”n fungi d”ri f”ktor ”ngiogenik seperti VEGF d”n ”n”logny” y”ng di h”silk”n pl”sent” y”itu PIGF. F”ktor-f”ktor tersebut s”ng”t penting p”d” proses embriogenik v”skulogenesis d”n ”ngiogenesis. P”d” g”mb”r di ”t”s jug” terlih”t ”d”ny” pl”sent”si norm”l, sitotrofobl”s inv”sif fetus ”k”n menginv”si ”rteri spir”lis m”tern”l, mengub”h v”s” d”r”h tersebut v”s” d”r”h resisten k”liber kecil menj”di v”s” k”p”sit”nsi k”liber bes”r y”ng m”mpu menj”min perfusi ”deku”t b”gi pertumbuh”n fetus. Sel”m” proses inv”si v”skuler, sitotrofobl”s berub”h d”ri fenotip epitel menj”di fenotip endotel, sebu”h proses y”ng merujuk p”d”
pseudo-v”skulogenesis ”t”u mimikri v”skuler. P”d” PE, terj”di keg”g”l”n sitotrofobl”s untuk meng”dopsi fenotip inv”sif endoteli”l. Seb”likny” inv”si terh”d”p ”rteri spir”lis d”ngk”l d”n v”s” d”r”h tet”p menj”di v”s” d”r”h y”ng resisten deng”n k”liber kecil (Powe et al, 2011).
2.2. Stres oksidatif pada kehamilan normal dan preeklampsia
15
Y”ng kedu” melib”tk”n fenomen” ischemia-reperfusion(I/R). Studi ”ngiogr” terh”d”p pembuluh d”r”h uterus d”ri ker” rhesus menunjukk”n b”hw” p”d” keh”mil”n norm”l, ”lir”n d”ri ”rteri spir”lis ke intervillous space sering intermiten, ”kib”t kompresi ekstern”l ”rteri sel”m” kontr”ksi uterus p”d” m”nusi” d”n b”hk”n ”kib”t perub”h”n postur”l. Sehingg” stimulus I/R der”j”t tertentu merup”k”n g”mb”r”n norm”l p”d” keh”mil”n, terut”m” setel”h mendek”ti ”term, dim”n” fetus d”n pl”sent” mengelu”rk”n oksigen d”l”m juml”h b”ny”k d”ri intervillous space. Stimulus kronis ini menyeb”bk”n peningk”t”n perlindung”n r”dik”l beb”s p”d” pl”sent”, sehingg” menurunk”n stress oksid”tif. Seperti p”d” keh”mil”n mud”, stress oksid”tif y”ng terkontrol b”ik ”k”n berper”n d”l”m remodeling plasenta sec”r” terus menerus d”n pentiong untuk fungsi pl”sent” seperti tr”nsport d”n sintesis hormone. D”l”m konteks ini, ”bortus d”n preekl”mpsi” d”p”t merup”k”n ”kib”t m”l”d”pt”si sement”r” terh”d”p perub”h”n k”d”r oksigen (Su”rd”n”, 2012).
Preekl”mpsi” mempuny”i p”to siologi y”ng kompleks, penyeb”b ut”m”ny” y”itu ”d”ny” pl”sent”si y”ng ”bnorm”l. Inv”si y”ng tid”k efektif d”ri sel sitotrofobl”s p”d” ”rteri spir”lis preekl”mpsi” tel”h l”m” diteliti. Peneliti”n ter”khir menunjukk”n b”hw” inv”si sel sitotrofobl”s p”d” preekl”mpsi” terj”di kel”in”n. Kel”in”n tersebut mungkin berk”it”n deng”n j”lur nitrit oksid”, y”ng memberik”n kontribusi subst”nsi”l untuk mengontrol tek”n”n v”skuler. Sel”in nitrit oksid”, ”d”ny” stres oksid”tif mem”cu pelep”s”n d”ri r”dik”l beb”s, lipid oksid”, sitokin d”n sFlt-1. H”l tersebut meng”kib”tk”n disfungsi endotel deng”n hiperperme”bilit”s v”skuler, trombo li” d”n hipertensi (Li Zhihe et ”ll 2007, Siddiqui A, 2011).
16
”ntioksid”n sehingg” menyeb”bk”n su”tu ke”d””n stres oksid”tif (Gede, 2013).
Hipotesis y”ng penting p”d” p”togenesis d”ri preekl”mpsi” ”d”l”h terd”p”tny” seny”w” y”ng dih”silk”n j”ring”n uteropl”sent” y”ng m”suk ke sirkul”si ibu d”n menyeb”bk”n kerus”k”n endotel. Perub”h”n fungsi endotel y”ng terj”di di”ngg”p seb”g”i penyeb”b ut”m” timbulny” gej”l” preekl”mpsi”: hipertensi, proteinuri” d”n ”ktiv”si sistem hemost”sis. Seny”w” y”ng dih”silk”n j”ring”n uteropl”sent” y”ng d”p”t merus”k endotel itu ”d”l”h h”sil met”bolisme lipid terut”m” y”itu peroksid”se lipid. Peroksid”se lipid ini diproduksi p”d” s””t r”dik”l beb”s menyer”ng ”s”m lem”k tid”k jenuh d”n kolesterol p”d” membr”n sel d”n lipoprotein. Peroksid”se lipid merup”k”n z”t toksik y”ng bis” menyeb”bk”n kerus”k”n sel b”ik sec”r” l”ngsung m”upun tid”k l”ngsung (Gede, 2013).
Ke”d””n hipoksi” y”ng terj”di d”p”t meningk”tk”n juml”h xantin dehidrogenase
y”ng terkonversi menj”di xantin oksigenase y”ng ”k”n mendegr”d”si purin, xantin d”n
hipoxantin menj”di ”s”m ur”t. D”l”m proses degr”d”si tersebut terbentuk jug” superoksid” y”ng merup”k”n su”tu r”dik”l beb”s y”ng poten. Terj”diny” re”ksi r”dik”l beb”s ini dit”nd”i deng”n meningk”tny” lipid peroksid” p”d” p”sien preekl”mpsi” dib”ndingk”n deng”n keh”mil”n norm”l. Re”ksi r”dik”l beb”s inil”h y”ng ”k”n menimbulk”n disfungi endotel, y”itu terj”di endoteolisis d”n perub”h”n ultr”strukturny” p”d” ”l”s pl”sent” d”n pembuluh d”r”h uterus, k”ren” r”dik”l beb”s ini bere”ksi deng”n membr”n sel sehingg” terbentuk lipid peroksid”se d”n ”ldehid” y”ng toksik sehingg” d”p”t mem”tik”n sel (Gede, 2013).
2.3. Histopatologi arteri spiralis uterus pada kehamilan normal dan preeklampsia
17
dindingny” sehingg” tet”p responsive terh”d”p ”gen v”so”ktif y”ng bekerj” p”d” otot polos ”t”u sel endotel. Sistem ”rteri spir”lis y”ng mend”r”hi desidu” b”s”lis tep”t dib”w”h bl”stokist” y”ng berimpl”nt”si, d”n ”khirny” mend”r”hi jug” ru”ng intervillus, meng”l”mi perub”h”n y”ng dr”m”tis. Arteriol” d”n ”rteri spir”lis ini diinv”si oleh sitotrofobl”s. Sel”m” proses ini, dinding pembuluh d”r”h desidu” b”s”lis dih”ncurk”n. H”ny” tersis” selubung pembuluh t”np” otot polos ”t”upun sel endotel. Akib”t y”ng penting d”ri h”l tersebut ”d”l”h s”lur”n pembuluh d”r”h m”tern”l ini y”ng menj”di pembuluh d”r”h uteropl”sent” tid”k responsive terh”d”p ”gen v”so”ktif (Cunningh”m, 2014).
P”d” keh”mil”n norm”l terj”di inv”si trofobl”s p”d” pembuluh d”r”h di b”gi”n desidu”. Inv”si trofobl”s gelomb”ng pert”m” ini terj”di p”d” usi” keh”mil”n 10–16 minggu. P”d” usi” keh”mil”n 22 minggu terj”di inv”si trofobl”s gelomb”ng kedu”, di m”n” sel-sel trofobl”s mem”suki ”rteri spir”lis di l”pis”n desidu” s”mp”i ke l”pis”n miometrium. L”pis”n otot dinding pembuluh d”r”h tersebut dig”ntik”n oleh j”ring”n el”stis, sehingg” pembuluh d”r”h berdil”t”si menc”p”i 30 k”li d”ri sebelum h”mil. Ke”d””n inil”h y”ng menyeb”bk”n terj”diny” perub”h”n siologis. P”d” PE inv”si trofobl”s gelomb”ng kedu” tid”k sempurn” ”t”u g”g”l terj”di. Deng”n demiki”n l”pis”n otot tunik” medi” pembuluh d”r”h tet”p seb”g”im”n” bi”s” sehingg” ”rteri spir”lis tid”k berdil”t”si d”n memungkink”n terj”diny” v”sokonstriksi. P”d” ke”d””n ini perub”h”n siologis tid”k terj”di. Akib”t keg”g”l”n inv”si trofobl”s ini ”k”n terj”di perub”h”n p”d” ”rteri spir”lis sehingg” terj”di penurun”n ”lir”n d”r”h uteropl”sent”, terj”di hiperpl”si” tunik” intim” d”n proses ”terosis. P”d” h”sil peneliti”n did”p”tk”n h”sil p”d” hiperpl”si” tunik” intim” p”d” kelompok Preekl”mpsi”/Ekl”mpsi” 20 k”sus d”n kelompok normotensif tid”k dijump”i, ”terosis ”kut p”d” Preekl”mpsi”/Ekl”mpsi” 18 k”sus d”n kelompok normotensif tid”k dijump”i ( Lukito, 2007 ).
18
”k”n dil”pisi oleh trofobl”s endovascular. Arteriol” miometrium y”ng lebih d”l”m tid”k kehil”ng”n l”pis”n endotel d”n j”ring”n muskoel”stik merek”, d”n rer”t” di”meter ekstern”l merek” h”ny” seteng”h di”meter pembuluh p”d” pl”sent” norm”l. P”d” bebeber”p” peneliti”n memperlih”tk”n b”hw” der”j”t g”nggu”n inv”si trofobl”s p”d” ”rteri spir”lis berhubung”n deng”n kep”r”h”n peny”kit hipertensi. ( Cunningh”m, 2009 ).
Ad”ny” perub”h”n preekl”mpsi” dini, term”suk kerus”k”n endotel, insud”si komponen pl”sm” ke d”l”m dinding pembuluh d”r”h, prolifer”si sel miointim”, d”n nekrosi tunik” medi”. Lipid ”w”lny” ter”kumul”si d”l”m sel miointim” d”n sel”njutny” d”l”m m”krof”g. Sel y”ng dipenuhi lipid sem”c”m ini d”n temu”n terk”it disebut seb”g”i ”terosis. Bi”s”ny”, pembuluh d”r”h y”ng terken” ”terosis ”k”n meng”l”mi dil”t”si ”neurism”l (Cunningh”m,2009).
Y”ng terb”ik dipel”j”ri ”d”l”h p”d” mencit, deng”n m”s” y”ng singk”t (19 - 20) h”ri
keh”mil”n d”n ”d”ny” remoderlling ”rteri spir”l desidu” signi k”n. P”d” mencit, terd”p”t Natural killer sel y”ng terut”m” bert”nggung j”w”b untuk remodelling ”rteri d”l”m spesies ini. Inv”si trofobl”s di mencit rel”tif d”ngk”l d”n sement”r” dib”t”si s”mp”i ”khir keh”mil”n, umumny” di”ngg”p seb”g”i kontributor minor terj”diny” remodeling ”rteri (Burke, 2013).
19
Perub”h”n ”rteri spir”l sel”m” keh”mil”n. (A) tr”nsform”si siologis norm”l ”rteri spir”l p”d” keh”mil”n norm”l. Lumen ”rteri spir”l (t”nd” bint”ng) ”d”l”h dil”t”si. Sel-sel trofobl”s y”ng in ltr”si dinding ”rteri spir”l. (B) Keg”g”l”n tr”nsform”si siologis ”rteri spir”l p”d” p”sien deng”n preekl”mpsi”. Lumen ”rteri (t”nd” bint”ng) tid”k meleb”r. L”pis”n medi”l ”rteri spir”l y”ng utuh. Meskipun b”ny”k trofobl”s interstiti”l mengelilingi ”rteri spir”l, trofobl”s tid”k menginv”si dinding pembuluh d”r”h (Kim,2015).
2.4. L-Arginine
Arginine ”d”l”h s”l”h s”tu bentuk ”s”m ”mino esensi”l, bentuk ”ktif d”l”m
L-form, y”ng disintesis oleh sel-sel endotel d”n diekskresik”n lew”t urin. Arginine tel”h diket”hui seb”g”i ter”pi d”ri berb”g”i peny”kit d”n berper”n seb”g”i diet. L-Arginine
”d”l”h substr”t nitrit oksid” (NO), sebu”h v”sodil”tor y”ng potent, y”ng mungkin mem”ink”n per”n ut”m” d”l”m regul”si tek”n”n d”r”h. Peneliti”n deng”n model hew”n cob” menunjukk”n b”hw” L-Arginine-No system meng”l”mi upregul”si sel”m” keh”mil”n, d”n hipertensi, proteinuri”, IUGR, d”n kerus”k”n glomerulus d”p”t terj”di ”kib”t blok”de d”ri sintesis NO, sement”r” hipertensi ”kib”t inhibisi sintesis NO d”p”t diperb”iki deng”n suplement”si L-Arginine. P”d” m”nusi”, pemberi”n L-Arginine d”p”t meningk”tk”n sirkul”si uteropl”sent” d”n menurunk”n tek”n”n d”r”h m”tern”l, d”n stress oksid”tif d”p”t berper”n seb”g”i kunci ut”m” d”l”m perkemb”ng”n disfungsi endotel d”n preekl”mpsi”. Oleh k”ren” itu, L-Arginine mungkin d”p”t menj”di opsi ter”pi b”ru untuk hipertensi p”d” keh”mil”n. (Shunping Gui et ”ll 2013).
20
ben”r-ben”r digun”k”n ul”ng d”l”m siklus ure” ”g”r h”ti memberik”n kontribusi sedikit ”t”u tid”k s”m” sek”li untuk uks ”rginin pl”sm”.
L-Arginine bi”s”ny” merup”k”n sekit”r 5 – 7 % d”ri k”ndung”n ”s”m ”mino d”ri diet dew”s” kh”s y”ng seh”t. Ini dihitung untuk ”sup”n r”t”-r”t” 2,5 – 5 g/h”ri, y”ng h”ny” memenuhi persy”r”t”n minim”l tubuh untuk memperb”iki j”ring”n, sintesis protein d”n pemelih”r””n sel kekeb”l”n tubuh. L-Arginine dis”mp”ik”n mel”lui s”lur”n pencern””n (GIT) diser”p d”l”m jejunum d”n ileum d”ri usus kecil. Sebu”h sistem tr”nsport”si ”s”m ”mino tertentu (y+ tr”nsporter) memf”silit”si proses ini; sistem tr”nsport”si ini jug” bert”nggung j”w”b untuk memb”ntu peng”ngkut”n ”s”m ”mino d”s”r l”inny” L-lysine d”n L-histidine. Sekit”r 60% d”ri L-Arginine y”ng diser”p dimet”bolisme oleh GIT, d”n h”ny” 40% menc”p”i sirkul”si sistemik utuh (Z.G”d, 2010).
P”d” kondisi norm”l, tubuh m”mpu mensintesis L-Arginine untuk mencukupi kebutuh”n, tet”pi p”d” kondisi stress tertentu, dim”n” terj”di peningk”t”n kebutuh”n terh”d”p L-Arginine, produksi d”l”m tubuh tid”k l”gi m”mpu mencukupi, d”n p”d” s””t itu L-Arginine d”l”m m”k”n”n menj”di s”ng”t essensi”l. L-Arginine b”ny”k dijump”i p”d” m”k”n”n ”nt”r” l”in k”c”ng k”c”ng”n (brazil nuts d”n ”lmonds) ker”ng, d”n term”suk d”ging s”pi, d”ging b”bi. L-Arginine disintesis terut”m” diginj”l, memeg”ng per”n”n penting d”l”m siklus krebs-henseleit urea. L-ornithine d”n L-citrulline
merup”k”n precursor p”d” sintesis L-Arginine, y”ng kemudi”n dikonversi menj”di ure” d”n Lorhithine oleh enzim ”rgin”se. Seb”gi”n L-Argininee y”ng tid”k dikonversi m”suk d”l”m sirkul”si d”n didistribusik”n keseluruh j”ring”n tubuh d”n dimet”bolisme. Seb”gi”n kecil L-Arginine disintesis di liver. An”lisis f”rm”kokinetik menunjuk”n b”hw”
L-Arginine dose-related kinetics. Bio”v”il”bilit”s or”l sekit”r 70% d”n konsentr”si pl”sm” m”ksimum dic”p”i lebih l”mb”t d”rip”d” setel”h pemberi”n intr”ven”. H”l ini berhubung”n deng”n ”bsorbsi y”ng l”mb”t p”d” tr”ktus g”strointestin”l. L-Arginine
21
(Andhi,2006).
2.5. Peran L-Arginine dalam preeklampsia
L-Arginine bertind”k seb”g”i precursor NO d”n diub”h menj”di NO d”n
L-citrulline oleh NOS, seperti y”ng dijel”sk”n d”l”m b”gi”n p”to siologi preekl”mpsi”. Ini tel”h menj”di fokus peneliti”n y”ng bertuju”n untuk menyelidiki per”n penceg”h”n d”l”m w”nit” berisiko tinggi untuk menj”di preekl”mpsi”. Sebu”h studi d”ri infus intr”ven” L-Arginine p”d” w”nit” h”mil menunjuk”n penurun”n y”ng signi k”n p”d” tek”n”n d”r”h, efek y”ng lebih bes”r p”d” w”nit” preekl”mpsi”. B”ru-b”ru ini, focus p”d” efek d”ri suplement”si L-Arginine p”d” penceg”h”n preekl”mpsi” w”nit” y”ng berisiko tinggi. Sebu”h ”c”k percob””n terkontrol menunjuk”n b”hw” suplement”si diet deng”n kombin”si L-Arginine d”n ”ntioksid”n dik”itk”n deng”n penurun”n y”ng signi k”n d”l”m kej”di”n preekl”mpsi”, dib”ndingk”n deng”n ”ntioksid”n sendiri d”n pl”cebo (V”dillo-Orteg” F et ”ll, 2011). Menging”t b”hw” L-Arginine ”d”l”h suplemen m”k”n”n y”ng tersedi” sec”r” lu”s , bukti tent”ng efek y”ng menguntungk”n bis” menyedi”k”n s”r”n” y”ng l”y”k untuk menceg”h preekl”mpsi”. M”k”, peneliti”n lebih l”njut, d”l”m per”n untuk mengur”ngi kej”di”n preekl”mpsi” p”d” popul”si berisiko rend”h (T”m”nrit Joh”l et ”ll, 2014).
Konsentr”si L-Arginine tel”h dibuktik”n sec”r” signi k”n berkur”ng p”d” w”nit” deng”n preekl”mpsi” bil” dib”ndingk”n deng”n w”nit” y”ng seh”t t”np” peny”kit, deng”n or”ng l”in menunjukk”n perub”h”n d”l”m tr”nsport”si substr”t. N”mun, t”mp”k b”hw” r”sio ADMA untuk L-Arginine (buk”n konsentr”si mutl”k L-Arginine) mungkin lebih penting d”l”m menentuk”n ”ktivit”s nitr”t oksid” sint”se d”n produksi berikutny” r”dik”l beb”s oksigen, sehingg” mencipt”k”n siklus meng”b”dik”n nitr”t disfungsi sint”se oksid” (Dorni”ck w”ll,2013).
Peneliti”n deng”n model hew”n cob” menunjukk”n b”hw” system
22
menurunk”n tek”n”n d”r”h m”tern”l d”n stress oksid”tif d”p”t berper”n seb”g”i kunci ut”m” d”l”m perkemb”ng”n disfungsi endotel d”n preekl”mpsi”. Oleh k”ren” itu,
L-Arginine mungkin d”p”t menj”di opsi ter”pi b”ru untuk hipertensi p”d” keh”mil”n (Shunping et al, 2013).
2.6. Preeklampsia Pada Mencit (Mus musculus)
Mencit (Mus musculus) ”d”l”h hew”n m”m”li” penger”t (Rodentia) y”ng term”suk d”l”m f”mili Muridae (tikus-tikus”n). Mencit b”ny”k digun”k”n d”l”m peneliti”n dik”ren”k”n m”s” reproduksi d”n perkemb”ng”nny” y”ng singk”t, kem”mpu”nny” untuk bert”h”n hidup d”n menyesu”ik”n diri deng”n perub”h”n sert” sec”r” genetik”, mencit ”d”l”h m”m”li” deng”n kode genetik p”ling menyerup”i m”nusi” (Yue et ”l, 2014).
HLA-G merup”k”n molekul MHC kel”s 1b non kl”sik, bersif”t monomor k d”n memiliki kem”mpu”n mengh”mb”t ”ktivit”s sel NK d”n LGL desidu” y”ng berfungsi mel”w”n sel trofobl”s sehingg” HLA-G mempuny”i fungsi melindungi trofobl”s d”ri peng”ruh imun m”tern”l. Sel”m” keh”mil”n trofobl”s mempert”h”nk”n peningk”t”n regul”si ekspresi HLA-G sehingg” kerj” trofobl”s d”l”m menginv”si desidu” sistem v”skuler m”tern”l berj”l”n b”ik. Jik” HLA-G tid”k diekspresik”n ”t”u menurun, kem”mpu”n trofobl”s ”k”n berkur”ng d”l”m menginv”si uterus (di”ngg”p non-self). Jik” trofobl”s tid”k menginv”si ”rteri m”tern”l deng”n b”ik m”k” ”lir”n uteropl”senter menurun d”n terj”di hipoksi” pl”sent” y”ng menyeb”bk”n preekl”mpsi” (Soloski et al, 2008).
23
HLA-G p”d” m”nusi”. Embrio mencit y”ng mengekspresik”n Q”-2 mengh”silk”n kecep”t”n pembel”h”n y”ng lebih ny”t”, surviv”l s”mp”i ”term d”n mengh”silk”n ber”t b”d”n l”hir y”ng b”ik d”n seb”likny” ”p”bil” mencit tid”k mengekspresik”n Q”-2 m”k” ”k”n terj”di kegugur”n, kem”ti”n j”nin mencit, pers”lin”n prem”tur d”n ber”t l”hir j”nin mencit y”ng rend”h (Pl”yf”ir et al, 2009; Roth, 2013).
2.7. Penelitian yang Relevan
Dorni”ck w”l (2013) d”l”m peneliti”nny” meny”t”k”n terd”p”t bukti khusus y”ng berk”it”n deng”n tind”k”n mek”nistik d”ri L-Arginine p”d” keh”mil”n lebih terb”t”s. Peneliti”n p”d” hew”n y”ng melib”tk”n tikus d”n mencit tel”h diinduksi tur preekl”mpsi”, term”suk hipertensi, proteinuri” d”n h”mb”t”n pertumbuh”n j”nin setel”h pengh”mb”t”n ”ktivit”s nitr”t oksid” sint”se. NG-nitro-L-Arginineee methyl ester (L-NAME) merup”k”n inhibitor penting d”ri oksid” nitr”t sint”se, d”n, p”d” tikus h”mil, infus menginduksi hipertensi d”n tur preekl”mpsi” l”inny”. Y”ng penting, tur ini t”mp”kny” reversibel setel”h pengob”t”n deng”n L-Arginine, deng”n hew”n diperl”kuk”n L-NAME y”ng kemudi”n diperl”kuk”n deng”n L-Arginine memiliki ekskresi sedikit protein urin, penurun”n tek”n”n d”r”h y”ng signi k”n.
2.8. Cara Pemeriksaan Histopatologi dengan Menggunakan Mikroskop
Pembu”t”n prep”r”t histop”tologi dil”kuk”n deng”n c”r” org”n uterus di ks”si deng”n menggun”k”n l”rut”n Netral Buffer Form”lin 10% kemudi”n dipotong d”n dim”sukk”n ke d”l”m temp”t spesimen y”ng terbu”t d”ri pl”stik. Sel”njutny” dil”kuk”n proses dehidr”si p”d” ”lkohol konsentr”si bertingk”t y”itu ”lkohol 70%, 80%, 90% ”lkohol ”bsolute I, ”bsolute II m”sing-m”sing 2 j”m. L”lu dil”kuk”n penjernih”n deng”n
24
pembes”r”n 400x. P”r”meter y”ng dinil”i y”itu hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosis ”rteri spir”lis. Peneliti mel”kuk”n pengukur”n hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosis ”rteri spir”lis d”ri seti”p prep”r”t blok p”r” n.
2.9. Cara Pembuatan Preparat dan Pemeriksaan Secara Miroskopis Sediaan Uutuk Pemeriksaan Histologi.
J”ring”n ”t”u org”n y”ng diterim” h”rus d”l”m ke”d””n ter ks”si deng”n form”lin buffer 10% (perb”nding”n j”ring”n d”n c”ir”n ks”si, 1:9 ) d”n ditutup r”p”t.
A. Buffer formalin 10%
1. Form”ldehid 40% H.CHO = 100 ml
2. Sodium Phosp”t monob”sic N”H2PO4.H2O = 4 gr”m 3. Sodium Phop”t dib”sic N”2HPO4 = 6.5 gr”m
4. Aqu”dest = 900 ml
B. Pemeriks””n M”kroskopis
Pemeriks””n m”kroskopis dil”kuk”n oleh dokter tug”s ”n”lis keseh”t”n/teknisi l”bor”torium mend”mpingi dokter, mel”kuk”n penc”t”t”n h”sil pemeriks””n dokter. P”d” t”h”p ini dokter jug” ”k”n memotong j”ring”n y”ng dicurig”i
C. Prosessing J”ring”n
Untuk prosessing j”ring”n mem”k”i ”l”t tissue prosessor automatic y”ng bekerj” ± 18,5 j”m (bis” diub”h sesu”i kebutuh”n). T”h”p”n prosessing j”ring”n y”itu, ks”si, dehidr”si, clearing, d”n in ltr”si p”r” n. T”h”p”n kerj” p”d”
Tissue Automatics Prosessor
1. Fiks”si:Botol 1. Buffer Formalin 10% 2 j”m 2. Dehidr”si : Botol 2. Alkohol 70% 1,5 j”m
25
Botol 4. Alkohol 95% 1,5 j”m
Botol 5. Alkohol ”bsolute I 1,5 j”m Botol 6. Alkohol ”bsolute II 1,5 j”m Botol 7. Alkohol ”bsolute III 1,5 j”m 3. Clearing : Botol 8. Xylol I 1 J”m
Botol 9. Xylol II 1,5 J”m
Botol 10. Xylol III 1,5 J”m
4. In ltr”si p”r” n : Botol 11. P”r”f n c”ir I 1,5 j”m
Botol 12. P”r”f n c”ir II 2 j”m
➔ Juml”h 18,5 j”m
D.Pengeblokk”n
Cara Kerja :
1. H”ng”tk”n p”r” n c”ir, pinset, d”n penutup cet”k”n
2. P”r” n c”ir ditu”ngk”n ked”l”m cet”k”n
3. J”ring”n d”ri prosessing dim”suk”n ked”l”m cet”k”n y”ng tel”h disi p”r” n c”ir, tek”n j”ring”n ”g”r sem”kin menempel di d”s”r cet”k”n
4. Tutup cet”k”n di”mbil, let”kk”n di”t”s cet”k”n d”n di tek”n. P”s”ng etiket di pinggir
5. Bi”rk”n s”mp”i membeku
6. Setel”h beku, kelu”rk”n d”ri cet”k”n. R”pik”n sisi-sisi blok. G”nti etiket deng”n y”ng perm”nen
E. Pemotong”n deng”n Mikrotom
26
di freezer ±15 menit ”t”u diberi b”tu es
2. Blok dijepit p”d” mikrotom kemudi”n dipotong deng”n pis”u mikrotom. Kemiring”n : ± 300 , Teb”l blok p”r” n ± 2-5 mikron
3. H”sil pemotong”n (berup” pit”/iris”n tipis y”ng s”ling bers”mbung) dim”sukk”n ked”l”m waterbath y”ng diisi ”ir y”ng sud”h dih”ng”tk”n 50 0 C, kemudi”n di”mbil deng”n k”c” objek (Melet”kk”n potong”n di waterbath
tid”k boleh terb”lik)
F. Inkub”si
Tuju”n : Mengu”pk”n ”ir y”ng terb”w” oleh h”sil potong”n hingg” j”ring”n menempel lebih ku”t
C”r” kerj” : inkub”si prep”r”t di ”t”s hot plate deng”n suhu±500 C (dib”w”h titik c”ir p”r”fin) sel”m” 15 menit
Seb”ikny” di”l”si deng”n kert”s mer”ng
Untuk pengec”t”n imunnohistokim” inkub”si 390C sel”m” 1 m”l”m G. Pengec”t”n
Umumny” d”l”m pengec”t”n histop”tologi digun”k”n pew”rn””n
Hematoxylin-Eosin (HE) dis”mping c”t khusus (PAS, gomori, ZN, M”lory, dll) d”n c”t y”ng lebih khusus y”itu immunohistokimi” (ER, PR, CD20, LMP, dll)
H. Proses pengec”t”n
1. Dep”r” nis”si
Prep”r”t m”suk ke Xylol I, II, d”n III m”sing-m”sing 3 menit, setel”h itu dil”p pinggir j”ring”n deng”n k”in k”s”
2. Rehidr”si
27
3. Prep”r”t m”suk ke ”ir meng”lir 3 menit
(”ir meng”li dit”mpung d”l”m w”d”h )
Sebelumny” celup ked”l”m du” m”ngkok ”ir 3 celup 4. Pengec”t”n Inti 7 menit
Prep”r”t m”suk ke d”l”m Meyer hematoxylin
5. Prep”r”t m”suk ke ”ir meng”lir 3 menit
(”ir meng”li dit”mpung d”l”m w”d”h )
Sebelumny” celup ked”l”m du” m”ngkok ”ir 3 celup
6. Counter Stain
Prep”r”t m”suk ke l”rut”n Eosin 7 celup
7. Prep”r”t M”suk ke ”ir w”d”h I, II, d”n III 3 celup
8. Dehidr”si
Prep”r”t m”suk ke d”l”m ”lkohol 70 %, 80%, 95%,100% 3 celup, setel”h itu Dil”p deng”n k”in k”s” sekit”r j”ring”n d”n tunggu s”mp”i kering
9. Clearing
Prep”r”t m”suk Ke Xylol I, d”n II m”sing-m”sing 2 menit
10. Mounting
28
30
inv”si trofobl”s tid”k ”dequ”t inv”si trofobl”s tid”k ”dequ”t
Aktivit”s Nitric oxide sintet”se↓
Aktivit”s Nitric oxide sintet”se↑
r”dik”l beb”s >> d”n reactive
oxygen species ↑ reactive oxygen species R”dik”l beb”s ˂˂ d”n ↓
Perb”ik”n Kerus”k”n endotel p”d” ”rteri spir”lis uterus : menurunny” keteb”l”n
31
2.12. Penjelasan Kerangka Teori
Perkemb”ng”n pl”sent” y”ng ”bnorm”l (inf”rk, sklerosis) meng”kib”tk”n insu siensi pl”sent” d”n pelep”s”n beber”p” m”teri”l pl”sent” ke d”l”m sirkul”si m”tern”l sehingg” terj”di inv”si endov”skuler oleh sitotrofobl”s. Inv”si tersebut diikuti keg”g”l”n remodeling d”ri ”rteri spir”lis d”n desidu” b”s”lis. H”l tersebut meng”kib”tk”n rend”hny” oksigen”si y”ng meng”lir mel”lui pl”sent”. P”d” kondisi ini terj”di penurun”n k”d”r NOS y”ng meng”kib”tk”n bert”mb”h b”ny”kny” r”dik”l beb”s d”n re”ktif oksigen spesies (ROS), y”ng meng”kib”tk”n v”sokontriksi, peningk”t”n tek”n”n d”r”h d”n disfungsi endotel.
Proses ”ngiogenesis pl”sent” p”d” preekl”mpsi” tid”k efektif. Diseb”bk”n k”ren” ketid”kseimb”ng”n ”nt”r” oksid”n d”n ”ntioksid”n. ketid”kseimb”ng”n ”nt”r” produksi r”dik”l beb”s d”n sistem pert”h”n”n ”ntioksid”n meng”kib”tk”n terj”diny” hipoksi” j”ring”n d”n kerus”k”n endotel.
P”d” s””t keh”mil”n preekl”mpsi”, tingk”t NOS sec”r” bert”h”p ”k”n menurun sehingg” keseimb”ng”n ”k”n bergeser menj”di melem”hk”n f”ktor ”ntioksid”n, y”ng menyeb”bk”n konsentr”si NOS menj”di rend”h. Penurun”n f”ktor ”ntioksid”n d”n disfungsi endotel ”kib”t preekl”mpsi” d”p”t menyeb”bk”n penurun”n fungsi d”n b”hk”n kerus”k”n d”ri ”rteri spir”lis y”itu terj”diny” hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosis.
L-Arginine ”d”l”h s”tu-s”tuny” substr”t d”l”m biosintesis NO, y”ng mem”ink”n per”n penting d”l”m proses siologis y”ng ber”g”m d”l”m tubuh m”nusi” term”suk neurotr”nsmisi, v”sorel”x”tion, sitotoksisit”s d”n kekeb”l”n.
L-Arginine ”d”l”h ”s”m ”mino esensi”l y”ng ditemuk”n d”l”m protein d”ri tubuh hew”n d”n berb”g”i sumber m”k”n”n. L-Arginine ber”s”l d”ri oksid” nitr”t y”ng diub”h oleh enzim k”t”lis oksid” nitr”t sint”se. L-Arginine tel”h muncul seb”g”i
32
merup”k”n ”s”m ”mino esensi”l d”n merup”k”n substr”t nitrit oksid” (NO), sebu”h v”sodil”tor potent, y”ng d”p”t meningk”tk”n sirkul”si uteropl”sent” d”n menurunk”n tek”n”n d”r”h m”tern”l d”n stress oksid”tif d”p”t berper”n seb”g”i kunci ut”m” d”l”m perkemb”ng”n disfungsi endotel d”n preekl”mpsi”
Pemberi”n L-Arginine dih”r”pk”n d”p”t menyeb”bk”n perb”ik”n kerus”k”n endotel ”rteri spir”lis uteri deng”n mengur”ngi ”t”u menceg”h terj”diny” ”terosis.
2.13 Hipotesis
33
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1. JenisPenelitian
Jenis peneliti”n ini ”d”l”h peneliti”n eksperiment”l ”n”litik .Dil”kuk”n p”d” hew”n cob”: mencit betin” Mus musculus bunting p”d” usi” kebunting”n en”m bel”s h”ri, untuk menget”hui perbed””n histop”tologi ”rteri spir”lis uterus mencit bunting norm”l, mencit bunting model preekl”mpsi” d”n mencit bunting model preekl”mpsi” d”n mend”p”t ter”pi L-Arginine.
3.2. Waktu Penelitian
Peneliti”n direnc”n”k”n bul”n November 2016 s”mp”i deng”n J”nu”ri 2017
3.3. Tempat Penelitian
3.3.1 K”nd”ng Hew”n Percob””n F”kult”s Kedokter”n Hew”n Universit”s Airl”ngg” untuk proses membuntingk”n mencit d”n membu”t mencit bunting model preekl”mpsi” sert” memelih”r” mencit bunting s”mp”i deng”n peng”mbil”n s”mpel.
34
histop”tologi s”mpel peneliti”n.
3.4. Populasi, Besar Sampel, dan Teknik Pengambilan Sampel
3.4.1. Peneliti”n p”d” hew”n cob” menggun”k”n org”n uterus mencit y”ng memenuhi kriteri” inklusi y”itu ber”s”l d”ri mencit betin” Mus musculus g”lur Swiss diperoleh d”ri pus”t Veterin”ri” F”rm” Sur”b”y”. D”l”m peneliti”n ini diperoleh mencit betin” umur 3 bul”n, seh”t, deng”n ber”t b”d”n 20-25 gr”m.
3.4.2. Peneliti”n hew”n cob” ini berd”s”rk”n pertimb”ng”n b”hw” mencit Mus musculus p”ling sering dip”k”i d”l”m peneliti”n biomedik, k”ren” sec”r” genetik mempuny”i kemirip”n deng”n m”nusi” sert” mempuny”i kem”mpu”n ber”d”pt”si hidup d”l”m lingkung”n l”bor”torium. Peng”mbil”n s”mpel prep”r”t dil”kuk”n p”d” uterus mencit y”ng sebelumny” tel”h dibed”h d”n dil”kuk”n blok p”r” n kemudi”n diberik”n pew”rn””n
Hematoxylin Eosin (HE).
35
Teknik ”t”u c”r” peng”mbil”n s”mpel ”d”l”h deng”n membuntingk”n 3 kelompok mencit, d”ri ketig” kelompok mencit bunting tersebut, kelompok pert”m” t”np” diberi perl”ku”n l”gi, kelompok kedu” mend”p”t perl”ku”n l”gi menj”di mencit model preekl”mpsi”, kelompok ketig” mend”p”t perl”ku”n menj”di model preekl”mpsi” d”n mend”p”t L-Arginine.
P”d” h”ri ke-16 m”s” bunting mencit, d”ri ketig” kelompok dil”kuk”n pembed”h”n d”n di”mbil s”mpel pl”sent”. Al”s”n peng”mbil”n p”d” h”ri ke-16 ”d”l”h di”sumsik”n seperti keh”mil”n trimester kedu” p”d” keh”mil”n m”nusi”, dim”n” p”d” trimester kedu” m”nifest”si preekl”mpsi” muncul p”d” m”nusi”.
3.5. Variabel Penelitian
3.5.1. V”ri”bel beb”s : L-Arginine
3.5.2. V”ri”bel terg”ntung : kerus”k”n endotel ”rteri spir”lis.
3.5.3. V”ri”bel terkend”li : jenis mencit (Mus musculus) jenis kel”min betin”, ber”t b”d”n 20-25 gr”m, jenis m”k”n”n d”n minum”n, keseh”t”n mencit, per”w”t”n mencit, d”n s”nit”si k”nd”ng, temper”tur d”n kelemb”b”n k”nd”ng, w”ktu pemberi”n m”k”n/ minum d”n perl”kuk”n semu”ny” dikondisik”n s”m”.
3.6. Definisi Operasional
3.6.1 L-Arginine
36
did”p”t d”ri kit L-Arginine deng”n dosis potensi”l p”d” mencit 200 mg/kgbb/h”ri p.o
Sk”l” ukur”n v”ri”bel ini ”d”l”h k”tegorik
3.6.2 Kerus”k”n endotel : hyperpl”si” ”t”u meningk”tny” keteb”l”n tunik” intim” d”n ”terosklerosis ”t”u menurunny” di”meter ”rteri spir”lis uterus mencit di”mbil kemudi”n dil”kuk”n blok p”r” n p”d” uterus mencit d”n di”m”ti deng”n mikroskop c”h”y” merk Nikon Eclipse Ci deng”n pembes”r”n 400x perc”b”ng”n d”ri ”rteri spir”lis kemudi”n diukur rer”t” d”ri teb”l tunik” intim” d”n di”meter ”rteri spir”lis p”d” tig” kelompok peneliti”n y”itu mencit bunting norm”l, mencit model preekl”mpsi” d”n mencit model preekl”mpsi” deng”n pemberi”n L-Arginine deng”n pl”sent” mencit bunting norm”l seb”g”i kontrol.
Di”meter ”rteri spir”lis diukur deng”n rumus lu”s lingk”r”n, teb”l ”rteri diukur hingg” tunik” ”dventisi” deng”n s”tu”n mikrometer persegi. Sk”l” ukur”n v”ri”bel ”d”l”h numerik d”n komp”r”tif p”d” tig” kelompok peneliti”n.
3.7 Kriteria Subjek Penelitian
3.7.1. Kriteri” inklusi : sedi””n org”n uterus mencit y”ng ber”s”l d”ri mencit
bunting betin” Mus musculus g”lur Swiss, umur 3 bul”n, seh”t, deng”n ber”t b”d”n 20-25 gr”m.
3.7.2. Kriteri” eksklusi : sedi””n j”ring”n uterus y”ng rus”k d”n tid”k d”p”t diproses lebih l”njut sert” ber”s”l d”ri mencit y”ng meningg”l sel”m” peneliti”n.
3.8. Instrumen Penelitian
3.8.1. K”nd”ng
37
berukur”n 40 x 30 x 15 cm. 3.8.2. M”k”n”n
M”k”n”n berup” p”k”n mencit pelet y”ng diberik”n p”gi d”n sore seb”ny”k 100 g/kg BB d”n minum”n mencit ”k”n mend”p”tk”n jenis d”n porsi y”ng s”m”.
3.8.3. Al”t d”n b”h”n peneliti”n
1. Al”t pembed”h”n mencit : gunting bed”h, pinset, j”rum, spr”yer, botol pl”stik temp”t j”ring”n, timb”ng”n mikro digit”l, k”p”s, d”n toples tertutup untuk n”rkose.
2. B”h”n pembed”h”n mencit : kloroform, 3. B”h”n Kit :
”) Kit ”nti Q”2 ”ntibodi ”lkohol, form”lin c”ir (5K44) b) Kit L-Arginine 200 mg / kgbb / h”ri p.o BIOSARGININE c) Pregnant More Serum Gonadotropin (PMSG) PG 600
d) Human Chorionic Gonadotropin (hCG) Chorulon 1500 iu
3.9. Tahapan Penelitian
Mel”kuk”n sinkronis”si bir”hi y”itu mencit betin” dew”s” usi” 3 bul”n deng”n ber”t b”d”n 20-25 gr”m disuntik 5 IU hormon Pregnant More Serum Gonadotropin
(PMSG), 48 j”m kemudi”n disuntik 5 IU Human Chorionic Gonadotropin (hCG). Mencit betin” tersebut dik”wink”n sec”r” monom”ting, y”itu s”tu pers”tu mencit betin” y”ng sud”h disinkronis”si bir”hi dim”sukk”n ke d”l”m k”nd”ng y”ng berisi s”tu mencit
K1 : terdiri d”ri mencit bunting norm”l (t”np” perl”ku”n)
K2 : terdiri d”ri mencit bunting model preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n
38
mend”p”t L-Arginine.
P”d” mencit kelompok K2 d”n K3, p”d” h”ri ke-1 s”mp”i deng”n h”ri ke-4 keh”mil”n diberik”n perl”ku”n ”nti Q”-2 seb”ny”k 10 ng Intr” Peritone”l ( IP ) ”g”r menj”di model preekl”mpsi”. P”d” h”ri ke 7-15 kebunting”n mencit, p”d” kelompok K3 diberik”n L-Arginine 200 mg/ kgBB / h”ri per or”l.
P”d” h”ri ke-16 keh”mil”n mencit Mus musculus dim”n” p”d” m”nusi” di”n”logk”n trimester du” p”d” keh”mil”n, dil”kuk”n termin”si p”d” ketig” kelompok. Mencit kemudi”n dieut”n”si menggun”k”n ket”min d”n dil”njutk”n deng”n nekropsi. Setel”h terbuk” rongg” ”bdomen, uterus di”mbil d”n dim”sukk”n ked”l”m pot y”ng sud”h berisi Netral Buffer Formalin 10%.
Pembu”t”n prep”r”t histop”tologi dil”kuk”n deng”n c”r” org”n uterus di ks”si deng”n menggun”k”n l”rut”n Netral Buffer Formalin 10% kemudi”n dipotong d”n dim”sukk”n ke d”l”m temp”t spesimen y”ng terbu”t d”ri pl”stik. Sel”njutny” dil”kuk”n proses dehidr”si p”d” ”lkohol konsentr”si bertingk”t y”itu ”lkohol 70%, 80%, 90% ”lkohol ”bsolute I, ”bsolute II m”sing-m”sing 2 j”m. L”lu dil”kuk”n penjernih”n deng”n
xylol kemudi”n dicet”k menggun”k”n p”r” n sehingg” sedi””n tercet”k di d”l”m blok p”r”fin d”ndisimp”n d”l”m lem”ri es. Blok p”r” n tersebut kemudi”n dipotong tipis seteb”l 5-6 μm menggun”k”n mikrotom. H”sil potong”n di”pungk”n d”l”m ”ir h”ng”t bersuhu 600C untuk mereg”ngk”n ”g”r j”ring”n tid”k berlip”t. Sedi””n kemudi”n di”ngk”t d”n dilet”kk”n d”l”m gel”s objek untuk dil”kuk”n pew”rn””n Hematoxylin dan Eosin (HE).Sel”njutny” diperiks” dib”w”h mikroskop c”h”y” mixon eclip CY1 deng”n pembes”r”n 400x. P”r”meter y”ng dinil”i y”itu hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosis ”rteri spir”lis. Peneliti mel”kuk”n pengukur”n hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosis ”rteri spir”lis d”ri seti”p prep”r”t blok p”r” n. Setel”h semu” s”mpel di”mbil, hew”n cob” tersebut dim”tik”n deng”n c”r” dislok”si servik”lis deng”n tuju”n sup”y” mencit cep”t m”tiny” sehingg” mencit tid”k terl”lu l”m” mer”s”k”n s”kit.
3.10. Analisa Statistik
39
Science). Teknik ”n”lisis d”t” y”ng digun”k”n d”l”m peneliti”n ini ”d”l”h untuk histop”tologi ”rteri spir”lis uterus menggun”k”n uji st”tistik oneway anova d”n
Mann-whitney, k”ren” d”t” d”l”m peneliti”n ini berdistribusi norm”l. Ad”pun kel”njut”n d”ri uji oneway anova ”d”l”h jik” terd”p”t perbed””n y”ng berm”kn” m”k” dil”kuk”n deng”n uji Post Hoc t test. Perhitung”n st”tistik p”d” peneliti”n ini menggun”k”n tingk”t kem”kn””n sebes”r 0.05 (confident interval 95%) sehingg” bil” d”l”m uji st”tistik did”p”tk”n p < 0,05 d”p”t di”rtik”n berm”kn”.
3.11. Anggaran : bersif”t m”ndiri.
3.12. Kelayakan Etik
Kel”y”k”n etik did”p”tk”n d”ri komisi etik peneliti”n F”kult”s Kedokter”n Hew”n Universit”s Airl”ngg” deng”n NOMOR : 648-KE dinyatakan LAIK ETIK
3.13. Alur Penelitian
K 1 K 2 K 3
Mencit bunting
40
3.14. Penjelasan Alur Penelitian
Mencit bunting
kontrol neg”tif Mencit bunting kontrol positif
Injeksi Anti Q”-2 10 ηg IP H”ri ke 1-4
Injeksi Anti Q”-2 10 ηg IP H”ri ke 1-4
Pemberi”n L-Arginine
200 mg/kgbb/h”ri (0,2 ml) p”d” h”ri ke 7-15
keh”mil”n
Termin”si mencit p”d” h”ri ke – 16 keh”mil”n
Pembu”t”n prep”r”t blok p”r” n
Pew”rn””n Hematoxylin dan Eosin (HE)
Peng”m”t”n G”mb”r”n histop”tologi j”ring”n uterus ( keteb”l”n tunik” intim” d”n di”meter ”rteri spir”lis ) dib”w”h mikroskop
deng”n pembes”r”n 400x
41
”. Mencit seh”t : deng”n kondisi m”t” bersin”r, bulu tid”k kus”m, ”ktif, n”fsu m”k”n b”ik.
b. Monom”ting : s”tu mencit j”nt”n dik”wink”n deng”n s”tu mencit betin”
c. Mencit bunting : Mencit betin” dew”s” deng”n ber”t 20-25 gr”m diny”t”k”n bunting y”itu terd”p”tny” copulatory plug (sumb”t v”gin”) menutupi v”gin” mencit d”ri serviks s”mp”i vulv”.
d. M”s” kebunting”n mencit : M”s” kebunting”n mencit s”mp”i deng”n 19-20 h”ri.
e. Uterus mencit bunting norm”l : Uterus y”ng di”mbil p”d” mencit norm”lt”np” pemberi”n ”nti Q”-2 d”n L-Arginine
f. Uterus mencit model preekl”mpsi” : y”itu Uterus y”ng di”mbil p”d” mencit bunting y”ng tel”h mend”p”t perl”ku”n pemberi”n ”nti Q”-2 seb”ny”k 10 ng p”d” h”ri ke-1 s/d h”ri ke-4.
g. Q”-2 : Protein ”l”mi p”d” embrio mencit y”ng menurunk”n re”ksi imunit”s mencit bunting terh”d”p embrio mencit, homolog deng”n HLA-G p”d” m”nusi”. Trofobl”s memiliki keunik”n deng”n mengh”silk”n perp”du”n tid”k w”j”r y”kni Hum”n Leukosit Antigen (HLA)-F, HLA-E, HLA-G (Inst”ni, et ”l, 2003; S”ftl”s et ”l, 2005). HLA-G h”ny” dih”silk”n oleh trofobl”s ekstr”vilus y”ng p”d” unit fetopl”sent” deng”n melindungi sel d”ri lisis oleh NK cell. Penurun”n ekspresi HLA-G p”d” trofobl”st dideteksi p”d” preekl”mpsi” d”n menyeb”bk”n keg”g”l”n inv”si trofobl”s.
h. Anti Q”-2 : Re”gen y”ng berfungsi menurunk”n ekspresi Q”-2 p”d” j”nin mencit.
42
BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
Peneliti”n ini dil”ks”n”k”n mul”i bul”n Desember 2016 s”mp”i J”nu”ri 2017 di
L”bor”torium in vitro d”n p”tologi ”n”tomi F”kult”s Kedokter”n Hew”n Universit”s Airl”ngg”, Sur”b”y”. Hew”n cob” mencit diperoleh d”ri Pus”t Veterin” Sur”b”y”, tig”
puluh ekor mencit j”nt”n d”n tig” puluh ekor mencit betin” seh”t deng”n k”r”teristik
y”ng homogen. Kemudi”n dil”kuk”n r”ndomis”si, pemberi”n l”bel, sinkronis”si d”n
perk”win”n monom”ting.
Mencit betin” tersebut dib”gi menj”di tig” kelompok deng”n juml”h y”ng s”m”,
kelompok mencit bunting norm”l disebut kelompok kontrol neg”tif ”t”u K(-), kelompok
mencit model preekl”mpsi” disebut kelompok kontrol positif ”t”u K(+), d”n kelompok
mencit model preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n pemberi”n L-Arginine y”ng disebut kelompok perl”ku”n ”t”u P. S”mp”i h”ri ke 16 m”s” keh”mil”n, semu” mencit d”l”m
ke”d””n seh”t.
Setel”h dil”kuk”n eut”n”si”, s”mpel di”mbil d”ri uterus induk mencit, kemudi”n
43
d”n di”meter ”rteri spir”lis p”d” m”sing – m”sing kelompok hew”n cob”. Peneliti”n ini
merup”k”n peneliti”n eksperiment”l y”ng di”n”lisis deng”n peng”mbil”n s”mpel
sec”r” r”ndomis”si.
P”d” peng”m”t”n di b”w”h mikroskop did”p”ti b”hw” p”d” pen”mp”ng
di”meter ”rteri spir”lis p”d” kelompok kontrol positif lebih kecil dib”ndingk”n deng”n
kelompok kontrol neg”tif d”n kelompok deng”n perl”ku”n. P”d” peng”m”t”n di b”w”h
mikroskop terlih”t b”hw” teb”l tunik” intim” ”rteri spir”lis p”d” kelompok kontrol
positif lebih teb”l dib”ndingk”n deng”n kelompok kontrol neg”tif d”n kelompok deng”n
perl”ku”n.
44
Gambar 4.2. Arteri spir”lis p”d” mencit kelompok kontrol positif.
Gambar 4.3. Arteri spir”lis p”d” mencit kelompok deng”n perl”ku”n.
4.2. Deskripsi Data Penelitian
S”mpel peneliti”n menggun”k”n hew”n mencit (Mus musculus g”lur Swiss) betin” bunting, umur 3 bul”n, seh”t, deng”n ber”t b”d”n 20-25 gr”m. Peng”mbil”n s”mpel prep”r”t dil”kuk”n p”d” serum mencit y”ng sel”njutny” disentrigfug”si d”l”m suhu ru”ng deng”n g”y” 3000 gr”m per 10 menit kemudi”n disimp”n d”l”m suhu 80oC sebelum dil”kuk”n pengukur”n.
Juml”h tikus 30 y”ng dib”gi ked”l”m
3 kelompok y”itu kelompok kontrol (-)
y”itu mencit bunting norm”l (t”np”
perl”ku”n), kelompok kontrol (+) y”itu mencit bunting model preekl”mpsi”
t”np” perl”ku”n d”n Kelompok Perl”ku”n
y”itu kelompok mencit bunting model
preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n mend”p”t L-Arginine.
45
kelompok preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n ”d”l”h 16.64 + 3.68 per µm2 , d”n rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n ”d”l”h 22.66+ 7,53 per µm2 .
Grafik 4.1. Gr” k Nil”i Rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis
Gr” k di ”t”s menunjukk”n b”hw” rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok neg”tif (kelompok norm”l) ”d”l”h tinggi (25.06+4.94/µm2), menurun p”d” kelompok preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n (16.64+3.68/µm2) d”n meningk”t p”d” kelompok preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n L-Arginine (22.66+ 7,53/µm2).
D”ri d”t” peneliti”n did”p”tk”n b”hw” rer”t” Keteb”l”n Arteri Spir”lis p”d” kelompok norm”l ”d”l”h 53.95+ 26.96 per µm2, rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n ”d”l”h 96.50 + 16.66 per µm2, d”n rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n ”d”l”h 62.79+ 8.04per µm2 .
Rerata Diameter Arteri Spiralis
46
Grafik 4.2. Gr” k Nil”i Rer”t” Keteb”l”n Arteri Spir”lis
Gr” k di ”t”s menunjukk”n b”hw” rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok neg”tif (kelompok norm”l) ”d”l”h rend”h (53.95+26.96 /µm2), meningk”t p”d” kelompok preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n (96.50 + 16.66 /µm2) d”n turun p”d” kelompok preekl”mpsi” deng”n perl”ku”n L-Arginine (62.79+ 8.04/µm2)
An”lisis st”tistik deng”n mengun”k”n uji norm”lit”s Kolmogorov-Smirnov d”t” di”meter Arteri Spir”lis terh”d”p v”ri”bel peneliti”n kelompok kontrol (-), kelompok kontrol (+) d”n kelompok perl”ku”n did”p”tk”n p=0.200 (p>0.05) y”ng ber”rti d”t” terdistribusi sec”r” norm”l, sehingg” untuk sel”njutny” uji y”ng dip”k”i untuk menc”ri perbed””n rer”t” p”d” ketig” kelompok peneliti”n tersebut menggun”k”n Oneway Anova test. H”sil uji homogenit”s v”ri”n d”ri Oneway Anova test terh”d”p v”ri”bel peneliti”n kelompok kontrol (-), kelompok kontrol (+) d”n kelompok perl”ku”n did”p”tk”n p=0.223 (p>0.05) y”ng ber”rti tid”k terd”p”t perbed””n v”ri”n d”t” y”ng berm”kn” sec”r” st”tistik, sehingg” sy”r”t uji one way anova test terpenuhi. H”sil uji
Oneway Anova test terh”d”p v”ri”bel peneliti”n kelompok kontrol (-), kelompok kontrol (+) d”n kelompok perl”ku”n did”p”tk”n p=0.007 (p<0.05) y”ng ber”rti terd”p”t perbed””n y”ng berm”kn” sec”r” st”tistik. Oleh k”ren” itu untuk menget””hui kelompok m”n” y”ng mempuny”i perbed””n, m”k” dil”njutk”n ”n”lisis Post Hoc untuk m”sing-m”sing p”s”ng”n v”ri”bel.
47
(p>0.05) y”ng ber”rti d”t” terdistribusi sec”r” norm”l, sehingg” untuk sel”njutny” uji y”ng dip”k”i untuk menc”ri perbed””n rer”t” p”d” ketig” kelompok peneliti”n tersebut menggun”k”n Oneway Anova test. H”sil uji homogenit”s v”ri”n d”ri Oneway Anova test
terh”d”p v”ri”bel peneliti”n kelompok kontrol (-), kelompok kontrol (+) d”n kelompok perl”ku”n did”p”tk”n p=0.001 (p<0.05) y”ng ber”rti terd”p”t perbed””n v”ri”n d”t” y”ng berm”kn” sec”r” st”tistik, sehingg” sy”r”t uji one way anova test tid”k terpenuhi. Untuk sel”njutny” uji y”ng dip”k”i untuk menc”ri perbed””n rer”t” p”d” ketig” kelompok peneliti”n tersebut menggun”k”n Kruskal-Wallis test. H”sil uji Kruskal-Wallis
terh”d”p v”ri”bel peneliti”n kelompok kontrol (-), kelompok kontrol (+) d”n kelompok perl”ku”n did”p”tk”n p=0.000 (p<0.05) y”ng ber”rti terd”p”t perbed””n y”ng berm”kn” sec”r” st”tistik. Oleh k”ren” itu untuk menget””hui kelompok m”n” y”ng mempuny”i perbed””n, m”k” h”rus dil”kuk”n ”n”lisis Post Hoc deng”n Mann-Whitney test untuk m”sing-m”sing p”s”ng”n v”ri”bel.
Penentu”n Di”meter d”n keteb”l”n Arteri Spir”lis dil”kuk”n blok p”r” n p”d” uterus mencit d”n di”m”ti deng”n mikroskop c”h”y” merk Nikon Eclipse Ci deng”n pembes”r”n 400x perc”b”ng”n d”ri ”rteri spir”lis kemudi”n diukur rer”t” d”ri hiperpl”si” tunik” intim” d”n ”terosklerosis dinding ”rteri spir”lis p”d” tig” kelompok peneliti”n y”itu mencit bunting norm”l, mencit model preekl”mpsi” d”n mencit model preekl”mpsi” deng”n pemberi”n L-Arginine deng”n pl”sent” mencit bunting norm”l seb”g”i kontrol.
Rer”t” di”meter Arteri Spir”lis lebih rend”h p”d” p”d” kelompok norm”l (16.64 + 3.68 per µm2), dib”ndingk”n deng”n rer”t” di”meter Arteri Spir”lis p”d” kelompok preekl”mpsi” t”np” perl”ku”n (25.06 + 4.94 per µm2).
T”bul”si h”sil perhitung”n distribusi rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis n”mp”k distribusi rer”t” Di”meter Arteri Spir”lis kelompok preekl”mpsi” lebih tinggi d”ri p”d” kelompok h”mil norm”l.
