PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
Margareta Trinova Ponirahayu Tea Mangu Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
ABSTRACT
The aim of study research were to prove the short-term effect of ethanol extract Persea americana Mill. peel about Alkalin Fosfatase’s activity in rats induced with carbon tetrachloride and to decide the relationship level of dose with decrease Alkalin Fosfatase’s activity.
This research is purely experimental research with randomized complete direct sampling design. This research used 30 male Wistar rats, 2-3 month old with weighing ± 150-250 grams into six group of five eachs. The first group (hepatotoxin control) was given carbon tetrachloride 2 ml/kgBW intraperitoneally. The second group (negative control) was given olive oil 2 ml/kgBW intraperitoneally. Third group (extract control) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 1.40 g/kgBW orally. The fourth group (low dose) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 0.35 g/kgBW orally. The fifth group (medium dose) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 0.7 g/kgBW orally. The sixth group (high dose) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 1.40 g/kgBW orally. The fourth until sixth group was given carbon tetrachloride with dose 2 ml/kgBW intraperitoneally after six hours. Twenty-four hours later, blood was collected from orbital sinus eye to be measured ALP’s activity. Data of ALP’s activity which were obtained were analyzed using one-way ANOVA.
Based on the research, ethanol extract Persea americana Mill. peel gave effect for decrease the ALP’s activity in male Wistar rats that induced by carbon tetrachloride. Ethanol extract Persea americana Mill. peel was given with different level dose were 0.35; 0.70 and 1.40 g/kgBW don’t have relationship level of dose with decrease ALP’s activity.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol jangka pendek kulit buah Persea americana Mill. terhadap aktivitas Alkali Fosfatase (ALP) tikus terinduksi karbon tetraklorida dan untuk mengetahui tingkat kekerabatan dosis dengan penurunan aktivitas ALP.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini dilakukan dengan mengelompokkan tiga puluh ekor tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan dengan berat ± 150-250 gram ke dalam enam kelompok, masing- masing sama banyak. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB secara intra peritoneal (i.p). Kelompok II (kontrol negatif) diberi
olive oil sebanyak 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol ekstrak) diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dosis 1,40 g/kgBB secara per oral. Kelompok IV diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dosis 0,35 g/kgBB secara per oral. Kelompok V diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dosis 0,70 g/kgBB secara per oral. Kelompok VI diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dosis 1,40 g/kgBB secara per oral. Kelompok IV-VI dipejani karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB secara i.p setelah 6 jam. Darah tikus kemudian diambil setelah 24 jam melalui sinus orbitalis mata, kemudian diukur aktivitas ALP-nya. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA satu arah.
Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. memberikan efek menurunkan aktivitas ALP pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Pemberian ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dengan tingkat dosis yang berbeda-beda yaitu 0,35; 0,70; dan 1,40 g/kgBB tidak memiliki hubungan kekerabatan antar dosis dengan penurunan aktivitas ALP.
i
PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PENDEK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ENZIM ALKALI
FOSFATASE PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh
Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Margareta Trinova Ponirahayu Tea Mangu
NIM : 118114164
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Kupersembahkan karya ku ini, Untuk Tuhan Yesus Kristus yang selalu mengangkatku ketika aku jatuh dan
menguatkan ku kembali, Untuk Ayahku yang sekarang pasti sedang tersenyum melihatku dari jauh sana,
Untuk Ibu ku, wanita terhebat dalam hidupku, Untuk kakak-kakak dan adik-adik ku yang selalu menjadi sahabat terbaik ku
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa karena berkat
rahmat dan kasih-Nya skripsi dengan judul “Pengaruh Pemberian Jangka Pendek
Ekstrak Etanol Kulit Buah Persea americana Mill. terhadap Aktivitas Enzim Alkali
Fosfatase pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” dapat penulis selesaikan pada
waktunya. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Skripsi ini dapat disusun tidak terlepas dari bimbingan dan bantuan berbagai
pihak. Karena itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph. D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma yang telah mengesahkan skripsi ini.
2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph. D., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah
banyak meluangkan waktu, tenaga dan pikiran dalam memberikan bimbingan,
petunjuk, koreksi dan masukan serta motivasi kepada penulis selama
penelitian dan penyusunan skripsi ini.
3. Ibu Yunita Linawati, M.Sc., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah
memberikan koreksi serta saran untuk kesempurnaan penulisan skripsi ini.
4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M. Si., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang
telah memberikan koreksi serta saran untuk kesempurnaan penulisan skripsi
viii
5. Ibu Dr. Sri Hartati Yuliani, Apt. selaku Kepala Laboratorium selama peneliti
melakukan penelitian di laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas
laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.
6. Ibu Agustina Setiawati, M. Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengesahkan surat
determinasi tanaman.
7. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si., atas bantuan dalam determinasi tanaman
Persea americana Mill.
8. Bapak Heru, Bapak Suparjiman, dan Bapak Kayatno selaku laboran bagian
Farmakologi dan Toksikologi, Bapak Wagiran selaku laboran Farmakognosi
Fitokimia, Bapak Suparlan selaku laboran Kimia Organik, serta Bapak Kunto
selaku laboran Kimia Analisis atas segala bantuan selama pelaksanaan skripsi
ini.
9. Keluarga yang selalu mendoakan saya, memberi semangat dan dukungan
dalam penyusunan skripsi ini (Ayah penulis Gaspar Mbasa, Ibu Penulis
Theresia Sukemi, Kakak Penulis Jimmy Ronaligius dan Vicky Aprilia, adik
penulis Antofan Ferdianus dan Novita Elisabeth serta kakak Ipar penulis
Retno).
10.Teman-teman seperjuangan “Tim Alpukat” Mita, Puput, Gita, Vivo, Gemah,
Risa, Siska, Ester, Angel, Jolin, Wina, Uci, dan Sita untuk kerja sama, suka
ix
11.Depot Es Teller atas partisipasi menyediakan alpukat.
12.Semua pihak yang penulis tidak dapat sebutkan satu persatu yang turut
membantu selama penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna sehingga
masukan berupa saran sangat diharapkan agar skripsi ini menjadi lebih sempurna, dan
akhir kata semoga skripsi ini berguna bagi semua pihak yang berkepentingan.
Yogyakarta, 9 Desember 2014
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPETINGAN AKADEMIS ... vi
PRAKATA ... vii
DAFTAR ISI ... x
DAFTAR TABEL ... xv
DAFTAR GAMBAR ... xvi
DAFTAR LAMPIRAN ... xvii
INTISARI ... xix
ABSTRACT ... xx
BAB I. PENGANTAR ... 1
A. Latar Belakang ... 1
1. Perumusan masalah ... 4
2. Keaslian penelitian ... 4
3. Manfaat penelitian ... 5
xi
3. Analisis histologik kerusakan hati ... 13
4. Perubahan kandungan kimia hati ... 14
xii
F. Ekstraksi Maserasi ... 18
G. Landasan Teori ... 18
H. Hipotesis ... 20
BAB III. METODE PENELITIAN... 21
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 21
B. Variabel dan Definisi Operasional ... 21
1. Variabel utama ... 21
3. Pembuatan serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. ... 26
4. Penetapan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill. ... 26
5. Pembuatan ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. ... 27
xiii
7. Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. .... 28
8. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1 % ... 29
9. Pembuatan larutan karbon tetraklorida ... 29
10.Uji pendahuluan ... 29
11.Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ... 30
12.Pembuatan serum ... 31
13.Penetapan aktivitas serum ALP ... 31
F. Tata Cara Analisis Hasil... 32
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 33
A. Penyiapan Bahan ... 33
1. Hasil determinasi tanaman ... 33
2. Penetapan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill. ... 33
3. Hasil penimbangan bobot ekstrak etanol kulit Persea americana Mill. 34 B. Uji Pendahuluan ... 35
1. Penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida ... 35
2. Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji ... 35
3. Penentuan dosis ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. ... 38
C. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Jangka Pendek Ekstrak Etanol Kulit Persea americana Mill. Terhadap Aktivitas ALP ... 38
1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 ml/kg BB ... 41
2. Kontrol hepatoksin karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB... 42
xiv
4. Kelompok perlakuan jangka pendek ekstrak etanol kulit Persea
americana Mill. Dosis 0,35; 0,70; 1,40 g/kg BB pada tikus
jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida... 44
D. Rangkuman Pembahasan ... 46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 48
A. Kesimpulan ... 48
B. Saran ... 48
DAFTAR PUSTAKA ... 49
LAMPIRAN ... 54
xv
DAFTAR TABEL
Tabel I. Purata aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian karbon
tetraklorida doisis 2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24, dan 48 ... 36
Tabel II. Hasil uji Scheffe aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian karbon
tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam ... 37
Tabel III. Purata aktivitas ALP tikus dengan pemberian ekstrak etanol kulit
Buah Persea americana Mill.yang terinduksi karbon tetraklorida
dosis 2 ml/kgBB ... 39
Tabel IV. Hasil uji scheffe aktivitas ALP tikus setelah pemberian karbon
xvi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida ... 12
Gambar 2. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus setelah
pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada selang
waktu 0, 24 dan 48 jam ... 36
Gambar 3. Diagram batang rata-rata aktivitas ALP tikus setelah
pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada kelompok
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Foto penampang luar buah Persea americana Mill. ... 55
Lampiran 2. Foto penampang dalam buah Persea americana Mill. ... 55
Lampiran 3 Foto buah Persea americana Mill.. ... 56
Lampiran 4. Foto serbuk kulit buah Persea americana Mill. ... 56
Lampiran 5. Foto Ekstrak kental kulit buah Persea americana Mill. ... 57
Lampiran 6. Foto Larutan ekstrak etanol kulit bauh Persea americana Mill .. 57
Lampiran 7. Surat Pengesahan Medicaland Health Research Ethics Commite (MHREC) ... 58
Lampiran 8. Surat Uji Kadar Air... 59
Lampiran 9. Surat Determinasi Persea americana Mill ... 60
Lampiran 10. Analisis statistik aktivtas serum ALP pada uji pendahuluan penentuan waktu pencuplikan darah ... 61
Lampiran 11.Analisis statistik aktivitas serum ALP perlakuan ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ... 65
Lampiran 12. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ... 72
Lampiran 13. Perhitungan penetapan peringkat dosis ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. kelompok perlakuan ... 72
xviii
INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol jangka pendek kulit buah Persea americana Mill. terhadap aktivitas Alkali Fosfatase (ALP) tikus terinduksi karbon tetraklorida dan untuk mengetahui tingkat kekerabatan dosis dengan penurunan aktivitas ALP.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini dilakukan dengan mengelompokkan tiga puluh ekor tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan dengan berat ± 150-250 gram ke dalam enam kelompok, masing- masing sama banyak. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB secara intra peritoneal (i.p). Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil sebanyak 2 ml/kgBB americana Mill. dosis 1,40 g/kgBB secara per oral. Kelompok IV-VI dipejani karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB secara i.p setelah 6 jam. Darah tikus kemudian diambil setelah 24 jam melalui sinus orbitalis mata, kemudian diukur aktivitas ALP-nya. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA satu arah.
Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak etanol kulit buah Persea americana
Mill. memberikan efek menurunkan aktivitas ALP pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Pemberian ekstrak etanol kulit buah Persea americana
Mill. dengan tingkat dosis yang berbeda-beda yaitu 0,35; 0,70; dan 1,40 g/kgBB tidak memiliki hubungan kekerabatan antar dosis dengan penurunan aktivitas ALP.
xix
ABSTRACT
The aim of study research were to prove the short-term effect of ethanol extract Persea americana Mill. peel about Alkalin Fosfatase’s activity in rats induced
with carbon tetrachloride and to decide the relationship level of dose with decrease
Alkalin Fosfatase’s activity.
This research is purely experimental research with randomized complete direct sampling design. This research used 30 male Wistar rats, 2-3 month old with weighing ± 150-250 grams into six group of five eachs. The first group (hepatotoxin control) was given carbon tetrachloride 2 ml/kgBW intraperitoneally. The second group (negative control) was given olive oil 2 ml/kgBW intraperitoneally. Third group (extract control) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 1.40 g/kgBW orally. The fourth group (low dose) was given ethanol extract
Persea americana Mill. peel with dose 0.35 g/kgBW orally. The fifth group (medium dose) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 0.7 g/kgBW orally. The sixth group (high dose) was given ethanol extract Persea americana Mill. peel with dose 1.40 g/kgBW orally. The fourth until sixth group was given carbon tetrachloride with dose 2 ml/kgBW intraperitoneally after six hours. Twenty-four
hours later, blood was collected from orbital sinus eye to be measured ALP’s activity. Data of ALP’s activity which were obtained were analyzed using one-way ANOVA.
Based on the research, ethanol extract Persea americana Mill. peel gave
effect for decrease the ALP’s activity in male Wistar rats that induced by carbon
tetrachloride. Ethanol extract Persea americana Mill. peel was given with different
level dose were 0.35; 0.70 and 1.40 g/kgBW don’t have relationship level of dose with decrease ALP’s activity.
1
BAB I PENGANTAR
A. LATAR BELAKANG
Hati merupakan organ terbesar dalam tubuh, menyumbang sekitar dua persen
berat tubuh total, atau sekitar 1,5 kg pada rata-rata manusia dewasa (Price dan
Wilson, 2005). Proses penyakit pada hati dikenal sebagai sirosis hati. Penyakit ini
lebih umum disebabkan oleh alkoholisme, tetapi penyakit ini juga dapat terjadi
karena masuknya racun seperti karbon tetraklorida, penyakit virus seperti hepatitis
infeksiosa, obstruksi usus biliaris dan proses infeksi di dalam duktus biliaris (Guyton
dan Hall, 2007).
Pada tahun 2009, World Health Organization (WHO) telah melaporkan
bahwa di tahun 2004 kanker hati adalah penyebab kematian dari 610.000 orang.
Kanker sendiri dapat terjadi karena senyawa karsinogenik kimia ataupun
karsinogenik biologis seperti infeksi virus, bakteri dan parasit.
Salah satu senyawa yang dapat digunakan sebagai senyawa model dalam
kerusakan hati adalah karbon tetraklorida. Karbon tetraklorida di dalam tubuh akan
mengalami proses biotransformasi oleh enzim CYP2E1 membentuk radikal bebas
yaitu radikal triklorometil (●CCl3). Radikal ini kemudian akan bereaksi dengan
oksigen dan membentuk radikal triklorometil peroksi (●OOCCl3) yang lebih reaktif
(Hippeli dan Elstner, 1999).
Radikal triklorometil dapat menyebabkan terjadinya kerusakan sitokrom
dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan
kolesterol. Reaksi ini juga menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu
metabolit dari karbon tetraklorida. Selain itu pula radikal triklorometil dapat
menginisiasi terjadinya radikal lipid yang menyebabkan terbentuknya lipid
hidroperoksidase (LOOH) dan radikal lipid alkoksil (LO●). Melalui proses
fragmentasi, radikal lipid alkoksi tersebut akan diubah menjadi malondialdehid
(Greguz and Klaaseen, 2001). Senyawa aldehid inilah yang akan menyebabkan
kerusakan pada membran plasma dan meningkatkan permeabilitas membran
(Bruckner dan Warren, 2001). Kelainan pada hati dapat dilihat dari meningkatnya
aktivitas transaminase serum yaitu alanin transaminase (ALT), aspartat amino
transferase (AST), bilirubin, γ-Glutamyl transpeptidase (GGT), alkali fosfatase dan
albumin (Ganong dan McPhee, 2011; North-Lewis, 2008).
Alkali fosfatase (ALP) merupakan enzim yang berperan dalam mempercepat
hidrolisis fosfat organik dengan melepaskan fosfat anorganik. Peningkatan ALP
terjadi akibat adanya kolestasis yaitu keadaan yang terjadi karena berkurangnya
aktivitas ekskresi empedu pada membran kanalikulus (Lu, 1995). Kolestasis ditandai
dengan peningkatan asam empedu dalam plasma, khususnya garam empedu dan
bilirubin (Robbins & Cotran, 2005), dan pada obstruksi intra (terjadi kelainan di
dalam parenkim hati dan kanalikuli ) maupun ekstrabiliar (terjadi kelainan dilaur
parenkim hati) enzim ini akan meningkat 3-10 kali dari nilai normal sebelum timbul
ikterus (penyakit kuning akibat akumulasi pigmen empedu) (Ruqiah, Ekowati,
menyebabkan enzim plasma seperti ALP meningkat dalam plasma (Murray, Granner,
and Rodwel, 2009). Peningkatan kadar enzim ini dapat digunakan sebagai cerminan
adanya kerusakan hati (Baron, 1995).
Tanaman telah memiliki peranan penting dalam menjaga kesehatan manusia
dan meningkatkan kualitas hidup. Menurut WHO, sekitar tiga perempat dari populasi
dunia bergantung pada obat tradisional dan sebagian besar dari perawatan ini
melibatkan penggunaan ekstrak tanaman atau komponen aktifnya (Elvin dan Lewis,
2001). Indonesia merupakan salah satu negara yang memiliki banyak
tumbuh-tumbuhan yang dapat digunakan untuk mencegah maupun mengobati penyakit
(Donatus, 2001). Salah satunya adalah alpukat (Persea americana Mill.), dimana
pada penelitian sebelumnya menyatakan bahwa ekstrak metanol biji Persea
americana Mill. memiliki kandungan fitokimia berupa flavonoid, tanin
terkondensasi, anthosianin, alkaloid, dan triterpen (Leite, et. al., 2009). Pada tahun
2012, Malangngi, Meiske, dan Jessey, menyatakan bahwa ekstrak etanol biji Persea
americana Mill. memiliki kandungan antioksidan yang mampu berfungsi menangkap
radikal bebas DPPH. Menurut Nopitasari (2013), dilaporkan bahwa pemberian
ekstrak etanol biji Persea americana Mill. memiliki efek hepatoprotektif pada tikus
jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida, yang ditunjukkan dengan
penurunan aktivitas ALT dan AST serum. Berdasarkan penelitian Vinha, Joana dan
Sérgio pada tahun 2013 menunjukkan bahwa ekstrak air dari bagian alpukat memiliki
aktivitas antioksidan, pada biji aktivitas antioksidan sebesar 43%, pada kulit buah
Berdasarkan hal tersebut dilakukan penelitian terkait pemberian ekstrak
etanol kulit buah Persea americana Mill. pada tikus yang terinduksi karbon
tetraklorida akan memberikan pengaruh penurunan aktivitas ALP. Pemberian ekstrak
etanol kulit buah Persea americana Mill. dilakukan pengamatan dalam jangka
pendek untuk mengetahui aktivitas pemberian ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. yang paling efektif dalam memberikan pengaruh penurunan ALP.
B. RUMUSAN MASALAH
1. Apakah pemberian ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. dalam
penggunaan jangka pendek dapat menurunkan aktivitas ALP pada tikus yang
terinduksi karbon tetraklorida?
2. Apakah ada hubungan kekerabatan antara dosis ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. dengan penurunan aktivitas ALP?
C. KEASLIAN PENELITIAN
Penelitian yang pernah dilakukan dengan menggunakan biji Persea
americana Mill. yaitu oleh Leite et al. (2009) menyatakan bahwa ekstrak metanol biji
Persea americana Mill. memiliki kandungan fitokimia berupa flavonoid, tanin
terkondensasi, anthosianin, alkaloid, dan triterpan. Pada tahun 2003, Yuko dan Jun
melaporkan bahwa aktivitas antioksidan yang potensial ditemukan pada ekstrak
metanol biji Persea americana Mill. Malangngi, dkk., (2012) menyatakan bahwa
berguna untuk menangkap radikal bebas DPPH. Pada penelitian Gunawan (2013),
pemberian ekstrak metanol-air biji Persea americana Mill. dengan dosis 350
mg/kgBB memiliki khasiat nefroprotektif terhadap tikus putih jantan galur Wistar
yang terinduksi karbon tetraklorida, yang ditunjukkan dengan penurunan serum
kreatinin. Pada tahun yang sama, Nopitasari (2013), melaporkan bahwa pemberian
ekstrak etanol biji Persea americana Mill. memiliki efek hepatoprotektif pada tikus
jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida, yang ditunjukkan dengan
penurunan aktivitas ALT dan AST serum. Berdasarkan penelitian Ana, dkk., (2013)
menunjukkan bahwa bagian buah, kulit dan biji alpukat Algarvian memiliki
kandungan karotenoid, phenolik dan flavonoid serta memiliki aktivitas antioksidan.
Bedasarkan penelitian Kosińska, Karamác, Estrella, Bartolomé, dan Dykes (2012),
ekstrak hidroetanolik pada kulit alpukat dan biji alpukat menunjukkan banyaknya
jumlah flavonoid, proantosianidin, dan asam hidrosinamik.
Berdasarkan studi pustaka yang dilakukan peneliti, untuk penelitian
pengaruh pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
terhadap penurunan aktivitas ALP serum pada tikus jantan galur Wistar yang
terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan.
D. MANFAAT PENELITIAN
1. Manfaat Teoritis
Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan manfaat bagi perkembangan
penurunan aktivitas ALP setelah pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit
buah Persea americana Mill.
2. Manfaat Praktis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat
mengenai manfaat penggunaan jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. untuk menurukan aktivitas ALP serum yang berfungsi sebagai
penunjuk adanya kerusakan hati.
E. TUJUAN PENELITIAN
1. Mengetahui pengaruh penurunan aktivitas ALP setelah pemberian jangka
pendek ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. pada tikus yang
terinduksi karbon tetraklorida.
2. Mengetahui kekerabatan dosis ekstrak etanol kulit buah Persea americana
7
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA A. HATI
1. Anatomi dan Fisiologi Hati
Hati merupakan organ terbesar pada tubuh, menyumbang sekitar dua persen
berat tubuh total, atau sekitar 1,5 kg pada rata-rata manusia dewasa (Guyton dan Hall,
2007). Dimana hati terletak dalam rongga abdomen (Kumar, Abbas, Fausto, dan
Mitchell, 2007). Bentuk hati menyesuaikan dengan struktur disekitarnya. Pada bagian
atas hati memilki bentuk cembung dan terletak di bagian kanan bawah diafragma dan
sebagian terletak di sebelah kiri bawah. Bagian bawah hati memiliki bentuk berupa
cekung dan melindungi organ lain seperti ginjal kanan, lambung, usus, dan pankreas.
Hati mempunyai kapasitas cadangan yang besar untuk regenerasi sel yang rusak dan
hanya memerlukan 10-20% fungsi jaringan untuk mempertahankan hidup.
Pembentukan dan ekskresi empedu merupakan fungsi utama hati, dimana saluran
empedu berfungsi mentransport dan kandung empedu berfungsi menyimpan dan
mengeluarkan empedu ke usus halus sesuai yang dibutuhkan. Hati mengsekresi
sekitar 1 liter empedu kuning setiap hari (Price dan Wilson, 2005). Hati memiliki
berat sekitar 1400 g pada orang dewasa dan dibungkus oleh suatu fibrosa. Hati
menerima hampir sekitar 1500 ml darah per menit melalui vena porta dan arteri
Hati terbagi dalam belahan utama yaitu kanan dan kiri. Hati terletak di
bawah diafragma dengan permukaan atas berbentuk cembung, sedangkan permukaan
bawah tidak rata dan memperlihatkan lekukan, fasiura transverses (Pearce, 2009).
Hati tersusun dari dua lobus yaitu lobus kanan dan lobus kiri. Belahan kanan
dan kiri dipermukaan bawah dipisahkan oleh fasiura longitudinal, sedangkan
dipermukaan atas dipisahkan oleh ligamen falsiformis. Dari setiap lobus terdiri dari
lobules. Lobulus merupakan struktur-struktur pada setiap lobus di hati, lobules terdiri
dari lempeng-lempeng sel hati yang berbentuk seperti kubus dan tersusun
mengelilingi vena sentralis (Pearce, 2009). Lempeng-lempeng sel hati dibatasi oleh
ruang vascular yaitu sinusoid. Sinusoid merupakan cabang vena portae dan arteri
hepatica sehingga darah akan bercampur menuju ke vena-vena sentral (Ganong dan
McPhee, 2011).
2. Fungsi Hati
Fungsi utama hati sebagai pusat metabolisme tubuh, yakni hati berperan
penting dalam metabolisme lemak; penimbun vitamin, besi, dan tembaga;
detoksifikasi sejumlah zat endogen (indol, skatol, dan fenol yang dihasilkan oleh
kerja bakteri pada asam amino dalam usus besar) dan zat eksogen (morfin,
fenobarbital); serta makronutrien yang dihantarkan oleh vena portae hepatis pasca
absorpsi dari usus. Sel-sel hati mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang
kaya makanan, tidak mengandung oksigen, dan kadang-kadang toksik. Sel hati
yang tidak biasa. Hal inilah yang menyebabkan sel hati lebih rentan terhadap
kerusakan dan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009).
3. Kerusakan pada Hati a. Perlemakan (Steatosis)
Perlemakan hati ditandai dengan adanya lipid pada hati dengan berat lebih
dari 5%. Lesi yang terbentuk dapat bersifat jangka pendek, seperti yang ditimbulkan
oleh etionin, fosfor, atau tertrasiklin. Tetrasiklin menyebabkan banyaknya butiran
lemak kecil di dalam suatu sel, sementara etanol menyebabkan terbentuknya butiran
lemak kecil yang menggantikan inti, sedangkan karbon tetraklorida menyebabkan
perlemakan hati melalui penghambatan sintesis satuan protein dari lipoprotein dan
penekanan konjugasi trigliserid dengan lipoprotein (Lu, 1995).
b. Nekrosis hati
Nekrosis hati merupakan kematian dari hepatosit yang termasuk dalam
kerusakan jangka pendek. Kematian sel ini ditandai dengan edema sitoplasma,
dilatasi retikulum endoplasma, dan disagregasi polisom (Lu, 1995). Peradangan
parah, nekrosis hepatosit dapat mengenai seluruh lobulus atau sebagian besar hati dan
biasanya menyebabkan gagal hati (Robbins & Cotran, 2005).
c. Kolestasis
Kolestasis merupakan salah satu jenis kerusakan hati yang bersifat akut, dan
lebih jarang ditemukan dibandingkan perlemakan hati dan nekrosis. Keadaan
kolestasis terjadi karena berkurangnya aktivitas ekskresi empedu pada membran
plasma, khususnya garam empedu dan bilirubin (Robbins & Cotran, 2005).
Terganggunya ekskresi empedu dari pigmen bilirubin, pigmen akan terakumulasi di
mata dan jaringan perifer terutama di kulit, menghasilkan penyakit kuning, dan
tumpahan ke dalam urin, yang menjadi kuning coklat atau gelap terang (Gregus dan
Klaaseen, 2001).
Toksin yang menginduksi kolestasis dapat bersifat sementara atau kronis,
namun ketika dalam jumlah yang besar, hal ini dapat memicu pembengkakan sel,
kematian sel, dan peradangan. Banyak jenis bahan kimia termasuk logam, hormon
dan obat-obatan menjadi penyebab kolestasis (Gregus dan Klaaseen, 2001).
Histologis kolestasis kemungkinan sangat halus sehingga sulit untuk dideteksi tanpa
penelitian ultrastruktur. Perubahan struktural mencakup pelebaran dari kanalikulus
empedu serta adanya colokan empedu dalam saluran empedu dan kanalikuli (Lu,
1995).
d. Sirosis
Sirosis merupakan bentuk tahap kerusakan hati kronis dan bersifat fatal
(Gregus dan Klaaseen, 2001). Sirosis ditandai dengan penghancuran hepatosit dan
terbentuknya jaringan parut fibrosa padat, khususnya serabut-serabut kolagen yang
menggantikan sel normal atau sel hepatik yang telah hancur. Hal itu sebagai respon
terhadap kerusakan atau peradangan berulang sehingga hati kehilangan fungsi dan
distorsi strukturnya (Mary, Mary dan Yakobus, 2005). Sirosis bersifat irreversibel,
memiliki harapan hidup kecil, biasanya merupakan hasil paparan berulang zat kimia
B. KARBON TETRAKLORIDA
Karbon tetraklorida merupakan suatu cairan jernih yang mudah menguap,
tidak berwarna, dan dengan bau khas, BM 153,82 dan sangat sukar larut dalam air
(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Karbon tetraklorida
adalah senyawa yang mudah larut dalam lemak dan merupakan model hepatotoksik
yang dapat menimbulkan nekrosis sentrilobular hepatik dan perlemakan hati
(Wahyuni, 2005). Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan senyawa kimia yang bersifat
lebih ekstensif dalam merusak hepar jika dibandingkan dengan senyawa kimia
lainnya.
Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang bersifat toksik. Karbon
tetraklorida di dalam tubuh akan mengalami proses biotransformasi oleh enzim
CYP2E1 membentuk radikal bebas yaitu radikal triklormetil (●CCl3). Radikal ini
kemudian akan bereaksi dengan oksigen dan membentuk radikal triklorometil peroksi
(●OOCCl3) yang lebih reaktif (Gambar 1.) (Hippeli and Elstner, 1999).
Radikal triklorometil dapat menyebabkan terjadinya kerusakan sitokrom
P-450. Radikal triklorometil akan berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal
dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan
kolesterol. Reaksi ini juga menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu
metabolit dari karbon tetraklorida (Gambar 1.). Selain itu pula radikal triklorometil
dapat menginisiasi terjadinya radikal lipid yang menyebabkan terbentuknya lipid
hidroperoksidase (LOOH) dan radikal lipid alkoksil (LO●). Melalui proses
(Greguz and Klaaseen, 2001). Senyawa aldehid inilah yang akan menyebabkan
kerusakan pada membran plasma dan meningkatkan permeabilitas membran
(Bruckner dan Warren, 2001).
Gambar 1. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008)
C. METODE PENGUJIAN
Evaluasi terjadinya kerusakan hepatik dapat dilakukan dengan beberapa uji
1. Tes enzim serum
Mengevaluasi kerusakan hati dengan enzim serum didasarkan atas
spesifikasi dan sensitivitas berbagai tipe kerusakan hati. Berbagai parameter dapat
diukur dalam plasma. Penentuan AST dan ALT enzim adalah cara pengukuran
parameter umum dalam plasma untuk mendeteksi kerusakan hati, enzim yang
dihasilkan beberapa kali lipat dalam 24 jam pertama setelah kerusakan (Timbrell,
2008). Ada beberapa enzim lain yang dapat digunakan sebagai penanda, yaitu Alkalin
fosfatase dan gamma-glutamiltranspeptidase (-GT). Kenaikan aktivitas kedua enzim
serum tersebut menunjukkan kerusakan kolestatik (Plaa dan Charbonneau, 2001).
2. Tes ekskretori hepatik
Zat kimia yang terdapat di dalam sirkulasi sistemik dapat diekskresikan oleh
hati dalam bentuk tidak berubah atau dirubah di dalam hepatosit. Bilirubin dan
xenobiotika merupakan contoh senyawa yang digunakan untuk mendeteksi kerusakan
hepatik (Plaa dan Charbonneau, 2001). Pada kerusakan hati, plasma bilirubin yang
mengalami peningkatan dan albumin plasma yang mengalami penurunan juga dapat
diukur (Timbrell, 2008).
3. Analisis histologik kerusakan hati
Analisis potensi hepatotoksik zat kimia tidak lengkap apabila tidak dengan
adanya deskripsi histologi kerusakan yang dihasilkan. Ciri-ciri kerusakan hati
ditentukan dengan melakukan pengamatan mikroskopik cahaya (Plaa dan
4. Perubahan kandungan kimia hati
Tingkat kerusakan hati yang terjadi dapat dideteksi dan ditetapkan melalui
perubahan struktural dan fungsional hepatik yang disebabkan oleh zat hepatotoksik.
Perubahan efek farmakologis obat dapat digunakan untuk menentukan dan
mendeteksi disfungsi hati (Plaa dan Charbonneau, 2001).
D. ALPUKAT
1. Sinonim
Persea gratissima Gaertn., Persea drymifolia, Persea mubigena, Persea
guatemalensis (Sunarjono, 2008).
2. Nama Daerah
Apokat, alpokat (Melayu), arpuket (Sunda), alpokat (Jawa), alpuket (Betawi) (Suhono
et al., 2010).
3. Taksonomi
Kerajaan : Plantae
Sub-kerajaan : Tracheobionta (tumbuhan berpembuluh)
Filum : Spermatophyta (tumbuhan berbiji)
Sub-Filum : Magnoliophyta (tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)
Sub-kelas : Magnoliidae
Ordo : Laurales
Marga : Persea
Jenis : Persea americana Mill. (Suhono et al, 2010).
4. Kandungan
Hasil skrining fitokimia yang dilakukan oleh Zuhrotun, Nikodemus, Muhtadi
(2004) terhadap simplisia dan ekstrak etanol biji Persea americana Mill.
menunjukkan bahwa biji alpukat mengandung polifenol, flavonoid, triterpenoid,
kuinon, saponin, tanin dan monoterpenoid dan seskuiterpenoid. Berdasarkan
penelitian Vinha, dkk., (2013) menunjukkan komposisi aktif dari beberapa bagian
alpukat. Bagian buah alpukat Algarvian yang berjenis Hass menunjukkan kandungan
karotenoid sebesar 0,8 ± 0,2 mg/100g, komposisi fenolik 410,2 ± 69,0 mg/100g dan
flavonoid 21,9 ± 1,0 mg/100g. Bagian kulit buah memiliki kandungan 2,5 ± 0,1
mg/100g karotenoid, 679,0 ± 117,0 mg/100g fenolik dan 44,3 ± 3,1 mg/100g
flavonoid. Bagian biji buah menunjukkan kandungan fenolik sebesar 704,0 ± 130,0
mg/100g dan flavonoid 47,9 ± 2,6 mg/100g. Konsentrasi kandungan vitamin C dan E
yang tertinggi terletak pada buah (5,3 ± 1,7 mg/100g kandungan vitamin E) dan kulit
(4,1 ± 2,7 mg/100g kandungan vitamin C). Alpukat memiliki aktivitas antioksidan,
pada biji aktivitas antioksidan sebesar 43%, pada kulit buah sebesar 35% dan pada
buahnya sendiri sebesar 23%. Bedasarkan penelitian Kosińska et al. pada tahun 2012,
ekstrak hidroetanolik pada kulit alpukat dan biji alpukat menunjukkan banyaknya
5. Khasiat dan Kegunaan
Penelitian Imafidon and Amaechina (2010) dan Anaka, Ozolua, Okpo (2009)
melaporkan ekstrak air biji Persea americana Mill. mempunyai khasiat sebagai
antihipertensi. Ekstrak etanol biji Persea americana Mill. memiliki kandungan
antioksidan (Malangngi, dkk., 2012). Penelitian sebelumnya menyatakan bahwa
ekstrak metanol biji Persea americana Mill. memiliki kandungan fitokimia berupa
flavonoid, tanin terkondensasi, anthosianin, alkaloid, dan triterpan (Leite et al.,
2009). Tahun 2003, Yuko dan Jun melaporkan bahwa aktivitas antioksidan yang
potensial ditemukan pada ekstrak metanol biji Persea americana Mill. Penelitian
Nopitasari (2013), menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji Persea
americana Mill. memiliki efek hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang
terinduksi karbon tetraklorida, yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT
dan AST serum. Menurut Gunawan (2013), pemberian ekstrak metanol-air biji
Persea americana Mill. dengan dosis 350 mg/kgBB memiliki khasiat nefroprotektif
terhadap tikus putih jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida, yang
ditunjukkan dengan penurunan serum kreatinin. Menurut Rosari (2013), pemberian
dekok biji Persea americana Mill. secara jangka pendek dengan dosis 360,71
mg/kgBB memiliki pengaruh terhadap penurunan aktivitas ALT dan AST pada tikus
E. ALKALI FOSFATASE
Alkali fosfatase merupakan enzim yang berperan dalam mempercepat
hidrolisis fosfat organik dengan melepaskan fosfat anorganik. Enzim ini terdapat
dalam banyak jaringan, terutama di hati, tulang, mukosa usus, dan plasenta.
Peningkatan ALP terjadi akibat adanya kolestasis, dan pada obstruksi intra maupun
ekstrabiliar enzim ini akan meningkat 3-10 kali dari nilai normal sebelum timbul
ikterus. Berdasarkan penelitian, pemberian 10 ml CCl4/kgBB menunjukkan bahwa
kemampuan hati dalam mensintesis enzim ALP sudah sangat terganggu akibat
terjadinya kerusakan sel hati yang luas dan berat (Ruqiah, dkk., 2007). Berdasarkan
penelitian Janakat dan Merie (2002) dan penelitian Garri (2013) dosis yang
digunakan pada penelitian ini yaitu 2 ml/kg BB, yang mana pada dosis ini sudah
mampu menimbulkan efek hepatotoksik. Adapun pada dosis rendah karbon
tetraklorida hanya menyebabkan kerusakan ringan berupa perlemakan hati (Timbrell,
2008).
Kerusakan yang terjadi pada lobus hati menyebabkan enzim plasma seperti
ALP meningkat dalam plasma (Murray,dkk., 2009). Peningkatan ALP serum terjadi
karena kerusakan dinding kanalikulus biliaris yang tersusun dari hepatosit yang rusak
(tempat ALP berada) akibat dari ikatan kovalen antara lipid dengan radikal bebas.
Sehingga terjadi kebocoran dan menyebabkan serum ALP banyak terdapat di plasma
darah. Pada tikus ditunjukkan nilai normal dari serum ALP adalah 164 ± 7,5 U/L
(Kiran, Vijaya, Ganga, 2012). Peningkatan kadar enzim ini dapat digunakan untuk
Kelainan pada hati dapat dilihat dari meningkatnya aktivitas transaminase
serum yaitu alanin transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), bilirubin,
GGT (γ-Glutamyl transpeptidase), alkalin phosfatase dan protein (Ganong dan
McPhee, 2011; North-Lewis, 2008).
F. EKSTRAKSI MASERASI
Ekstrak merupakan sediaan kental yang diperoleh dengan cara mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang
sesuai, kemudian semua atau hampir pelarut diuapkan dan masa atau serbuk yang
tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan
(Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).
Metode maserasi merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari
pada temperatur kamar dan terlindung dari cahaya. Metode maserasi digunakan untuk
menyari simplisia yang mengandung komponen kimia yang mudah larut dalam cairan
penyari tidak mengandung benzoin, stiraks dan lilin (Sudarmaji, Haryono, dan
Suhardi, 1989).
G. LANDASAN TEORI
Hati merupakan organ terbesar pada tubuh yang menyumbang sekitar dua
persen berat tubuh total, atau sekitar 1,5 kg pada rata-rata manusia dewasa (Guyton
dan Hall, 2007). Pembentukan dan ekskresi empedu merupakan fungsi utama hati,
menyimpan dan mengeluarkan empedu ke usus halus sesuai yang dibutuhkan. Hati
mengsekresi sekitar 1 liter empedu kuning setiap hari (Price and Wilson, 2005).
Alkali fosfatase merupakan enzim yang berperan dalam mempercepat
hidrolisis fosfat organik dengan melepaskan fosfat anorganik. Peningkatan ALP
terjadi akibat adanya kolestasis, dan pada obstruksi intra maupun ekstrabiliar enzim
ini akan meningkat 3-10 kali dari nilai normal sebelum timbul ikterus (Ruqiah, dkk.,
2007). Kerusakan yang terjadi pada lobus hati menyebabkan enzim plasma seperti
ALP meningkat dalam plasma (Murray,dkk., 2009). Peningkatan kadar enzim ini
dapat digunakan untuk cerminan adanya kerusakan hati (Baron, 1995).
Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan senyawa kimia yang bersifat lebih
ekstensif dalam merusak hepar jika dibandingkan dengan senyawa kimia lainnya.
Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang bersifat toksik. Karbon tetraklorida di
dalam tubuh akan mengalami proses biotransformasi oleh enzim CYP2E1
membentuk radikal bebas yaitu radikal triklormetil (●CCl3). Radikal ini kemudian
akan bereaksi dengan oksigen dan membentuk radikal triklorometil peroksi
(●OOCCl3) yang lebih reaktif (Hippeli and Elstner, 1999).
Radikal triklorometil dapat menyebabkan terjadinya kerusakan sitokrom
P-450. Radikal triklorometil akan berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal
dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan
kolesterol. Reaksi ini juga menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu
metabolit dari karbon tetraklorida. Selain itu pula radikal triklorometil dapat
hidroperoksidase (LOOH) dan radikal lipid alkoksil (LO●). Melalui proses
fragmentasi, radikal lipid alkoksi tersebut akan diubah menjadi malondialdehid
(Greguz and Klaaseen, 2001). Senyawa aldehid inilah yang akan menyebabkan
kerusakan pada membran plasma dan meningkatkan permeabilitas membran
(Bruckner dan Warren, 2001).
Biji Persea americana Mill. diketahui mempunyai aktivitas antioksidan
yang potensial pada ekstrak metanol biji Persea americana Mill. (Yuko dan Jun,
2003). Menurut Rosari (2013), pemberian dekok biji Persea americana Mill. secara
jangka pendek dengan dosis 360,71 mg/kgBB memiliki pengaruh terhadap penurunan
aktivitas ALT dan AST pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida.
Menurut Nopitasari (2013), pemberian ekstrak etanol biji Persea americana Mill.
memiliki efek hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon
tetraklorida, yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT dan AST serum.
Berdasarkan penelitian Ana, Joana dan Sérgio pada tahun 2013 menunjukkan ekstrak
dari bagian alpukat memiliki aktivitas antioksidan, pada biji aktivitas antioksidan
sebesar 43%, pada kulit buah sebesar 35% dan pada buahnya sendiri sebesar 23%.
Hal ini memungkinkan pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. mampu berperan sebagai penurun aktivitas ALP.
H. HIPOTESIS
Pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
21
BAB III
METODE PENELITIAN
A. JENIS DAN RANCANGAN PENELITIAN
Penelitian mengenai pengaruh pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit
buah Persea americana Mill. terhadap aktivitas enzim Alkali Fosfatase pada tikus
terinduksi karbon tetraklorida merupakan penelitian eksperimental murni dengan
memberikan perlakuan terhadap sejumlah variabel penelitian. Rancangan penelitian
ini termasuk rancangan acak lengkap pola searah yang artinya bahwa setiap hewan uji
mempunyai kesempatan yang sama untuk mendapatkan perlakuan, dimana hewan uji
mendapatkan perlakuan yang sama. Dan variabel pada penelitian ini menggunakan
satu variabel bebas.
B. VARIABEL DAN DEFINISI OPERASIONAL
1. Variabel Utama
a. Variabel bebas. Variabel bebas pada penelitian ini adalah variasi dosis
penggunaan jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
yang diberikan pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida.
b. Variabel tergantung. Variabel tergantung pada penelitian ini adalah pengaruh
penurunan aktivitas ALP pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon
tetraklorida setelah pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah Persea
2. Variable Pengacau
a. Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini
adalah kondisi hewan uji yang digunakan, yaitu tikus galur Wistar dengan jenis
kelamin jantan dengan berat badan 150-250 g dan berumur 2-3 bulan, digunakan
tikus dewasa dengan berat yang mencukupi karena tikus dengan usia dewasa
sudah memiliki organ yang lengkap; frekuensi waktu pemberian ekstrak etanol
kulit buah Persea americana Mill. dan cara pemberian ekstrak etanol kulit buah
Persea americana Mill. secara peroral serta bahan kulit buah Persea americana
Mill.
b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam
percobaan ini adalah kondisi patofisiologis hewan uji.
3. Definisi Operasional
a. Ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
Ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. adalah ekstrak kental yang
diperoleh dari serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. yang dilarutkan
dalam pelarut etanol 70% dan dimaserasi selama 5 hari dengan sesekali
penggojokan. Kemudian disaring, serbuknya di remaserasi kembali selama 2 hari
dengan sesekali penggojokan. Setelah itu disaring, hasil penyaringan pertama dan
kedua disatukan dan dievaporasi dengan cara diuapkan di atas waterbath pada
b. Penurunan ALP
Penurunan ALP merupakan kemampuan ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. untuk menurunkan aktivitas ALP pada tikus yang terinduksi
karbon tetraklorida.
c. Jangka pendek
Jangka pendek yang dimaksud dalam penelitian adalah pemberian ekstrak etanol
kulit buah Persea americana Mill. kepada hewan uji pada waktu 6 jam sebelum
pemberian karbon tetraklorida.
d. Kulit buah
Kulit buah yang dimaksud dalam penelitian adalah kulit buah Persea americana
Mill. yang didapatkan dari buah Persea americana Mill. yang sudah matang
dengan warna kulit hijau.
C. BAHAN PENELITIAN 1. Bahan utama
a. Hewan uji yang digunakan adalah tikus jantan galur Wistar, berumur 2-3 bulan
dengan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
b. Bahan uji yang digunakan adalah kulit buah Persea americana Mill. yang
diperoleh dari depot es yang terletak di Ambarukmo Plaza dan Malioboro,
Yogyakarta. Waktu pengambilan kulit Persea americana Mill. adalah selama
2. Bahan kimia
a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh
dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
b. Etanol 70% sebagai pelarut yang digunakan untuk pembuatan sediaan uji
diperoleh dari laboratorium Biofarmasetika Fakultas Farmasi Sanata Dharma.
c. Blanko pengujian ALP menggunakan aqua bidestilata yang diperoleh dari
laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Sanata Dharma.
d. Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah olive oil (Bertolli®)
yang diperoleh dari laboratorium Biofarmasetika Fakultas Farmasi Sanata
Dharma.
e. Reagen serum ALP
Reagen serum yang digunakan adalah reagen yang terdapat di laboratorium
Parahita, karena pengamatan nilai ALP dilakukan laboratorium Parahita di
Yogyakarta. Reagen yang digunakan di laboratorium Parahita yaitu terdiri dari
dua reagen :
1. Reagen 1 terdiri dari : 2-Amino-2-methylpropanol (C = > 1.2 mol/L)
Magnesium (C = > 7.2 mmol/L)
Zinc sulfate (C = > 3.6 mmol/L)
HEDTA (C = > 7.2 mmol/L)
D. ALAT PENELITIAN 1. Alat ekstraksi
Alat gelas yaitu Bekker glass, Erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, cawan
porselen, corong Buchner, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®). Mesin
penyerbuk Retsch®, ayakan No. 40 Elektric Sieve Shaker Indotest Multi Lab®,
timbangan analitik Metteler Toledo®, moisture balance, orbital shaker Optima®,
rotary vaccum evaporator IKVAC®, oven Memmert®.
2. Alat uji hepatoprotektif
Seperangkat alat gelas berupa Beker glass, gelas ukur, tabung reaksi, labu
ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®). Timbangan electric Mettler
Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit per oral dan
syringe 3 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®,
stopwatch.
E. TATA CARA PENELITIAN
1. Determinasi buah Persea americana Mill.
Determinasi buah Persea americana Mill. dilakukan dengan mencocokan
buah Persea americana Mill. yang berasal dari depot es yang terletak di Ambarukmo
2. Pengumpulan bahan uji
Bahan uji penelitian ini adalah kulit buah Persea americana Mill. yang
masih segar dan tidak busuk, bahan uji dikumpulkan selama periode bulan Juni 2014.
Buah yang diambil adalah buah yang matang dengan warna kulit hijau.
3. Pembuatan serbuk kering kulit buah Persea americana Mill.
Kulit buah Persea americana Mill. yang telah dipisahkan dari dagingnya,
diambil kulitnya dan di cuci dibawah air yang mengalir. Setelah bersih
diangin-anginkan kemudian dipotong hingga menjadi potongan-potongan kecil bertujuan
untuk mempercepat proses pengeringan. Selanjutnya setelah dalam bentuk potongan
kecil dilakukan pengeringan di bawah sinar matahari. Pengeringan dilanjutkan
dengan oven pada suhu 500C selama 24 jam, kemudian diserbuk dan diayak dengan
ayakan No. 40 agar luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut semakin
besar sehingga kandungan fitokimia yang terkandung dalam kulit buah Persea
americana Mill. lebih mudah terekstrak.
4. Penetapan kadar air serbuk kering kulit buah Persea americana Mill.
Penetapan kadar air secara sederhana menggunakan alat moisture balance.
Sebanyak 5 g serbuk kulit buah Persea americana Mill. dimasukkan ke dalam alat
moisture balance dan diratakan. Serbuk ditimbang sebagai bobot sebelum pemanasan
(bobot a). Kemudian serbuk dipanaskan pada suhu diatas 1050C dan serbuk
ditimbang kembali sebagai bobot setelah pemanasan (bobot b). Selisih bobot sebelum
5. Pembuatan ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
Pembuatan ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill. menggunakan
metode maserasi. Metode maserasi dipilih karena digunakan untuk menyari simplisia
dimana zat aktif yang terkandung di dalamnya mudah larut dalam cairan penyari.
Selain itu dalam proses pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana. Dalam
metode maserasi tidak dilakukan pemanasan sehingga bahan alam tidak akan terurai.
Cairan penyari yang digunakan adalah etanol karena senyawa hipotesis yang
diketahui adalah senyawa golongan glikosida fenolik yang dapat larut dalam pelarut
polar. Hal ini berdasarkan penelitian Javier, David, Maria, Petri dan Mario (2011),
menyatakan bahwa senyawa fenolik biji Persea americana Mill. merupakan hasil
isolasi dengan pelarut organik yang bersifat polar. Berdasarkan penelitian Shirly,
Hesty dan Wahyu (2013) menyatakan bahwa ekstrak etanol 70% daun Persea
americana Mill. mengandung senyawa flavonoid, saponin, dan kumarin.
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi yaitu perendaman dengan
melarutkan 40 g serbuk kulit buah Persea americana Mill. dalam 200 ml pelarut
etanol 70 % dan dimaserasi selama 5 x 24 jam pada suhu kamar dengan sesekali
dilakukan penggojokan. Tujuan dilarutkannya dalam pelarut etanol supaya senyawa
kimia yang terkandung dalam kulit buah Persea americana Mill. dapat larut di dalam
pelarut. Selanjutnya hasil maserasi disaring untuk memisahkan filtrat dari serbuk
(residu) dengan menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring. Kemudian
serbuk hasil penyaringan tersebut di remaserasi atau maserasi kembali dengan pelarut
selanjutnya disaring. Kedua hasil ekstrak dicampurkan dan dievaporasi menggunakan
labu alas bulat. Ekstrak kental yang diperoleh ditempatkan dalam cawan petri dan
dilakukan penimbangan untuk mempermudah dalam perhitungan rendemen ekstrak
yang akan diperoleh. Kemudian hasil maserasi diuapkan kembali di atas waterbath
dengan suhu 800C hingga diperoleh bobot tetap kemudian disimpan di dalam
desikator.
Dilakukan perhitungan rata-rata rendemen enam replikasi ekstrak etanol
kulit buah Persea americana Mill. kental yang telah dibuat.
Rendemen ekstrak = berat cawan ekstrak kental – berat cawan kosong Berat serbuk kering
Rata-rata rendemen = rep.1 + rep.2 + rep.3 + rep.4 + rep.5 + rep.6
6
6. Penetapan konsentrasi pekat ekstrak
Berdasarkan penelitian Nopitasari (2013), digunakan konsentrasi pekat yang
dapat dibuat dimana pada konsentrasi tersebut ekstrak yang dibuat dapat dimasukkan
serta dikeluarkan dari spuit oral. Cara pembuatannya dengan melarutkan ekstrak
sebanyak 3,5 g dalam labu ukur 50 ml dengan pelarut yang sesuai yaitu CMC Na 1%.
Sehingga konsentrasi ekstrak dapat ditetapkan sebesar 7% b/v atau 0,07 g/ml atau 70
mg/ml.
7. Penetapan dosis ekstrak etanol kulit Buah Persea americana Mill.
Berdasarkan penelitian Nopitasari (2013), penetapan peringkat dosis
yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan melalui spuit oral dan pemberian volume
cairan peroral yaitu 5 ml. Penetapan dosis tertinggi ekstrak etanol kulit buah Persea
americana Mill. dengan konsentrasi 7% diperoleh sebagai berikut :
D x BB = C x V
D x 0,250 kgBB = 70 mg/ml x 5 ml
D = 1400 mg/kgBB
Dua dosis lainnya diperoleh dengan menurunkan 2 dan 4 kalinya sehingga
didapatkan dosis 700 dan 350 mg/kgBB. Dosis yang digunakan dalam penelitian
adalah 350; 700; dan 1400 mg/kgBB atau 0,35; 0,70; dan 1,40 g/kgBB.
8. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1%
Ditimbang sebanyak 5 g CMC Na, kemudian dilarutkan menggunakan
aquadest 200 ml, lalu didiamkan selama 24 jam hingga CMC mengembang,
kemudian di add dengan aquadest pada labu ukur hingga 500 ml.
9. Pembuatan larutan karbon tetraklorida
Karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50% dengan cara melarutkan
50 ml karbon tetraklorida ke dalam olive oil sebanyak 50 ml (Janakat dan Merrie,
2002).
10.Uji pendahuluan
a. Penetapan dosis karbon tetraklorida bertujuan untuk mengetahui pada dosis
berapa karbon tetraklorida mampu menimbulkan kerusakan hati pada tikus yang
ditunjukan dengan adanya peningatan aktivitas serum ALT yang tinggi.
adalah 2 ml/kg BB yang terbukti mampu meningkatkan aktivitas serum ALT dan
AST yang diberikan secara intraperitonial (i.p). Pada penelitian yang dilakukan
Garri (2013) juga membuktikan bahwa 2 ml/kg BB mampu meningkatkan
aktivitas serum ALT dan AST yang pemberiannya melalui intraperitonial (i.p).
b. Penetapan waktu pencuplikan darah. Untuk mendapatkan waktu pencuplikan
darah dilakukan orientasi dengan satu kelompok. Dalam satu kelompok terdiri
dari 5 ekor tikus. Pengambilan darah dilakukan melalui sinus orbitalis mata. Pada
jam ke 0, 24, dan 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Kemudian
lakukan pengukuran aktivitas ALT.
11.Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji
Tiga puluh ekor tikus dibagi menjadi enam kelompok perlakuan secara acak,
masing-masing sejumlah lima ekor tikus.
a. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida : olive oil
(1:1) dosis 2 ml/kgBB secara intra peritonial, setelah dua puluh empat jam ambil
darahnya.
b. Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil sebanyak 2 mL secara intra
peritonial, setelah dua puluh empat jam diambil darahnya.
c. Kelompok III (kontrol ekstrak) diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana
Mill. dosis 1,4 g/kgBB secara per oral, enam jam kemudian diambil darahnya.
d. Kelompok IV (dosis rendah) diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana
e. Kelompok V (dosis tengah) diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana
Mill. dosis 0,7 g/kgBB secara per oral.
f. Kelompok VI (dosis tinggi) diberi ekstrak etanol kulit buah Persea americana
Mill. dosis 1,4 g/kgBB secara per oral.
Enam jam kemudian kelompok IV-VI dipejani karbon tetraklorida dosis 2
ml/kgBB secara intraperitonial. Ambil darahnya setelah 24 jam melalui sinus orbitalis
mata, kemudian diukur aktivitas ALP-nya.
12.Pembuatan serum
Darah diambil melalui sinus orbitalis mata tikus dan ditampung dalam
tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama ± 15 menit, kemudian disentrifugasi
selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm dan bagian supernatannya diambil.
13.Penetapan aktivitas serum ALP
Pengukuran aktivitas ALP dilakukan di Laboratorium PARAHITA,
Yogyakarta. Pengukuran dilakukan dengan cara memasukkan serum yang didapatkan
ke dalam alat Architect yang didalamnya terdapat reagen untuk pengukuran ALP
serum. Prinsip dari pengukuran aktivitas ALP serum yaitu alkali fosfatase dalam
sampel mempercepat hidrolisis p-nitrofenil fosftat (p-NPP) menjadi p-nitrofenol dan
fosfat anorganik. Pada pH basa, p-nitrofenol dalam bentuk phenoxide berwarna
kuning akan memberikan kenaikan absorbansi pada panjang gelombang 404 nm yang
F. TATA CARA ANALISIS HASIL
Data aktivitas ALP dianalisis dengan Kolmogorov-Smirnov karena sampel
yang digunakan pada penelitian kurang dari 50. Kolmogorov-Smirnov digunakan
untuk mengetahui normalitas data pada masing-masing kelompok perlakuan. Nilai
normal suatu data ditunjukkan dengan nilai p>0,05. Apabila hasil analisis statistik
Kolmogorov-Smirnov kadar serum ALP menunjukkan distribusi data normal
(p>0,05), dilanjutkan dengan analisis One Way Anova dengan taraf kepercayaan 95%
untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Apabila hasil tersebut
menunjukkan nilai signifikansi (p>0,05), berarti data tersebut homogen. Kemudian
dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar
kelompok. Jika diperoleh distribusi data yang tidak normal maka dilakukan analisis
data menggunakan Kruskal-Wallis untuk melihat homogenitasnya, dan dilanjutkan
33
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak
etanol kulit buah Persea americana Mill. pada tikus jantan jalur Wistar yang
terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat aktivitas enzim alkali fosfatase (ALP)
serta melihat tingkat kekerabatan antar dosis dengan peningkatan ataupun penurunan
nilai ALP.
A. Penyiapan Bahan 1. Hasil determinasi tanaman
Determinasi tanaman dilakukan untuk memastikan bahwa tanaman yang
digunakan dalam penelitian adalah Persea americana Mill. Bagian tanaman yang
digunakan untuk determinasi adalah buah Persea americana Mill. Determinasi
tanaman dilakukan dengan mencocokkan kesamaan ciri buah Persea americana Mill.
dengan literatur Agrilink tahun 2001. Hasil determinasi membuktikan bahwa bahan
yang digunakan dalam penelitian benar merupakan tanaman Persea americana Mill.
2. Penetapan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill.
Penetapan kadar air bertujuan untuk mengetahui kadar air dalam serbuk kulit
buah Persea americana Mill. dan melalui uji ini dapat diketahui apakah serbuk kulit
buah Persea americana Mill. telah memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu
memiliki kadar air kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan
dilakukan di Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Serbuk kulit buah Persea
americana Mill. yang akan digunakan, dipanaskan pada suhu diatas 1050C karena
diasumsikan pada suhu diatas 1050C kandungan air didalam serbuk kulit buah Persea
americana Mill. dapat menguap. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa serbuk
kulit buah Persea americana Mill. memiliki kadar air 7,1%. Hal ini menyatakan
bahwa serbuk kulit buah Persea americana Mill. memenuhi syarat serbuk yang baik.
Kelemahan pada penelitian ini yaitu tidak dilakukan uji kadar air ekstrak etanol kulit
buah Persea americana Mill. sehingga perlu dilakukan penelitian lanjutan mengenai
hal tersebut.
3. Hasil penimbangan bobot ekstrak etanol kulit buah Persea americana Mill.
Metode yang digunakan dalam pembuatan ekstrak etanol dalam penelitian
ini adalah metode maserasi. Metode maserasi dipilih karena digunakan untuk menyari
simplisia dimana zat aktif yang terkandung di dalamnya mudah larut dalam cairan
penyari. Selain itu dalam proses pengerjaan dan peralatan yang digunakan begitu
sederhana. Cairan penyari yang digunakan adalah etanol karena senyawa hipotesis
yang diketahui adalah senyawa golongan glikosida fenolik yang dapat larut dalam
pelarut polar. Berdasarkan penelitian Malangngi, dkk., pada tahun 2012, ekstrak
etanol biji Persea americana Mill. memiliki kandungan antioksidan.
Hasil menunjukkan bahwa sebanyak 400 gram serbuk kering Persea
americana Mill. menghasilkan berat tetap 4,48 gram ekstrak kental, dengan hasil
B. Uji Pendahuluan 1. Penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida
Senyawa hepatotoksik yang digunakan dalam penelitian ini adalah karbon
tetraklorida. Pada penelitian ini penentuan dosis karbon tetraklorida bertujuan untuk
mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida dapat menyebabkan kerusakan hati
pada tikus yang ditunjukkan dengan peningkatan aktivitas enzim ALP. Pada
penelitian Janakat dan Merie (2002) dan penelitian Garri (2013) menyatakan bahwa
dosis karbon tetraklorida yang mampu menimbulkan efek hepatotoksik adalah 2
ml/kg BB. Berdasarkan penelitian Nirmala, Girija, Lakshman dan Divya (2012),
menunjukkan bahwa dengan peningkatan nilai ALT lebih dari 1,5 kali lipat
menunjukkan peningkatan pada aktivitas ALP serum. Hal tersebut juga didukung
oleh penelitian Ruqiah, dkk. (2007), yang menyatakan bahwa dengan peningkatan
aktivitas ALT juga meningkatkan aktivitas ALP.
2. Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji
Penentuan waktu pencuplikan darah pada hewan uji bertujuan untuk
mengetahui efek hepatotoksik karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB mencapai
maksimal, yang ditunjukkan dengan peningkatan ALT tertinggi pada waktu tertentu.
Pencuplikan darah dilakukan melalui sinus orbitalis mata dengan selang waktu
tertentu yaitu jam ke 0, 24 dan 48 setelah pemberian larutan karbon tetraklorida dosis
2 ml/kg BB. Hasil uji berupa aktivitas ALT setelah pemberian karbon tetraklorida
