Preparasi Kolom Microbore Monolith Berbasis Polistirena untuk
Pemisahan Alkilbenzena Menggunakan Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi
Aprilia Nur Tasfiyati1), Wigang Solandjari1), Elvina Dhiaul Iftitah1), Akhmad Sabarudin 1,2,)* 1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya
2) Pusat Penelitian Advanced System and Material Technology (ASMAT), Universitas Brawijaya
Diterima 31 Maret 2015, direvisi 07 Juli 2015
ABSTRAK
Dalam penelitian ini, monolith polimer organik berbasis polistirena dikembangkan sebagai kolom kromatografi fasa terbalik pada kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) untuk pemisahan senyawa-senyawa dengan ukuran molekul kecil, yaitu alkilbenzena. Kolom monolith dibuat dalam kolom silicosteel berukuran microbore (100 1,02 mm i.d) secara polimerisasi in situ menggunakan styrene sebagai monomer, divinilbenzena sebagai crosslinker, porogen, dan inisiator radikal 2,2’-azobis(isobutyronitrile). Morfologi kolom monolith dipelajari menggunakan SEM. Karakter monolith seperti permeabilitas, porositas, dan distribusi ukuran monolith juga dipelajari dengan detil. Dari hasil karakterisasi 9 variasi komposisi monolith, monolith PS-DVB dengan komposisi %T 30, %C 50 menggunakan porogen yang terdiri dari toluena:1-dekanol (3:7 v/v) merupakan komposisi yang ideal dan dapat memberikan hasil yang terbaik untuk pemisahan alkilbenzena. Monolith ini mempunyai jumlah piringan teoritis (N) sebesar 17260/m kolom, serta memiliki proporsi flow-through pore dan mesopore yang relatif seimbang, yaitu berturut-turut sebesar 47% dan 44%. Performa kolom monolith juga dibandingkan dengan kolom monolith komersial Proswift RP-4H. Kolom monolith PS-DVB yang dibuat dalam penelitian ini menunjukkan hasil yang lebih baik daripada kolom monolith komersial.
Kata kunci : kolom monolith, microbore, polistirena, kromatografi cair fasa terbalik, alkilbenzena
ABSTRACT
In this study, polystyrene-based monolith was developed as reversed phase column in high performance liquid chromatography (HPLC) for separation of small molecule sample (alkylbenzene). Polystyrene-based monolithic column was prepared in microbore silicosteel column (100 x 1.02 mm i.d.) by in-situ polymerization reaction using styrene as monomer, divinylbenzene as crosslinker, porogenic solvents, with the presence of radical initiator 2,2’-azobis(isobutyronitrile). The morphology of the monolithic column was studied by SEM. The properties of the monolithic column, such as permeability, mechanical stability, binding capacity and pore size distribution, were characterized in detail. From the characterization results of 9 monolith variation, monolith PS-DVB with %T 30, %C 50, using toluene:1-decanol (3:7 v/v) as porogenic solvent was found to be the ideal composition and gave the best separation of alkylbenzene. It has theoretical plate value (N) of 17260/m column, also has relatively equal proportion of flow-through pore and mesopores (47% and 44% respectively). The performance of monolithic column was also compared with commercially available monolithic column Proswift RP-4H. PS-DVB monolith prepared in this study shown its superiority over commercial one.
Keywords : monolithic column, microbore, polystyrene, reversed phase liquid chromatography, alkylbenzene
PENDAHULUAN
Monolith adalah material berpori kontinyu dengan struktur pori yang terdiri dari 3 jenis ukuran, yaitu micropore (<2 nm), mesopore (2---
*Corresponding author:
50 nm), dan macropore/flow-through pores
(>50 nm). Sebagai media pemisahan, monolith telah banyak diaplikasikan sebagai pengganti kolom partikel konvensional yang selama ini digunakan dalam KCKT. Variasi dan aplikasi kolom monolith telah berkembang dengan pesat dalam dekade terakhir ini dan memainkan peranan yang sangat penting dalam ilmu kimia pemisahan [1,2].
Keuntungan kolom monolith terutama terletak pada kemudahan produksinya yang dapat dibuat secara langsung di dalam kolom secara in situ dan terikat secara kovalen pada dinding kolom, sehingga tidak memerlukan
stopper untuk menahan monolith pada tempatnya. Selektivitas monolith dapat dengan mudah diubah secara in situ dengan penambahan gugus aktif yang selektif melalui kopolimerisasi monomer fungsional, post-polimerisasi untuk modifikasi situs reaktif, maupun foto-grafting pada permukaan monolith. Monolith mempunyai porositas lebih tinggi daripada kolom partikel konvensional, menyebabkan permeabilitas yang tinggi sehingga dapat diaplikasikan untuk laju alir yang tinggi dengan tekanan rendah tanpa mengurangi efisiensi pemisahan dan tidak berpotensi menimbulkan kerusakan baik pada instrumen maupun pada kolom. Analisis dapat dilakukan dalam waktu lebih singkat [3–6].
Penggunaan porositas dan ukuran pori yang dapat divariasi, monolith terbukti dapat berfungsi sebagai media pemisahan dalam kromatografi untuk pemisahan berbagai analit, mulai dari molekul berukuran kecil [3,7–8], hingga makromolekul seperti peptida dan protein [9–10], dan juga oligodeoxythymidylic acids [2].
Monolith diklasifikasikan dalam 2 jenis, yaitu monolith berbasis polimer organik dan monolith berbasis silika. Monolith polimer organik mempunyai lebih banyak keunggulan. Keunggulan tersebut antara lain dapat diaplikasikan pada rentang pH yang lebar, serta kemudahan dalam proses preparasi dan modifikasi. Sedangkan kelemahan monolih polimer organik meliputi stabilitas mekanis yang rendah dan keberadaan micropore yang mengurangi efisiensi dalam pemisahan molekul berukuran kecil. Kelemahan monolith polimer organik dapat diatasi dengan optimasi konsentrasi total monomer (%T) dan konsentrasi crosslinker (%C) serta pemilihan
monomer dan porogen yang tepat [3].
Dari berbagai jenis monolith polimer organik, monolith berbasis polistirena termasuk salah satu yang paling umum digunakan sebagai media pemisahan. Fasa diam berbasis polistirena telah terbukti mempunyai stabilitas kimia yang tinggi pada rentang pH yang lebar. Kolom monolith berbasis polistirena telah banyak digunakan secara luas untuk aplikasi pemisahan berbagai jenis analit [11–13].
Monolith dalam penelitian ini dibuat dalam kolom berukuran microbore (diameter 0,75–1,5 mm). Kolom jenis ini dapat dengan mudah dihubungkan ke sistem KCKT standar tanpa modifikasi apapun. Diameter kolom ini cukup kecil sehingga diharapkan mempunyai beberapa keuntungan dibandingkan dengan kolom berdiameter besar, yaitu homogenitas yang baik dan efisiensi pemisahan yang tinggi terutama untuk sampel-sampel biologis dalam jumlah kecil. Selain itu, konsumsi sampel dan pelarut lebih sedikit sehingga lebih hemat dan ramah lingkungan. Sedangkan kolom berdiameter besar bersifat kurang homogen. Homogenitas yang rendah disebabkan oleh pengaruh pemanasan yang tidak merata dan pengaruh gravitasi pada proses pembentukan dan pengendapan polimer (growing gravitational settling effect) [14–16].
Dalam penelitian ini dibuat monolith polimer organik berbasis polistirena, yaitu poly-(stirena-co-divinilbenzena) / PS-DVB, yang disintesis secara in situ dalam kolom microbore
(1,02 mm i.d. x 100 mm). Berbagai jenis porogen biner, konsentrasi total monomer (%T) dan konsentrasi crosslinker (%C) dioptimasi untuk menghasilkan monolith dengan karakteristik terbaik, mencakup permeabilitas, porositas, serta distribusi ukuran pori. Morfologi monolith diobservasi menggunakan
scanning electron microscopy (SEM). Kemudian, monolith dievaluasi performa kromatografiknya dengan aplikasi pemisahan sampel senyawa alkilbenzena.
METODE PENELITIAN
isoamilalkohol, aseton, asetonitril dan tetrahidrofuran (THF) berasal dari Wako Pure Chemicals (Osaka, Jepang). Urasil, etilbenzena, propilbenzena, butilbenzena, dan amilbenzena diperoleh dari Tokyo Chemical Industries (Jepang). Polistirena standar set (Mw 500-2000000) dan bovine serum albumin (BSA) berasal dari Sigma–Aldrich Jepang (Tokyo, Jepang). HCl, NaOH, dan toluena dari Kanto Chemicals (Tokyo, Jepang), sementara 3-metakriloksipropil-trimetoksisilan (MAPS) diperoleh dari Shin-etsu Chemicals (Tokyo, Jepang). Semua bahan dengan kemurnian p.a dan langsung digunakan tanpa proses purifikasi lebih lanjut. Akuades dipersiapkan menggunakan sistem purifikasi ELIX 10/Milli-Q Element A-10 purification system (Nihon Millipore Kogyo, Tokyo). Kolom silicosteel (1,02 mm i.d, 1/16 inch o.d) berasal dari GL sciences, Tokyo, Jepang.
Eksperimen kromatografi cair dilakukan dengan menggunakan set KCKT prominence 20 dari Shimadzu Jepang yang dilengkapi dengan software LabSolution, terdiri dari unit degasser (DGU-20A), pompa (LC-20AD), oven (CTO-20A), detektor UV/VIS (SPD-(CTO-20A), semi-micro flow cell (2.5 μL), Rheodyne 7125 injektor
dengan sample loop 1 μL, controller (CBM-20A). Observasi morfologi menggunakan SEM JEOL-JSM-6360LV (JEOL, Tokyo, Jepang).
Prosedur Kerja: Preparasi Monolith poly-(GMA-co-EDMA). Silanasi kolom dilakukan dengan mengadopsi prosedur yang dilakukan oleh Shu et al. [14]. Kolom silicosteel
secara berurutan dicuci dengan akuades, 0,2 M NaOH, akuades, 0,2 M HCl, akuades, dan aseton menggunakan syringe. Kemudian diisi dengan 30% MAPS dalam aseton dan kedua ujung kolom ditutup, lalu ditempatkan didalam oven pada suhu 60°C selama 12 jam. Setelah proses silanisasi ini selesai, kolom silicosteel dicuci dengan aseton, dipotong-potong sepanjang 10 cm, dan siap diisi dengan larutan polimer.
Campuran larutan polimer untuk pembuatan monolith PS-DVB terdiri dari styrene (monomer fungsional), DVB (crosslinker), porogen, dan AIBN (inisiator) yang dioptimasi dengan komposisi seperti pada Tabel 1. Larutan polimer pada berbagai komposisi tersebut dimasukkan ke dalam kolom silicosteel dengan menggunakan syringe, lalu ditutup kedua ujungnya dan selanjutnya dilakukan polimerisasi di dalam oven pada suhu 70°C selama 20 jam. Setelah proses polimerisasi berakhir, kolom kemudian dihubungkan dengan pompa KCKT dan dicuci dengan etanol dan air untuk menghilangkan sisa-sisa komponen yang tidak bereaksi.
Uji Permeabilitas. Monolith PS-DVB yang dihasilkan diuji permeabilitasnya dengan cara mengukur tekanan balik yang dihasilkan dari elusi dengan fasa gerak asetonitril-air (50:50 v/v) pada laju alir konstan 0,1 mL/menit. Permeabilitas monolith ditentukan dari tekanan balik yang terukur ketika dialiri fasa gerak. Semakin besar tekanan balik yang terukur, semakin kecil permeabilitas monolith.
Tabel 1. Komposisi dan data tekanan balik monolith PS-DVB
Monolith %T a) %C b) Porogen AIBN c) Tekanan Balik
c) Jumlah AIBN sebagai inisiator adalah 1% w/v yang dihitung berdasarkan total monomer (volume styrene + volume
DVB).
Uji Distribusi Pori Metode ISEC. Inverse size exclusion chromatography (ISEC) dilakukan dengan menggunakan polistirena standar dan toluen. Volume untuk injeksi diatur 1 μL untuk masing-masing standar, dengan laju alir 0,1 mL/menit dijaga konstan pada suhu 27C. THF digunakan sebagai fasa gerak dan deteksi dilakukan pada 254 nm yang memberikan serapan maksimum bagi polistirena. Untuk perhitungan proporsi flow-through pores, mesopore, dan micropore dilakukan menurut metode yang dilakukan oleh Al-Bokari et al. [17].
Aplikasi Pemisahan Sampel Alkilbenzena. Untuk pemisahan alkilbenzena, digunakan sampel campuran yang terdiri dari uracil (marker, unretained molecule), toluen, etil benzena, propil benzena, butil benzena, dan amil benzena. Monolith PS-DVB dipasangkan pada KCKT prominence 20. Pemisahan dilakukan secara isokratik dengan komposisi fasa gerak asetonitril-air (50:50 v/v), pada suhu 27C, laju alir 0,1 mL/menit, dan dideteksi menggunakan detektor UV pada 214 nm.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan Kolom Monolith PS-DVB Sebelum dilakukan in situ polimerisasi monolith di dalam kolom silicosteel, dilakukan proses silanasi terlebih dahulu dengan MAPS, yaitu modifikasi terhadap permukaan dinding bagian dalam kolom untuk memberikan gugus fungsi yang dapat berikatan secara kovalen dengan polimer monolith. Reaksi silanasi pada permukaan dinding kolom silicosteel ditunjukkan pada Gambar 1 [18].
Kolom monolith PS-DVB dalam penelitian ini dibuat dalam 9 variasi komposisi sebagaimana tercantum dalam Tabel 1. Reaksi yang terjadi selama polimerisasi berlangsung diilustrasikan pada Gambar 2. Reaksi polimerisasi berlangsung secara polimerisasi adisi (chain-growth reaction) dengan melibatkan inisiasi radikal bebas.
Hasil pengamatan SEM pada Gambar 3 menunjukkan bahwa semua monolith yang dihasilkan merupakan jaringan berpori kontinyu dengan struktur globular.
Gambar 1. Reaksi modifikasi permukaan dinding kolom silika dengan MAPS
Gambar 3. Foto SEM monolith PS-DVB pada berbagai komposisi dengan pembesaran 5000x
Permeabilitas Kolom Monolith PS-DVB. Dari uji permeabilitas diperoleh nilai tekanan balik untuk setiap komposisi monolith sebagaimana dapat dilihat pada Tabel 1. Monolith I, II, VIII, dan IX mempunyai permeabilitas yang tidak diinginkan, diindikasikan dari tekanan balik yang sangat besar (>40 MPa). Dari fenomena ini, diduga bahwa monolith-monolith pada komposisi tersebut didominasi oleh karakter micropore atau bahkan lebih kecil lagi yang mengakibatkan transfer massa kurang baik. Sementara itu, rendahnya tekanan balik pada monolith III, IV, V, VI, dan VII mengindikasikan bahwa monolith ini mempunyai permeabilitas yang baik, dan didominasi oleh karakter mesopore dan flow-through pore.
Data permeabilitas tersebut diperkuat dengan hasil uji SEM sebagaimana terlihat pada Gambar 3. Dari observasi morfologi tersebut dapat diketahui bahwa diameter globule untuk monolith I, VIII, dan XI berkisar pada ukuran <0,1 μm, sedangkan ukuran flow-through pore
yang berperan penting pada permeabilitas tidak dapat ditentukan karena terlalu kecil (hampir tidak ada). Dari hasil ini semakin mendukung bahwa monolith dengan komposisi tersebut mempunyai permeabilitas yang kurang baik, ditandai dengan resistansi aliran yang besar (high flow resistant). Atas dasar fakta ini,
monolith I, II, VIII, dan IX tidak digunakan untuk pengujian selanjutnya.
Hal yang berbeda ditunjukkan oleh monolith III, IV, V, VI, dan VII. Monolith III mempunyai diameter globule sebesar 0,5–0,6 μm dengan flow-through pore bervariasi hingga 1,5 μm. Monolith IV dan V mempunyai ukuran yang hampir sama untuk diameter globule sebesar 0,8–1,2 μm dan flow-through pore
hingga 2 μm. Adapun monolith VI dan VII mempunyai diameter globule berkisar 1,7–2,2 μm, dengan flow-through pore bervariasi hingga 5 μm. Dari fakta ini membuktikan bahwa monolith III, IV, V, VI, dan VII mempunyai permeabilitas yang baik, ditandai dengan resistansi aliran yang relatif kecil (low flow resistant).
terukur dalam keadaan kering.
ISEC dilakukan menggunakan polistirena standard (MW = 500, 2000, 3000, 10000, 20000, 30000, 70000, 150000, 300000, 700000, 1000000, 2000000) yang dilewatkan melalui kolom monolith. Toluen berperan sebagai analit terkecil yang dapat mengakses semua pori pada monolith. Melalui uji ini diperoleh hasil sebagaimana terlihat pada Gambar 4.
Berdasarkan Gambar 4(a) dapat ditentukan
total porositas (εt), porositas eksternal (εe), dan
porositas internal (εi). Hasil perhitungan porositas monolith ditampilkan pada Tabel 2, menunjukkan porositas eksternal yang lebih besar dari porositas internal pada semua monolith yang diuji. Hal ini menandakan jumlah flow-through pore lebih dominan daripada jumlah mesopore. Kondisi ini sangat menguntungkan untuk proses transfer massa yang efektif di dalam kolom monolith.
Berdasarkan Gambar 4(b) dapat ditentukan distribusi ukuran pori dari perhitungan fraksi volume. Hasil perhitungan distribusi flow-trough pore/macropore, mesopore, dan
micropore ditampilkan pada Tabel 2. Dengan jumlah flow-through pore yang dominan maka
dapat menghasilkan transfer massa yang efisien didalam monolith sehingga analisis sampel dapat dilakukan dengan cepat. Jumlah mesopore yang besar akan menyediakan luas permukaan yang memadai untuk interaksi efektif antara sampel dengan permukaan monolith sehingga dapat menghasilkan pemisahan dengan resolusi yang baik. Sementara itu, terbentuknya micropores kurang disukai karena dapat menyebabkan adsorpsi
irreversible (adsorpsi tidak dapat balik) terhadap sampel yang digunakan, serta terjadinya pelebaran puncak yang pada akhirnya akan mengurangi efisiensi pemisahan. Jumlah micropore yang sangat kecil dan tidak signifikan pada Tabel 2 (<10%) memberikan keuntungan karena dapat mencegah terjadinya adsorpsi irreversible, terutama untuk sampel-sampel biomolekul. Dengan demikian monolith yang dibuat dalam percobaan ini dapat diaplikasikan secara luas, tidak terbatas pada sampel senyawa-senyawa alkilbenzena atau molekul berukuran kecil lainnya, tetapi juga dapat diaplikasikan untuk sampel-sampel biologi atau biomolekul seperti DNA, protein, asam amino, dll.
Gambar 4. Plot ISEC untuk penentuan porositas (a) dan distribusi ukuran pori (b) dari monolith PS-DVB III, V, VI, dan VII.
Tabel 2. Porositas dan distribusi ukuran pori monolith PS-DVB
Monolith Total Porositas / εt (%)
Porositas Eksternal / εe (%)
Porositas Internal / εi
(%)
Micropore
(%)
Mesopore
(%)
Macropore / Flow-through
Pore (%)
III 90,8 47,4 43,4 9 44 47
V 94,3 65,6 28,7 4 30 66
VI 98,9 82,8 16,1 2 16 82
Berdasarkan Tabel 2, monolith III mempunyai karakter yang lebih baik dalam hal jumlah mesopore dibandingkan dengan monolith lainnya. Monolith III memiliki keseimbangan antara proporsi flow-through pore (untuk transfer massa secara konvektif) dan proporsi mesopores (untuk interaksi yang efektif), serta mempunyai proporsi micropores
seminimal mungkin. Kombinasi proporsi tersebut akan memberikan binding capacity
yang baik dan pemisahan yang efisien untuk aplikasi kolom pada laju alir yang tinggi dengan tekanan relatif rendah.
Aplikasi Pemisahan Sampel Alkilbenzena. Untuk mengetahui performa monolith PS-DVB dalam pemisahan dan analisis molekul berukuran kecil, maka dilakukan evaluasi untuk pemisahan senyawa-senyawa turunan alkilbenzena. Dalam penelitian ini juga digunakan kolom monolith komersial Proswift RP-4H dari Dionex untuk memisahkan sampel yang sama, untuk kemudian dibandingkan hasilnya dengan monolith yang dikembangkan pada penelitian ini. Hasil pemisahan senyawa-senyawa alkilbenzena dapat dilihat pada Gambar 5.
Berdasarkan Gambar 5 diketahui bahwa monolith VI, VII, dan monolith komersial Proswift RP-4H tidak mampu untuk memisahkan sampel-sampel alkilbenzena. Hal ini berkaitan dengan jumlah karakter mesopore
sebagai media interaksi antara sampel dengan monolith yang lebih kecil dibandingkan monolith lainnya sebagaimana didukung oleh
fakta pada Tabel 2. Monolith komersial Proswift RP-4H juga tidak mampu memisahkan sampel-sampel alkil benzena. Sedangkan kolom III, IV, dan V mampu memberikan pemisahan yang cukup baik, ditandai dengan munculnya puncak-puncak terpisah pada kromatogram.
Gambar 5. Pemisahan alkilbenzena menggunakan monolith PS-DVB III-VII dan kolom monolith komersial Proswift RP-4H (Dionex) sebagai fase diam. Fasa gerak: asetonitril-air (50:50 v/v), laju alir: 0,1 mL/min (isokratik), panjang gelombang: 214 nm, suhu: 27C. Sampel: (*) urasil, (1) toluena, (2) etilbenzena, (3) propilbenzena, (4) butilbenzena, (5) amilbenzena
Tabel 3. Kapasitas faktor dan jumlah piringan teoritis (N) PS-DVB monolith untuk pemisahan alkilbenzena
Monolith Kapasitas Faktor N
(plates/m kolom) Toluena Etilbenzena Propilbenzena Butilbenzena Amilbenzena
III 13,66 21,24 34,14 56,71 93,03 17260
IV 13,05 20,22 32,42 54,22 88,84 11022
V 10,97 17,58 26,77 43,67 70,97 1800
Berdasarkan hasil kromatogram, dapat dihitung kapasitas faktor dan jumlah piringan teoritis (N) dari monolith III, IV, dan V sebagaimana disajikan pada Tabel 3. Perhitungan N didasarkan pada waktu retensi dan lebar puncak dari amilbenzena. Dari hasil percobaan ini dapat diketahui bahwa monolith III merupakan monolith dengan komposisi terbaik untuk dapat diaplikasikan dalam
KESIMPULAN
Kolom monolith PS-DVB telah berhasil dibuat secara polimerisasi in situ dalam kolom
silicosteel berukuran microbore dengan diameter 1,02 mm. Dari hasil optimasi 9 variasi komposisi monolith, monolith PS-DVB dengan komposisi %T 30, %C 50, menggunakan porogen biner yang terdiri dari toluena:1-dekanol (3:7 v/v) memberikan hasil yang terbaik untuk pemisahan molekul berukuran kecil. Adapun N dari monolith ini sebesar 17260/m kolom dengan jumlah mesopore 44% dan flow-through pore 47%. Macropore yang dominan pada monolith ini memberikan transfer massa yang efisien sehingga analisis sampel dapat dilakukan dengan cepat, sedang jumlah mesopore dapat mengefektifkan interaksi antara sampel dengan permukaan monolith sehingga menghasilkan pemisahan dengan resolusi yang baik. Jumlah micropore
yang kecil (<10%) dapat mencegah terjadinya
irreversibleadsorption terhadap sampel.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didanai oleh Hibah Unggulan Universitas (No. 023.04.2.414989/2013-2014) dari Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan, Indonesia.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Urban, J., S. Eeltink, P. Jandera, P.J. Schoenmakers (2008), Characterization of polymer-based monolithic capillary columns by inverse size-exclusion chromatography and mercury-intrusion porosimetry, J. Chromatogr. A, 1182, 161-168.
[2] Sabarudin, A., J. Huang, S. Shu, S. Sakagawa, T. Umemura (2012). Preparation of methacrylate-based anion-exchange monolithic microbore column for chromatographic separation of DNA fragments and oligonucleotides, Anal. Chim. Acta, 736, 108-114.
[3] Ueki, Y., T. Umemura, J. Li, T. Odake, K.I. Tsunoda (2004), Preparation and
application of methacrylate-based cation-exchange monolithic columns for capillary ion chromatography, Anal. Chem., 76, 7007-7012.
[4] Nema, T., E.C.Y. Chan, P.C. Ho (2014), Applications of monolithic materials for sample preparation, J. Pharmaceut. Biomed., 87, 130-141.
[5] Schaller, D., E.F. Hilder, P.R. Haddad (2006), Monolithic stationary phases for fast ion chromatography and capillary electrochromatography of inorganic ions,
J. Sep. Sci., 29, 1705-1719.
[6] Arrua, R.D., M. Talebi, T.J. Causon, E.F. Hilder (2012), Review of recent advances in the preparation of organic polymer monoliths for liquid chromatography of large molecules, Anal. Chim. Acta, 738, 1-12.
[7] Urban, J., F. Svec, J.M.J. Fréchet (2010),
Efficient separation of small molecules using a large surface area hyper-crosslinked monolithic polymer capillary column, Anal. Chem., 82, 1621-1623. [8] Zhang, Y.P., W. Li, X.J. Wang, L.B. Qu,
G.L. Zhao, Y.X. Zhang (2009), Fast preparation of polystyrene-based monolith using microwave irradiation for micro-column separation, Anal. Bioanal. Chem., 394, 617–623.
[9] Levkin, P.A., S. Eeltink, T.R. Stratton, R. Brennen, K. Robotti, H. Yin, K. Killeen, F. Svec, J.M.J. Fréchet (2008), Monolithic porous polymer stationary phases in polyimide chips for the fast high performance liquid chromatography separation of proteins and peptides, J. Chromatogr. A, 1200, 55-61.
[10] Krenkova, J., A. Gargano, N.A. Lacher, J.M. Schneiderheinze, F. Svec (2009), High binding capacity surface grafted monolithic columns for cation exchange chromatography of proteins and peptides,
J. Chromatogr. A, 1216, 6824-6830. [11] Huang, H.Y., Y.C. Liu, Y.J. Cheng (2008),
Development of capillary electrochromatography with poly-(styrene-divinylbenzene-vinyl benzene sulfonic acid) monolith as the stationary phase, J. Chromatogr. A, 1190, 263-270. [12] Huang H.Y., I.Y. Huang, H.Y. Lin (2006),
poly-(styrene-divinyl benzene-methacrylic acid) monolithic columns, J. Sep. Sci., 29, 2038–2048.
[13] Huang H.Y., H.Y. Lin, S.P. Lin (2006), CEC with monolithic poly(styrene-divinylbenzene-vinylsulfonic acid) as the stationary phase, Electrophoresis, 27, 4674–4681.
[14] Shu, S., H. Kobayashi, N. Kojima, A. Sabarudin, T. Umemura (2011), Preparation and characterization of lauryl methacrylate-based monolithic microbore column for reversed-phase liquid chromatography, J. Chromatogr. A, 1218, 5228-5234.
[15] Shu, S., H. Kobayashi, M. Okubo, A. Sabarudin, M. Butsugan, T. Umemura (2012), Chemical anchoring of lauryl methacrylate-based reversed phase
monolith to 1/16” o.d.
polyetheretherketone tubing, J. Chromatogr. A, 1242, 59-66.
[16] Umemura, T., Y. Ueki, K. Tsunoda, A. Katakai, M. Tamada, H. Haraguchi (2006), Preparation and characterization of methacrylate-based semi-micro monoliths for high-throughput bioanalysis, Anal. Bioanal. Chem., 386 566-571.
[17] Al-Bokari, M., D. Cherrak, G. Guiochon (2002), Determination of the porosities of monolithic columns by inverse size-exclusion chromatography, J. Chromatogr. A, 975, 275-284.
