ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI ETANOL DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG DENGAN MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI KOLOM
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi sebagian dari syarat untuk memperpoleh gelar Sarjana Farmasi
DEWI ASTUTI 1408010105
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
v MOTTO
“Sometimes the best thing you can do is not think, not wonder, not imagine, not obsess. Just breathe, and have faith that
everything will work out for the best”_ unknown
PERSEMBAHAN
Allah SWT
Bapak Haryono Mahirin dan Ibu Yonah
Kakakku Juniawati, S.SiT.,M.Kes, dan adik-adikku Tri Lestari, Amd.Kg
dan Rakhmat Widodo
vii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahirobbil’alamin, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, karena atas berkat dan rahmat-Nya, sehaingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi dengan judul “Isolasi Senyawa Penangkap Radikal Bebas
dari Fraksi Etanol Daun Mangga (Mangifera indica L.) Var. Gedong Menggunakan Metode Kromatografi Kolom”. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat :
(1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto;
(2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana penyusunan skripsi;
(3) Wahyu Utaminingrum, M.Sc., Apt selaku Ketua Program Studi S1 Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana penyusunan skripsi;
(4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si dan Ika Nurzijah, M.Sc., Apt selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan pikiran untuk mengarahkan dalam penyusunan skripsi ini;
(5) Rojhmadi Budi Setiyanto, A.Md selaku laboran biologi farmasi dari Fakultas Farmasi;
(7) Haryono Mahirin dan Yonah selaku orang tua penulis berkat bimbingannya dengan penuh kesabaran serta kasih sayang yang sangat besar, juga dukungan yang disertai doa yang mengiringi setiap langkah; (8) Juniawati, S.SiT.,M.Kes kakak tercinta, Tri Lestari, Amd. Kg dan
Rakhmat Widodo adik-adik tersayangku dan seluruh keluarga penulis terima kasih atas dukungan dan doanya;
(9) Nisa Nurulmala yang telah berjuang bersama, terima kasih atas motivasi dan kerja sama dalam menyelesaikan skripsi ini;
(10) Sahabat sepanjang masa Setia Utami, Amd dan Hani Marwanti, Amd. Kep, terima kasih atas dukungan, semangat dan motivasi;
(11) Sahabat seperjuangan mencari tambahan nama belakang Nila Zahrotul Fitriyani, Rifqi Zuhriyatun Nisa, S.Kep, Nisa Aulia Muftiani, Amd.Keb. (12) Teman-teman kuliah Elvina Farica Azalia, Fadhilah Zahra Nadia, Firda
Aulia Ikhsani, Desiana Nur Handayani, Ulfatunnisa Fauziyah, Nimas Irjayanti, Ika Ryandita, Rima Anggita, Lina Yusrina Noor, Nanda Elfa Amelia, dan lainnya yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu, terima kasih atas dukungan dan motivasi;
(13) Teman-teman Farmasi angkatan 2014 terima kasih atas dukungan, motivasi, selalu tetap semangat;
(14) Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
Besar harapan penulis, skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan dengan baik. Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan atas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa manfaat bagi pengembangan ilmu. Aamiin.
Purwokerto, 04 Agustus 2018 Penulis
ix
RIWAYAT HIDUP
Nama : Dewi Astuti
NIM / Angkatan : 1408010105 / 2014 Tempat / Tanggal Lahir : Purbalingga / 03 Juli 1995 Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Alamat : Makam RT.02 RW.09 Kecamatan Rembang, Kabupaten Purbalingga, Provinsi Jawa Tengah Riwayat Pendidikan :
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto (Angkatan 2014)
xi
ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI ETANOL DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG DENGAN MENGGUNAKAN
METODE KROMATOGRAFI KOLOM
Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1 ABSTRAK
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan (unpaired electron), sangat reaktiv dan dapat menyebabkan stres oksidatif. Stres oksidatif di dalam tubuh menyebabkan beberapa penyakit akut seperti kanker, aterosklerosis, penyakit koroner, serta penyakit autoimun. Stres oksidatif dapat dihambat oleh suatu senyawa yang disebut sebagai antioksidan. Daun Mangifera indica L. (mangga) varian gedong memiliki potensi sebagai sumber antioksidan alami yang kuat. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa antioksidan yang terdapat dalam fraksi etanol daun mangga gedong menggunakan kromatografi kolom dan menguji aktivitas antioksidan isolat yang didapat menggunakan metode DPPH ((2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Ekstraksi dan fraksinasi menggunakan pelarut n-heksana : etil asetat : etanol. Fraksi etanol kemudian diisolasi menggunakan kromatografi kolom dengan fase diam silika gel 60 dan fase gerak gradien kloroform : aseton : asam format. Aktivitas antioksidan kualitatif isolat dianalisis dengan metode KLT dan pereaksi semprot DPPH. Isolat dikelompokan berdasarkan nilai Rf yang sama. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas antioksidan pada fraksi etanol, isolat A, isolat B, dan isolat C dengan metode DPPH dan untuk menentukan nilai IC50.Nilai IC50 fraksi etanol sebesar 18,972 ppm, sedangkan isolat A, isolat B, dan isolat C berturut-turut sebesar 9,280 ppm, 27,753 ppm, dan 37,837 ppm dengan kontrol positif vitamin C 8,010 ppm. Analisis dengan kruskal-wallis (p≤0,05) yang menunjukan adanya
perbedaan yang signifikan pada masing-masing grup sampel. Uji Mann Whitney
menunjukan bahwa isolat A memiliki kemampuan antioksidan yang sebanding dengan vitamin C.
ISOLATION OF FREE RADICAL SCAVENGER(S) FROM ETHANOL FRACTION OF MANGO LEAVES (Mangifera indica L.) GEDONG
VARIETIES USING COLUMN CHROMATOGRAPHY METHOD
Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1 ABSTRACT
Free radicalis atom or molecule that has unpaired electrons, very reactive and can causes oxidative stress. Oxidative stress in the body leads to several diseases such as cancer, atherosclerosis, coronary disease, and autoimmune diseases. Oxidative stress can be inhibited by substances called antioxidants. Mango (Mangifera indica L. ) leaves from Gedong varieties has a potential as a source of natural antioxidants. This study aims to isolate the antioxidant compounds present in the ethanol fraction of mango leaf (Gedong var.) using column chromatography and test its antioxidant activity using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) assay. Extraction and fractination was carried out using n-hexane : ethyl acetate : ethanol. Ethanol fraction was then isolated by column chromatography with silica gel 60 as stationary phase and chloroform : acetone : formic acid as mobile phase. Qualitative analysis to test the presence of antioxidant compounds was carried out using thin layer chromatography, followed by DPPH spraying. The positive isolates from DPPH spraying were classified into isolate A, B, and C based on their Rf value. Further study was conducted on ethanol fraction, isolate A, isolate B, and isolate C with DPPH assay to determine the IC50 value. The result showed that IC50 value of ethanol fraction was 18.972 ppm, while isolate A, isolate B, and isolate C were 9.280 ppm, 27.753 ppm and 37.837 ppm, respectively, in comparison to vitamin C (8.010 ppm) as a positive control. Kruskal-wallis
(p≤0.05) indicated a significant difference in each sample group. Mann Whitney
xiii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS iv
MOTTO v
PERSEMBAHAN vi
KATA PENGANTAR vii
RIWAYAT HIDUP ix
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI x
ABSTRAK xi
A. Hasil Penelitian Terdahulu 4
B. Landasan Teori 5
9. Spektrofotometri UV-Vis 18
C. Kerangka Konsep 20
D. Hipotesis 21
BAB 3. METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian 22
B. Variabel Penelitian 22
C. Waktu dan Tempat Penelitian 22
D. Bahan dan Alat 22
E. Cara Penelitian 23
F. Analisis Data 25
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman 26
B. Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia 26 C. Pembuatan Fraksi Etanol Daun Mangga Gedong 27 D. Pemisahan dengan Kolom Kromatografi 28 E. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (λmaks) DPPH 30
F. Pembacaan Operating Time 30
G. Aktivitas Antioksidan Fraksi Etanol, Isolat A, Isolat B,
Isolat C dan Vitamin C 31
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan 37
B. Saran 37
DAFTAR PUSTAKA 38
xv
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 2.1. Turunnya kepolaran pelarut ... 16 Tabel 4.1. Hasil pembacaan operating time ...31 Tabel 4.2. Nilai IC50 fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin C ...33 Tabel 4.3. % penghambatan fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Mangga Gedong ... 5
Gambar 2.2 Struktur mangiferin ... 8
Gambar 2.3 Reduksi DPPH dari senyawa antioksidan ...18
Gambar 4.1 Hasil DPPH semprot ...29
Gambar 4.2 Hasil panjang gelombang maksimum larutan DPPH ...30
Gambar 4.3 Struktur vitamin C ...32
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil determinasi daun mangga gedong (Mangifera indica L.) ...41
Lampiran 2 Perhitungan bobot kering terhadap bobot basah daun mangga (Mangifera indica L.) var. gedong ...43
Lampiran 3 Perhitungan rendemen fraksi etanol dan isolat ...44
Lampiran 4 Gambar profil kromatografi lapis tipis ...45
Lampiran 5 Perhitungan Rf dan hRf ...49
Lampiran 6 Perhitungan pembuatan larutan stok dan seri konsentrasi...52
Lampiran 7 Perhitungan persen penghambatan dan IC50...56
Lampiran 8 Hasil normalitas dan homogenitas fraksi etanol, isolat A, B, dan C terhadap aktivitas penangkap radikal bebas DPPH ...62
Lampiran 9 Hasil kruskal-wallis test kelompok uji terhadap vitamin C ...63
