INTISARI
Penyakit infeksi merupakan salah satu faktor penyebab kematian di dunia. Salah satu penyebab infeksi yaitu bakteri S. aureus dan E. coli. Penyakit infeksi yang belum dapat diatasi mendorong pencarian antibiotik secara eksploratif menggunakan bahan alam. Bunga petai diduga mengandung senyawa alkaloid, terpenoid, saponin, tanin dan flavonoid. Senyawa alkaloid, terpenoid, saponin, tanin dan flavonoid diketahui aktif sebagai antibakteri, oleh karena itu perlu dilakukan pencarian kandungan senyawa dalam bunga petai (Parkia speciosa) dan aktivitasnya sebagai antibakteri.
Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni yang bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai, dilanjutkan dengan pencarian Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) terhadap S. aureus dan E. coli. Pencarian kandungan senyawa dilakukan dengan metode uji tabung. Pengujian aktivitas antibakteri serta pencarian KHM dan KBM dilakukan dengan metode difusi sumuran dan dilusi cair. Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisis statistik menggunakan uji Shapiro Wilk, Levene, Kruskal Wallis dan Mann Whitney.
Hasil penelitian menujukkan bahwa ekstrak etanol bunga petai mengandung senyawa alkaloid, saponin, terpenoid dan flavonoid serta memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus, tetapi tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli. Kadar Hambat Minimum ekstrak etanol bunga petai terhadap S. aureus sebesar 50%.
ABSTRACT
Infectious diseases are one of the causes of death in the world. One of the cause bacterial infection is S. aureus and E. coli. Infectious diseases that can not be solved yet, encourage exploratory searches using natural materials. Parkia speciosa flower is supected to contains alkaloid, terpenoid, saponin, tanin and flavonoid. Alkaloid, terpenoid, saponin, tanin and flavonoid are known as an antibacterial. Therefore, it is necessary to search the compound in Parkia speciosa flower and its activity as an antibacterial.
This study is pure experimental that aimed to determine the contens of compounds in Parkia speciosa flower and antibacterial activity of ethanol extract of Parkia speciosa flowers, followed by determination of the Minimum Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) against S. aureus and E. coli. Explorating of phytochemical compound was doing with using test tube metode. Testing of antibacterial activity using well diffusion method and determination of MIC and MBC using broth dilution method. The antibacterial activity results were analyzed statistically using Shapiro Wilk, Levene, Kruskal-Wallis and Mann Whitney test.
The results showed that the ethanol extract of Parkia speciosa contains alkaloid, saponin, terpenoid, flavonoid and has antibacterial activity against S. aureus but do not have antibacterial activity against E. coli. Minimum Inhibition Concentration of an ethanol extract of Parkia speciosa flower obtained against S. aureus is 50%.
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUNGA PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan
Escherichia coli ATCC 25922
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh : Metta Maurilla
NIM 118114094
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
i
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUNGA PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan
Escherichia coli ATCC 25922
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh : Metta Maurilla
NIM 118114094
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
.
Kupersembahkan karya ini untuk : Tuhan Yesus Kristus, sumber kehidupan dan harapanku Bapak, Ibu, Adet, Felix dan seluruh keluarga besarku
Sahabat-sahabat ku yang selalu membantuku Serta Almamaterku Universitas Sanata Dharma.
Succes consist of going
from failure to failure
without
loss
of
enthusiasm.
vii PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas segala penyertaan, kasih dan berkat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bunga Petai (Parkia speciosa Hassk.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Eschericia coli ATCC 25922” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan, doa dan dukungan dari berbagai pihak. Penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si selaku dosen pembimbing skripsi atas perhatian, kesabaran, bimbingan, masukan dan motivasi kepada penulis dari proses penyusunan proposal sampai penyusunan skripsi ini selesai.
3. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. selaku dosen penguji. 4. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc selaku dosen penguji.
viii
6. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S.Si atas masukan dan arahan dalam bidang Mikrobiologi.
7. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Bapak Parlan, Bapak Kunto, Bapak Iswandi, serta seluruh laboran yang telah membantu selama penelitaan sampai skripsi dapat diselesaikan.
8. Keluarga tercinta, Bapak Albertus Mikael Siregar, Mama Tiambun Pasaribu, Bernadette Victoria dan Felix Jonathan yang selalu memberikan doa, perhatian dan semangat kepada penulis.
9. Teman-teman seperjuangan satu kelompok skripsi Sabrina Handayani Tambun, Anisetus Ratnasari Jebarus, Aloysius Ade Pratama atas kerja samanya, bantuan dan semangat yang diberikan selama penyusunan skripsi dari awal hingga akhir.
10.Teman–teman Jolinna Natia, Erica, Niken, Reni, Vina, Betzy, Kak Rotua dan Yoestenia dan Kakak-Kakak “sariayuers” atas kebersamaan, kecerian dan semangat yang diberikan kepada penulis
11.Teman–teman FSM C 2011, FKK B 2011 dan seluruh angkatan 2011 atas dukungannya.
12.Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.
ix
dari semua pihak. Akhir kata, semoga skripsi ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan terutama dalam bidang farmasi serta untuk semua pihak yang membutuhkan.
x
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... v
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ... vi
xii
G. Antimikroba ... 24
H. Uji Aktivitas Antibakteri ... 25
1. Pengujian Aktivitas Antibakteri ... 25
2.Pengujian Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM)……….. 27
3. Pengukuran Pertumbuhan Bakteri ... 28
I. Landasan Teori ... 29
J. Hipotesis ... 30
BAB III. METODE PENELITIAN... 31
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 31
B. Variabel dan Definisi Operasional ... 31
1. Variabel Penelitian ... 31
2. Definisi Operasional... 31
C. Bahan Penelitian... 32
D. Alat penelitian ... 33
E. Tata Cara Penelitian ... 33
1. Determinasi Bunga Petai ... 33
2. Pengumpulan Bahan Bunga Petai ... 34
3. Pengeringan dan Pembuatan Serbuk ... 34
4. Penetapan Susut Pengeringan ... 34
5. Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Petai ... 34
xiii
7. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai terhadap
S.aureus dan E.coli ... 37
8. Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair ... 41
F. Tata Cara Analisis Hasil... 42
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 44
A. Determinasi Tanaman ... 44
B. Pengumpulan dan Pengeringan Bunga Petai serta Pembuatan Serbuk ... 44
C. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Bunga Petai ... 45
D. Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Petai ... 46
E. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Etanol Bunga Petai dengan Uji Tabung ... 49
F. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bunga Petai terhadap S.aureus dan E.coli ... 55
G. Penentuan KHM dan KBM dengan Metode Dilusi Cair... 64
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 68
A. Kesimpulan ... 68
xiv
xv
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel I Pembuatan Variasi Konsentrasi Uji………... 38 Tabel II Hasil Perolehan Ekstrak Bunga Petai dengan Maserasi………... 49 Tabel III Hasil Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak
Etanol Bunga Petai.………... 49 Tabel IV Diameter Zona Hambat Seri Konsentasi Ekstrak Etanol Bunga
Petai, Kontrol Positif dan Negatif terhadap S. aureus dan E.
coli.……… 60 Tabel V Kriteria Kekuatan Daya Antibakteri Esktrak Etanol Bunga Petai
terhadap S. aureus ………... 63 Tabel VI Hasil Uji Statistik Diameter Zona Hambat Variasi Konsentrasi
Ekstrak Bunga Petai, Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
terhadap S. aureus……… 63 Tabel VII Hasil Pengukuran Absorbansi Uji KHM dan KBM Ekstrak Etanol
xvi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Bunga Petai………... 7
Gambar 2. E. coli Dilihat dalam Mikroskop Elektron……… 16
Gambar 3. S. aureus Dilihat dalam Mikroskop Mikroskop Elektron …………... 22
Gambar 4. Reaksi Antara Alkaloid dengan Pereaksi Mayer………... 51
Gambar 5. Reaksi Antara Alkaloid dengan Pereaksi Dragendorff……… 51
Gambar 6. Reaksi Saponin dalam Air……… 53
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi Bunga Petai………... 75 Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji S. aureus ATCC 25922……….……… 76 Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji E. coli ATCC 259237………. 77 Lampiran 4. Foto Serbuk Bunga Petai, Hasil Maserasi dan Ekstrak
Kental Bunga Petai ……….. 78 Lampiran 5. Foto Hasil Uji Fitokimia ……….………. 79 Lampiran 6. Foto Hasil Uji Biokimia dan Pewarnaan Gram ………... 84 Lampiran 7. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Bunga Petai
terhadap S.aureus dan E.coli dengan Metode
Difusi Sumuran ……… 89
Lampiran 8. Hasil Analisis Data……… 91 Lampiran 9. Hasil Pengukuran Absorbansi Uji KHM dan KBM Ekstrak
xviii INTISARI
Penyakit infeksi merupakan salah satu faktor penyebab kematian di dunia. Salah satu penyebab infeksi yaitu bakteri S. aureus dan E. coli. Penyakit infeksi yang belum dapat diatasi mendorong pencarian antibiotik secara eksploratif menggunakan bahan alam. Bunga petai diduga mengandung senyawa alkaloid, terpenoid, saponin, tanin dan flavonoid. Senyawa alkaloid, terpenoid, saponin, tanin dan flavonoid diketahui aktif sebagai antibakteri, oleh karena itu perlu dilakukan pencarian kandungan senyawa dalam bunga petai (Parkia speciosa) dan aktivitasnya sebagai antibakteri.
Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni yang bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai, dilanjutkan dengan pencarian Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) terhadap S. aureus dan E. coli. Pencarian kandungan senyawa dilakukan dengan metode uji tabung. Pengujian aktivitas antibakteri serta pencarian KHM dan KBM dilakukan dengan metode difusi sumuran dan dilusi cair. Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisis statistik menggunakan uji Shapiro Wilk, Levene, Kruskal Wallis dan Mann Whitney.
Hasil penelitian menujukkan bahwa ekstrak etanol bunga petai mengandung senyawa alkaloid, saponin, terpenoid dan flavonoid serta memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus, tetapi tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap E. coli. Kadar Hambat Minimum ekstrak etanol bunga petai terhadap S. aureus sebesar 50%.
xix ABSTRACT
Infectious diseases are one of the causes of death in the world. One of the cause bacterial infection is S. aureus and E. coli. Infectious diseases that can not be solved yet, encourage exploratory searches using natural materials. Parkia speciosa flower is supected to contains alkaloid, terpenoid, saponin, tanin and flavonoid. Alkaloid, terpenoid, saponin, tanin and flavonoid are known as an antibacterial. Therefore, it is necessary to search the compound in Parkia speciosa flower and its activity as an antibacterial.
This study is pure experimental that aimed to determine the contens of compounds in Parkia speciosa flower and antibacterial activity of ethanol extract of Parkia speciosa flowers, followed by determination of the Minimum Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) against S. aureus and E. coli. Explorating of phytochemical compound was doing with using test tube metode. Testing of antibacterial activity using well diffusion method and determination of MIC and MBC using broth dilution method. The antibacterial activity results were analyzed statistically using Shapiro Wilk, Levene, Kruskal-Wallis and Mann Whitney test.
The results showed that the ethanol extract of Parkia speciosa contains alkaloid, saponin, terpenoid, flavonoid and has antibacterial activity against S. aureus but do not have antibacterial activity against E. coli. Minimum Inhibition Concentration of an ethanol extract of Parkia speciosa flower obtained against S. aureus is 50%.
1 BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang
Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan yang berkontribusi menyebabkan kesakitan dan kematian di dunia. Penyebab penyakit infeksi menurut World Health Organization (WHO) (2001) dapat disebabkan oleh berbagai mikroorganisme salah satunya yaitu bakteri. Pada tahun 2012, penyakit infeksi saluran pernafasan bawah dan diare dikategorikan masuk dalam peringkat 10 besar penyakit penyebab kematian di dunia. Infeksi saluran pernafasan bawah menyebabkan kematian 3,1 juta jiwa sedangkan diare menyebabkan kematian 1,5 juta jiwa di dunia (WHO, 2014). Infeksi saluran pernafasan bawah yaitu pneumonia merupakan pembunuh utama balita di dunia (Gatot, 2014). Menurut WHO (2014) pada tahun 2012 penyakit infeksi saluran pernafasan bawah dan diare termasuk ke dalam kategori 3 besar penyebab kematian di negara berkembang. Berdasarkan Buletin Jendela Data dan Informasi Kesehatan Kemenkes R.I (2012) penyakit infeksi kulit, diare dan faringitis masuk dalam kategori 10 besar penyakit penyebab rawat jalan di Rumah Sakit Indonesia pada tahun 2009 dan 2010. Penyakit infeksi seperti faringitis, pneumonia, diare dan kulit disebabkan oleh bakteri S. aureus dan E. coli (Dale and Federman, 2003)
yang terdapat pada kulit batang pohon petai mengandung flavonoid, alkaloid dan terpenoid (Pratama, 2015).
Bunga petai memiliki bau yang khas. Menurut Junker, Heidinger dan Bluthgen (2010) bau atau aroma khas yang terdapat dalam bunga disebabkan karena adanya senyawa terpenoid. Menurut Heinrich (2005) pigmen pemberi warna pada bunga berasal dari senyawa golongan fenolik yaitu flavonoid. Menurut Swaati, Nitika, dan Veena (2014) senyawa alkaloid, saponin dan tanin dapat terkandung dalam bunga yang termasuk ke dalam famili Fabaceae. Oleh karena itu diduga bahwa bunga petai memiliki kandungan senyawa terpenoid, flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Senyawa-senyawa tersebut diketahui memiliki aktivitas antibakteri (Swaati, Nitika, dan Veena, 2014 cit., Criagg dan David, 2001). Untuk mengetahui kebenaran adanya kandungan senyawa tersebut dalam bunga petai, perlu dilakukan pencarian kandungan senyawa yang terdapat dalam bunga petai dan potensinya sebagai antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli.
1. Rumusan masalah
a. Apakah senyawa terpenoid, flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin terdapat dalam ekstrak etanol bunga petai ?
b. Apakah ekstrak etanol bunga petai memiliki aktivitas antibakteri terhadap S.aureus dan E.coli ?
c. Berapa Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Maksimum (KBM) dari ekstrak etanol bunga petai terhadap S.aureus dan E.coli.
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan penulis, penelitian sebelumnya yang berkaitan dengan uji aktivitas antibakteri bunga petai, meliputi :
a. Uji aktivitas antibakteri ekstrak kulit petai (Parkia speciosa Hassk.) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Kurniawati, 2014).
b. Aktivitas antibakteri ekstrak biji petai terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Salmonella typhi, Shigella sonnei dan Helicobacter pylori (Sakunpak dan Panichayupakaranant, 2012).
Perbedaan penelitian yang dilakukan oleh penulis dengan penelitian lainnya adalah pada penelitian yang dilakukan oleh Kurniawati (2014) menggunakan kulit petai yang diekstraksi dengan pelarut n--heksana, etil asetat dan etanol 70%, sedangkan penelitian yang dilakukan penulis menggunakan bunga petai yang diekstraksi dengan etanol 70%. Penelitian yang dilakukan oleh Sakunpak dan Panichayupakaranant (2012) menggunakan biji petai yang diekstraksi dengan etil asetat dan etanol 70 %, sedangkan penelitian yang dilakukan oleh penulis menggunakan bunga petai yang diekstraksi dengan etanol 70%. Selain itu penelitian yang dilakukan Kamisah dkk. (2013) menggunakan biji petai dengan penyari eter, kloroform, metanol dan air sedangkan penelitian yang dilakukan oleh penulis menggunakan bunga petai dengan penyari etanol.
Sejauh penelusuran pustaka dan pengetahuan penulis, penelitian mengenai pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai terhadap S. aureus dan E.coli belum pernah dilakukan.
3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis
b. Manfaat Praktis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang manfaat bunga petai sebagai pengobatan alternatif bagi masyarakat terutama untuk mengobati penyakit akibat infeksi S. aureus dan E. coli.
B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum
Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai terhadap S.aureus dan E. coli.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui adanya senyawa terpenoid, flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin yang terdapat dalam ekstrak etanol bunga petai.
7
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA A. Petai
1. Taksonomi tanaman
Klasifikasi tanaman petai menurut United States Departement of Agriculture (2014) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Ordo : Fabales
Famili : Fabaceae/Leguminosae Genus : Parkia
Species : Parkia speciosa Hassk.
2. Nama Lain
Petai dikenal dengan nama u’pang (Filipina), pete, petai papan, peuteuy (Indonesia), Chou dou, petai, petah, patai, patag, yiring, cong dou (Malaysia), sator, sataw, sator dan, sator kow, to dan, to khao (Thailand) (Orwa et al., 2009).
3. Deskripsi tanaman
4. Manfaat tanaman
Biji petai yang muda atau tua dapat dimakan mentah atau dimasak sebagai makanan pelengkap. Daun muda dan dasar bunga dapat dimakan sebagai lalap. Pohon petai berguna sebagai pohon pelindung pada perkebunan kopi atau perkebunan tanaman hias. Berdasarkan aspek medis, biji petai memiliki khasiat untuk mengobati penyakit liver, edema, nefritis, diabetes dan antihelmentik. Pohon ini memiliki perakaran kuat dan cocok ditanam untuk memulihkan lahan-lahan kritis (Wiriadinata dan Bamroongrugsa, 2010).
5. Kandungan nutrisi
Biji petai diketahui kaya akan nutrisi antara lain protein, lemak, karbohidrat, mineral, vitamin C, vitamin E (α-tocopherol). Vitamin B1 merupakan kandungan nutrisi yang cukup tinggi pada tanaman petai (Kamisah dkk., 2013).
6. Kandungan kimiawi
batang, pembungkus biji dan pada kulit buah. Komponen kimia saponin terdapat pada pembungkus biji. Komponen kimia yang lain seperti terpenoid terdapat pada bagian biji dan daun. Selain itu komponen kimia flavonoid diketahui terdapat pada bagian biji, pembungkus biji dan kulit buah (Kamisah dkk., 2013). Flavonoid pada bunga berperan dalam memberikan warna menarik yang dapat membantu proses penyerbukan bunga, selain itu flavonoid diketahui memliki aktivitas sebagai antibakteri (Cushnie and Lamb, 2005).
B. Metode Ekstraksi
Ekstrak merupakan sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan cairan penyari simplisia menggunakan cara yang sesuai, tanpa pengaruh cahaya matahari langsung. Cairan penyari yang dapat digunakan yaitu air, eter, etanol atau campuran etanol dan air. Metode penyarian dengan cairan penyari berupa campuran etanol dan air dilakukan dengan maserasi atau perkolasi sedangkan dengan cairan penyari eter penyarian dilakukan dengan cara perkolasi (Badan POM R.I, 2010) .
Cara metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut yaitu : 1. Cara Dingin
b. Perkolasi adalah proses pengekstrakan menggunakan pelarut yang selalu baru sampai sempurna, yang umumnya dilakukan pada suhu ruangan. Prosesnya terjadi terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat).
2. Cara Panas
a. Refluks adalah ekstraksi dengan menggunakan suhu titik didih pelarutnya, selama waktu tertentu dengan jumlah pelarut tertentu. Jumlah pelarut yang digunakan pada ekstraksi ini terbatas. Proses ekstraksi dilakukan pengulangan pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga proses ekstraksi lebih sempurna. b. Digesti adalah maserasi kinetik (pengadukan kontinu) pada suhu lebih tinggi daripada suhu kamar, yaitu secara umum dilakukan pada temperature 40o– 50oC.
c. Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada suhu penangas air 96o– 98oC, proses pengekstrakan dilakukan selama 15 – 20 menit.
d. Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air dengan menggunakan penangas air sampai mencapai suhu titik didih air dengan waktu proses pengekstrakan yang lebih lama daripada infus
(Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000).
C. Maserasi
simplisia yang mengandung zat aktif. Komponen aktif simplisia akan larut dan akan berpindah ke pelarut. Komponen aktif yang larut bergantung pada kelarutannya dalam pelarut dan kemudian akan tejadinya transfer massa komponen aktif dari simplisia menuju ke pelarut. Transfer massa terjadi karena adanya gradien konsentrasi atau perbedaan konsentrasi antara komponen aktif didalam sel dan diluar sel. Kecepatan transfer massa komponen senyawa aktif akan berkurang jika konsentrasi senyawa aktif di dalam pelarut meningkat sampai mencapai titik keseimbangan. Titik keseimbangan diperoleh jika konsentrasi komponen aktif di dalam sel simplisia dan di dalam pelarut sama (United Nations Industrial Development Organization And The International Centre For Science And High Technology, 2008).
D. Senyawa Fitokimia 1. Alkaloid
serangga, sebagai senyawa pelindung metabolik dari reaksi detoksifikasi, sebagai faktor pertumbuhan, dan sebagai zat yang berguna untuk menyuplai nitrogen atau unsur penting lainnya. Alkaloid yang diperoleh dari berbagai sumber tanaman selalu memberikan endapan nyata dengan pereaksi spesifik tertentu. Pereaksi pengendap alkaloid digunakan untuk mendeteksi ada tidaknya alkaloid pada ekstrak kering atau bahan tumbuhan dan untuk memastikan suatu prosedur ekstraksi spesifik, telah membuang keseluruhan kandungan alkaloid (Kar, 2007).
Senyawa alkaloid sebagai antibakteri memiliki 2 mekanisme yaitu dengan menyisip pada DNA sehingga merubah strruktur ikatan DNA dan dengan menghambat sisntesis DNA dengan cara menghambat kerja enzim topoisomerase (Karou, 2005).
2. Fenolik
Senyawa fenolik atau polifenol pada dasarnya merupakan senyawa yang mewakili sekumpulan antioksidan alam yang digunakan sebagai nutrasetika. Senyawa ini memiliki kemampuan yang beragam antara lain untuk melawan kanker dan dapat dipertimbangkan untuk mencegah penyakit jantung. Polifenol dikelompokkan menjadi polifenolik flavonoid, asam –asam fenolat dan polifenol non flavonoid (Kar, 2007). 3. Flavonoid
manfaat di alam berkat warnanya yang dapat menjadi daya tarik serangga dan burung sehingga dapat membantu proses penyerbukan tanaman (Cushnie and Lamb, 2005). Senyawa flavonoid juga berperan dalam memberikan warna kuning dan jingga pada mahkota bunga bahkan flavonoid tidak berwana mengabsorpsi cahaya pada spektrum UV karena memiliki banyak gugus kromofor (Heinrich, 2005).
Mekanisme kerja senyawa flavonoid sebagai antibakteri yaitu dengan membentuk senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler dan terlarut sehingga dapat merusak membran sel bakteri dan diikuti dengan keluarnya senyawa intraseluler. Flavonoid juga dapat berperan dalam inhibisi sintesis DNA dan RNA bakteri melalui ikatan hidrogen yang terbentuk. Senyawa ini juga mengganggu proses metabolisme energi dengan cara menghambat sistem respirasi sel bakteri. Sistem respirasi diperlukan untuk menghasilkan energi yang cukup. Energi dibutuhkan untuk penyerapan berbagai metabolit dan biosintesis makromolekul. Jika terjadi gangguan regulasi tersebut dapat menyebabkan sel bakteri lisis (Ngajow, 2013). 4. Saponin
Mekanisme aksi antibakterinya yaitu saponin berdifusi melalui membran luar dan dinding sel bakteri, lalu merusak membran sitoplasma. Hal inilah yang menyebabkan membran sitoplasma bocor keluar dari sel yang mengakibatkan kematian sel. (Ngajow, 2013).
5. Tanin
Tanin merupakan polifenol yang bersifat larut air dan memiliki bobot molekul tinggi. Berdasarkan bentuk kimiawinya, tanin terbagi menjadi 2 golongan yaitu tanin dapat terhidrolisis yang merupakan turunan dari asam galat yang dapat dihidrolisis oleh basa untuk membentuk asam sederhana dan gula dan tanin tidak dapat terhidrolisis atau yang disebut tanin terkondensasi (proantosianidin), berasal dari reaksi polimerisasi antar flavonoid. Sifat utama tanin dapat terhidrolisis ini mempunyai kemampuan berikatan dengan protein. menyamak kulit, dan sebagai astrigen (Heinrich, 2005).
Mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri dibagi menjadi 3 yaitu :
a. Tanin bersifat astringen, yang dapat menginduksi enzim bakteri sehingga membentuk kompleks dengan enzim atau substrat yang ada pada bakteri sehingga membentuk ikatan kompleks dengan substrat atau enzim pada bakteri. b. Kompleks yang terbentuk dengan ion besi berhubungan dengan toksisitas tanin c. Ikatan kompleks yang terbentuk bersifat toksik, memiliki aksi di membran
6. Terpenoid
Terpenoid merupakan senyawa yang diturunkan dari kombinasi dua atau lebih satuan isopren (C5). Prekursor terpenoid yaitu asam mevalonat. Terpenoid ditemukan dalam hampir semua tanaman tingkat tinggi, dan terdapat dalam jamur dan lumut (Sarker dan Nahar, 2007). Senyawa terpenoid juga diketahui aktif melawan bakteri, mekanisme yang terjadi melibatkan pemecahan membran oleh komponen-komponen lipofilik. Mekanisme aksi lainnya yaitu mengganggu membran sitoplasma dari peran komponen-komponen yang bersifat hidrofobik (Ngajow, 2013).
E. Escherichia coli
Gambar 2. Escherichia coli dalam mikroskop elektron (Carr, 2011). Klasifikasi E.coli menurut Moder (2008) adalah sebagai berikut : Kingdom : Bacteria
Divisi : Proteobacteria
Kelas : Gamma Proteobacteria Bangsa : Enterobacteriales Suku : Enterobacteriaceae Genus : Escherichia
Bakteri E.coli ditemukan pertama kali oleh Theodor Escherich pada abad ke 19 sebagai bakteri flora normal yang memproduksi vitamin K untuk mencerna makanan pada saluran pencernaan. Sebagian besar strain E.coli bersifat non patogenik tetapi beberapa strain E.coli ada yang bersifat patogenik. Bakteri ini merupakan bakteri gram negatif, berbentuk batang pendek, berukuran lebar 1-1,5 µm x panjang 2-6 µm dan dapat hidup soliter membentuk coccoid bipolar maupun berkelompok sehingga membentuk filamen-filamen berukuran panjang. Dinding sel terdiri dari lipopolisakarida serta membran luar berikatan dengan periplasma. Pada umumnya bersifat motil dengan flagella, tidak membentuk spora, merupakan jenis bakteri aerob atau fakultatif anaerob. Metabolisme yang dijalankan yaitu oksidasi dan fermentasi. 1. Enterotoksin dan eksotoksin
Jenis eksotoksin (superantigen) atau faktor virulensi yang dihasilkan yaitu : shiga-like toxin (toksin AB), toksin ini dihasilkan oleh E.coli enteropatogenik O157:H7. Toksin ini terdiri dari 2 sub unit A dan B. Sub unit B berikatan dengan permukaan reseptor sel host dan menghantarkan subunit A melewati membran sel. superantigen ini menginduksi hilangnya cairan dari saluran usus (Brooks, Carrol, Butel, Morse dan Mietzner, 2010). E.coli memiliki endotoksin yang berupa lipopolisakarida (LPS) yang terdiri dari 3 komponen, yaitu :
merupakan komponen antigen yang utama. Antigen O ini merupakan target aksi sistem komplemen sel host, tetapi ketika terjadi reaksi untuk memutus ikatan polisakarida, komplemen sistem imun gagal untuk memberikan efek litik pada bakteri secara normal karena bakteri yang virulen akan resisten terhadap serangan sistem imun sel host, oleh karena itu tubuh akan memproduksi antibodi, berinteraksi pada permukaan bakteri, membentuk ikatan komplemen sehingga dapat melisiskan bakteri.
b. Core polisakarida : polisakarida yang terletak diantara O polisakarida dan lipid A dan mengandung galaktosa, glukosa, N-asetilglukosamin, heptosa dan ketodeoksioktonat.
c. Lipid A : komponen yang mengandung glukosamin dan fosfat yang berikatan dengan asam lemak, memberikan efek toksik, dan bersifat hidrofobik. Endotoksin ini akan diproduksi saat bakteri lisis akibat adanya aksi perlawanan dari sistem imun atau antibiotik. Endotoksin akan memberikan efek fisiologi seperti demam, diare, dan muntah bahkan dapat menyebabkan kematian akibat nekrosis membran atau hemorrhagic shock. Demam terjadi karena sel host distimulasi untuk mengeluarkan protein endogen yang bersifat pirogen yang mempengaruhi sistem saraf pusat pengatur suhu tubuh
molekeul antara 3000-5000. Lipopolisakarida pada aliran darah pada mulanya terikat pada protein yang bersirkulasi kemudian berinteraksi dengan makrofag, monosit dan sel. Efek patofisiologi yang timbul yaitu demam, leukopenia, dan syok yang mengakibatkan gangguan organ–organ penting. Lipopolisakarida juga menyebabkan trombosit menempel pada endotel pembuluh darah menyebabkan oklusi pembuluh darah kecil, yang dapat menyebababkan nekrosis hemorrhagik atau iskemik pada berbagai organ (Brooks dkk., 2010).
2. Komponen antigen
Strain E.coli menghasilkan infeksi yang bermacam-macam dan spesifik berdasarkan serotipe atau komponen antigenik yang dimiliki yang terdiri dari lipopolisakarida (O), kapsul (K) dan flagella (H). Antigen O merupakan bagian terluar dinding sel liposakarida yang tersusun atas polisakarida dan bersifat resisten terhadap panas dan alkohol dan terdeteksi melalui aglutinasi bakteri. Antigen K merupakan bagian terluar dari antigen O pada beberapa enterobacteriae. Antigen K pada E.coli menyebabkan perlekatan bakteri ke sel epithelia sebelum menginvasi saluran cerrna atau saluran kemih. Antigen H terletak pada flagella dan terdenaturasi oleh panas atau alkohol (Brooks dkk., 2010).
3. Patogenesis dan manifestasi klinis
E.coli merupakan bakteri yang menjadi penyebab sekitar 90% infeksi saluran kemih pada perempuan muda. Oganisme ini disebut E.coli uropatogenik. Gejala dan tanda meliputi sering berkemih, disuria, hematuria, dan piuria. Sebagian besar infeksi saluran kemih disebabkan oleh antigen O yang memproduksi faktor virulensi yaitu hemolisin, bersifat sitotoksik yang dapat menginvasi jaringan.
b. Penyakit diare.
E. coli yang menyebabkan diare dapat diklasifikasikan berdasarkan faktor virulensinya :
1) E.coli enterotoksigenik (ETEC) : penyebab “diare turis” dan diare pada bayi di negara berkembang. Beberapa galur ETEC menghasilkan eksotoksin labil-panas yang secara genetik dikendalikan oleh plasmid yang terdiri dari 2 sub unit: Sub unit B melekat pada sel epitel usus halus dan mempermudah masuknya sub unit A ke dalam sel yang mengakibatkan hipersekresi air dan klorida yang berlebihan, menghambat reabsorpsi natrium dan terjadi hiperosmolitas yang berlebihan. Beberapa galur ETEC dapat menghasilkan enterotoksin stabil panas yang juga dapat merangsang sekresi cairan.
2) E.coli enteropatogenik (EPEC): penyebab diare pada bayi khususnya di negara berkembang, mirip dengan ETEC tetapi berbeda faktor virulensi. Akibat infeksi EPEC terjadi diare cair yang dapat sembuh spontan tetapi dapat menjadi kronis. 3) E.coli enteroinvasif (EIEC) : penyakit yang sangat mirip dengam shigelosis. Galur
4) E.coli enteroagregratif (EAEC) : penyebab diare akut dan kronik yang terjadi di negara berkembang dengan durasi 14 hari disertai dengan sindrom uremik hemolitik dan gagal ginjal akut. Di negara maju galur ini merupakan penyebab penyakit yang dapat ditularkan melalui makanan. Galur ini menghasilkan toksin mirip shiga (shiga like toksin) dan hemolisin. Serotipe E.coli penghasil shiga like toksin yang paling banyak ditemukan yaitu O157:H7.
c. Sepsis
Sistem imun atau pertahanan tubuh normal pada pejamu yang tidak adekuat, dapat menyebabkan bakteri E.coli masuk ke aliran darah. Suatu keadaan banyaknya bakteri di dalam darah disebut dengan sepsis. Kelompok neonatus sangat rentan terhadap sepsis E.coli karena tidak mempunyai antibodi IgM. Sepsis dapat juga terjadi sekunder akibat infeksi saluran kemih.
d. Meningitis
Meningitis akut pada neonatus (4-6 bulan) dan anak berumur 6 tahun yang belum divaksinasi, sering disebabkan oleh bakteri kelompok Streptococcus dan E.coli. E.coli juga merupakan penyebab utama dari meningitis pada janin. Sekitar 75% E.coli penyebab meningitis memiliki antigen K1 yang beraksi silang dengan polisakarida kapsuler grup B N.meningitidis. Meningitis bakteri akut akan mematikan jika tidak diobati
F. Staphylococcus aureus
Gambar 3. Staphylococcus aureus dalam mikroskop elektron (Carr, 2014). Klasifikasi E.coli menurut National Microbial Pathogen Data Resources (2008) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Bacteria Divisi : Firmicutes Kelas :Bacilli Bangsa :Bacillales
Suku : Staphylococcaceae Genus : Staphylococcus Species : Stapylococcus aureus
untuk pertumbuhan koloni yaitu 37oC dengan ph 7,2. Bakteri ini bersifat halotolerant yaitu dengan adanya penurun pH lingkungan pertumbuhan, bakteri ini masih mampu mentoleransi untuk tumbuh. Bakteri ini mampu memfermentasi mannitol serta menjalankan dua macam metabolisme yaitu respirasi maupun fermentasi (Madigan, Martinko, Dunlap, and Clark, 2009).
1. Enterotoksin dan eksotoksin
Jenis eksotoksin atau faktor virulensi yang dihasilkan yaitu: shiga toksin, α toksin, toxin shock syndrome (SA), Exfoliating toxin A dan B, leukocidin, ß toksin, ∂ toksin, dan enterotoksin A, B, C,D, E dan enzim. Eksotoksin akan diproduksi selama bakteri tersebut hidup. Enterotoksin yang umum diproduksi yaitu enterotoksin A yang stabil terhadap panas sehingga dapat menyebabkan keracunan makanan. Enterotoksin A merupakan protein yang dikode entA dalam kromosom gen bakteri sedangkan Enterotoksin B dan C berada dalam plasmid, lisogenik bakteriofage. Beberapa galur S.aureus menghasilkan enterotoksin. Enterotoksin yang dihasilkan oleh S. aureus merupakan antigen super (Madigan dkk., 2009).
2. Patogenesis dan manifestasi klinis
saluran pernafasan yang mana S. aureus akan memfermentasikan mannitol dan memproduksi pigmen kuning sehingga mudah dideteksi.
Enterotoksin dapat menyebabkan sekresi air berlebihan pada saluran usus yang dapat menyebabkan mual dan muntah. Enzim koagulase berhubungan dengan sifat kepatogenannya, enzim ini menyebabkan fibrin berkoagulasi dan membentuk gumpalan sebagai pelindung dari serangan sel host sehingga mencegah fagositosis pada bakteri. Enzim katalase digunakan sebagai uji untuk membedakan genus Staphylococci lainnya. Uji ini dapat membedakan genus Staphylococcus yang memproduksi atau tidak memproduksi enzim katalase (Madigan et al, 2009).
G. Antimikroba
Biosida adalah agen fisik atau kimia yang yang bekerja menonaktifkan mikroorganisme. Agen biosida memiliki sifat bakteriostatik dan bakteriosidal. Sifat bakteriostatik yang dimiliki mampu menghambat multipikasi bakteri. Multipikasi bakteri akan dihambat bila agen antimikroba dihilangkan. Bakteriosidal merujuk pada biosida yang mampu membunuh bakteri. Organisme yang terbunuh tidak mampu bereproduksi, bahkan setelah dihilangkan kontak dengan agen antimikroba.
Beberapa contoh agen antimikroba :
3. Desinfektan adalah produk biosida yang digunakan untuk mengurangi jumlah mikroorganisme dalam suatu permukaan atau produk hingga mencapai tingkat yang telah ditetapkan atau layak untuk digunakan atau diolah lebih lanjut. Desinfektan tidak harus bersifat sporisidal tetapi dapat pula sporostatik.
4. Antiseptik adalah suatu produk yang dapat merusak atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme di atau di dalam jaringan hidup
5. Pengawet merupakan agen yang digunakan untuk mencegah multiplikasi mikroorganisme dalam produk yang diformulasi antara lain farmaseutika dan makanan.
6. Antibiotik merupakan suatu senyawa organik sintetik atau alami yang menghambat pertumbuhan bakteri atau merusak bakteri. Kemampuannya untuk menghambat atau merusak umumnya berada pada konsentrasi rendah (Brooks dkk., 2010).
H. Uji Aktivitas Antibakteri 1. Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang dapat dapat digunakan untuk menguji potensi agen antimikroba pada suatu mikroba antara lain :
Metode ini digunakan untuk mengukur Kadar Hambat Minimum (KHM) ataua Kadar Bunuh Minimum (KBM). Prinsip metode ini yaitu substansi antimikroba dalam kadar bertingkat (biasanya pengenceran dua kali lipat) dicampurkan ke dalam medium bakteriologis solid atau cair. Tujuan metode ini untuk mengetahui besarnya konsentrasi minimum yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan bakteri yang ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba, dan diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah inkubasi diteteapkan sebagai KBM. Kelebihan metode ini adalah data yang didapatkan merupakan hasil kuantitatif yang menunjukkan jumlah antimikroba tertentu yang dapat mengambat atau membunuh mikroba uji.
2) Metode dilusi padat
Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan media padat.
b. Metode difusi dibedakan menjadi : 1) Metode disc diffusion
2) Cup plate technique
Pada metode ini dibuat sumur pada media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan selanjutnya pada sumur tersebut diberi agen antimikroba yang akan diuji. Penghambatan pertumbuhan mikroorganisme ditunjukkan dengan adanya area jernih
(Pratiwi, 2008). 2. Pengujian Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum
(KBM)
3. Pengukuran Pertumbuhan Bakteri
Pengukuran pertumbuhan bakteri dapat ditentukan dengan berbagai cara, salah satu cara yaitu dengan memperkirakan jumlah bakteri secara tidak langsung yang diamati berdasarkan :
a. Kekeruhan : merupakan metode untuk mengetahui adanya pertumbuhan mikroorganisme. Prinsip metode ini dengan melihat kekeruhan media cair dengan alat spektrofotometer. Seiring dengan bertambahnya sel bakteri dalam media cair media tersebut akan menjadi keruh. Prinsip kerja alat ini dengan mentransmisikan berkas cahaya melalui suspensi bakteri lalu diteruskan ke detektor sensitif cahaya, jika jumlah bakteri meningkat sedikit cahaya yang akan diteruskan ke detektor yang akan terukur pada skala alat yang berupa persentasi transmisi atau nilai absorbans atau densitas optik (optical density). Nilai absorbani ini yang akan digunakan untuk memperkirakan jumlah bakteri
b. Aktivitas metabolik : prinsip metode ini dengan mengukur aktivitas metabolik populasi bakteri seperti asam, atau karbon dioksida yang menujukkan proporsi keberadaan bakteri.
c. Bobot kering : metode ini digunakan untuk bakteri berfilamen dan kapang dengan cara menentukan bobot kering. Metode ini dilakukan dengan cara bakteri atau kapang dipindahkan dari media pertumbuhan, disaring untuk mneghilangkan materi pengganggu lain, dikeringkan kemudian ditimbang
I. Landasan Teori
Penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri S.aureus dan E. coli merupakan penyakit yang sering diderita oleh masyarakat dan merupakan penyebab kematian di dunia. Berdasarkan hal tersebut perlu dilakukan eksplorasi bahan alam yang berpotensi sebagai antibakteri yang aman dan efektif.
Biji petai mengandung senyawa alkaloid, terpenoid, fenolik dan flavonoid (Kamisah dkk., 2013) sedangkan menurut Jebarus (2015) pada kulit buah mengandung saponin, flavonoid, alkaloid, tanin, fenolik dan terpenoid. Pada kulit batang pohon petai mengandung flavonoid, alkaloid, fenolik dan terpenoid (Pratama, 2015). Bunga petai memiliki bau yang khas. Menurut Junker dkk., (2010) bau atau aroma khas yang terdapat dalam bunga disebabkan karena adanya senyawa terpenoid. Menurut Heinrich (2005) pigmen pemberi warna pada bunga berasal dari senyawa golongan fenolik yaitu flavonoid. Menurut Swaati dkk., (2014) senyawa alkaloid, saponin dan tanin juga dapat terdistribusi dalam bunga yang termasuk ke dalam famili Fabaceae. Oleh karena itu diduga bahwa bunga petai memiliki kandungan senyawa terpenoid, flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Senyawa-senyawa tersebut diketahui memiliki aktivitas antibakteri (Swaati dkk., 2014).
adanya gugus amina, amida, fenol dan metoksi yang dimungkinkan dapat tertarik oleh etanol. Etanol juga dapat menarik senyawa fenolik yang cenderung larut dalam air. Tanin juga memiliki gugus fenolik sehingga dapat larut pada pelarut polar. Saponin memiliki ikatan glikosida dan flavonoid memiliki ikatan dengan gugus gula yang membuat kedua senyawa ini bersifat polar (Siedel, 2008).
Pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran. Hasil yang diperoleh menggunakan metode difusi sumuran yaitu adanya daerah penghambatan (zona hambat) yang menujukkan terhambatnya pertumbuhan bakteri disekitar sumuran. Pengukuran KHM dan KBM dilakukan dengan metode dilusi cair. Hasil metode dilusi cair ditunjukkan dengan media jernih yang mengandung konsentrasi ekstrak etanol bunga petai terendah yang menujukkan bebas dari pertumbuhan mikroba.
Penelitian mengenai aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai diharapkan dapat mengembangkan ilmu pengetahuan dan memberikan informasi ilmiah mengenai manfaat bunga petai sebagai salah satu antibakteri alternatif untuk mengatasi penyakit infeksi yang disebabkan oleh S. aureus dan E. coli.
J. Hipotesis
31 BAB III
METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola satu arah. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta dan Laboratorium Mikrobiologi, Balai Kesehatan Yogyakarta.
B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variable penelitian
a. Variabel bebas : konsentrasi ekstrak etanol bunga petai.
b. Variabel tergantung : diameter zona hambat serta KHM dan KBM.
c. Variabel pengacau terkendali: asal tanaman, cairan penyari, media penanaman bakteri, waktu inkubasi, suhu inkubasi, jenis bakteri uji, volume larutan uji yang diinokulasikan, kepadatan suspensi bakteri uji setara dengan larutan Mc Farland 0,5.
d. Variabel pengacau tak terkendali : umur tanaman 2. Definisi operasional
b. Aktivitas antibakteri adalah kemampuan ekstrak etanol bunga petai untuk menghambat pertumbuhan mikroba uji S. aureus dan E.coli dibandingkan dengan kontrol negatif (DMSO 5%) dengan metode difusi sumuran.
c. Zona hambat adalah daerah jernih yang menujukkan adanya penghambatan pertumbuhan bakteri S. aureus dan E.coli disekitar lubang sumuran.
d. KHM adalah konsentrasi terendah ekstrak etanol bunga petai yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli.
e. KBM adalah konsentrasi terendah ekstrak etanol bunga petai yang dapat membunuh bakteri S. aureus dan E. coli
f. Berbeda bermakna (BB) merupakan perbedaan yang secara statistik bermakna antara 2 kelompok yang dibandingkan.
g. Berbeda tidak bermakna (BTB) merupakan perbedaan yang sangat kecil dan secara statistik tidak bermakna atau dikatakan sama antara 2 kelompok yang dibandingkan.
C. Bahan Penelitian
Brataco®), larutan standar Mc Farland 0,5 (1,5.108 CFU/mL), suspensi S.aureus ATCC 25923 dan E.coli ATCC 25922, amoksisillin (Bernofarm), Dimetilsulfoksida (DMSO).
D. Alat Penelitian
Alat-alat gelas (Pyrex dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma), pengayak, moisture balance (HG53 Halogen Moisture Analyzer), rotary evaporator (Buchi Labortechnik AG CH-9230), waterbath (Memmert), neraca analitik (Mettler pc-2000), oven (Memmert), incubator (Hareus), autoklaf (KT-40. ALP Co.Ltd Hamurasi Tokyo Japan), Microbial safety Cabinet, Laminar Air flow, penggaris (butterfly), kertas saring, jarum ose, vortex, shaker (InnovaTM2100), pelubang sumuran berdiameter 6 mm, mikropipet (Socorex), tabung eppendorf, flakon, kulkas (Samsung), spektrofotometer UV-Vis.
E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi bunga petai
2. Pengumpulan bahan bunga petai
Sampel yang digunakan adalah bunga petai yang diambil dari Kabupaten Sleman. Bagian yang diambil adalah seluruh bagian bunga yang berupa bongkol bundar yang bewarna kuning kecoklatan, tanpa tangkai bunga.
3. Pengeringan dan pembuatan serbuk
Pengeringan dilakukan pada ruang pengering simplisia. Pengeringan dilakukan sampai bunga kering dan mudah diremukkan, kemudian bunga diserbuk hingga halus. Serbuk yang diperoleh diayak hingga diperoleh serbuk bunga dengan ukuran yang homogen. Kemudian serbuk disimpan dalam wadah tertutup rapat, pada suhu ruangan dan terlindung dari sinar matahari.
4. Penetapan susut pengeringan serbuk bunga petai
Penetapan susut pengeringan serbuk bunga petai dilakukan dengan menggunakan moisture balance. Penetapan susut pengeringan dilakukan dengan menimbang 5 gram serbuk pada moisture balance, lalu diukur selama 15 menit dengan suhu 105oC dan hasil pengukuran dinyatakan dalam persen.
5. Pembuatan ekstak etanol bunga petai
penyari) (Badan Pegawas Obat dan Makanan RI, 2010). Maserasi dilakukan selama 2x24 jam dengan bantuan shaker. Hasil maserat yang diperoleh disaring dengan menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring dengan bantan pompa vakum, kemudian serbuk dari hasil penyaringan diremaserasi dengan pelarut baru sebanyak 125 ml selama 1x 24 jam.
Hasil maserat pertama dan kedua dicampur dan duapkan dengan rotary evaporator pada suhu 70oC untuk menguapkan pelarut yang terdapat pada ekstrak, kemudian ekstrak ditempatkan pada cawan petri dan diuapkan kembali diatas water bath dengan suhu 50-60oC untuk menghilangkan pelarut yang kemungkinan masih terdapat pada ekstrak. Ekstrak diuapkan hingga diperoleh ekstrak kental dengan bobot tetap yang telah dipersyaratkan.
6. Identifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanol bunga petai dengan uji tabung
a. Pembuatan larutan uji
Pembuatan larutan uji untuk uji fitokimia dilakukan dengan cara, 500 mg ekstrak kental bunga petai dilarutkan ke dalam 50 ml etanol 70%.
b. Uji pendahuluan
larutan menjadi lebih intensif menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor dengan gugus hidrolik.
c. Uji fenolik
Sebanyak 3 ml larutan uji ditambahkan dengan ± 3 tetes larutan FeCl3 1 %. Hasil positif adanya senyawa fenolik ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau, merah, ungu atau hitam (Jones dan Kinghorn, 2006).
d. Uji flavonoid
Sebanyak 3 ml larutan uji ditetesi dengan ± 2 tetes NaOH LP maka akan terjadi pembentukan intensitas warna kuning. Dengan penambahan HCl terjadi perubahan intensitas warna kuning. Adanya perubahan warna menunjukkan hasil positif bahwa terdapat senyawa flavonoid.
e. Uji tanin
Sebanyak 1 ml larutan uji ditambahkan dengan ± 3 tetes larutan FeCl3 10%. Hasil positif adanya senyawa tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru tua, atau biru kehitaman (Jones dan Kinghorn, 2006).
f. Uji alkaloid
positif ditunjukan dengan terbentuknya endapan jingga pada larutan yang ditambahkan pereaksi Dragendorff dan endapan putih hingga kekuningan pada larutan yang ditambahkan pereaksi Mayer (Jones dan Kinghorn, 2006).
g. Uji terpenoid
Larutan uji sebanyak 2,5 ml dicampur dengan 1 ml kloroform kemudian ditambahkan 1,5 ml H2SO4 pekat secara hati-hati melewati dinding tabung. Hasil positif adanya senyawa terpenoid ditunjukkan dengan terbentuknya cincin warna coklat kemerahan pada permukaaan dalam larutan (Edeoga, Okwu, dan Mbaebre, 2005).
h. Uji saponin
Sebanyak 100 mg serbuk bunga petai ditambahkan 10 mL aquadest ke dalam tabung reaksi, ditutup dan dikocok kuat-kuat selama 30 detik. Tabung dibiarkan dalam posisi tegak. Apabila terbentuk buih setinggi kurang lebih 1-10 cm selama ± 10 menit pada permukaan cairan dan setelah penambahan ± 1 tetes HCl 2 N busa tidak hilang, maka menujukkan adanya senyawa saponin (Departemen Kesehataan RI, 1995).
7. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga petai terhadap S. aureus dan E. coli
a. Sterilisasi alat dan bahan
dimasukkan ke dalam cawan petri kemudian dibungkus dengan kertas. Semua alat yang telah dibungkus dimasukkan ke dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 30 menit. Jarum ose disterilkan dengan memijarkan pada api bunsen, dan tabung mikropipet disterilkan dengan direndam pada alkohol.
b. Pembuatan pelarut ekstrak
Pelarut yang akan digunakan yaitu DMSO konsentrasi 5% v/v. Pembuatan DMSO 5% dilakukan dengan cara melarutkan 5 ml DMSO, kemudian di tambahkan dengan aquadest sampai 100 mL.
c. Pembuatan variasi konsentrasi larutan uji
Ekstrak etanol bunga petai untuk uji potensi antibakteri menggunakan 5 seri konsentrasi. Konsentrasi 50% didapatkan dengan melarutkan 3 gram ekstrak kental dengan 6 mL DMSO 5%, kemudian dilakukan pengenceran sehingga diperoleh konsentrasi 25%; 12,5%; 6,25%; 3,125%. Kontrol negatif digunakan DMSO 5% dan sebagai kontrol positif digunakan amoksisilin 125mg/5ml.
Tabel I. Pembuatan Variasi Konsentrasi Uji. Konsentrasi larutan uji
Bakteri diinokulasi di media geolitik, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Bila terdapat endapan hitam pada media geolitik diduga bakteri tersebut merupakan Staphylococcus. Bakteri diisolasi dari media geolitik ke media Enrich, diinkubasi selama 2 X 24 jam pada suhu 37oC. Jika terdapat kabut putih diduga bakteri Staphylococcus. Kemudian, diambil 1-2 ose bakteri, diinokulasikan ke media gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sakarosa), media Simons Citrat (SC), media Sulfur Indol Motil (SIM) dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Tahap selanjutnya dilakukan uji koagulase dan pengecatan Gram.
2) Escherichia coli
Bakteri diinokulasi di media penyubur Brilliant Green Lactose Blue (BGLD), kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37oC. Jika terdapat koloni berwarna biru diduga bakteri Escherichia. Tahap selanjutnya, bakteri diisolasi lalu ditanam ke media TBX (Tryptone Bile X-Glucoronide) dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Pada media isolasi setelah 24 jam diduga adanya Escherichia coli dengan timbulnya warna hijau, kemudian bakteri diambil 1-2 ose, diinokulasi ke dalam media gula (glukosa, sakarosa, laktosa, maltose, manitol), SC (Simon Citrat), SIM (Sulfur Indol Motil) dan diinkubasi selama 24 jam. Tahap selanjutnya dilakukan pengecatan Gram.
e. Pembuatan stok bakteri uji
f. Pembuatan suspensi bakteri uji
Bakteri diambil sebanyak 1-3 ose dari stok kultur mikroba, kemudian diinokulasikan ke dalam tabung reaksi yang berisi MHB dan divortex agar tercampur merata. Suspensi bakteri yang telah dibuat disetarakan kekeruhanya dengan larutan Mac Farland 0,5 (1,5 X 108 CFU).
37oC selanjutnya diamati ada atau tidaknya zona jernih disekitar sumuran. Zona jernih yang tampak diukur dengan penggaris.
8. Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair
Penentuan KHM dan KBM dilakukan dengan metode dilusi cair dengan menggunakan media MHB dan diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis sebelum dan sesudah inkubasi untuk melihat pertumbuhan bakteri uji. Pengujian dilakukan dengan membuat dan mengambil 5 mL media MHB dimasukkan ke tiap tabung reaksi, ditambahkan 200 L larutan ekstrak etanol bunga petai dengan konsentrasi yang berbeda untuk dimasukkan pada tiap tabung reaksi. Konsentrasi larutan ekstrak etanol yang dibuat meliputi 13 seri konsentrasi (50%; 43,75%; 37,50%; 31,25%; 25%; 12,5%; 10,938%; 9,375%; 7,813%; 6,25%; 3,125%; 1,563% dan 0,782%. Tiap tabung yang telah berisi media MHB dan larutan ekstrak ditambahkan kembali dengan 200 L suspensi bakteri uji yang telah distandarisasi kekeruhannya dengan larutan Mac Farland 0,5 kemudian divortex dan tabung reaksi tersebut diukur absorbansi atau Optical Density (OD) dengan menggunakan spektrofotometer ( 480 nm) sebagai pembanding sebelum inkubasi atau kontrol. Setiap satu kali pengukuran OD selesai, dilakukan autozero dengan menggunakan blanko yang berisi konsentrasi larutan ekstrak dan media.
mengukur OD setelah inkubasi dikurangi OD sebelum inkubasi. Apabila terdapat konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan bakteri, ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan (∆OD≤ 0), maka didapatkan KHM.
Uji lanjutan dilakukan untuk menentukan KHM atau KBM dengan cara mengambil 1-2 ose larutan konsentrasi terendah yang menunjukkan ∆OD = 0 atau yang menujukkan KHM, dinokulasikan pada media MHA steril baru dengan metode streak plate, kemudian media tersebut diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC. Apabila setelah inkubasi menunjukkan adanya pertumbuhan koloni pada hasil steak plate atau goresan, maka didapatkan KHM. Bila tidak adanya pertumbuhan koloni bakteri pada goresan, maka didapatkan KBM.
F. Tata Cara Analisis Hasil
44 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman
Determinasi dilakukan untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan adalah benar tanaman yang dimaksud untuk digunakan dalam penelitian. Ciri tanaman petai yaitu pohon dengan tinggi mencapai 30 m, batang berkayu dengan permukaan kulit batang berwarna coklat kemerahan. Daun majemuk, menyirip ganda, ujung daun membulat berwarna hijau. Perbungaan bongkol, bunga kecil dan banyak. Pangkal bonggol berwarna putih kekuningan, merupakan bunga jantan, sedangkan ujung bonggol merupakan kumpulan bunga betina (Wiriadinata dan Bamroongrugsa, 2010). Ciri tanaman yang digunakan pada penelitian sesuai dengan pustaka. Serbuk bunga petai diperoleh dari CV. Merapi Farma, Kaliurang, Sleman, Yogyakarta, disertai dengan surat keterangan keaslian tanaman (lampiran 1) yang digunakan sebagai bukti bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini merupakan tanaman petai (Parkia speciosa, Hassk).
Tujuan pengeringan yaitu untuk mempermudah proses pembuatan serbuk dan mengurangi kadar air sehingga simplisia tidak mudah ditumbuhi kapang dan bakteri. Jika kadar air masih tinggi maka aktivitas enzim juga tinggi untuk mengubah kandungan kimia dalam simplisia menjadi produk lain yang yang kemungkinan memiliki efek yang berbeda dengan senyawa induknya. Beberapa enzim perusak kandungan kimia antara lain hidrolase, oksidase dan polymerase (Pramono, 2005 cit., Ma’mun, 2006). Pengeringan dilakukan sampai bunga petai kering sempurna ditunjukkan dengan warna bunga petai yang lebih gelap dibandingkan sebelum dikeringkan, mudah diremukkan sehingga mudah untuk dibuat serbuk. Tujuan penyerbukan yaitu untuk memperkecil ukuran partikel dan memperbesar luas permukaan serbuk, sehingga kontak serbuk dengan pelarut juga semakin besar, maka pelarut mudah masuk ke dalam sel sehingga proses penyarian optimal. Serbuk yang diperoleh diayak dengan ayakan tepung, dan selanjutnya disimpan untuk proses ekstraksi lebih lanjut. Syarat penyimpanan serbuk menurut Menteri Kesehatan RI (1994) yaitu serbuk yang telah dibuat disimpan dalam wadah tertutup, pada suhu kamar, ditempat kering dan terlindung dari sinar matahari.
C. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Bunga Petai
menguap. Susut pengeringan dapat digunakan sebagai salah satu parameter untuk melihat kualitas simplisia bunga petai. Menurut Menteri Kesehatan RI (2009) susut pengeringan yang dipersyaratkan yaitu tidak melebihi 10 %. Jika susut pengeringan sesuai yang dipersyaratkan maka dapat meminimalisir kandungan air dalam simplisia yang dapat mencegah pertumbuhan dan aktivitas enzim mikroorganisme pada simplisia sehingga simplisia bunga petai tahan lama, terlebih lagi agar kandungan zat aktif tidak berubah.
Penetapan susut pengeringan dilakukan dengan metode gravimetri dengan suhu 105oC selama 15 menit. Suhu yang digunakan yaitu suhu diatas titik didih air supaya menjamin agar seluruh kandungan air dan bahan menguap lain yang ada pada serbuk telah menguap. Pada penetapan ini dilakukan 3 kali replikasi dan diperoleh rata-rata susut pengeringan pada 3 replikasi sebesar 9,09%. Hasil yang diperoleh menujukkan bahwa simplisia yang digunakan telah memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan.
D. Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Petai
Proses ekstraksi bunga petai dilakukan dengan metode maserasi kinetik. Proses ekstraksi pada prinsipnya senyawa fitokimia yang memiliki sifat yang sama dengan pelarut akan tertarik dan terlarut ke dalam pelarutnya sehingga senyawa kimia tertentu dapat dipisahkan.
bersifat polar maupun semipolar dapat tertarik. Gugus OH dalam etanol membantu melarutkan molekul polar dan ion-ion dan gugus alkilnya CH3-CH2 dapat mengikat bahan non polar (Thoha, Sitanggang dan Hutahayan, 2009). Etanol 70 % dapat melarutkan fitokimia lebih maksimal karena etanol 70% masih mengandung air yang membantu proses ekstraksi sehingga sebagian senyawa ada yang dapat tertarik oleh etanol dan ada yang tertarik dengan air (Sani, Nisa, Andriani, dan Maligan, 2014).
rotary vakum evaporator yaitu destilasi (pemisahan). Alat ini akan menghasilkan ekstrak yang terpisah dari penyari. Senyawa yang larut dalam penyari tidak menguap, melainkan turun ke bawah karena adanya gravitasi dan membentuk gumpalan atau endapan. Proses penguapan atau pengeringan dilanjutkan dengan menggunakan waterbath pada suhu 60oC sampai didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap.
Menurut Peraturan Menteri Kesehatan RI (2009) bobot tetap diperoleh apabila perbedaan dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan selama 1 jam tidak melebihi 0,5 mg. Penimbangan sampai bobot tetap dilakukan untuk memastikan, agar cairan penyari yang digunakan sudah tidak ada dalam ekstrak sehingga didapatkan ekstrak kental murni. Jika etanol masih terdapat dalam ekstrak akan menyebabkan bias hasil penelitian untuk pengujian aktivitas antibakteri karena etanol 70% juga dapat bersifat sebagai disinfektan. Karakteristik ekstrak yang didapat. berupa ekstrak kental, berwarna coklat kehitaman dengan bau yang menyengat dan bobot tetap ekstrak diperoleh pada pemanasan jam ke 6 dan ke 7. Pada pemanasan jam ke 6 dan 7 menunjukkan tidak ada perubahan bobot ekstrak dua kali penimbangan berturut turut setelah dikeringkan selama 1 jam. Bobot ekstrak yang diperoleh sebesar 8,34 g. Hasil rendemen ekstrak yang diperoleh dihitung menggunakan rumus :
Tabel II. Hasil Perolehan Ekstrak Bunga Petai dengan Maserasi.
Wujud Kental
Warna Coklat kehitaman
Bau Menyengat
Rendemen 16, 68 %
E. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Etanol Bunga Petai dengan Uji Tabung
Tabel III. Hasil Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Ekstrak Etanol Bunga Petai.
No Pengujian Pengamatan Hasil
1 Uji pendahuluan
Warna biru tua atau hitam kehijauan
disajikan dalam (tabel III). Uji tabung merupakan metode analisis kualitatif yang bertujuan untuk mengetahui kandungan kimia yang terdapat dalam bunga petai. Uji tabung digunakan sebagai metode untuk identifikasi kandungan kimia yang diduga terdapat dalam bunga petai. Metode ini yang dipilih dikarenakan metode ini sederhana dan cepat.
1. Uji Pendahuluan
Uji pendahuluan bertujuan untuk mengidentifikasi apakah dalam bunga petai terdapat senyawa yang mengandung gugus kromofor atau gugus hidrofilik. Berdasarkan hasil pengujian diketahui bahwa bunga petai mengandung gugus kromofor atau gugus hidrofilik. Hal ini dapat ditunjukkan dengan larutan yang berwarna merah bata dan warna berubah menjadi lebih intensif setelah penambahan beberapa tetes KOH LP (Lampiran 5).
2. Uji Alkaloid
penambahan pereaksi Mayer dan terbentuk endapan berwarna coklat setelah penambahan peraksi Dragendorff, yang artinya bunga petai mengandung senyawa alkaloid (Lampiran 5).
Pada prinsipnya uji alkaloid terjadi reaksi pengendapan karena adanya penggantian ligan. Atom nitrogen yang mempunyai pasangan elektron bebas pada alkaloid akan membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam K+ yang berasal dari pereaksi Dragendorff (Gambar 5). Pada penambahan pereaksi mayer terbentuk endapan putih, hal ini disebabkan karena nitrogen pada alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari pereaksi Mayer (Gambar 4). Penambahan pereksi tersebut akan membentuk kompleks kalium-alkaloid yanga akan mengendap (Sangi, Runtuwene, Simbala dan Makang, 2008). Berdasarkan hasil skrining tersebut diduga bahwa bunga petai mengandung senyawa alkaloid
Gambar 4. Reaksi antara alkaloid dengan pereaksi Mayer (Marliana, 2005 cit. Miroslav, 1971).
3. Uji Tanin
Tanin merupakan senyawa polifenol yang bersifat larut dalam air dan pelarut polar yang sebagian besar terdapat pada tanaman herba dan tanaman berkayu. Pada uji identifikasi untuk mengetahui adanya tanin, larutan uji ditambahkan dengan pereaksi FeCl3 10%. Tanin yang merupakan senyawa fenolik akan membentuk senyawa kompleks dengan Fe3+ sehingga akan timbul reaksi perubahan warna menjadi warna biru tua, atau biru kehitaman.
Berdasarkan penelitian hasil skrinig fotokimia, diduga bahwa bunga petai tidak mengandung senyawa tanin yang ditunjukkan dengan tidak adanya perubahan warna biru tua atau hitam kehijauan setelah penambahan pereksi FeCl3 10% (Lampiran 5). Tidak terjadinya perubahan warna ini diperkirakan karena pereaksi FeCl3 10% tidak membentuk reaksi kompleksasi ion besi dengan tanin (Lampiran 5).
4. Uji Terpenoid
Uji terpenoid pada skrining terpenoid didasarkan pada kemampuan senyawa dalam larutan uji untuk membentuk reaksi warna dengan H2SO4 pekat (Sangi dkk., 2008). Terpenoid yang larut dalam kloroform akan membentuk warna merah ketika ditambahkan dengan H2SO4 pekat. Hasil dalam penelitian diperoleh hasil positif yaitu terbentuknya cincin warna coklat kemerahan pada larutan (Lampiran 5)
5. Uji Saponin
buih setinggi 3 cm. Buih yang terbentuk ini bertahan dalam jangka waktu cukup lama dan setelah penambahan HCl 2N buih yang terbentuk tidak hilang (Lampiran 5). Hal ini menujukkan bahwa terdapat senyawa saponin dalam bunga petai. Buih yang terbentuk terdiri dari gugus hidrofilik dan hidrofobik yang dapat merusak membran sitoplasma sehingga dapat membunuh sel bakteri. Gugus hidrofilik akan menghadap keluar dan berikatan dengan gugus hidrofilik air, sedangkan gugus hidrofobik akan menghadap ke dalam. Keadaan ini yang menyebabkan tampak seperti busa atau buih.
Saponin bila terhidrolisis menghasilkan ikatan glikosida, ikatan ini mempunyai sifat seperti sabun dalam air yang membentuk buih (Gambar 6). Glikosida yang terbentuk tersusun atas bagian gula (glikon) dan bagian non gula (aglikon atau sapogenin) (Sarker dan Nahar , 2007). Busa atau buih merupakan komponen aktif yang dapat mengganggu permeabilits membran luar pada dinding sel pada bakteri gram positif dan negatif.
Gambar 6. Reaksi saponin dalam air (Marliana,2005). 6. Uji Fenolik
membentuk kompleks warna. Reaksi yang terjadi pada uji fenolik terdapat pada Gambar 7. Perubahan warna yang terjadi ini menujukkan kemungkinan adanya senyawa fenolik yang membentuk kompleks dengan FeCl3 dalam ekstrak etanol bunga petai.
Gambar 7. Reaksi antara senyawa fenolik dengan FeCl3 (Herlinawati, 2007). 7. Uji Flavonoid
