Uji Toksisitas Subkronik Ekstrak Etanol Daun Kembang Bulan (Tithonia diversifolia (Hemsley) A.Gray) pada Mencit Jantan Appendix

(1)

56

Lampiran 1.

Hasil identifikasi tumbuhan

(2)

57 Lampiran 2.

Gambar tumbuhan dan daun segarkembang bulan (Tithonia

diversifolia (Hemsley) A. Gray)

Tumbuhan kembang bulan

Daun segar tumbuhan kembang bulan

(3)

58 Lampiran 3.

GambarSimplisia dan serbuk simplisia daun kembang bulan

Simplisia daun kembang bulan

Serbuk simplisia daun kembang bulan

(4)

59 Lampiran 4.

Bagan pembuatan ekstrak

Serbuk simplisia

Dimasukkan ke dalam bejana

Ditambah pelarut 5,5 liter etanol 80% (75

bagian)

Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari

cahaya sambil sesekali di aduk

Diserkai, diperas

Dicuci dengan pelarut

etanol 80%

hingga

diperoleh (100 bagian)

Dipindahkan ke dalam

bejana tertutup

Dibiarkan di tempat

sejuk, terlindung dari

cahaya selama 2 hari

Dienap tuangkan dan

di saring

Digabung

Dipekatkan dengan alat rotary evaporator

40

o

C

Dikeringkan dengan alat freeze dryer

-40

o

C

Ekstrak Kental

(71 g)

Maserat I

Ampas

Maserat II

Ampas

(5)

60 Lampiran 5.

Bagan alur penelitian uji toksisitas subkronik

`

Pengamatan 28 Hari

EEDKB

Hewan Uji

(Mencit)

Kelompok

kontrol (I)

Diberi

CMC Na

5%

Kelompok

II

Diberi EEDKB dosis 250 mg/kg bb

Kelompok

III

Kelompok

IV

Kelompok

IV

Diberi EEDKB dosis

1000 mg/kg bb

Gejala

toksik

Berat

Badan

Jumlah

pakan

Kema-tian

Kadar ALT dan Kreatinin

Makropa -tologi hati dan

ginjal

Histopa-tologi hati dan

ginjal

Analisis data

(6)

61 Lampiran 6

. Contoh perhitungan dosis

Berat badan mencit 25 g dengan dosis EEDKB 1000 mg/kg bb

Dosis = 1000 mg/kg bb

= (25 : 1000 kg ) x 1000 mg/kg

= 25 mg

Konsentrasi ekstrak yang dibuat 6% = 6 g/100 mL

= 6000 mg/100 mL

= 60 mg/mL

Jumlah obat yang disuntikkan

= 25 mg : 60 mg/mL

= 0,42 mL

(7)

62 Lampiran 7.

Hasil uji

pendahuluan1. Hasil pengamatan

berat badan

Perlakuan

Berat badan hari ke- (g)

0

1

2

3

4

5

6

7 2. Hasil perhitungan dan analisa rata-rata berat badan

Hari

Rata-rata berat badan (g) ± SD

kontrol

250 mg

500 mg

1000 mg

1500 mg

3000 mg

0

26,55 ±0,78 26,75±0,35 24,55±0,78 24,65±1,63

24,7±0,71

24,65±2,33

7

26,95±0,49

27,05±0,35 24,5±0,99

23,6±2,26

24,00±

-

3. Hasil pengamatan gejala toksik

Perlakuan Kejang Salivasi Diare Lemas

Perubahan bulu Gerak gerik

Rontok Warna Jalan

mun-dur

Jalan dengan

perut

Gelisah

Kontrol

-

(8)

63 Lampiran 8.

Hasil pengukuran berat badan

1. Berat badan pada minggu pertama

Perlakuan

Berat badan hari ke- (g)

1

2

3

4

5

6

7 kontrol I

23,3

24,9

23,3

23,5

22 23,5

24,3

kontrol II

20 20,1

20,2

20,1

20

20 kontrol III

21

21 21,2

21,2

21,1

21,5

22 kontrol IV

22,1

24,1

24 25,1

25

24

25 kontrol V

26,2

27,8

28 27,8

28,4

29 28,7

Dosis 250 mg I

20,2

22

21.5 20,3

21,6

21,8

22 Dosis 250 mg II

27,6

28 28,5

28,7

29 29,1

29,3

Dosis 250 mg III

24,4

26 25,5

25,6

24,6

25 24,7

Dosis 250 mg IV

20 20,1

20,2

20 20,5

21 20,7

Dosis 250 mg V

26,9

29 28,8

28,9

29 28,8

29 Dosis 500 mg I

27,8

30 29,8

28,9

31 29,8

30 Dosis 500 mg II

22,7

24,5

24 23,8

23,9

24

24 Dosis 500 mg III

23

25 24,8

23,9

25 24,7

25 Dosis 500 mg IV

25,9

26,8

25,8

24,9

25 26,1

25,9

Dosis 500 mg V

22,7

25 23,8

22,9

23,5

23,4

23,6

Dosis 750 mg I

32 32,2

31,6

31,7

33

32

29 Dosis 750 mg II

27,8

30

30 28,3

29 28,8

29 Dosis 750 mg III

21 22,3

25

24

23 19,5

20 Dosis 750 mg IV

25,4

27,8

28 28,9

29

29 28,6

Dosis 750 mg V

24 23,4

22 22,8

23,7

23,5

23,4

Dosis 1000 mg I

25,2

25 24,3

22

19 18,8

17 Dosis 1000 mg II

28 28,8

28,9

29,2

30

31 30,5

Dosis 1000 mg III

26,1

28,7

29 28,9

29

30 30,3

Dosis 1000 mg IV

22,4

21

20

21 22,2

22,4

Dosis 1000 mg V

25 26,6

26 25,6

25,7

26 26,1

(9)

64

2. Berat badan pada minggu kedua

Perlakuan

Berat badan hari ke- (g)

1

2

3

4

5

6

7 kontrol I

24

24 23,7

24 23,8

23,6

23,4

kontrol II

20

20 20,2

20,1

20,2

20,3

20,7

kontrol III

21,4

21,3

21,8

21,4

20,3

20,4

kontrol IV

25 24,5

25 24,8

24,9

25,7

26 kontrol V

29

30 30,3

30,4

30,6

31 Dosis 250 mg I

21

20

20 20,5

20,4

Dosis 250 mg II

29,6

30

30 29,7

29,5

28,8

30 Dosis 250 mg III

26 25,4

25,4

25,2

24 23,8

26 Dosis 250 mg IV

21 20,8

21

22

21 21,3

22 Dosis 250 mg V

28,7

28,5

28,3

27,8

26,9

27

27 Dosis 500 mg I

28,4

28,1

26,8

27 25,8

28 28,2

Dosis 500 mg II

24 22,3

20 19,4

16,5

18

19 Dosis 500 mg III

25 24,5

23,6

24 23,7

25 25,2

Dosis 500 mg IV

26

25 23,8

23,6

23 24,4

25 Dosis 500 mg V

24 23,8

24 24,6

24,7

25,3

26 Dosis 750 mg I

25

24

21

20 Mati

Dosis 750 mg II

30 30,2

29,5

29,6

28,4

30 30,2

Dosis 750 mg III

20 21,4

21 20,6

21,8

20 21,4

Dosis 750 mg IV

27,6

24,5

23 25,2

20 27,6

24,5

Dosis 750 mg V

20

18

17

18

16

20

18 Dosis 1000 mg I

16

15

15 Mati

Dosis 1000 mg II

30,6

30,7

31,4

32 30,6

30,7

31,4

Dosis 1000 mg III

30 30,6

31

30

24 Mati

Dosis 1000 mg IV

22,4

22,1

21,6

22 22,4

22,1

21,6

Dosis 1000 mg V

26 25,8

25,6

26

26 25,8

25,6

(10)

65

3. Berat badan pada minggu ketiga

Perlakuan

Berat badan hari ke- (g)

1

2

3

4

5

6

7 kontrol I

23,6

24,3

25 24,7

25

25 24,8

kontrol II

20,5

20,6

20,4

20,8

21 21,3

21,4

kontrol III

20,3

20,4

20,2

20,8

21

21 kontrol IV

26

26 25,8

25,5

26 26,4

27 kontrol V

31 31,6

31,8

32 31,7

31,5

30 Dosis 250 mg I

20,3

20,4

20,5

20 20,3

20,5

20,4

Dosis 250 mg II

30,8

31,7

32 31,6

30,5

31 31,3

Dosis 250 mg III

26,4

26,8

27 26,7

26,5

26,6

26,8

Dosis 250 mg IV

21,9

21,8

21,9

22 21,8

22 22,1

Dosis 250 mg V

27 27,1

26,7

26,4

26,2

26,5

Dosis 500 mg I

28,1

27,7

27,6

27,4

27,2

27

27 Dosis 500 mg II

19

18

19

19 18,6

Dosis 500 mg III

25 25,3

25,7

26 26,5

27 26,8

Dosis 500 mg IV

25 23,8

24,7

25,7

25,6

25,8

26 Dosis 500 mg V

26

26 26,2

26.7

27 26,8

27 Dosis 750 mg I

Mati

Dosis 750 mg II

30

31

31 29,8

29,9

30

31 Dosis 750 mg III

23 24,5

24,8

23,9

25 25,1

25,3

Dosis 750 mg IV

20,5

20,2

20

19

20 21,4

22 Dosis 750 mg V

13 Mati

Dosis 1000 mg I

Mati

Dosis 1000 mg II

32

24 Mati

Dosis 1000 mg III

Mati

Dosis 1000 mg IV

21,9

22,5

23 22,8

23,6

24 23,8

Dosis 1000 mg V

24,6

24,7

24,6

25 24,7

24,3

25

(11)

66

4. Berat badan pada minggu keempat

Perlakuan

Berat badan hari ke- (g)

1

2

3

4

5

6

7 kontrol I

22

23

24

25

26

27

28 kontrol II

25 25,5

25,8

26 26,6

27 kontrol III

21,7

22 21,8

21,6

21,9

22 kontrol IV

21 20,7

20,8

21 21,3

21,6

21,8

kontrol V

27 27,7

28

29

29 Dosis 250 mg I

20,7

21 21,5

21,8

21,2

21,6

22 Dosis 250 mg II

31 30,6

30,4

30,7

30,8

31 31,1

Dosis 250 mg III

26,4

27 26,5

26,7

26 27,1

27,3

Dosis 250 mg IV

21,3

21 21,6

22 21,7

21,8

22 Dosis 250 mg V

27 26,8

27 26,5

25,8

26,4

27 Dosis 500 mg I

26,4

26 25,7

26,9

26 26,4

26,5

Dosis 500 mg II

20

19

17

17 Mati

Dosis 500 mg III

27,3

29 28,6

28,8

29 28,5

28,3

Dosis 500 mg IV

26 25,5

25

26

27 27,6

28 Dosis 500 mg V

27,5

28 26,9

26,5

27 27,2

27,5

Dosis 750 mg I

Mati

Dosis 750 mg II

30,8

31 30,7

30,9

31,5

31,7

32 Dosis 750 mg III

25,1

25 25,4

26 25,3

25,6

25 Dosis 750 mg IV

22,5

23,1

23 23,6

25 24,7

24,5

Dosis 750 mg V

Mati

Dosis 1000 mg I

Mati

Dosis 1000 mg II

Mati

Dosis 1000 mg III

Mati

Dosis 1000 mg IV

23,6

24 23,7

23,8

24 24,7

25 Dosis 1000 mg V

25 25,6

25,8

26 26,2

26

(12)

67 Lampiran 9.

Hasil pengukuran kadar ALT dan kreatinin

(13)

68 Lampiran 9.

(lanjutan)

(14)

69 Lampiran 9.

(lanjutan)

(15)

70 Lampiran 9.

(lanjutan)

(16)

71 Lampiran 9.

(lanjutan)

(17)

72 Lampiran 9.

(lanjutan)

(18)

73 Lampiran 9.

(lanjutan)

(19)

74 Lampiran 9.

(lanjutan)

(20)

75 Lampiran 9.

(lanjutan)

(21)

76 Lampiran 9.

(lanjutan)

(22)

77 Lampiran 9.

(lanjutan)

(23)

78 Lampiran 9.

(lanjutan)

(24)

79 Lampiran 9.

(lanjutan)

(25)

80 Lampiran 9.

(lanjutan)

(26)

81 Lampiran 9.

(lanjutan)

(27)

82 Lampiran 9.

(lanjutan)

(28)

83 Lampiran 9.

(lanjutan)

(29)

84 Lampiran 10.

Hasil rata-rata kadar ALT dan kreatinin

1. Hasil rata-rata kadar ALT

Perlakuan

Rata-Rata ±SD

Nilai signifikansi

Kontrol

24,26 ±7,67

-

Dosis 250 mg/kg bb

48,5 ± 7,00

0,09*

Dosis 500 mg/kg bb

73,5 ± 19,46

0,014*

Dosis 750 mg/kg bb

99,5 ± 12,99

0,002*

Dosis 1000 mg/kg bb

151,2 ± 0,80

0,024*

2. Hasil rata-rata kadar kreatinin

Perlakuan

Rata-Rata ±SD

Nilai signifikansi

Kontrol

0,12 ± 0,05

-

Dosis 250 mg/kg bb

0,18 ± 0,04

0,092*

Dosis 500 mg/kg bb

0,33 ± 0,05

0,014*

Dosis 750 mg/kg bb

0,47 ± 0,05

0,004*

Dosis 1000 mg/kg bb

0,71 ± 0,08

0,024*

*) terdapat perbedaan yang signifikan

(30)

85 Lampiran 11.

Pengamatan makropatologi organ hati dan ginjal

Hati dan ginjal mencit kelompok kontrol

Hati dan ginjal mencit dosis 250 mg/kg bb

(31)

86 Lampiran 11.

(lanjutan)

Hati dan ginjal mencit dosis 500 mg/kg bb

Hati dan ginjal mencit dosis 750 mg/kg bb

(32)

87 Lampiran 11.

(lanjutan)

Hati dan ginjal mencit dosis 1000 mg/kg bb

(33)

88 Lampiran 12.

Gambar alat, bahan, dan objek yang digunakan

Oral sonde

Peralatan bedah

(34)

89 Lampiran 12.

(lanjutan)

Mikroskop

Preparat hati dan ginjal

(35)

90 Lampiran 13.

Gambar hewan percobaan yang digunakan

Mencit

Pembedahan mencit

7,5 cm

(36)

91 Lampiran 14.

Hasil analisis SPSS berat badan mencit jantan

Descriptives

N Mean Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Mini

19.5434 25.4966 20.0 0

19.3514 28.2886 20.0 0

21.5381 27.3019 22.7 0

20.8983 31.1817 21.0 0

19.9204 28.0796 20.0 0

20.2527 30.0273 20.7 0

22.5149 28.8851 23.6 0

20.8986 31.1014 20.0 0

18.1822 32.3378 17.0 0

18.8607 29.7393 20.4 0

20.2659 29.8941 20.4 0

20.4343 28.9257 19.0 0

13.7015 28.8985 13.0 0

15.8480 31.3120 15.0 0

20.1171 29.5629 21.0 0

20.0842 30.7558 20.4 0

20.5531 29.6069 18.6 0

14.0108 30.5092 13.0 0

31.00

(37)

92

17.2183 27.5017 15.0 0

21.0213 31.2987 21.8 0

21.0460 30.7140 22.0 0

19.5268 31.3932 17.0 0

14.2039 31.5961 13.0 0

17.2889 28.3111 15.0 0

26.00

Total 25 24.64 4.78774 .95755 22.6637 26.6163 13.0 0

32.00

Test of Homogeneity of Variances

Levene Statistic df1 df2 Sig. Squares

df Mean

Square

F Sig.

berat badan Hari 0

Between Groups

37.202 4 9.301 1.026 .418

Within Groups 181.368 20 9.068

Total 218.570 24

berat badan minggu I

Between Groups

11.676 4 2.919 .177 .947

Within Groups 328.964 20 16.448

Total 340.640 24

berat badan minggu II

Between Groups

44.802 4 11.201 .459 .765

Within Groups 488.564 20 24.428

Total 533.366 24

berat badan minggu III

Between Groups

48.026 4 12.007 .558 .695

Within Groups 430.052 20 21.503

Total 478.078 24

berat badan minggu Iv

Between Groups

54.668 4 13.667 .552 .700

Within Groups 495.472 20 24.774

Total 550.140 24

(38)

93

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons Tukey HSD

Dependent Variable

(I) perlakuan

(J) perlakuan

Mean Difference

(I-J)

Std. Error Sig. 95% Confidence Interval Lower Bound

Upper Bound

berat badan Hari 0

kontrol

dosis 250

dosis 1000 mg/kg bb

.70000 1.90456 .996

-4.9992

6.3992

dosis 1000 mg/kg bb

berat badan minggu I

kontrol

dosis 250

dosis 1000 mg/kg bb

(39)

94

dosis 1000 mg/kg bb

.74000 2.56501 .998

-6.9355

8.4155

dosis 1000 mg/kg bb

berat badan minggu II

kontrol

dosis 250

12.3539

dosis 1000 mg/kg bb

.72000 3.12590 .999

-8.6339

10.0739

dosis 250 mg/kg bb

kontrol .78000 3.12590 .999

-8.5739

10.1339

dosis 500

13.1339

dosis 1000 mg/kg bb

1.50000 3.12590 .988

-7.8539

10.8539

dosis 500

12.7339

dosis 1000 mg/kg bb

1.10000 3.12590 .996

-8.2539

10.4539

dosis 750 mg/kg bb

kontrol

-3.00000 3.12590 .870

(40)

95

dosis 1000

mg/kg bb

-2.28000 3.12590 .947

-11.633 9

7.0739

dosis 1000 mg/kg bb

kontrol

-.72000 3.12590 .999

-11.6339

berat badan minggu III

kontrol

dosis 250

11.3559

dosis 1000 mg/kg bb

2.48000 2.93275 .913

-6.2959

11.2559

dosis 250

11.9359

dosis 1000 mg/kg bb

3.06000 2.93275 .832

-5.7159

11.8359

dosis 500

11.5959

dosis 1000 mg/kg bb

2.72000 2.93275 .883

-6.0559

11.4959

dosis 750 mg/kg bb

kontrol

-2.58000 2.93275 .901

-dosis 1000 mg/kg bb

-.10000 2.93275 1.000 -8.8759

8.6759

dosis 1000 mg/kg bb

kontrol

-2.48000 2.93275 .913

-berat badan

minggu Iv kontrol

dosis 250

10.1198

(41)

96

dosis 750

mg/kg bb

3.26000 3.14793 .836

-6.1598

12.6798

dosis 1000 mg/kg bb

3.36000 3.14793 .821

-6.0598

12.7798

dosis 250

12.3998

dosis 1000 mg/kg bb

3.08000 3.14793 .862

-6.3398

12.4998

dosis 500 mg/kg bb

kontrol

-.70000 3.14793 .999

-11.9798

dosis 1000 mg/kg bb

2.66000 3.14793 .913

-6.7598

12.0798

dosis 750 mg/kg bb

kontrol

-3.26000 3.14793 .836

-dosis 1000 mg/kg bb

.10000 3.14793 1.000

-9.3198

9.5198

dosis 1000 mg/kg bb

kontrol

-3.36000 3.14793 .821

(42)

97 Lampiran 15.

Hasil analisis SPSS pakan mencit

Oneway

Descriptives

Jumlah pakan(Gram)

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minim

Jumlah pakan(Gram)

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 2660,077 4 665,019 18,501 ,000

Within Groups 2336,458 65 35,946

Total 4996,534 69

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: Jumlah pakan(Gram)

(I)

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower

Bound Upper Bound

Tukey HSD kontrol 250 mg -1,19286 2,26607 ,984 -7,5511 5,1653

(43)

98

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

(44)

99 Lampiran 16.

Hasil analisis SPSS kadar ALT dan kreatinin

Descriptives

N Mean

Std.

Deviation Std.

Error

95% Confidence Interval for

Mean

Min Max

Lower Bound Upper Bound

kadar

Tests of Normality

Perlakuan

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

kadar

kreatinin

kontrol ,267 5 ,200* ,930 5 ,593

*. This is a lower bound of the true significance.

a. Lilliefors Significance Correction

(45)

100 Lampiran 16.

(lanjutan)

NPAR TESTS

/K-W=kadar kdr BY perlakuan(1 5) /MISSING ANALYSIS.

NPar Tests

Kruskal-Wallis Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank

kadar ALT Kontrol 5 3,00

250 mg 5 8,00

500 mg 4 12,75

750 mg 3 15,67

1000 mg 2 18,50

Total 19

kadar kreatinin Kontrol 5 3,90

250 mg 5 7,10

500 mg 4 12,63

750 mg 3 15,83

1000 mg 2 18,50

Total 19

Test Statisticsa,b

kadar ALT kadar kreatinin

Chi-Square 16,989 15,930

Df 4 4

Asymp. Sig. ,002 ,003

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: Perlakuan

(46)

101

NPAR TESTS

/M-W= kadar kdr BY perlakuan(1 2) /MISSING ANALYSIS.

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Test Statisticsa

Mann-Whitney U ,000 4,500

Wilcoxon W 15,000 19,500

Z -2,611 -1,687

Asymp. Sig. (2-tailed) ,009 ,092

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] ,008b ,095b

a. Grouping Variable: Perlakuan

b. Not corrected for ties.

NPAR TESTS

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

(47)

102

Mann-Whitney U ,000 ,000

Wilcoxon W 15,000 15,000

Z -2,449 -2,470

NPAR TESTS

/K-W=kadar kdr BY perlakuan(1 4) /STATISTICS DESCRIPTIVES

/MISSING ANALYSIS.

NPar Tests

Kruskal-Wallis Test

Ranks

Test Statisticsa,b

Chi-Square 14,762 13,445

Df 3 3

Asymp. Sig. ,002 ,004

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: Perlakuan

(48)

103

NPAR TESTS

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

kadar ALT Kontrol 5 3,00 15,00

1000 mg 3 7,00 21,00

Total 8

kadar kreatinin Kontrol 5 3,00 15,00

1000 mg 3 7,00 21,00

Total 8

Mann-Whitney U ,000 ,000

Wilcoxon W 15,000 15,000

Z -2,249 -2,263