ANALISIS KOMPONEN MINYAK ATSIRI TUMBUHAN EPAZOTE

(1)

EFEKTIVITASNYA DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN JAMUR AKAR PUTIH

(Rigidoporus microporus)

SKRIPSI

KARTINATRA PURBA 130822003

PROGRAM STUDI S1 KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN 2018

(2)

EFEKTIFITASNYA DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN JAMUR AKAR PUTIH

(Rigidoporus microporus)

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Sains

KARTINATRA PURBA 130822003

PROGRAM STUDI S1 KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN 2018

(3)

ANALISIS KOMPONEN MINYAK ATSIRI TUMBUHAN EPAZOTE (Dysphania ambrosioides L.) DAN UJI EFEKTIFITASNYA DALAM

MENGHAMBAT PERTUMBUHAN JAMUR AKAR PUTIH (Rigidoporus microporus)

SKRIPSI

Saya mengakui bahwa skripsi ini adalah hasil karya saya sendiri, kecuali beberapa kutipan dan ringkasan yang masing - masing disebutkan sumbernya.

Medan, Februari 2018

KARTINATRA PURBA

130822003

(4)

PENGESAHAN SKRIPSI

Judul : Analisis Komponen Minyak Atsiri Tumbuhan Epazote (Dysphania ambrosioides L.) dan Uji Efektifitasnya dalam Menghambat Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)

Kategori : Skripsi

Nama : Kartinatra Purba

Nomor Induk Mahasiswa : 130822003

Program Studi : Sarjana(S1) Kimia

Fakultas : MIPA - Universitas Sumatera Utara

Disetujui di Medan, Februari 2018

Komisi Pembimbing Pembimbing 2

Dr. Mimpin Ginting, M.S NIP. 195510131986011001

Pembimbing 1

Dr. Cut Fatimah Zuhra, M.Si NIP. 19740405 199903 2 001

Ketua Program Studi

Dr. Cut Fatimah Zuhra, M.Si NIP. 197404051999032001

(5)

ANALISIS KOMPONEN MINYAK ATSIRI TUMBUHAN EPAZOTE (Dysphania ambrosioides L.) DAN UJI EFEKTIFITASNYA DALAM

MENGHAMBAT PERTUMBUHAN JAMUR AKAR PUTIH (Rigidoporus microporus)

ABSTRAK

Minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) diisolasi dengan metode hidrodestilasi menggunakan alat Stahl. Daun epazote yang didestilasi menghasilkan minyak atsiri sebanyak 0,25 %(b/b). Komponen minyak atsiri yang dianalisa menggunakan GC-MS terdiri dari 31 senyawa dimana diantaranya sebanyak 5 senyawa yang dapat diidentifikasi, yaitu : 1,3 difenilpropana 40,94%);

1,3 difenil1-butena (13,05%); 2-metil-1,1-difenil-1-propena (7,15%); α- terpinen (5,92%) dan 9,10-dihidro-9,10 dimetil-antracene (4,9 %). Hasil pengujian minyak atsiri epazote efektif untuk menghambat pertumbuhan jamur akar putih (Rigidoporus microporus) sebanyak 60,24 % pada konsentrasi 1000 ppm.

Kata Kunci : epazote, hidrodestilasi, jamur Rigidoporus microporus, Minyak Atsiri

(6)

ambrosioides L.) AND ITS EFFECTIVENESS TEST IN INHIBITING FUNGAL GROWTH OF Rigidoporus microporus

ABSTRACT

Essential oils of epazote (Dysphania ambrosioides L.) had been isolated with hydrodestilation methods using Stahl apparatus. Epazote’s leaves that had destilated produce 0,38 % (b/b) of essential oils. The chemical component of essential oils was determined with GC-MS shown 31 compounds, major compounds were : 1,3 diphenilpropana (40,94%); 1,3 diphenyl1-butene (13,05%); 2-methyl-1,1- diphenyl-1-propene (7,15%); α- terpinene (5,92%); 9,10-dyhidro-9,10 dimethil- antracene (4,94%). The essential oils of epazote (Dysphania ambrosioides L.) shown its effectivity in inhibited the growth of Rigidoporus microporus up to 60,24 % in added 1000 ppm of essential oil .

Keywords : epazote, Essential oils, hydrodestilation, Rigidoporus microporus

(7)

Segala puji dan syukur penulis sampaikan kepadaa Allah SWT dengan limpah karunianya penilis dapat menyelesaikan skripsi ini sebagai salah satu syarat menyelesaikan pendidikan Sarjana Sains di Departemen Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam USU.Judul dari skripsi ini adalah ―Analisis Komponen Minyak Atsiri Tumbuhan Epazote (Dysphania ambrosioides L.) Dan Uji Efektifitasnya Dalam Menghambat Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)”.

Terimakasih penulis sampaikan kepada dosen Pembimbing 1 Ibu Dr. Cut Fatimah Zuhra, MS dan dosen Pembimbing 2 Bapak Dr. Mimpin Ginting, M.S yang telah banyak membimbing dan memberi masukan yang sangat bermanfaat sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Terimakasih kepada Ibu Dr. Cut Fatimah Zuhra, MS dan Ibu Dr. Sovia Lenny, M.Si selaku Ketua dan Sekretaris Program Studi Kimia FMIPA USU, kepada Bapak Dekan dan wakil dekan, kepada seluruh staff pegawai dan dosen di Program Studi Kimia Organik FMIPA USU.

Terimakasih kepada Ayahanda R. Purba dan Ibunda N. Sitanggang dan juga kepada saudara penulis, Bang Jeffri, Kak Krisna, Bang Dani, Jennis atas doa, dukungan dan semangat yang diberikan dalam proses penelitian dan penulisan skripsi ini. Terimakasih kepada rekan – rekan di Laboratorium BBPPTP Medan, seluruh sahabat penulis atas semua dukungannya.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, karena masih banyak terdapat kekurangan baik dari segi isi maupun penyusunan kata. Oleh karena itu penulis mengharapkan saran yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat bagi semua.

Medan, Februari 2018

(8)

DAFTAR ISI

PERNYATAAN i

PENGESAHAN SKRIPSI ii

ABSTRAK iii

ABSTRACT iv

PENGHARGAAN v

DAFTAR ISI vi

DAFTAR TABEL viii

DAFTAR GAMBAR ix

DAFTAR LAMPIRAN x

DAFTAR SINGKATAN xii

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang 1

1.2 Permasalahan

1.3 Hipotesis 3

1.4 Pembatasan Masalah 3

1.5 Tujuan Penelitian 3

1.6 Manfaat Penelitian 3

1.7 Metodologi Percobaan 4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Epazote 5

2.1.1. Manfaat Epazote (Dysphania ambrosioides) 6

2.2 Jamur Akar Putih 6

2.2.1. Gejala Serangan Jamur Akar Putih 8

2.2.2. Pengendalian Jamur Akar Putih 8

2.3 Minyak Atsiri 9

2.3.1. Isolasi Minyak Atsiri dengan Destilasi 9

2.3.2. Komponen Kimia Minyak Atsri 10

2.3.3. Biosintesa Pembentukan Minyak Atsiri 10 2.4 Analisa Komponen Minyak Atsiri dengan GC-MS 13

2.4.1. Analisa Kromatografi Gas 14

2.4.2. Analisa Spektrometri Massa 16

2.5 Pestisida 17

2.5.1. Fungisida 18

BAB 3 METODE PENELITIAN

(9)

3.2.2. Bahan 21

3.3 Prosedur Penelitian 21

3.3.1. Penyediaan Sampel 21

3.3.2. Isolasi Minyak Atsiri epazote dengan alat Destilasi 21 3.3.3. Analisa Minyak Atsiri epazote dengan GC-MS 22 3.3.4. Uji Daya Hambat Minyak Atsiri epazote

terhadap Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)

3.3.4.1. Pembuatan Media (PDA+ Minyak Atsiri) 23 3.3.4.2. Inokulasi Jamur Akar Putih 24

(Rigidoporus microporus) ke Media

3.3.5. Parameter Pengamatan 24

3.3.5.1 Diameter Pertumbuhan Jamur 24 Akar Putih Rigidoporus microporus

3.3.5.2 Persentase Zona Hambatan Miselium 24 Jamur Akar Putih

3.3.5.3 Pengamatan Miselium Jamur Akar Putih 24 Rigidoporus microporus

3.4 Bagan Penelitian 25

3.4.1. Isolasi Minyak Atsiri Tumbuhan epazote

dengan alat Stahl 25

3.4.2 Analisa Minyak Atsiri dengan GC-MS 25 3.4.3 Uji Daya Hambat Minyak Atsiri Dysphania

ambrosioides terhadap Pertumbuhan Jamur

Akar Putih Rigidoporus microporus 26

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian 27

4.1.1. Penentuan Kadar Minyak Atsiri 27

4.1.2. Hasil Analisis GC-MS 27

4.1.3. Diameter Pertumbuhan Rigidoporus microporus 30 4.1.4. Zona Hambatan Diameter Pertumbuhan Rigidoporus 31

microporus

4.1.5. Pengamatan Kerusakan miselium 32 Rigidoporus microporus

4.2 Pembahasan 33

4.2.1. Minyak Atsiri dari Hasil Destilasi dengan Alat Stahl 33 4.2.2. Analisis Minyak Atsiri Dysphania ambrosioides 33 4.2.3. Uji efektifitas Minyak Atsiri epazote 40 (Dysphania ambrosioides) dalam Menghambat Pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan 42

5.2 Saran 42

(10)

DAFTAR TABEL

Nomor Tabel

Judul Halaman

4.1 Hasil Hidrodestilasi Minyak Atsiri Daun Dysphania ambrosioides

27 4.2. Senyawa Hasil Analisis GC-MS Minyak Atsiri Dysphania

ambrosioides

29 4.3.

4.4.

4.5.

Hasil Analisa GC-MS Minyak Atsiri Dysphania

ambrosioides yang dapat Diinterpretasi sebanyak 10 buah senyawa berdasarkan Standart Library Willey dan NIST (>4%)

Rataan Diameter Pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus pada pengamatan 1 HSI – 8 HSI Rataan Hambatan pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus pada pengamatan 1 HSI – 8 HSI

30

30 31

(11)

DAFTAR GAMBAR

Nomor Gambar

Judul Halaman

2.1 Foto Tumbuhan epazote 5

2.2 Tubuh Buah Rigidoporus microporus 7

2.3 Biosintesa Terpenoid 11

2.4 Perubahan Senyawa Monoterpen 12

4.1 4.2

Kromatogram Hasil Analisa GC Minyak Atsiri Dysphania ambrosioides

Spektrum Massa 1,3 difenil propana

28 34 4.3 Pola fragmentasi senyawa 1,3 difenil propana 35

4.4 Spektrum Massa 1,3 difenil1butena 36

4.5 Pola fragmentasi senyawa 1,3 difenil1butena 36 4.6 Spektrum Massa 2-metil-1,1-difenil-1-propena 37 4.7 Pola fragmentasi senyawa 2-metil-1,1-difenil-1-

propena

38

4.8 Spektrum Massa α-terpinen 39

4.9 Pola Fragmentasi Senyawa α-terpinen 39

4.10 Spektrum Massa 9,10-dihidro-9,10 dimetil antracene 40 4.11 Pola Fragmentasi Senyawa 9,10-dihidro-9,10 dimetil

antracene

41

(12)

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Lampiran

Judul Halaman

1. Rataan persentase Zona Hambatan Pertumbuhan Miselium Rigidoporus microporus 1 HSI (%)

47 2. Sidik Ragam Persentase Zona Hambatan Pertumbuhan

Miselium Rigidoporus microporus 1 HSI

47 3. Rataan persentase Zona Hambatan Pertumbuhan

Miselium Rigidoporus microporus 2 HSI (%)

53 15. Rataan persentase Zona Hambatan Pertumbuhan 54

(13)

17.

18.

19

Hasil Pengamatan Miselium Jamur Rigidoporus

microporus secara Mikroskopik pada setiap Perlakuan Hasil Identifikasi Tumbuhan

Foto – foto Penelitian

54 60 61

(14)

DAFTAR SINGKATAN

GC-MS = Gas Chromatography – Mass Spectra HSI = Hari Sesudah Inokulasi

PDA = Potato Dextrose Agar SK = Standar Keragaman DB = Derajat Bebas JK = Jumlah Kuadrat KT = Kuadrat Total

(15)

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Penyakit jamur akar putih (JAP) yang disebabkan oleh jamur Rigidoporus microporus merupakan penyakit utama pada tanaman karet yang dapat mengakibatkan kematian pada tanaman. Penyakit ini menimbulkan kerusakan pada akar tanaman. Gejala pada daun terlihat pucat kuning dan tepi atau ujung daun terlipat ke dalam kemudian daun gugur diikuti ujung ranting menjadi mati.

Adakalanya terbentuk daun muda, atau bunga dan buah lebih awal. Pada perakaran tanaman sakit tampak benang-benang jamur berwarna putih dan agak tebal (rizomorf) (Fairuzah dkk,2014).

Pengendalian yang lebih efektif saat ini untuk perkebunan besar dan perkebunan rakyat dilakukan secara kimiawi dengan menggunakan pestisida.

Sinulingga dkk (1991) menyebutkan bahwa penggunaan fungisida kimia untuk mengendalikan jamur akar putih tidak akan efektif. Banyak hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan pestisida sintetik seperti fungisida yang kurang bijaksana ternyata lebih banyak merugikan manusia dan agroekosistem, misalnya terstimulasinya pembentukan baru ras patogen, musnahnya musuh alami dan agen antagonis, serta keracunan operator fungisida sintetik membuat permasalahan menjadi kompleks.

Oleh karena itu banyak peneliti dan praktisi pertanian yang menyadari bahwa pengendalian penyakit tanaman harus dilakukan dengan cara – cara yang ramah lingkungan. Cara yang ramah lingkungan diantaranya penggunaan pestisida alami.

Penggunaan ekstrak alami sebagai fungisida alami mempunyai beberapa keuntungan, antara lain tanaman telah tersedia di alam, ramah lingkungan, dan mempunyai efek negatif rendah bagi organisme non target. Selain itu penggunaan ekstrak tanaman tidak membutuhkan biaya yang mahal, serta pengaruh negatif terhadap pertumbuhan tanaman (Sinulingga dkk, 1991).

(16)

Berbagai penelitian menggunakan pestisida nabati sebagai alternatif pengendalian terhadap serangan jamur akar putih pada tanaman karet sudah banyak dilakukan diantaranya penggunaan ekstrak daun bangun - bangun (Coleus ambonicus) yang mengandung senyawa flavonoid, glikosida dan saponin, senyawa tersebut dapat menghambat pertumbuhan jamur akar putih (Rigidoporus microporus) pada konsentrasi 5% ekstrak n-heksan dengan persentase daya hambat di atas 75%

(Dalimunthe dkk, 2016).

Penggunaan ekstrak rimpang kunyit dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus juga telah dilakukan. Senyawa pada ekstrak rimpang kunyit mempunyai aktifitas antifungi terhadap jamur patogen Rigidoporus microporus . Pemberian ekstrak rimpang kunyit dengan konsentrasi 1,5% mampu menekan pertumbuhan diameter jamur sebesar 90,19 %, serta menyebabkan kerusakan miselium Rigidoporus microporus terberat (penelitian dilakukan dengan variasi konsentrasi 0,4 % - 1,5 % (Darwis,2015).

Minyak atsiri yang diekstraksi dari daun Dysphania ambrosioides Linn diuji terhadap strain uji aflatoksigenik Aspergillus flavus Linn. Minyak benar-benar menghambat pertumbuhan miselium pada 100 ug / ml. Minyak tersebut menunjukkan spektrum fungitoksik luas terhadap Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus pada 100 ug / ml. Minyak menunjukkan keampuhan yang signifikan dalam menghambat produksi aflatoksin B1 oleh strain aflatoksigenik A. Flavus. (Kumar, 2006).

Penelitian yang dilakukan oleh Tripathi dkk (2007), menggunakan beberapa minyak atsiri sebagai fungisida nabati dalam pengendalian pasca panen buah Anggur terhadap kapang kelabu (Botrytis cinerea). Diantaranya pengendalian dengan menggunakan minyak atsiri Dysphania ambrosioides (Hambatan Pertumbuhan 100 %) dengan Konsentrasi Hambatan minimum (MIC=Minimum Inhibitory Concentration 100 ppm.

Berdasarkan uraian diatas, penulis tertarik untuk melakukan analisis komponen minyak atsiri hasil isolasi tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides l.) dan uji efektifitas minyak atsiri dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus. Isolasi minyak atsiri dilakukan dengan menggunakan metode destilasi

(17)

air (hidrodestilasi) dan dilakukan uji efektifitasnya dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus.

1.2. Permasalahan

1. Komponen senyawa kimia apakah yang terkandung dalam minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.)?

2. Bagaimanakah efektivitas minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus?

1.3. Hipotesis

Senyawa kimia yang terkandung dalam minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) efektif dalam menghambat pertumbuhan jamur akar putih (Rigidoporus microporus).

1.4. Pembatasan Masalah

1. Daun tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioide L.) diperoleh dari desa Pematang Sidamanik, Kec. Pematang Sidamanik, Kab. Simalungun.

2. Pengujian efektifitas Minyak atsiri yang diperoleh dari hasil hidrodestilasi tumbuhan Dysphania ambrosioides L.dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus dilakukan di laboratorium 1.5. Tujuan Penelitian

2. Untuk menentukan komponen senyawa kimia yang terkandung dalam minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.)

3. Untuk menentukan efektivitas minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L). dalam menghambat pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus.

1.6. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi di bidang kimia organik mengenai komponen kimia yang terdapat dalam minyak atsiri dan

(18)

potensi minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) dalam menghambat pertumbuhan jamur.

1.7. Metodologi Penelitian

Penelitian ini dilakukan secara eksperimen laboratorium dan sebagai objek penelitian adalah tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) yang diperoleh dari Desa Pematang Sidamanik, Kab. Simalungun. Tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L.) segar ditimbang, kemudian dilakukan hidrodestilasi menggunakan alat Stahl untuk mendapatkan minyak atsirinya. Perlakuan yang diuji dalam menentukan efektifitasnya untuk menghambat pertumbuhan jamur terdiri dari :

C0 = kontrol (tanpa menggunakan minyak atsiri) C50 = konsentrasi 50 ppm minyak atsiri

C100 = konsentrasi 100 ppm minyak atsiri C250 = konsentrasi 250 ppm minyak atsiri C500 = konsentrasi 500 ppm minyak atsiri C1000 = konsentrasi 1000 ppm minyak atsiri

Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan analisis sidik ragam.

Selanjutnya bila hasil analisis sidik ragam menunjukkan hasil yang nyata maka akan dilanjutkan dengan uji DMRT ( Duncan Multiple Range Test) (Sastrosupadi, 2000).

(19)

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Epazote (Dysphania ambrosioides L.)

Dysphania ambrosioides, yang dikenal sebagai teh Yesuit, teh Meksiko, payqu (paico), epazote, atau herba sancti Mariæ (Duke, J.A, dkk, 2009). Merupakan tumbuhan semusim, bentuknya mudah berubah, tegak, sering bercabang banyak, terna yang harum, asli di Amerika tropis, ada forma yang berbulu dengan kelenjar yang banyak di permukaan bawah daun, banyak tumbuh liar di pegunungan Jawa Barat pada ketinggian ± 1600 meter di atas permukaan laut. Dari biji jenis tumbuhan ini dapat disuling minyak chenopodium atau amerikaanse wormzadoolie, obat khusus untuk pengobatan cacing tambang yang merusak kesehatan masyarakat, penyakit ini selama perang dunia banyak terdapat di Indonesia

Gambar 2.1 Foto tumbuhan epazote

Adapun klasifikasi tanaman epazote adalah sebagai berikut : Kingdom : Plantae

(20)

Divisi : Spermatophyta Kelas : Dicotyledoneae Ordo : Caryophyllales Famili : Amaranthaeae Genus : Dyspania

Species : Dysphania ambrosioides L.

Nama lokal : cia-cia

Tanaman ini ditemukan di seluruh daerah tropis dan subtropis di dunia, namun kebanyakan di Amerika Selatan. Ditemukan di berbagai habitat yang terganggu, kebun, ladang yang dibudidayakan, tanah bekas tapi paling sering di atas pasir oleh sungai. Ketinggian yang disukai berkisar antara 550-1620 m. Di Kenya, ditemukan di Tsavo East National Park, di Nyeri, Limuru, Thika, Machakos dan Laikipia (Heyne,1987).

Komposisi kimia minyak esensial daun dihidrodestilasi dari Dysphania ambrosioides L. yang tumbuh liar di Yaman ditentukan oleh analisis GC-MS, dan potensi antioksidan sitotoksik dan umum dievaluasi. Senyawa utama minyak D.

ambrosioides adalah ascaridole, isoascaridole dan p-cymene (Al Kaf dkk, 2016).

2.1.1 Manfaat Epazote (Dysphania ambrosioides L)

Daun rebusan digunakan sebagai pestisida yaitu fumigan terhadap nyamuk dan lalat dan membunuh siput. Juga digunakan sebagai racun jamur dalam perlindungan biji pasca panen. Ditambah pupuk untuk menghambat larva serangga.

Minyak digunakan sebagai pelindung butiran pascapanen sebagai racun jamur. Daun bubuk dapat ditambahkan ke gandum yang disimpan sekitar 0,5% b / b untuk mengendalikan Bruchid dalam kacang atau sampai 5% b / b untuk mengendalikan hama penyimpanan jagung termasuk Sitophilus zeamais. Konsumsi bubuk daun harus dihindari karena potensi efek berbahaya dari ramuan ramuan aktif meskipun senyawa ini mudah menguap dan secara alami akan terlepas dari produk yang tersimpan. Sebagai makanan, daun digunakan sebagai bumbu dalam sup atau teh.

Biji yang direndam dan dimasak dikonsumsi secukupnya.

Dysphania ambrosioides bertindak sebagai diuretik dan anthelmintik, dan digunakan untuk mengobati luka, masalah pernapasan, proses inflamasi dan nyeri,

(21)

bronkitis, tuberkulosis, dan rematik . sebagai obat luar, telah digunakan sebagai pencuci untuk wasir, sebagai bahan untuk mendetoksifikasi gigitan ular dan racun lainnya dan dianggap memiliki sifat penyembuhan luka (Al Kaf dkk, 2016).

2.2 Jamur Akar Putih

Menurut Alexopoulus, dkk, (1996) penyakit jamur akar putih (JAP) dapat diklasifikasikan sebagai berikut:

Kingdom : Fungi

Filum : Basidiomycota Kelas : Basidiomycetes Ordo : Aphylloporales Famili : polyporaceae Genus : Rigidoporus

Spesies : Rigidoporus microporus

JAP membentuk tubuh buah berbentuk kipas tebal agak berkayu, mempunyai zona – zona pertumbuhan, sering mempunyai struktur serat yang radier, mempunyai tepi yang tipis. Warna permukaan tubuh buah dapat berubah tergantung dari umur dan kandungan airnya. Pada permukaan tubuh buah benang – benang jamur berwarna kuning jingga, tebalnya 2,8 – 4,5 µm, mempunyai banyak sekat (septum) yang tebal. Pada waktu masih muda berwarna jingga jernih sampai merah kecokelatan dengan zona gelap yang agak menonjol. Permukaan bawah berwarna jingga, tepinya berwarna kuning jernih atau putih kekuningan. Jika menjadi tua atau kering tubuh buah menjadi suram, permukaan atasnya cokelat kekuningan pucat dan permukaan bawahnya cokelat kemerahan.

Pada permukaan tubuh buah benang – benang jamur berwarna kuning jingga, tebalnya 2,8 – 4,5 µm, mempunyai banyak sekat (septum) yang tebal.

Kadang – kadang jamur akar putih membentuk tubuh buah seperti kerak yang melekat datar (resupinat) pada permukaan kulit batang atau akar (Semangun, 2008).

(22)

Gambar 2.2 Foto tubuh buah Rigidoporus microporus

2.2.1 Gejala Serangan Jamur Akar Putih

Tanaman yang terinfeksi jamur akar putih mula – mula daunnya tampak kusam, kurang mengkilat, dan melengkung ke bawah ( daun yang sehat berbentuk seperti perahu). Setelah itu daun – daun menguning dan rontok. Pada pohon dewasa gugurnya daun yang disertai dengan matinya ranting, menyebabkan pohon memiliki mahkota yang jarang. Pohon yang terinfeksi kadang – kadang membentuh buah dan bunga sebelum masanya. Akar – akar busuk, sehingga pohon mudan rebah. Jamur akar putih sering membentuk tubuh buah pada leher akar tanaman sakit, pada tunggul, pada akar sawit yang terbuka (Semangun, 2008).

Gejala serangan jamur akar putih pada tanaman karet ditandai dengan adanya perubahan warna pada daun – daun muda. Daun berwarna hijau kusam, permukaan daun lebih tebal dari yang normal, ada kalanya tanaman membentuk bunga/buah lebih awal. Jamur akar putih termasuk jamur yang bersifat parasit fakultatif artinya patogen dapat hidup sebagai saprofit kemudian parasit. Patogen ini tidak dapat bertahan hidup tanpa adanya sumber makanan, hal ini menunjukkan bahwa timbulnya jamur akar putih sangat ditentukan oleh adanya sisa – sisa tunggul dan akar di lapangan (Rahayu dkk,2006)

2.2.2 Pengendalian Jamur Akar Putih

Pengendalian penyakit dengan jamur akar putih dengan cara pencegahan meliputi pembersihan tunggul dan sisa akar sebagai sumber infeksi, peracunan dan pembakaran tunggul yang terinfeksi (Situmorang, 2004). Pengendalian jamur akar putih pada tanaman karet dilakukan dengan melaksanakan sejumlah kegiatan secara terpadu. Pengendalian dapat dibagi menjadi dua kelompok yaitu membersihkan sumber infeksi sebelum dan sesudah penanaman tanaman karet dan mencegah meluasnya penyakit. (Semangun, 2008)

Penggunaan ekstrak alami sebagai fungisida alami mempunyai beberapa keuntungan, antara lain tanaman telah tersedia di alam, ramah lingkungan, dan mempunyai efek negatif rendah bagi organisme non target. Selain itu penggunaan

(23)

ekstrak tanaman tidak membutuhkan baiaya yang mahal, serta pengaruh negatif terhadap pertumbuhan tanaman (Sinulingga dkk, 1991)

2.3 Minyak Atsiri

Minyak atsiri adalah salah satu kandungan tanaman yang sering disebut minyak terbang. Minyak atsiri dinamakan demikian karena minyak tersebut mudah menguap. Selain itu, minyak atsiri juga disebut essential oil (dari kata essence) karena minyak tersebut memberikan bau pada tanaman (Koensoemardiyah, 2010).

Minyak atsiri dapat dibagi menjadi dua kelompok. Pertama, minyak atsiri yang dengan mudah dapat dipisahkan menjadi komponen-komponen atau penyusunan murninya. Biasanya komponen utama yang terdapat dalam minyak atsiri tersebut dipisahkan atau diisolasi dengan penyulingan bertingkat atau dengan proses kimia yang sederhana. (Sastrohamidjojo, 2004).

2.3.1 Isolasi Minyak Atsiri dengan Destilasi

Destilasi merupakan metode yang paling berfungsi untuk memisahkan dua zat yang berbeda, tetapi tergantung beberapa faktor, termasuk juga perbedaan tekanan uap air (berkaitan dengan perbedaan titik didihnya) dari komponen- komponen tersebut. Destilasi melepaskan uap air pada sebuah zat yang tercampur yang kaya dengan komponen yang mudah menguap daripada zat tersebut (Pasto,1992). Dalam pengertian industri minyak atsiri dibedakan tiga tipe destilasi, yaitu:

1. Penyulingan Air

Pada metode ini, bahan tanaman yang akan disuling mengalami kontak langsung dengan air mendidih. Bahan dapat mengapung di atas air atau terendam secara sempurna, tergantung pada berat jenis dan jumlah bahan dan air mendidih (Lutony, 2002).

2. iPenyulingan Uap dan Air

Bahan tanaman yang akan diproses secara penyulingan uap dan air ditempatkan dalam suatu tempat yang bagian bawah dan tengah berlubang-lubang yang akan

(24)

ditopang di atas. Bahan tanaman yang akan disuling hanya terkena uap dan tidak terkena air yang mendidih (Sastrohamidjojo, 2004).

3. Penyulingan Uap

Penyulingan uap disebut juga penyulingan tak langsung. Didalam proses penyulingan dengan uap ini, uap dialirkan melalui pipa uap berlingkar yang berpori dan berada di bawah bahan tanaman yang akan disuling. Kemudian uap akan bergerak menuju ke bagian atas melalui bahan yang disimpan di atas saringan (Lutony, 1994).

2.3.2 Komponen Kimia Minyak Atsiri

Minyak atsiri biasanya terdiri dari berbagai campuran persenyawaan kimia yang terbentuk dari unsur karbon (C), Hidrogen (H), dan oksigen (O). pada umumnya komponen kimia minyak atsiri dibagi menjadi dua golongan, yaitu:

1. Hidrokarbon yang terutama terdiri dari persenyawaan terpen

Persenyawaan yang termasuk golongan ini terbentuk dari unsur karbon (C), dan hidrogen (H). Jenis Hidrokarbon yang terdapat dalam minyak atsiri sebagian besar terdiri dari monoterpen (2 unit isopren), dan politerpen.

2. Hidrokarbon teroksigenasi

Komponen kimia dari golongan ini terbentuk dari unsur karbon (C), Hidrogen (H), dan oksigen (O). persenyawaan yang tewrmasuk dari golongan ini adalah persenyawaan alkohol, aldehid, ester, fenol. Ikatan karbon yang terdapat dalam molekulnya dapat terdiri dari ikatan tunggal, dan ikatan rangkap dua dan ikatan rangkap tiga.

Terpen mengandung ikatan tunggal dan ikatan rangkap dua. Senyawa terpen memiliki aroma kurang wangi, sukar larut dalam alkohol encer dan jika disimpan dalam waktu lama akan terbentuk resin. Golongan hidrokarbon teroksigenasi merupakan senyawa yang penting dalam minyak atsiri karena umumnya aroma yang lebih wangi. Fraksi terpen perlu dipisahkan untuk tujuan tertentu, misalnya untuk pembuatan parfum, sehingga didapatkan minyak atsiri yang bebas terpen (Ketaren, 1985).

2.3.3. Biosintesa Pembentukan Minyak Atsiri

(25)

Berdasarkan proses biosintesinya atau pembentukan komponen minyak atsiri di dalam tumbuhan, minyak atsiri dapat dibedakan menjadi dua golongan: golongan pertama adalah turunan terpena yang terbentuk dari asam asetat melalui jalur biosintesis asam mevalonat. Golongan kedua adalah senyawa aromatik yang terbentuk dari biosintesis asam siklamat melalui jalur fenil propanoid (Agusta, 2000).

Senyawa yang dihasilkan ini dengan asetil koenzim A melakukan kondensasi jenis aldol menghasilkan rantai karbon bercabang sebagaimana ditemukan pada asam mevalonat. Reaksi-reaksi berikutnya ialah fosforilasi, eliminasi asam fosfat dan dekarboksolasi menghasilkan IPP (Isopentenil Pirofosfat) yang selanjutnya berisomerisasi menjadi DMAPP (Dimetil Pirofosfat) oleh enzim isomerase. IPP sebagai unit merupakan langkah pertama dari polimerisasi isoterpen untuk menghasilkan terpenoid. Penggabungan ini terjadi karena serangan elekron diikuti oleh penyingkiran ion pirofosfat. Serangan ini menghasilkan Geranil Pirofosfat (GPP) yakni senyawa antara bagi semua senyawa monoterpen. Penggabungan selanjutnya antara satu unit IPP dan GPP, dengan mekanisme yang sama seperti antara IPP dan DMAPP menghasilkan Farnesil Pirofosfat (FPP) yang merupakan senyawa antara bagi semua senyawa seskuiterpen.

Senyawa-senyawa diterpen dari Geranil-geranil Pirofosfat (GGPP) yang berasal dari kondensasi antara satu unit IPP dan FPP dengan mekanisme yang sama.

Sintesa terpenoid sangat sederhana sifatnya. Ditinjau dari segi teori reaksi organik sintesa ini hanya menggunakan beberapa jenis reaksi dasar. Reaksi-reaksi selanjutnya dari senyawa antara GPP, FPP, GGPP untuk menghasilkan senyawa- senyawa terpenoid satu per satu hanya melibatkan beberapa jenis reaksi sekunder.

Reaksi-reaksi sekunder ini lazimnya adalah hidrolisa, siklisasi, oksidasi, reduksi, dan reaksi-reaksi spontan yang dapat berlangsung dengan mudah dalam suasana netral dan pada suhu kamar, seperti isomerisasi, dehidrasi, dekarbosilasi dan sebagainya.

Berikut ini adalah gambar biosintesa terpenoid yang dapat dilihat pada Gambar 2.3

(26)

C

H₃ C SCoA O

C

H₃ C SCoA O

+ ^H³^C ^C ^CH²

O

C SCoA O

C

H3 C SCoA O

C

H₃ C CH₂ OH

C SCoA O

C

H₂ C SCoA O

H C

H₃ C CH₂ OH

C OH O

C

H₂ CH₂ OH

C

H₃ C CH₂ OPP

C C

H₂ CH₂ OH O O

C

H₃ C CH CH₂ OPP

CH₂ H C

H₃ C CH CH₂ OPP

CH₃

C H₂

H

OPP CH₃

C

H₃ OPP

CH₃

+

C H₃

CH₃ CH₃

OPP

C H₃

CH₂

OPP H

Monoterpen

C H₃

CH₃ CH₃

OPP CH₃

C H₃

CH₂

OPP H

2x Seskuiterpen

Triterpen

C H₃

CH₃

CH₃ CH₃

OPP CH₃

Diterpen

Tetraterpen 2x

Asetil koenzim A Asetoasetil koenzim A

Asam Mevalonat

Isopentenil pirofosfat (IPP) Dimetilalil pirofosfat (DMAPP)

Geranil pirofosfat

Farnesil pirofosfat

Geranil-geranil pirofosfat

Gambar 2.3. Biosintesa Terpenoid (Achmad, 1986)

Untuk menjelaskan dapat diambil beberapa contoh monoterpen. Dari segi biogenetik, perubahan geraniol, nerol dan linalool dari yang satu menjadi yang lain

(27)

berlangsung sebagai akibat reaksi isomerisasi. Ketiga alkohol ini, yang berasal dari hidrolisa geranil pirofosfat (GPP) dapat menjalanireaksi-reaksi sekunder berikut, misalnya dehidrasi menghasilkan mirsena, oksidasi menjadi sitral dan oksidasi reduksi menghasilkan sitronelal. Berikut ini adalah contoh perubahan senyawa monoterpen, dapat dilihat pada Gambar 2.4.

CH₃

C

H₃ CH₃

CH₂OH

C

H₃ CH₃

CH₂ OH CH₃

C

H₃ CH₃

CH₂ CH₂

C

H₃ CH₃

CHO CH₃

C

H₃ CH₃

CHO CH₃

C

H₃ CH₃

CH₂OH CH₃

Geraniol (trans)

Mirsen

Linalool Sitronelal

Sitral Nerol

(cis)

- H₂O

H ,

O O

Gambar 2.4 Perubahan Senyawa Monoterpen (Achmad, 1986)

2.4. Analisa Komponen Minyak Atsiri dengan GC-MS

Minyak Atsiri yang diperoleh di analisis komponen-komponen yang dikandungnya dengan GC-MS yang mana dalam hal ini akan diperoleh spektra GC

(28)

yang merupakan total ion kromatogram atau puncak-puncak kromatogram dari komponen senyawa yang ada dalam minyak atsiri sedangkan spektra MS akan diperoleh Massa Molekul Relatif dari komponen-komponen senyawa dalam minyak atsiri serta fragmentasi ion-ionnya (Silverstein, 1981).

Pada penggunaan GC, efek penguapan dapat dihindari bahkan dihilangkan sama sekali. Perkembangan teknologi instrumentasi yang pesat akhirnya dapat menghasilkan suatu alat yang merupakan gabungan dua sistem dengan prinsip dasar yang berbeda satu sama lain tetapi saling melengkapi, yaitu gabungan antara kromatografi gas dan spektrometer massa. Kromatografi gas berfungsi sebagai alat pemisah berbagai campuran komponen dalam sampel sedangkan spektrometer massa berfungsi untuk mendeteksi masing-masing komponen yang telah dipisahkan pada kromatografi gas (Agusta, 2000).

2.4.1 Analisa Kromatografi Gas

Kromatografi gas digunakan untuk memisahkan komponen campuran kimia dalam suatu bahan berdasarkan perbedaan polaritas campuran. Fase gerak akan membawa campuran sampel menuju kolom. Campuran dalam fase gerak akan berinteraksi dengan kecepatan yang berbeda dimana interaksi komponen dengan fase diam dengan waktu yang paling akhir (Eaton, 1989). Pemisahan tercapai dengan partisi sampel antara fase gas bergerak dan fase diam berupa cairan dengan titik didih tinggi (tidak mudah menguap) yang terikat pada zat padat penunjangnya (Khopkar, 2003).

Komponen utama dalam Kromatografi Gas 1. Gas pembawa

Pemilihan gas pembawa sampai taraf tertentu bergantung pada detektor yangdipakaihantar hambang, ionisasi nyala, tangkap elektron, atau khas terhadap unsur. Nitrogen, Helium, Argon, Hidrogen, dan Karbon dioksida adalah gas yang paling sering dipakai sebagai gas pembawa karena mereka tidak reaktif serta dapat dibeli dalam keadaan murni dan kering dalam kemasan tangki bervolume besar dan bertekanan tinggi. Hal yang menentukan ialah bahwa kita harus memakai gas paling murni (Gritter, 1991).

(29)

2. Sistem Injeksi

Lubang injeksi didesain untuk memasukkan sampel secara cepat dan efisien.

Pada dasarnya, ada 4 jenis injektor pada kromatografi gas, yaitu :

a. Injeksi langsung (direct injection), yang mana sampel yang diinjeksikan akan diuapkan dalam injektor yang panas dan 100% masuk menuju kolom.

b. Injeksi terpecah (split injection), yang mana sampel yang diinjeksikan diuapkan dalam injektor yang panas dan selanjutnya dilakukan pemecahan.

c. Injeksi tanpa pemecahan (splitness injection), yang mana hampir semua sampel diuapkan dalam injektor yang panas dan dibawa ke dalam kolom karena katup pemecah ditutup.

d. Injeksi langsung ke kolom (on coloum injection), yang mana ujung semprit dimasukkan langsung ke dalam kolom.

Teknik injeksi langsung ke dalam kolom digunakan untuk senyawa-senyawa yang mudah menguap, karena kalau penyuntikkannya melalui lubang suntik, dikwatirkan akan terjadi peruraian senyawa tersebut karena suhu yang tinggi (Rohman, 2009).

3. Kolom

Kolom merupakan tempat terjadinya proses pemisahaan karena didalamnya terdapat fase diam. Oleh karena itu, kolom merupakan komponen sentral pada kromatografi gas (Rohman, 2009).

4. Fase Diam

Fase diam dibedakan berdasarkan kepolarannya, yaitu nonpolar, semi polar dan polar. Berdasarkan minyak atsiri yang nonpolar sampai sedikit polar, maka untuk keperluan analisis sebaiknya digunakan kolom fase diam yang bersifat nonpolar (Agusta, 2000).

5. Suhu

Suhu merupakan salah satu faktor utama yang menentukan hasil analisis Kromatografi Gas dan Spektrometri Massa. Umumnya yang sangat menentukan adalah pengaturan suhu injektor dan kolom (Agusta, 2000).

6. Detektor

(30)

Detektor yang digunakan pada sistem GC-MS harus stabil dan tidak merusak senyawa yang dideteksi. Pada systemGC-MS ini, yang berfungsi sebagai detektor adalah spektrometer massa itu sendiri yang terdiri atas sistem ionisasi dan sistem analisis (Agusta, 2000).

2.4.2 Analisis Spektrometri Massa

Spektrometer massa adalah suatu alat berfungsi untuk mendeteksi masing- masing molekul komponen yang telah dipisahkan pada sistem kromatografi gas yang terdiri dari sistem analisis dan sistem ionisasi dan sistem molekul. Prinsip spektrometri massa (MS) ialah senyawa organik (sampel) ditembak dengan berkas elektron dan menghasilkan ion bermuatan positif yang mempunyai energi yang tinggi karena lepasnya elektron dari molekul yang dapat pecah menjadi ion positif yang lebih kecil (ion fragmen). Spektrum massa merupakan grafik antara limpahan relatif lawan perbandingan massa/muatan (m/z). Terpisah fragmen ion positif didasarkan pada massanya. Kejadian tersederhana adalah tercampaknya satu elektron dari molekul dalam fasa gas oleh sebuah elektron dalam berkas elektron dan membentuk suatu kation radikal (M•+

) M + e → M•+

+ 2e

Satu proses yang disebabkan oleh tabrakan elektron pada kamar pengion spektrometer massa adalah ionisasi dari molekul yang berupa uap dengan kehilangan satu elektron dan terbentuk ion molekul bermuatan positif, karena molekul senyawa organik mempunyai elektron berjumlah genap maka proses pelepasan satu elektron menghasilkan ion radikal yang mengandung satu elektron tidak berpasangan.

M M•+

Proses lain molekul yang berupa uap tersebut menangkap sebuah elektron membentuk ion radikal bermuatan negatif dengan kemudian terjadi jauh lebih kecil (10^-2) dari pada ion radikal bermuatan positif (Sudjadi, 1983).

Informasi yang diperoleh dari kedua teknik ini yang digabung dalam intrument GC- MS adalah hasil dari masing-masing spektra. Untuk spektra GC, informasi terpenting yang didapat adalah waktu retensi untuk tiap-tiap senyawa dalam sampel. Sedangkan

-1e

(31)

untuk spektra MS bias diperoleh informasi mengenai massa molekul relatif dari sampel tersebut (Skoog, 1991).

(32)

2.5 Pestisida

Secara umum dampak negatif dari pemakaian pestisida sintetis, sebagai berikut : 1. Pencemaran air dan tanah yang akhirnya akan kembali lagi kepada manusia

dan makhluk hidup lainnya dalam bentuk makanan dan minuman yang tercemar

2. Matinya musuh alami dari organisme pengganggu tanman 3. Kemungkinan terjadinya serangan hama sekunder

4. Kematian organisme yang menguntungkan, seperti lebah yang sangat berperan dalam penyerbukan bunga

5. Timbulnya kekebalan OPT terhadap pestisida sintetis

Kelemahan pestisida sintetis seperti yang dikemukakan di atas membuat para ilmuwan khawatir pestisida sintetis tidak lagi mampu menanggulangi masalah hama dan penyakit tanaman, tetapi justru mendatangkan malapetaka bagi umat manusia.

Karena itu, berbagai penelitian, dari yang sederhana hingga yang rumit seperti rekayasa genetika mulai dikembangkan untuk mencari sumber – sumber yang lebih aman untuk manusia dan lingkungan. Sumber – sumber tersebut tersedia di alam dalam jumlah yang sangat besar. Pestisida alami yang berasal dari bahan – bahan yang terdapat di alam tersebut diekstraksi, diproses, atau dibuat menjadi konsentrat dengan tidak mengubah struktur kimianya. Berbeda dengan pestisida sintetis yang umumnya bersumber dari bahan dasar minyak bumi yang diubah struktur kimianya untuk memperoleh sifat – sifat tertentu sesuai dengan keinginan.

Pestisida alami yang kini dikenal dapat dikelompokkan menjadi 3 golongan, sebagai berikut :

1. Pestisida botani (botanical pesticides) yang berasal dari ekstrak tanaman.

Seperti diketahui, berbagai jenis tanaman memproduksi senyawa kimia untuk melindungi dirinya dari serangan OPT. Senyawa inilah yang kemudian diambil dan dipakai untuk melindungi tanaman lain.

2. Pestisida biologis (biological pesticide) yang mengandung mikroorganisme pengganggu OPT, seperti bakteri patogenik, virus dan jamur.

Mikroorganisme ini secara alami memang merupakan musuh OPT, yang kemudian dikembangbiakkan untuk keperluan perlindungan tanaman. Proses manufacture dari organisme ini telah memungkinkan petani memakainya

(33)

Pestisida berbahan dasar mineral anorganik yang terdapat pada kulit bumi.

Biasanya bahan mineral ini berbentuk kristal, tidak mudah menguap, dan bersifat stabil secara kimia, seperti belerang dan kapur. Minyak bumi atau minyak nabati dan sabun pun dapat dipakai untuk mengendalikan OPT. Pada pertanian organik, minyak dan sabun sangat lazim dipakai (Novizan,2002) Macam – macam pestisida diantaranya:

- Fungisida = Pengendali cendawan

- Insektisida = pengendali insecta/serangga dewasa - Herbisida = pengendali gulma

- Nematisida = pengendali nematoda

- Akarisida = pengendali pengendali tungau

- Ovasida = pengendali telur serangga dan telur tungau - Bakterisida = pengendali bakteri

- Larvasida = pengendali larva - Rodentisida = pengendali tikus - Avisida = pengendali burung

- Mollussida = pengendali bekicot (Djafaruddin, 2008)

2.5.1. Fungisida

Fungisida (fungicide), berasal dari kata bahasa Yunani : ―fungus‖ = cendawan, dan ―caedo‖ = membunuh. Fungisida dlam arti yang luas didefenisikan sebagai suatu senyawa yang dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan, tepatnya mengendalikan cendawan/fungi. Senyawa – senyawa yang menghambat pertumbuhan tanpa membunuh tersebut lebih tepat dikatakan ―fungistatik‖. Ada beberapa tipe fungisida, diantaranya:

- Proteksi (protective), yaitu tipe yang memberikan perlindungan terhadap infeksi pada tempat dimana ia dipakai, atau dapat juga bereaksi, dimana infeksi belum terjadi (protectant)

- Eradikasi (eradicant), yaitu tipe yang mengobati atau menyembuhkan infeksi, yang telah terjadi serta memusnahkan patogen pada tempat dimana ia dipakai

(34)

- Sistemik (sistemic), yaitu tipe yang dapat mencegah perkembangan penyakit di tempat – tempat atau bagian – bagian di sleuruh tubuh tanaman yang berasal dari mana atau pada tempat di mana ia dipakai.

Sifat – sifat fungisida, yaitu :

- Fungisidal, berarti fungisida itu membunuh cendawan (fungi)

- Fungistatik, berarti tidak membunuh cendawan tersebut, tetapi hanya menghambat pertumbuhannya atau memperlambat pertumbuhannya

- Genestatik berarti mencegah sporulasi atau pembentukan spora dari cendawan tersebut. Oleh karena itu fungisida yang genestatik dapat pula disebut ―eradicant‖.

Sebaiknya atau yang ideal, fungisida mempunyai sifat – sifat sebagai berikut : - Dapat meracun patogen (toksid yang tinggi)

- Tidak merusak tanaman (fitotoksid)

- Tidak meracun manusia (tidak toksid pada manusia) - Tidak meracun ternak (tidak toksid pada ternak) - Murah dan mudah didapat

- Tidak mudah terbakar - Tahan disimpan lama - Tidak merusak alat – alat

- Mudah dibuat dan mudah pemakaiannya - Dapat merata dan melekat kuat

- Dapat aktif dalam waktu yang lama setelah dipakai

Tetapi boleh dikatakan belum ada fungisida yang ideal, yang memenuhi semua syarat – syarat tersebut diatas. Fungisida yang sudah umum dipakai hanya mempunyai sebagian dari syarat – syarat dan sifat sifat baik tersebut (Djafaruddin, 2008).

(35)

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Proses penelitian ini dilakukan dari bulan Mei sampai Oktober 2017.

Penyulingan minyak atsiri tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L) dilakukan di Laboratorium Kimia Organik FMIPA USU Medan, untuk uji analisa spektroskopi GC-MS dilakukan di Laboratorium Kimia Organik FMIPA UGM, dan untuk uji efektifitas terhadap jamur akar putih (Rigidoporus microporus) dilakukan di Laboratorium Lapangan Agensia Pengendali Hayati Balai Besar perbenihan dan Proteksi Tanaman Perkebunan (BBPPTP) Medan.

3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat

 Alat Stahl

 Beaker glass 100 ml Pyrex

 Botol aquadest

 Botol vial

 Corong pisah Pyrex

 Gelas Erlenmeyer 250 ml Pyrex

 GC-MS Shimadzu

 Kain kasa

 Kertas label

 Labu ukur 50 ml Pyrex

 Labu destilasi 1000 ml Pyrex

 Lemari pendingin Toshiba

 Neraca analitis Mettler AE 2000

 Pipet tetes

 Pompa air

 Sarung tangan

(36)

 Selang

 Spatula

 Statif dan klem

 Teflon

 Cawan petri diameter = 9 cm

 Inkubator

 Plastik wrap

 Bor gabus diameter = 0.8 cm

 Mikroskop

 Jarum inokulasi

 Autoklaf

3.2.2 Bahan

 Aquadest

 PDA (Potato Dextrose Agar)

 etanol

 Dietil eter p.a Merck

 Na₂S0₄ anhidrous p.a Merck

 Tumbuhan epazote (Dysphania ambrosioides L)

 Tween 80 p.aMerck

3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1. Penyediaan Sampel

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah

 Daun tumbuhan epazote yang diperoleh dari desa Pematang Sidamanik, Kec. Pematang Sidamanik, Kab. Simalungun

 Isolat jamur akar putih Rigidophorus microporus koleksi Balai Penelitian Karet, Sungai Putih

3.3.2. Isolasi Minyak Atsiri Epazote. Dengan Alat Destilasi Stahl

(37)

Sebanyak 150 gram daun tumbuhan epazote dimasukkan kedalam labu alas bulat volume 1000 mL ditambahkan air sampai sampel terendam, dipasang pada alat penyuling Stahl, dan dididihkan selama ± 5-6 jam hingga minyak atsiri menguap sempurna. Destilat yang diperoleh merupakan campuran minyak dengan air.

Kemudian lapisan minyak dimasukkan kedalam beaker glass, ditambahkan dietil eter, ditambahkan Na₂SO₄ anhidrous pada botol vial untuk mengikat air yang mungkin masih tercampur, disaring,kemudian filtratnya di uapkan dan minyak atsiri yang diperoleh dimasukkan ke dalan botol vial,disimpan ditempat sejuk dan ditutup rapat. Minyak atsiri yang diperoleh dianalisis kandungan kimianya menggunakan alat GC-MS dan dilanjutkan pengujian daya hambat terhadap jamur akar putih (Rigidoporus miroporus)(Shara, 2012).

3.3.3. Analisa Minyak Atsiri Dysphania ambrosioides L. Dengan GC-MS Cuplikan dimasukkan kedalam gerbang suntik pada sebuah alat GC-MS.

Selanjutnya kondisi disesuaikan dengan kondisi dibawah ini kemudian diamati kromatogram yang dihasilkan oleh recorder serta mass spektra masing-masing senyawa.Kondisi alat GC-MS, yaitu:

GC-MS-QP2010S SHIMADZU

Kolom : Rtx sil-5

Panjang kolom : 30 meter

Gas Pembawa : Helium

Pengion : EI 70 Ev

GC-2010

Column Oven Temperature : 60.0 ^oC Injection Temperature : 250^oC

Injection Mode : Split

Flow Control Mode : Pressure

Pressure : 40.0 kPa

Total Flow : 31.3 mL/min

Column Flow : 0.76 mL/min

Linear Velocity : 31.9 cm/sec

Purge Flow : 3.0 mL/min

(38)

Split Ratio : 36.0

Equlibrium Time : 1.0 min

GC Program GCMS-QP2010

Ion Source Temperature : 250.00 ^oC Interface Temperature : 250.00 ^oC

Solvent Cut Time : 3.60 min

Detector Gain Mode : Relative

Detector Gain : +0.00 kV

MS

Start Time : 3.80 min

End Time : 70.00 min

ACQ Mode : Scan

Even Time : 0.50 sec

Scan Speed : 1250

Start m/z : 29.00

End m/z : 600.00

3.3.4. Uji Daya Hambat Minyak Atsiri Tumbuhan Epazote (Dysphania Ambrosioides) Terhadap Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)

3.3.4.1. Pembuatan Media (PDA + Minyak Atsiri)

Disiapkan media PDA pada labu ukur 100 ml. Selanjutnya media dicairkan dengan menggunakan water bath. Pada saat PDA masih cair (45^oC) variasi konsentrasi minyak atsiri dibuat dengan melarutkan sejumlah minyak atsiri yang diperlukan ( 5 µl ; 10 µl ; 25 µl; 50 µl; 100 µl) dalam 5 ml 0.1 % tween 80 dan kemudian mencampurkan dengan 95 ml media PDA. Dihomogenkan dengan menggunakan shaker. Konsentrasi minyak atsiri yang diperoleh yaitu 50 ppm; 100 ppm; 250 ppm; 500 ppm; dan 1000 ppm. Kemudian masing masing dituang ke cawan petri dan diinkubasikan selama 24 jam untuk mengetahui ada tidaknya kontaminasi. Dilakukan hal yang sama untuk kontrol kecuali penambahan minyak atsiri. (Tripathi P., dkk, 2007).

(39)

3.3.4.2 Inokulasi Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus) ke Media

Biakan murni dari patogen Rigidoporus microporus berumur 7 hari dipotong dengan alat bor gabus kemudian diambil dengan jarum inokulasi dan ditumbuhkan dalam cawan petri yang berisi PDA sesuai dengan perlakuan. Bagian yang diambil adalah dari tepi koloni yang diletakkan tepat ditengah – tengah cawan petri. Lalu cawan petri diinkubasikan dalam kotak inkubator pada suhu ruangan (Darwis, 2015).

3.3.5 Parameter Pengamatan

3.3.5.1 Diameter Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus) Pengukuran diameter pertumbuhan patogen dilakukan pada umur biakan 1 HSI (Hari Sesudah Inokulasi) sampai dengan perlakuan kontrol memenuhi cawan petri. Pengukuran dilakukan setiap 24 jam. Pengukuran dilakukan dengan alat penggaris dengan satuan millimeter yaitu dengan mengukur koloni pertumbuhan patogen (Darwis, 2015).

3.3.5.2 Persentase Zona Hambatan Miselium Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)

Perhitungan persentase zona hambatan misellium Rigidoporus microporus menggunakan rumus Pandey et al., dalam Darwis 2015., sebagai berikut :

Keterangan :

ZH = Zona Hambatan Akar Putih (Rigidoporus microporus) (%)

a = Diameter miselium Akar Putih (Rigidoporus microporus) pada kontrol (cm)

b = Diameter miselium Akar Putih (Rigidoporus microporus) pada perlakuan (cm)

3.3.5.3 Pengamatan Miselium Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus) Pengamatan miselium jamur secara mikroskopis dengan menggunakan mikroskop. Pengamatan dilakukan pada hari terakhir pengamatan, yaitu dengan

(40)

dimasukkan kedalam labu alas bulat 1 Liter ditambahkan aquadest

dididihkan selama 5-6 jam hingga keluar uap air bersama minyak

Destilat

dimasukkan kedalam beaker glass ditambahkan dietil eter

ditambahkan Na₂SO₄anhidrous

residu filtrat

diuapkan untuk menghilangkan pelarut eter

Minyak atsiri

Analisa GC-MS Analisa uji hambatan jamur

ditimbang

disaring

dirangkai alat Stahl 150 gram daun epazote

mengamati perbedaan miselium jamur Rigidoporus microporus antara perlakuan kontrol dengan perlakuan lainnya ( Darwis, 2015).

3.4. Bagan Penelitian

3.4.1. Isolasi Minyak Atsiri tumbuhan epazote Dengan Alat

Stahl

3.4.2. Analisis Minyak Atsiri Dengan GC-MS

Cuplikan ±

diinjeksikan kedalam GC-MS diamati kromatogram yang dihasilkan Hasil

(41)

3.4.3. Uji Daya Hambat Minyak Atsiri Dysphania Ambrosioides Terhadap Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus microporus)

Media PDA cair

ditambahkan minyak atsiri Dysphania ambrosioides

ditambahkan 5 ml 0,1 % tween 80 dikocok hingga rata

dituang ke dalam petridisk dibiarkan hingga mengeras media PDA padat

diinokulasikan jamur dengan ukuran 0.8 cm pada bagian tengah

diukur zona hambat pertumbuhan miselium hasil

(42)

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian

4.1.1 Penentuan Kadar minyak Atsiri

Hasil isolasi minyak atsiri daun epazote diperoleh dengan metode hidrodestilasi menggunakan alat Stahl. Dari hasil destilasi daun epazote segar sebanyak 150 gram dengan 7 kali perlakuan diperoleh rata-rata 0,38 gram (b/b) dan rata – rata kadar minyak atsiri sebesar 0,25 % seperti pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil Hidrodestilasi Minyak Atsiri minyak atsiri daun epazote

No. Sampel

(gram)

Minyak Atsiri (gram)

Persentase (%)

1. 150 0,36 0,24

2. 150 0,36 0,24

3. 150 0,38 0,25

4. 150 0,38 0,25

5. 150 0,37 0,25

6. 150 0,39 0,26

7. 150 0,39 0,26

Rata-rata 150 0,38 0,25

4.1.2. Hasil Analisis GC-MS

(43)

Minyak atsiri yang dihasilkan secara hidrodestilasi dianalisis dengan Gas Chromatography - Mass Spectroscopy (GC-MS). Kromatogram hasil analisis GC menunjukkan terdapatnya 31 puncak senyawa (Gambar 4.1 ) yang menunjukkan adanya 31 senyawa yang terkandung dalam minyak atsiri tersebut (Tabel 4.2)

Gambar 4.1. Kromatogram Hasil Analisa GC Minyak Atsiri Epazote

(44)

Tabel 4.2. Senyawa Hasil Analisis GC-MS Minyak Atsiri Epazote No. RT

(Menit)

Massa Relatif Senyawa

Rumus

Molekul Nama Senyawa %

Area

1. 15,517 136 C10H16 α- terpinen 5,92

2. 16,038 134 C10H14 Para cymen 0,85

3. 26,135 142 C11H10 1-metil naftalen 0,45

4. 29,218 204 C₁₀H₁₈O α-guaiene 1,88

5. 29,800 222 C₁₅H₂₆ Ledol 0,75

6. 30,017 167 C₁₃H₁₂O Difenilmetan 3,53

7. 30,158 204 C15H24 Seychellene 1,31

8. 30,308 207 C₁₀H₁₃N₃O₂ 5-nitro-2-piridil Piperidine 0,51

9. 30,581 204 C₁₅H₂₄ α-patkoulen 1,32

10. 31,699 204 C15H24 Delta guaiena 3,39

11. 32,039 182 C14H14 1,1 difeniletana 2,86

12. 33,475 170 C₁₃H₂₇NO 4 asetamido-4-propiloktana 0,17

13. 33,542 182 C14H14 bibenzil 1,50

14. 33,824 182 C9H10S2 2-fenill, 1,3 ditiolene 0,43 15. 40,189 196 C15H16 1,3 difenilpropana 40,94 16. 40,475 194 C21H18N2 1-fenyl-N,N-bis(fenylmetilen)

Metandiamin 0,19

17. 41,483 194 C₁₃H₂₂O Trans-1,1,10-trimetildekalona 0,18 18. 41,649 208 C₁₆H₁₆ 9,10-dihidro-9,10 dimetil-

antracene 4,94

19. 41,833 210 C₁₆H₁₈ 1,3 difenilbutana 1,08

20.. 41,950 246 C₁₈H₃₀ 1-fenyldodekana 0,10

21. 42,135 208 C16H16 2-metil-1,1-difenyl-1-propena 7,15 22. 43,289 208 C₁₆H₁₆ 1,3 difenil1-butene 13,05 23. 44,114 208 C21H22N2O

2-(3,3-dimetil-4,4-difenyl-2- oxtanylidene)amino-2—metil Propanenitril,

0,32 24. 44,625 208 C₁₆H₁₆ 1-metil tetraline 0,33 25. 44,725 222 C17H18 1,5 difenil pentena 0,77 26. 45,967 303 C19H29NO2

Mentil N—1-fenyletil-

karbamat 0,57

(45)

27. 46,132 194 C₁₅H₁₄ 1,2,4,5-dibenzosikloheptana 3,21 28. 50,433 193 C₁₄H₁₁N 9-metilacridine 0,28 29. 50,509 207 C12H14ClN 1-metil-4,4-klorofenil 1,2,3,6-

tetrahidropiridin 1,54

30. 64,842 182 C₈H₇NO₄ 3-metil-6-nitrobenzoiacid 0,08 31. 65,650 158 C9H16Cl2 1,1-dikloro-2,2,3-trietil

siklopropane 0,36

Senyawa dari hasil interpretasi yang dapat diindentifikasi sebanyak 5 buah senyawa berdasarkan standart library Willey dan NIST (>4%) seperti pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3. Hasil Analisa GC-MS Minyak Atsiri epazote yang dapat Diinterpretasi

No. RT (Menit)

Massa Relatif Senyawa

Rumus

Molekul Nama Senyawa %

Area 1. 40,189 196 C15H16 1,3 difenilpropana 40,94 2. 43,289 208 C16H16 1,3 difenil1butena 13,05 3. 42,135 208 C₁₆H₁₆ 2-metill-1,1-difenil-1-

propena 7,15

4. 15,517 136 C₁₀H₁₆ α- terpinen 5,92

5. 41,649 208 C16H16

9,10-dihidro-9,10

dimetil-antracene 4,94

4.1.3. Diameter Pertumbuhan Jamur Akar Putih (Rigidoporus Microporus) Diameter pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus diukur setiap hari mulai dari 1 HSI sampai dengan 8 HSI. Dari 3 ulangan setiap perlakuan (kontrol;

50 ppm; 100 ppm; 250 ppm; 500 ppm; dan 1000 ppm), maka diperoleh rataan diameter pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus yang disajikan pada tabel 4.4. berikut:

Tabel 4.4. Rataan diameter Pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus pada pengamatan 1 HSI – 8 HSI

Perlakuan Pengamatan (cm)

1 HSI 2HSI 3HSI 4 HSI 5 HSI 6 HSI 7 HSI 8 HSI

(46)

KONTROL 1,87 2,93 3,80 5,10 5,80 6,77 7,97 8,73 50 ppm 1,77 2,70 3,73 4,75 5,25 6,20 7,30 8,10 100 ppm 1,77 2,67 3,43 4,60 5,45 6,33 7,17 8,07 250 ppm 1,70 2,50 3,33 4,50 5,30 6,27 6,80 7,50 500 ppm 1,40 2,17 3,17 3,60 4,30 5,13 6,00 6,73 1000 ppm 0,80 1,17 1,60 2,10 2,90 3,67 4,90 5,37 Keterangan: HSI = Hari Sesudah Inokulasi

Berdasarkan Tabel 4.4. di atas dapat diketahui bahwa diameter pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus tercepat pada pengamatan 1 HSI – 8 HSI yaitu pada kontrol dan diameter pertumbuhan terlama pada konsentrasi 1000 ppm. Semakin tinggi konsentrasi minyak atsiri yang diberikan maka diameter pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus semakin kecil. Hal ini terlihat nyata pada konsentrasi 500 ppm dan 1000 ppm.

4.1.4. Zona Hambatan Diameter Pertumbuhan Rigidoporus Microporus

Hasil analisis sidik ragam dan uji jarak Duncan (DMRT) pada taraf 5 % dan 1

% menunjukkan bahwa pemberian minyak atsiri berpengaruh nyata terhadap persentase zona hambatan pertumbuhan miselium Rigidoporus microporus pada pengamatan 1 HSI sampai 8 HSI (HSI = Hari Sesudah Inokulasi). Rataan persentase zona hambatan pertumbuhan miselium Rigidoporus microporus terhadap pemberian minyak atsiri dapat dilihat pada tabel 4.5.

Tabel 4.5. Rataan Hambatan Pertumbuhan jamur Rigidoporus microporus pada pengamatan 1 HSI – 8 HSI

Perlakuan Pengamatan (%)

1 HSI 2HSI 3HSI 4 HSI 5 HSI 6 HSI 7 HSI 8 HSI KONTROL 0,00A 0,00A 0,00A 0,00A 0,00A 0,00A 0,00A 0,00A 50 ppm 5,26AB 7,86B 1,73A 7,12AB 7,09A 8,36B 8,30AB 7,26B 100 ppm 5,26AB 8,97B 9,71B 7,60AB 3,80A 6,35B 10,02B 7,61B 250 ppm 8,87B 14,68B 12,07B 9,58B 8,31A 7,41B 14,63B 14,08B 500 ppm 24,95C 26,19C 16,64B 27,73C 23,89B 23,92C 24,68C 22,94C