اهی نوین رد کشاورزی و منابع طبیعی اولین همایش ملی ایده در

(1)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

The first national conference on novel ideas in agriculture and natural resources (November, 2018)

نوزگا یلکشدنچ یسررب 2

نژ MHC-DRB3 کینکت زا هدافتسا اب یندعزب رد

PCR-

RFLP

یروب یسرازه هنیکس ،*

یریصن یگیب یقتدمحم رکفنشور هلا تیاده،1

یرظن دومحم ،2 3

،ماد داژن حلاصا و کیتنژ یوجشناد1

یماد مولع هورگ ناتسزوخ یعیبط عبانمو یزرواشک هاگشناد ،ییاذغ عیانصو ماد مولع هدکشناد ،

داتسا1

هورگ مولع

،یماد هدکشناد مولع ماد عیانصو

،ییاذغ هاگشناد یزرواشک عبانمو یعیبط ناتسزوخ

2 داتسا هورگ مولع

سا3

رایدات هورگ مولع

لووسم هدنسیون *

؛

[email protected]

هدیکچ نوزگا هیحان یلکشدنچ ییاسانش یارب رضاح هعلاطم رد 2

نژ داژن یاهزب تیعمج رد )یتفاب یراگزاس یلصا عمتجم(MHC

دادعت زا ،رهشوب ناتسا یندع 97

تفرگ ماجنا یریگنوخ زب سار .

یا هعطق و دیدرگ جارختسا نوخ یاه هنومن زا یمونژDNA

هزادنا هب 279 نوزگا هیحان زا زاب تفج 2

MHC نژ تلاوصحم و هدش ریثکت زارم یلپ یا هریجنز شنکاو زا هدافتسا اب PCR

ب هدمآ تسدب ه

ی هلیسو یشرب میزنآ Ras I

زراگآ لژ یور رب و دندش مضه 2

.دندیدرگ زروفورتکلا دصرد تلاوصحم مضه جیاتن

میزنآ ابPCR Ras I لماش 6 للآ عون

، A ،B ،C ،D وE تیعمج لک رد اه نآ یناوارف هک دوب هاگیاج نیا ردF 500

/ 0 ،

093 / 0 ، 211 / 0 ، 046 / 0 ، 129 / 0 و 021 / 0 دادعت و دش هبساحم 9

یپیتونژ بیکرت ،AA

،AB ،BB ،AC ،AD ،DD ،AE

وEE آ هدش هبساحم یپیتونژ یناوارف هک دندش ییاسانشAF ربارب تیعمج رد بیترت هب اه ن

432 / 14 ، 06 / 2 ، 247 / 8 ، 268 / 42 ،

154 / 5 ، 06 / 2 ، 525 / 17 ، 123 / 4 و 123 / 4 رثوم للآ دادعت .دمآ تسد هب ،

،نوناش صخاش نا دروم یتیسوگیزورته

هدهاشم و راظت

هدش بیترت هب هاگیاج نیا یارب 101

/ 3

، 382 / 1

، 678 / 0 و 711 / 0 .دیدرگ هبساحم عمج

ی ت نژ ظاحل زا MHC-DRB3

رد

لداعت دراه ی - و ی گربن رارق ادن ر د راد ینعم و (P<0.001) تسا

. هک دومن یریگ هجیتن ناوت یم هدمآ تسدب جیاتن ساسا رب

لماوع ریثات تحت هعلاطم دروم سوکول یاه پیتونژ .تسا هدوب ترجاهم و شهج ،باختنا دننام هدنهد رییغت

:یدیلک ناگژاو ،یندع زب ،یلکشدنچ ،یتفاب یراگزاس یلصا عمتجم

PCR-RFLP

همدقم ا روشک ی نار لد هب ی ل اوه و بآ عونت نتشاد یی

ن و ی ز ز تعسو ی دا اراد ی داژن عونت ی بوخ ی ( تسا زب زا 4

اقم رد .) ی هس د اب ی رگ

لها ناگدننکراوخشن ی

، ارش هب نونکات ی

ط رادهگن ی موب زب داژن حلاصا و ی

( تسا هدشن هجوت 1

.) رتمهم هلمج زا ی

ن داصتقا تافص ی

رد

ندع زب ی راگزاس تردق ی

ارش هب لااب ی

ط حم دعاسمان ی

ط ی

، ن ،کاروخ فرصم هدزاب ی

زا اج هب مک ی هاگ هجت و ی

،تاز از ی ش ره 8 هام ی

،رابک

م نودب ی ناز ازولقود یی اهروشک رد بسانم شورف رازاب و ی

شاح ی ه لخ ی ج ازم زا سراف یا

ی ندع زب شرورپ ی

( تسا 2 ندع زب .) ی رد هک

لحم حلاطصا ی

ع نآ هب ی نو ی ع و ی نا ی م هتفگ مه ی

،دوش ی ک ی اهداژن زا ی ا بونج رد مهم زب ی

نار ا .تسا ی ن حان رد داژن ی

ه لحاس ی خ ل ی ج

م هداد شرورپ رهشوب ناتسا رد سراف ی

.دوش اه نژ ی لصا سکلپمک ی

راگزاس ی تفاب (MHC)ی اه خساپ اب طابترا هطساو هب

ی ا ی نم ی

و تمواقم و یا

ساسح ی ت ب هب ی رام ی مها اه ی ت و ی هژ ا ی کشزپماد رد ی

رورپماد و ی دنراد ( 5 .) نژ ناکم عقاوردMHC

ی تنآ هدننک دک ی

ئتورپ و اه نژ ی

ن اه ی حطس ی سوفنل ی ت اه یی اه شنکاو رد هک تسا ی

عافد ی اسانش و ندب یی

ئتورپ ی ن اه ی جراخ ی .دنراد تلاخد

ا دوجو ی ن نژ ناکم ی شقن هب هجوت اب ی

اه لوکلوم هک ی

اسانش رد نآ یی

تنآ ی اه نژ ی دوخ ی ب عاونا زا ی هناگ ا ی اف م ی دننک ی ک ن ی زا

ساسا ی ارب ی اقب ی ( تسا هدنز دوجوم 12

نونکات .) 3

هدمع سلاک اه لوکلوم هک تسا هدش صخشم نارادناتسپ ردMHC

MHCی

سلاک ی ک تپپ هب لاصتا رد ،ود و ی

اهد ی ا ی نژونوم سوفنل هب اهنآ هضرع و ی

Tت .دنراد تلاخد ادورته تروصب ،ود سلاکMHC

ی رم افلآ

(2)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

The first national conference on novel ideas in agriculture and natural recourses (November, 2018)

1251

رتسگ روط هب و هدوب اتب اه لولس رد هد

ی ا هفرح هدننک هضرع ی

تنآ ی ب نژ ی نا م ی ( دوش 9 لصا سکلپمک .) ی

راگزاس ی تفاب ی رتسلاک

گرزب ی اه نژ زا ی پ مهب ی هتسو ظنت شقن هک تسا ی

م ی س رد ار ی متس ا ی نم ی زاب ی م ی .دنک 3 نژ اه مان هبDRB

ی DRBP1 و

وDRB2 .تسا هدش شرازگDRB3

DRBP1 ی

ک و تسا بذاک نژ ردDRB2

خ حطس ی ل ی اپ یی ن ب ی نا م ی .دوش لاحرد ی هک

بیDRB3 نا

لااب یی ( تسا لکشدنچ هداعلا قوف و دراد 6

، 10 و 11 .)

شور و داوم اه

د نیا ر ،حرط زا 97 زب سار یندع یواح تکجونو یاه هلول رد یفداصت تروص هب رهشوب ناتسا هقطنم نیدنچ زا یریگنوخEDTA

دیدرگ لقتنم هاگشیامزآ هب خی یور لماک نوخ یاه هنومن سپس .دش یامد رد و

20 - .دندش زیرف اب اه ماد نوخ یاه هنومنDNA

تیک زا هدافتسا DIAtom DNA prep

ارختسا یمک و تیفیک نییعت یارب .دیدرگ ج DNA

زراگآ لژ زا 1

.دش هدافتسا دصرد

نوزگا هیحان 2

MHC-DRB3 نژ وط هب

ل 279 .دیدرگ ریثکت زارمیلپ یا هریجنز شنکاو هلیسو هب یلاوت هک

دروم یاهرمیارپ

:زا دندوب ترابع هدافتسا تفر رمیارپ 5´-TCTCTGCAGCACATTTCCTGG-3´

تشگرب رمیارپ 5´-CTCGCCGCTGCACAGTGAAAC-3´

شنکاو ییاهن مجح ردPCR

25 لماش ،رتیلورکیم 5

/ 12 ،سکیم رتسم رتیلورکیم 5

/ 8 اهرمیارپ زا کیره و لیرتسا بآ رتیلورکیم

رادقم هب 1

و رتیلورکیم 2

هنومن زا رتیلورکیم ییادتبا هلحرم کی زا هدافتسا اب رظن دروم هعطق ریثکت .تفرگ ماجنا یمونژ DNA

یزاس تشرساو 95

تدم هب دارگ یتناس هجرد 4

و هقیقد 30 یزاس تشرساو( لماش لکیس 95

،هیناث

اهرگزاغآ لاصتا 62

ریثکت و هیناث 72

تدم هب هجرد 30

ییاهن ریثکت کی یامد و )هیناث 72

هجرد

تدم هب دارگ یتناس 10

.تفرگ ماجنا هریجنز شرتسگ تهج هقیقد تلاوصحم

زراگآ لژ یورPCR 2

هاگتسد زا هدافتسا اب دصرد

هاگتسد کمک هب و هدهاشم یقفا زروفورتکلا .دش ماجنا نآ زا یرادرب سکعUV

( یمیزنآ مضه شنکاو )RFLP

مجح رد یمیزنآ مضه شنکاو 15

یواح رتیلورکیم 5

/ 0 میزنآ رتیلورکیم Ras I

، 1 ،رفاب رتیلورکیم 5

لوصحم رتیلورکیم و PCR

5 / 8 یلورکیم لیرتسا بآ رت یامد رد

37 تدم هب دارگ یتناس هجرد 30

تلاوصحم مضه زا دعب و تفرگ رارق یمیزنآ مضه دروم هقیقد

زراگآ لژ زا هدافتسا اب هدش هداد شرب 2

هدهاشم و راظتنا دروم یتوگیزورته ،یپیتونژ ،یللآ یاه یناوارف .دندیدرگ زروفورتکلا دصرد

لداعت نومزآ و هدش رازفا مرن زا هدافتسا ابH.W

GenAlex .دش هبساحم

ثحب و جیاتن تیفیک .تفرگ رارق یسررب دروم اهدناب لکش هدهاشم اب و دصرد کی زراگآ لژ اب زروفورتکلا طسوت هدش جارختساDNA

ناب دوجو یاهد

ودب و پراش لاماک ن

مدع زا یکاح دناب و کهاچ نیب هلصاف رد یگدیشک دوجو مدع .دوب تیفیک نیرتهب زا یکاح یگدیشک نیرتمک

دع هدنهد ناشن یلصا دناب زا دایز هلصاف رد و لژ نییاپ رد یفاضا دناب دوجو مدع و اه هنومن رد ینیئتورپ یگدولآ یصلاخان دوجو م

هب طوبرم .دوب اه هنومن ردRNA

تلاوصحم لوط هب یا هعطق لماشPCR

279 یتفاب یراگزاس عمتجم نژ مود نوزگا زا زاب تفج

رپ طسوت هک دوب ریثکت رکذلا قوف یصاصتخا یاهرمیا

.دیدرگ ،یللآ یناوارف ،اه للآ دادعت یلوکلوم رگناشن کی تایصوصخ نیرت مهم زا

.دشاب یم رگناشن نآ یتیسوگیزورته و رثوم یاه للآ دادعت تلاوصحم یمیزنآ مضه جیاتن

لکش( PCR 1 ) عون شش دوجو زا یکاح ،

للآ

،A

،B

،C

،D وE اه للآ نیا هک دوب هاگیاج نیا ردF یپیتونژ بیکرت هن رد

،AA ،AB ،BB ،AC ،AD ،DD ،AE وEE AF

(3)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1252

اسانش یی ناوارف هک دندش ی

تونژ ی پ ی ترت هب اه نآ هدش هبساحم ی

ب عمج رد ی ت ارب رب 432 / 12 ، 06 / 2 ، 247 / 8

، 268 / 42 ، 154 / 5 ، 06 / 2 ،

525 / 17 ، 123 / 4 و 123 / 4 .دندش یدنب هتسد

تلاح دوش یم یللآ دنچ هب لیدبت و دوش یم جراخ یللآ ود تلاح زا متسیس هک ینامز

دیآ یم شیپ یزراب مه .دنیامن یم ظفح توگیزورته تلاح رد ار دوخ تفص هک ییاه للآ ینعی ،

یتیسوگیزورته ،رثوم للآ دادعت

بیترت هب هاگیاج نیا یارب هدش هدهاشم و راظتنا دروم 101

/ 3 ، 678 / 0 و 711 / 0 .دیدرگ هبساحم تیعمج نیا رد رئوکسا یاک نومزآ

هک داد ناشن یندع زب زا نژ ظاحل زا تیعمج

MHC-DRB3 د

یدراه لداعت ر -

رارق گربنیو درادن

.(P<0.001) رب

جیاتن ساسا

تسدب و شهج ،باختنا دننام هدنهد رییغت لماوع ریثات تحت هعلاطم دروم سوکول یاه پیتونژ هک دومن یریگ هجیتن ناوت یم هدمآ

.تسا هدوب ترجاهم یندع زب رد یتفاب یراگزاس یلصا عمتجم نژ مود نوزگا یارب یپیتونژ بیکرت هن و للآ شش ،هعلاطم نیا رد

للآ هک دش ییاسانش یناوارف اب A

500 / 0 پیتونژ و یناوارف ابAA

432 / 14 یاه یناوارف نیرتشیب یاراد آ

دندوب یپیتونژ و یلل .

زا

یاه هاگیاج هک ییاجنآ ( نوناش صخاش و دنشاب یم ییلااب یلکشدنچ یارادRFLP

تیعمج ره رد یکیتنژ عونت نازیم رگنایب )I

دیدرگ نوناش صخاش هبساحم هب مادقا هعلاطم نیا رد نیاربانب ،تسا اب.

یارب یبسانم رایعم تیعمج نیا رد نوناش صخاش یبایزرا

عونت دوش کیدزن رفص هب نوناش صخاش هچره .دوش یم مهارف هعلاطم دروم یاه هاگیاج یریذپ رییغت نازیم و یلکشدنچ یبایزرا صخاش هک یرگناشن زا هدافتسا و رتلااب عونت دهد ناشن یرتشیب نوناش صخاش ینژ هاگیاج کی هچره و رتمک یرتلااب نوناش

دراد

وگ عونت زا یا هجنس ناونع هب نوناش عونت صخاش .تسا بسانم عونت نییعت تهج ( دش هبساحم ریز هلداعم قبط یا هن

8 .)

H'= - Σ pi × ln pi Pi = ni/N

تیعمج ره یارب اه للآ یناوارف =Pi تیعمج رد هدش هدید یاه للآ دادعت =ni ماi

اه للآ لک دادعت =N عونت ( هدش هدهاشم یتیسوگیزورته نوچمه ییاهرایعم اب یتیعمج نورد ( راظتنادروم یتیسوگیزورته ،)Ho

یتیسوگیزورته و )He

یئن صخاش ای بیراان تفرگ رارق یسررب دروم )Nei)

دش ه ( 7 .) راظتنا دروم یتیسوگیزورته و هدش هدهاشم یتیسوگیزورته رادقم

تیعمج رد عونت نازیم هک دشاب نیا دناوت یم یلامتحا هجیتن کی ،دنتسه مه هب کیدزن رایسب ریداقم و دنرادن مهاب ینادنچ توافت مآ تسد هب ریداقم نیا و میدروآ تسدب ام هک دشاب یزیچ نآ زارتشیب تسا نکمم یسررب دروم لاثم رتشیب هنومن دادعت اب لاامتحا هد

یم مه رتشیب سار دصیس ای تسیود .دشاب یم یسررب دروم یاه هنومن رد لااب رایسب عونت رگنایب دادعا نیا ،دش

هعلاطم دروم تیعمج رد رثوم للآ دادعت 101

/ 3 دش هبساحم

، نیا رگنایب و تسا تیعمج رد یعقاو للآ دادعت هب کیدزن رادقم نیا هک

کینکت هک تسا عمج رد دوجوم عونت تسا هتسناوت یدایز دح اتRFLP

ی .دنک ییاسانش و یسررب یبوخ هب ار ت

یشهوژپ رد آ

یم ل ناراکمه و ز ( هدش مضه تاعطق لوط توافت مسیفروم یلپ نیب یکیدزن طابترا ،دنداد ناشن ،

ینیزگیاج و )RFLP

،دراد دوجو راظتنا دروم یاه تیعقوم رد هنیمآ یاهدیسا ( نژ یتنآ صیخشت هیحان یریگ لکش رد هک

لوکلوم رد ،)ARS رثومDR

( تسا 3 .)

(4)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1253

لکش 1 - یاهوگلا تلاوصحم مضه زا لصاحRFLP

نژPCR MHC-DRB3 یشرب میزنآ طسوت

یور رب هدش زروفورتکلا ،RasI

.دصرد ود زراگآ لژ

لودج 1 . نوزگا یارب اه پیتونژ یناوارف و اه للآ 2

MHC-DRB3 نژ یندع زب داژن رد

یکیتنژ ینوگانوگ شزرا

اه للآ یناوارف

یپیتونژ بیکرت یناوارف

دادعت

اه للآ دادعت A 6

500 / AA 0 432

/ 14 14

هرثوم یاه للآ دادعت 101

/ B 3

093 / AB 0 06

/ 2 2

نوناش صخاش 38

/ C 1

211 / BB 0 247

/ 8 8

هدش هدهاشم یتیسوگیزورته 711

/ D 0

046 / AC 0 268

/ 42 41

راظتنا دروم یتیسوگیزورته 678

/ E 0

129 / AD 0 154

/ 5 5

یئن صخاش 681

/ F 0

021 / DD 0 06

/ 2 2

525 AE / 17 17

123 EE / 4 4

123 AF / 4 4

نوزگا هاگیاج یور هعلاطم نیلوا قیقحت نیا 2

یندع زب رد هاگیاج نیا یکیتنژ عونت یسررب یارب یتفاب یراگزاس یلصا عمتجم نژ

هیحان هک دهد یم ناشن قیقحت نیا جیاتن .تسا سرتسد رد یناریا زب فلتخم یاه داژن اب هسیاقم یارب یمک یلیخ تاعلاطا و دوب نوزگا 2 نژ ،MHC باق یلکشدنچ یم تیعمج نیا رد هاگیاج نیا یارب ییلااب رایسب یکیتنژ عونت دوجو رگنایب و دراد یا هظحلام ل

.دشاب

عبانم

1 .یضترم ،روپ تزع. 1382

ص.لوا پاچ .ناریا یموب زب و دنفسوگ شرورپ . 125

.

2

.ملاس ،یضمرم .

2629 نژ یلکشدنچ و نایب هعلاطم . ریش دیلوت اب اهنآ طابترا و مهم یادیدناک یاه

یسانشراک همان نایاپ .ناریا یندع یاهزب رد

.سردم تیبرت هاگشناد .دشرا

3.Amills, M., O.Francino, and A. Sanchez. 1995. Nested PCR allows the characterization of TaqI and PstI RFLPs in the second exon of the caprine MHC class II DRB gene. Veterinary Immunology and Immunopathology. 48: 313-21.

(5)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1254

4. Eghbalsaied, S., Ghaedi, K., Forouzanfar, M., Hajian, M., Hosseini, S.M., Nasr-e- Esfahan, MH. 2009. Science and technology of farm animal Transgenesis. Yakhteh Medical Journal. 11(2): 78-87.

5. Lewin, H. A., Russell G. C. and Glass E. J. 1999. Comparative organization and function of the major histocompatibility complex of domesticated cattle. Immunological Reviews. 167: 145-58.

6.Miretti, M. M., Ferro, J. A., Lara M. A. and Contel E. P. B. 2001. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) in Exon 2 of the BoLADRB3 Gene in South American Cattle. Biochemical Genetics, 39: 311-324.

7. Nei, M. 1978. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals. Genetics 89: 583- 590.

8. Orians, G.H.1990. The Preservation and valuation of biological resources. Univeersity of Washington Press.

9. Tizard, I. R. 2009. Veterinary Immunology (7th ed.), Acquired immunity: Antigen-presenting receptors (pp. 67-76) Saunders, Philadelphia.

10.Van Oorschot, R. A. H., Maddox, J. F., Adams, L. J., and Fabb S. A. 1994. Characterization and evolution of ovine MHC class II DQB sequence polymorphism. Animal Genetics. 25: 417.

11. Wang, K., Sun, D. X.and Zhang Y. 2007. Identification of genetic variations of exon 2 of BoLA-DQB gene in five Chinese yellow cattle breeds. International Journal of Immunogenetics. 34: 115–118.

12. Williams, JKG., Rubelik, AR., Liva, KJ., Rafalski, JA. and Tingley, SV. 1990. DNA polymorphisms amplified byarbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acid Research. 18: 6531-6535.