اهی نوین رد کشاورزی و منابع طبیعی اولین همایش ملی ایده در

(1)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

The first national conference on novel ideas in agriculture and natural resources (November, 2018)

1287

دنچ یبایزرا نژ یلکش

DNMT3b شور زا هدافتسا اب یناتسیس واگ رد

PCR-SSCP

ودراس یدادهش داجس هلاو یافو یدهم ،1

*2

باشاد اضرملاغ ، یعوکر دمحم ،3

4

داژن حلاصا و کیتنژ دشرا یسانشراک هتخومآ شناد1

لباز هاگشناد ،یزرواشک هدکشناد ،یماد مولع هورگ ،ماد

لباز هاگشناد ،یزرواشک هدکشناد ،یماد مولع هورگ ،ماد داژن حلاصا و کیتنژ رایداتسا2

لباز هاگشناد ،یزرواشک هدکشناد ،یماد مولع هورگ ،ماد داژن حلاصا و کیتنژ رایداتسا3

رایشناد4

کیتنژ و حلاصا داژن

،ماد هورگ مولع

،یماد هدکشناد

،یزرواشک هاگشناد

لباز

*

؛لووسم هدنسیون

[email protected]

هدیکچ

تم نویسلای لولس فلتخم عاونا رد نژ نایب یاهوگلا میظنت زین و یلولس زیامت دنیآرف لرتنک رد یمهم شقنDNA

یح یاه یتا

دراد . هدمع روط هب اهدنیآرف نیا لرتنک تحت

نژ هداوناخ یاه

هلمج زا زارفسنارت لیتمDNA نژ

DNMT3b .دراد یگتسب

رد

دنچ رضاح هعلاطم نژ یلکش

DNMT3b زا .دش یسررب یناتسیس واگ رد

60 واگ سأر .دش هیهت نوخ یفداصت روط هب یناتسیس

جارختسا رگزاغآ زا هدافتسا اب .دمآ لمع هب مرفورلک لونف شور زا هدافتسا ابDNA

شگرب و تفر یصاصتخا یاه هعطق کی ،ت

207 نورتنیا رد عقاو رظن دروم نژ زا یزاب تفج 3

مرف یبایدر روظنم هب .دش ریثکت ،یللآ توافتم یاه

شور زا PCR-SSCP و

.دش هدافتسا هرقن تارتین یزیمآ گنر نژ رد رگناشن هاگیاج ،جیاتن ساسا رب

DNMT3b و داد ناشن ار یدناب یوگلا کی اهنت

هنومن رد رظن دروم هاگیاج رد شهج عوقو .دیدرگن دییأت هعلاطم دروم یاه

:یدیلک ناگژاو نژ ،یلکشدنچ

DNMT3b یناتسیس واگ ،

همدقم ددجم یزیر همانرب نویسلایتم یاهوگلا

رد ینینج نارود یط هدنز دوجوم نیوکت دنیارف لرتنک رد یدیلک یشقن

کیروطب ،دراد ره ه

هدنز تیلباق یور تدش هب هکلب ،دراد نیوکت و دشر دنیارف یور یتدم دنلب راد ینعم تارثا اهنت هن اهوگلا نیا درکلمع رد للاتخا هنوگ لکش زین و ینام یراتفر یاهوگلا زورب و یریگ

راذگ ریثأت .دنتسه

نویسلایتم نژ تیلاعف میظنت رد ییازس هب شقن DNA

یاه

یرپمیا نژ ،تن نینج نزو لرتنک زین و نیوکت دنیآرف رد یا هدننک نییعت شقن یاراد هک سنج هب هتسباو نایب یوگلا یاراد یاه

یم ( دراد ،دنشاب 8

.) هداد ناشن اتسار نیا رد

،تسا هدش نویسلایتم

میزنآ طسوت DNA یم میظنت زارفسنارت لیتم DNA

دوش

،

DNMT3b لکش لوئسم

لایتم دیدج یاهوگلا یریگ نویس

هدننک نییعت یشقنDNA یم افیا

دنک ( 2 ) و تشوگ تیفیک تافص اب و

( هشلا 5 ) یرامیب عوقو لامتحا زین و ناگدنرپ رد کرام ریظن ییاه

و لکش یپا یاهوگلا یریگ زنژوتماگ هرود رد یکیتنژ

گ ریثأت تسا راذ

( 7 ) رد ،دندرک شرازگ تاعلاطم . لوط

یپا یاهوگلا ددجم یزیر همانرب یکیتنژ

مونژ نژ ، DNMT3b لکش رد یگنر رپ روضح

یریگ

یپا دیدج یاهوگلا یکیتنژ

حاقل زا سپ نامز رد دراد

( 4 ) نژ هک یدیلک شقن ساسا رب . DNMT3b

لرتنک رد هرتسگ

زا یعیسو

ریسم یاه هب طوبرم یاهدنیآرف صاخ روطب و یکیژولویزیف

،دراد نینج نیوکت و دشر ییاسانش ،رضاح هعلاطم رد

دنچ یلکش یاه

نژ درکلمع رب راذگریثأت یداهنشیپ DNMT3b

یناتسیس واگ رد .تفرگ رارق یبایزرا دروم

شور و داوم اه

زا قیقحت نیا رد 60

زا یریگولج روظنم هب .دش ماجنا یریگنوخ لباز رهش یناتسیس واگ شرورپ هاگتسیا رد عقاو یناتسیس واگ سأر

هلول ،داقعنا یواح یاه

فتساEDTA .دش هدا س سپ هنومن اه یراذگ هرامش و

جارختسا نامز ات یامد هبDNA

20 - دارگ یتناس هجرد

(2)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1288

.دندش لقتنم جارختسا

هنومن سپس .دش ماجنا مرفورلک لونف شور طسوتDNA یاه

یامد ردDNA 20 - یرادهگن دارگ یتناس هجرد

.دندش رازفا مرن زا هدافتسا اب اهرگزاغآ Primer Premier 6

و یحارط تیاس هلیسو هب

Ncbi Blast ندش تفج لحم ندوب ناسکی زا

رگزاغآ لصاح نانیمطا اه دش

اهرمیارپ و لودج اب قباطم

1 .دندش زتنس ماگشیپ تکرش طسوت

لودج 1 اهرگزاغآ یلاوت .

هرامش نژ کناب رد تبث لوط

هعطق ( )bp اهرگزاغآ یلاوت

نژ

AC_000170.1 F: 5׳-CACAGAGGAGGTTCCAAGAGAT-3׳ 207

R:5׳-ATTCAGGTCATTATCAGGCACTG-3׳

DNMT3b

هریجنز شنکاو مجح رد زارمیلپ یا

25 لودج اب قباطم رتیلورکیم 2

.دش ماجنا

لودج 2 هریجنز شنکاو فلتخم لحارم . یا

زارمیلپ

نژ شنکاو هماگ

امد ( )°C نامز ( )S (نامز )Min

DNMT3a هیلوا یزاس تشرساو

یزاس تشرساو

38 رگزاغآ لاصتا هخرچ

شرتسگ یامد

ییاهن طسب 90

94 63 72 72 45

45 45 5

15

تلاوصحم هریجنز شنکاو

زارمیلپ یا زراگآ لژ یور

کی شنکاو تحص و زروفورتکلا دصرد یزیمآ گنر زا سپ تاعطق هزادنا زین و اه

اب مویدیتا دیامورب شهج ییاسانش .دیدرگ یزاس نایامن وگلا و اه

کینکت زا یریثکت هعطق رد ینژ یاه PCR-SSCP

یلپ لژ یور رب

دیمآ لیرکآ 10

گنر و دصرد .تفرگ ماجنا هرقن تارتین یزیمآ

،روظنم نیدب 6

لوصحم زا رتیلورکیم هریجنز شنکاو

زارمیلپ یا اب ار

رفاب دیمآ لیرکآ یلپ لژ یور رب و هدرک طولخمSSCP

6 دصرد ژاتلو رد 220 تدم هب ،تلو 4

یامد رد و میظنت تعاس 4

هجرد

،لژ زروفورتکلا نامز مامتا زا سپ .دش هداد رارق دارگ یتناس اهدناب

اب گنر یزیمآ تارتین هرقن راکشآ .دندش

ثحب و جیاتن جارختسا تملاس هدنهد ناشن دناب کت دوجو و دش ماجنا تیقفوم اب مرفورلک لونف ابDNA

لکش( دوب هدش جارختساDNA 1

.)

100 M 3 2 1

لکش 1 تیفیک .

،دصرد کی زراگآ لژ یور هدش جارختساDNA

:M رگناشن

100bp

(3)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1289

یط هعطق زارمیلپ یا هریجنز شنکاو 207

( نویسلایتم هدننک ءاقلا نژ زا یزاب تفج DNMT3b

ریوصت هب هجوت اب .دش ریثکت )

هنومن زا لصاح یاه هریجنز شنکاو

زارمیلپ یا یم زراگآ لژ یور

هنومن تفگ ناوت یگدولآ دقاف دنتفرگ رارق یسررب دروم هک ییاه

یم یم رظن دروم هعطق ریثکت اب بسانتم ییامد همانرب و دنشاب دشاب

لکش(

2 .)

100 M 4 3 2 1

لکش 2 . هنومن زا لصاح یاه نژPCR

DNMT3b ،دصرد کی لژ یور

رگناشن :M 100bp

وگلا سپس زا لصاح یدناب یاه

هنومنSSCP .دش صخشم اه وگلا

زا لصاح یاه رگنایب هک دنداد ناشن ار پیتونژ عون کی اهنتSSCP

نژ یسررب دروم هیحان رد عونت دوجو مدع DNMT3b

یم لکش( دشاب 3

.)

TT TT TT TT TT TT

لکش 3 . هنومن زا لصاح یاهدناب زا ییاه نورتنیاSSCP

3 نژ DNMT3b

تللاد تاعلاطم زا یخرب جیاتن دوجو نیا اب تشادن یناوخمه نژ کناب رد هدش هئارا جیاتن اب یسررب دروم هیحان رد عونت عوقو هچ رگا نژ فلتخم یحاون رد یلکش دنچ طابترا رب DNMT3b

هطبار نیا رد .دراد تافص زا یا هدرتسگ فیط اب یلکشدنچ طابترا تاعلاطم

نژ یاه DNMTs رد ار تشوگ تیفیک تفص اب

یراجت تیعمج کی واگ

نیچ رد یتشوگ دنداد رارق یسررب دروم

هک 9 یلپ مسیفروم

( یدیتوئلکون کت )SNP

هس و دش تفای تیعمج رد نییعت روظنم هبSNP

زیلانآ و پیتونژ یگتسباو

یلامتحا اب 16 تیفیک تفص

دندش باختنا تشوگ یلکشدنچ هک دش صخشم و

وئلکون کت یاه ،هدند تیعضو ،یبرچ نودب تشوگ گنر هلمج زا یتافص اب یدیت

اخض ،هشلا هدزاب هک تروص نیا هب ،دندوب طابترا رد ندب تشپ یبرچ تم

،دوبن طبترم تافص زا کی چیه ابSNP1 روط هبSNP2

هرمن و تشوگ گنر هرمن اب یراد ینعم ینهپ

و هدند یتشوگ واگ تیعمج رد یبرچ تماخض و هشلا دصرد رب یراد ینعم ریثأتSNP3

تشاد . هتفای نیا ساسا رب هک دندرک شرازگ اه

وSNP2 ردSNP3

DNMT3b هوقلاب شقن واگ

واگ رد تشوگ تیفیک دوبهب رد یا

یلپ یلک روط هب و دنراد یتشوگ مسیفروم

نژ یدیتوئلکون کت یاه DNMT3b

ص اب یرادانعم طابترا نژ و دنتشاد واگ تیفیک تاف

DNMT3b یم

دهد رارق ریثأت تحت ار تشوگ تیفیک شزرا اب نژ کی ناونع هب دناوت (

6 .) تاعلاطم زا یکی رد دنچ یسررب

یلکش

شور طسوت PCR-RFLP

پیتونژ نییعت یارب (

C46359T )

DNMTs یرامیب رد

ناطرس ندرگ و رس یصاصتخا یاهرگزاغآ اب

(4)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1290

دش ماجنا پیتونژ عون هس ، ،TT

،TC داد ناشنCC

، للآ پیتونژ زاT DNMT3B

رد روموت هزادنا تفرشیپ اب یهجوت لباق روط هب

تشاد طابترا رت نسم نارامیب (

3 ).

یلپ طابترا دروم رد ناریا تیعمج زا یا هعومجم ریز کی یور هک یقیقحت رد نژ مسیفروم

DNMT3b ناشن دش ماجنا گرزب هدور ناطرس و

پیتونژ هک دش هداد یاه

پیتونژ اب هسیاقم رد TT یاه

و GT رتمک رطخ GG

یم ناشن ار گرزب هدور ناطرس هب لاتبا دهد

. هعلاطم جیاتن رد توافت شهوژپ ریاس اب رضاح ی

یم ار اه توافت ای و تیعمج هزادنا هب ناوت

هاگیاج رد .داد صاصتخا ینژ یاه

یم جیاتن رد فلاتخا رگید لیلاد زا کینکت رد توافت هب ناوت

،درک هراشا هدافتسا دروم یلوکلوم یاه

کینکت رد هک تروص نیا هب شور رد هک یتروص رد ،درادن دربراک هدننک دودحم میزنآSSCP

تلاوصحمRFLP ضرعم ردPCR

یم یمیزنآ مضه هکنیا نمض .دنشاب

شور رطاخبSSCP

رد لااب تقد ت

خش صی شهج شور هب تبسن هتخانشان یاه یئاراک زا رگید یاه

یم رادروخرب ییلااب دشاب

( 9 ).

عبانم

1. Daraei, A., Salehi, R. and MohamadHashem, F. 2011. DNA-methyltransferase 3B 39179 G> T polymorphism and risk of sporadic colorectal cancer in a subset of Iranian population. Journal of Research in Medical Sciences, 16: 6.

2. Denis, H., Ndlovu, M. N. and Fuks, F. 2011. Regulation of mammalian DNA methyltransferases: a route to new mechanisms.

EMBO reports, 12(7): 647–656.

3. Farias, L. C., De Carvalho Fraga, C. A., De Oliveira, M. V. M., Silva, T. F., Marques-Silva, L., Moreira, P. R., De-Paula, M. B., Gomez, R. S. and Guimarães, L. S. 2010. Effect of age on the association between p16CDKN2A methylation and DNMT3B polymorphism in head and neck carcinoma and patient survival. International journal of oncology, 37: 167.

4. Goll, M. G. and Bestor, T. H. 2005. Eukaryotic cytosine methyltransferases. Annu Rev Biochem, 74: 481-514.

5. Guo, X., Liu, X., Xu, X., Wu, M., Zhang, X., Li, Q., Liu, W., Zhang, Y., Wang, Y. and Yu, Y. 2012. The expression levels of DNMT3a/3b and their relationship with meat quality in beef cattle. Molecular biology reports, 39: 5473-5479.

6. Liu, X., Guo, X., Xu, X., Wu, M., Zhang, X., Li, Q., Ma, P., Zhang, Y., Wang, C. and Geng, F. 2012. Novel single nucleotide polymorphisms of the bovine methyltransferase 3b gene and their association with meat quality traits in beef cattle. Genet Mol Res, 11: 2569-2577.

7. Okano, M., Bell, D. W., Haber, D. A. and Li, E. 1999. DNA methyltransferases Dnmt3a and Dnmt3b are essential for de novo methylation and mammalian development. Cell, 99: 247-257.

8. Saradalekshmi, K. R., Neetha, N. V., Sathyan, S., Nair, I. V., Nair, C. M., Banerjee, M. 2014. DNA methyl transferase (DNMT) gene polymorphisms could be a primary event in epigeneticsusceptibility to schizophrenia. PLoS ONE, 9 (5): e98182.

9. Takahashi, K., Kobayashi, T. and Kanayama, N. 2000. p57Kip2 regulates the proper development of labyrinthine and spongiotrophoblasts. Molecular human reproduction, 6(11): 1019-1025.