Pengaruh Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus dan Metabolit Sekunder Pada Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

(1)

(2)

Lampiran 2. Kegiatan Penelitian

Jenis Kegiatan Minggu ke–

1 2 3 4 5 6 7 8

Sterilisasi Alat X

Pembuatan Media X

Persiapan Ruang Kultur X

Sterilisasi Eksplan X

Penanaman Eksplan X

Pemeliharaan Kultur X X X X X X X

Subkultur X

Panen X

Penimbangan b. basah kalus (g) X

Pengeringan X

Penimbangan b. kering kalus (g) X

Ekstraksi Kalus X

Deteksi Metabolit Sekunder X

Peubah amatan

Waktu muncul Kalus (HST) X X X X X X

Persentase Terbentuk Kalus X

Warna Kalus X

Tekstur Kalus X

Bobot Basah Kalus (g) X

Bobot Kering Kalus (g) X

(3)

Lampiran 3. Bagan Penelitian

E2Z3 E3Z3 E3Z1 E1Z5 E1Z5 E2Z1

E2Z5 E3Z2 E1Z5 E1Z2 E1Z4 E2ZU

(4)

Lampiran 4. Data Pengamatan Persentase Terbentuk Kalus (%)

Perlakuan Ulangan Total Rataan

1 2 3 4 5 6

E1Z0 0 0 0 - 0 0 0 0,00

E1Z1 100 - - 100 0 100 300 75,00

E1Z2 100 0 100 - - 0 200 50,00

E1Z3 - 100 100 0 100 100 400 80,00

E1Z4 - 0 0 100 - 100 200 50,00

E1Z5 100 100 - 100 0 100 400 80,00

E1Z6 100 100 100 100 0 - 400 80,00

E2Z0 100 100 0 100 - 0 300 60,00

E2Z1 - - 100 100 100 100 400 100,00

E2Z2 - 100 100 100 - 100 400 100,00

E2Z3 - 100 100 - 100 - 300 100,00

E2Z4 100 100 100 0 100 100 500 83,33

E2Z5 - 100 100 - 100 100 400 100,00

E2Z6 100 100 100 100 100 - 500 100,00

E3Z0 0 - 0 0 - 0 0 0,00

E3Z1 - - 0 100 0 - 100 33,33

E3Z2 - 100 - - 100 100 300 100,00

E3Z3 100 - - 100 - 100 300 100,00

E3Z4 100 100 100 - 100 - 400 100,00

E3Z5 100 - 100 100 - 100 400 100,00

E3Z6 - 100 - - 100 100 300 100,00

Total 1000 1200 1100 1100 900 1200 6500

(5)

Lampiran 5. Data Transformasi Persentase Terbentuk Kalus Arcsin √

1 2 3 4 5 6

Lampiran 6. Daftar Sidik Ragam Persentase Terbentuk Kalus

(6)

Lampiran 7. Data Pengamatan Waktu Muncul Kalus (HST)

1 2 3 4 5 6

E1Z0 - - - -

E1Z1 11 - - 10 - 11 32 10,67

E1Z2 11 - 12 - - - 23 11,50

E1Z3 - 14 14 - 11 14 53 13,25

E1Z4 - - - 14 - 11 25 12,50

E1Z5 12 12 - 14 - 10 48 12,00

E1Z6 10 11 11 10 - - 42 10,50

E2Z0 9 11 - 10 - - 30 10,00

E2Z1 - - 7 6 7 5 25 6,25

E2Z2 - 6 6 7 - 8 27 6,75

E2Z3 - 6 7 - 8 - 21 7,00

E2Z4 6 7 9 - 7 7 36 7,20

E2Z5 - 6 7 - 7 7 27 6,75

E2Z6 6 7 9 7 7 - 36 7,20

E3Z0 - - - -

E3Z1 - - - 8 - - 8 8,00

E3Z2 - 7 - - 8 7 22 7,33

E3Z3 8 - - 7 - 6 21 7,00

E3Z4 9 9 9 - 9 - 36 9,00

E3Z5 9 - 9 8 - 10 36 9,00

E3Z6 - 10 - - 9 10 29 9,67

Total 91 106 100 101 73 106 577

(7)

Lampiran 8. Data Pengamatan Bobot Basah Kalus (g)

1 2 3 4 5 6

E1Z0 0 0 0 - 0 0 0 0,0000

E1Z1 0,0017 - - 0,0039 0 0,0101 0,0157 0,0039

E1Z2 0,0027 0 0,0025 - - 0 0,0052 0,0013

E1Z3 - 0,0018 0,0061 0 0,0031 0,0027 0,0137 0,0027

E1Z4 - 0 0 0,0091 - 0,001 0,0101 0,0025

E1Z5 0,003 0,0063 - 0,0038 0 0,0051 0,0182 0,0036 E1Z6 0,0016 0,0008 0,0025 0,0032 0 - 0,0081 0,0016 E2Z0 0,007 0,0576 0 0,0555 - 0 0,1201 0,0240 E2Z1 - - 0,0628 0,0679 0,0222 0,199 0,3519 0,0880 E2Z2 - 0,1644 0,0059 0,1003 - 0,0278 0,2984 0,0746

E2Z3 - 0,01 0,1018 - 0,1128 - 0,2246 0,0749

E2Z4 0,2615 0,026 0,0022 0 0,035 0,1003 0,4250 0,0708 E2Z5 - 0,013 0,131 - 0,0782 0,0199 0,2421 0,0605 E2Z6 0,0739 0,0243 0,0234 0,1192 0,2332 - 0,4740 0,0948

E3Z0 0 - 0 0 - 0 0 0,0000

E3Z1 - - 0 0,0167 0 - 0,0167 0,0056

E3Z2 - 0,0169 - - 0,0115 0,0271 0,0555 0,0185 E3Z3 0,0407 - - 0,0512 - 0,0476 0,1395 0,0465 E3Z4 0,0078 0,009 0,0073 - 0,0165 - 0,0406 0,0102 E3Z5 0,0133 - 0,0116 0,0346 - 0,0508 0,1103 0,0276 E3Z6 - 0,0174 - - 0,0123 0,0098 0,0395 0,0132 Total 0,4132 0,3475 0,3571 0,4654 0,5248 0,5012 2,6092

(8)

Lampiran 9. Data Transformasi Bobot Basah Kalus √

1 2 3 4 5 6

Lampiran 10. Daftar Sidik Ragam Bobot Basah Kalus

(9)

Lampiran 11. Data Pengamatan Bobot Kering Kalus (g)

1 2 3 4 5 6

E1Z0 0 0 0 - 0 0 0 0,0000

E1Z1 0,0001 - - 0,0008 0 0,0029 0,0038 0,0010

E1Z2 0,001 0 0,0008 - - 0 0,0018 0,0005

E1Z3 - 0,001 0,003 0 0,0027 0,0009 0,0076 0,0015

E1Z4 - 0 0 0,0031 - 0,0003 0,0034 0,0009

E1Z5 0,0012 0,0033 - 0,0027 0 0,0045 0,0117 0,0023 E1Z6 0,0012 0,0003 0,0012 0,0014 0 - 0,0041 0,0008 E2Z0 0,0016 0,0079 0 0,0056 - 0 0,0151 0,0030 E2Z1 - - 0,0093 0,0072 0,0056 0,0172 0,0393 0,0098 E2Z2 - 0,0159 0,0013 0,0126 - 0,0059 0,0357 0,0089

E2Z3 - 0,002 0,019 - 0,0211 - 0,0421 0,0140

E2Z4 0,0252 0,0113 0,0005 0 0,0039 0,0062 0,0471 0,0079 E2Z5 - 0,0056 0,0028 - 0,0006 0,0022 0,0112 0,0028 E2Z6 0,0142 0,0059 0,0047 0,0149 0,0196 - 0,0593 0,0119

E3Z0 0 - 0 0 - 0 0 0,0000

E3Z1 - - 0 0,004 0 - 0,004 0,0013

E3Z2 - 0,0027 - - 0,0064 0,0052 0,0143 0,0048 E3Z3 0,0059 - - 0,0065 - 0,0091 0,0215 0,0072 E3Z4 0,0031 0,002 0,0025 - 0,0046 - 0,0122 0,0031 E3Z5 0,0049 - 0,0021 0,0047 - 0,0058 0,0175 0,0044 E3Z6 - 0,0036 - - 0,0025 0,0001 0,0062 0,0021 Total 0,0584 0,0615 0,0472 0,0635 0,067 0,0603 0,3579

(10)

Lampiran 12. Data Transformasi Bobot Kering Kalus √

1 2 3 4 5 6

Lampiran 13. Daftar Sidik Ragam Bobot Kering Kalus

(11)

Lampiran 14. Foto Penelitian

E1Z0

E1Z1

E1Z2

E1Z3

(12)

E1Z6

E2Z0

E2Z1

E2Z2

(13)

E2Z5

E2Z6

E3Z0

E3Z1

(14)

E3Z4

E3Z5

(15)

Lampiran 15. Foto Analisis Kualitatif Metabolit Sekunder Flavonoid dan Saponin

Keterangan:

Sebelah kiri Flavonoid : merah magenta Sebelah kanan Saponin : adanya busa

E1Z1 E1Z2 E1Z3

(16)

E2Z0 E2Z1 E2Z2

(17)

E3Z1 E3Z2 E3Z3

(18)

DAFTAR PUSTAKA

Arsyad, H. 2015. Isolasi dan Skrining Aktinomisetes Dari Akar Tanaman Binahong (Anredera cordifolia) Sebagai Penghasil Antimikroba. Universitas Hasanuddin. Makassar.

Astuti, S. M. 2012. Skrining Fitokimia dan Uji Aktifitas Antibiotika Ekstrak Etanol Daun, Batang, Bunga dan Umbi Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis). Universiti Malaysia Pahang. Pahang.

Baud G. S., M. S. Sangi, dan H. S. J. Koleangan. 2014. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman Patah Tulang (Euphorbia tirucalli L.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Universitas Sam Ratulangi. Manado.

Dodds, J. H. and Roberts, L W. 1995. Experiments in Tissue Culture. Third Edition. Cambridge University Press. Cambridge.

Gangga, E., H. Asriani, dan L. Novita. 2007. Analisis Pendahuluan Metabolit Sekunder dari Kalus Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl.). J. Ilmu Kefarmasian Indonesia 1(5):17-22.

Gunawan, L. W. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Bogor: Pusat Antar Universitas Bioteknologi Tanaman Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Harborne, J.B. 2006. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Petunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif-Modern. Kanisius. Yogyakarta.

Ignacimuthu, S. 1997. Plant Biotechnology. Science Publisher, Inc. New York. Julianti, M. 2008. Binahong, Tanaman Multikhasiat. Bandung Raya: 17: 25. Khairunisa, R. 2009. Penggunaan Beberapa Jenis Sitokinin Terhadap Multiplikasi

Tunas Dan Pertumbuhan Binahong (Anredera cordifolia [Ten.] Steenis) Secara In vitro. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

(19)

Lestari, E. G. 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman melalui Kultur Jaringan. J. Biogen 7 (1):63-68.

Lubis, R. S. 2015. Isolasi Senyawa Flavonoida Dari Bunga Tumbuhan Mawar Putih (Rosa hybrida L.). Universitas Sumatera Utara, Medan.

Ma’rufah, D. 2008. Laporan Praktikum Kultur Jaringan. Universitas Sebelas

Maret. Surakarta.

Manoi, F. 2009. Binahong (Anredera cordifolia) Sebagai Obat. Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri. Vol 15 No 1 April 2009. BALITRO. Bogor.

Mardini, U. 2015. Pengaruh Kombinasi 2,4-D dan BAP Terhadap Induksi Kalus Eksplan Daun dan Batang Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Secara In vitro. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta. Rachmawati, S. 2007. Studi Makroskopi dan Skrining Fitokimia Daun Binahong

(Anredera cordifolia). Universitas Negeri Airlangga. Surabaya.

Rahmawati, Fahmi dan S. H. Bintari. 2014. Studi Aktivitas Antibakteri Sari Daun Binahong (Anredera cordifolia) Terhadap Pertumbuhan Bacillus cereus dan Salmonella enteritidis. Unnes J Life Sci 3(2).

Radji M. 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam Pengembangan Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian. 2 (3): 113-126.

Rahayu, B. Solichatun, dan E. Anggarwulan. 2003. Pengaruh Asam 2,4 Diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap Pembentukan dan Pertumbuhan Kalus serta Kandungan Flavonoid Kultur Kalus Acalypha indica L.. Biofarmasi 1(1).

Robbiani, D., T. Nurhidayati, dan N. Jadid. 2010. Pengaruh Kombinasi Naphthalene Acetic Acid (NAA) dan Kinetin Pada Kultur In vitro Eksplan Daun Tembakau (Nicotiana tabacum L. var. Prancak 95). Institut Teknologi Sepuluh Nopember. Surabaya.

Sari, Novita, E. Ratnasari, dan Isnawati. 2013. Pengaruh Penambahan Berbagai Konsentrasi 2,4-Dikhlorofenoksiasetat (2,4-D) dan 6-Bensil Aminopurin (BAP) pada Media MS terhadap Tekstur dan Warna Kalus Eksplan Batang Jati (Tectona grandis Linn. F.) JUL. LenteraBio 2(1):70.

Selawa W., M. R. J. Runtuwene, G. Citraningtyas. 2013. Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.)Steenis.). J. Ilmu Farmasi 2(1):1-6.

(20)

Sugiyarto L. dan P. C. Kuswandi. 2014. Induksi Kalus Daun Binahong (Anredera Cordifolia L.) Dalam Upaya Pengembangan Tanaman Obat Tradisional. J. Sains Dasar 3(1):56 – 60.

Sumardi, 1996. Penggunaan Arang Aktif Pada Beberapa Komposisi NAA dan BAP dalam Kultur Durian (Durio zibethinus Murr.) Secara In Vitro. Universitas Andalas. Padang.

Suseno, 2013. Kandungan binahong. http : www.jurnal.stkipgarut.ac.id. Diakses Tanggal 29 Maret 2016.

Suyitno, A. dan V. Henuhili. 2011. Induksi Kalus dan Organogenesis Tanaman Ngukilo (Gynura Procumbens (Lour.) Merr.) Dengan 2,4 D dan Kombinasi NAA - Air Kelapa Secara In vitro. Universitas Negeri Yogyakarta. Yogyakarta.

Tjitrosoepomo, G. 1999. Morfologi Tumbuhan. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

Triana, F. 2015. Induksi Kalus Pada Eksplan Daun Tanaman Binahong (Anredera Cordifolia) Secara In vitro Dengan Konsentrasi 2,4-D Dan BAP yang

Wahyudi, A. 2011. Zat Aktif Pada Binahong.Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Perkebunan. Sukabumi.

Wattimena, G. A., L. W. Gunawan, NA Mattjik, E Syamsudin, N. M. A. Wendi, dan A. Ernawati. 1992. Bioteknologi Tanaman. Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman Pusat Antar Universitas Bioteknologi Insititut Pertanian Bogor. Bogor.

Wardani, D. P, Solichatun, A. D. Setyawan. 2004. Pertumbuhan dan Produksi Saponin Kultur Kalus Talinum paniculatum Gaertn. pada Variasi Penambahan Asam 2,4 Diklorofenoksi Asetat (2,4-D) dan Kinetin. Biofarmasi 2 (1): 35-43.

Wardani, N. E. K., 2015. Pengaruh Pemberian Daun Binahong Terhadap Kualitas Luka Perineum Pada Ibu Nifas di Rumah Sakit Syarifah Ambarni Rato Ebuh Bangkalan. Salemba Medika. Jakarta.

(21)

BAHAN DAN METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan UPT, Benih Induk Hortikultura Gedung Johor, Dinas Pertanian, Sumatera Utara dan Laboratorium Bahan Alam, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara. Penelitian ini dimulai pada bulan Juli sampai dengan September 2016.

Bahan dan Alat Penelitian

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun, batang, dan tangkai daun binahong hijau yang masih muda sebagai eksplan, larutan stok media MS (Murashige and Skoog) sebagai media, 2,4 D dan BAP sebagai zat pengatur tumbuh, agar, aquadest steril, alkohol, NaOH 1 N, HCl 1 N, label, aluminium foil, detergen, air, dithane, klorox 10%, tween, kertas saring, HCl pekat, HCl 2 N, serbuk Mg, metanol 80%, dan bahan-bahan lainnya yang mendukung penelitian ini.

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), autoclave, botol kultur, cawan petri, gelas ukur, erlenmeyer, dissecting set, timbangan analitik, rak kultur, hot plate, magnetic stirer, lampu

bunsen, pH meter, oven, saringan dan alat-alat lainnya yang mendukung penelitian ini.

Metode Penelitian

Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) Faktorial, yaitu:

(22)

E1 : Daun E2 : Batang E3 : Tangkai daun Faktor 2: Zat Pengatur Tumbuh

Z0 : MS

Z1 : MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP Z2 : MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP Z3 : MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP Z4 : MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP Z5 : MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP Z6 : MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP Sehingga diperoleh kombinasi perlakuan, yaitu:

E1Z0 E2Z0 E3Z0

E1Z1 E2Z1 E3Z1

E1Z2 E2Z2 E3Z2

E1Z3 E2Z3 E3Z3

E1Z4 E2Z4 E3Z4

E1Z5 E2Z5 E3Z5

E1Z6 E2Z6 E3Z6

Diperoleh kombinasi perlakuan : 21

Jumlah ulangan : 6

(23)

Jumlah sampel seluruhnya : 126

Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan sidik ragam berdasarkan model linier sebagai berikut:

Yijk = µ + αi + βj + (αβ )ij + ijk Dimana :

Yijk : Hasil pengamatan pada ulangan ke-k yang mendapat perlakuan jenis eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j µ : Nilai tengah

αi : Efek jenis eksplan pada taraf ke-i

βj : Efek zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j

(αβ)ij : Interaksi antara jenis eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j

ijk : Galat dari perlakuan jenis eksplan pada taraf ke-i dan zat pengatur tumbuh pada taraf ke-j pada ulangan ke-k.

Jika perlakuan berbeda nyata dalam sidik ragam maka dilanjutkan dengan

(24)

PELAKSANAAN PENELITIAN Sterilisasi Alat

Semua alat-alat glassware seperti botol kultur, cawan petri, gelas ukur, erlenmeyer, dan dissecting-set yang akan digunakan untuk kultur dicuci dengan detergen dan dibilas dengan air mengalir, selanjutnya dikeringkan. Kemudian alat-alat dibungkus dan disterilkan dengan autoclave pada suhu 121oC dengan tekanan 17,5 psi selama 60 menit.

Pembuatan Media

Media yang digunakan adalah media MS padat dengan menggunakan zat pengatur tumbuh yaitu 2,4 D dan BAP. Media MS yang digunakan sebanyak 1000 ml. Media tersebut ditambahkan 30 g sukrosa dan 7 g agar, dimasak diatas hot plate, lalu diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer sebagai pengaduk sampai larutan mendidih dan bening (larut dan homogen). Keasaman diukur dengan pH meter sampai 5,6-5,8, untuk mengatur pH yaitu menaikkan atau menurunkan pH dapat digunakan larutan NaOH dan HCl.

Media MS yang telah siap dimasukkan ke dalam botol kultur yang telah disterilkan dan ditutup dengan aluminium foil. Kemudian media MS di sterilisasi dengan tekanan 17,5 psi pada suhu 121°C selama 20 menit di autoclave. Setelah proses sterilisasi selesai, media dimasukkan ke ruang kultur dan dimasukkan ke Laminar Air Flow Cabinet (LAFC). Selanjutnya disimpan dalam ruang kultur

sebelum digunakan. Persiapan Ruang Kultur

(25)

dilakukan. Semua alat yang akan digunakan harus disemprot dengan alkohol 96%. Hal ini dilakukan untuk menghindari terjadinya kontaminasi.

Sterilisasi Eksplan

Eksplan yang digunakan untuk menginduksi kalus diambil langsung dari tanaman. Eksplan yang telah diambil dari lapangan kemudian dicuci menggunakan detergen dan dibilas di bawah air bersih yang mengalir sebanyak 3 kali. Sterilisasi eksplan dilakukan dengan memberikan dithane 2 g/L sebagai fungisida yang dicampurkan dengan air selama 30 menit, kemudian dibilas dengan aquadest steril sebanyak 3 kali. Selanjutnya direndam dalam klorox 10% selama 15 menit, lalu dibilas dengan aquades steril sebanyak 3 kali. Eksplan kembali direndam dengan tween 20 selama 10 menit, dibilas lagi dengan menggunakan aquades steril sebanyak 3 kali, lalu ditiriskan dengan menggunakan kertas saring.

Penanaman Eksplan

(26)

Pemeliharaan Kultur

Botol-botol yang telah berisi eksplan diletakkan pada rak kultur sesuai dengan bagan penelitian di ruang kultur. Rak kultur disemprot dengan alkohol

96% setiap hari agar tidak terjadi kontaminasi. Suhu ruangan kultur diatur ±20-250C, dengan penyinaran lampu fluorencent (neon) dengan intensitas cahaya

2.000 lux. Subkultur

Subkultur dilakukan setelah empat minggu setelah muncul kalus, Proses perbanyakan dilakukan dengan memasukkan kalus ke dalam botol kultur pada medium baru sesuai dengan perlakuan. Kegiatan penanaman dilakukan di LAFC dan di bawah api Bunsen, kemudian diletakkan di rak kultur di bawah cahaya dan ruangan memiliki air conditioner dengan suhu yang sesuai.

Panen

Panen kalus yang telah disubkulturkan dilakukan setelah enam minggu masa inkubasi di ruang kultur.

Penimbangan bobot basah kalus (g)

Kalus yang telah dipanen diambil menggunakan spatula dan pinset dengan hati-hati, kemudian ditimbang menggunakan timbangan analitik.

Pengeringan

Kalus yang telah ditimbang bobot basahnya dikeringkan pada suhu ruang 24o C sampai bobot kering konstan (3x24 jam).

Penimbangan bobot kering kalus (g)

(27)

Ekstraksi Kalus

Masing-masing sampel dimasukkan ke dalam gelas ukur dan diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol. Gelas ukur ditutup dengan plastik dan karet dan didiamkan selama ± 4 jam. Hasil maserasi disaring dan menjadi stok ekstrak.

Deteksi Metabolit Sekunder Uji Flavonoid

Uji flavonoid dilakukan dengan mengambil ekstrak dan dimasukkan ke dalam gelas ukur. Kemudian ditambahkan 1 tetes HCl pekat dan bubuk Mg. Uji Saponin

Uji saponin dilakukan dengan mengambil ekstrak, dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan aquadest dan dikocok, ditambahkan alkohol 96% dan dikocok, dan ditambahkan 1 tetes HCl 2 N.

Peubah Amatan

Persentase Terbentuk Kalus (%)

Persentase terbentuk kalus dihitung pada akhir penelitian dengan rumus: Persentase terbentuk kalus = Jumlah kalus yang terbentuk x 100 %

Jumlah eksplan seluruhnya (per perlakuan) Waktu Muncul Kalus (HST)

Pengamatan dilakukan dengan mencatat hari saat kalus pertama kali muncul. Kalus mulai muncul ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan berjejal pada permukaan eksplan.

Warna kalus

(28)

Tekstur Kalus

Ditentukan pada akhir penelitian apakah kalus yang terbentuk kalus bertekstur kompak atau friable (remah).

Bobot Basah Kalus (g)

Diukur pada akhir penelitian dengan mengambil kalus dari botol kultur dan ditimbang sebelum dikeringkan.

Bobot Kering Kalus (g)

Diukur pada akhir penelitan dengan menimbang kalus setelah dikeringkan. Deteksi Metabolit Sekunder

Uji Flavonoid

Hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah magenta dalam waktu 3 menit.

Uji Saponin

(29)

HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil

Berdasarkan hasil analisis data yang dilakukan, diperoleh bahwa perlakuan jenis eksplan memberikan pengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus, bobot basah kalus, dan bobot kering kalus. Pada perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh memberikan pengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus.

Persentase Terbentuk Kalus (%)

Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter persentase terbentuk kalus pada perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 6) menunjukkan pengaruh yang nyata, sedangkan interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap persentase terbentuk kalus. Rataan persentase terbentuk kalus dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi media dapat dilihat pada Tabel 1. menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%. b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.

c) Perlakuan Z0: MS; Z1: MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z2: MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z3: MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; Z4: MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z5: MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; Z6: MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP.

(30)

eksplan dengan perlakuan E1 dan E3 berbeda nyata dengan perlakuan E2. Untuk perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh yang berbeda memperlihatkan persentase terbentuk kalus tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP), Z5 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 1mg/L BAP), dan Z6 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP) dengan rataan 93,33, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan rataan 20,00. Komposisi zat pengatur tumbuh Z3, Z5 dan Z6 berbeda nyata terhadap perlakuan Z0, Z1, Z2 dan Z4.

Gambar eksplan membentuk kalus pada perlakuan dapat dilihat pada gambar 5, 6, dan gambar 7

Gambar 5. Daun Gambar 6. Batang Gambar 7. Tangkai Waktu muncul Kalus (HST)

Hasil pengamatan terhadap parameter waktu muncul kalus pada perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 7). Rataan waktu muncul kalus dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi media dapat dilihat pada Tabel 2.

Tabel 2. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap rataan lama muncul kalus (hari setelah kultur / HST)

Eksplana) ZPT

Keterangan: a) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.

(31)

Warna Kalus

Warna kalus yang terbentuk dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh adalah putih kecoklatan.

Tekstur Kalus

Hasil pengamatan terhadap parameter tekstur kalus pada perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh menunjukkan bahwa tekstur kalus pada semua perlakuan bertekstur remah atau friable.

Bobot Basah Kalus (g)

Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter berat basah kalus pada perlakuan jenis eksplan (Lampiran 10) menunjukkan pengaruh yang nyata, tetapi belum memberikan pengaruh yang nyata pada komposisi zat pengatur tumbuh begitu pula dengan interaksi antara perlakuan jenis eksplan dengan komposisi zat pengatur tumbuh. Rataan bobot basah kalus dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%. b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.

(32)

pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 0,002 g. Perlakuan jenis eksplan dengan perlakuan E1, E2, dan E3 memberikan pengaruh saling berbeda nyata. Untuk perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh yang berbeda memperlihatkan bobot basah kalus tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP) dengan rataan 0,041 g, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan rataan 0,008 g.

Bobot Kering Kalus (g)

Hasil pengamatan serta sidik ragam terhadap parameter bobot kering kalus pada perlakuan jenis eksplan (Lampiran 15) menunjukkan pengaruh yang nyata, tetapi belum memberikan pengaruh yang nyata pada komposisi zat pengatur tumbuh serta pada interaksi antara perlakuan jenis eksplan dengan komposisi zat pengatur tumbuh. Rataan bobot kering kalus dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 4.

Tabel 4. Pengaruh perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh menunjukkan tidak berbeda nyata pada Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%. b) Perlakuan E1: Daun; E2: Batang; E3: Tangkai daun.

(33)

perlakuan E1, E2, dan E3 memberikan pengaruh saling berbeda nyata. Untuk perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh memperlihatkan bobot kering kalus tertinggi terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP) dengan rataan 0,008 g, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan rataan 0,001 g.

Deteksi Metabolit Sekunder Flavonoid

Hasil pengamatan terhadap parameter deteksi metabolit sekunder pada perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 15) menunjukkan flavonoid terdapat pada E2Z1 yaitu E2 (batang) dan Z1 (MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP) dan E2Z4 yaitu E2 (batang) dan Z4 (MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP). Deteksi metabolit sekunder flavonoid dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 5.

(34)

E3Z3 - Merah pudar

E3Z4 - Orange pudar

E3Z5 - Orange pudar

E3Z6 - Orange pudar

Keterangan: *Flavonoid: dicirikan oleh warna merah magenta

Saponin

Hasil pengamatan terhadap parameter deteksi metabolit sekunder pada perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh (Lampiran 17) menunjukkan saponin terdapat pada perlakuan E2Z2 yaitu E2 (batang) dan Z2 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP). Deteksi metabolit sekunder saponin dari perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh dapat dilihat pada Tabel 6.

(35)

Pembahasan

Pengaruh Jenis Eksplan Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong

Berdasarkan hasil analisis data secara statistik diketahui bahwa perlakuan jenis eksplan memberikan pengaruh yang nyata terhadap persentase terbentuk kalus, bobot basah kalus, dan bobot kering kalus.

Pada peubah amatan persentase terbentuk kalus tertinggi pada perlakuan jenis eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 91,90% dan terendah pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 59,29%. Kalus ini dapat terbentuk sesuai dengan teori totipotensi yang menyatakan bahwa setiap sel mempunyai kemampuan untuk tumbuh menjadi individu baru jika berada pada lingkungan yang sesuai. Menurut Sugiyarto (2012) menyatakan bahwa kondisi lingkungan untuk kultur jaringan harus terkontrol, baik dari segi suhu, kelembaban dan cahaya. Selain kondisi lingkungan yang terkontrol, suplai nutrisi dan penambahan zat pengatur tumbuh juga sangat penting.

(36)

Selain didasarkan pada bobot basah, pertumbuhan kalus juga didasarkan pada bobot keringnya. Bobot kering kalus tertinggi pada perlakuan jenis eksplan terdapat pada perlakuan E2 (batang) dengan rataan 0,008 g dan terendah pada perlakuan E1 (daun) dengan rataan 0,001 g. Kalus kering yang dihasilkan pada masing-masing jenis eksplan berbeda satu sama lain.. Bobot kering kalus mempunyai nilai rentang yang sangat berbeda dengan bobot basah kalus. Kalus pada ekplan daun sangat sedikit, bahkan ada eksplan daun yang tidak menghasilkan kalus, melainkan akar. Kondisi ekplan juga mempengaruhi terbentuk kalus. Hal ini didukung oleh Suyitno dan Henuhili (2011) yang menyatakan bahwa keberhasilan kultur jaringan tidak hanya tergantung pada faktor lingkungan melainkan juga pada faktor endogen dari eksplan. Faktor endogen meliputi kondisi eksplan seperti umur, keadaan fisiologis dan hormon, jenis organ dan ukuran eksplan.

Pada penelitian ini diperoleh bahwa induksi kalus tanaman binahong dari jenis eksplan daun, batang, dan tangkai daun menghasilkan kalus dengan warna putih kecoklatan, namun setelah dilakukan subkultur, kalus berubah menjadi coklat tua. Menurut Widyawati (2010), warna kalus yang bermacam-macam diakibatkan oleh adanya pigmentasi cahaya dan asal eksplan. Pigmentasi bisa merata keseluruh permukaan kalus atau hanya sebagian saja, bisa dilihat adanya perbedaan warna dalam satu kalus.

(37)

tekstur remah. Menurut Sugiyarto dan Kuswandi (2014), berdasarkan tekstur dan komposisi selnya, kalus dapat dibedakan menjadi kalus yang kompak dan remah. Kalus kompak mempunyai tekstur padat dan keras, yang tersusun dari sel-sel kecil yang sangat rapat, sedangkan kalus remah mempunyai tekstur lunak dan tersusun dari sel-sel dengan ruang antar sel yang banyak. Perbedaan struktur kalus menimbulkan adanya perbedaan kemampuan memproduksi metabolit sekunder. Pengaruh Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong

Berdasarkan hasil analisis data secara statistik diketahui bahwa perlakuan zat pengatur tumbuh memberikan pengaruh yang nyata terhadap persentase terbentuk kalus, namun belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap bobot basah kalus dan bobot kering kalus.

Pada peubah amatan persentase terbentuk kalus tertinggi pada perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh terdapat pada perlakuan Z3 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP), Z5 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 1mg/L BAP), dan Z6 (MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP) dengan rataan 93,33%, sedangkan terendah pada perlakuan Z0 (MS) dengan rataan 20,00%. Terbentuknya kalus tersebut sangat dipengaruhi oleh adanya auksin dan sitokinin. ZPT golongan auksin yang digunakan adalah 2,4 diklorofenoksi asetat (2,4D), sedangkan golongan ditokininnya adalah Benzylaminopurin (BAP) atau Benzyladenine. Suyitno dan Henuhili (2011) menyatakan bahwa auksin berperan merangsang pembelahan dan pembesaran sel, pembentukan kalus dan akar, sedang sitokinin akan memacu pembentukan tunas. ZPT berperan sebagai pengatur metabolisme, mitosis dan deferensiasi sel.

(38)

pengatur tumbuh menghasilkan kalus dengan warna putih kecoklatan, namun setelah dilakukan subkultur, kalus berubah menjadi coklat tua. Warna kalus yang kecoklatan terjadi pada hampir semua perlakuan yang terbentuk kalus. Hal ini serupa dengan penelitian Sugiyarto dan Kuswandi (2014) bahwa penampakan kalus pada media 2,4-D (1 dan 2ppm), awalnya berwarna putih bening hingga minggu ke-4, kemudian memasuki minggu ke-5 warna kalus berubah warnanya menjadi coklat muda dan akhirnya kehitaman setelah di subkultur. Hal ini disebabkan adanya metabolisme senyawa fenol yang berlebihan pada jaringan yang mulai terbentuk.

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan diperoleh bahwa pada perlakuan komposisi zat pengatur tumbuh dalam induksi kalus tanaman binahong menghasilkan kalus dengan tekstur remah. Menurut Sugiyarto dan Kuswandi (2014), karakteristik kalus sendiri tergantung pada komposisi media pengulturan, khususnya zat pengatur tumbuh, dan jenis eksplan. Kalus yang remah juga dapat diperoleh dengan cara melakukan subkultur berulang-ulang dengan media padat. Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong

Interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap semua peubah amatan seperti persentase terbentuk kalus, bobot basah kalus dan bobot kering kalus.

(39)

auksin dan sitokinin pada media belum saling sesuai untuk mendukung pertumbuhan kalus. Menurut Sumardi (1996), pertumbuhan kalus dipengaruhi oleh beberapa faktor terutama yang berhubungan langsung dengan eksplan seperti ketersediaan energi, tempat eksplan tumbuh dan kehadiran zat pengatur tumbuh terutama auksin dan sitokinin dalam media kultur dengan keseimbangan tertentu.

Menurut Robbiani et al. (2010) menyatakan bahwa perbandingan konsentrasi yang tepat antara sitokinin dan auksin akan memacu pertumbuhan eksplan kultur in vitro. Oleh karena itu, konsentrasi zat pengatur tumbuh perlu diperhatikan untuk keberhasilan teknik kultur jaringan. Dalam penelitian ini waktu muncul kalus tercepat adalah 5 hari setelah kultur (HST) dan waktu muncul kalus terlambat adalah 14 hari setelah kultur (HST). Umur muncul kalus tercepat terdapat pada perlakuan jenis eksplan batang dalam media MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP. Hal ini dikarenakan auksin yang lebih tinggi dibandingkan sitokinin mengakibatkan terbentuknya kalus pada eksplan. Hal ini didukung oleh Dodds dan Roberts (1995) yang menyatakan bahwa organ yang berbeda menunjukkan kecepatan pembelahan yang berbeda. Pada umumnya kalus muncul pada bagian yang terluka.

Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Metabolit Sekunder Tanaman Binahong

(40)

merah magenta. Hal ini didukung oleh Astuti (2012) yang menyatakan bahwa sampel tumbuhan yang telah diekstrak ditambah beberapa tetes HCl pekat dan bubuk Mg menghasilkan hasil positif terhadap flavonoid jika timbul warna merah tua (magenta) dalam waktu 3 menit.

Pada penelitian ini diperoleh bahwa saponin terdapat pada perlakuan E2Z2 yaitu E2 (batang) dan Z2 (MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP). Adanya saponin ini ditandai dengan adanya busa pada ekstrak yang telah dikocok kuat-kuat, namun dalam penelitian ini hanya ada satu kombinasi perlakuan yang mengandung saponin. Baud et al (2014) menyatakan bahwa ekstrak tumbuhan yang dikocok kuat-kuat selama 10 detik lalu ditambahkan 1 tetes HCl 2 N akan menghasilkan buih jika terdapat saponin di dalamnya.

Tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat memiliki zat-zat penting yang sangat berperan dalam menentukan aktivitas kerja tumbuhan obat tersebut, salah satunya yaitu flavonoid yang umumnya terdapat pada tumbuhan seperti tanaman binahong. Secara empiris beragam khasiat binahong telah diakui, untuk mengatasi beberapa penyakit seperti luka bakar, kanker, dan jantung. Pada penelitian Selawa et al. (2013) diperoleh bahwa sampel segar dan kering daun binahong yang

diekstraksi dengan etanol serta dianalisis akan menunjukkan adanya flavonoid. Flavonoid yang terkandung pada ekstrak daun binahong dari sampel segar dan kering adalah 7,81 mg/kg dan 11,23 mg/kg.

(41)

binahong menunjukkan reaksi kimia yang sangat kuat dan jelas. Pada tanaman binahong kandungan metabolit sekunder yang tinggi adalah total saponin, total fenol, dan total flavonoid. Kandungan senyawa ini mempunyai aktifitas sebagai antioksidan dan antimikroba/antibiotik, sehingga binahong sangat baik dipakai sebagai bahan baku untuk obat tradisional. Menurut Jeong dan Ji Wong (2005), saponin pada akar tanaman dapat digunakan sebagai obat generik yang dapat mengobati penyakit diabetes.

Ignacimuthu (1997) menyatakan bahwa kultur in vitro dapat digunakan sebagai sarana penghasil senyawa metabolit sekunder. Hal ini disebabkan karena metabolit sekunder merupakan hasil dari proses-proses biokimia yang terjadi pada tubuh tanaman secara utuh, sedang proses-proses tersebut juga terjadi pada kultur in vitro. Pada kultur in vitro, senyawa ini terdapat pada kalus atau bagian lain seperti daun, akar, dan batang. Saponin banyak digunakan sebagai bahan baku obat tradisional. Saponin ini merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam beberapa tanaman obat contohnya Talinum paniculatum Gaertn. Pada penelitian Wardani et al. (2004) menunjukkan bahwa zat pengatur tumbuh yang ditambahkan pada media kultur jaringan memberikan hasil yang berbeda-beda. Penambahan 2,4-D dan kinetin dalam media dapat meningkatkan kadar saponin kalus T. paniculatum secara in vitro. Penambahan 1,5 mg/L 2,4-D dan 1,5 mg/L kinetin dalam media merupakan konsentrasi yang optimum untuk meningkatkan kadar saponin kalus T. paniculatum secara in vitro.

(42)

(43)

KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan

1. Eksplan batang merupakan eksplan yang terbaik untuk persentase terbentuk kalus, bobot basah kalus, dan bobot kering kalus.

2. Medium MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP, dan MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP merupakan medium yang terbaik untuk persentase terbentuk kalus.

3. Interaksi antara perlakuan jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh belum memberikan pengaruh yang nyata terhadap semua peubah amatan.

4. _{Flavonoid terdeteksi dalam kalus yang diperoleh dari eksplan batang dalam}

media MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP dan MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP serta saponin terdeteksi dalam kalus yang diperoleh dari eksplan batang dalam media MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP.

Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian lanjutan dengan menggunakan selang atau interval konsentrasi zat pengatur tumbuh yang lebih sesuai untuk menghasilkan kalus yang lebih banyak sehingga cukup untuk melakukan skrining fitokimia metabolit sekunder.

(44)

TINJAUAN PUSTAKA Botani Tanaman

Menurut Tjitrosoepomo (1999) klasifikasi tanaman binahong adalah sebagai berikut Kingdom : Plantae ; Sub kingdom : Tracheobionta; Superdivisio : Spermatophyta; Divisio : Angiospermae; Kelas : Magnoliopsida Dicotyledoneae; Subkelas : Hamamelidae; Ordo : Caryophyllales; Familia : Basellaceae; Genus : Anredera; Species : Anredera cordifolia (Ten) Steenis.

Gambar 1. Akar binahong

(45)

Tanaman binahong memiliki batang yang lunak, berbentuk silindris dan saling membelit satu sama lain. Batang berwarna merah dan memiliki permukaan yang halus. Ada kalanya tanaman ini berbentuk seperti umbi – umbi yang melekat di ketiak daun dengan bentuk yang tidak beraturan dan memiliki tekstur yang kasar (Suseno, 2013).

Gambar 3. Daun binahong

Daun binahong merupakan salah satu tanaman yang berdaun tunggal, bertangkai sangat pendek, bertulang menyirip, tersusun berseling, berwarna hijau muda, berbentuk jantung (cordata), memilikipanjang sekitar 5-10 cm dan lebar sekitar 3-7 cm, helaian daun tipis lemas, ujung runcing, pangkal berbelah, tepi rata atau bergelombang, dan permukaan halus dan licin (Rachmawati, 2007).

(46)

Jenis bunga pada tanaman binahong ini adalah majemuk yang tertata rapi menyerupai tandan dengan tangkai yang panjang. Bunga tersebut muncul di ketiak daun. Mahkota bunga berwarna krem keputihan dengan jumlah kelopak sebanyak 5 helai. Bunga ini cukup menarik karena memiliki aroma wangi yang khas (Suseno, 2013).

Metabolit Sekunder Tanaman Binahong

Senyawa metabolit sekunder adalah suatu senyawa yang merupakan hasil dari proses metabolisme sekunder, yang mana proses terjadi pada suatu tumbuhan (Lubis, 2015). Fungsi metabolit sekunder adalah untuk mempertahankan diri dari kondisi lingkungan yang kurang menguntungkan, misalnya untuk mengatasi

hama dan penyakit, menarik polinator, dan sebagai molekul sinyal (Verpoorte dan Alfermann, 2000).

(47)

Tanaman binahong mengandung fenol, flavonoid, saponin, triterpenoid,

steroid dan alkaloid, selain itu memiliki aktifitas sebagai antioksidan (Astuti, 2012). Zat aktif flavanoid merupakan senyawa polifenol yang bermanfaat

untuk melancarkan peredaran darah ke seluruh tubuh dan mencegah terjadinya penyumbatan pada pembuluh darah, mengurangi kandungan kolesterol serta mengurangi penimbunan lemak pada dinding pembuluh darah, mengurangi kadar resiko penyakit jantung koroner, mengandung antiinflamasi (anti-radang), berfungsi sebagai antioksidan, membantu mengurangi rasa sakit jika terjadi pendarahan atau pembengkakan (Wahyudi, 2011).

Metabolit sekunder lainnya adalah saponin yang memiliki aktifitas pada permukaan. Tanaman binahong memiliki kandungan senyawa saponin yang lebih besar dari pada senyawa lainnya, terutama pada umbi. Saponin termasuk senyawa glikon (gula) dan senyawa aglikon, Adapun senyawa aglikon adalah termasuk golongan steroid dan terpenoid. Senyawa terpenoid adalah senyawa hidrokarbon isometrik yang membantu proses sintesa organik dan pemulihan sel-sel tubuh. Saponin mempunyai fungsi menurunkan kolesterol karena mempunyai aktifitas sebagai antioksidan (Astuti, 2012).

(48)

meningkatkan sistem kekebalan tubuh dan meningkatkan vitalitas (Wahyudi, 2011).

Kegunaan Tanaman Binahong

Binahong dipercaya memiliki khasiat untuk membantu pengobatan luka,

tipus, maag, radang usus, ambeien, pembengkakan, pembekuan darah,

rematik, luka memar, asam urat, stroke, dan diabetes melitus (Utami dan Puspaningtyas, 2013). Hasil penelitian Rahmawati et al. (2014), sari

daun binahong memiliki aktivitas antibakteri yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif yaitu Bacillus cereus dan bakteri Gram negatif yaitu Salmonella enteritidis.

Akar dan daun tanaman binahong bermanfaat sebagai obat penyembuh luka bekas operasi, penyakit tiphus, radang usus, asam urat, disentri dan wasir (Astuti, 2012). Zat bioaktif dalam tanaman binahong dapat membantu proses penyembuhan penyakit-penyakit degeneratif seperti kerusakan ginjal, diabetes, pembengkakan jantung, strok, wasir dan asam urat. Dalam penelitian lain tanaman binahong dapat mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri, bahkan ekstrak daun dan umbi binahong dapat mengobati infeksi penyakit kelamin seperti penyakit syphilis (Manoi, 2009).

(49)

Beberapa penyakit yang dapat disembuhkan dengan menggunakan tanaman ini adalah kerusakan ginjal, diabetes, pembengkakan jantung, muntah darah, tifus, stroke, wasir, rhematik, pemulihan pasca operasi, pemulihan pasca melahirkan, menyembuhkan segala luka dalam dan khitanan, radang usus, melancarkan dan menormalkan peredaran dan tekanan darah, sembelit, sesak napas, sariawan berat, pusing-pusing, sakit perut, menurunkan panas tinggi, menyuburkan kandungan, maag, asam urat, keputihan, pembengkakan hati, meningkatkan vitalitas dan daya tahan tubuh (Arsyad, 2015).

Binahong mempunyai khasiat yang sudah dirasakan oleh masyarakat yaitu dapat digunakan untuk mencegah stroke, penyembuh luka di dalam maupun luar tubuh, mengobati rematik, mencegah keputihan, menghaluskan kulit, penyubur kandungan, dan menambah vitalitas. Selain itu binahong juga mempunyai khasiat mengobati radang usus, typus, grastritis, maag, mempercepat pemulihan kesehatan setelah operasi, melahirkan, khitan, sariawan berat, pusing-pusing, sakit perut, wazir, dan patah tulang (Julianti 2008).

Kultur Jaringan

Kultur jaringan adalah upaya perbanyakan tanaman dengan menggunakan bahan tanam mikro dalam media buatan dengan kondisi bebas mikroorganisme. Dalam kultur jaringan, dua golongan zat pengatur tumbuh (ZPT) yang sangat penting adalah sitokinin dan auksin. Sitokinin berperan penting untuk merangsang pembelahan sel dan auksin digunakan secara luas dalam kultur jaringan untuk merangsang pertumbuhan kalus, suspensi sel dan organ (Hatta et al., 2008).

(50)

untuk tumbuh menjadi individu baru jika berada pada lingkungan yang sesuai. Kondisi lingkungan untuk kultur jaringan harus terkontrol baik dari segi suhu, kelembaban dan cahaya. Selain kondisi lingkungan yang terkontrol, suplai nutrisi dan penambahan zat pengatur tumbuh juga sangat penting (Sugiyarto, 2012).

Penggunaan kultur jaringan mempunyai kelebihan yaitu mampu memproduksi bibit yang seragam dalam jumlah banyak dan dalam waktu yang relatif singkat. Oleh karena itu kultur jaringan sering dijadikan solusi sebagai metode perbanyakan tanaman dan juga dapat digunakan sebagai suatu metode penyimpanan plasma nutfah yang tidak membutuhkan tempat yang besar

(Ma’rufah, 2008).

Kultur jaringan ini merupakan salah satu contoh perbanyakan secara vegetatif. Beberapa keuntungan yang diperoleh dari penerapan teknik ini antara lain: 1. Memiliki tingkat multiplikasi yang tinggi 2. Sistem yang aseptik dan penyimpanan yang mudah dan bebas patogen 3. Ruang yang dibutuhkan tidak terlalu luas 4. Erosi genetik dapat dikurangi 5. Tanaman haploid dapat dihasilkan dari program inbreeding 6. Mendukung langkah konservasi (Khairunisa, 2009).

Keberhasilan dari kultur jaringan sangat bergantung dari ketepatan konsentrasi nutrisi yang berada di dalam media kultur. Ketepatan konsentrasi ini menyangkut pada ketersediaan nutrisi bagi eksplan tanaman. Kelebihan nutrisi dari tanaman akan menyebabkan tanaman mengalami keracunan unsur hara. Oleh karena itu, pembuatan larutan stock dan sterilisasi media dianggap penting untuk diketahui sebagai sarana penenunjang kebutuhan informasi akan kultur jaringan

(51)

Media dasar yang banyak digunakan adalah Murashige & Skoog (MS), karena komposisi garamnya sesuai untuk morfogenesis, kultur meristem, dan regenerasi tanaman. Dalam media MS biasanya ditambahkan satu atau lebih vitamin yang berfungsi untuk proses katalis dalam metabolisme eksplan. Vitamin yang biasa digunakan adalah Myo-inositol, Piridoxin-HCl, Asam folat, Sianocobacilamin, Riboflafin, Betin, Kolin klorida, Kalsium pantetonut, Piridoxin fosfat, Thiamin-HCl, dan Nicotinamid (Wattimena et al., 1992).

Kultur kalus sering mengasilkan metabolit dengan kadar lebih tinggi dibandingkan yang diambil langsung dari tanamannya. Metabolit sekunder merupakan hasil dari proses-proses biokimia yang terjadi pada tubuh tanaman secara utuh dan hanya diproduksi pada kondisi-kondisi tertentu yang berfungsi untuk mempertahankan diri dari kondisi lingkungan yang kurang (Triana, 2015).

Kalus adalah massa amorf dari sel-sel parenkim berdinding tipis yang tersusun tidak rapat dan tidak teratur, yang berasal dari proliferasi sel eksplan dalam kultur. Kalus dapat diinisiasi dari hampir semua bagian tanaman, misalnya akar, batang, daun, biji atau buah. Dengan kata lain semua bagian tanaman multiseluler merupakan sumber eksplan yang potensial untuk inisiasi kalus. Organ

yang berbeda menunjukkan kecepatan pembelahan yang berbeda (Dodds dan Roberts, 1995).

(52)

kalus pada media 2,4-D (1 dan 2ppm), awalnya berwarna putih bening hingga minggu ke-4, kemudian memasuki minggu ke-5 warna kalus berubah warnanya menjadi coklat muda dan akhirnya kehitaman setelah di subkultur. Hal ini disebabkan adanya metabolisme senyawa fenol yang berlebihan pada jaringan yang mulai terbentuk (Sugiyarto dan Kuswandi, 2014).

Warna kalus yang bermacam-macam diakibatkan oleh adanya pigmentasi cahaya dan asal eksplan. Pigmentasi bisa merata keseluruh permukaan kalus atau hanya sebagian saja, bisa dilihat adanya perbedaan warna dalam satu kalus yaitu putih, hijau, coklat, putih kecoklatan, dan putih kehijauan. Warna putih kehijauan memungkinkan warna paling cerah dengan kandungan klorofil lebih sedikit. Warna hijau pada kalus akibat efek sitokinin dalam pembentukan klorofil (Widyawati, 2010).

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kultur Jaringan

Keberhasilan kultur jaringan tergantung dari beberapa faktor, meliputi faktor lingkungan dan faktor endogen dari eksplan. Faktor lingkungan meliputi kondisi media, zat pengatur tumbuh (ZPT = hormon sintetis, umumnya golongan auksin dan sitokinin), suhu, cahaya dan proporsi sukrosa. Faktor endogen meliputi kondisi eksplan seperti umur, keadaan fisiologis dan hormon, jenis organ dan ukuran eksplan (Suyitno dan Henuhili, 2011).

(53)

Keberhasilan dalam metode kultur jaringan sangat bergantung pada media yang digunakan. Komponen dasar media kultur ialah air, gula sebagai sumber karbon, garam inorganik, hara mikro dan makro, vitamin, dan hormon pertumbuhan. Komposisi media yang umum digunakan untuk perbanyakan tanaman adalah media Murashige-Skoog (MS) dan Gamborg‟s (B5). Untuk memudahkan pembuatan media, biasanya komponen tersebut dibuat dalam larutan stok.

Selain itu faktor lain yang memberikan pengaruh terhadap keberhasilan perbanyakan tanaman secara in vitro adalah zat pengatur tumbuh. Zat pengatur tumbuh yang banyak digunakan dalam kultur jaringan adalah auksin dan sitokinin. Sitokinin bersama-sama dengan auksin akan memberikan pengaruh interaksi terhadap diferensiasi jaringan dalam kultur jaringan tanaman (Hendaryono dan Wijayani 1994).

Hal penting yang harus diperhatikan dalam pencahayaan kultur adalah panjang gelombang, intensitas cahaya dan photoperiodism. Kekuatan penyinaran

lampu yang diperlukan selama 16 jam. Namun untuk pembentukan kalus yang maksimal dapat terjadi di tempat yang lebih gelap (Hendaryono dan Wijayani 1994).

Zat Pengatur Tumbuh

(54)

sintetik yang mempunyai sifat fisiologis dan biokimia yang serupa dengan hormon tanaman adalah ZPT (Rachmawati, 2007).

Zat pengatur tumbuh sangat penting digunakan untuk mengontrol organogenesis dan morfogenesis dalam pembentukan dan perkembangan tunas dan akar, serta pembentukan kalus. Penggunaan ZPT tergantung pada arah pertumbuhan jaringan tanaman yang diinginkan. Jenis dan konsentrasi ZPT untuk setiap tanaman berbeda tergantung pada genotip dan kondisi fisiologi jaringan tanaman (Lestari, 2011).

Seringkali pemasokan zat pengatur tumbuh secara alami berada di bawah optimal dan dibutuhkan sumber dari luar untuk menghasilkan respon yang dikehendaki. Pada tahapan pembibitan secara vegetatif (metode stek), aplikasi zat pengatur tumbuh secara langsung dapat meningkatkan kualitas bibit serta mengurangi jumlah bibit yang pertumbuhannya abnormal. Terkait dengan aplikasi ZPT eksternal untuk penyetekan, beberapa faktor seperti macam dan konsentrasi perlu diperhatikan. Penggunaan tidak boleh sembarangan karena penggunaan ZPT

eksternal yang berlebihan justru dapat menghambat pertumbuhan (Leovici et al., 2014).

(55)

tepat antara sitokinin dan auksin akan memacu pertumbuhan eksplan kultur in vitro. Oleh karena itu, konsentrasi zat pengatur tumbuh perlu diperhatikan untuk

keberhasilan teknik kultur jaringan (Robbiani et al., 2010).

(56)

PENDAHULUAN Latar Belakang

Kesadaran masyarakat meningkat terhadap penggunaan tanaman obat dikarenakan obat-obatan yang berasal dari tanaman diyakini kurang memberikan efek samping dibandingkan dengan obat- obat sintetik. Seiring dengan hal tersebut menyebabkan terjadinya peningkatan pencarian sumber tanaman obat. Permintaan akan bahan baku tanaman obat yang beragam dipengaruhi oleh berbagai jenis penyakit yang diderita (Khairunisa, 2009).

Binahong (Anredera cordifolia L.) merupakan tanaman obat yang potensial yang dapat mengatasi berbagai jenis penyakit. Di negara Eropa maupun Amerika tanaman ini cukup dikenal, tetapi para ahli belum tertarik untuk meneliti tanaman ini lebih mendalam, padahal berbagi khasiat sebagai obat telah diketahui. Bagian dari tanaman binahong hampir semuanya dapat dimanfaatkan, mulai dari batang, akar, bunga, dan daun, akan tetapi bagian yang banyak digunakan sebagai bahan obat herbal adalah bagian daun (Sugiyarto dan Kuswandi, 2014).

(57)

Kelestarian binahong dapat terjaga jika dilakukan upaya budidaya baik secara ex vitro maupun in vitro. Perbanyakan secara in vitro melalui teknik kultur jaringan merupakan cara yang tepat untuk melakukan upaya konservasi binahong sehingga dapat memenuhi kebutuhan bahan baku tanpa mengancam kelestariannya di alam karena melalui metode kultur in vitro akan diperoleh tanaman dalam jumlah besar dalam waktu yang relatif singkat dan akan menghasilkan tanaman baru yang seragam (Gunawan 1992).

Teknik mikropropagasi juga telah dikembangkan dan digunakan untuk beberapa tanaman obat karena multiplikasinya lebih cepat. Regenerasi tanaman dengan teknik kultur jaringan ini terbukti menghasilkan kandungan senyawa aktifnya sama dengan tanaman induknya (Radji 2005). Selain untuk perbanyakan varietas tanaman, saat ini kultur jaringan diarahkan untuk beberapa tujuan, antara

lain untuk memproduksi metabolit sekunder (alkaloid, flavonoid, dll) (Gangga et al., 2007).

Teknik in vitro atau kultur jaringan merupakan salah satu teknik yang dapat digunakan untuk induksi kalus daun binahong untuk menghasilkan metabolit sekunder. Berdasarkan tekstur dan komposisi sel, kalus dapat dibedakan menjadi kalus kompak dan kalus remah. Kalus dengan tekstur kompak akan menghasilkan metabolit sekunder yang lebih banyak dibandingkan kalus dengan

(58)

Pada metode kultur jaringan pemberian zat pengatur tumbuh (ZPT) penting untuk memacu pertumbuhan eksplan. Fungsi ZPT dalam kultur in vitro adalah untuk memacu pertumbuhan tunas dan pengakaran. ZPT yang paling sering digunakan adalah auksin dan sitokinin (Gunawan 1992). Kombinasi zat pengatur tumbuh yang ditambahkan ke dalam medium merupakan faktor utama penentu keberhasilan kultur in vitro. Penambahan 2,4-D dalam media akan merangsang pembelahan dan pembesaran sel pada eksplan sehingga memacu pembentukan dan pertumbuhan kalus serta meningkatkan senyawa kimia alami flavonoid (Rahayu et al., 2003). BAP memiliki struktur yang mirip dengan kinetin, aktif dalam pertumbuhan dan poliferasi kalus (Sari et al., 2013).

Metabolit sekunder adalah senyawa metabolit yang tidak esensial bagi pertumbuhan organisme dan ditemukan dalam bentuk yang unik atau berbeda-beda antara spesies yang satu dan lainnya (Verpoorte dan Alfermann, 2000). Identifikasi kandungan metabolit sekunder merupakan langkah awal yang penting dalam penelitian pencarian senyawa bioaktif baru dari bahan alam yang dapat menjadi prekursor bagi sintesis obat baru atau prototipe obat beraktivitas tertentu (Harborne, 2006).

(59)

proses sintesa organik dan pemulihan sel –sel tubuh. Sedangkan saponin dapat menurunkan kolesterol, mempunyai sifat sebagai antioksidan, antivirus dan antikarsinogenik dan manipulator fermentasi rumen.

Berdasarkan uraian di atas penulis tertarik untuk mengetahui pengaruh jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong.

Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).

Hipotesis Penelitian

1. Ada pengaruh jenis eksplan terhadap induksi kalus tanaman binahong.

2. Ada pengaruh komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus tanaman binahong.

3. Ada pengaruh interaksi jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder tanaman binahong.

Kegunaan Penelitian

(60)

growth regulators composition on the callus induction and secondary metabolites of binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), supervised by Rosmayati and Luthfi A. M. Siregar.

The aim of the research was to know the effect of explants type and growth regulators composition on the callus induction and secondary metabolites of binahong. The research was conducted at the Tissue Culture Laboratory, Dinas Pertanian, Sumatera Utara and Laboratory of Natural Materials, Faculty of Science, North Sumatera University, from July to September 2016. The completely randomized design was used with two factors i.e: type of explant (leaf, stem, petiole) and medium (MS; MS + 1 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP).

The results showed that the type of explant significantly affected to all parameters. The growth regulators composition significantly affected the percentage of callus formed. The stem explant were the best explant for all parameters. The medium of MS + 3 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP, MS + 3 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP were the best medium for the percentage of callus formed. The flavonoids were obtained in the stem explant with MS + 1 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP and MS + 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; the saponin were obtained in the stem explant with MS + 2 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP.

(61)

komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), dibimbing oleh Rosmayati dan Luthfi A. M. Siregar.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan, Dinas Pertanian Sumatera Utara dan Laboratorium Bahan Alam, Fakultas MIPA, Universitas Sumatera Utara pada bulan Juli sampai dengan September 2016. Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 2 faktor yaitu jenis eksplan (daun, batang, tangkai daun) dan zat pengatur tumbuh (MS; MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP).

Hasil penelitian menunjukkan jenis eksplan berpengaruh nyata terhadap semua peubah amatan. Komposisi zat pengatur tumbuh berpengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus. Eksplan batang merupakan eksplan yang terbaik untuk semua peubah amatan. Media MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP, dan MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP merupakan media yang terbaik untuk persentase terbentuk kalus. Kehadiran flavonoid terdapat pada eksplan batang dalam media MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP dan MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP serta saponin terdapat pada eksplan batang dalam media MS + 2 mg/L 2,4 D + BAP 0,5 mg/L.

(62)

PENGARUH JENIS EKSPLAN DAN KOMPOSISI ZAT PENGATUR TUMBUH TERHADAP INDUKSI KALUS DAN METABOLIT SEKUNDER PADA

TANAMAN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

SKRIPSI

OLEH:

IRA TIARMA SARI DAMANIK 120301134/PEMULIAAN TANAMAN

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI FAKULTAS PERTANIAN

(63)

PENGARUH JENIS EKSPLAN DAN KOMPOSISI ZAT PENGATUR TUMBUH TERHADAP INDUKSI KALUS DAN METABOLIT SEKUNDER PADA

TANAMAN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

SKRIPSI

OLEH:

IRA TIARMA SARI DAMANIK 120301134/PEMULIAAN TANAMAN

Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana di Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara, Medan

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI FAKULTAS PERTANIAN

(64)

Judul : Pengaruh Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh

Terhadap Induksi Kalus dan Metabolit Sekunder Pada Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

Nama : Ira Tiarma Sari Damanik NIM : 120301134

Program Studi : Agroekoteknologi Minat : Pemuliaan Tanaman

Disetujui Oleh: Komisi Pembimbing

(Prof. Dr. Ir. Rosmayati, MS.) (Luthfi A. M. Siregar, SP. MSc. Ph.D.) Ketua Anggota

Mengetahui:

(65)

growth regulators composition on the callus induction and secondary metabolites of binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), supervised by Rosmayati and Luthfi A. M. Siregar.

The aim of the research was to know the effect of explants type and growth regulators composition on the callus induction and secondary metabolites of binahong. The research was conducted at the Tissue Culture Laboratory, Dinas Pertanian, Sumatera Utara and Laboratory of Natural Materials, Faculty of Science, North Sumatera University, from July to September 2016. The completely randomized design was used with two factors i.e: type of explant (leaf, stem, petiole) and medium (MS; MS + 1 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP; MS + 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP).

The results showed that the type of explant significantly affected to all parameters. The growth regulators composition significantly affected the percentage of callus formed. The stem explant were the best explant for all parameters. The medium of MS + 3 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP, MS + 3 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP were the best medium for the percentage of callus formed. The flavonoids were obtained in the stem explant with MS + 1 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP and MS + 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP; the saponin were obtained in the stem explant with MS + 2 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BAP.

(66)

komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), dibimbing oleh Rosmayati dan Luthfi A. M. Siregar.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh jenis eksplan dan komposisi zat pengatur tumbuh terhadap induksi kalus dan metabolit sekunder pada tanaman binahong. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan, Dinas Pertanian Sumatera Utara dan Laboratorium Bahan Alam, Fakultas MIPA, Universitas Sumatera Utara pada bulan Juli sampai dengan September 2016. Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 2 faktor yaitu jenis eksplan (daun, batang, tangkai daun) dan zat pengatur tumbuh (MS; MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP; MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP; MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP).

Hasil penelitian menunjukkan jenis eksplan berpengaruh nyata terhadap semua peubah amatan. Komposisi zat pengatur tumbuh berpengaruh nyata terhadap persentase terbentuk kalus. Eksplan batang merupakan eksplan yang terbaik untuk semua peubah amatan. Media MS + 3 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP, MS + 2 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP, dan MS + 3 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP merupakan media yang terbaik untuk persentase terbentuk kalus. Kehadiran flavonoid terdapat pada eksplan batang dalam media MS + 1 mg/L 2,4 D + 0,5 mg/L BAP dan MS + 1 mg/L 2,4 D + 1 mg/L BAP serta saponin terdapat pada eksplan batang dalam media MS + 2 mg/L 2,4 D + BAP 0,5 mg/L.

(67)

23 Februari 1994 dari Ayahanda J. Damanik dan Ibunda M. Purba. Penulis merupakan putri pertama dari empat bersaudara.

Pendidikan formal yang pernah ditempuh adalah SD Swasta GKPS No. 1 Pematangsiantar lulus pada tahun 2006, SMP Swasta RK Bintang Timur Pematangsiantar lulus pada tahun 2009 dan SMAN 2 Pematangsiantar lulus pada tahun 2012. Tahun 2012 diterima sebagai mahasiswa melalui jalur SNMPTN (Seleksi Nasional Masuk Perguruan Tinggi Negeri) pada program studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara, Medan.

Selama mengikuti perkuliahan penulis pernah berkesempatan menjadi ketua acara Kebaktian Padang Himagrotek tahun 2015 dan bendahara acara Kebaktian Padang Himagrotek tahun 2016. Selain itu penulis aktif sebagai anggota dalam organisasi Himpunan Mahasiswa Agroekoteknologi.

(68)

atas berkat dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus dan Metabolit

Sekunder Pada Tanaman Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)” yang merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana di Program Studi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara, Medan.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Prof. Dr. Ir. Rosmayati, M.S. selaku ketua komisi pembimbing dan Bapak Luthfi A. M. Siregar, S.P., M.Sc., Ph.D. selaku anggota komisi

pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan serta kritik dan saran kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Ucapan terima kasih juga

disampaikan kepada orang tua tercinta, Ayahanda J. Damanik dan Ibunda M. Purba atas kasih sayang, semua dukungan moril dan materil serta

doanya kepada penulis, kepada S. Sumbayak, JWS Sumbayak, S. Purba, Elvi Aryestika Damanik, Jonathan Dohardo Damanik, dan Meirani Hotmauli

(69)

perbaikan di masa yang akan datang. Akhir kata, penulis mengucapkan terima kasih dan semoga skripsi ini bermanfaat bagi pihak yang membutuhkan.

Medan, November 2016

(70)

ABSTRAK ... ii

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kultur Jaringan ... 13

(71)

Uji Flavonoid ... 23 Pengaruh Jenis Eksplan Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong ... 31

Pengaruh Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong ... 33

Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus Tanaman Binahong ... 34

Pengaruh Interaksi Jenis Eksplan dan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Metabolit Sekunder Tanaman Binahong ... 35

KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan ... 39

Saran ... 39 DAFTAR PUSTAKA