Pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap pembuatan kitosan nanopartikel dengan menggunakan Ultrasonic Bath

(1)

PENGARUH VISKOSITAS KITOSAN DARI BERBAGAI BERAT

MOLEKUL TERHADAP PEMBUATAN KITOSAN

NANOPARTIKEL DENGAN MENGGUNAKAN

ULTRASONIC BATH

TESIS

Oleh

ZUHAIRIAH NST 117006017/KIM

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

(2)

PENGARUH VISKOSITAS KITOSAN DARI BERBAGAI BERAT

MOLEKUL TERHADAP PEMBUATAN KITOSAN

NANOPARTIKEL DENGAN MENGGUNAKAN

ULTRASONIC BATH

TESIS

Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar Magister Sains dalam Program Studi Kimia pada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam Universitas Sumatera Utara

Oleh

ZUHAIRIAH NST 117006017/ KIM

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

(3)

Judul Tesis : PENGARUH VISKOSITAS KITOSAN DARI BERBAGAI BERAT MOLEKUL TERHADAP PEMBUATAN

KITOSAN NANOPARTIKEL DENGAN MENGGUNAKAN ULTRASONIC BATH

Nama Mahasiswa : Zuhairiah NST Nomor Pokok : 117006017 Program Studi : Kimia

Menyetujui Komisi Pembimbing

(Prof. Dr. Harry Agusnar, M.Sc, M.Phil)

Ketua Anggota

(Prof. Dr. Zul Alfian, M.Sc)

Ketua Program Studi Dekan

Prof. Basuki Wirjosentono, MS, Ph.D Dr. Sutarman, M.Sc

(4)

Telah diuji pada

Tanggal : 27 April 2013

PANITIA PENGUJI TESIS

Ketua : Prof. Dr. Harry Agusnar, MSc, M.Phil Anggota : 1. Prof. Dr. Zul Alfian, M.Sc

2. Dr. Hamonangan Nainggolan, MSc 3. Prof. Dr. Harlem Marpaung

(5)

PENGARUH VISKOSITAS KITOSAN DARI BERBAGAI BERAT MOLEKUL TERHADAP PEMBUATAN KITOSAN

NANOPARTIKEL DENGAN MENGGUNAKAN ULTRASONIC BATH

PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kerjasama di suatu perguruan tinggi dan sepanjang sepengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Medan, April 2013 Penulis

(6)

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Sebagai Sivitas Akademika Universitas Sumatera Utara, saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Zuhairiah Nasution

Nomor Pokok : 117006017

Program Studi : Magister Ilmu Kimia Jenis Karya Ilmiah : Tesis

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, menyetujui untuk memberikan kepada Universitas Sumatera Utara Hak Bebas Royalti Non-Eksklusif (Non-Exclusif Royalty Free Right) atas Tesis saya yang berjudul:

PENGARUH VISKOSITAS KITOSAN DARI BERBAGAI BERAT MOLEKUL TERHADAP PEMBUATAN KITOSAN NANOPARTIKEL DENGAN

MENGGUNAKAN ULTRASONIC BATH

beserta perangkat yang ada (jika diperlukan). Dengan Hak Bebas Royalti Non-Eksklusif ini, Universitas Sumatera Utara berhak menyimpan, mengalih media, memformat, mengelola dalam bentuk data-base, merawat dan mempublikasikan Tesis saya tanpa meminta izin dari saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis dan sebagai pemegang dan atau sebagai pemilik hak cipta.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan sebenarnya.

Medan, 27 April 2013

(7)

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian mengenai pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap pembuatan kitosan nanopartikel dengan menggunakan ultrasonic bath. Kitosan merupakan salah satu polisakarida alam yang diperoleh dari deasetilasi kitin. Dewasa ini aplikasi kitosan telah sangat banyak dan meluas. Perkembangan penelitian kitosan juga telah sangat berkembang salah satunya dengan memodifikasi kitosan menjadi berukuran nano. Banyak cara untuk memodifikasi kitosan menjadi kitosan nanopartikel. Dalam penelitian ini, pengubahan kitosan menjadi kitosan nanopartikel dengan menggunakan instrument ultrasonic bath dengan menggunakan Na-TPP 1% sebagai pengikat silang dan asam oleat sebagai surfaktan dengan memvariasikan berat molekul kitosan, konsentrasi larutan kitosan dan lama penyimpanan larutan kitosan. Data menunjukkan viskositas larutan kitosan menurun seiring dengan lamanya waktu penyimpanan kitosan. Larutan kitosan dengan konsentrasi sama, penurunan viskositasnya lebih nyata terlihat pada kitosan berat molekul tinggi dibandingkan kitosan berat molekul sedang. Penurunan viskositas ini terjadi karena kitosan mengalami hidrolisis ketika bereaksi dengan larutan asam. Hasil foto SEM menunjukkan, larutan kitosan 1% dari kitosan berat molekul tinggi dengan penyimpanan 1 hari menghasilkan homogenitas partikel yang paling baik. Karena pada penyimpanan 1 hari kitosan belum mengalami hidrolisis dalam larutan asam. Spectrum FTIR menunjukkan terdapatnya semua gugus fungsi yang khas pada kitosan.

(8)

THE EFFECT OF CHITOSAN VISCOSITY FROM VARIOUS MOLECULAR WEIGHT TO THE MAKING OF NANO PARTICLE CHITOSAN BY USING

ULTRASONIC BATH

ABSTRACT

The effect of chitosan viscosity from various molecular weight to the making of nano particle chitosan by using ultrasonic bath has been studied. Chitosan is one of the natural polysaccharide obtained from the deacetylation of chitin. Today the applications of chitosan have been very numerous and widespread. The development of chitosan research has also highly developed, one of them by modifying chitosan into the nano-sized one. Many ways to modify chitosan into nanoparticles chitosan. In this study, the conversion of chitosan into nanoparticles chitosan by using ultrasonic bath instrument and 1% STPP as crosslinking agent and oleic acid as a surfactant by varying the molecular weight of chitosan, chitosan concentration and the storage time of chitosan solution. Data shows that chitosan solution viscosity decreases along with the storage time of chitosan. Chitosan solution with the same concentration, its viscosity deflation looks more apparently on the chitosan of high weight molecule compared to the chitosan of medium weight molecule. Viscosity decreases because chitosan hydrolyse when it reacts with the acid solution. SEM photos result indicates, 1% chitosan solution of high weight molecular chitosan with 1 day of storage produces the best particles homogenity because it doesn’t have hydrolyis in acidic solutions on the first day of storage. FTIR spectrum shows that it has all of the typical functional groups on chitosan.

(9)

KATA PENGANTAR

Syukur Alhamdulillah penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT yang telah memberikan Rahmat dan Hidayahnya, serta tidak lupa Shalawat dan Salam kepada junjungan kita Nabi Besar Muhammad SAW, sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan tesis ini.

Adapun judul tesis ini ‘Pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap pembuatan kitosan nanopartikel dengan menggunakan Ultrasonic

Bath’. Tesis ini sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister of Sains

di Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara.

Melalui kesempatan ini penulis ingin menyampaikan sembah sujud kepada ayahanda Syahril Nasution dan ibunda Roswita yang telah melahirkan, membesarkan dan mendidik penulis. Terima kasih juga penulis sampaikan kepada : Rektor Universitas Sumatera Utara, Bapak Prof. Dr. dr. Syahril Pasaribu, DMTH, M.Sc, CTM, SpA(K) atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada penulis untuk menyelesaikan Program Magister, Dekan FMIPA Dr. Sutarman, M.Sc., ketua Program Studi Kimia, Bapak Prof. Dr. Basuki Wirjosentono, MS, Ph.D dan sekretaris program studi kimia Bapak Dr. Hamonangan Nainggolan, M.Sc atas kesempatan yang telah diberikan kepada penulis untuk menjadi mahasiswa Program Magister Sains di Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara.

Dan dengan segala kerendahan hati, penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang setinggi-tingginya kepada :

(10)

2. Bapak Prof. Dr. Harlem Marpaung, Bapak Dr. Darwin Yunus, M.S, beserta Bapak Prof. Dr. Yunazar Manjang selaku dosen pembanding yang telah banyak memberikan masukan dalam penulisan tesis ini.

3. Bapak dan Ibu Dosen serta Pegawai Sekolah Pascasarjana Program Studi Ilmu Kimia yang telah memberikan ilmu dan motivasi bagi penulis.

4. Kak Leli di Sekolah Pascasarjana Ilmu Kimia dan Bang Aman di Laboratorium Penelitian yang telah banyak membantu dan memberikan arahan.

5. Teman-teman mahasiswa Sekolah Pascasarjana Kimia USU angkatan 2011 yang telah memberikan semangat dan dorongan kepada penulis.

6. Seluruh keluarga dan sahabat-sahabat yang telah banyak mendoakan dan memberi semangat kepada penulis.

Penulis menyadari bahwa tesis ini masih banyak kekurangan, oleh sebab itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya membangun dari para pembaca untuk kesempurnaan bagi penelitian dan kemajuan ilmu.

Medan, 27 April 2013

(11)

DAFTAR RIWAYAT HIDUP

1. Nama : Zuhairiah NST

2. Tempat/tanggal lahir : Medan/ 14 Juli 1988

3. Agama : Islam

4. Status : Belum Menikah

5. Alamat : Jl. Damai Lingk. VII Kel. Perdamaian Kec. Stabat

6. Pendidikan :

SD Negeri 054904 Stabat 1994 - 2000

SMP Negeri 1 Stabat 2000 - 2003

SMA Negeri 1 Stabat 2003 – 2006

Universitas Negeri Medan 2006 – 2010 Sekolah Pascasarjana Kimia USU 2011 – 2013 7. Riwayat Pekerjaan :

(12)

DAFTAR ISI

DAFTAR GAMBAR viii

DAFTAR TABEL x

2.5. Kitosan Nanopartikel 18

2.6. Tripolipospat 20

2.7. Surfaktan 20

2.8. Ultrasonic 21

2.9. Metode Freeze Drying 23

(13)

BAB 3. METODE PENELITIAN 31

3.1. Lokasi Penelitian 31

3.2. Alat dan Bahan 31

3.3. Prosedur Penelitian 32

3.4. Bagan Penelitian 33

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN 36

4.1. Uji Viskositas Larutan Kitosan 36

4.2. Karakterisasi dengan SEM 40

4.3. Hasil Uji FTIR 46

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN 51

5.1. Kesimpulan 51

5.2. Saran 51

(14)

DAFTAR GAMBAR

Nomor Judul Halaman

Gambar 2.1. Struktur Kitosan 4

Gambar 2.2. Struktur Kitin 4

Gambar 2.3. Kitosan Nanopartikel dengan Gelasi Ionik 19

Gambar 2.4. Skema SEM 29

Gambar 4.1. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 0,2% 37 Gambar 4.2. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 0,4% 37 Gambar 4.3. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 0,6% 38 Gambar 4.4. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 0,8% 38 Gambar 4.5. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 1% 39 Gambar 4.6. SEM kitosan nanopartikel dari larutan kitosan dengan berat

molekul sedang pada penyimpanan 1 hari 41 Gambar 4.7. SEM kitosan nanopartikel dari larutan kitosan dengan berat

molekul tinggi pada penyimpanan 1 hari 41 Gambar 4.8. SEM kitosan nanopartikel dari larutan kitosan dengan berat

molekul sedang pada penyimpanan 3 hari 43

Gambar 4.11. SEM kitosan nanopartikel dari larutan kitosan dengan berat

(15)

Gambar 4.16. Spektrum FTIR kitosan standard 46 Gambar 4.17. Spektrum FTIR dari larutan kitosan BM tinggi dengan waktu

penyimpanan 1 hari 47

Gambar 4.18. Spektrum FTIR dari larutan kitosan BM tinggi dengan waktu

(16)

DAFTAR TABEL

Nomor Judul Halaman

Tabel 2.1. Serapan FTIR Karakteristik untuk Kitin dan Kitosan 6

Tabel 2.2. Spesifikasi Kitosan Niaga 8

Tabel 2.3. Kelarutan Kitosan dalam Berbagai Asam 9 Tabel 2.4. Sifat-sifat dan Pemanfaatan Kitosan 11

(17)

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Judul Halaman

Lampiran 1 Data Hasil Pengujian Viskositas Larutan Kitosan 56

Lampiran 2 Spektrum FTIR Kitosan Penyimpanan 1 Hari 57

(18)

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian mengenai pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap pembuatan kitosan nanopartikel dengan menggunakan ultrasonic bath. Kitosan merupakan salah satu polisakarida alam yang diperoleh dari deasetilasi kitin. Dewasa ini aplikasi kitosan telah sangat banyak dan meluas. Perkembangan penelitian kitosan juga telah sangat berkembang salah satunya dengan memodifikasi kitosan menjadi berukuran nano. Banyak cara untuk memodifikasi kitosan menjadi kitosan nanopartikel. Dalam penelitian ini, pengubahan kitosan menjadi kitosan nanopartikel dengan menggunakan instrument ultrasonic bath dengan menggunakan Na-TPP 1% sebagai pengikat silang dan asam oleat sebagai surfaktan dengan memvariasikan berat molekul kitosan, konsentrasi larutan kitosan dan lama penyimpanan larutan kitosan. Data menunjukkan viskositas larutan kitosan menurun seiring dengan lamanya waktu penyimpanan kitosan. Larutan kitosan dengan konsentrasi sama, penurunan viskositasnya lebih nyata terlihat pada kitosan berat molekul tinggi dibandingkan kitosan berat molekul sedang. Penurunan viskositas ini terjadi karena kitosan mengalami hidrolisis ketika bereaksi dengan larutan asam. Hasil foto SEM menunjukkan, larutan kitosan 1% dari kitosan berat molekul tinggi dengan penyimpanan 1 hari menghasilkan homogenitas partikel yang paling baik. Karena pada penyimpanan 1 hari kitosan belum mengalami hidrolisis dalam larutan asam. Spectrum FTIR menunjukkan terdapatnya semua gugus fungsi yang khas pada kitosan.

(19)

THE EFFECT OF CHITOSAN VISCOSITY FROM VARIOUS MOLECULAR WEIGHT TO THE MAKING OF NANO PARTICLE CHITOSAN BY USING

ULTRASONIC BATH

ABSTRACT

The effect of chitosan viscosity from various molecular weight to the making of nano particle chitosan by using ultrasonic bath has been studied. Chitosan is one of the natural polysaccharide obtained from the deacetylation of chitin. Today the applications of chitosan have been very numerous and widespread. The development of chitosan research has also highly developed, one of them by modifying chitosan into the nano-sized one. Many ways to modify chitosan into nanoparticles chitosan. In this study, the conversion of chitosan into nanoparticles chitosan by using ultrasonic bath instrument and 1% STPP as crosslinking agent and oleic acid as a surfactant by varying the molecular weight of chitosan, chitosan concentration and the storage time of chitosan solution. Data shows that chitosan solution viscosity decreases along with the storage time of chitosan. Chitosan solution with the same concentration, its viscosity deflation looks more apparently on the chitosan of high weight molecule compared to the chitosan of medium weight molecule. Viscosity decreases because chitosan hydrolyse when it reacts with the acid solution. SEM photos result indicates, 1% chitosan solution of high weight molecular chitosan with 1 day of storage produces the best particles homogenity because it doesn’t have hydrolyis in acidic solutions on the first day of storage. FTIR spectrum shows that it has all of the typical functional groups on chitosan.

(20)

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Kitosan adalah turunan utama kitin, yang disediakan dengan proses deasetilasi kitin. Kitosan pertama kali ditemukan oleh Rouget pada tahun 1859. Kitosan adalah biopolimer glokosamin linier yang terbentuk dari unit ulang 2-amino-2deoksi-D-glukosa atau disebut (1,4)-2-amino-2-deoksi-D-glukosa dan ini merupakan nama resmi kitosan yang mempunyai berat molekul rata-rata 120.000 (Muzzarelli, 1977). Namun kitosan dirujuk dari hasil proses deasetilasi kitin dengan derajat polimerisasi yang berbeda-beda

(Agusnar, 2006). Kitosan larut pada kebanyakan larutan asam organik, pada pH

sekitar 4,0 tetapi tidak larut pada pH lebih besar dari 6,5, juga larut dalam pelarut air, alkohol, dan aseton. Perlu kita ketahui, bahwa kelarutan kitosan dipengaruhi oleh bobot molekul, derajat deasetilasi, dan rotasi spesifiknya yang beragam bergantung pada sumber dan metode isolasi serta transformasinya (Sugita,2009).

Derajat deasetilasi kitosan dapat diukur dengan berbagai metode dan yang paling lazim digunakan adalah metode garis dasar spektroskopi IR transformasi Fourier (FTIR) yang pertama kali diajukan oleh Moore dan Robert pada tahun 1977. Teknik ini memberikan beberapa keuntungan, yaitu relatif cepat, contoh tidak perlu murni, dan tingkat ketelitian tinggi dengan teknik titrimetri dan metode spektroskopi lainnya (Sugita,2009).

(21)

ultrasonik pada penguraian kitosan telah dilaporkan oleh beberapa peneliti, termasuk parameternya adalah konsentrasi kitosan, suhu reaksi, jenis pelarut yang digunakan dan waktu ultrasonik serta penyimpanan dalam larutan asam, sifat polidispersi terhadap kitosan. Hasilnya menunjukkan bahwa kitosan mengalami kelarutan yang cepat dalam larutan yang encer dari pada dalam larutan yang pekat dan lebih cepat dalam larutan yang bersuhu rendah dari pada dalam larutan yang bersuhu tinggi.

Penelitian yang dilakukan oleh Liu, 2005 menunjukkan bahwa penggunaan ultrasonic dapat menurunkan berat molekul kitosan terutama untuk kitosan dengan berat molekul dan derajat deasetilasi yang lebih tinggi.

Dewi, 2010 telah melakukan penelitian mengenai pengaruh waktu penggunaan ultrasonic bath terhadap sifat kitosan nanopartikel, dan hasilnya menunjukkan bahwa nilai derajat deasetilasi akan meningkat dengan meningkatnya waktu penggunaan ultrasonic bath.

Penelitian yang dilakukan Naibaho, 2009 menunjukkan bahwa penyimpanan larutan kitosan dapat mempercepat waktu alir larutan kitosan tersebut, yang tentunya juga mempengaruhi viskositas larutan kitosan.

Berdasarkan uraian diatas, peneliti tertarik untuk memodifikasi kitosan menjadi kitosan nanopartikel kemudian meneliti perubahan sifat-sifat karakteristik dari kitosan nanopartikel dengan menggunakan variasi berat molekul kitosan dan variasi lama penyimpanan larutan kitosan.

1.2 Permasalahan

Bagaimanakah pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap karakterisasi kitosan nanopartikel yang dihasilkan.

1.3 Pembatasan Masalah

(22)

kitosan nanopartikel dengan menggunakan Ultrasonic bath kemudian dianalisa karakteristiknya dengan menggunakan instrumen FTIR dan SEM.

1.4 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh viskositas kitosan dari berbagai berat molekul terhadap karakterisasi kitosan nanopartikel.

1.5 Manfaat Penelitian

(23)

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kitosan

2.1.1 Struktur Kitosan

Kitosan adalah polisakarida alam yang diperoleh dari deasetilasi kitin. Jika sebagian besar gugus asetil pada kitin disubstitusikan oleh atom hidrogen menjadi gugus amino dengan penambahan larutan basa kuat berkonsentrasi tinggi, hasilnya dinamakan kitosan atau kitin terdeasetilasi (Bastaman, 1989).

Kitosan sebagai poli (β-(1,4)-2-amino-2-Deoksi-D-Glukopiranosa). Kitosan bukan merupakan senyawa tunggal, tetapi merupakan kelompok yang terdeasetilasi sebagian dengan derajat polimerisasi yang berbeda. Kitosan adalah kitin yang terdeasetilasi sebanyak mungkin dengan derajat deasetilasi antara 80-90% (Uragami, 2006).

Gambar 2.1 Struktur Kitosan

(24)

Kitin dalam kulit udang sebesar 15-20% dan dapat diisolasi melalui proses deproteinasi yang diikuti dengan demineralisasi. Kitin juga dapat diubah menjadi kitosan setelah lebih dari 70% gugus asetil (CH3

Berbagai metode digunakan untuk menyediakan kitosan dengan derajat deasetilasi tertentu, diantaranya Horowitz, Wolfrom, Broussignae dan Fujita (Muzzarelli, 1977). Hidrolisis gugus asetil pada kitin dapat dilakukan dengan menggunakan larutan NaOH kuat, diikuti pencucian, pengubahan pH dan proses pengeringan. Pada tahap ini kitosan masih berbentuk kepingan kasar dan dapat dihaluskan mengikuti ukuran tertentu (Agusnar, 2006).

CO-)-nya dihilangkan. Kitosan lebih banyak digunakan daripada kitin, karena ternyata penghilangan gugus asetil kitin dapat meningkatkan kelarutannya sehingga kitosan lebih mudah larut.

Proses deasetilasi kitosan dapat dilakukan dengan cara kimiawi maupun enzimatik. Proses kimiawi menggunakan basa misalnya NaOH, dan dapat menghasilkan kitosan dengan derajat deasetilasi yang tinggi, yaitu mencapai 85-93%. Namun proses kimiawi menghasilkan kitosan dengan bobot molekul yang beragam dan deasetilasinya juga sangat acak , sehingga sifat fisik dan kimia kitosan tidak seragam. Selain itu proses kimiawi juga dapat menimbulkan pencemaran lingkungan, sulit dikendalikan, dan melibatkan banyak reaksi samping yang dapat menurunkan rendemen. Proses enzimatik dapat menutupi kekurangan proses kimiawi. Pada dasarnya deasetilasi secara enzimatik bersifat selektif dan tidak merusak struktur rantai kitosan, sehingga menghasilkan kitosan dengan karakteristik yang lebih seragam agar dapat memperluas bidang aplikasinya (Sugita.2009).

(25)

Tabel 2.1 Serapan FTIR Karakteristik untuk Kitin dan Kitosan

Jenis Vibrasi Bilangan Gelombang (cm

-1₎

C-O (-C-O-C-) streching asym -) bending sym

C-O (-C-O-C-) streching sym

3500

Perbedaan perlakuan kimia dalam pembuatan kitin dan kitosan menghasilkan perbedaan pada karakteristik kitosan. Untuk menghasilkan kitosan dengan viskositas dan derajat deasetilasi tinggi pada suhu rendah, prosesnya harus dimulai dengan dekalsifikasi dan membutuhkan deasetilasi berulang (Lertsutthiwong. 2002)

(26)

Penentuan Derajat Deasetilasi dengan menggunakan spektroskopi FTIR dilakukan dengan cara sebagai berikut: kitosan dibuat menjadi pellet dengan KBr hingga membentuk suatu lapisan tipis transparan. Selanjutnya, serapan diukur dengan FTIR. Puncak tertinggi dicatat dan diukur dari garis dasar yang dipilih (Sugita.2009).

Karena adanya gugus amino, kitosan merupakan polielektrolit kationik (pKa = 6,5) hal yang sangat jarang terjadi secara alami. Sifat yang basa ini menjadikan kitosan :

a. Dapat larut dalam media asam encer membentuk larutan yang kental sehingga dapat digunakan dalam pembuatan gel. Dalam beberapa variasi konfigurasi seperti butiran, membran, pelapis kapsul, serat dan spons.

b. Membentuk kompleks yang tidak larut dengan air dengan polianion yang dapat juga digunakan untuk pembuatan butiran gel, kapsul dan membran.

c. Dapat digunakan sebagai pengkelat ion logam berat dimana gelnya menyediakan system produksi terhadap efek dekstruksi dari ion

Kitosan juga dapat dibuat menjadi membrane film dengan cara, kitosan dilarutkan dalam asam asetat dan seterusnya dituangkan diatas plat kaca, pelarut asam tersebut dibiarkan menguap pada udara terbuka sehingga film terbentuk dan dengan mudah dapat diambil dari permukaan kaca ( Agusnar.2006).

(27)

Tabel 2.2 Spesifikasi Kitosan Niaga

Parameter Ciri

Ukuran Partikel Serpihan sampai bubuk

Kadar air (%) ≤ 10,0

Kadar abu (%) ≤ 2,0

Warna larutan Tidak berwarna

N-deasetilasi (%) ≥ 70,0

Kelas Viskositas (cps) : - Rendah

- Medium

- Tinggi pelarut organic - Sangat tinggi

2.1.2 Sifat-sifat Fisika dan Kimia Kitosan

Pada umumnya polisakarida alami seperti selulosa, dekstrin, pektin, alginat, agar-agar, karagenan bersifat netral atau sedikit asam, sedangkan kitin dan kitosan bersifat basa (Kumar, 2000).

Kitosan merupakan padatan amorf yang berwarna putih kekuningan dengan

(28)

fisika dan kimia kitosan tersebut telah dijadikan bagian dalam penentuan spesifikasi kitosan niaga.

Tabel 2.3 Kelarutan Kitosan dalam Berbagai Asam

Konsentrasi Asam Organik Konsentrasi Asam Organik (%)

10 50 >50

Asam asetat + ± -

Asam adipat - - -

Asam sitrat + - -

Asam format + + +

Asam laktat + - -

Asam maleat + - -

Asam malonat + - -

Asam Oksalat + - -

Asam propionate + - -

Asam piruvat + + -

Asam suksinat + - -

Asam tartrat + - -

Ket : + larut - tidak larut ± larut sebagian (Sugita, 2009)

(29)

Sifat fisik yang khas dari kitosan yaitu mudah dibentuk menjadi spons, larutan, gel, pasta, membran dan serat yang sangat berperan dalam aplikasinya (Kaban, 2009).

2.1.3 Kegunaan Kitosan

Dewasa ini aplikasi kitin dan kitosan sangat banyak dan meluas. Biopolimer tersebut berguna sebagai antikoagulan, antitumor, antivirus, penambahan dalam obat pembuluh darah-kulit dan ginjal sintetik, bahan pembuat lensa kontak, aditif pada kosmetik, membran dialisis, bahan shampoo dan kondisioner rambut, penstabil liposome, bahan ortopedik, pembalut luka dan benang bedah yang mudah diserap, serta mempertinggi daya kekebalan, dan antiinfeksi (Sugita.2009).

Kitosan dengan derajat deasetilasi tinggi, lebih dari 85 %, dan berat molekul rendah dibutuhkan sebagai antibakteri, antifungi, antioksidan, antitumor dan

immunoenhancing. Untuk aplikasi sebagai membran dan pengemas dibutuhkan

kitosan dengan derajat deasetilasi sekitar 70 % dan berat molekul tinggi (Emmawati,

et al. 2007).

Kitosan sebagai adsorben sering dimanfaatkan untuk proses adsorpsi ion logam berat. Besarnya afinitas kitosan dalam mengikat ion logam sangat bergantung pada karakteristik makrostruktur kitosan yang dipengaruhi oleh sumber dan kondisi pada proses isolasi. Perbedaan bentuk kitosan akan berpengaruh pada luas permukaannya. Semakin kecil ukuran kitosan, maka luas permukaan kitosan akan semakin besar, dan proses adsorpsi pun dapat berlangsung lebih baik. Dalam penggunaannya kitosan tidak beracun dan mampu menurunkan kadar kolesterol dalam darah. Kitosan juga dapat digunakan dalam penjernihan atau pengolahan air minum. Pemakaian kitosan pada pengolahan air minum lebih baik dari pada memakai alum atau tawas dan Poli Aluminium Klorida (PAC), karena tawas dan PAC dapat mengakibatkan efek racun bagi kesehatan manusia (Roberts.1991).

(30)

Tabel 2.4. Sifat-sifat dan Pemanfaatan Kitosan

Sifat-sifat Pemanfaatan

Kationik :

Polielektrolit linier bermuatan tinggi Mengkelat ion logam beracun

Pemurnian air Flokulan yang baik

Kimiawi :

Berat Molekul tinggi Gugus amino dan hidroksil

Viskositas tinggi, film

Farmasi : Biokompatible, biodegradable Penyembuh luka, pelepasan obat, kulit sintesis, kontak lensa

Umum-kosmetik :

Pelembab, pakan, penyalut, pelindung

Produk perawatan kulit, perawatan/pemeliharaan rambut

Makanan dan Pertanian: Pengikat ion (asam empedu atau asam lemak)

Penurun kolesterol, antikanker, serat pangan, anti luka

Fungistatik Bakteriologis: Penjerat dan Adsorben

Meningkatkan produksi, bahan penjerat

(Taranathan and Kittur, 2003).

(31)

2.2 Viskositas

Viskositas menyatakan ukuran kekentalan suatu cairan atau fluida. Kekentalan merupakan sifat cairan yang berhubungan erat dengan hambatan untuk mengalir. Viskositas cairan akan menimbulkan gesekan antara bagian-bagian atau lapisan-lapisan cairan yang bergerak satu terhadap yang lain. Hambatan atau gesekan yang terjadi ditimbulkan oleh gaya kohesi dalam zat cair.

Setiap fluida mempunyai viskositas yang berbeda-beda yang harganya bergantung pada jenis cairan dan suhu. Pada kebanyakan cairan, viskositasnya turun dengan naiknya suhu. Menurut ’teori lubang’ terdapat kekosongan dalam cairan dan molekul bergerak secara kontinyu ke dalam kekosongan ini, sehingga kekosongan akan bergerak keliling. Proses ini menyebabkan aliran, tetapi memerlukan energy karena ada energi pengaktifan yang harus dipunyai suatu molekul agar dapat bergerak ke dalam kekosongan. Energi pengaktifan lebih mungkin terdapat pada suhu yang lebih tinggi dan dengan demikian cairan lebih mudah mengalir (Yazid,Estein,2005).

Pada penelitian ini, viskositas larutan kitosan diukur menggunakan viscometer

Brookfield.

2.3 Berat Molekul Kitosan

Salah satu karakteristik dari larutan polimer berbobot molekul tinggi dibandingkan dengan pelarut murninya adalah kenaikan viskositas larutannya oleh pertambahan konsentrasi. Karena berat/ukurannya yang besar, molekul polimer dalam larutan akan menurunkan mobilitas dan mempengaruhi sifat aliran campuran yang sebanding dengan jumlah molekul terlarut. Karena itu, pengamatan perubahan viskositas ini dapat digunakan untuk menentukan bobot molekul polimer tersebut (Wirjosentono,B, 1995).

(32)

produk. Berat molekul dapat ditentukan dengan beberapa metode seperti viscometry dan light schattering (R.A.A.Muzzarelli).

Nata et al.,2007 dalam Sugita 2009 melakukan penentuan Berat molekul kitosan dengan menggunakan alat viscometer Oswald yang merujuk metode tarbojevich & Cosani (1996). Dalam penentuannya, larutan kitosan perlu disiapkan dengan konsentrasi 0,00, 0,02, 0,04, 0,06 dan 0,08% dalam larutan asam asetat 1%. Sejumlah volume larutan tersebut dimasukkan ke dalam viscometer dan ditentukan waktu alirnya dengan pengukuran berulang. Bobot molekul dapat dihitung dengan menggunakan persamaan Mark-Houwink sebagai berikut :

Viskositas relative ηr = η/ηo = t/t

viskositas intrinsic [η] = KM

c ; dengan nilai k’ 0,3 – 0,7

Dari data percobaan kemudian dibuat kurva hubungan antara ηsp

ln η

/c dengan c, sehingga diperoleh persamaan :

sp/c = ln [η] + k’ [η]2 c

(33)

Sifat polidispersi kitosan menurun seiring dengan semakin lamanya waktu penggunaan ultrasonic bath, dalam hal ini berbanding lurus dengan penurunan berat molekul. Sedangkan kristalinitas dari kitosan yang diberi perlakuan dengan ultrasonic

bath menunjukkan bahwa perlakuan dengan ultrasonic mengubah struktur fisik dari

kitosan, terutama bergantung pada penurunan berat molekul. Penggunaan ultrasonic mempertinggi aktivitas antimikroba dari kitosan, terutama bergantung pada berat molekul kitosan (Liu, 2005).

2.4 Nanopartikel

Nanopartikel merupakan partikel yang berukuran sangat kecil, sangat aktif dan memiliki karakteristik sangat istimewa seperti luas permukaan hingga rasio massa yang dapat meningkatkan kapasitas material nano tersebut. Sebagai tambahan dalam hal luas permukaan, nanopartikel juga memiliki sifat penyerapan yang unik.

Karakteristik dari nano partikel sangat beragam berdasarkan hal-hal berikut :

a. Ukuran

Ukuran bergantung pada bahan yang digunakan untuk menghasilkan nanopartikel. Sifat-sifat seperti kelarutan, transparansi, warna, absorpsi atau panjang gelombang emisi, konduktivitas, titik leleh dan sifat katalitik berubah hanya karena variasi ukuran partikel.

b. Komposisi

Perbedaan komposisi nanopartikel yang digunakan akan menunjukkan perbedaan sifat fisik-kimia bahan tersebut.

c. Permukaan

(34)

Nanopartikel memiliki jangkauan aplikasi yang luas mengenai polusi dan monitoring lingkungan. Pengolahan air limbah adalah area yang sangat penting dimana nanopartikel dapat digunakan secara efektif (Ghosh. 2010).

2.4.1 Klasifikasi Nanopartikel

Jain, 2008 mengklasifikasikan nanopartikel menjadi lima macam berdasarkan jenis materi partikel yaitu kuantum dot, nanokristal, lipopartikel, nanopartikel magnetik, dan nanopartikel polimer. Kuantum dot merupakan kristal berukuran nano dari suatu bahan semikonduktor yang bersinar atau berfluoresense apabila dikenai dengan cahaya seperti laser. Kuantum dot memiliki sifat tidak stabil dan sulit larut sehingga penggunaan kuantum dot harus ditanamkan dalam bahan penjerap karet. Beberapa kristal yang sering digunakan sebagai kuantum dot adalah kadmium selenida (CdSe) dan seng selenida (ZnSe). Pembuatan nanopartikel kuantum dot menggunakan gas mikroemulsi pada suhu kamar. Teknik ini memanfaatkan fase terdispersi dari berbagai mikroemulsi untuk beberapa nanoreaktor yang identik. Kuantum dot banyak digunakan sebagai penanda dalam pelacakan protein pada sel hidup, biosensor, ekspresi gen, pengambilan gambar sel hidup secara in vitro, dan melacak keberadaan sel kanker dengan bantuan Magnetic Resonance Imaging (MRI) secara in vivo.

(35)

silika hasil sedimentasi alga. Nanopartikel ini telah digunakan dalam sistem pengantaran obat dan terapi gen (Jain 2008).

Lipopartikel adalah matriks berukuran nano yang dikelilingi oleh lipid bilayer dan ditanamkan dalam protein membran integral. Jenis nanopartikel ini digunakan dalam biosensor, pengembangan antibodi, penelitian mengenai struktur reseptor kompleks, dan mikrofluida (Jain 2008).

Nanopartikel magnetik merupakan bahan penting untuk sortasi sel, pemisahan protein, dan pengukuran molekul tunggal. Partikel yang digunakan pada aplikasi tersebut harus memenuhi persyaratan seperti keseragaman ukuran, paramagnetik kuat, dan stabil dalam lingkungan larutan penyangga garam (Jain 2008).

2.4.2 Metode Pembuatan Nanopartikel

Menurut Soppimath et al. 2001, sediaan nanopartikel dapat dibuat dengan berbagai metode. Hingga saat ini, ada enam metode pembuatan nanopartikel yang sering digunakan yaitu metode emulsifikasi spontan atau difusi pelarut, salting out, fluida superkritis, polimerisasi monomer, polimer hidrofilik, dan dispersi pembentukan polimer.

Metode emulsifikasi spontan menggunakan prinsip difusi antar pelarut larut air seperti aseton dan metanol dengan pelarut organik tidak larut air seperti kloroform dengan penambahan polimer. Difusi yang terjadi antara dua pelarut tersebut mengakibatkan emulsifikasi pada daerah di antara dua fase pelarut. Partikel yang berada antara dua fase pelarut tersebut berukuran lebih kecil dari pada kedua fase pelarut itu sendiri (Soppimath et al. 2001).

(36)

Metode fluida superkritis menggunakan senyawa yang memiliki suhu dan tekanan di atas titik kritis. Senyawa yang termasuk dalam golongan ini antara lain karbon dioksida, air, dan gas metan. Senyawa ini digunakan sebagai pengganti pelarut organik yang berbahaya bagi lingkungan (Soppimath et al. 2001).

Metode polimerisasi monomer menggunakan senyawa poliakrilsianoakrilat (PACA). Metil atau etil sianoakrilat dimasukkan dalam media asam dengan penambahan surfaktan. Monomer sianoakrilat ditambahkan dalam campuran yang sedang diaduk dengan magnetic stirrer. Senyawa obat ditambahkan baik sebelum penambahan monomer maupun setelah reaksi polimerisasi. Suspensi nanopartikel yang terbentuk dimurnikan dengan ultrasentrifugasi (Soppimath et al. 2001).

Metode polimer hidrofilik tidak memerlukan surfaktan seperti metode polimerisasi monomer. Polimer yang digunakan dalam metode ini merupakan polimer larut air seperti kitosan larut air, natrium alginat, dan gelatin. Nanopartikel umumnya terbentuk secara spontan ataupun dengan penambahan pengemulsi (Soppimath et al. 2001).

(37)

dipisahkan dari zat penstabil dan surfaktan dengan menggunakan sentrifugasi. Pada teknik gelasi ionik dilakukan pencampuran antara polimer yang bersifat polikation dengan polianion.

Tiyaboonchai et al. 2003 menyatakan bahwa nanopartikel dapat dibuat melalui empat metode. Metode tersebut diantaranya gelasi ionik, mikroemulsi, difusi emulsifikasi pelarut dan komplek polielektrolit. Metode yang berkembang luas adalah metode gelasi ionik dan metode pembentukan kompleks polielektrolit (Tiyaboonchai

et al. 2003). Pada metode gelasi ionik, dilakukan pencampuran polikation kitosan

dengan polianion sodium tripolifosfat yang mengakibatkan interaksi antara muatan positif pada gugus amino kitosan dan muatan negatif pada TPP. Beberapa peneliti yang menggunakan metode gelasi ionik kitosan dengan TPP antara lain: Kumar (2000) dalam pembentukan nanopartikel kitosan poli(etilen oksida), ukuran nanopartikel yang diperoleh berkisar 200-1000 nm.

2.5 Kitosan Nanopartikel

(38)

Kim et al (2006) berhasil membuat kitosan nanopartikel berukuran 50-200 nm menggunakan metode ultrasonikasi dilanjutkan dengan metode pengering beku (Freeze Dryer).

Penelitian nanokitosan umumnya manggunakan senyawa pengikat silang dan surfaktan. Zat pengikat silang yang sering digunakan adalah glutaraldehida, sedangkan surfaktan yang banyak dipakai adalah surfaktan nonionik (Tween 80 dan span 80). Selain itu, ada senyawa yang bisa berfungsi sebagai pengikat silang sekaligus sebagai surfaktan, yaitu asam oleat (Wahyono, 2010).

Umumnya pembentukan ikatan silang ionik antara polikationik kitosan dengan senyawa polianion akan lebih disukai. Tripolifosfat (TPP) yang merupakan senyawa polianion merupakan zat pengikat silang yang baik. Kekuatan mekanik gel kitosan meningkat dengan menggunakan TPP karena TPP memiliki rapatan muatan negatif yang tinggi sehingga interaksi dengan polikationik kitosan akan lebih besar (Shu & Zhu 2002).

Metode yang paling umum dalam pembuatan nanopartikel melalui proses gelasi ionik yaitu metode magnetic stirrer, metode homogenizer ultrasonik dan metode high speed.. Salah satu contoh metode gelasi ionik ini adalah mencampurkan polimer kitosan dengan polianion sodium tripolifosfat yang menghasilkan interaksi antara muatan positif pada gugus amino kitosan dengan muatan tripolifosfat. Tripolifosfat dianggap sebagai zat pengikat silang yang paling baik (Mohanraj & Chen 2006). Proses terbentuknya kitosan nanopartikel dengan gelasi ionik dapat dilihat pada Gambar 2.3.

(39)

Dalam penelitian ini, pengikat silang yang digunakan adalah Tripolipospat (TPP).

2.6 Tripolipospat

Pembentukan ikatan silang ionik salah satunya dapat dilakukan dengan menggunakan senyawa tripolifosfat. Tripolifosfat dianggap sebagai zat pengikat silang yang paling baik. Shu dan Zhu (2002) melaporkan bahwa penggunaan tripolifosfat untuk pembentukan gel kitosan dapat meningkatkan mekanik dari gel yang terbentuk. Hal ini karena tripolifosfat memiliki rapatan muatan negatif yang tinggi sehingga interaksi dengan polikationik kitosan akan lebih besar. Menurut Yongmei dan Yumin (2003) dalam Wahyono (2010), pembentukan nanopartikel hanya terjadi pada konsentrasi tertentu kitosan dan TPP. Peran TPP sebagai zat pengikat silang akan memperkuat matriks nanopartikel kitosan. Dengan semakin banyaknya ikatan silang yang terbentuk antara kitosan dan TPP maka kekuatan mekanik matriks kitosan akan meningkat sehingga partikel kitosan menjadi semakin kuat dan keras, serta semakin sulit untuk terpecah menjadi bagian - bagian yang lebih kecil (Wahyono 2010).

Selain menggunakan pengikat silang, pembuatan kitosan nanopartikel dalam penelitian ini juga menggunakan surfaktan.

2.7 Surfaktan

(40)

pangan dan farmasi. Tarirai (2005) dalam Wahyono (2010) telah melakukan penelitian tentang pembuatan gel kitosan sebagai pembawa obat ibuprofen dengan menggunakan senyawa pengikat silang tripolifosfat dan senyawa surfaktan yang sekaligus berfungsi sebagai pengikat silang, yaitu asam oleat, sodium laurit sulfat (SLS) dan Tween 80. Dalam penelitian ini, surfaktan yang digunakan adalah asam oleat.

Asam oleat sering digunakan sebagai agen pengemulsi pada makanan dan formula obat-obatan. Asam oleat berwarna kekuningan, larut dalam benzene, kloroform, etanol 95%, eter, hexane, dan tidak larut dalam air.

2.8 Ultrasonic

Ultrasonik didefinisikan sebagai energi akustik atau gelombang suara dengan frekuensi diatas 20 KHz. Ultrasonikasi biasanya dianggap perusak bagi pertumbuhan sel. Ultrasonic meningkatkan transport molekul-molekul kecil dalam larutan berarir dengan meningkatkan konveksi dalam larutan (Ghosh. 2010).

Ultrasonik merupakan vibrasi suara dengan frekuensi melebihi batas pendengaran manusia, yaitu diatas 20 KHz. Batas atas rentang ultrasonik mencapai 5 MHz untuk gas dan mencapai 500 MHz untuk cairan dan padatan. Penggunaan ultrasonic berdasarkan rentangnya yang luas ini dibagi menjadi dua bagian. Yang pertama termasuk suara beramplitudo rendah (frekuensi lebih tinggi) dan berkaitan dengan efek fisik medium pada gelombang dan biasanya disebut “gelombang energi rendah” atau “ultrasonic frekuensi tinggi”. Biasanya, gelombang amplitudo rendah digunakan dalam tujuan analisis untuk mengukur kecepatan dan koefisien absorpsi gelombang dalam medium pada rentang 2 sampai 10 MHz. Yang kedua adalah gelombang energi tinggi (frekuensi rendah), yang dikenal dengan “ultrasonic energi tinggi” dan terletak antara 20 – 100 KHz. Jenis kedua ini digunakan untuk pembersihan, pembentukan plastik, dan yang terbaru adalah untuk sonokimia (Mason

(41)

Beberapa aspek penting dari sonokimia adalah aplikasinya dalam pembuatan dan modifikasi bahan-bahan organik maupun nonorganik. Ultrasonik intensitas tinggi dapat menginduksi konsekuensi fisika dan kimia yang cukup luas. Efek fisika dari ultrasonic intensitas tinggi salah satunya adalah emulsifikasi. Pada sistem polimer termasuk dispersi bahan pengisi dan bahan lainnya kedalam polimer dasar (contohnya pada formulasi cat), enkapsulasi partikel inorganic dengan polimer, modifikasi ukuran partikel pada serbuk polimer, hingga pembentukan dan pemotongan termoplastik.

Sedangkan efek kimianya, gelombang ultrasonik tidak secara langsung berinteraksi dengan molekul-molekul untuk menginduksi suatu perubahan kimiawi. Ini karena panjang gelombang ultrasonik yang terlalu panjang jika dibandingkan dengan panjang gelombang molekul-molekul. Interaksi gelombang ultrasonik dengan molekul-molekul terjadi melalui media perantara berupa cairan. Gelombang yang dihasilkan oleh tenaga listrik (lewat tranduser) diteruskan oleh media cair ke medan yang dituju melalui fenomena kavitasi akustik yang menyebabkan terjadinya temperatur dan tekanan lokal ekstrem dalam cairan dimana reaksi terjadi.

Gelombang suara biasanya diaplikasikan pada medium cairan menggunakan

ultrasonic bath atau ultrasonic horn. Medan listrik bolak-balik (sekitar 20 - 50 KHz)

menghasilkan vibrasi mekanis pada tranduser yang menyebabkan probe bervibrasi pada frekuensi medan listrik yang digunakan. Molekul-molekul cairan dibawah pengaruh medan akustik yang digunakan akan bervibrasi pada posisi seimbangnya dan tekanan akustik (Pa = PA sin 2π ft) akan tumpang tindih dengan tekanan lingkungan (biasanya tekanan hidrostatik, Ph). Selama perambatan gelombang suara dalam medium intensitas gelombang semakin menurun seiring makin besarnya jarak dari sumber radiasi.

Kitosan nano partikel yang telah dihasilkan dengan menggunakan instrument

(42)

2.9 Metode Freeze Drying

Freeze dryer awalnya digunakan untuk mengeringkan artefak. Spesimen

basah dibekukan secepat mungkin, khususnya dengan kecepatan pendinginan ratusan derajat Celsius per detik. Ukuran dari Kristal es yang terbentuk dalam spesimen bergantung pada kecepatan pendinginan, Pendinginan lambat menghasilkan Kristal berukuran besar dan sebaliknya.

Prinsip metode freeze drying adalah pengeringan suspensi sel dari fase cair dengan cara sublimasi melalui proses pembekuan terlebih dahulu. Proses

freeze-drying dibagi ke dalam tiga tahap. Tahap pertama, yaitu proses pembekuan. Tahap

kedua, yaitu proses pengeringan primer melalui proses sublimasi pada suhu rendah, sehingga menyebabkan sebagian besar air tertarik dari suspensi beku sel. Tahap ketiga, yaitu proses pengeringan sekunder pada suhu yang lebih tinggi dengan tujuan mengeringkan sisa air (Matejtschuk 2007).

• Tahap Freezing

Freezing adalah tahapan pertama dalam freeze-drying. Dalam tahap ini,

suspensi larutan didinginkan, dan kristal es dari air murni terbentuk. Karena proses

freezing terus berlanjut, maka ada semakin banyak air dalam cairan yang membeku.

Hal ini menyebabkan meningkatnya konsentrasi dari cairan yang tertinggal. Ketika suspensi cairan menjadi lebih terkonsentrasi, peningkatan viskositasnya menghalangi kristalisasi lebih lanjut. Cairan yang mengeras dengan konsentrasi dan viskositas yang tinggi ini berfasa amorf, kristal atau gabungan amorf-kristal. Sebagian kecil air yang tertinggal dalam cairan dan tidak membeku disebut bound water.

• Tahap Primary Drying

(43)

air berpindah dari permukaan produk ke kondensor melalui chamber, dan 4) uap air terkondensasi di dalam kondensor. Di akhir tahap sublimasi terbentuklah bagian yang berpori-pori. Tiap-tiap pori cocok dengan ruangan yang diisi dengan kristal es.

• Tahap Secondary Drying

Tahap secondary drying melibatkan penghilangan air yang diserap dari produk. Ini adalah air yang tidak dapat dipisahkan sebagai es pada tahap freezing, dan juga tidak dapat tersublimasi.

Ukuran sistem yang khas dari freeze dryer terdiri dari drying chamber mengandung shelves yang dapat diatur temperaturnya, yang dihubungkan dengan

condenser chamber melalui katup besar. Condenser chamber merupakan tempat dari

rangkaian plates atau coil yang temperaturnya dapat dipertahankan pada titik yang sangat rendah (di bawah -50oC). Satu atau lebih pompa vakum dalam rangkaian yang dihubungkan ke condenser chamber untuk dapat mencapai tekanan antara 4-40 Pa di dalam keseluruhan sistem selama pengoperasian.

Kitosan nanopartikel yang telah dikeringkan dengan freeze dryer kemudian diuji karakteristiknya dengan menggunakan SEM dan FTIR.

2.10 Spektrofotometer Fourier Transform Inframerah (FTIR)

(44)

Spektrofotometer inframerah konvensional dikenal sebagai alat dispersi. Dengan terhubung pada komputer dan mikroposesor sebagai alat dasarnya, hal ini telah tersebar luas dan dikenal dengan nama alat Fourier transform infrared (FTIR)

spectrometer, yang mana mempengaruhi sejumlah keuntungan. Dibandingkan suatu

kinerja pada monokromator, alat FTIR memakai suatu interferometer untuk mendeteksi peak yang mengandung pengganggu yang terdeteksi.

Pada alat interferometer, radiasi dari sumber IR konvensional dibedakan kedalam dua alur oleh suatu pemisah berkas cahaya, satu alur menuju posisi cermin yang ditentukan, dan yang lainnya menjauhi cermin. Ketika berkas cahaya dipantulkan, salah satu cahaya dipindahkan (keluar dari tahap) dari yang lainnya sejak ia menjadi lebih kecil (ataupun lebih besar) tujuan jaraknya untuk menjauhi cermin, dan mereka dikombinasikan kembali untuk menghasilkan suatu rumus gangguan (semua panjang gelombang dalam berkas cahaya) sebelum melewati sampel. Sampel mendeteksi secara serentak semua panjang gelombang, dan menukar rumus gangguan dengan waktu seperti cermin yang terusmenerus diteliti pada percepatan linier.Hasil penyerapan radiasi oleh sampel merupakan suatu spectrum dalam daerah waktu, yang disebut suatu interferogram, yang menyerap intensitas sebagai fungsi dari lintasan optis yang membedakannya dengan kedua berkas cahaya tersebut (Cristian,D.G.2005).

Suatu jenis interferogram yang mana tinggi bagian signal yang dihasilkan ketika kedua kaca diletakkan sama jauh dari pemisah berkas cahaya, ketika gangguan yang merusak diantara kedua cermin tersebut bernilai nol, dan disebut sebagai pusat masalah. Intensitas mulai menjauh secara cepat dari ini, menuju gangguan. Ini disesuaikan dengan menggunakan komputer, kedalam daerah frekuensi untuk mengetahui operasi matematika yang dikenal sebagai Fourier transformation (karenanya lebih dikenal dengan nama Fourier Transform Infra-red

Spectrophotometer). Suatu hasil spektrum inframerah yang ditunjukkan secara

(45)

Ketebalan film merupakan parameter kkritis dalam mempelajari IR dari degradasi polimer. Suatu reaksi panas oksidatif mungkin menjadi kontrol difusi jika film tebal lebih besar dari pada nilai tertentu. Dalam degradasi termal pada polimer, tingkatan difusi pada produk yang mudah menguap menjadi lebih dominan dan sisi reaksi diantara produk dan rantai radikal mungkin menjadi lebih besar luasnya dengan meningkatnya ketebalan film. Hal tersebut dicatat bahwa dalam film yang benar-benar tipis tingkat degradasi dapat ditinggkatkan untuk volatilisasi pada radikal-radikal dengan hasil pada reaksi radikal yang non-steady-state. Ini merupakan awal tujuan dari Florin et all untuk menjelaskan peningkatan tingkat degradasi pada polytetrafluoroetilena irradisi-ƒÁ dengan berkurangnya ketebalan film (Allen.1983).

2.10.1 Kegunaan Spektrofotometer

Spektrofotometer Fourier Transform Inframerah dapat melakukan semua

yang dapat dilakukan oleh spektrometer IR sederhana tetapi harganya lebih mahal. Oleh karena itu keahliannya memanipulasi dalam perlakuan dimana yang lainnya tidak dapat melakukannya, yang mana tidak bagus kecepatan dan kesensitifannya.

Piktogram sampel dapat memberikan spectra yang bagus, khususnya jika berkas cahaya difokuskan pada sampel dengan cermin atau sebuah lensa KBr. Diameter berkas cahaya pada beberapa mikrometer yang mungkin, dan hal tersebut menguntungkan jika sebuah mikrodetektor digunakan dalam kesatuan, jika detektor besar maka akan menghasilkan suara dari area itu yang mana tidak dalam berkas cahaya.

Menurut Dachriyanus (2004), spektrofotometer inframerah pada umumnya digunakan untuk: 1) Menentukan gugus fungsi suatu senyawa organik, dan 2) Mengetahui informasi struktur suatu senyawa organik dengan membandingkan daerah sidik jarinya.

Pengukuran pada spektrum inframerah dilakukan pada daerah cahaya inframerah tengah (mid-infrared) yaitu pada panjang gelombang 2,5 - 50 ƒÊm atau

(46)

menyebabkan vibrasi atau getaran pada molekul. Pita absorbsi inframerah sangat khas dan spesifik untuk setiap tipe ikatan kimia atau gugus fungsi. Spektrum yang dihasilkan berupa grafik yang menunjukkan persentase transmitan yang bervariasi pada setiap frekuensi radiasi inframerah (Dachriyanus, 2004).

2.10.2 Syarat Interpretasi Spektrum

Tidak ada aturan yang pasti dalam menginterpretasikan spektrum IR. Tetapi beberapa syarat harus dipenuhi dalam menginterpretasikan spektrum :

1. Spektrum harus tajam dan jelas serta memiliki intensitas yang tepat. 2. Spektrum harus berasal dari senyawa yang murni.

3. Spektrofotometer harus dikalibrasi sehingga akan menghasilkan pita atau serapan pada bilangan gelombang yang tepat.

4. Metoda penyiapan sampel harus dinyatakan. Jika digunakan pelarut maka jenis pelarut, konsentrasi dan tebal sel harus diketahui.

Karakteristik frekuensi vibrasi IR sangat dipengaruhi oleh perubahan yang sangat kecil pada molekul sehingga sangat sukar untuk menentukan struktur berdasarkan data IR saja. Spektrum IR sangat berguna untuk mengidentifikasikan suatu senyawa dengan membandingkannya dengan spektrum senyawa standar terutama pada daerah sidik jari. Secara praktikal, spektrum IR hanya dapat digunakan untuk menentukan gugus fungsi (Dachriyanus, 2004).

2.11 Scanning Electron Microscopy (SEM)

Mikroskop merupakan alat untuk melihat benda yang berukuran kecil (mm). Salah satu jenis mikroskop adalah SEM (scanning electron microscopy). Scanning

Electron Microscopy (SEM) menggunakan elektron dan cahaya tampak sebagai

(47)

Mikroskop elektron payaran (SEM) digunakan dalam pengamatan morfologi dan penentuan ukuran nanopartikel. Metode ini merupakan cara yang efisien dalam memperolah gambar permukaan spesimen. Cara kerja mikroskop ini adalah dengan memancarkan elektron ke permukaan spesimen. Informasi tentang permukaan partikel dapat diperoleh dengan pengenalan probe dalam lintasan pancaran elektron yang mengenai permukaan partikel. Informasi juga dapat dibawa oleh probe yang menangkap elektron pada terowongan antara permukaan partikel spesimen dengan tip

probe atau sebuah probe yang menangkap gaya dorong antara permukaan dengan tip

probe.

Pada sebuah mikroskop elektron (SEM) terdapat beberapa peralatan utama antara lain :

1. Pistol elektron, biasanya berupa filamen yang terbuat dari unsur yang mudah melepas elektron misal tungsten.

2. Lensa untuk elektron, berupa lensa magnetis karena elektron yang bermuatan negatif dapat dibelokkan oleh medan magnet.

3. Sistem vakum, karena elektron sangat kecil dan ringan maka jika ada molekul udara yang lain elektron yang berjalan menuju sasaran akan terpencar oleh tumbukan sebelum mengenai sasaran sehingga menghilangkan molekul udara menjadi sangat penting.

Prinsip kerja dari SEM adalah sebagai berikut:

1. Sebuah pistol elektron memproduksi sinar elektron dan dipercepat dengan anoda. 2. Lensa magnetik memfokuskan elektron menuju ke sampel.

3. Sinar elektron yang terfokus memindai (scan) keseluruhan sampel dengan diarahkan oleh koil pemindai.

(48)

Gambar 2.4 Skema SEM

Ada beberapa sinyal yang penting yang dihasilkan oleh SEM. Dari pantulan inelastis didapatkan sinyal elektron sekunder dan karakteristik sinar X sedangkan dari pantulan elastis didapatkan sinyal backscattered electron.

Perbedaan gambar dari sinyal elektron sekunder dengan backscattered adalah sebagai berikut: elektron sekunder menghasilkan topografi dari benda yang dianalisa, permukaan yang tinggi berwarna lebih cerah dari permukaan rendah. Sedangkan

backscattered elektron memberikan perbedaan berat molekul dari atom – atom yang

menyusun permukaan, atom dengan berat molekul tinggi akan berwarna lebih cerah daripada atom dengan berat molekul rendah.

Namun untuk mengenali jenis atom dipermukaan yang mengandung multi atom para peneliti lebih banyak menggunakan teknik EDS (Energy Dispersive

Spectroscopy). Sebagian besar alat SEM dilengkapi dengan kemampuan ini, namun

(49)

puncak tertentu yang mewakili suatu unsur yang terkandung. Dengan EDS kita juga bisa membuat elemental mapping (pemetaan elemen) dengan memberikan warna berbeda – beda dari masing – masing elemen di permukaan bahan. EDS bisa digunakan untuk menganalisa secara kunatitatif dari persentase masing – masing elemen.

Sedangkan kelemahan dari teknik SEM antara lain: 1. Memerlukan kondisi vakum

2. Hanya menganalisa permukaan 3. Resolusi lebih rendah dari TEM

4. Sampel harus bahan yang konduktif, jika tidak konduktor maka perlu dilapis logam seperti emas

Scanning electron microscopy (SEM) menghasilkan gambar dari suatu

(50)

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1.Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian FMIPA Universitas Sumatera Utara sedangkan karakterisasi dilakukan ditempat lain.

3.2. Alat dan Bahan 3.2.1 Alat-alat

- Neraca analitis

- Gelas ukur pyrex

- Labu takar pyrex

- Gelas Beker pyrex

- Plat kaca

- FTIR Shimadzu

- Ultrasonik bath

- Viskometer Brookfield

- SEM

3.2.2 Bahan

- Kitosan komersil

- Na. TPP p.a merck

- Asam Oleat p.a merck

- Etanol p.a merck

- CH3

- Aquades

(51)

3.3. Prosedur Penelitian

3.3.1. Pembuatan Larutan Asam Asetat 1%

Diukur 10 ml asam asetat p.a merck, kemudian dimasukkan kedalam labu takar 1 L dan di encerkan dengan aquades sampai garis tanda.

3.3.2. Pembuatan Larutan Asam Oleat 50%

Diukur 50 ml asam oleat p.a. merck dan diencerkan dengan menggunakan etanol 95% hingga 100 ml.

3.3.3. Pembuatan larutan Na- TPP 1%

Ditimbang 1 gram serbuk Na-TPP kemudian dilarutkan dengan aquades dan diencerkan hingga 100 ml.

3.3.4. Pembuatan Larutan Kitosan

Kitosan dengan Berat Molekuli tinggi dilarutkan dalam asam asetat 1% dalam gelas beker sehingga dihasilkan larutan kitosan dengan konsentrasi 0,2%, 0,4%, 0,6%, 0,8% dan 1%, kemudian diaduk dengan waktu pengadukan selama 10 menit hingga homogen. Larutan kitosan yang dihasilkan disimpan selama 1, 2 3, 4, 5 hari dan dilakukan pengujian viskositas larutan setiap harinya.

Dilakukan prosedur yang sama untuk kitosan dengan berat molekul sedang.

3.3.5. Pembuatan Kitosan Nanopartikel

(52)

3.4. Bagan Penelitian

3.4.1. Pembuatan Larutan Asam Asetat 1%

3.4.2. Pembuatan Larutan Asam Oleat 50%

3.4.3. Pembuatan Larutan Na-TPP 1%

Asam Asetat

Di ukur 10 ml

Dimasukkan dalam labu takar 1 L

Diencerkan dengan aquades sampai garis

Larutan Asam Asetat 1%

Asam Oleat

Di ukur 50 ml

Dimasukkan dalam labu takar 100 ml Diencerkan dengan etanol 95% sampai garis

Larutan Asam Oleat 50%

Na-TPP

Ditimbang sebanyak 1 gram Di larutkan dengan aquades

Diencerkan dengan aquades hingga 100 ml

(53)

3.4.4. Pembuatan larutan kitosan

Dilakukan prosedur yang sama untuk kitosan dengan BM sedang.

3.4.5. Pembuatan Kitosan Nanopartikel Kitosan BM tinggi

Larutkan dalam asam asetat 1%

Di aduk

Larutan Kitosan 0,2 %, 0,4 %, 0,6%, 0,8% dan 1%

Hasil

Di simpan selama 1, 2, 3, 4 dan 5 hari

Di uji viskositasnya dengan viscometer Brookfield

Larutan Kitosan

Di tambahkan Na-TPP 1% tetes demi tetes dan asam oleat sambil diaduk

Dimasukkan ke dalam ultrasonic bath selama 5 menit Larutan Kitosan Nanopartikel

Dikeringkan dalam freeze dryer

Kitosan

(54)

(55)

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1Uji Viskositas Larutan Kitosan

Pengujian viskositas larutan kitosan dilakukan dengan menggunakan viscometer Brookfield. Data hasil pengujian viskositas larutan kitosan dengan variasi lama penyimpanan disajikan dalam tabel 4.1.

Tabel 4.1. Viskositas Larutan Kitosan dengan Perbedaan Waktu

Hari

Viskositas Larutan Kitosan (cps)

0,2% 0,4% 0,6% 0,8% 1%

KS1 KS2 KS1 KS2 KS1 KS2 KS1 KS2 KS1 KS2 1 43 65 135 210 300 460 490 850 760 1550 2 38 59 112 205 286 424 412 811 646 1300 3 35 53 98 192 249 388 385 744 575 1215 4 31 46 87 181 205 347 366 695 505 1168 5 27 40 78 165 189 306 315 637 485 1115 Keterangan : KS1

KS

= kitosan berat molekul sedang

2 = kitosan berat molekul tinggi

(56)

Gambar 4.1. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 0,2%

Pada larutan kitosan 0,2% (gambar 4.1) terjadi penurunan viskositas mulai penyimpanan hari 1 sampai 5 sebesar 16 cps untuk kitosan dengan berat molekul sedang. Sementara untuk kitosan dengan berat molekul tinggi, terjadi penurunan sebesar 25 cps.

(57)

(58)

Gambar 4.5. Grafik perubahan viskositas larutan kitosan 1%

Pada larutan kitosan 1% (gambar 4.5) terjadi penurunan viskositas mulai penyimpanan hari 1 sampai 5 sebesar 275 cps untuk kitosan dengan berat molekul sedang. Sementara untuk kitosan dengan berat molekul tinggi, terjadi penurunan sebesar 435 cps.

Dari pengujian viskositas diketahui bahwa viskositas larutan kitosan menurun seiring dengan lamanya penyimpanan larutan kitosan. Pada larutan kitosan 0,2% penurunan viskositas yang terjadi tidak terlalu signifikan, namun pada larutan kitosan 1% terjadi penurunan viskositas yang sangat signifikan. Hal ini disebabkan karena terjadinya hidrolisis antara kitosan dengan larutan asam asetat. Kitosan memiliki gugus hidroksil dan amina yang dapat memberi jembatan hydrogen secara intermolekuler dan intramolekuler. Semakin lama waktu kontak antara kitosan

(59)

dengan asam asetat, ikatan hydrogen yang terbentuk antara Hidrogen dari gugus amina pada kitosan dengan Hidrogen dari asam asetat juga semakin banyak.

Menurut Muzzarelli 1977, untuk konsentrasi yang sama dengan berat molekul yang berbeda akan semakin nyata perubahan hidrolisis yang terjadi pada larutan kitosan, ini menunjukkan data pengujian viskositas larutan kitosan yang dilakukan memang mengalami hidrolisisis sesuai yang dilaporkan Muzzarelli.

Demikian juga untuk kitosan dengan berat molekul sama, semakin tinggi konsentrasi maka penurunan viskositas juga semakin nyata terlihat. Hal ini dikarenakan semakin tinggi konsentrasi berarti semakin banyak kitosan yang terlarut dalam larutan asam yang juga berarti semakin banyak gugus hidroksil dan amina yang terdapat dalam larutan sehingga semakin banyak jembatan hydrogen yang dapat terbentuk akibat kontak dengan larutan asam.

4.2Karakterisasi dengan SEM

Kitosan nanopartikel yang dihasilkan, dikarakterisasi dengan menggunakan instrument SEM untuk melihat morfologi partikel nano kitosan sehingga dapat diketahui homogenitas ukuran partikel yang dihasilkan.

(60)

Gambar 4.6. SEM kitosan nanopartikel dari kitosan dengan berat molekul sedang pada penyimpanan 1 hari

Dari gambar yang dihasilkan (gambar 4.6), dapat dilihat bahwa ukuran partikel nanokitosan yang dihasilkan kurang homogen, hal ini ditunjukkan dengan terdapatnya gumpalan pada gambar SEM yang dihasilkan.

(61)

Dari gambar yang dihasilkan (gambar 4.7), dapat dilihat bahwa ukuran partikel nanokitosan yang dihasilkan sangat homogen ditunjukkan dengan meratanya bentuk partikel yang terlihat pada gambar SEM yang dihasilkan.

Gambar 4.8. SEM kitosan nanopartikel dari kitosan dengan berat molekul sedang pada penyimpanan 2 hari (tidak homogen)

(62)

(63)

(64)

(65)

Dari sepuluh sampel yang diuji SEM, dapat terlihat bahwa kitosan nanopartikel yang dihasilkan paling baik adalah kitosan nanopartikel yang dibuat dari kitosan dengan berat molekul tinggi dan waktu penyimpanan larutan kitosan 1 hari (gambar 4.7.)

Pada gambar 4.7. terlihat bahwa kitosan nanopartikel yang dihasilkan memiliki morfologi yang seragam (homogen). Hal ini dikarenakan, pada kitosan dengan berat molekul tinggi dan waktu penyimpanan 1 hari, belum terjadi degradasi sehingga pengubahan kitosan menjadi ukuran nano menghasilkan partikel berukuran seragam (homogen). Sebaliknya, pada kitosan yang telah mengalami penyimpanan lebih dari 1 hari, gambar SEM menunjukkan adanya gumpalan-gumpalan yang berarti adanya perbedaan ukuran partikel dikarenakan telah terjadi degradasi pada kitosan akibat lamanya kontak dengan larutan asam.

4.3Hasil Uji FTIR

(66)

Gambar 4.17. Spektrum FTIR kitosan BM tinggi dengan waktu penyimpanan 1 hari

(67)

(68)

(69)

Dari karakterisasi yang telah dilakukan menunjukkan bahwa kitosan nanopartikel yang dihasilkan paling baik adalah kitosan nanopartikel yang dibuat dari kitosan berat molekul tinggi dengan penyimpanan selama 1 hari.

Kitosan dapat larut dalam asam asetat. Adanya gugus karboksil (-COOH) dalam asam asetat akan memudahkan pelarutan kitosan karena terjadinya interaksi hidrogen

antara gugus karboksil dengan gugus amina dari kitosan (Dunn et al.1997). semakin lama

interaksi antara kitosan dengan asam asetat makan semakin banyak interaksi hydrogen yang terjadi. Hal ini ditunjukkan oleh spectrum FTIR dimana terjadi pelebaran puncak pada pita serapan –OH.

Dari data percobaan yang dilakukan oleh Ramadhan, 2010 diketahui bahwa nilai Derajat Deasetilasi berkaitan dengan Berat Molekul Kitosan, dimana semakin tinggi derajat deasetilasi maka berat molekul kitosan akan semakin rendah. Lebih tingginya nilai Derajat deasetilasi menunjukkan lebih banyaknya gugus asetil yang hilang. Pada kitosan dengan berat molekul tinggi, gugus asetil yang hilang lebih sedikit daripada kitosan berat molekul sedang sehingga gugus asetil lebih banyak terdapat pada kitosan berat molekul tinggi. Lebih banyaknya gugus asetil ini disebabkan faktor morfologi rantai yang gugus asetamidanya semakin banyak pada derajat deasetilasi lebih rendah sehingga larutannya dalam asam akan menghasilkan larutan dengan viskositas lebih tinggi.

(70)

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1. Dari pengujian viskositas larutan kitosan dengan variasi konsentrasi 0,2%, 0,4%, 0,6%, 0,8% dan 1%, viskositas tertinggi adalah viskositas larutan kitosan 1% yang berasal dari kitosan Berat Molekul tinggi dengan penyimpanan 1 hari.

2. Dari pengujian dengan SEM diperoleh bahwa kitosan nanopartikel dengan ukuran partikel yang homogen dihasilkan dari larutan kitosan dengan viskositas tertinggi yaitu larutan kitosan 1% yang berasal dari kitosan dengan berat molekul tinggi dan penyimpanan 1 hari

5.2Saran

Dari hasil penelitian ini, penulis menyarankan untuk melakukan penelitian lebih lanjut dengan karakterisasi ukuran kitosan nanopartikel dengan menggunakan

(71)

DAFTAR PUSTAKA

Agusnar,H.2006.Penggunaan Kitosan Sebagai Bahan Penyalut Fiber Glass Dan

Filter Paper Untuk Penyerap Logam Ni Dan Cr Dengan system Aquatic.Disertasi.USU.Medan

Allen,S,N.1983.Degradation And Stabilisation Of Polyolefins. Applied Science

Publishers. New York.

Alsalvar, C, and Taylor, T, 2002. Seafoods Technology, Quality and Nutraceuticals

Applications. Berlin : Springer.

Bastaman, S. 1989. Studies on Degradation and Extraction of Chitin and Chitosan From Prawn Shells. England : The Queen’s University of Belfast.

Chen, Rong-Huei; Chang, Jaan-Rong and Shyur, Ju-Shii. 1997. Effects on Ultrasonic Conditions and Storage in Acidic Solutions on Changes in Molecular Weight and Polydispersity of Treated Chitosan. Carbohydrate Research. 299:287 -294

Cheung,W.H, S. Szeto, and G. McKay.2008.Enchancing The adsorption Capacities

Of Acid Dyes By A Chitosan NanoParticle. Department of Chemical

Engineering. University of Science and Technology.Hongkong.

Christian,D,G.2005. Analytical Chemistry.Sixth Edition.John Willey And Sons. New York.

Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organic Secara Spektroskopi.

Andalas University Press.Padang.

Dewi,Afrima.2010.Pengaruh Waktu Penggunaan Ultrasonik Bath terhadap

Sifat-sifat Karakteristik Kitosan Nanopartikel.Tesis.USU.Medan

Dunn,ET.EW. Grandmaison dan MFA. Goosen. 1997. Aplication and Properties of Chitosan. Di dalam MFA. Goosen (ed). Applications of Chitin and Chitosan. Technomic Pub,Basel.

Emmawati, Aswita, dkk. 2007. Kombinasi Perendaman dalam Natrium Hidroksida

dan Aplikasi Kitin Deasetilase terhadap Kitin Kulit Udang Untuk Menghasilkan Kitosan dengan Berat Molekul Rendah. Jurnal Teknologi