PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
TESIS
Oleh
ELVIDA 117030015/BIO
PROGRAM PASCASARJANA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
TESIS
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains dalam Program Studi Magister pada Program Pascasarjana Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara
Oleh
ELVIDA 117030015/BIO
PROGRAM PASCASARJANA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
PENGESAHAN
Judul Tesis : Pengaruh Kitosan Terhadap Komponen Darah , Kadar Hemoglobin, Sgpt dan Sgot pada Tikus (Rattus norvegicus L) yang Dipapar Plumbum Asetat
Nama Mahasiswa : Elvida Nomor Induk Mahasiswa : 117030015 Program Studi : Magister Biologi
Fakultas : Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara
Menyetujui
Pembimbing I, Pembimbing II,
Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M. Biomed. Dr. Salomo Hutahaean, M. Si.
NIP. 19660209 199203 1 003 NIP. 19651011 199501 1 001
Ketua Program Studi, Dekan,
Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M. Biomed.
PERNYATAAN ORISINALITAS
PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
TESIS
Dengan ini saya nyatakan bahwa saya mengakui semua karya tesis ini adalah hasil kerja saya sendiri kecuali kutipan dan ringkasan yang tiap satunya telah di jelaskan sumbernya dengan benar.
Medan, 28 Agustus 2013
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
Sebagai sivitas akademika Universitas Sumatera Utara, saya yang bertanda tangan di bawah ini :
Nama : Elvida
NIM : 117030015
Program Studi : Magister Biologi Jenis Karya Ilmiah : Tesis
Demi pengembangan ilmu pengetahuan, menyetujui untuk memberikan kepada Universitas Sumatera Utara Hak Bebas Royalti Non-Eksklusif (Non-Exclusive Royalty Free Right) atas Tesis saya yang berjudul :
PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
Beserta perangkat yang ada (jika diperlukan). Dengan Hak Bebas Royalti Non-Eksklusif ini, Universitas Sumatera Utara berhak menyimpan, mengalih data, menformat, mengelola dalam bentuk data-base, merawat dan mempublikasikan Tesis saya tanpa meminta izin dari saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis dan sebagai pemegang dan atau sebagai pemilik hak cipta.
Demikian pernyataan ini dibuat dengan sebenarnya.
Medan, 28 Agustus 2013
Telah diuji pada
Tanggal : 28 Agustus 2013
PANITIA PENGUJI TESIS
Ketua : Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed
Anggota : 1. Dr. Salomo Hutahaean, M.Si
2. Dr. Suci Rahayu, M.Si
3. Dr. Miswar Budi Mulya, M.Si
RIWAYAT HIDUP
DATA PRIBADI
Nama : Elvida, S.Pd M.Si
Tempat dan Tanggal Lahir : Sorkam Kanan, 20 September 1988
Alamat Rumah : Jl. Raden Saleh No.46 Sorkam Kanan
Tapanuli Tengah - 22563
Telepon : 085361101485
e-mail : [email protected]
Instansi Tempat Bekerja : YPI Amir Hamzah Medan
DATA PENDIDIKAN
SD : SD Negeri 153008 Tamat : 2000
SMP : SMP Negeri 4 Sorkam Tamat : 2003
SMA : SMA Negeri 1 Sorkam Tamat : 2006
Strata-1 : Biologi FMIPA UNIMED Tamat : 2010
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis sampaikan ke hadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia Nya, serta salawat beriring salam penulis sampaikan kepada Nabi Muhammad SAW, sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan hasil penelitian yang berjudul “Pengaruh Kitosan Terhadap Komponen Darah , Kadar Hemoglobin, SGPT dan SGOT Pada Tikus (Rattus norvegicus L) yang Dipapar Plumbum Asetat,” sebagai salah satu syarat untuk meraih gelar Magister Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara Medan.
Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: Bapak Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed sebagai Dosen Pembimbing 1, dan Dr. Salomo Hutahaean, M.Si selaku Dosen Pembimbing 2. Dr. Suci Rahayu, M.Si dan Dr. Miswar Budi Mulya, M.Si selaku Dosen Penguji yang telah memberikan banyak saran dan arahan dalam penulisan tesis ini. Bapak Ketua Departemen Pascasarjana Biologi, Bapak Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed. dan seluruh staf pengajar dan pegawai di Pascasarjana Biologi.
Penulis juga mengucapkan terimakasih Kepada Pemerintah Provinsi Sumatera Utara (PEMPROVSU) yang telah memberikan beasiswa untuk melanjutkan dan menyelesaikan studi saya di Pascasarjana Biologi FMIPA Universitas Sumatera Utara, Medan.
Ungkapan terima kasih yang tak ternilai harganya penulis ucapkan kepada kepada Ayahanda tercinta Haidin Sitanggang dan Ibunda Yusnar Pasaribu yang sudah memberikan doa, semangat, kasih sayang yang tak ternilai harganya. Kepada keluargaku, kakak tersayang Yuti Hanriani, S.Pd beserta Suami Muktiono, M.Si dan Adikku tersayang Santi Putri, S.Pd yang selalu memberikan doa, semangat dan dukungan moril kepada penulis selama ini.
Terima kasih kepada sahabat baik Hilda Sinaga, Kakak Ulina, da Zuwanna serta rekan-rekan mahasiswa/I Pascasarjana Biologi 2011 yang telah banyak berbagi suka dan duka dalam menjalani studi dalam 2 tahun ini. Terima kasih juga buat Dedek Dermawan, SH yang telah menjadi motivator dan sahabat penulis baik suka maupun duka.
Semoga tesis ini bermanfaat untuk semua pihak dan semoga Allah SWT memberikan balasan atas apa yang telah diberikan. Amin ya Rabbal Alamin.
Medan, Agustus 2013
PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
ABSTRAK
Pencemaran lingkungan oleh plumbum (Pb) antara lain diakibatkan oleh pertambangan, industri yang menggunakan Pb, dan asap kendaraan. Plumbum dapat mengakibatkan perubahan jumlah komponen seluler darah, kadar hemoglobin, serta kadar SGPT dan SGOT. Kitosan merupakan antioksidan yang dapat menurunkan atau menyerap logam berat sehingga tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh kitosan terhadap jumlah komponen seluler darah, kadar Hb, serta kadar SGPT dan SGOT yang telah dipapar plumbum selama 7 minggu. Penelitian dilakukan dengan menggunakan model rancangan acak lengkap (RAL) yang terdiri dari tujuh (7) perlakuan (K= Kontrol; P1= plumbum asetat 40 mg; P2= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 0,5% selama 5 minggu terakhir; P3= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 0,75% selama 5 minggu terakhir; P4= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 1% selama 5 minggu terakhir; P5= kitosab 1%; P6= pelarut asam asetat 1%), masing-masing perlakuan memiliki ulangan 5 ekor tikus. Pemberian asetat sebanyak 0,5% dan kitosan dengan konsentrasi 1% secara oral. Hasil penelitian menunjukkan bahwa plumbum asetat mempengaruhi komponen darah, kadar Hb dan kadar SGPT dan SGOT. Jumlah eritrosit dan kadar Hb tikus pada perlakuan P1-P4 terjadi penurunan jumlah eritrosit dan Hb secara nyata (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol. Kadar SGOT pada perlakuan P1-P4 mengalami peningkatan secara nyata (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol. Jumlah leukosit , trombosit dan SGPT tidak berpengaruh secara nyata (p>0,05) disetiap perlakuan. Pemberian kitosan dapat meningkatkan jumlah eritrosit dan kadar Hb dalam darah dan menurunkan kadar SGPT dan SGOT dalam darah. Konsentrasi kitosan yang dapat melindungi jumlah komponen darah normal, kadar Hb normal serta kadar SGPT dan SGOT normal tikus terhadap paparan plumbum adalah 1%.
THE EFFECT OF CHITOSAN PROTECTIVE OF WHITE RAT’S CELLULAR COMPONENT OF BLOOD HEMOGLOBIN AND
THE LEVELS OF SGPT AND SGOT (Rattus norvegicus L) THAT EXPOSED BY ACETATE PLUMBUM
ABSTRACT
Environmental plumbum pollution has been caused by mining, industries which use lead and vehicle exhaust. Plumbum able to changes in the number of cellular component of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT. Chitosan is an antioxidant that can reduce or absorb of heavy metals. This study was determine the effect of chitosan on the number of cellular components of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT of rats. They were exposed by acetate plumbum for 7 weeks. The research has been done from January until june 2013 with complete random design, which consist of seven treatments (K= control; P1= acetate plumbum 40 mg and chitosan 0,5% for 5 weeks; P3= acetat plumbum 40 mg and chitosan 0,75% for 5 weeks; P4= acetate plumbum 40 mg and chitosan 1% for 5 weeks; P5= chitosan 1%; P6= acetate acid 1%) which each treatment had replications of rats. The giving of acetate plumbum is 0,5 ml and the concentration of chitosan are 0,5%, 0,75% and 1% orally. The result of research showed Pb-acetate affect the amount of blood component, hemoglobin levels and levels of SGPT and SGOT. The results of number erytrosites and Hb level in the treatment of P1-P4 decreased number erythrocyte and Hb level were significantly (p<0,05) in each treatment. The result of SGOT in the treatment of P1-P4 increased level of SGOT were significantly (p<0,05) in each treatment. The result of number of leucocytes and platelets had no significant effect (p<0,05) in each treatment. The giving of chitosan affect increased number of erythrocytes and level of Hb and decreased level of SGPT and SGOT. The concentration of chitosan can be protected normally the number of cellular component of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT of rats exposed by acetated plumbum is 1%.
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR i
ABSTRAK ii
ABSTRACT iii
DAFTAR ISI iv
DAFTAR GAMBAR vi
DAFTAR LAMPIRAN vii
BAB 1 PENDAHULUAN 1
1.1 Latar Belakang 1
1.2 Perumusan Masalah 3
1.3 Tujuan Penelitian 4
1.4 Hipotesis 4
1.5 Manfaat Penelitian 5
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 6
2.1 KarakteristikLogamPlumbum (Pb) 6
2.2 Keracunan timbal 7
2.3 Pengaruh Pb pada Sistem peredaran darah 8
2.4 darah dan Komponen-komponennya 9
2.4.2 Fungsi Darah 9
2.4.3. Komposisi Darah 10
2.5 Biosintesis Hemoglobin 12
2.6 Interaksi Plumbum Dengan Hemoglobin 13
2.7 Kitosan 13
2.8 SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase)
dan SGPT (Serum Glutamic Pyruvic Transaminase) 15
BAB 3 BAHAN DAN METODE 17
3.1 Desain Penelitian 17
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian 17
3.2.1 Tempat Penelitian 17
3.2.1 Waktu Penelitian 17
3.3 Bahan dan Alat 17
3.4 Populasi dan Sampel Pemelitian 18
3.4.1 Populasi Penelitian 18
3.4.2 Sampel Penelitian 18
3.4.7 Persiapan Pembuatan Zat Warna
3.5 Pelaksanaan Penelitian 19
3.5.1 Pemeliharaan Hewan Percobaan 19
3.5.2 Plumbum Asetat 20
3.6 Prosedur Pemeriksaan 20
3.6.1 Penentuan Kadar Pb dalam darah 20 3.6.2 Penentuan Kadar Eritrosit, Leukosit dan Trombosit 21 3.6.3 Penentuan Kadar Hemoglobin 21 3.6.4 Penentuan Kadar SGPT dan SGOT dalam Darah 22
3.7 Analisis Data 23
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN 24
4.1 Kadar Plumbum Darah Tikus 24
4.2 Jumlah Sel Darah Merah (Eritrosit) Tikus 27 4.3 Jumlah Sel Darah Putih (Leukosit) Tikus 29
4.4 Jumlah Trombosit Tikus 31
4.5 Kadar Hemoglobin Tikus 32
4.6.1. Kadar SGPT Tikus 36
4.6.2 Kadar SGOT Tikus 36
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Struktur Kitin 12
Gambar 4.1 Grafik Rata-Rata Kadar Pb dalam Darah Tikus 12
Gambar 4.2 Grafik Rata-Rata Jumlah Eritrosit Tikus 27
Gambar 4.3 Grafik Rata-Rata Jumlah Leukosit Tikus 30
Gambar 4.4
Gambar 4.5
Gambar 4.6
Gambar 4.7
Grafik Rata-Rata Jumlah Trombosit Tikus
Grafik Rata-Rata Kadar Hemoglobin Tikus
Grafik Rata-Rata Kadar SGPT Tikus
Grafik Rata-Rata Kadar SGOT Tikus
32
33
35
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran A Surat Rekomendasi Persetujuan Etik Penelitian Kesehatan L-1
Lampiran B Data Hasil Analisis Plumbum dalam Darah Tikus L-2
Lampiran C Data Pemeriksaan Komponen Darah, Hb, SGPT dan SGOT Tikus L-3
Lampiran D Data Penghitungan Kadar Pb L-4
Lampiran E Data Penghitungan Jumlah Eritrosit L-5
Lampiran F Data Penghitungan Jumlah Leukosit L-6
Lampiran G
Lampiran H
Lampiran I
Data Penghitungan Jumlah Trombosit
Data Penghitungan Kadar SGPT
Data Penghitungan Kadar SGOT
L-7
L-8
PENGARUH KITOSAN TERHADAP KOMPONEN DARAH , KADAR HEMOGLOBIN, SGPT DAN SGOT PADA TIKUS
(Rattus norvegicus L) YANG DIPAPAR PLUMBUM ASETAT
ABSTRAK
Pencemaran lingkungan oleh plumbum (Pb) antara lain diakibatkan oleh pertambangan, industri yang menggunakan Pb, dan asap kendaraan. Plumbum dapat mengakibatkan perubahan jumlah komponen seluler darah, kadar hemoglobin, serta kadar SGPT dan SGOT. Kitosan merupakan antioksidan yang dapat menurunkan atau menyerap logam berat sehingga tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh kitosan terhadap jumlah komponen seluler darah, kadar Hb, serta kadar SGPT dan SGOT yang telah dipapar plumbum selama 7 minggu. Penelitian dilakukan dengan menggunakan model rancangan acak lengkap (RAL) yang terdiri dari tujuh (7) perlakuan (K= Kontrol; P1= plumbum asetat 40 mg; P2= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 0,5% selama 5 minggu terakhir; P3= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 0,75% selama 5 minggu terakhir; P4= plumbum asetat 40 mg dan kitosan 1% selama 5 minggu terakhir; P5= kitosab 1%; P6= pelarut asam asetat 1%), masing-masing perlakuan memiliki ulangan 5 ekor tikus. Pemberian asetat sebanyak 0,5% dan kitosan dengan konsentrasi 1% secara oral. Hasil penelitian menunjukkan bahwa plumbum asetat mempengaruhi komponen darah, kadar Hb dan kadar SGPT dan SGOT. Jumlah eritrosit dan kadar Hb tikus pada perlakuan P1-P4 terjadi penurunan jumlah eritrosit dan Hb secara nyata (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol. Kadar SGOT pada perlakuan P1-P4 mengalami peningkatan secara nyata (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol. Jumlah leukosit , trombosit dan SGPT tidak berpengaruh secara nyata (p>0,05) disetiap perlakuan. Pemberian kitosan dapat meningkatkan jumlah eritrosit dan kadar Hb dalam darah dan menurunkan kadar SGPT dan SGOT dalam darah. Konsentrasi kitosan yang dapat melindungi jumlah komponen darah normal, kadar Hb normal serta kadar SGPT dan SGOT normal tikus terhadap paparan plumbum adalah 1%.
THE EFFECT OF CHITOSAN PROTECTIVE OF WHITE RAT’S CELLULAR COMPONENT OF BLOOD HEMOGLOBIN AND
THE LEVELS OF SGPT AND SGOT (Rattus norvegicus L) THAT EXPOSED BY ACETATE PLUMBUM
ABSTRACT
Environmental plumbum pollution has been caused by mining, industries which use lead and vehicle exhaust. Plumbum able to changes in the number of cellular component of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT. Chitosan is an antioxidant that can reduce or absorb of heavy metals. This study was determine the effect of chitosan on the number of cellular components of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT of rats. They were exposed by acetate plumbum for 7 weeks. The research has been done from January until june 2013 with complete random design, which consist of seven treatments (K= control; P1= acetate plumbum 40 mg and chitosan 0,5% for 5 weeks; P3= acetat plumbum 40 mg and chitosan 0,75% for 5 weeks; P4= acetate plumbum 40 mg and chitosan 1% for 5 weeks; P5= chitosan 1%; P6= acetate acid 1%) which each treatment had replications of rats. The giving of acetate plumbum is 0,5 ml and the concentration of chitosan are 0,5%, 0,75% and 1% orally. The result of research showed Pb-acetate affect the amount of blood component, hemoglobin levels and levels of SGPT and SGOT. The results of number erytrosites and Hb level in the treatment of P1-P4 decreased number erythrocyte and Hb level were significantly (p<0,05) in each treatment. The result of SGOT in the treatment of P1-P4 increased level of SGOT were significantly (p<0,05) in each treatment. The result of number of leucocytes and platelets had no significant effect (p<0,05) in each treatment. The giving of chitosan affect increased number of erythrocytes and level of Hb and decreased level of SGPT and SGOT. The concentration of chitosan can be protected normally the number of cellular component of blood (erythrocytes, leucocytes and platelets), hemoglobin, and the levels of SGPT and SGOT of rats exposed by acetated plumbum is 1%.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1Latar Belakang
Indonesia merupakan salah satu negara berkembang yang sedang menggalakkan kegiatan industri. Industrialisi di Indonesia banyak menimbulkan dampak negatif terhadap lingkungan dan kesehatan masyarakat, salah satu diantaranya adalah pencemaran lingkungan. Logam berat plumbum (Pb) adalah salah satu bahan pencemar lingkungan yang dihasilkan dari kegiatan industri dan transportasi yang menimbulkan masalah serius dalam bidang kesehatan. Polusi Pb dilingkungan hidup biasanya berasal dari sektor pertambangan, peleburan logam, industri yang menggunakan bahan baku Pb (misalnya pabrik cat, kabel, enamel, gelas, baterai dan pestisida), dan sektor transportasi (Purwoningsih, 2008)
Plumbum masuk ke dalam tubuh manusia melalui saluran pernapasan, pencernaan dan permukaan kulit (Bartik, 1981). Plumbum merupakan jenis logam
berat yang bersifat toksik bagi tubuh manusia. Organ-organ tubuh yang menjadi sasaran dari keracunan plumbum adalah sistem peredaran darah, sistem saraf, sistem urinaria, sistem reproduksi, sistem endokrin dan jantung (WHO, 1977).
Plumbum di udara yang terhirup manusia berasal dari penggunaan bahan bakar berplumbum yang dalam pembakarannya melepaskan plumbum oksida yang berbentuk partikulat. Baku Mutu Udara untuk Plumbum adalah 0,06 µg/m3
Plumbum dapat mengakibatkan gangguan terhadap fungsi hati dan karakteristik seluler darah. Telah dilaporkan bahwa paparan Pb dapat menyebabkan anemia (Hariono, 2006 ; Soetopo, 2005), gangguan sintesis hemoglobin (Shannon, 1998 ; Hariono, 2005), kerusakan organ hati (Hariono,
2006 ; Gujawat, 2006) dan menyebabkan terjadinya sirosis pada hati (Hariono, 2005; Sipos et al., 2003)
Absorpsi Pb yang dihirup berbeda-beda tergantung dari bentuk ( uap atau partikel) dan kadar Pb kira-kira 90% partikel di udara diabsorpsi melalui saluran napas (Syarif et al., 2007). Ekskresi Pb membutuhkan waktu yang relatif lama. Telah dilaporkan bahwa waktu paruh Pb di eritrosit, ginjal, hati, dan tubulus lebih dari 30 hari. Ekskresi terutama pada sistem urinaria (76%), gastrointestinal (16%) sedangkan melalui rambut, kuku dan kelenjar sangat kecil (8%) (Klaassen et al., 1986).
Keracunan plumbum dapat diatasi dengan melakukan terapi dengan bahan penghelat. Bahan penghelat dapat mengikat logam-logam transisi seperti plumbum dengan cara mengikat logam plumbum dan membentuk ikatan kompleks dan bersifat hidrofilik sehingga dapat dikeluarkan bersama urin. Terkadang dikeluarkan dalam bentuk garam asam urat, asam hipourat dan keratin (Luckey dan Venugopel, 1977). Salah satu cara mempercepat ekskresi adalah dengan menggunakan senyawa penghelat (Sanghi, 2000; Wan Ngah et al., 1998;
Fernandez-Kim, 2004).
Kitosan alami juga mampu mengikat logam dan dapat dijadikan sebagai bahan pembersih air. Interaksi logam dengan kitosan membentuk ikatan kompleks, dengan cara mengikat molekul, pertukaran ion, dan khelasi (Sanghi, 2000). Kitosan merupakan turunan biopolimer karbohidrat alami yang diperoleh dari destilasi kitin. Kitin dapat diperoleh dari invertebrata laut, serangga, jamur dan ragi (Guibal, 2004). Elektron dari nitrogen yang terdapat pada gugus amina dapat mengakibatkan ikatan kovalen dative dengan ion-ion logam transisi, kitosan sebagai donor elektron pada ion-ion logam transisi (Guibal, 2004). Jenis crustaceae mengandung 20-30% kitin pada bagian eksoskletonnya. Sedangkan untuk dosis harian kitosan yang dianjurkan untuk pengobatan adalah 1-3 gram (Anonimus, 1999).
penghelat logam berat secara in vivo. Dengan demikian, akan dilakukan penelitian tentang pengaruh pemberian kitosan dengan konsentrasi yang berbeda terhadap jumlah dan karakteristik seluler darah, kadar hemoglobin serta gambaran jumlah enzim hati tikus putih yang dipapar plumbum asetat.
1.2 Perumusan Masalah
Penelitian mengenai pengaruh pemberian plumbum (Pb) terhadap fungsi organ-organ tubuh terutama bagaimana pengaruh plumbum terhadap kinerja darah sebagai alat transportasi dalam tubuh sudah banyak dilakukan sebelumnya. Kemudian diketahui pula bahwa penelitian mengenai kitosan merupakan bahan penghelat atau adsorben bagi logam berat seperti plumbum juga telah banyak dilakukan. Meskipun demikian, sejauh ini belum banyak dikaji bagaimana pengaruh pemberian kitosan terhadap gambaran karakteristik seluler darah (eritrosit, leukosit dan trombosit), hemoglobin serta gambaran enzim hati (SGPT dan SGOT) dari darah tikus yang dipapar plumbum asetat.
1.3 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian ini adalah:
1. Untuk mengetahui pengaruh pemberian plumbum terhadap komponen darah, kadar hemoglobin serta kadar SGPT dan SGOT darah tikus putih. 2. Untuk mengetahui pengaruh pemberian kitosan dengan konsentrasi yang
berbeda terhadap komponen darah, kadar hemoglobin, serta kadar SGPT dan SGOT darah tikus putih yang dipapar plumbum.
3. Untuk mengetahui konsentrasi kitosan yang dapat melindungi jumlah komponen darah normal, kadar Hb normal serta kadar SGPT dan SGOT normal tikus putih terhadap paparan.
1.4 Hipotesis Penelitian
Adapun yang menjadi hipotesis dalam penelitian ini adalah:
2. Pemberian kitosan berpengaruh dalam proteksi jumlah komponen seluler darah, kadar Hb serta kadar SGPT dan SGOT yang diakibatkan oleh Plumbum asetat.
1.5 Manfaat Penelitian
Hasil penenlitian ini diharapkan bermanfaat untuk :
1. Bahan informasi tentang efek industri terhadap lingkungan dan kesehatan. 2. Bahan informasi tentang bahaya plumbum yang berasal dari limbah
industri dan asap kendaraan.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Karakteristik Logam Plumbum (Pb)
Plumbum adalah suat
Pb dan Plumbum.
Plumbum (Pb) adalah logam berat yang terdapat secara alami di dalam kerak bumi (MSDS, 2005). Keberadaan plumbum berasal dari hasil aktivitas manusia, yang jumlahnya 300 kali lebih banyak dibandingkan Pb alami yang terdapat pada kerak bumi. Pb terkonsentrasi dalam deposit bijih logam. Unsur Pb digunakan dalam bidang industri modern sebagai bahan pembuatan pipa air yang tahan korosi, bahan pembuat cat, baterai, dan campuran bahan bakar bensin tetraetil (Purwoningsih, 2008).
Plumbum merupakan logam yang mendapat perhatian khusus karena sifatnya yan
melalui konsumsi makanan, minuman, udara, air, serta debu yang tercemar Pb. Pb sebagai salah satu komponen polutan udara mempunyai efek toksis yang luas pada manusia dan hewan dengan mengganggu fungsi saluran ginjal yang kronis bahkan menyebabkan gagal ginjal, gangguan pada saluran pencernaan, sistem saraf pada remaja, menurunkan fertilitas, menurunkan jumlah spermatozoa, dan meningkatkan spermatozoa abnormal dan aborsi spontan (Astuti, 2002).
dan kadar Pb kira-kira 90% partikel di udara diabsorpsi melalui saluran napas (Syarif et al., 2007).
2.2 Keracunan Plumbum
Keracunan yang ditimbulkan oleh logam Pb dapat terjadi karena masuknya logam tersebut kedalam tubuh. Proses masuknya Pb ke dalam tubuh dapat melalui beberapa jalur, yaitu melalui makanan dan minuman, udara dan perembesan atau penetrasi pada selaput atau lapisan kulit. Gejala keracunan Pb yang bersifat akut telah banyak diketahui, biasanya karena faktor ketidak sengajaan atau kecelakaan, misalnya karena terminum atau termakan. Adapun gejalanya berupa iritasi lokal pada saluran pencernaan. Gejala keracunan berupa bau logam di mulut, tenggorokan terasa kering, haus, rasa sakit dan terbakar di lambung, nausea, kolik serta muntah, Kadang-kadang disertai diare,tinja yang berdarah dan berwarna hitam (Bartik, 1981).
Sebagian Pb yang terhirup akan masuk kedalam pembuluh darah paru-paru. Tingkat penyerapan itu sangat dipengaruhi oleh ukuran partikel senyawa Pb
yang ada dan volume udara yang mampu dihirup pada saat bernapas. Makin kecil ukuran partikel debu dan semakin besarnya volume udara yang dihirup akan semakin besar pula konsentrasi Pb yang diserap tubuh. Plumbum yang masuk ke paru-paru melalui proses pernapasan akan terserap dan berikatan dengan darah di paru-paru, kemudian diedarkan ke seluruh jaringan dan organ tubuh. Lebih dari 90% Pb yang terserap oleh darah akan berikatan dengan sel-sel darah merah (Astuti, 2002).
janin dan selanjutnya setelah bayi lahir Pb akan dikeluarkan bersama ASI (Air Susu Ibu). Meskipun jumlah Pb yang diserap tubuh hanya sedikit ternyata Pb ini sangat berbahaya. Hal ini disebabkan senyawa-senyawa Pb dapat memberikan efek racun terhadap berbagai macam fungsi organ tubuh (Syarif et al., 2007)..
Daya racun Pb dalam tubuh diantaranya disebabkan oleh penghambatan enzim oleh ion-ion Pb2+. Enzim yang diduga dihambat adalah yang diperlukan untuk pembentukan haemoglobin. Penghambatan tersebut disebabkan terbentuknya ikatan yang kuat (ikatan kovalen) antara Pb2+ dengan sulfur yang terdapat di dalam asam-asam amino (misalnya sistein) dari enzim tersebut (Astuti, 2002).
2.3. Pengaruh Plumbum pada Sistem Perdaran Darah
Kira-kira 90% plumbum yang masuk ke dalam sirkulasi darah menuju ke eritrosit, ada juga yang ke albumin darah, α-globulin dan protein lain (Bartik, 1981). Plumbum mempengaruhi system peredaran darah dengan berbagai cara, yaitu dengan memperlambat pematangan normal sel darah merah (eritrosit) dalam
sum-sum tulang, hal ini menyebabkan terjadinya anemia serta mempengaruhi kelangsungan hidup sel darah merah. Cara berikutnya adalah dengan menghambat gerkan sel darah. Sel darah merah yang diberi perlakuan dengan plumbum, memperlihatkan peningkatan tekanan osmosis dan kelemahan pergerakan. Selain itu juga menghambat Na-K-ATPase yang meningkatkan kehilangan kalium intraselular yang bermuara pada anemia yang disertai oleh penyusutan waktu hidup sel darah merah (Delmann & Brawn, 1992).
2.4 Darah dan Komponen-Komponennya 2.4.1. Darah
peristiwa pembakaran atau metabolisme di dalam tubuh (Delmann & Brawn, 1992).
Karakteristik fisik darah meliputi viskositas atau kekentalan darah 4,5-5, temperaturnya sekitar 38oC, pH 7,37 – 7,4, salinitas 0,9%, berat 8 % dari berat badan serta volume 5-6 liter. Darah selama beredar didalam tubuh oleh karena adanya kontraksi dari pompa jantung. Selama darah berada dalam pembuluh darah maka akan tetap encer, tetapi kalau ia keluar dari pembuluhnya akan menjadi beku. Pembekuan ini dapat dicegah dengan jalan mencampurkan kedalam darah tersebut sedikit obat anti pembekuan atau sitras natrikus (Delmann & Brawn, 1992).
2.4.2. Fungsi Darah
Menurut Junquiera (1995), fungsi darah adalah sebagai alat pengangkut, yaitu mengambil oksigen atau zat pembakaran dari paru-paru untuk diedarkan ke seluruh jaringan tubuh, mengangkat karbondioksida dari jaringan
untuk dikeluarkan melalui paru- paru, mengambil zat- zat makanan dari usus halus untuk diedarkan dan dibagikan keseluruh jaringan atau alat tubuh, mengangkat atau mengeluarkan zat-zat yang tidak berguna bagi tubuh dikeluarkan melalui kulit dan ginjal. Kemudian sebagai pertahanan tubuh terhadap serangan penyakit dan racun dalam tubuh dengan perantaraan leukosit dan antibodi untuk mempertahankan tubuh terhadap invasi mikroorganisme dan benda asing (leukosit) dan proses homeostatis (trombosit). Dan juga sebagai pengatur regulasi yaitu mempertahankan PH dan konsentrasi elektrolit pada cairan interstitial melalui pertukaranion-ion dan molekul pada cairan interstitial, darah mengatur suhu tubuh melalui transport panas menuju kulit dan paru-paru.
2.4.3 Komposisi Darah
Darah terdiri atas plasma dan selsel darah. Plasma terdiri dari air, protein, dan bahan-bahan non protein. Plasma protein terdiri dari albumin (55%), globulin α, β,
trombosit. Dimana leukosit terbagi 2 yaitugranulosit: netrofil, eosinofil, dan basofil. Serata agranulosit: limfosit dan monosit (Junqueira et al., 1995).
a. Eritrosit (sel darah merah)
Eritrosit memiliki ciri-ciri, yaitu tidak berinti, mengandung Hb (protein yang mengandung senyawa hemin dan globin yang mempunyai daya ikat terhadap oksigen dan karbondioksida), bentuknya bikonkav, dibuat didalam sumsum merah tulang pipih sedang pada bayi di bentuk di hati. Setelah tua sel darah merah akan dirombak oleh hati dan dijadikan zat warna empedu (billirubin) (Junqueira et al., 1995). Untuk kisaran normal eritrosit seekor tikus putih dewasa adalah 7,2-9,6 juta/mm3 (Schalm, 1971).
b. Leukosit (sel darah Putih)
Eritrosit memiliki ciri-ciri, yaitu mempunyai inti, setiap 1 mm mengandung 6000-9000 sel darah putih, bergerak bebas secara amoeboid, berfungsi melawan kuman secara fagositosis, dibentuk oleh jaringan reticulum
endothelium disumsum tulang untuk granulosit dan kelenjar limpha untuk agrunulosit. Leukosit meliputi : Granulosit merpakan sel darah putih yang bergranula yang terdiri dari neutrofil merupakan granula merah kebiruan dan bersifat fagosit, basofil merupakan granula biru dan bersifat fagosit serta eosinofil yang bergranula merah dan bersifat fagosit. Sedangkan agranulosit merupakan sel darah putih yang sitoplasmanya tidak bergranula yang terdiri dari monosit dengan cirri-ciri memiliki inti besar, bersifat fagosit dan dapat bergerak cepat serta limphosit yang memiliki inti sebuah, untuk imunitas, tidak dapat bergerak (Delmann & Brawn, 1992 ; Junqueira et al., 1995). Kisaran normal leukosit tikus dewasa, yaitu 4000-10000/mm3 (Anonimus, 1991).
c. Trombosit
biru-keabu-abuan pucat yang berisi granula merah-ungu yang tersebar merata. Trombosit memiliki peran dalam sistem hemostasis, suatu mekanisme faali tubuh untuk melindungi diri terhadap kemungkinan perdarahan atau kehilangan darah. Fungsi utama trombosit adalah melindungi pembuluh darah terhadap kerusakan endotel akibat trauma-trauma kecil yang terjadi sehari-hari dan mengawali penyembuhan luka pada dinding pembuluh darah. Mereka membentuk sumbatan dengan jalan adhesi (perlekatan trombosit pada jaringan sub-endotel pada pembuluh darah yang luka) dan agregasi (perlekatan antar sel trombosit) (Delmann & Brawn, 1992 ; Junqueira et al.,1995).
Orang-orang dengan kelainan trombosit, baik kualitatif maupun kuantitatif, sering mengalami perdarahan-perdarahan kecil di kulit dan permukaan mukosa yang disebut ptechiae, dan tidak dapat mengehentikan perdarahan akibat luka yang disengaja maupun yang tidak disengaja. Agar dapat berfungsi dengan baik, trombosit harus memadai dalam kuantitas (jumlah) dan kualitasnya. Pembentukan sumbat hemostatik akan berlangsung dengan normal jika jumlah trombosit memadai dan kemampuan trombosit untuk beradhesi dan beragregasi
juga bagus (Delmann & Brawn, 1992).
2.5 Hemoglobin molekul organik dengan satu atom besi (Supariasa, 2002).
sitoplasma 2 molekul aminolevulenat dikatalisis oleh enzim delta-aminolevulenic acid dehydratase membentuk 2 molekul air dan 1 molekul porfobilinogen.
Dalam sitoplasma 4 unit porfobilinogen mengalami kondensasi membentuk polimer siklik yaitu uroporfobilinogen. Ada 2 isomer uroporfobilinogen, yaitu isomer tipe I dan isomer tipe III. Heme berasal dari isomer tipe III. Uroporfobilinogen III diubah menjadi koproporfirinogen III. Reaksi ini dikatalisis oleh uroporfobilinogen dekarboksilase. Kemudian koproporfirinogen III memasuki mitokondria, selanjutnya diubah menjadi protoporfirinogen. Dari 15 kemungkinan isomer hanya satu yang dibentuk, yaitu protoporfirinogen IX. Protoporfirinogen IX dioksidasi oleh protoporfirinogen oksidase menghasilkan protoporfirin IX. Oksidasi ini menghasilkan ikatan rangkap terkonjugasi yang merupakan ciri porfirin. Tahap akhir pembentukan heme adalah pemasukan ion ferro ke dalam protoporfirin yang dikatalisis oleh enzim ferrokatalase (Murray et al., 2003). Untuk kadar hemoglobin normal seekor tikus dewasa adalah 15-16 g/100 mm3 (Widjayakusuma dan Sikar, 1986).
2.6 Interaksi Plumbum Dengan Hemoglobin
Interaksi logam-logam berat pada oksihemoglobin dinyatakan sebagai sumber pembentukan radikal bebas superoksid (O2) pada eritrosit. Penelitian secara invitro menunjukkan bahwa plumbum secara bermakna memperbesar autooksidasi hemoglobin pada lisosom. Anemia merupakan tanda lanjut dan paling sering terjadi pada orang dewasa, biasanya ringan dan selalu hipokrom. Hal ini menunjukkan salah penggunaan Fe dalam sum-sum tulang sehingga Fe darah meningkat. Hal ini mengakibatkan pengurangan inkorporasi Fe kedalam eritrosit dan penimbunan Fe yang berlabihan dalam mithokondria precursor eritrosit. Anemia yang terjadi digolongkan sebagai anemia sideroblastik (Astuti, 2002).
2.7 Kitosan
Kitosan merupakan biopolymer alami turunan dari kitin, homopolymer dari (1-4)-amino-2-deoksi-β-D-glukosa. Kitin merupakan biopolymer alami terbesar kedua yang dapat ditemukan dialam setelah selulosa. Kitosan adalah turunan kitin yang hanya dibedakan oleh gugus radikal CH3. CO- pada struktur polimernya. Kitosan merupakan senyawa kimia yang berasal dari bahan hayati kitin, suatu senyawa organik yang melimpah di alam ini setelah selulosa (Ketty, 1942).
Kitin ini umumnya diperoleh dari kerangka hewan invertebrata dari kelompok Arthopoda sp, Molusca sp, Coelenterata sp, Annelida sp, Nematoda sp, dan beberapa dari kelompok jamur. Selain dari kerangka hewan invertebrate, juga banyak ditemukan pada bagian insang ikan, trachea, dinding usus dan pada kulit cumi-cumi. Sebagai sumber utamanya ialah cangkang Crustaceae sp, yaitu udang, lobster, kepiting, dan hewan yang bercangkang lainnya, terutama asal laut. Sumber ini diutamakan karena bertujuan untuk memberdayakan limbah udang (Ketty, 1942).
Kitosan adalah suatu rantai linear dari D – Glukosamin dan N – Asetil D –
Glukosamin yang terangkai pada posisi β (1-4 ).(Adriana et al, 2003). Kitosan adalah suatu kitin N – deasetilasi yaitu biomaterial yang mempunyai sifat biologi yang efektif seperti aktivitas bakteri (Sashiwa, 2003) , biodegradable, biokompatibel, dan tidak beracun (Kaban, 2007).
Kitosan mempunyai sifat polikationik, sehingga dapat dimanfaatkan sebagai agensia penggumpal. Kitin dan kitosan diakui sebagai biosorbent untuk penghilangan logam berat. Salah satu bahan pengklelat dari crustaceae adalah kitosan, yang diperoleh dari senyawa kitin yang terdapat dikulit (cangkang)nya lalu dengan proses deasetilasi diubah menjadi kitosan (Purwaningsih, 1994).
Gambar 1.1 Struktur Kitosan
Karena adanya gugus amino, kitosan merupakan polielektrolit kationik (pKa ≈ 6,5) hal yang sangat jarang terjadi secara alami. Sifat yang basa ini menjadikan kitosan :
a. Dapat larut dalam media asam encer membentuk larutan yang kental sehingga dapat digunakan dalam pembuatan gel. Dalam beberapa variasi konfigurasi seperti butiran, membrane, pelapis kapsul, serat dan spons. b. Membentuk kompleks yang tidak larut dengan air dengan polianion yang
dapat juga digunakan untuk pembuatan butiran gel, kapsul, dan membran. c. Dapat digunakan sebagai pengkhelat ion logam berat dimana gelnya
menyediakan sistem produksi terhadap efek destruksi dari ion (Meriaty,
2002)
2.7.2 Sifat – Sifat Fitokimia Kitosan 1. Sifat Fisika
kitin berkisar 5 – 8% tergantung pada tingkat deasetilasi sedangkan nitrogen pada kitosan kebanyakan dalam bentuk gugus amino. Maka kitosan bereaksi melalui gugus amino dalam pembentukan N – asilasi dan reaksi Schiff yang merupakan reaksi yang penting (Kumar, 2000).
2. Sifat Kimia
Adanya gugus amino dan hidroksil dari kitosan juga menyebabkan kitosan mudah dimodifikasi secara kimia antara lain dalam reaksi pembentukan :
a. N – Asil
Metode yang paling sederhana adalah dengan mereaksikan asam karboksilat dengan kitosan. Pemanasan larutan kitosan dalam asam formiat 100% pada suhu 90o
b. O – Asilasi
C dengan penambahan piridin sedikit demi sedikit untuk menghasilkan N – formilatosan serta N – Asetil dalam asetat 20%. Pereaksi yang paling banyak digunakan untuk N – Asilasi kitosan adalah asil anhidrida, baik dalam kondisi homogen dan heterogen
Gugus amino kitosan lebih reaktif daripada gugus hidroksilnya. Gugus
amino perlu diproteksi selama proses asilasi untuk menghasilkan O – asil Kitosan. Metode proteksi yang dilakukan antara lain melalui pembuatan basa Schiff disusul O – Asetilasi menggunakan larutan untuk mencegah hidrolisis asam dan basa Schiff.Pembuatan O – Asetil Kitosan dapat juga dilakukan dengan melarutkan kitosan terasetilasi dalam asam formiat 90% yang mengandung asetat anhidrida dengan HClO4 dengan asumsi protonasi akan mencegah terjadinya N – Asetilasi. N – dan O – Asetilasi kitosan juga dapat diperoleh bersamaan dengan menggunakan asil klorida. Caranya dengan merefluks kitosan dalam dodekanoil klorida berlebih – piridin – kloroform dan ditambah asam klorida sesudah direfluks 5 jam. Produk yang diperoleh sesudah 9 jam larut dalam kloroform, benzene, dietil eter, dan piridin.
c. Eter Kitosan
kitosan yang dipeorleh melalui prosedur pertama menghasilkan garam natrium dengan gugus amin bebas dalam bentuk busa ataupun garam hidroklorida dari asam amino dengan gugus karboksimetil dalam bentuk asam. Sensitifitas terhadap penambahan elektrolit meningkat dengan bertambahnya karboksilasimetilasi. (Sugita dkk., 2009).
2.7.3. Modifikasi Kitosan
Kitosan dapat dimodifikasi menjadi berbagai bentuk seperti serpih, hidrogel, membran dan butiran. Perbedaan bentuk kitosan akan mempengaruhi pada luas permukaannya. Semakin kecil ukuran kitosan, maka luas permukaan kitosan akan semakin besar.
a. Kitosan berbentuk serpihan
Afinitas kitosan bentuk serpihan telah diuji coba terhadap ion Pb+2, Ni+2, dan Cr+2 dan persentase pengikatan adalah 84 – 98, 40 – 92, dan 17 – 46% berturut – turut.
b. Hidrogel kitosan
Pelarutan kitosan dalam asam asetat merupakan cara sederhana untuk membentuk hidrogel kitosan. Hidrogel kitosan yang dibentuk oleh penambahan bahan senyawa penaut silang disebut hidrogel kitosan kovalen atau ionik. Penaut silang yang digunakan merupakan molekul berbobot molekul lebih rendah daripada bobot molekul kedua rantai polimer yang akan ditautkan.
c. Kitosan berbentuk membran
Membran dapat disiapkan dengan menggunakan beberapa metode antara lain pelelehan, pengepresan, track – etching, dan pembalikan fase. Pembalikan fase adalah proses yang mengubah polimer dari bentuk larutan menjadi bentuk padatan secara terkontrol. Asnel (2008) membuat membran gel kitosan – alginat dengan penaut silang glutaraldehida.
d. Kitosan berbentuk butiran
terbentuk dikumpulkan dan dicuci dengan akuades. Shentu, et al telah membuat kitosan dalam bentuk butiran yang digunakan untuk proses adsorpsi enzim catalase (Sugita dkk., 2009).
Kitosan mempunyai sifat antimikrobia melawan jamur lebih kuat dari kitin. Jika kitosan ditambahkan pada tanah, maka akan menstimulir pertumbuhan mikrobia mikrobia yang dapat mengurai jamur. Selain itu kitosan juga dapat disemprotkan langsung pada tanaman. Sifat kitin dan kitosan dapat mengikat air dan lemak. Karena sifatnya yang dapat bereaksi dengan asam-asam seperti polifenol, maka kitosan sangat cocok untuk menurunkan kadar asam pada buah-buahan, sayuran dan ekstrak kopi. Kitosan mempunyai sifat polikationik, sehingga dapat dimanfaatkan sebagai agensia penggumpal. Kitin dan kitosan diakui sebagai biosorbent untuk penghilangan logam berat. Salah satu bahan pengklelat dari crustaceae adalah kitosan, yang diperoleh dari senyawa kitin yang terdapat dikulit (cangkang)nya lalu dengan proses deasetilasi diubah menjadi kitosan (Purwaningsih, 1994). Kitosan dipelajari secara luas sebagai pengikat logam, larutan inorganic anionic,bahan pencelup, dan pestisida (Guibal, 2004). Gugusan
amina pada rantai kitosan merupakan tempat penghelat untuk logam transisi dan
β-1,4 glikosida bergabung dengan unit glukosamina yang tahan terhadap degradasi kimia dan bilogi (Bhuvana, 2006).
2.8 SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase) dan SGPT (Serum Glutamic Pyruvic Transaminase)
Enzim-enzim metabolisme terdapat di dalam hati yang kandungannya tertentu dan tidak berfluktuasi terjadi pada makhluk hidup sehat, tetapi bila terjadi kerusakan sel hati maka enzim seperti SGPT, SGOT akan meningkat konsentrasinya. Sehingga kadar enzim tersebut dapat digunakan sebagai indikator kerusakan hati (Dudeley et al., 1982).
kadar enzim aminotransferase dalam darah akan meningkat. Dua macam enzim aminotransferase yang paling sering dihubungkan dengan kerusakan sel hati adalah aspartat aminotransferase (AST) yang juga disebut SGOT dan alanin aminotransferase (ALT) yang juga disebut SGPT (Widman, 1989).
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1Desain Penelitian
Desain yang dilakukan pada penelitian ini adalah studi experimental pada tikus putih.
3.2Tempat dan Waktu penelitian 3.2.1 Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan dilaboratorium Struktur Perkembangan Hewan, Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara Medan, penghitungan kadar plumbum asetat pada darah dilakukan di Balai Riset dan Standarisasi Industri Medan (Kementrian Perindustrian RI) dan Penghitungan komponen darah, kadar Hb dan penghitungan kadar enzim SPGT dan SGOT di Balai Laboratotium Kesehatan Provinsi
Sumatera Utara.
3.2.2 Waktu penelitian
Waktu penelitian ini dilakukan pada bulan Januari sampai Juni 2013, kurang lebih selama 24 (dua puluh empat) minggu.
3.3Bahan dan Alat
Adapun bahan dan alat yang digunakan adalah sebagai berkut :
seperti darah, heparin dan reagen hematology diluens. Sedangkan alat yang digunakan adalah tabung reaksi dan beckmen coulter. Untuk penghitungan kadar Hb digunakan bahan seperti darah, heparin, larutan darkbin, dan kain kasa kering. Sedangkan alat yang digunakan adalah tabung reaksi, pipet dan spektrofotometer. Penghitungan kadar SGPT dan SGOT menggunakan bahan seperti darah, heparin, dan reagen GPT dan GOT. Sedangkan alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV.
3.4Populasi dan Sampel Penelitian 3.4.1 Populasi Penelitian
Populasi penelitian menggunakan tikus putih dewasa yang sehat, umur ± 3 bulan. Tikus tersebut belum pernah digunakan pada percobaan lain dan mempunyai berat badan berkisaran diantara 180 - 250 g yang diperoleh dari Laboratorium Fisiologi Hewan Biologi FMIPA USU Medan.
3.4.2. Sampel Penelitian
Rumus yang digunakan untuk menemukan besarnya sampel dalam penelitian ini agar hipotesa dapat dibuktikan dengan menggunakan rumus Federer (1963), sebagai berikut ;
(t-1) (n-1) ≥15 Keterangan;
t = kelompok perlakuan ( 7 kelompok ) n = jumlah sampel tiap kelompok
Dari rumus diatas dapat dihitung (n) untuk masing-masing kelompok adalah 4. Untuk menghindari kekurangan sampel maka pada tiap kelompok perlakuan ditambah 1, maka jumlah sampel yang dibutuhkan 35 ekor tikus putih (dimana tiap perlakuan ada 5 tikus) yang dipilih dengan teknik secara acak sederhana (simple Random sampling), dengan distribusi sebagai berikut ;
K = tanpa perlakuan (kontrol).
P2 = perlakuan Pb Asetat 40mg/kgBB/hari selama 7 minggu dan kitosan 0,5% selama 5 minggu terakhir.
P3 = perlakuan Pb Asetat 40mg/kgBB/hari selama 7 minggu dan kitosan 0,75% selama 5 minggu terakhir.
P4 = perlakuan Pb Asetat 40mg/kgBB/hari selama 7 minggu dan kitosan 1% selama 5 minggu terakhir.
P5 = perlakuan kitosan 1% selama 7 minggu.
P6 = perlakuan pelarut asam asetat 1% salama 7 minggu.
3.5. Penentuan Dosis Plumbum Asetat (Pb) dan Kitosan
Plumbum asetat diberikan kepada tikus dalam penelitian ini dalam bentuk serbuk yang dilarutkan didalam 0,5 ml aquabides. Dimana dosis Pb asetat yang diberikan adalah 40mg/kgBB/hari yang dimasukkan secara oral sebanyak 0,5 ml dengan menggunakan jarum gavage (Suprijono et al., 2012). Sedangkan kitosan yang diberikan ke tikus putih dalam bentuk larutan dengan pelarut 100ml asam asetat 1% dengan konsentrasi yang berbeda-beda yaitu kitosan 0,5%, kitosan 0,75% dan
kitosan 1% (Purwoningsih, 2008). Kitosan yang digunakan pada penelitian ini merupakan kitosan yang didapatkan dari laboratorium terpadu FMIPA USU.
3.6. Pelaksanaan Penelitian
3.6.1. Pemeliharaan Hewan Percobaan
percobaan selama berlangsungnya penelitian ini ditempatkan di laboratorium fisiologi hewan biologi FMIPA USU Medan.
3.6.2. Persiapan Hewan Percobaan
Masing-masing hewan percobaan dipersiapkan dalam kandang yang terpisah. Tikus dipilih dan dipisahkan secara random dalam keadaan baik, disiapkan untuk beradaptasi sebelum dilakukan penelitian. Sebelum perlakuan terhadap semua tikus, berat badannya ditimbang dan diamati kesehatannya secara fisik(berat badan, makan dan minum)setelah tikus-tikus beradaptasi maka untuk selanjutnya diberikan perlakuan plumbum asetat dan kitosan selama 7 minggu.
3.7 Prosedur Pemeriksaan
Satu hari setelah selesai perlakuan, berat badan tikus putih ditimbang yang terlebih dahulu dianastesi dengan ether. Tikus putih dimatikan secara dislokasi leher dan dibedah untuk diambil darahnya. Darah diambil sebanyak 3 ml dengan
menggunakan spuit, dimasukkan kedalam tabung yang telah berisi heparine dan disimpan pada suhu 40C (Wigfield & Farant, 1981). Selanjutnya darah dianalisa kadar Pb, jumlah komponen seluler darah (eritrosit, leukosit dan trombosit) dan kadar Hb dalam darah serta kadar SGPT dan SGOT darah tikus putih.
3.7.1 Penentuan kadar Pb dalam darah
3.7.2 Penentuan Jumlah Eritosit, Leukosit dan Trombosit
Penentuan jumlah eritrosit, leukosit dan trombosit darah, dilakukan penghitungannya di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara. Kadar komponen darah dihitung dengan menggunakan alat Hematology Analize (Beckman Coulter) untuk menghitung jumlah eritrosit, leukosit dan trombosit tikus putih. Sampel darah dimasukkan kedalam tabung dan dicampurkan dengan reagen hematology diluens dan dihitung jumlahnya dengan menggunakan alat Beckman Coulter dan hasil langsung dapat dibaca.
3.7.3 Penentuan Kadar Hemoglobin
Penentuan kadar hemoglobin dilakukan penghitungannya di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara. Kadar hemoglobin diukur dengan metode cyanmethemoglobin ( Bachyar, 2002). Adapun cara kerja yang dilakukan adalah dengan memasukkan sebanyak 5 ml larutan Darbkin kedalam tabung reaksi/botol kecil, mengambil darah sebanyak 20 μl dengan menggunakan pipet mikro atau pipet Sahli. jika ada kelebihan darah yang melekat pada bagian luar pipet dihapus
dengan kain kasa kering/kertas tissue. Darah dalam pipet dimasukkan kedalam tabung reaksi yang berisi larutan Drabkin. Pipet dibilas beberapa kali dengan larutan Drabkin tersebut. larutan ini campurkan dengan cara menggoyang tabung perlahan-lahan hingga larutan homogen dan dibiarkan selama 3 menit. Hasil penghitungan sudah dapat dibaca dan dicatat dengan melihat hasil bacaan pada spektrofotometer pada gelombang 546 nm.
3.7.4. Penentuan Kadar SGPT dan SGOT dalam darah
Pengamatan kadar enzim hati dilakukan dengan cara mengambil darah tikus putih (Rattus norvegitus) sebanyak 1 ml menggunakan jarum suntik 1 ml yang telah diberi heparin agar tidak terjadi koagulasi. Kemudian dimasukkan kedalam kotak es (box ice), diperiksa kadar SGPT dan SGOT dengan spektrofotometer panjang gelombang 365 nm di Balai Laboratorium Kesehatan.
kedalam tabung vacutest kemudian disentrifugasi untuk mendapatkan serumnya. Serum darah tikus dicampurkan dengan reagen GPT sebanyak 1000µl. setelah itu campuran diinkubasi selama 5 menit pada temperature 370C. kemudian absorbannya dibaca dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 340 nm. Kadar GOT dicari dengan cara yang sama seperti GPT tetapi menggunakan reagen GOT (Alawiyah, 2007).
3.7 Analisis Data
Data hasil penelitian untuk parameter kadar plumbum pada darah dan besar kadar komponen darah, Hb dan besar enzim SGPT dan SGOT dicatat dan disusun ke dalam tabel. Data kuantitatif (variabel dependen) yang didapatkan, diuji kemaknaannya terhadap pengaruh kelompok perlakuan (variabel independen) dengan bantuan program statistik komputer yakni program SPSS release 17.00 untuk menguji normalitas dan homogenitas data. Jika data berdistribusi normal dan homogen maka selanjutnya dengan uji anova pada taraf 5%. Jika tidak maka data ditransformasi, tetapi jika masih tidak normal maka data
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari penelitian yang telah dilakukan tentang pengaruh kitosan terhadap karakteristik darah, kadar hemoglobin, kadar SGPT dan SGOT yang dipapar plumbum asetat iperoleh hasil sebagai berikut:
4.1 Kadar Plumbum Darah
Pemberian Pb asetat berpengaruh secara nyata terhadap kadar plumbum dalam darah tikus (p>0,05). Secara statistik perlakuan P1-P4 berpengaruh nyata jika dibandingkan dengan control (p<0,05). Hal ini disebabkan karena adanya pemberian Pb asetat secara terus menerus selama 7 minggu, sehingga Pb asetat terakumulasi didalam darah dan menyebabkan kadar Plumbum meningkat.
Gambar 4.1. Grafik Rata-Rata Kadar Pb dalam Darah Tikus Putih
K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
Dari gambar 4.1 dapat dilihat rata-rata kadar Pb darah tikus putih pada perlakuan P1 (pemberian Pb asetat) memiliki kadar tertinggi yaitu 0,39µg/100mL jika dibandingkan dengan kelompok K1 (kontrol), P5(pemberian kitosan 1%) dan P6 (pemberian pelarut asam asetat 1%). Untuk rata-rata kadar kadar plumbum darah tikus pada kontrol (K1) yaitu 0,01µg/100mL begitu juga dengan kadar plumbum pada P5 dan P6 yaitu 0,01µg/100mL. Kadar plumbum pada perlakuan P2 (pemberian Pb asetat + kitosan 0,5%) yaitu 0,38µg/100mL, P3 (pemberian Pb asetat + kitosan 0,75%) yaitu 0,37µg/100mL dan P4 (pemberian Pb asetat + kitosan 1%) yaitu 0,30µg/100mL, jumlah eritrositnya lebih rendah jika dibandingkan dengan K1 yaitu kontrol. Terlihat bahwa adanya pengaruh yang diberikan oleh khitosan terhadap kadar plumbum dengan tingkat konsentrasi yang berbeda-beda yaitu 0,5%, 0,75% dan 1%.
Senyawa plumbum (Pb) merupakan senyawa logam berat yangterdapat dialam yang sifatnya berbahaya bagi kesehatan manusia apabila terkonsumsi. Hal ini terjadi dikarenakan logam berat dalam tubuh bersifat akumulatif (bioakumulatif).
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, pemberian larutan Pb asetat dapat meningkatkan kadar Pb dalam darah hewan uji P1 (perlakuan dengan pemberian Pb asetat) sebesar 10mg/0,5 mL aquades. Pemberian plumbum dapat menyebabkan tingginya kadar plumbu dalam darah, karena plumbum merupakan kelompok logam toksik yang dapat membentuk ligan kompleks dalam tubuh yang dapat mengganggu aktivitas enzim dan dapat menyebabkan kerusakan organ tubuh. Salah satu jalur metabolisme yang sangat dipengaruhi adalah system hemopoitik. Toksisistas timbale disebabkan adanya interaksi antara Pb dengan senyawa ligand yaitu gugus enzim –SH dari –ALAD dan enzim hemesintase. Sehingga terjadi hambatan sintesis hemoglobin. Plumbum juga dapat menghambat enzim feroketalase yang menyebabkan ion Fe tidak dapat berikatan dengan cincin protoporpirin, oleh karena terjadi kompetisi antara timbale dengan Fe. Proses ini menyebabkan penurunan kadar hemoglobin (Sugiharto, 2004)
Kelompok perlakuan P2-P4 yang diberikan dengan perlakuan plumbum asetat dan kitosan dengan konsentrasi yang berbeda-beda memperlihatkan terjadinya penurunan kadar plumbum dalam darah. Hal ini dikarenakan kitosan sebagai pengkhelat (absorben) untuk logam berat. Menurut Inoue et al., (1993) gugus hidroksil pada kitosan menyebabkan kitosan menjadi bersifat hidrofilik dan gugus amina pada rantai kitosan merupakan tempat pengkhelat untuk ion logam. Maka dari sifat-sifat inilah kitosan mempunyai kemampuan untuk mengikat plumbum. Hal ini didukung oleh pernyataan Suharsih (2008) bahwa kemampuan kitosan dalam mengkhelat plumbum dalam darah dapat dilihat dari kecenderungan penurunan kadar Pb darah yang terjadi. Dengan demikian terlihat bahwa pemberian kitosan juga meemberikan pengaruh yang positif terhadap efek plumbum yang terjadi.
4.2 Jumlah Sel Darah Merah (Eritrosit) Tikus
dibandingkan dengan kontrol (p<0,05). Pemberian kitosan mengurangi dampak buruk Pb (p>0,05)
Kelompok perlakuan P1-P4 berpengaruh nyata dengan kontrol (p<0,05). Hal ini dikarenakan pemberian jumlah plumbum yang diberikan secara terus menerus mengakibatkan berkurangnya jumlah eritrosit. Kelompok perlakuan P4 (pemberian plumbum asetat dan kitosan 75%) berbeda nyata terhadap kelompok P1 (pemberian plumbum asetat) dikarenakan adanya pemberian kitosan dengan konsentrasi yang lebiih tinggi yaitu 1%. Kelompok P5-P6 tidak berbeda nyata terhadap kadar plumbumdarah dibandingkan dengan control (K). hal ini dikarenakan pada perlakuan tidak dipapar oleh plumbum asetat sehingga hasil jumlah eritrosit yang diperiksa normal. Pengaruh pemberian Pb asetat dan kitosan terhadap jumlah eritrosit dapat dilikat jelas pada Gambar 4.2
Gambar 4.2 Grafik Rata-Rata jumlah Eritrosit dalam Darah Tikus Putih K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
Dari gambar terlihat bahwa rata-rata jumlah eritrosit pada darah tikus putih pada kontrol (K1) memiliki jumlah rata-rata yang sangat tinggi jika dibandingkan dengan perlakuan yang lainnya yaitu 8,26 juta/mm3 sedangkan untuk perlakuan plumbum 1% memiliki jumlah rata-rata yang paling rendah jika dibandingkan dengan rata-rata perlakuan yang lain yaitu P2 (Pb asetat + kitosan 0,5%), P3 (Pb asetat + kitosan 0,75%), P4 (Pb asetat + kitosan 1%;), P5 (kitosan 1%), dan P6 (pelarut asam asetat 1%). Sedangkan untuk jumlah kisaran normal seekor tikus putihdewasa adalah 7,2-9,6 juta/mm3 (Schalm, 1971). Dengan demikian pemberian Pb disini mengakibatkan jumlah eritrosit yang tidak normal pada tikus (P1 (plumbum asetat 10 mg)= 5,30 juta/mm3
Plumbum yang masuk kedalam sirkulasi darah menuju ke eritrosit, ada juga yang ke albumin darah, α-globulin dan protein lain (Bartik, 1981). Plumbum mempengaruhi system peredaran darah dengan berbagai cara, yaitu dengan memperlambat pematangan normal sel darah merah (eritrosit)dalam sumsum tulang, hal ini menyebabkan terjadinya anemia serta mempengaruhi kelangsungan hidup sel darah merah. Sel darah merah yang diberi perlakuan plumbum dengan plumbum, memperlihatkan peningkatan tekanan osmosis dan kelemahan pergerakan. Selain it juga memperlihatkan penghambatan Na-K-ATP ase yang meningkatkan kehilangan kalium intraseluler. Pengaruh ini menjelaskan bahwa kejadian anemia pada peristiwa keracunan plumbum disertai oleh penyusutan waktu hidup sel darah merah. Peristiwa tersebut juga mengakibatkan berkurangnya jumlah eritrosit darah.
).
Plumbum menyebabkan defisiensi enzim G-6DP dan penghambatan enzim pirimidin-5-nukleotisida pada pematangan eritrosit sehingga terjadi akumulasi degradasi RNA (pirimidyn nucleotides) serta ribosom. Hal ini menyebabkan turunnya masa hidup eritrosit dan meningkatnya kerapuhan membrane eritrosit, sehingga terjadi penurunan jumalah eritrosit (Ganiswara et al. 1995 dalam Nelma, 2008) hal ini didukung oleh pernyataan Kurniawati (1996) menyebutkan bahwa larutan plumbum dapat menyebabkan kerusakan eritrosit. Hal ini juga didukung oleh penelitian Wahyuni (2000) yang menyatakan bahwa pemberian larutan plumbum juga dapat menurunkan jumlah eritrosit.
semakin tinggi konsentrasi kitosan yang diberikan maka semakin banyak pula gugus amino (NH2
Hal ini didukung oleh pernyataan Meriatna (2008) bahwa kitosan berkemampuan mengikat logam dengan cara pengkhelat. Pengkhelat dalam hal ini adalah kitosan yang memiliki kadar nitrogen yang tinggi pada rantai polimernya. Persentase kitosan yang baik digunakan untuk menjaga eritrosit normal adalah kitosan dengan persentase 1% dikarenakan pada kondisi ini jumlah eritrosit sangat meningkat dibandingkan dengan kelompok yang memiliki persentase kitosan 0,50% dan 0,75%.
) didalam mengikat (mengkhelat) plumbum asetat yang masuk kedalam tubuh. Ini sesuai dengan pernyataan Wiyarsih dan Priyambodo (2011) bahwa kitosan dapat digunakan sebagai adsorben/penyerap yang daoat menyerap logam-logam berat seperti Zn, Cd, Pb< Mg dan Fe.
4.3 Jumlah Sel Darah Putih (Leukosit) Tikus Putih
Gambar 4.3 Grafik Rata-Rata jumlah Leukosit dalam Darah Tikus Putih K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
Gambar 4.3 menjelaskan bahwa rata-rata yang dimiliki oleh perlakuan dengan pemberian plumbum 1% (P1) memiliki rata-rata leukosit tertinggi jika dibandingkan dengan kontrol dan perlakuan yang lainnya yaitu 9,2X103/mm3. Sedangkan untuk rata-rata jumlah leukosit yang terendah adalah dimiliki oleh P5 yaitu perlakuan dengan pemberian kitosan 1%. Kisaran normal leukosit tikus putih dewasa, yaitu 4000-10.000/mm3 (Anonimus, 1991). Pada P1 (pemberian plumbum 1%) jumlah leukosit adalah 9200/mm3
fungsi sebagai system kekebalan tubuh dan juga melawan zat asing yang masuk kedalam tubuih. Hal inilah yang menyebabkan meningkatnya jumlah leukosit dalam darah.
Kitosan yang diberikan pada tikus setelah dipapari plumbum dalam hal ini memberikan pengaruh yang tidak cukup besar terhadap jumlah leukosit. Hal ini dikarenakan kitosan yang digunakan sebagai antioksidan mengikat (mengkhelat) plumbum asetat masuk kedalam tubuh sehingga leukosit tidak terlalu terangsang untuk memproduksi antibody didalam melawan antigen.
4.4 Jumlah Trombosit Tikus Putih
Pemberian Pb dan kitosan tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah trombosit (p>0,05) jika dibandingkan terhadap control. Secara statistic untuk setiap perlakuan (P1-P6) tidak berbeda nyata dengan kontrol (K). walaupun tidak berbeda nyata tetapi untuk kelompok P1 (pemberian plumbum 1%) jika dibandingkan dengan kelompok P1 jumlah trombosit meningkat. Hal ini diduga karena plumbum asetat yang diberikan dapat menyebabkan peningkatan jumlah trombosit. Peningkatan jumlah trombosit dalam darah menurt Smith (1988) disebabkan oleh meningkatnya jumlah leukosit pada tikus.
Gambar 4.3 Grafik Rata-Rata Jumlah Trombosit dalam Darah Tikus Putih K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
Gambar 4.4 menjelaskan bahwa jumlah rata-rata trombosit tertinggi dimiliki oleh kelompok perlakuan yang diberikan plumbum asetat 1% selama satu minggu dan diteruskan dengan pemberian kitosan 0,75% dengan rata-rata 276X103/ml. sedangkan untuk jumlah rata-rata trombosit terendah dimiliki oleh kontrol (K1) dan pemberian plumbum asetat 1% selama satu minggu dan diteruskan dengan penambahan kitosan 0,50% (P4) yaitu sebanyak 264X103
Kitosan yang diberikan dalam hal ii mempengaruhi keadaan trombosit dalam darah. Pada kelompok P2 tampak bahwa jumlah trombosit menurun. Hal ini diduga karena kitosan adalah sebagai adsorben yang dapat mengkhelat plumbum dalam darah tikus.
4.5 Kadar Hemoglobin (Hb) Tikus Putih
Pemberian Pb secara statistic berpengaruh nyata terhadap kadar hemoglobin (p<0,05). Dosis pemberian Pb yaitu 40/kgBB/hari menghasilkan kadar hemoglobin yang secara berbeda nyata terhadap control, dimana terlihat terjadi penurunan kadar hemoglobin darah. Pemberian kitosan mengurangi dampak yang diberikan oleh plumbum. Pengaruh plumbum asetat dan kitosan terhadap kadar hemoglobin setelah diberi plumbum disajikan pada gambar 6.
Gambar 4.5 Grafik Rata-Rata Kadar hemoglobin dalam Darah Tikus Putih K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
kadar Hb yang terendah dimiliki oleh kelompok P1 yaitu 13,24 g/100mL yaitu pada kelompok yang diberikan perlakuan dengan pemberian plumbum asetat 1%.
Kadar plumbum asetat di darah juga mempengaruhi kadar hemoglobin. Pemberian Pb asetat ini juga menunjukkan adanya penurunan kadar hemoglobin darah (13,24 g/100 mL). Hal ini sesuai dengan penelitian Sugiharto (2004), dan Hariono (2005) yang menunjukkan pemberian larutan timbal dapat mengakibatkan penurunan kadar hemoglobin darah tikus. Menurut Palar (2004), plumbum dapat menghambat proses pengikatan heme dengan globin sehingga Hb yang terbentuk berkurang. Kadar Pb dalam darah sebesar 0,5 µg/mL pada manusia dewasa dapat menurunkan sintesis Hb, pada kadar 0,8 µg/mL dapat mengakibatkan anemia, sedangkan pada anak-anak anemia dapat terjadi apabila dalam darah mengandung timbal pada kadar 0,7 µg/mL (WHO, 1987 ).
Adanya terdapat perbedaan yang nyata kadar Pb darah diantara kelompok perlakuan namun terdapat kecenderungan penurunan kadar Pb darah antara kelompok kontrol Pb dengan kelompok perlakuan yang diberikan kitosan (P2, P3 dan P4). Hal ini dapat dilihat dari kadar hemoglobin yang berbeda pada kelompok kontrol dan perlakuan. Untuk kadar hemoglobin normal tikus putih adalah 15-16 g/100 mm3
Kitosan mengandung gugus amina dan hidroksil (-OH) sehingga menyebabkan kitosan mempunyai reaktifitas kimia yang tinggi, bersifat polielektrolit kation sehingga dapat berperan sebagai penukar ion (ion exchanger) dan dapat berperan sebagai absorben terhadap logam berat dalam air limbah (Marganof, 2003). Menurut Inoue et al (1993) Rorrer dan Hsien (1993), gugus hidroksil pada kitosan menyebabkan kitosan menjadi bersifat hidrofilik , dan gugus amina pada rantai kitosan merupakan tempat pengkelat untuk ion logam. Maka dari sifat-sifat ini kitosan mempunyai kemampuan untuk mengikat plumbum darah. Hal ini didukung oleh Purwoningsih, 2008 yang mengatakan bahwa, kitosan mampu mengkhelat plumbum dalam darah dan dapat menaikkan kadar hemoglobin dalam darah dapat meningkat kembali. Dikarenakan adanya peranan kitosan sebagai pengkhelat dapat mengikat plumbum dalam darah. Dalam penelitian ini ko0nsentrasi kitosan paling efektif yang diberikan untuk memproteksi kadar Hb tetap normal adalah kitosan dengan konsentrasi 1%.
4.6 Kadar SGPT dan SGOT Tikus 4.6.1 Kadar SGPT Tikus Putih
Pemberian Pb dan kitosan tidak berpengaruh nyata terhadap kadar SGPT (p>0,05). Dosis pemberian Pb yaitu 40/kgBB/hari menghasilkan kadar SGPT yang secara statistik meningkat jika dibandingkan dengan kontrol. Pengaruh pemberian plumbum asetat dan kitosan terhadap kadar SGPT setelah diberi Pb disajikan pada gambar 4.6.
Gambar 4.6 Grafik Rata-Rata Kadar SGPT dalam Darah Tikus Putih K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
4.6.2 Kadar SGOT Tikus Putih
Pemberian Pb dan kitosan berpengaruh nyata terhadap kadar SGPT (p<0,05). Dosis pemberian Pb yaitu 40/kgBB/hari menghasilkan kadar SGPT yang secara statistik meningkat jika dibandingkan dengan kontrol. Pemberian kitosan mengurangi dampak buruk Pb. Pda kelompok P5 dan P6 kadar SGOT tidak berbeda nyata dengan control (p>0,05). Pengaruh pemberian plumbum asetat dan kitosan terhadap kadar SGOT setelah diberi Pb disajikan pada gambar 4.6.
Gambar 4.7 Grafik Rata-Rata Kadar SGOT dalam Darah Tikus Putih
K = Kontrol (tanpa perlakuan); P1= Pb asetat; P2= Pb asetat + kitosan 0,5%; P3= Pb asetat + kitosan 0,75%; P4= Pb asetat + kitosan 1%; P5= kitosan 1%; P6= pelarut asam asetat 1%
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat diambil kesimpulan sebagai berikut :
1. Pemberian plumbum menimbulkan peningkatan kadar plumbum dalam darah, penurunan jumlah eritrosit, trombosit dank afar Hb. Plumbum juga dapat mengakibatkan terjadinya peningkatan jumlah leukosit, kadar SGPT dan SGOT.
2. Pemberian kitosan pada tikus putih yang telah dipapar plumbum dapat membantu meningkatkan jumlah eritrosit dan menurunkan kadar SGPT dan SGOT dalam darah.
3. Konsentrasi kitosan yang dapat melindungi jumlah komponen darah normal, kadar Hb normal dan kadar SGPT dan SGOT normal tikus terhadap paparan plumbum adalah 1%.
5.2 SARAN
DAFTAR PUSTAKA
Adriana, AA. 2003. Adsorbsi Cr dengan Absorben Khitosan. Jurnal Kimia Lingkungan.
Alawiyah, L. 2007. Ekstrak Etanol Rumput Mutiara (Hesiots corymbosa) sebagai Antihepatoksik pada Tikus Putih yang Diinduksi Parasetamol. FMIPA Kimia ITB. Bogor.
Anonimus, 2009. Mega Khitosan Plus. Available at : 2013.
Attesahin, A S Yilmaz, I Karahan. 2005. The Effect of Vitamin E and Selenium on Cypermethrium Induced Oxidative Stress in Rat. Turkey Jouirnal Animal Science.
Asnel, H. 2008. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. UI Press. Jakarta.
Bartik, M. 1981. Veterinary Toxicology. Elsevier scientific Publishing company, New York.
Bachyar. 2002. Penilaian Status Gizi. Jakarta.
Buvana. 2006. Studied Of Frictional Behavior of Chitosan Pabric. Aux.Re.J/
Delmann, H.D. Buku Teks Histologi Veteriner II. Cetakan pertama. Edisi ke-3. Penerbit UI. Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 1991. Petunjuk Pemeriksaan Laboratorium Puskesmas. Jakarta
Dharwiyanti. 2004. Bahaya Pencemaran Timbal pada Makanan dan Minuman. Available from
Frances, K Widmann. 1989. Tinjauan Klinis Atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium Jakarta. EGC Gajawat. Penerbit Buku Kedokteran.
Guibal, E. 2004. Metal Ion Intraction with Chitosan A Review. Separation and Purification Tecnology.
Guyton, A.C. 1976. Buku Teks Fisiologi Kedokteran. Penerjemah: Adji D. Dan P. Lukmanto. EGC. Penerbit Buku Kedokteran.
Hariono, B. 2005. Efek Pemberian Plumbum (Timah Hitam) Anorganik pada Tikus Putih. J. Saint Vet.
__________ 2006. Efek Pemberian Plumbum (Timah Hitam) Organik pada Tikus Putih. J. Saint Vet.
Inoue, K.et all. 1994. Adsorbtion of Metal Ion on Chitosan and Chemically Modified Chitosan and Their Aplication to Hidrometalurgy. Bioteknology and Bioactive Polymer Gebelin, C. Carraher. Plennum Publishing. New York.
Junquiera, J.C., J. Kelley, R.O. alih bahasa, jan Tambayong. 1995. Histologi Dasar. Edisi ke-8 EGC. Jakarta.
Kaban, J. 2007. Modifikasi Kimia dari Kitosan dan Aplikasi Produk yang dihasilkan. Pidato pengukuhan Guru Besar. Kimia FMIPA Medan.
Kumar, M.N.V.R. 2000. A Review of Chitin and Chitosan Aplication. Reactive and Fugsional Polimer.
Lukey, T.D. 1977. Metal Toxity in Mamalas Physiologyc and chemical Basis for Metal Toxid. Plennum Press. New York.
Meryati. 2002. Pembuetan dan Karakterisasi Membran Kalsium. Thesis. Medan.
Meyes PA, DK Granner. 1991. Biokimia. Alih bahasa Iyan Darmawan. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Murray, K.R, Granner. Mayes. 2003. Biokimia Harper. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Nasution, F.A. 2004. Bahaya Timbal dan Permasalahannya. Republika Online :
Purwaningsih, 1994. Teknology Pembekuan Udang. PT Penebar Swadaya. Bogor.
Sadikin, M. 2002. Biokia Enzim. Widya Medika. Jakarta.
Sanghi, R. 2000. Recearch News. Whats up with chelates. Current Science.
Saraswati, T. R. 1998. Analisis Kadar Timah Hitam dalam Darah dan pengaruhnya terhadap Aktivitas Enzim Delta-ALAD dan Kadar Kemoglobin Darah Kariawan di Industri Timah Hitam. Thesis, Program Pascasarjana Universitas Padjajaran. Bandung.
Shanno M W. 1998. Lead In : Haddad L.M. Clinical management of Poisoning and Drug Overdose, philadelpia . W.B Saunders
Smith BJ. Wangkoewidjojo S. 1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan Penggunaan Hewan Cobaan di Daerah Tropis. Agromedia Pustaka. Jakarta.
Soetopo. 2005. Toksisistas Limbah Padat Industri Pulp dan Kertas Terhadap aktivitas Delta-ALAD dan Karakteristik Darah Tikus Wistar jantan. Sekolah Ilmu dan Hayati-ITB. Bandung.
Sugita, P dkk. 2009. Kitosan Sumber Biomaterial Masa Depan. IPB Press Bogor.
Supariasa, dkk. 2002. Penilaian Status Gizi. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Wibowo AW, L. 2008 Pengaruh Pemberian Perasan Buah Mengkudu (Morinda citrifolia) terhadap Kadar SGPT dan SGOT Tikus Putih (Rattus norvegicus) diet Tinggi Lemak. Jurnal Veterineria Medika Universitas Airlangga.
Widjajakusuma, R & S.H.S Sikar. 1986. Diktat Kuliah Fisiologi Hewan. Bogor. IPB
