• Tidak ada hasil yang ditemukan

Analisis Akrilamida Dalam Minyak Goreng Bekas Pakai Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2016

Membagikan "Analisis Akrilamida Dalam Minyak Goreng Bekas Pakai Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi"

Copied!
143
0
0

Teks penuh

(1)

ANALISIS AKRILAMIDA DALAM MINYAK GORENG

BEKAS PAKAI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

TINGGI

SKRIPSI

OLEH:

SEPTILINA MELATI SIRAIT NIM 071501041

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

(2)

ANALISIS AKRILAMIDA DALAM MINYAK GORENG

BEKAS PAKAI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

TINGGI

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara

OLEH:

SEPTILINA MELATI SIRAIT NIM 071501041

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

(3)

PENGESAHAN SKRIPSI

ANALISIS AKRILAMIDA DALAM MINYAK GORENG

BEKAS PAKAI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

TINGGI

OLEH:

SEPTILINA MELATI SIRAIT NIM 071501041

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara Pada tanggal: Juni 2011

Pembimbing I, Panitia Penguji,

Drs. Nahitma Ginting, MSi, Apt. Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt. NIP 195406281983031002 NIP 195201041980031002

Pembimbing II, Drs. Nahitma Ginting, M.Si., Apt.

NIP 195406281983031002

Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt.

NIP 195006071979031001 Dra. Syahrial Yoenoes,SU., Apt. NIP 195112061983031001

Drs. Siti Nurbaya., Apt.

NIP 19500826174122001

Dekan,

(4)

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan berkatNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Analisis Akrilamida dalam Minyak Goreng Bekas Pakai secara Kromatografi Cair Kinerja TInggi”. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)..

Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih yang tiada terhingga kepada Ayahanda T. Sirait, Ibunda Alm.M. Hutapea, Kakanda Agustini Sirait, S.T, Kakanda Lestari, S.H dan kakanda penulis lainnya serta semua keluarga yang tidak dapat disebutkan satu per satu, yang telah banyak memberikan doa dan dorongan serta bantuan moril dan materil kepada penulis selama menempuh pendidikan S-1 Farmasi.

Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Bapak Drs. Nahitma Ginting, M.Si., Apt. dan kepada Bapak Prof. Dr. Jansen Silalahi, M. App. Sc., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah banyak memberikan bimbingan dan bantuan yang sangat berarti mulai dari penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini.

Pada kesempatan ini penulis juga menyampaikan ucapan terima kasih kepada:

(5)

2. Ibu Dra. Saleha Salbi, M.Si., Apt., selaku Dosen Penasehat Akademik yang telah memperhatikan dan membimbing penulis selama masa perkuliahan.

3. Bapak Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt., Ibu Dra. Siti Nurbaya., Apt., dan Bapak Drs. Syahrial Yoenoes,SU., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran kepada penulis hingga selesainya penulisan skripsi ini.

4. Seluruh Staf Pengajar dan Pegawai Tata Usaha di Fakultas Farmasi, khususnya Operator di Laboratorium Penelitian (Kak Mustika, Kak Tina, Bang Abdi dan Bang Limiyanto) yang telah banyak membimbing penulis selama perkuliahan dan membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian ini.

5. Sahabat-sahabatku “Rejoicing in Love” (Santa, Ira, Debi, Alex, Eva, Novalina, Via, Trie, Martin, Vintha, Juwita, Sari, Jimmy, Sandro, Fida, Cory, Rachmad, Ernal, Hendry, Febri, Wandi, Fanny, Silvana, Melisa, dan Sylvia).

6. Teman-teman Farmasi 2007 khususnya konsentrasi Sains dan Teknologi Farmasi serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih memiliki banyak kekurangan, dengan segala kerendahan hati penulis bersedia menerima kritik dan saran yang membangun pada skripsi ini. Semoga skripsi ini bermanfaat bagi kita semua.

Medan, Juni 2011

Penulis,

(6)

ANALISIS AKRILAMIDA DALAM MINYAK GORENG BEKAS PAKAI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Abstrak

Akrilamida merupakan suatu senyawa toksik yang terbentuk dari karbohidrat, protein dan lipid selama proses pengolahan pangan dengan penggorengan pada temperatur yang tinggi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

Sampel minyak goreng bekas pakai berjumlah 9 dan diambil dari rumah tangga penduduk yang bertempat tinggal di Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur. Analisis akrilamida dilakukan secara kromatografi cair kinerja tinggi dengan perbandingan fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (15:85), laju alir 1 ml/menit, dan detektor UV pada panjang gelombang 210 nm yang telah memenuhi persyaratan validasi.

Validasi metode menunjukkan bahwa prosedur analisis yang dilakukan memiliki akurasi dan presisi yang baik yakni dengan persen perolehan kembali 100,16 % ( RSD = 2,71%).

Hasil penelitian menunjukkan bahwa terbentuknya akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai. Kadar akrilamida yang tertinggi yaitu 1,5047 mcg/g dengan 2 kali perulangan dan kadar akrilamida yang terendah yaitu 0,0950 mcg/g dengan 1 kali perulangan.

(7)

ANALYSIS OF ACRYLAMIDE IN USED FRYING OIL BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Abstract

Acrylamide is a toxic substance formed in carbohydrate, protein and lipid at the food processing with frying in high temperature. The aim of this research was to analyze acrylamide in used frying oil by high performance liquid chromatography (HPLC).

There are nine samples of used frying oil and were obtained from the citizen at Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur. Analysis acrylamide was done by using methanol-0,1% phosphoric acid solution mixture ( 15:85 ) applied as mobile phase at the flow rate of 1 ml/minute and the wavelength 210 nm which fullfill the requirements of validation.

Method validation has performed that research procedure have a good accuracy and precision with percent recovery 100, 16 % ( RSD = 2,71%).

The result of this research shows that acrylamide was formed in used frying oil.The highest level is 1,5407 mcg/g with two times frying and the lowest level is 0,0950 mcg/g with one time frying.

(8)

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL

HALAMAN PENGESAHAN ... iii

KATA PENGANTAR ... iv

ABSTRAK ... vii

ABSTRACT ... viii

DAFTAR ISI ... ix

DAFTAR TABEL ... xii

DAFTAR GAMBAR ... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ... xiv

BAB I PENDAHULUAN ... 1

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Perumusan Masalah ... 3

1.3 Hipotesis ... 3

1.4 Tujuan Penelitian ... 3

1.5 Manfaat Penelitian ... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 4

2.1 Akrilamida ... 4

2.1.1 Sifat Fisikokimia ... 4

2.1.2 Kegunaan Umum ... 4

2.1.3 Farmakokinetika ... 5

(9)

2.1.5 Proses Pembentukan Akrilamida dalam Minyak

Goreng Bekas Pakai ... 6

2.1.6 Ekstraksi akrilamida dalam Minyak Goreng Bekas Pakai ... 6

2.2 Analisis Akrilamida dalam Makanan ... 8

2.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ... 10

2.3.1 Jenis – jenis KCKT ... 10

2.3.2 Instrumen KCKT... 11

2.3.2.1 Wadah Fase Gerak ... 12

2.3.2.2 Pompa ... 12

2.3.2.3 Injektor ... 12

2.3.2.4 Kolom ... 13

2.3.2.5 Detektor ... 13

2.3.2.6 Perekam ... 13

2.3.3 Parameter Penting dalam KCKT ... 14

2.3.3.1 Tinggi dan Luas Puncak ... 14

2.3.3.2 Waktu Tambat ... 14

2.3.3.3 Faktor Kapasitas ... 15

2.3.3.4 Selektifitas ... 15

2.3.3.5 Efisiensi Kolom ... 16

2.3.3.6 Resolusi ... 16

2.3.3.7 Faktor Asimetri ... 17

2.4 Validasi Metode ... 17

2.4.1 Akurasi ... 18

(10)

2.4.3 Spesifitas ... 19

2.4.4 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi... 20

2.4.5 Linearitas ... 20

2.4.6 Rentang ... 21

2.4.7 Kekuatan ... 21

BAB III METODE PENELITIAN ... 22

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ... 22

3.2 Bahan-bahan ... 22

3.2.1 Sampel ... 22

3.2.2 Pereaksi ... 22

3.3 Alat-alat ... 22

3.4 Pembuatan Pereaksi ... 23

3.4.1 Larutan Asam Fosfat 0,1 % v/v ... 23

3.5 Rancangan Penelitian ... 23

3.5.1 Pengambilan Sampel ... 23

3.5.2 Penyiapan Bahan ... 23

3.5.2.1 Pembuatan Fase Gerak ... 23

3.5.2.2 Pembuatan Pelarut ... 24

3.5.3 Pembuatan Larutan Induk Baku Pembanding Akrilamida ... 24

3.5.3.1 Pembuatan Larutan Induk Baku I ( 500 ppm) ... 24

3.5.3.2 Pembuatan Larutan Induk Baku II (10 ppm) ... 24

3.5.4 Pembuatan Larutan Sampel ... 25

(11)

3.6.1 Penyiapan Alat KCKT ... 25

3.6.2 Analisis Kualitatif ... 26

3.6.3 Analisis Kuantitatif ... 26

3.6.3.1 Penentuan Linieritas Kurva Kalibrasi Baku Pembanding Akrilamida ... 26

3.6.3.2 Penetapan Kadar Akrilamida dalam Sampel. 27 3.6.3.3 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik ... 28

3.6.4 Validasi Metode ... 29

3.6.4.1 Akurasi ... 29

3.6.4.2 Presisi ... 30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 31

4.1 Kondisi Kromatografi untuk Mendapatkan Hasil Analisis yang Optimum. ... 31

4.2 Analisis Kualitatif ... 40

4.3 Analisis Kuantitatif ... 42

4.4 Kadar Akrilamida dalam Sampel Minyak Goreng Bekas Pakai ... 43

4.5 Validasi Metode ... 46

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 48

5.1 Kesimpulan ... 48

5.2 Saran ... 48

DAFTAR PUSTAKA ... 49

(12)

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 1. Pengaruh Komposisi Fase Gerak Pada Sampel No.1 Terhadap

Parameter Pemisahan dalam KCKT ... ... 39 Tabel 2. Hasil Penetapan Kadar Akrilamida dalam Sampel Minyak Goreng

Bekas Pakai secara statistik ... 43 Tabel 3. Data Hasil Pengujian Perolehan Kembali Akrilamida pada Minyak

(13)

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Rumus Bangun Senyawa Akrilamida ... 4 Gambar 2. Hipotesis pembentukan akrilamida dari lipid ... 6

Gambar 3. Instrument dasar KCKT ... 11 Gambar 4. Kurva Serapan Akrilamida Baku 10 ppm secara spektrofotometri

UV ... 31 Gambar 5. Kromatogram sampel (A) dan kromatogram spike sampel (B)

dengan perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (5 : 95), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 33 Gambar 6. Kromatogram sampel (C) dan kromatogram spike sampel (D)

dengan perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (10 : 90), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 34 Gambar 7. Kromatogram sampel (E) dan kromatogram spike sampel (F) dengan

perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (15 : 85), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 35 Gambar 8. Kromatogram sampel (G) dan kromatogram spike sampel (H)

dengan perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (20 : 80), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 36 Gambar 9. Kromatogram sampel (I) dan kromatogram spike sampel (J) dengan

perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (25 : 75), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 37 Gambar 10. Kromatogram sampel (K) dan kromatogram spike sampel (L)

dengan perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (30 : 70), laju alir 1 ml/menit dan panjang gelombang 210 nm ... 38 Gambar 11. Kromatogram akrilamida baku (A),larutan sampel (B) dan larutan

(14)

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1. Kromatogram Penyuntikan Sampel Untuk Mencari Komposisi

Fase Gerak yang Optimum pada Analisis ... 51 Lampiran 2. Kromatogram Hasil Penyuntikan Akrilamida Baku pada

Pembuatan Kalibrasi ... 57 Lampiran 3. Perhitungan Persamaan Regresi dari Kurva Kalibrasi Akrilamida

Baku yang Diperoleh dengan KCKT pada Panjang Gelombang 210 nm ... 63 Lampiran 4. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.1 ... 65 Lampiran 5. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.1 ... 68 Lampiran 6. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.2 ... 69 Lampiran 7. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.2 ... 72 Lampiran 8. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.3 ... 73 Lampiran 9. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.3 ... 76 Lampiran 10. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.4 ... 78 Lampiran 11. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.4 ... 81 Lampiran 12. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.5 ... 84 Lampiran 13. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.5 ... 87 Lampiran 14. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.6 ... 89 Lampiran 15. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

(15)

Lampiran 17. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan

Sampel No.7 ... 97

Lampiran 18. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.8 ... 100

Lampiran 19. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan Sampel No.8 ... 103

Lampiran 20. Kromatogram Hasil Penyuntikan Sampel No.9 ... 105

Lampiran 21. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan Sampel No.9 ... 108

Lampiran 22. Hasil Pengolahan Data Penyntikan Larutan Sampel Minyak Bekas Pakai secara KCKT ... 109

Lampiran 23. Contoh Perhitungan untuk Mencari Kadar Akrilamida dalam Sampel ... 111

Lampiran 24. Kromatogram Sampel No.2 untuk Perhitungan Hasil Perolehan Kembali ... 112

Lampiran 25. Kromatogram Hasil Perolehan Kembali Akrilamida Baku yang Ditambahkan pada Sampel No.2 dengan rentang spesifik 100% (Metode Penambahan Baku) ... 116

Lampiran 26. Data Perolehan Kembali Akrilamida Baku yang Ditambahkan pada Sampel No.2 (Metode Penambahan Baku) ... 119

Lampiran 27. Contoh Perhitungan Persen Perolehan Kembali... 120

Lampiran 28. Sertifikat Analisis Akrilamida Baku ... 121

Lampiran 29. Daftar Nilai Distribusi t... 122

Lampiran 30. Gambar Instrumen KCKT dan Syringe 100 µ l ... 123

(16)

ANALISIS AKRILAMIDA DALAM MINYAK GORENG BEKAS PAKAI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Abstrak

Akrilamida merupakan suatu senyawa toksik yang terbentuk dari karbohidrat, protein dan lipid selama proses pengolahan pangan dengan penggorengan pada temperatur yang tinggi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

Sampel minyak goreng bekas pakai berjumlah 9 dan diambil dari rumah tangga penduduk yang bertempat tinggal di Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur. Analisis akrilamida dilakukan secara kromatografi cair kinerja tinggi dengan perbandingan fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (15:85), laju alir 1 ml/menit, dan detektor UV pada panjang gelombang 210 nm yang telah memenuhi persyaratan validasi.

Validasi metode menunjukkan bahwa prosedur analisis yang dilakukan memiliki akurasi dan presisi yang baik yakni dengan persen perolehan kembali 100,16 % ( RSD = 2,71%).

Hasil penelitian menunjukkan bahwa terbentuknya akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai. Kadar akrilamida yang tertinggi yaitu 1,5047 mcg/g dengan 2 kali perulangan dan kadar akrilamida yang terendah yaitu 0,0950 mcg/g dengan 1 kali perulangan.

(17)

ANALYSIS OF ACRYLAMIDE IN USED FRYING OIL BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Abstract

Acrylamide is a toxic substance formed in carbohydrate, protein and lipid at the food processing with frying in high temperature. The aim of this research was to analyze acrylamide in used frying oil by high performance liquid chromatography (HPLC).

There are nine samples of used frying oil and were obtained from the citizen at Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur. Analysis acrylamide was done by using methanol-0,1% phosphoric acid solution mixture ( 15:85 ) applied as mobile phase at the flow rate of 1 ml/minute and the wavelength 210 nm which fullfill the requirements of validation.

Method validation has performed that research procedure have a good accuracy and precision with percent recovery 100, 16 % ( RSD = 2,71%).

The result of this research shows that acrylamide was formed in used frying oil.The highest level is 1,5407 mcg/g with two times frying and the lowest level is 0,0950 mcg/g with one time frying.

(18)

BAB I

PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Akrilamida dengan rumus kimia CH2=CHCONH2, adalah suatu senyawa

sintetik dan merupakan monomer atau bahan baku untuk membuat polimer poliakrilamid. Poliakrilamida ini terutama digunakan dalam pengolahan air limbah, pengolahan kertas dan pulp, pertambangan dan pengolahan mineral. Paparan akrilamida menjelaskan bahwa akrilamida dapat menyebabkan kerusakan pada sistem syaraf pada hewan dan manusia, dan bersifat karsinogenik dan mutagenik pada hewan percobaan (Taeymens, 2004).

World Health Organization (WHO) memutuskan bahwa akrilamida bersifat karsinogenik (toksik terhadap materi genetik dalam sel). Akrilamida dapat diabsorpsi pada saluran gastrointestinal, didistribusikan secara luas oleh cairan tubuh dan dapat menembus membran plasenta. Senyawa ini juga neurotoksik (toksik terhadap sel saraf). Environmental Protection Agency mengklasifikasikan akrilamida sebagai senyawa yang kemungkinan bersifat karsinogenik terhadap manusia.

(19)

goreng dan makanan yang mengandung protein juga menghasilkan akrilamida dalam konsentrasi yang lebih kecil (Harahap, 2006).

Pengolahan makanan di dalam suatu rumah tangga biasanya dilakukan dengan menggoreng, merebus, menumis dan olahan lainnya. Dalam menggoreng, penggunaan minyak goreng memegang peranan sangat penting. Untuk menghemat pemakaian minyak goreng, konsumen menggunakan minyak goreng berulang kali tanpa mengetahui akibat yang akan di timbulkan. Minyak goreng yang berulang kali digunakan biasanya disebut dengan minyak jelantah (Fransiska, 2010).

Penggunaan minyak jelantah dapat membahayakan kesehatan tubuh. Hal tersebut dikarenakan pada saat pemanasan akan terjadi proses degradasi, oksidasi dan dehidrasi dari minyak goreng. Proses tersebut dapat membentuk radikal bebas dan senyawa toksik yang bersifat racun (Rukmini, 2007). Ketika minyak dipanaskan hingga suhu lebih dari 120o C, akrilamida akan terbentuk. Akrilamida ini dapat terbentuk dari akrolein. Akrolein selanjutnya mengalami oksidasi membentuk asam akrilat atau membentuk senyawa antara berupa radikal akrilat. Kedua senyawa tersebut, dengan adanya sumber nitrogen yang berasal dari sumber makanan yang digoreng dan kondisi yang sesuai, dapat membentuk akrilamida ( Lingnert et. al, 2002 ).

(20)

mengoptimasi komposisi fase gerak menggunakan metanol dan larutan asam fosfat 0,1 %. Kolom yang digunakan yaiu C-18 (4,6 x 250 mm), detektor UV pada panjang gelombang 210 nm dan laju alir 1 ml/menit.

1.2 Perumusan Masalah

1. Apakah metanol – larutan asam fosfat 0,1% dapat digunakan sebagai fase gerak untuk analisis minyak goreng bekas pakai secara KCKT ?

2. Apakah terdapat akrilamida pada minyak goreng bekas pakai ? 1.3Hipotesis

1. Metanol – larutan asam fosfat 0,1% dapat digunakan sebagai fase gerak untuk analisis minyak goreng bekas pakai secara KCKT

2. Terdapat akrilamida pada minyak goreng bekas pakai 1.4 Tujuan Penelitian

1. Untuk menggunakan metanol – larutan asam fosfat 0,1% sebagai fase gerak untuk analisis minyak goreng bekas pakai secara KCKT.

2. Untuk mengetahui ada atau tidaknya akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai.

1.5Manfaat Penelitian

(21)

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Akrilamida.

2.1.1 Sifat Fisikokimia

Akrilamida (sinonim: 2-propenamida, etilen karboksi amida, akrilik amida,vinil amida) merupakan senyawa kristalin bening hingga putih dengan bobot molekul 71,09; tidak berbau; larut dalam air, metanol, etanol, dimetil eter dan aseton, serta tidak larut dalam benzene dan heptan. Akrilamida akan meleleh pada suhu 87,5o C dan mendidih pada suhu 125o C (Otles, 2004). Akrilamida memiliki rumus molekul C3H5NO dan rumus bangun seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1.

Gambar 1. Rumus Bangun Senyawa Akrilamida

2.1.2 Kegunaan Umum

(22)

2.1.3 Farmakokinetika.

Akrilamida dapat diabsorbsi melalui saluran pernafasan, saluran cerna, dan kulit. Pada pendistribusiannya, akrilamida terdapat dalam kompartemen sistem tubuh dan dapat menembus placenta. Berdasarkan data bioavailabilitas absorbsi akrilamida tercepat diperoleh melalui rute oral, di dalam tubuh akrilamida didistribusi melalui cairan tubuh dan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P450 lalu diekskresikan melalui urin dan empedu. Waktu paruh eliminasi akrilamida pada tikus sekitar 2 jam, sedangkan pada manusia belum diketahui secara jelas waktu eliminasi yang dibutuhkan (FAO dan WHO, 2002; Friedman, 2003).

2.1.4 Toksikologi

Akrilamida merupakan senyawa toksik dalam bentuk monomer sedangkan poliakrilamida yang merupakan polimernya tidak lagi bersifat toksik. Akrilamida telah diklasifikasikan sebagai senyawa yang mungkin menyebabkan kanker atau berpotensi sebagai karsinogen pada manusia (Friedman, 2003)..

(23)

2.1.5 Proses Pembentukan Akrilamida dalam Minyak Goreng Bekas Pakai.

Lipid umumnya trigliserida dapat membentuk akrilamida pada pemanasan suhu tinggi. Tahap awal adalah hidrolisis trigliserida membentuk gliserol dan asam lemak. Gliserol selanjutnya dapat melepaskan molekul air dan selanjutnya teroksidasi membentuk akrolein. Akrolein selanjutnya dapat mengalami oksidasi membentuk asam akrilat atau membentuk senyawa antara berupa radikal akrilat. Kedua senyawa tersebut, dengan adanya sumber nitrogen (umumnya gugus amina dari asam amino) dan kondisi yang sesuai, dapat membentuk akrilamida (Lingnert, et.al., 2002). Hipotesis pembentukan akrilamida dari lipid dapat dilihat pada gambar 2.

Gambar 2. Hipotesis mekanisme pembentukan akrilamida dari lipid. ( Yasuhara, 2003 )

2.1.6 Ekstraksi akrilamida dalam Minyak Goreng Bekas Pakai.

Proses pengekstraksian akrilamida dalam sampel minyak goreng bekas pakai dilakukan dengan ekstrasksi cair – cair dengan cairan pengekstrak adalah fase gerak (Napitupulu, 2008).

(24)

meningkatkan kelarutan akrilamida sewaktu proses ekstraksi. Akrilamida sebenarnya memiliki kelarutan yang tinggi dalam air (Gökmen dan Senyuva, 2008), namun dalam proses ekstraksi tidak menggunakan air dikarenakan banyaknya senyawa polar yang mungkin ikut terekstraksi bersama akrilamida yang akan mengganggu analisis, sehingga digunakan campuran diklorometan dan etanol sebagai larutan pengekstraksi. Akrilamida memiliki kelarutan yang besar dalam air, sehingga dapat ditarik lagi dari diklorometana tanpa terbawanya senyawa organik yang tidak larut dalam pelarut polar.

Adanya kemungkinan bahwa tidak seluruh akrilamida tertarik ke dalam fase air, maka fase diklorometan harus diuapkan hingga habis sehingga sisa akrilamida yang tertinggal akan larut ke dalam fase air (Castle, 2006). Lapisan diklorometan akan berada di bawah lapisan cairan pengekstraksi yaitu fase gerak sehingga dapat diuapkan di atas penangas air namun diklorometana bersifat relatif toksik dan berpotensi mencemari lingkungan bila dilakukan penguapan secara langsung. Penguapan dilakukan dalam sistem tertutup menggunakan proses destilasi. Proses destilasi memungkinkan untuk dikerjakan karena titik didih diklorometan yang relatif jauh dari air yakni 40°C. Selain itu, pengamatan titik akhir destilasi juga mudah dilakukan karena fase air tidak bercampur dengan fase diklorometana. Larutan destilat disentrifugasi, kemudian dibekukan di dalam

freezer lemari pendingin selama 3 jam hingga minyak di bagian atas memadat.

(25)

2.2. Analisis Akrilamida dalam Makanan

Analisis akrilamida dalam makanan sudah pernah dilakukan oleh para peneliti sebelumnya. Ada banyak metode yang dapat digunakan untuk menganalisis kadar akrilamida dalam sampel makanan, antara lain seperti kromatografi gas spektrometri massa, kromatografi cair-spektrometri massa tandem dan kromatografi cair kinerja tinggi (Harahap,2006; Tanseri,2009).

Analisis akrilamida yang ditambahkan ke dalam keripik kentang simulasi secara kromatografi cair kinerja tinggi dilakukan oleh Harahap (2006). Fase gerak yang digunakan yaitu asetonitril : aquabidest : asam fosfat (5:94:1) dengan pelarut asam fosfat 10 % dan detektor UV-VIS. Kolom yang digunakan yaitu C-18, panjang gelombang 230 nm, laju alir 1,2 ml/menit, waktu tambat 3,1 menit dan volume injeksi 20 µ l. Keripik kentang dibuat sendiri dengan cara memanaskan di oven pada suhu 100o C selama 3 jam. Kemudian ditambahkan akrilamida yang sudah diketahui kadarnya. Setelah itu diekstraksi dengan 3 cara yaitu ekstraksi cair – cair antara diklorometan dengan air, penguapan diklorometan kemudian penambahan air, dan diklorometan ditambahkan air kemudian diklorometan diuapkan. Metode ekstraksi yang terbaik yaitu diklorometan yang ditambahkan air kemudian diklorometan diuapkan dengan persen perolehan kembali 97 %.

(26)

pemanasan, tidak terdeteksi akrilamida dalam minyak kelapa. Pembentukan akrilamida yang paling banyak yaitu pada suhu 110 C setelah 35 menit dengan kadar sebesar 336,30 ± 16, 57 µg/kg. Analisis ini dilakukan dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi dengan fase gerak asetonitril dan larutan asam fosfat (95:5), waktu tambat 7,64 menit, kolom C-18 dan detektor UV pada 210 nm.

Tanseri (2009) meneliti tentang pengaruh suhu terhadap pembentukan akrilamida dalam kentang goreng secara kromatografi cair kinerja tinggi. Fase gerak yang digunakan yaitu metanol dan larutan asam fosfat (10:90). Kolom yang digunakan yaitu C-18, detektor UV 210 nm dan laju alir 1,5 ml/menit.. Ekstraksi yang digunakan yaitu dengan diklorometan dan etanol. Kentang digoreng dengan peningkatan variasi suhu dari 110o C, 130o C, 150o C, 170o C dan 190o C. Sehingga diperoleh kadar akrilamida yang tertinggi yaitu 1,98 µg/g pada suhu 190o C.

(27)

2.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi dan detektor yang sangat sensitif dan beragam sehingga mampu menganalisis berbagai analit secara kualitatif maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran (Depkes, 1995).

Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis, ananlisis ketidakmurnian dan analisis senyawa – senyawa yang tidak mudah menguap. KCKT sering digunakan untuk menetapkan kadar senyawa – senyawa tertentu seperti asam – asam amino, asam – asam nukleat dan protein – protein dalam fisiologis, menentukan kadar senyawa – senyawa aktif obat dan lain – lain (Rohman, 2007).

2.3.1 Jenis – jenis KCKT

Hampir semua jenis campuran solut dapat dipisahkan dengan KCKT karena banyaknya fase diam yang tersedia dan selektifitas yang dapat ditingkatkan dengan mengatur fase gerak. Pemisahan dapat dilakukan dengan fase normal atau fase balik tergantung pada polaritas fase diam dan fase gerak.

(28)

Pada KCKT fase terbalik paling sering digunakan fase diam berupa oktadesilsilam (ODS atau C18) dan fase gerak campuran metanol atau asetonitril dengan air atau dengan larutan buffer. Untuk solut yang bersifat asam lemah, peranan pH sangat krusial karena bila pH fase gerak tidak diatur maka solute akan mengalami ionisasi atau protonisasi. Terbentuknya spesies yang terionisasi ini menyebabkan ikatannya dengan fase diam menjadi lebih lemah dibanding jika solute dalam bentuk spesies yang tidak terionisasi akan terelusi lebih cepat (Rohman, 2007).

2.3.2 Instrumen KCKT

Instrumen KCKT tersusun atas 6 bagian dasar, yaitu wadah fase gerak (reservoir), pompa (pump), tempat injeksi sampel (injector), kolom (column), detektor (detector) dan perekam (recorder). Ilustrasi instrument dasar KCKT dapat dilihat pada Gambar 3.

(29)

2.3.2.1 Wadah Fase Gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan inert. Wadah pelarut kosong ataupun labu dapat digunakan sebagai wadah fase gerak dan biasanya dapat menampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut. Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing ( penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama dipompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisi (Rohman, 2007).

2.3.2.2 Pompa

Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat, Teflon, dan batu nilam. Pompa yang digunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 ml/menit (Rohman, 2007).

2.3.2.3 Injektor

(30)

2.3.2.4 Kolom

Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok :

• Kolom analitik : garis tengah-dalam 2-6 mm. Panjang bergantung pada

jenis kemasan, untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50-100 cm, untuk kemasan mikropartikel berpori biasanya 10-30 cm.

• Kolom preparatif : umumnya bergaris tengah 6 mm atau lebih besar dari

panjang 25-100 cm.

Kolom hampir selalu terbuat dari baja nirkarat. Kolom biasanya dipakai pada suhu kamar, tetapi pada suhu yang lebih tinggi dapat juga dipakai (Johnson,1991).

2.3.2.5 Detektor

Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen cuplikan dalam aliran yang keluar dari kolom. Detektor – detektor yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan ( noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi tanggapan/respon untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh. Detektor yang paling banyak digunakan dan merupakan tulang punggung kromatografi cair kinerja tinggi ialah detetktor UV 254 nm (Johnson,1991).

2.3.2.6 Perekam

(31)

2.3.3 Parameter Penting dalam KCKT. 2.3.3.1 Tinggi dan Luas Puncak

Tinggi dan luas puncak berkaitan secara proporsional dengan kadar atau jumlah analit tertentu yang terdapat dalam sampel (memiliki informasi kuantitatif). Namun demikian, luas puncak lebih umum digunakan dalam perhitungan kuantitatif karena lebih akurat/cermat daripada perhitungan menggunakan tinggi puncak (Ornaf dan Dong, 2005). Hal ini dikarenakan luas puncak relatif tidak banyak dipengaruhi oleh kondisi kromatografi, kecuali laju alir. Sementara itu, tinggi puncak dipengaruhi oleh banyak faktor seperti misalnya faktor tambat, suhu kolom serta cara injeksi sampel (Miller, 2005). Hal ini akan menyebabkan tinggi puncak relatif labil selama analisis. Namun demikian tinggi puncak masih dapat digunakan dalam perhitungan kuantitatif bila puncak analit simetris (Dyson, 1990).

2.3.3.2 Waktu Tambat

Periode waktu antara penyuntikan sampel dan puncak maksimum yang terekam oleh detektor disebut sebagai waktu tambat. Waktu tambat dari suatu komponen yang tidak ditahan oleh fase diam disebut sebagai waktu hampa/void

time (t0). Waktu tambat merupakan fungsi dari laju alir fase gerak dan panjang

(32)

2.3.3.3 Faktor Kapasitas

Waktu tambat dipengaruhi oleh laju alir, ukuran kolom dan parameter yang lain. Oleh karena itu, diperlukan suatu ukuran derajat tambatan dari analit yang lebih independen yakni faktor kapasitas (Ornaf dan Dong, 2005).

Dalam beberapa literatur lain, faktor kapasitas juga disebut sebagai faktor tambat (k). Idealnya, analit yang sama jika diukur pada dua instrumen berbeda dengan ukuran kolom yang berbeda namun memiliki fase diam dan fase gerak yang sama, maka faktor tambat dari analit pada kedua sistem KCKT tersebut secara teoritis adalah sama (Kazakevich dan LoBrutto, 2007).

Faktor tambat yang disukai berada di antara nilai 1 hingga 10. Jika nilai k terlalu kecil menunjukkan bahwa analit terlalu cepat melewati kolom sehingga tidak terjadi interaksi dengan fase diam dan oleh karena itu tidak akan muncul dalam kromatogram. Sebaliknya, nilai k yang terlalu besar mengindikasikan waktu analisis akan panjang (Meyer, 2004). Nilai k’ dari analit yang lebih besar dari 20 akan menjadi masalah dalam analisis KCKT karena waktu analisis yang terlalu panjang dan sensitifitas yang buruk sebagai akibat dari pelebaran puncak yang berlebihan (Ornaf dan Dong, 2005).

2.3.3.4 Selektifitas

(33)

permukaan fase diam serta jenis fase gerak yang digunakan (Kazakevich dan LoBrutto, 2007). Nilai selektifitas yang didapatkan dalam sistem KCKT harus lebih besar dari 1 (Ornaf dan Dong, 2005). Selektifitas disebut juga sebagai faktor pemisahan atau tambatan relatif (Meyer, 2004).

2.3.3.5 Efisiensi Kolom

Salah satu karakteristik sistem kromatografi yang paling penting adalah efisiensi atau jumlah lempeng teoritis. Bilangan lempeng (N) yang tinggi disyaratkan untuk pemisahan yang baik yang nilainya semakin kecilnya nilai H. Istilah H merupakan tinggi ekivalen lempeng teoritis atau HETP (high equivalent

theoretical plate) yang mana merupakan panjang kolom yang dibutuhkan untuk

menghasilkan satu lempeng teoritis. Kolom yang baik akan mempunyai bilangan lempeng yang tinggi dan nilai H yang rendah, untuk mencapai hal ini ada beberapa faktor yang mendukung yaitu kolom yang dikemas dengan baik, kolom yang lebih panjang, partikel fase diam yang lebih kecil, viskositas fase gerak yang lebih rendah dan suhu yang lebih tinggi, molekul-molekul sampel yang lebih kecil, dan pengaruh di luar kolom yang minimal (Rohman, 2007).

2.3.3.6 Resolusi

Tingkat pemisahan komponen dalam suatu campuran dengan metode kromatografi direfleksikan dalam kromatogram yang dihasilkan, untuk hasil pemisahan yang baik puncak-puncak dalam kromatogram harus terpisah secara sempurna dari puncak lainnya. Resolusi adalah perbedaan waktu retensi 2 puncak yang saling berdekatan, dibagi dengan rata-rata lebar puncak, dengan rumus sbb:

(34)

Ket:

t = waktu retensi puncak W = lebar puncak

Nilai Rs mendekati atau lebih dari 1,5 akan memberikan pemisahan yang baik (Rohman, 2007).

2.3.3.7 Faktor Asimetri

Adanya puncak, yang asimetris dapat disebabkan oleh hal –hal berikut: • Ukuran sampel yang dianalisis terlalu besar. Jika sampel terlalu besar maka fase gerak tidak mampu membawa solut dengan sempurna karenanya terjadi pengekoran atau tailing.

• Interaksi yang kuat antara solut dengan fase diam dapat menyebabkan solut sukar terelusi sehingga dapat menyebabkan terbentuknya puncak yang mengekor. • Adanya kontaminan dalam sampel yang dapat muncul terlebih dahulu sehingga menimbulkan puncak mendahului (fronting) (Rohman, 2007).

2.4 Validasi Metode

Validasi metoda analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004). Berikut delapan karakterisitik utama yang digunakan dalam validasi metode analitik menurut USP:

1 2 R R R t t

t = −

(35)

Karakteristik Pengertian

Akurasi Kedekatan antara nilai hasil uji yang diperoleh lewat metode analitik dengan nilai sebenarnya.

Presisi Ukuran keterulangan metode analitik, termasuk di antaranya kemampuan instrumen dalam memberikan hasil analitik yang reprodusibel.

Spesifisitas Kemampuan untuk mengukur analit yang dituju secara tepat dan spesifik dengan adanya komponen lain dalam matriks sampel seperti ketidakmurnian, produk degradatif dan komponen matriks.

Batas deteksi Konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat dideteksi, meskipun tidak selalu dapat dikuantifikasi.

Batas kuantitasi Konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan.

Linieritas

Rentang

Kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil uji yang secara langsung proposional dengan konsentrasi analit pada kisaran yang diberikan.

Konsentrasi terendah dan tertinggi yang mana suatu metode analitik menunjukkan akurasi, presisi dan linieritas yang cukup. Kekasaran Tingkat reprodusibilitas hasil yang diperoleh dibawah berbagai

kondisi yang diekspresikan sebagai % RSD.

Ketahanan Kapasitas metode untuk tidak terpengaruh oleh adanya variasi parameter yang kecil.

(Rohman, 2007). 2.4.1 Akurasi

Akurasi/kecermatan dapat ditentukan dengan dua metode, yakni spiked

placebo recovery dan standard addition method. Pada spiked placebo recovery

atau metode simulasi, analit murni ditambahkan (spiked) ke dalam campuran bahan pembawa sediaan farmasi, lalu campuran tersebut dianalisis dan jumlah analit hasil analisis dibandingkan dengan jumlah analit teoritis yang diharapkan.

Jika plasebo tidak memungkinkan untuk disiapkan, maka sejumlah analit yang telah diketahui konsentrasinya dapat ditambahkan langsung ke dalam sediaan farmasi otentik. Metode ini dinamakan metode standard addition method

(36)

Jumlah keseluruhan analit kemudian diukur dan dibandingkan dengan jumlah teoritis, yaitu jumlah analit yang murni berasal dari sediaan farmasi otentik tersebut, ditambah dengan jumlah analit yg di-spiked ke dalam sediaan. Akurasi kemudian dinyatakan dalam persen perolehan kembali (%Recovery).

Persen perolehan kembali ditentukan sebagai rasio antara hasil yang diperoleh dari analisis dengan hasil sebenarnya yang dihitung secara teoritis. Hal yang penting untuk diperhatikan adalah metode kuantitasi yang digunakan dalam penentuan akurasi harus sama dengan metode kuantitasi yang digunakan untuk menganalisis sampel dalam penelitian (Harmita, 2004; Ermer, 2005).

2.4.2 Presisi

Presisi diekspresikan dengan standar deviasi atau standar deviasi relatif (RSD) dari serangkaian data. Data untuk menguji presisi seringkali dikumpulkan sebagai bagian dari kajian-kajian lain yang berkaitan dengan presisi seperti linearitas atau akurasi. Biasnya replikasi 6-15 dilakukan pada sampel tunggal untuk tiap-tiap konsentrasi. Pada pengujian dengan KCKT, nilai RSD antara 1-2% biasanya dipersyaratkan untuk senyawa-senyawa aktif dalam jumlah yang banyak sedangkan untuk senyawa-senyawa dengan kadar sekelumit RSD berkisar antara 5-15% (Rohman, 2007).

2.4.3 Spesifitas

(37)

yang dituju ≥ 2). Cara kedua untuk memperoleh spesifitas adalah dengan menggunakan detektor selektif terutama untuk senyawa-senyawa yang terelusi secara bersama-sama sebagai contoh detektor elektrokimia hanya akan mendeteksi senyawa tertentu, sementara senyawa yang lainnya tidak terdeteksi. Penggunaan detektor UV pada panjang gelombang yang spesifik juga merupakan cara yang efektif untuk melakukan pengukuran selektifitas (Rohman, 2007).

2.4.4 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Batas deteksi dan batas kuantitasi dapat ditentukan dengan 2 metode yakni metode non instrumental visual dan metode perhitungan. Metode non instrumental visual digunakan pada teknik kromatografi lapis tipis dan metode titrimetri. Metode perhitungan didasarkan pada simpangan baku respon (SB) dan derajat kemiringan/slope (b) dengan rumus perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi sbb:

Simpangan baku respon dapat ditentukan berdasarkan simpangan baku blanko, simpangan baku residual dari garis regresi atau simpangan baku intersep y pada garis regresi (Rohman, 2007).

2.4.5 Linearitas

Lineritas merupakan kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil-hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada kisaran yang diberikan. Linearitas suatu metode merupakan ukuran seberapa baik kurva

Slope SB x

LOD=3

Slope SB x

(38)

kalibrasi yang menghubungkan antara respon (y) dengan konsentrasi (x). Linearitas dapat diukur dengan melakukan pengukuran tunggal pada konsentrasi yang berbeda-beda. Data yang diperoleh selanjutnya diproses dengan metode kuadrat terkecil, untuk selanjutnya dapat ditentukan nilai kemiringan (slope), intersep, dan koefisien korelasinya (Rohman, 2007).

2.4.6 Rentang

Rentang atau kisaran suatu metode didefinisikan sebagai konsentrasi terendah dan tertinggi yang mana suatu metode analisis menunjukkan akurasi, presisi, dan linearitas yang mencukupi. Kisaran-kisaran konsentrasi yang diuji tergantung pada jenis metode dan kegunaannya (Rohman, 2007).

2.4.7 Kekuatan

(39)

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dan penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi USU dan di Laboratorium Sintesa Bahan Obat Fakultas Farmasi USU Medan pada bulan Februari 2011 sampai dengan April 2011.

3.2 Bahan-Bahan 3.2.1 Sampel

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah minyak goreng bekas pakai masyarakat Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur.

3.2.2 Pereaksi

Bahan yang digunakan jika tidak dinyatakan lain merupakan kualitas p.a.

(pro analysis) keluaran E.Merck antara lain diklorometana, etanol, asam fosfat

85%, metanol (grade for HPLC), akrilamida for synthesis (sertifikat analisis dapat dilihat pada Lampiran 29) dan aquabidest (PT. Ikapharmindo Putramas).

3.3 Alat-Alat

(40)

(Branson 1510); pompa vakum (Gast DOA-P604-BN); alat penyaring fase gerak dan sampel dilengkapi dengan penyaring membran Whatman cellulose nitrate

0,45 μm dan PTFE 0,5 μm dengan diameter 47 mm serta Whatman cellulose

nitrate 0,2 μm dengan diameter 13 mm; neraca analitik (Boeco BBL31);

spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800); mini orbital laboratory shaker ( Stuart ); hot plate (Fisons); sentrifugator ( Hitachi ); alat destilasi serta peralatan gelas yang umumnya digunakan dalam laboratorium analitik (Gambar alat dapat dilihat pada Lampiran 31 dan 32)

3.4 Pembuatan Pereaksi

3.4.1. Larutan Asam Fosfat 0.1 % v/v

Diambil sebanyak 12 ml larutan asam fosfat 85% b/v lalu diencerkan dengan aquadest hingga 100 ml (larutan asam fosfat 10% b/v). Kemudian 0,5 ml larutan asam fosfat 10% v/v ini dipipet ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan kembali dengan aquabidest dengan garis tanda.

3.5 Rancangan Penelitian 3.5.1 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif (Sudjana,2005) yaitu 9 rumah tangga dari Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur.

3.5.2 Penyiapan Bahan

3.5.2.1 Pembuatan Fase Gerak

(41)

5,9 ml lalu ditambahkan aquabidest hingga garis tanda pada labu tentukur 50 ml (asam fosfat 10%), setelah itu diambil 0,5 ml larutan asam fosfat 10% dan ditambahkan aquabidest hingga garis tanda pada labu tentukur 50 ml. Sebelum digunakan, larutan asam fosfat 0,1 % dan metanol disaring masing-masing melalui penyaring membran Whatman cellulose nitrate 0,45 μm dan PTFE 0,5

μm, kemudian diawaudarakan selama ±20 menit menggunakan sonifikator.

3.5.2.2 Pembuatan Pelarut

Pelarut dibuat secara kuantitatif dari metanol, aquabidest dan asam fosfat 0,1 % dengan perbandingan 15:84:1 sesuai dengan perbandingan fase gerak yang didapat pada optimasi. Pelarut lalu disaring dengan penyaring membran cellulose

nitrate 0,45 μm, kemudian diawaudarakan selama ±20 menit menggunakan

sonifikator.

3.5.3 Pembuatan Larutan Induk Baku Pembanding Akrilamida 3.5.3.1 Pembuatan Larutan Induk Baku I ( 500 ppm)

Ditimbang seksama sebanyak 50,0 mg akrilamida, lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml. Kemudian ditambahkan dengan sedikit pelarut, kocok hingga larut. Setelah larut, diencerkan lagi dengan pelarut sampai garis tanda.

3.5.3.2 Pembuatan Larutan Induk Baku II ( 10 ppm)

(42)

3.5.4 Pembuatan Larutan Sampel

Ditimbang seksama 15 g sampel kemudian dilarutkan dalam 60 ml diklorometana ,ditambahkan 3 ml etanol, kemudian dikocok dengan laboratory shaker pada kecepatan 200 rpm selama 10 menit. Larutan sampel disaring kemudian filtrat ditampung dan residu dicuci dengan diklorometana sebanyak 2 x 5 ml dan disaring kembali, kemudian filtrat digabung dan ditambahkan 25 ml pelarut dan didestilasi hingga diklorometan habis. Kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 8000 rpm selama 15 menit, lalu dibekukan dalam freezer lemari pendingin selama 3 jam. Minyak yang sudah memadat dipisahkan secara fisik dari dari fase air beku. Fase air yang membeku kemudian dibiarkan mencair dan dipindahkan ke dalam labu tentukur 25 ml, dan volumenya dicukupkan hingga 25 ml dengan pelarut. Larutan ini disebut sebagai larutan sampel.(Napitupulu, 2008 ; Tanseri, 2008)

3.6 Prosedur Analisis 3.6.1 Penyiapan Alat KCKT

Kolom yang digunakan adalah Shim-Pack VP-ODS (4,6 x 250 mm). KCKT menggunakan detektor UV. Pompa menggunakan mode aliran tetap dengan low-pressure gradient system untuk memperoleh komposisi fase gerak yang konstan selama analisis (sistem elusi isokratik).

(43)

3.6.2 Analisis Kualitatif

Analisis kualitatif akrilamida dapat dilakukan dengan membandingkan waktu tambat yang sama (identik) dari kromatogram pada penyuntikan larutan sampel dengan kromatogram pada penyuntikan larutan baku pembanding akrilamida pada kondisi KCKT yang sama. Untuk mempertegas identifikasi ini, sedikit larutan baku pembanding akrilamida ditambahkan (spiking) ke dalam larutan sampel, lalu dianalisis kembali dengan KCKT. Puncak dengan waktu tambat yang sama diamati kembali dan dibandingkan antara kromatogram hasil

spiking dengan kromatogram larutan sampel sebelum spiking. Sampel dinyatakan

mengandung akrilamida jika terjadi peningkatan tinggi dan luas puncak pada kromatogram hasil spiking dengan waktu tambat yang sama seperti pada kromatogram penyuntikan larutan baku pembanding (Rohman, 2007).

3.6.3 Analisis Kuantitatif

3.6.3.1 Penentuan Linieritas Kurva Kalibrasi Baku Pembanding Akrilamida Larutan induk baku II ( 10 mcg/ml ) dipipet 0,50 ml; 1,00 ml; 2,25 ml; 5,00 ml; dan 9,00 ml, dimasukkan dalam labu 25 ml, ditambahkan dengan pelarut sampai garis tanda. Konsentrasi masing – masing larutan adalah 0,2 mcg/ml, 0,4 mcg/ml, 0,9 mcg/ml, 2 mcg/ml dan 3,6 mcg/ml. Masing-masing larutan disaring melalui penyaring membran cellulose nitrate 0,2 μm dan diawaudarakan selama

±20 menit. Setelah itu, filtrat larutan baku pembanding disuntikkan sebanyak 20 μl ke dalam sistem KCKT melalui injektor dengan loop 20 μl. Direkam

(44)

lalu dihitung persamaan regresi dan koefisien korelasi. (kromatogram dan data perhitungan dapat dilihat pada lampiran 2 dan lampiran 3 ).

3.6.3.2 Penetapan Kadar Akrilamida dalam Sampel

Larutan sampel yang telah disiapkan seperti pada bagian 2.5.4 disaring dengan menggunakan penyaring membran cellulose nitrate 0,2 μm dan

diawaudarakan selama ±20 menit. Kemudian disuntikkan sebanyak 20 μl ke dalam sistem KCKT melalui injektor dengan loop 20 μl, menggunakan sistem elusi isokratik dengan fase gerak metanol dan larutan asam fosfat 0,1 % di mana perbandingan komposisi dan laju alir sesuai dengan hasil optimasi. Deteksi menggunakan detektor UV pada panjang gelombang hasil optimasi. Direkam kromatogram (kromatogram dapat dilihat pada Lampiran 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 dan 20 ).

Kadar akrilamida yang terdapat dalam larutan sampel (X) dihitung dengan mensubstitusikan luas puncak ke dalam persamaan regresi yang diperoleh dari kurva kalibrasi sebagai Y. Hasilnya lalu dikali volume larutan sampel (25 ml), kemudian dibagi dengan berat penimbangan sampel minyak goreng bekas pakai sehingga diperoleh kadar akrilamida dengan satuan mcg/g sampel.

Rumus perhitungan kadar akrilamida dalam sampel dituliskan sebagai berikut:

Kadar Akrilamida (mcg/g sampel) =

) ( sampel(ml) larutan Volume x mcg/ml) ( g sampel n penimbanga berat X

(45)

3.6.3.3 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik

Data perhitungan kadar akrilamida dianalisis secara statistik menggunakan uji t. Rumus yang digunakan untuk menghitung simpangan baku adalah:

SD =

(

)

1 2 − −

n X X

Sedangkan untuk mendapatkan thitung digunakan rumus:

thitung =

n SD X X / −

Data diterima jika –ttabel < thitung < ttabel pada interval kepercayaan 95% dengan derajat kebebasan dk = n-1 dan nilai α = 0,05.

Keterangan:

SD = standard deviation/simpangan baku X = kadar akrilamida

= kadar rerata akrilamida n = jumlah perlakuan

Untuk menghitung kadar akrilamida dalam sampel secara statistik digunakan rumus:

Kadar Akrilamida (µ) = X ± t(1-1/2α)dk x n SD

Keterangan:

μ = kadar akrilamida

t = harga ttabel sesuai dengan derajat kepercayaan α = tingkat kepercayaaan

(46)

( Data perhitungan penetapan kadar secara statistik dapat dilihat pada Lampiran 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 dan 21 )

3.6.4 Validasi Metode 3.6.4.1 Akurasi

Akurasi ditentukan dengan menggunakan metode penambahan baku (the

method of standard additives), yakni ke dalam sampel minyak goreng bekas pakai

ditambahkan akrilamida baku sebanyak 100% dari kadar akrilamida yang diketahui terdapat dalam sampel, kemudian dianalisis dengan prosedur yang sama seperti pada sampel. Hasil dinyatakan dalam persen perolehan kembali (%

recovery). Persen perolehan kembali dapat dihitung dengan menggunakan rumus

sebagai berikut:

% perolehan kembali =

C B A

x 100%

Keterangan:

A = konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan akrilamida baku B = konsentrasi sampel sebelum penambahan akrilamida baku

C = konsentrasi baku yang ditambahkan

(47)

3.6.4.2 Presisi

Presisi metode penelitian dinyatakan oleh simpangan baku relatif (Relative

Standard Deviation/RSD) dari serangkaian data. RSD dapat dirumuskan sebagai

berikut. RSD =

X SD

x 100%

Keterangan:

SD = standard deviation/simpangan baku

(48)

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Kondisi Kromatografi untuk Mendapatkan Hasil Analisis yang Optimum.

Analisis akrilamida dengan menggunakan KCKT sudah pernah dilakukan oleh peneliti sebelumnya. Namun untuk mendapatkan hasil yang lebih baik karena perbedaan sampel dan kondisi maka terlebih dahulu kondisi kromatografi dioptimasi yaitu meliputi panjang gelombang, komposisi fase gerak dan laju alir. Panjang gelombang analisis ditentukan dengan membuat kurva serapan akrilamida baku menggunakan spektrofotometer UV. Spektrum pengukuran hasil akrilamida baku dapat dilihat pada Gambar 1.

Absorbsi

Panjang gelombang (nm)

No Panjang gelombang Absorbsi

[image:48.595.127.519.397.696.2]

2 197 0,185

(49)

Dari hasil pengukuran akrilamida baku pada konsentrasi 10 ppm, maka diperoleh serapan maksimum akrilamida baku pada panjang gelombang 197 nm. Hasil ini sesuai dengan pernyataan dari Brown, dkk (1982) bahwa akrilamida memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang 196-198 nm dan sisa ion anorganik. Namun demikian, pada analisis akrilamida secara kromatografi cair kinerja tinggi digunakan panjang gelombang 210 nm. Metanol memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 205 nm, sehingga analisis sebenarnya dapat dilakukan pada panjang gelombang 205 nm. Namun, bila analisis dilakukan pada panjang gelombang di bawah 210 nm, pengotor akan menyerap lebih kuat dikarenakan memiliki serapan pada panjang gelombang 195-205 nm (Gokmen and Senyuva, 2008).

Berdasarkan hal tersebut maka analisis akrilamida dalam penelitian ini dilakukan pada panjang gelombang 210 nm, panjang gelombang ini telah digunakan oleh Tanseri (2009) untuk menganalisis akrilamida dalam kentang goreng secara KCKT menggunakan fase gerak metanol dan larutan asam fosfat 0,1 % (10 : 90) dengan laju alir 1,5 ml/menit.

(50)

A.

B.

[image:50.595.113.510.96.662.2]
(51)

C.

[image:51.595.113.511.89.717.2]

D.

(52)

E.

F.

[image:52.595.110.509.90.732.2]
(53)

G.

H.

[image:53.595.112.508.93.711.2]
(54)

I.

J.

[image:54.595.113.509.94.682.2]
(55)

K.

[image:55.595.112.507.97.627.2]

L.

(56)

Tabel 1. Pengaruh komposisi fase gerak pada sampel No.1 terhadap parameter pemisahan dalam KCKT ( secara terperinci dapat dilihat di Lampiran 1 ) Komposisi Fase Gerak

(metanol:larutan asam fosfat 0,1 %)

Faktor Ikutan

Bilangan Lempeng

Tinggi Ekivalen Lempeng

Teoritis

5 : 95 0,864 14275,935 17512

10 : 90 1,418 2199,433 113666

15 : 85 1,598 14657,719 17056

20 : 80 0,866 13615,634 18361

25: 75 2,375 4702,015 53169

30 : 70 2,042 4399,891 56820

[image:56.595.109.520.124.340.2]
(57)

4.2 Analisis Kualitatif.

Hasil identifikasi sampel minyak goreng bekas pakai menunjukkan adanya akrilamida, hal ini dapat dilihat dari waktu tambat sampel terhadap baku akrilamida. Dari hasil penyuntikkan sampel minyak goreng bekas pakai diperoleh waktu tambat (misalnya, sampel penyuntikan I minyak goreng bekas pakai No.1) yaitu 3,981 menit dan waku tambat dari akrilamida baku yaitu 3,822 menit. Waktu tambat sampel masih berada di dalam rentang waktu tambat yang dapat diterima yaitu ± 5 % dari waktu tambat puncak akrilamida baku (Weston and Brown, 1997). Hal ini menunjukkan bahwa akrilamida dalam sampel masih terdapat dalam satu puncak terhadap akrilamida baku. Kromatogram akrilamida baku dan sampel dapat dilihat pada Gambar 11A dan 11B.

(58)

A.

B.

[image:58.595.107.516.91.743.2]

C.

(59)

4.3 Analisis Kuantitatif.

Analisis kadar secara kuantitatif ditentukan dari kurva kalibrasi akrilamida baku berdasarkan luas puncak. Kurva kalibrasi akrilamida baku dibuat dengan konsentrasi akrilamida baku yang meningkat ditandai dimulai dari rentang 0,2 µg/ml, 0,4 µg/ml, 0,9 µg/ml, 2 µg/ml dan 3,6 µg/ml. Kromatogram penyuntikan baku akrilamida untuk kalibrasi dapat dilihat pada Lampiran 2. Prosedur penentuan luas puncak serupa dengan tinggi puncak yaitu dengan mengukur luas sebagai hasil kali tinggi puncak dan lebar setengah tinggi (Rohman, 2007). Kurva kalibrasi akrilamida baku dapat dilihat pada Gambar 12.

Dari kurva kalibrasi diperoleh persamaan regresi Y= 161054,4905X – 1606,6471 dan mempunyai hubungan yang linier antara luas puncak dan konsentrasi dengan koefisien korelasi, r = 0,9997. Koefisien korelasi ini telah memenuhi persyaratan yaitu lebih besar dari 0,9950 (Moffat, 2004).

Luas Puncak

(60)

4.4 Kadar Akrilamida dalam Sampel Minyak Goreng Bekas Pakai.

[image:60.595.113.517.250.561.2]

Sampel minyak bekas pakai yang diperoleh dari Kelurahan Dataran Tinggi Kecamatan Binjai Timur dengan spesifikasinya dan kadar akrilamida dapat dilihat pada Tabel 2 berikut ini.

Tabel 2. Hasil Penetapan Kadar Akrilamida dalam Sampel Minyak Goreng Bekas Pakai secara statistik

No Bahan makanan yang digoreng

Perulangan pemakaian

Kadar ( mcg/g)

1 Ikan, kerupuk 2 kali 0,1257 ± 0,0628

2 Tahu, ikan 2 kali 1,5407 ± 0,0066

3 Ikan, kerupuk 2 kali 0,2843 ± 0,0013

4 Tempe, kerupuk 2 kali 0,3053 ± 0,0006

5 Ikan 3 kali 0,2158 ± 0,0060

6 Ikan 1 kali 0,0950 ± 0,0016

7 Ikan, telur 3 kali 0,1545 ± 0,0002

8 Ikan, telur, kerupuk 2 kali 0,1392 ± 0,0032

9 Ikan 2 kali 0,1749 ± 0,0066

Hasil pengolahan data penyuntikan larutan sampel minyak goreng bekas pakai

secara KCKT dengan kolom Shim-Pack VP-ODS (4,6 X 250 mm), perbandingan

(61)

kadar akrilamida dalam sampel minyak goreng bekas pakai dengan 6 kali perlakuan.

Dari Tabel 2 dapat diketahui bahwa pemakaian minyak goreng bekas pakai berjumlah 1 – 3 kali. Pemakaian minyak goreng yang berulang akan membuat minyak terhidrolisis. Minyak akan terhidrolisis menjadi gliserol dan asam lemak. Gliserol ini akan melepaskan molekul air dan selanjutnya teroksidasi membentuk akrolein. Akrolein selanjutnya akan mengalami oksidasi membentuk asam akrilat atau membentuk senyawa berupa radikal akrilat. Kedua senyawa tersebut, dengan adanya sumber nitrogen (umumnya gugus amina dari asam amino) dan kondisi yang sesuai, dapat membentuk akrilamida (Taeymens, 2004).

Semua jenis bahan makanan yang digoreng yaitu sumber protein, yang dalam hal ini mengandung unsur nitrogen. Jenis bahan makanan yang digoreng yaitu ikan, tahu, tempe, telur dan kerupuk. Tahu dan tempe sama- sama merupakan protein nabati yang berasal dari kedelai. Kedelai mengandung protein 35 % bahkan pada varietas unggul kadar proteinnya dapat mencapai 40- 43 % (Sentra IPTEK, 2005).

(62)

Pada sampel No.4 minyak yang digunakan bekas menggoreng tempe dan kerupuk dengan perulangan pemakaian juga 2 kali. Jenis kerupuk yang digoreng tidak diinformasikan oleh si pemakai. Namun, kemungkinan terkecil juga hanya sedikit mengandung protein karena pada dasarnya untuk menggoreng kerupuk tidak membutuhkan suhu penggorengan yang tinggi. Namun, karena tempe juga memiliki kandungan protein (sumber nitrogen) yang tinggi maka kadar akrilamida yang tertinggi kedua yaitu sampel ini dengan kadar sebesar 0,3053 mcg/g.

(63)

4.5 Validasi Metode

Pada penelitian ini dilakukan uji validasi dengan metode penambahan bahan baku (standard addition method) terhadap salah satu sampel dari 9 sampel minyak goreng bekas pakai yang ada. Uji validasi dilakukan terhadap sampel No.2 dimana kadar akrilamida tertinggi terdapat pada sampel ini. Uji validasi yang dilakukan meliputi uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali (% recovery) dan uji presisi dengan parameter RSD (Relatif Standar Deviasi).

Hasil dinyatakan dalam persen perolehan kembali (% recovery). Kromatogram sampel dan hasil perolehan kembali dapat dilihat pada Lampiran 24 dan 25 sedangkan data hasil pengujian akurasi dapat dilihat pada Tabel 3

. Tabel 3. Data Hasil Pengujian Perolehan Kembali Akrilamida pada minyak goreng bekas pakai dengan Penambahan Baku Standar (Standard Addition Method)

NO Rentang Spesifik

% Luas Puncak

Perolehan Kembali (℅)

1 100 251052 96,97

2 100 248881 101,42

3 100 248376 101,24

4 100 247587 98,83

5 100 247847 98,96

6 100 253921 103,86

Rerata perolehan kembali 100,16

Simpangan baku (SD) 2,72

Simpangan baku relatif (RSD) 2,71

(64)

dengan simpangan baku relatif. Simpangan baku relatif yang diperoleh dari dari hasil pengujian akurasi adalah 2,71 %. Kriteria presisi diberikan sangat fleksibel tergantung pada konsentrasi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium. Prosedur penelitian ini cukup baik karena sudah memenuhi persyaratan di bawah 16 % pada kadar satu per sejuta (Harmita, 2004).

(65)

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Metode KCKT dengan perbandingan fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (15:85), laju alir 1 ml/menit, dan detektor UV pada panjang gelombang 210 dapat diterapkan dalam penetapan kadar akrilamida pada sampel dan telah memenuhi persyaratan validasi.

Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa ternyata terbentuk akrilamida dalam minyak goreng bekas pakai dengan perulangan pemakaian 1-3 kali. Kadar akrilamida yang terendah yaitu pada sampel No. 6 dengan perulangan hanya 1 kali dan hanya bekas menggoreng ikan saja dengan kadar sebesar 0,0950 mcg/g. Kemudian kadar yang tertinggi yaitu pada sampel No.2 dengan perulangan 2 kali dan bekas menggoreng tahu dan ikan dengan kadar sebesar 1,5047 mcg/g..

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk menggoreng bermacam bahan makanan dengan perulangan pemakaian minyak goreng tertentu dengan adanya variasi suhu dan lama pemanasan.

(66)

DAFTAR PUSTAKA

Brown, P., dan K. DeAntonis. (1997). High-Performance Liquid Chromatography. In: Settle, F.A., editors. Handbook of Instrumental Techniques for Analytical Chemistry. New Jersey: Prentice-Hall, Inc: hal. 149-154.

Ermer, J. (2005). Analytical Validation within the Pharmaceutical Environment. In: Ermer, J., dan Miller, J.H McB., editors. Method Validation in

Pharmaceutical Analysis. Weinhein: Wiley-VCH Verlag GmbH & Co.

KgaA: hal. 54, 63-70,80,101.

Fransiska, E. ( 2010 ). Karakteristik, Pengetahuan, Sikap dan Tindakan Ibu Rumah Tangga Tentang Penggunaan Minyak Goreng Berulang Kali di Desa Tanjung Selamat Kecamatan Sunggal Tahun 2010. Skripsi. Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Sumatera Utara.

Gökmen,V., dan H.Z. Senyuva. (2008) .Acrylamide in Heated Foods. In:Gilbert, J., dan H.Z. Senyuva, editors. Bioactive Compounds in Foods. Chichester: Blackwell Publishing: hal. 254, 257-259, 273.

Harmita.(2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Review Artikel. Majalah Ilmu Kefarmasian. Vol 1 (3): hal. 122.

Harahap,Y. (2005). Optimasi Penetapan Kadar Akrilamida yang di tambahkan kedalam Keripik Kentang Simulasi Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Majalah Ilmu Kefarmasian.Vol 2 (3): hal.155.

Lingnert, H., et al. ( 2002 ). Acrylamide in Food : Mechanism of Formation and Influencing Factors During Heating of Foods. Scandinavian Journal of Nutrition 2002. Vol: 46 (4): hal. 159-172.

Napitupulu, P.T. ( 2008 ). Pengaruh Suhu dan Lama Pemanasan Terhadap Pembentukan Akrilamida Pada Pembuatan Minyak Kelapa Dengan Cara Panas. Skripsi .Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung.

Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Cetakan Pertama. Yogyakarta: Pustaka Pelajar: hal. 386-397, 465-469.

Rohman, A. (2009). Kromatografi Untuk Analisis Obat. Cetakan Pertama. Yogyakarta: Graha Ilmu: hal. 218, 220.

Rukmini, Ambar. ( 2007 ). Regenerasi Minyak Goreng Bekas dengan Arang Sekam Menekan Kerusakan Organ Tubuh. Seminar Nasional Teknologi 2007 ( SNT 2007 ).

(67)

Tanseri, L. (2009). Pengaruh Suhu Terhadap Kadar Akrilamida Dalam Kentang Goreng Simulasi. Skripsi.Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Taeymens, D., and Wood, J.A. Review of Acrylamide : An Industry Perspective

on Research, Analysis, Formation, dan Control. Crit. Rev. Food Sci. and Nutr. 2004 : 44 (5) : 323-347.

Weston, A, dan P.R.Brown.(1997). HPLC and CE Principles and Practice. California: Academic Press: hal. 261, 231.

(68)

Lampiran 1.Kromatogram Penyuntikan Sampel Untuk Mencari Komposisi Fase Gerak yang Optimum Pada Analisis.

(69)

Lampiran 1. ( lanjutan )

Sampel dengan komposisi metanol : larutan asam fosfat 0,1%( 10:90 )

(70)

Lampiran 1. ( lanjutan )

Sampel dengan komposisi metanol : larutan asam fosfat ( 15 : 85 )

(71)

Lampiran 1. ( lanjutan )

Sampel dengan komposisi metanol : larutan asam fosfat 0,1% ( 20 : 80 )

(72)

Lampiran 1. ( lanjutan )

Sampel dengan komposisi metanol : larutan asam fosfat 0,1% ( 25 : 75 )

(73)

Lampiran 1. ( lanjutan )

Sampel dengan komposisi metanol : larutan asam fosfat 0,1 &( 30:70 )

(74)

Lampiran 2.Kromatogram Hasil Penyuntikan Akrilamida Baku pada Pembuatan Kalibrasi

A.

B.

(75)

Lampiran 2. ( lanjutan ) D.

.

E.

(76)

Lampiran 2.( lanjutan ) G.

H.

(77)

Lampiran 2. ( lanjutan ) J.

K.

(78)

Lampiran 2. ( lanjutan ) M.

N.

(79)

Lampiran 2. (lanjutan)

(80)

Lampiran 3. Perhitungan Persamaan Regresi Dari Kurva Kalibrasi Akrilamida Baku yang diperoleh dengan KCKT pada Panjang Gelombang 210 nm.

Data Hasil Penyuntikan Larutan Akrilamida Baku yang Diperoleh dengan KCKT

No. Konsentrasi (mcg/ml) Luas Area

1 0 0

2 0,2 29259,0000

3 0,4 69861,3333

4 0,9 139.395,3333

5 2,0 312.314,3333

[image:80.595.115.511.391.584.2]

6 3,6 583.017,0000

Tabel Konsentrasi (X) vs Luas Area (Y) untuk Akrilamida Baku

No. X Y XY X2 Y2

1 0 0 0 0 0

2 0,2 29259,0000 5851,8000 0,04 856089081

3 0,4 69861,3333 27944,5333 0,16 4880605890 4 0,9 139.395,3333 125455,8000 0,81 19431058950 5 2,0 312.314,3333 624628,6666 4 97540242780 6 3,6 583.017,0000 2098861,2000 12,96 339908822300

∑ 7,1 1133847 2882742 17,97 462616819000

(81)

Lampiran 3. ( lanjutan )

a =

(

X

) (

X

)

n

n Y X XY / / . 2 2

− − = 6 / ) 1 , 7 ( 97 , 17 6 / 1133847 . 1 , 7 2882742 2 − − = 5683 , 9 0500 , 1541023 = 161054,4905

= a + b

b = - a

= 188.974,5000 – 161054,4905 . 1,1833 = - 1606,6471

Sehingga diperoleh persamaan garis regeresi

Y= 161054,4905X - 1606,6471

Untuk mencari hubungan linier antara konsentrasi (X) dengan luas area (Y) maka dihitung koefisien korelasi (r) sebagai berikut

r =

(

)

(

)

[

X X n

]

[

( )

Y

( )

Y n

]

n Y X XY / . / / . 2 2 2 2

− − − =

( )

(82)

Lampiran 4. Kromatogram Hasil Penyuntikan Larutan Sampel No.1 A.

B.

(83)

Lampiran 4. ( lanjutan ) D.

E.

(84)

Lampiran 4. ( lanjutan )

(85)

Lampiran 5. Analisis Data secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Larutan Sampel No.1

SD =

(

)

1 2 − −

n X X = 1 6 01537569 , 0

− = 0,0554

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = 5 diperoleh nilai ttabel = 2,57. Data diterima bila –ttabel < thitung < ttabel.

thitung =

n SD X X / −

thitung 1 : 0,0247/0,0226 = 1,0921 thitung 2 : 0,0005/0,0226 = 0,0221 thitung3 : -0,0038/0,0226 = -0,1680 thitung4 : -0,0175/0,0226 = -0,7737 thitung 5 : -0,0041/0,0226 = -0,1812 thitung 6 : 0,0002/0,0226 = 0,0088

Karena –ttabel≤ thitung ≤ ttabel maka data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara :

Kadar akrilamida (µ) = ± (ttabel x SD/ )

= 0,1257 ± (2,78 x 0,0554/2,4495) = 0,1257 ± 0,0628

N0 Kadar (mcg/g) Luas Puncak (X- ) (X- )2

X y

1 0,1504 12967 0,0247 0,00061009

2 0,1262 10612 0,0005 0,00000250

3 0,1219 10184 -0,0038 0,01444000

4 0,1082 8893 -0,0175 0,00030625

5 0,1216 10191 -0,0041 0,00001681

6 0,1259 10613 0,0002 0,00000004

(86)

Lampiran 6. Kromatogram Hasil Penyuntikan Larutan Sampel No.2 A.

B.

Gambar

Gambar 2. Hipotesis mekanisme pembentukan akrilamida dari lipid.
Gambar 3. Instrument dasar KCKT
Gambar 4 . Kurva serapan akrilamida baku 10 ppm secara spektrofotometri UV
Gambar 5  Kromatogram sampel (A) dan kromatogram spike sampel (B) dengan perbandingan komposisi fase gerak metanol : larutan asam fosfat 0,1 % (5 : 95), laju alir 1 ml/menit dan panjang  gelombang  210 nm
+7

Referensi

Dokumen terkait

Dalam penulisan tugas akhir ini, penetapan kadar kloramfenikol dalam sediaan kapsul kloramfenikol menggunakan metode kromatografi yakni Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan metode elusi gradien untuk penentuan kadar antioksidan sintetik tertier butil hidrokuinon (TBHQ) dalam minyak goreng

Metode kromatografi cair kinerja tinggi dalam menganalisis akri- lamida dalam keripik kentang memberikan kondisi optimum dengan menggunakan kolom C 18 , 25 cm x 4.6 mm, 5mm,

Perhitungan Penetapan Kadar Trikosan pada Pasta Gigi Secara. Kromatografi Cair Kinerja

Kromatografi gas (KG) dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan teknik kromatografi yang komplementer karena kromatografi gas dapat digunakan untuk

PENETAPAN KADAR KOFEIN TERLARUT DALAM SECANGKIR KOPI SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Sistem kromatografi yang digunakan pada penelitian ini didasarkan pada penelitian-penelitian sebelumnya (9,18), yaitu menggunakan metode KCKT dengan kolom

Pada kromatografi cair kinerja tinggi KCKT sistem kromatografi yang digunakan adalah cair-padat, fasa bergerak mobile phase berupa cairan yaitu pelarut dan fasa diam stationer phase