Pengaruh Pemberian Formaldehyde 0,1% terhadap Stabilitas Antigen HA Virus Newcastle Disease Galur La Sota

Dan

tiadalah b i n a t a n g - b i n a t a a g yang ada dan burung-burung yang kerbang, melain- ltan

mat

juga seper'brimu

. .

.

Ire

(Q.S,

G : S 8 )

Terun.i;uk yang t e r c i n t a :

nyah, Ibu, Mbak Biltik,

Mas

Y m , Mbak I i k , hi, E"ck dm

Am

VIRUS NEWCASTLE DISEASE GAlUR L A S I

Oleh

SARASTINA

B 22,1253

SARASPINA. W n g a r u l ~ Fernberim Formaldehyde 0,18 Terhadap S-babfli-bas An-tigen

HA

V i r u s Newcastle Disease G a l u r La So-

ta,

(Bibaaah bimbtagm

DR. M, B,

M,

MaloXe d a D r h , Su- racbmi S e - t y m hgslih),

P e n e l i - t i m

jlii

b e r t u

ju,m un-l;uk rne1lllaa-b

pengaruh

darl. gembepian formaldehyde dengan k o n s e n t r a s i 0 , 1 ;& t e r h a d n p s t a b i l i e a s dari v i r u s

ND

g a l m

La

Sota selama Icwun

waktu

t e r t s n t u

pada

penyimpanan

temperatur

f r e e z e r d m tempera-

t u p

refrigera-tor. I'itras i antigen HA d i l a k u k a n dengan u-

ji

hemagglutinasi,

'enelli-t

i m 3'13

i

dilalc~~lcas?

selama

empat bulan

,

menggu- nakalz -t;elul- ' I - e r t ~ u i a s

umur

10

hari

sebanyalr 20

b u - t i r *

Pe- n~upulzan lnenggunakan v i r u o ND galur La

S O " ~

ddegan route j ~ ~ o k u l a s i suang allcan-tois,

.15

butrir d i i n o k u l a s i dan lima

b u ' t i r

sebagai

kon-trol,

Caircm

allan'-l;ois di.panen pada ha-

ri

1ceeaa.m sel;ekah pemupulran, dikumpul1ca.n dalam

s a t u

wadah,

dihornogenkai, d i s e n ' t r i f u g e dan d i u k u r pK

s e r t a

dilalctakan

u

ji. hcrnagglu.f;;inasi,

Formaldehyde ycmg ciigunakalz adalah 40% p r o a n a l i t i k , D e n g a ~ menggunalran larubl;an Phosphat B u f f e r Saline (PBS)

,

diencerlcan men j a d i 0,2:4. ICemudian formaldehyde 0,276 h i

dicampur

dengan

cairax

a l l m t o i s

dengm

volume

yang a m a

secara homogen selama

satu

jam,

sehjngga

didapatlcan

v i r u s

dilalculcan u j i hernagglutinasi untuii mengetahui t i t e r awal penyimpanan, kemudian dimasukkai d:llam tabung-tabung f l a - Iton t e r t u t u p dan disimpan dalam dua t e m p e r a t u r penyin~pa- nan y a i t u t e q e r a t u r r e f r i g e r a t o r

( 4

-

9' C ) dab tempera- .bur f r e e z e r

(-4

-

-8' 6 ) . U j i IIA dilakukan s e t i a p minggu d-imulai pada m i n g p ke-7 sampai minggu ke-16 pada kedua t e m p e r a t u r penyimpanan.

H a s i l ycmg d i p e r o l e h menun jukkan pada penyimpanan 'kemperatur f r e e z e r s t a b i l i t a s a n t i ,en HA d a p a t b.ertdilzan selnpai minggu lte-7 dan minggu k e l O s~mpai minggu ke-14. Pada penyimpalian tempera-t;ur r e f r i g s r a t o r

,

h a s i l yang d i

-

pero:l-ell menu juklran bnh.\ia s t a b i l i t a s a n t i g e n HA d a p a t ber- tahan sampai minggu Ice-10 dan minggu he-13 sampai minggu ice-1G.

Da.ri b a . s i l p e n e l i t i a n d a p a t d i t a r i k kesimpulan bahwa

f ormaldel~yde 0,1

Fi

m.mpu menstahilkan a n t i g e n I-@ v i r u s ND

FENGA411UI-I PXMBERIAN POH4ALDEI-IYDE 0,176

TXRI-IADXF STABILITAS RNTIC;EN RA VIRUS XEblCASTLE DISXASE GALUR

LA

tSOTA

SKRIPSI

D i a jukan S e b a g a i S a l a h S a t u S y a r a t Untulc

V I R U S NEWCASTILT DISEASB GmUR Lg

SOTA

NAMA MAEASISWA : SAliASiCINA

NOMOR POKOK : B 2 2 . 7 2 5 3

- P e n u l i s dilahirlcan pada t a n g g a l 15 J u n i 1967 d i Pasu-

r u a n

.,

s e b a g a i anak keempat d a r i

t u

juh b e r s a u d a r a d a r i ayahnda S jarkawi dan ibunda S r i Widati.

P e n u l i s menyelesaikan pendidikan s e k o l a h d a s a r d i SI)

Negeri Pelcuncen I Pasuruan pada tahun 1979, selrolah mene- ngah pertama d i SMP Negeri I Pasuruan pada t a h u n 1982 dan

s e k o l a h meneagah a t a s d i SiqA Wegeri I Pasuruan pada tahun 1985.

Pada tahun 1985 p e n u l i s d i t e r i m a s e b a g a i maliasiawi d i I n s L - i t u t P e r t m i a n Bogor m e l a l u i j a l u r Penelusuran M i -

na"can IZernampuan (PIDIC) dan pada tahun 1986 d i t e r i m a se- b a g a i mahasiswi d i Falrultas Kedokkerm EIewan Z n s t i t u t Per- t a n i a n Dogor. Lulus

s a r

jana Icedokteran IIewan pada t a n g g a l

2

September 1989.

Selama menempuh pendidilcan d i F a k u l t a s Kedolcteran Iie- wan 1nskitu-t p e r t a n i a n Bogor, p e n u l i s pernah men j a d i A s i s -

p e n ~ ~ l i s s e l e s a i k a n .

S k r i p s i ini merupakan h a s i l p e n e l i t i s 1 yang d i l a k s a - nakan m u l a i t a n g g a l 10 P e b r u a r i s a n p a i 10 J u n i 1990, d i l a b o r a t o r i u m V i r o l o g i jurusan Ilmu P e n y a k i t EIewan dan Ile- sellatan PIasyarzltat Ve'teriner, Bakul'tias liedokteran I-Iewan l3s.l;itu.l; P e r t a n i n n Bogor. Slcripsi Lni disusun s e b a ~ a i s a l a h s a t u s y a r a t un'kuk memperoleh g e l a r Dokter I-Iewan d l

Palrul.kas Iiedok'teran Iiewan Lnsti.tu't perkanian Bogor. Dengan s e l e s a i n y a s l r r i p s i i n i p e n u l i s menyampaikan ucapan t e r i m a ltasih kepada :

I. Bapalr DR.

M.

B. M. Malole dan Ibu Drh. Surachmi Setya- n i i l g s i h selaltu d . ~ s e n pembimbing yang t e l a h banyak mem- bantu, meinberi bimbingan dan saran-saran s e r t a penga- rahan kepada p e n u l i s

.

2. Ayah,

I l ~ u ,

kalcalr dan a d i k yang senan"casa memberi se- mangat dan doa menu ju ire sulrsesan.

7 .

Bapalc DR. Mans joer Ilavra,b dan pengurus l a b o r a t o r i ~ m D i - oltimia yang t e l a h banyak membantu dalam penyediaan ba- han-bahan kimia.

4. Pengurus l a b o r a t o r i u m Icimia l'erpadu yang t u r u t memban- -tu selama peneli'1;im.

6 . Rekern-relcmlku : C a w i , Ros, T i n i , Chia, Yadi, Kalc Emi, drl.1. E l i , Tomi d a i uda I n s e r t a semua pihalc yang t u - ~ u t rnembantu dengan t u l u s ,

P e n u l i s menyadari bahwa s l c r i p s i

i n i

m a s i h jauh d a r i sempurna. Walaupun demikian, semoga s k r i p a i h i berman- f a a t b a g i d u n i a pe'ternalcan, khususnya dalam b i d a n g pengem- b m ~ g a n p e t e r n a k a n unggas d i I n d o n e s i a .

DAFTAR GAPlBAR

...

ii LAl"IP6RAIi .

..

...*...

ii

1

.

PENDAX-IULUAN

...

I

.

...

II

TIitJAUAN PUSTAICA

3

A

.

V i r u s ND

...

3

.

...

.

A 1 ICLasifiltasi 3

8

.

₂

.

_{1 ~ 4 o r f o l o g i}

...

₃ A : 7

.

S i f a t B i o l o g i

...

7

.

..*...*...

13

Formaldehyde 11

.

.

...

B I Inalt-bivasi V i r u s dengan Pormaldehyde 14

13.2. Daya leer ja Formaldehyde dalam Inali*r _{. . . . . .}

.

l . i v a s i V i r u s

.

...

1 6

.

...*...

C U j i IIemagglutb1asi 17

...

.

.

C I Neltanisme 1-Iemaggl.utinasi 20

....

.

.

C 2 ~ i p l i k a s i P r a k t i s I I e m a g g l u t i n a s i 21

...

.

D T e l u r T e r t ~ u l a s

22

...

.

111 13AfIm DAN METODE PETmLITINV 24-

...

.

A Bahan 2 4

...

.

U

Metode P e n e l i t i a n 25

...

13.1.

Pemupukan T e l u r T e r t u n a s 25 13.2. I n a l t t i v a s i VI'JD d e n g a l Formaldeliyde

. .

2

6

...

13.3. U j i H e m a g g l u t i n a s i 28

.

...

v.

VI.

ｰｲＺ［ｾｭａｈａｓａｎ＠ • • • • • • • • 0 • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • •

ImSINPULAN DAN SARAN _• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • DlillTAR PUSTAKA • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • •

Tabel

Teks

Halaman

1.

'riter Hll pada Temperatur Refrigerator!

For-lnaldehyde . . . " . . . 0 • • • • 0 • • " • • 31

2.

Titer

hyde

3.

Titer

4.

Titer

HA pada Temperatur Freezer!

Formalde-• 0 • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • •

HA

pada Temperatur Refrigerator/

PBS

EA pada Temperatur Freezer/

PBS

,

.

.

DAFTAR GAl'lBAR

Garnbar Teks Halaman

1. StruJdur Pararnyxovirus o .. .. • • • 0 • .. .. • • • • 0 • • • •

5

LAMP IRAN

1. Kurva Modus Titer IU pada Temperatur Refri':'

gerator 0 . . . 44

Dalam usaha pengembangan peternal\:an di Indonesia baik dalarn rangka pemenuhan gizi masyarakat termasuk pening]{at-an ]wl1sumsi hewpening]{at-ani, pemerintah telah berusaha membpening]{at-antu u-saha-usaha peterl1akan rakyat untuk meninglcatkan kualitas dan kual1titas produlm:L, baik d:L bidang produksi telur, da-ging maupun air susu.

Se jalan dengan itu usaha ｰ･ﾷｾ･ｲｮ｡ｫ｡ＱＱ＠ di Indones.ia mem-punyai dampak positif terhadap pertumbuhan ekol1omi ya11g diharapkan dalam fJelita V.;,ini untuk memcapai sasaran lima persen per tahtm. PertumbUhan dan pergeseran struktur e-konomi yang diperlukan dapat menyerap angkatan kerja. Hal ini dapat tercapai dengan adanya kecterpaduan dan hubungan inter sektoral yang saling mendul;:ung. Dalam Pelita V di-harapkan almn terjadi proses menuju keseimbangan antara sektor rnigas dan sektor non migas . (Anonimous, 1989). Sa-lah satu diantaranya adaSa-lah sub sektor peternakan.

Dalam usaha pen,gembangan peternaJ{an banyak kendala yang ditemukan. baik berasal dari manusia sendiri sebagai pengeJ.ola maupun dari ternaknya. Iiliususnya dalam bidang peternakan ayam, berbagai kendala seperti timbulnya penya-Idt se r ing te r jadi. Salah sa tu penyakit pa da ayam yang men jadi persoalan bagi peternak dan pemerintah ]{arena ba-nyak menimbulkan kerugian adalah peba-nyakit I tetelo I atau

tetasnya, angka l{ematian yang tinggi yaitu mencapa;i: 50% sampai 100% serta pertumbuhan yang terhambat.

2

Upaya untu), melindungi ayam terhadap ND sudah banya!\: dilalcukan. 1'enemuan vaksin dan metode vaksinasi saat ini telah memberikan andil besar dalam menelmn kematian terha-dap penyaldt ini, terutama untuk ayam-ayam komersial (Ras).

Untuk mengetahui hasil valminasi yang telah dilakukan diperlulwn pengulmran titer antibodi dengan menggunakan u ji penghambatan aglutinasi (haemagglutination inhibition). Dalam uji tersebut diperlukan virus standar yang memiliki stabilitas titer antigen dan antigen yang siap .-pakai. Hal ini sullt dipenuhi di lapangan dan di tempat yang jauh

dari laboratoriuro.

1'eneli tian ini dilalmlmn untuk mengetahui apakah

in-aldivasi dengan formaldehyde 0,

i%

mampu menstabill,an anti-gen Hil virus ND selama kurun waktu tertentu yang disimpan pada temperatur freezer dan temperatur refrigerator.

Virus ND yallg digunakan dalam peneli tian ini adalah virus ND galur La Sota • karen a rnerupakan galur yang len-togenik atau avirulen. Dipilihnya formaldehyde 0, 1% ｫ｡ｲ･ﾷｾ＠

A. Virus})TD 1 • Klas ifilms i

Agen dari Newcastle Disease ditemukan pada tahun 1926 oleh Doyle (1927) dari burung yang sakit.

Virus ｈ･｜ｾ｣｡ｳｴｬ･＠ Disease adalah salah satu anggota da-ri ke16mpol< Paramyxovirus, yang mengandung dua permukaan glilwprotein dan paling sedikit empat . protein internal (Nagai et ｾＮＬ＠ 1976; Sato ｾ＠ a1., 1987; ｾｬ｣ｇｩｮｮ･ｳ＠ et al., 1988 dalam Umino, Kohama, Sato dan Sugiura, 1990).

Genus ini sesudah dengan klasifikasi oleh Natthews (1979) yang juga mencakup virus Parainfluenza dari mammals 1-5, virus HVJnps dan Avian Paramyxovirus (PMVs) yang se-tidak-tidaknya ada tu juh serotipe. Virus ND memiliki se-rotipe Pr'lV-1 (Hanson dan Beard dalam Hofstad et a1., 1984). 2. Morfologi

l'lenurut Spradbrow dalam Copland (1987) Paramyxovirus lIlempunyai sebuah gen berhelai tunggal, 'negative sense RNA'. Partilml viral mempunyai 'envelope I dan paling sedikit

me-ngandung enarn partikel yang spesifik.

semang untuh: menghasil]-;:an "hemagglutinin inhibitingll dan netralisasi antibodi (Rott, 1964).

Nenurut ])ulbecco dan Ginsberg (1984) struktur Paramy-xovirus terdiri dari hemagglutinin-neuraminidase glikopro-tein, fussion glikoproglikopro-tein, dua lapis lipid, matrilw gli-koprote in, nulde oprote in, polj,merase prote in serta RNA (Gambar 1).

Komponen dalam atau internal (nukleocapsid) juga di-Iwtahui sebagai antigen G atau nul-;:leoprotein (NP) antigen terlarut , terdiri dari sebuah tabung bergulung yang

pan-jang dan banyak dengan diameter 180 AO• Struktur unit protein dari tabung tersusun dalam sebuah 'helix' meling-kari pusat I axis I berlubang; didalamnya ditentuk811

konfi-gurasi ｉｕｾａ＠ (Hanson d811 Beard dalam Hofstad et a1., 1984). Hussell dan Edington (1985) menyatakan batang gliko-pl.'otein mempunyai tiga fungsi yang terpisah yaitu untuk menyerang' sel indul'i: semang melalui sisi reseptor induk se-mang, yang disebut hemagglutinin (H) dan untuk roerobek sel

dengan u jung virus yang dise but neuraminidase (N) serta untuk melebur envelope virus dengan sel (persatuan bentuk dan penetrasi viral) y811g disebut 'fussion' protein (F).

P PROTEIN

Swnber Dnlbe eeo dan Ginsberg (1984)

Ellight (1975) menjelaskan banyak virus di alam denga11 l1artikel yang telah matang atau sempurna mengandung sema-ta-mataasarn nuldeat dan prote in. Asam nuldet prote in ini merupalmn unsur polwk yang memegang peranan lebih banyak

6

perantara proses infeksi, yang sering menentukan induk se-mallg spesifil<:: suatu virus, ｹ｡ｩ［ｾｵ＠ pengikatan sebuM

parti-]<:dfl virus terhadap daerah reseptor pada sebuah sel. Virus yang'lebih komplelm selain mengandung asam nukleat dan pro-tein juga mengandung lipid dan bermaeam- maeam unsur pokok la.in yang jwnlahnya se dild t.

Komposisi lipid dari membran viral ditentul<:an teru-tama oleh sel indul, semang, komposisi virions dari strain yal1g sama dapat sangat luas, tergantung pada keadaan dari lwmposisi membran plasma dari induk semang. Envelope pro-tein viral menentukan lwmposisi lipid dari virion oleh IJenggabungan seleldif lipid-lipid (J!'raenkel-Conrat dan \'lagner, 1975). Lipid yang terdapat pada envelope viral dengan istilah ' lipid s-cruldur perifert _{penti:ng untuk}

me-melihara struktur envelope virus,: Infektifi tas virus ber-lmrang bila lipid virus dihilangkan, yaitu terlihat adanya ke t idak lllampuan virus men gada]{an pe r Ie ka tall dan pene tras 1:

(Franklin, 1962 dalam Knight, 1975).

Choppin dan compans (1975) daJam Fraenkel-Conrat dan Wagner (1975) menyatal<:an Paramyxovirus mengandung karbohi-drat berbatasan dian-cara glikoprotein dan glikolipid dan diketalmi bahwa penggabungan h:arbohidrat dengan glikolipid ... dalam virion di tentukan oleh sel induk semang. Franklin

tetapi ujung-ujung dari Orthomyxovirus dan Paramyxovirus adalah glikoprotein.. Kekuatan penting karbohidrat sebagai ·bahan dalam agglutinasi ditunjukkan oleh berkuran.gnya

l,apa-sitas 'dari hemagglutinin bersamaan dengan penghilangan

gu-la oleh enzim glikosidase yan.g khusus (Bikel dan Knight dalam Knight, 1975). Dleh karena lokasi dari karbohidrat virus dalam permu.)<;:aan partikel viTuB, diduga karbohidrat dari 'envelope virus mernegang peranan dalam perlekatan -dan penetrasi virus-virus ,dalarn menginf'eksi sel dan ketika ke-luar darisel.

3.

Sifat Biologis

8

3.1. Pengaruh Suhu

Semua tifitas dari virus dirusak dalam satu menit pada.1000 C. pada 56° C terjadi kerusakan dari infektifi-tas, aktifitas hemagglutinasi dan immunogenitas selama

pe-riode lima menit sampai enam jam.

pada 37° C diperlukan

beberapa jam dan beberapa ｾ｡ｲｩ＠ untuk terjadinya perubahan tersebut. Pada 20° C dan 8° C diperlukan waktu berbulan -bulan sampai bertahun-tahun sebelum semua aktifitas dari virus hilang (Hanson <ian Beard <!alam Hofstad -et a1.., 1'984).

Virus sangat tahan pacta temperatur r.endah, .kebanyakan

da-pat disimpan berbulan-bulan atan bertahuu-tahun dalsm ampul gelas hampa udal'a dalam nitrogen cair (-196° C) a-tau pada suhu _700 C sampai _900 C (Nalole, 1988).

3.2. Pengaruh Sinar Ultraviolet dan pH

Virus ND rusak -oleh sinal' ultraviolet (Levinson

£.1

§,!.

3.3.

Pengaruh Lingkungan

ｾｬ･､ｩｕｬｬｬ＠ dimana virus berada sangat menentukan

stabil-itasnya di alam, seperti karkas yang rusak, rf.'eses (Zako-mirdiJ.1. (1963); Mickalov dan Vrtiak (1963) dilrutip oleh Hofstad ｾｾＮ＠ (1984), kekeringan dan ballan fermentasi

(Olesiuk (1951); Boys dan Hanson (1958) da1am Hofstad et a1. (1984) serta butir-butir rouleus di ｵ､｡ｾ｡Ｎ＠

Bahan-bahan ､｡ｾｩ＠ protein tidalc hanya tnelindungi, te-tapi tluga meniadakan kerja dari d.esinfe!ttan ·terhadap VND {\'lalker et a1.. 1"953 dalam Hofstad et al., 1984).

- -

- -

Kondisi Imglrungan, Imususnya suhu hangat dan radiasi sinaI' mata-hari membantu ·memudahkan perusakan 01eh bahan -ldmia. Su-hu :pembekuan mempertahankan proses inaktivaai virus (Dobson dan Simmin13, 1951 dalam Hofstad ｾ＠ ｾＮＬ＠ 1984).

3. Ｔｾ＠ Pengaruh Fisik dan Kimia

Efek inaktivasi dari bahan kimia sangat banyak diten-tukan pada suspensi di dalam medium. Se jumlah besar pro-tein mengurangi .Bfek dari bahan-bahan kimia dan menghambat inaktivasi dari virus.

Formalin (Brand1y et ｾＮＬ＠ 1946c), Beta propiolactone {Nack dan Chotison, 1955) dan Phenol telah digunakan untu.k merusak infeldifitas tan:pa merus ale kemampuan

immunogeni-tas (Hanson dan Beard dalam Hofstad et a2.. 1984).

10

mempengaruhi respon immunogenik. Kemampuan merusak ini bervariasi beI'dasaI'lmn kecepatan oleh perlakuan fisik dan .pemllerian panas, Idmia, sinaI' ultraviolet, cahaya, sinaI"

X, proses oksidasi, perubahan pH dan persenya\vaan l{imia.

3.5. Hemolisis

VND dapat memproduksi hemolisin yang berguna dalam yang berguna dalam menghemolisa sel darah marah unggas dan mama lia. Peristiwa ini terjadi akibat adanya penggabung-antara virus dan membran sel (Apostolov dan Almeida dalam Alexander, 1980). Kemampuan virus dalam menghemolisa sel darah merah juga dapat dipakai untuk membedakan isolat Pa-ramyxovirus dari Orthomyxovirus yang tidak mampu memperli-hatkan aktifitas hemolitik (Nishikawa et al.dalam Alexan-der, 1980). Aktifitas hemolitik virus dipertinggi oleh pembelman dan pencairan. dialisis, vibrasi sonik dan 10S-motic shock i (r1c Collum dan Brandly, 1955a dikutip oleh

B. Formaldehyde

Dari golongan aldehyde, yang penting dalam kehidupan sehari-hari adalah formaldehyde (CH

20) (Foye, 1976). Ru-mus bangunnya dapat diluldskan sebagai berikut :

o

II

C

Ｏｾ＠

H H

Formaldehyde ,adalah suatu gas yang diperdagangkan sebagai suatu larutan yang bentuknya di air disebut forma-lin. Menurut Huber dalam Booth dan Me Donald (1982), la-rutan formaldehyde (formalin) adalah lala-rutan bersifat cair menganclung tidak lmrang dari 37% (umumnya 40%) gas for-maldehyde dengan se jumlah metil alkohol untuk

mempertahan-kan polimerisasinya.

12

Larutan formaldehyde dengan konsentrasi rendah C0n-derung beroksidasi lebih cepat daripada larutan yang mem-punyai 1,00mentrasi lebih tinggi. Kestabilan larutan. da-pat dijaga dengan cara meletakkan kepingan-kepingan pua-lam ke dapua-lam larutan.

Formaldehyde jika bereaksi dengan protein al{an mem-bentuk hubungan diantara rangkaian-ranglmian protein yang berdel,atan. Formaldehyde bereaksi lebih efisien sebagai larutan stabil di sekitar titik netral pH

7,5-8,0,

sehing-ga sansehing-gat bail{ sebasehing-gai pensehing-gawet jarinsehing-gan pada pH tersebut.

Formaldehyde mempill1yai sifat penetrasi yang cukup ba-il, tetapi gerakan penetrasinya lambat. vlalaupill1 formalde-hyde da pat digunakan untuk mengawetkan sel-sel tetapi ti-dak dapat melindunginya secara sempurna. Kecuali bila di-berikan dalam waktu lama dan sementara itu jaringan menja-di keras.

Formaldehyde suatu bahan fiksasi y.ang baik untuk se-nyawa organis yang mengandill1g minyal, serta tidak larut da-lam ｡ｩｲｾ＠ formaldehyde tidak melarutkan lemak, tidak me-ngikat karbohidrat yang dapat larut dan dapat melarutkan beberapa glikogen dan urea.

yang terlarut. Polimer dari formaldehyde membebaskan for-maldehyde dari larutannya perlahan-lahan pada suhu kamar atau cepat pada suhu hangat (Foye, 1976).

'Re8ksi formaldehyde dengan air menghasilkan sebuah hidrat, reall:sinya adalah

o

II

c

+ H - OIl

/"-.,

H

H

OR I

H - C -

on

I

n

Hidrogen dari air ditambahkan pada olwigen lmrbonil dan sebuah hidroll:sil dari air melekat pada I carbonil

car-bon' (Hill dal1 Feigl, 1984). Ilidrat dengan mudah dapat berubah l,embali men jadi formaldehyde dan air. Pada lcese-imb811gan 20° C hidrat lebih berpengaruh. Sesunggu1l11ya ha-nya satu diantara 10.000 molelml yang ada merupakan for-maldehyde bebas, 9.999 lainnya dalam bentuk hidrat.

Formaldehyde juga dapat digunakan sebagai bahan pe-ngawet spesimen biologis !carena mempunyai sifat mengeras-kan protejn (Nur

§.1

§:1.,

1984), reaksinya sebagai beri;;" kut :

R - 1\1-12 -I- Hcno

;;;,,======'"

frote,in

ｒＱｾｈｃｈＲＰｈ＠ + JICHa

:;;:,,=====-!:"

14

lain digunakan sebagai ina],tivasi larYngotracheitis, fowl

pox, ND dan virus lainnya (Huber dalam Booth dan Me Donald, 1982) •

1. Inah:tivasi Virus dengan Formaldehyde

Menurut Potash (1968) dalam Knight (1975), formalde-hyde untu], inaktivasi virus telah diketahui selama berta':" hun-tahun dan merupal,an hal penting karen8 formaldehyde telah digunakan secara luas untuk menghasillmn vaksin yang tidak infe],sius tetapi secara antigenik masih meru-pakan virus yang aktif.

Dalam prosedur inaktivasi vaksil1 dipal{ai formaldehy-de 0,04%. Gerard dan lljacko\'liak (1949) melaporkan pemakai-an formaldehyde lwnsentrasi tinggi., tetapi data mendetail ycJl1g dipublilcasil,an ten tang efek dari formaldehyde 0,04.% tidak ada lagL Se]carang konsentrasi ini sering dipakai pada pembuatan vaksin.

Pada penyediaan valmin l'MK, formaldehyde telah lama digw,lakan dalam inakl;ivasi dengan penyer<Jpan virus dalam allvJ1lw'lium hidroksida gel terlebih dahulu. Baehtraek me- ' lapork0..n laju in0..ktivasi clengan kehilangan infektivitas

ＹＰＬＰｾ｢＠ per 110..ri pada 40 C memakai formaldehyde 0,009%. Se-cara umtun formalin 0,05% sampai 0,1% digunakan untuk peri-ode inlmbasi selama 24-48 jam pada suhu 23-260 C.

PHK 01 d.an PJ.'IjK AlO kira-kira 1 log 10 per jam. Setelah fase al'lal ina]{tivasi men jadi linier d.an lebih lambat (un-tU]1: virus P}1K 01 dan A₁₀ 0,2 log 10 per jam). Pada kondi-si di bawah standar (formaldehyde 0,04%. pH 8,5 dan pada suhu 250 C) Cd - virus diinaldivasi ldra-kira. satu se-tengah kali lebih cepat dari virus 01 dan A

10• Pada tem-peratur 40 C inaktivasi pada ketiga strain virus di atas dilan jutkan kira-kira 1 log 10 per hari. Formulasi yang dipakai adalah formalin O,05?G", setara dengan 0,02% formal-dehycle dalam buffer 0,02 M sodium glisin dengan pH 8,5-9,0. Formulasi ini sering memberikan hasil yang tidak sempurna pada inaktivasi virus tidak teradsorbsi (Girard dan Mackowiak, 1949; Wesclen dan Dinter, 1957. Graves, 1963; Brown et al., 1963a; Fontain et al., 1974).

Kurva inakti vasi pada banyak Jmsus menun jukJl:an pengu-rangan dellgan perlahan-lahan dihasilkan di dalam infektif-itas sisa, menolak :ll:eraguan tentang keamanan vaksin yang diins.ktivasi dengan formaldehyde, meski demikian pada ska-la besar aplikasi di ska-lapangan dan beberapa data ska- laborato-rium (Bro1'm et a1., 1963b) memberiJmn indikasi bahwa in-aktivasi virus yang telah diadsorbsi oleh alhidrogel dapat memberikan hasil yang aman.

16

pencerl1aan protein, seperti lactalbumin hydrolysate (LAH)

atau asarn amino bebas, seperti buffering glysin belum di-feliti. Pada virus Pf.1K 01 dan A₁₀ yang dilalmkan percoba-an tpercoba-anpa adsorbsi alhidrogel pH dirnonitor secara teratur terutama pada jam- jam pertama dan diatur dengan Na-lmrbo-nat bila perlu. Dapat dilihat kecepatan inaktivasi me.:.. ningkat dengan meningkatnya pI-I. Inaktivasi terjadi ce.pat pada pH 9,0 tetapi tidak menghancurkan partikel virus

(Bartcling dan \'Ioort,neyer, 1983).

2. Daya Kerja Formaldehyde dalam Illaktivasi Virus

Jika organisme diinaktivasi untuk membuat vaksin, ma-ka diharapl{an organisme terse but masih memiliki sifat an-tigenik yang menyerul)ai organ'isme yang belum diinaktivasi. Oleh Imrena itu, suatu metode sederhana untuk mematil{an organisme' seperti pemanasan yang menyebabkan denaturasi prote ill tidak tidak mernuaskan. Jil,a bahan kimia digunalcan maka bahan kimia terse but harus menghasilkan sangat sedi-Idt perubahan antigen yang bertanggung jawab untuk merang-sang kekebalan protektif. Salah satu senyawa yang diguna-ka11 untuk inaktivasi ini adalah :formaldehyde, dirnana gu:-gusan amino da11 kelompok aroida dalaro protein dan pada a-mino yang tida II: mengilmt hidrogen dalam ｰｕｊｾｩｮ＠ dan

pirimi-din dari asam nukleat membentuk ill:atan silang dan memberi strulctur yang lI:aku.

tergantung pada real<:si formcl.ldehyde dengan asam nukleat, tetapi sedildt perubahan dari mantel protein yang disebab-kan reaksi ikatan silang tidak dapat balik 8lltara l<:elompok amino dengan metilol pada satu sisi dengan l<:elompok amida atau guanidil pada sisi lain yang menghas;ilkan gugus me-thilene yang menyebabkan pengerasan protein. mungkin meng-halangi pelepaS811 ,asam nulueat dari virus ke dalam sel y811g diinfel<:si, oleh l<:arena itu kemungkinan menambah inal<:-tivasi terhadap virus. Diketahui bahwa dalam hubungan ini protein dapat diubah secara berarti sebelum asam nukleat dibuat tidak infeksius (Knight, 1975).

Formaldehyde dapat melewati superstruktur virion dan bereaksi secara efisien dengan as am nukleat. Formaldehyde bereal<:si deng811 ,'11rote in seperti halnya dengan asam nukle-at, dan reaksi ini berlangsung lama karena " adanya reaksi ikatan sil811g 8l1tara .bermacam-macam I<:elompok protein atau disebut efek penyamakan dan l?embentukan membran (Fraenkel-Oonrat dan Olcott, 1948 dalam Knight, 1975).

c.

Uji Hemagglutinasi

Sifat biologi terpenting dari VND adalah j<:emampuan mengadsorbsi permukaan sel darah merah dan menyebabl<:an

a-gregasi. Hemagglutinasi dari VND pertama kali dijelasl<:an ole11 Burnet (1942), yang juga menemukan al<:si ini pada

18

hemagglutinasi ditentukan secara kimia berhubul1gan dengan enzim neuraminidase (Hanson dalam Hofstad et a1., 1972). Penemuan luar biasa dan sangat penting dari banyak virus hewan yang m pu mengagglutinasi RBC dijelas!m:n oleh Hirst

(1941) dan r·lc. Clelland dan Hare (194'1) yang bekerja dengan telur tertunas yang diinfeksi dengan virus influenza. Me-reka mengamati REC dalam cairan allantois sewaktu memanen hasil tanpa mence gah perdarahan. Perdarahan terlihat meng-gumpal dan copat mengendap. Agglutinasi seperti tersebut tidalc tor jadi pada cairan allantois yang tidak mengandung virus. Heamagglutinasi dapat diukur berdasari<.:an laju enda-l)an dari agglutinasi sel darah merah (Hirst dan Pic!,els,

1942) atau dengan melihat pola agregat yang terbentuk pa-da pa-dasar permukaan Imca yang cembung (Salk, 1944) yang dilmtip oloh Hanson dalal]J Hofstad et a1., (-1972).

Kira-ldra 106 unit virus Dlfektif setara dengan satu unit hemagglutDlasi. Jumlah dari partikel virus diperki-rakan atas dasar aktivitas Hll, tetapi aktifitas Hil dari virus tidak selalu diinaktivasi pada ]cecepatan sarna seper-ti mi'ekl;ifitas virus (Hanson et a1., 1949; TaIba dan Es-Imron, 1962) (Hanson dalam Hofstad et a1.,

- -

ＱＹＷＲｾ＠ •. Bebera-pa galur dari VND kehilangan aktifitas hemagg1utDlasi pa-da perlakuan 560 0 selama 5 menit, yang laDl mampu meng,m-feksi telur tertunas atau mduk semang lam yang sesuai setelah pemanasan selama 25 menit. Ga1ur lam mampu mem-pertahanlmn HA 'pada 560 0 selama 180-240 menit meskipun lcemampuall mene;ini'eksi pada 90 menit pertama hi1ang.

Komposisi medium. kondisi pH dan temperatur umumnya tidak berpengaruh serius, pH agak alkali ada1ah baik

Ul1-tulc terjadmya Hll, tetapi Hll dapat juga terjadi pada ki,.. saran pH yang lebih luas yaitu. pH 5,0-9,0

rIA dapat dibentuk segera dalam siklus replilcasi oleh virus tertentu (Dlfluenza dan VIm) dan dapat diperlihat-k811 dalam virus inkomplit atau virus be1um dewasa y8l1g be-lUlU mfe ktif. Virus yang tidak sempurna dan virus inkom-plit atau partikel virus utuh yang dibuat non illfeksius dengan perlalman pemanasan, formalin atau eter memperta-hanll:an l(emampuan Hll dalam RBO yang sesuai (Buxton dan

20

1. jvjekanisme Hemagglutil18si

Proses hemagglutinasi "terdiri dari dua "tahap. Tahap pertema adalah pengika"tan virus i}ada in"ti, yaHu reseptor permulman sel ( agglu"tillasi) dan penghancuran reseptor 0-leh enzim neuramin:iidase (AcI{ermann, 1964). Tahap kedua menurut 11c Gollum dan Brandly (1955); Sagi dan Levine

(1957), menghubungkan pelepasan virus dari permukaan sel (elusion). Kecepa"tan elusi depat diulcur dengan mendiamkan sel sampai ter jadi agglu-tillasi pada berbagai seri pengen-ceran lerutan virus. Larutan tersebu"t didiamkan selama 30 menit atau 12 jam lebih tergantung pada galur virus. Kecepatan elusi tidal, diukur berdasar],an illdel,s yang tepat dari all:tifitas enzim neuramillidase (Hanson ＮＹＭｾ＠ Hofstad

ｾ＠ a1., 1972).

Virus-virus yang mengadakan HA memiJ.,iki tepi permuka-an batpermuka-ang pendell: dimpermuka-ana pada proses HA berfungsi sebagai enzim sehingga dapat mengikat dan mencapai daerah khusus pada permukaan RDG dapat diperlihatkan dengan elektron mi-krogref. Daerah penerima pada RDG sebagien besar terdiri dari lI:arbohidrat yaitu mulwpolisalmrida, dimana substansi lengket. Selama proses HA ter jadi, se jumlah besar virion-virion mengiket permukaan RBO yang sesuai dan bila masillg-masillg RDG membawa sedikit partikel virus bertabrakan, ma-·

in-tera]<:si dari enzim viral d811 kelompok sllbstrat yang ba-nyak berperan dalam mekanisme HA, tetapi terjaliIlnya jem-batan llrotoplasmik yang dibentuk antara dua sel bersama-sarna mengikat RBC sampai terbentuk gumpalan agregat besar yang lama-kelamaan akan mengendap pada dasar tabung (Bux-ton dan Fraser, 1977).

Cara lai11 untuk memperlihatkan aggluti:nasi adalah a-tas dasar sedimen sel-sel yang mengalami agglutinasi pada suatu 1aju yang terjadi 1ebih cepat daripada yang tidak agglutiIlasi. Dengan demikian agglutiIlasi dapat dititrasi' dengan mengestimasi sel RBC yang ditinggallca:n pada suspen-si pada wak-tu tertel1tu lebDl mudah dari pada melalui pe;-nyelidikan sedimen sel (r·jaramorosch dan Koprowski, 1967). 2. Alllikasi Praktis Hemagglutinasi

Untuk mendeteksi kehadi1'an virus yang menghemaggluti-nasi dalam telur te1'tunas dan cai1'an jariIlgan sel dapat digunakan metode cepat dalam diagnostik laborato.ris yaitu dengan rekasi hemagglutinasi. Adanya sejumlah virus yang tidal, diketahui sebelumnya dapat ditemukan dengan mudah dengan penambahan beberapa tetes cairan dari telur tertu-nas dan Cairal1 jariIlgan pada suspensi

0,5-1,0%

RBC. De-nga:n cara yang sama jumlah dari virus dalam suatu suspen-si dapat dititrasuspen-si oleh telmik dilususpen-sion sederhana dengal1 menggunakan RBC sehat sebagai indikator.

22

memberiltan metode cepat dan terpercaya untuk identifilmsi virus isolasi yang tidak diketahui. Uji ini sangat ,spesi-fill: dan memberikan identifikasi tidak hanya dari anggota kelompok berbeda dari virus yang mengagglutinasi, tetapi

juga dari anggota yang sama.

Umulllnya kurang lebih 106 partiltel virus harus ada un-tuk menyatakan suatu test positif, meskipun partikel virus tidak perlu dalam bentuk infeksius. Dengan demildan meto-de ini lebih sensitif dari titrasi oleh infektivitas d8.11 titer HA tidak harus selalu dihubungkan dengan titer

in-fektiv (Buxton d8.11 Fraser, 1977).

118.11faa"t pral,tis lain dari HA adalah untuk pengu jian sera clari antibocli yang dapat menghalangi agglutinasi. Hemagglutinasi inhibisi memiliki manfaat untuk identifika-si virus d8.11 memberil,an uji serologis yang dapat diperca-ya, Y8itu :

a. 11endeteksi 'eksposure I paela infeksi

b. i1enilai ],eman juran vaksin viral

c. Penyelidikan epiclemiologi penyakit yang disebabkan vi-rus yang mengagglutinasi RBO.

Buxton d8.11 Fraser (1977) menyatal{an bahwa viral HA clap at juga digul1akan sebagai metode pada pemurnian virus elan konsentrasi virus.

D. Telur Tertunas

avirulen rnematH,an embrio. Kehadiran virus pada ruang allantois ini dapat diketahui dengan test hemagglutinasi sederhana (Spradbrow dalam Copland, 1987).

Biasanya telur terttmas yang digunakan adalah telur fertil, terutama dari induk ayam betina yang sehat dan non ilTlmun. Telur berumur 9-11 hari dan cliinkubasikan pa-da suhu 37-38° C setelah cliinolmlasi dengan suspensi pa-dari eksudat at au jaringan tersangka, biasanya ditambahnan an-tibiotik penisilin atau streptomisin atau kecluanya untu], membtU1Uh bakteri yang ada (Hanson dan Beard dalalTl Hofstad

2.!

a1., 1984·).

Huang allantois aclalah tempat yang disulmi untuk

III. BAHAN DAN MET ODE PENELITIAN

l'enelitian dilakul,an di laboratorium Virologi jurusan Ilmu PC11yakit Hewan dan Kesehatan l'iasyara],at Veteriner, J?akultas Kedokteran Bewan Institut Pertanian Bogor mulai tanggal 10 Februari sampai 10 Juni 1990.

A. Bahan

Sebagai bahan penelitian digunakan VND galur La Sota yang telah dipupuk pada telur tertunas berumur 10 hari de-ngan route ruang allantois. Pemupukan menge;unakan 15 til' telur tertunas ym1g dinokulasi de11gan VND dan lima bu-til' telur tertunas yang tidal, diinokulasi dengan VND seba-gai kontrol. Sebelum diinolmlasi VND galur loa Sota ini diberikan antibiotik penisilin dan streptomisin untul{ mencegah kontaminasi mikroorganisme lain.

Untul, inal{tivasi VND digunakan formaldehyde 40% pro analitik yang dijadikan larutan 0,2% dengan mengglll1a]{an larutan Phosphat Buffer Saline (PBS). Nenurut Dulbecco larutan ini terdiri dari campuran 8,0 gram soditun chloride

+ 0,2 gram potassium chloride -I-

1,15

gram disodium

hidro-gen phosphat -I- 0,2 gram potassitun dihidrogen l)hosphat

di-tambahkan air destilata sampai 1 liter. Laru"tan ini di-jadikan pH 7,4 (Fres!mey, 1986).

adalah allcohol ＷＰＧｽｾＬ＠ natrium sitrat

4%

sebagai anti lcoagu-lan, colodion, kapas, alat ｳｵｮｴｩｬｾ＠ berbagai ulmran, api Bunsen, bor telur, j.111mbator, pipet berbagai ukuran, ta-bung-tabung flakon, alat sentrifuge, pH meter digital, pinset fisiologis, allumunium foil, erlenmeyer, gelas u-kur, alat magnestir, refrigerator, freezer, tabung reaksi. dan alat pengocok tabung elektrik.

B. r'1etode Penelitian

1. Pemupulmn Telur Tertunas

a. Virus ND (VND) galur La Sota yang telah disedialmn, ditambahkan ｡ｮｴｩ｢ｩｯｴｩｬｾ＠ penisilin dosis 5.000

IUj

cc dan streptomisin dosis 5.000

Ugrjcc,

lalu disimpan dalam refrigerator untuk inol{lUasi.

b •. Telur tertunas umur 10 hari dicandling untuk melihat hidup atau mati embrio. Embrio yang mati -I;idak

di-gunakan. Dmgan menggunal{an lmpas beralkohol kera-bang telur dihapushamakan. Kemudian dibuat dua lu-bang dengan bor telur, yai tu pada bagian keralu-bang yang terdapat ruang udara tepat di atas kepala em-brio.

26

d. Seluruh telur disimPall dalam inkubator 370 C sela-ma empat hari, setiap hari dicandling. Telu:r tertu-nas yang mati sebelum hari keempat dibuang.

e. Seluruh telur tertunas yang hidup sampai hari lee em-pat dimasul,]can ke dalam refrigerator sampai hari ke-enam.

f. Pada hari l{eellam telur tertunas dipanen. Kerabang telur dipecah pada bagian ruang udara, dengan meng-gunakan alat suntik 10 cc cairan allantois dikumpul-kan clalam satu waclah yang terpisah dari cairan al-la;Qtois kontrol. Pekerjaan dilakukan secara

asep-tis.

g. Cairan allantois VND clan kontrol (butir :fi') masing-masing clihomogenkal1, diulmr pRnya clengan pH meter igital dan disentrifuge 4-.000 rpm selama satu jam. Endapan hasil sentrifuge dibuang.

h. Dilalmkan uji IrA Ulltulc me11getahui titer awal penyim-yEman, dengan menggunakan 33 tabung reaksi dibuat

3

deret

2. Inaktivasi VND dengan ]!'ormaldehyde

a. Formaldehyde 40% pro analitik (p.a) diencerkan de-11gan larutal1 PBS men jadi 0,2)6 -formaldehyde.

b. Alat magnestir dimasultl,an dalam refriger8tor dan Imntak listriknya dihubungkan keluar melalui celah pfutu kulkas.

c. Cairan allan-t;ois VND sebanyak

15

cc dimasukl{an ke dalam gelas piala ulmran 50 cc, kemudian dimasul,kan sepotong magnet steril dan gelas piala ditutup de-ngan allumunium foil. Gelas piala ini diletakkan di atas magnestir sehingga potongan magnet berputar. d. Formaldehyde 0,2% sebanyak

15

cc dimasukkan sedikit

demi sedikit 1(0 dalam gelas piala pada buJ(;ir (c). Setelah itu di tutup dengan allumunium foil kembali dan magnestir dilanjutkan selama satu jam. Larutan i:ni adalah 0,1 % formaldehyde dalam VND.

e. Perlakuan pada butir (c) dan butir (d) dilalmkan ti-ga kali (tr iplo ).

f. Cairan alla:nto is se ballYak

15

ce dilakukan sama se-perti pada butir (e), kemudian dimasul,kal1 sedild t demi sedildt ditambahkan larutan PBS seba:nyak

15

ce. Swtelah itu ditutuIJ dengan allumunium foil, magnes-til' dilakukal1 selama satu jam dan dila:n jutkan sela-ma satu jam ·24 jaln kemudian.

28

h. Dilakukan uji HA untuk masing-masing sediaal1 yaitu VN_DF I, VNDF II, VNDF III, VNDP I, VNDP II, VNDP III dan kontrol Cairal1 allantois (CAF).

i . l"iasing-masing sediaan dibagi dua dan dimasukkan ke-dalam tabung-ta-bung flakon dan ditutup dengan sumbat h:aret.

j. Sediaan pada butir (i) disimpan pada dua ternperatur penyiml)al1an, yaitu pada penyimpanan temperatur free-zer (-4 - _80 C) dan temperatur refrigerator (4 -90 C).

Ie, Penyjmpal1an dilakukan selama 16 ｭｩｮｧｧｾＮ＠ Uji HA di-lalmlcan set:Lap minggu mulai minggu ],e-7 sampai ming-gu lm-16 - untuk seluruh sediaan.

3.

Uji Hemagllutinasi (HA) Modifikasi Metode dad Hirst

(1941)

a. Sebanyak -39 tabung reaksi yang bersih dan steril di-jadikan tiga deret dan diletakkan pada rak tabung reaksi.

b. Dengan pipet -10 ce, dipipet larutan PBS 0,8 ee pada tabung pertama dan 0,5 ce pada tabung ],edua hingga tabung 13.

e. llingan pipet 1 ee, VND yang telah diinaldivasi de-ngan formaldehyde a:taupun kontrol diambil sebanyak

0,2 ee dan dimasukkan pada tabung pertama.

elektrik, diambil sebanyak 0,5 cc dipindahlmn ke· tabung ke-2. Setelah dihomogenisasi kembali dengan menggunakan pipet 1 cc dipindahkan sebanyall: 0,5 cc l{e tabung ke-

3.

Per lalcuan terse but dilakukan sam-pai tabung ke-12, dan sebanyal\: 0,5 cc diambil dari tabung l\:e-12 lalu clibual1g. Tabung l{e-13 hanya beri-si larutan PBS sebagai kontrol. Hal ini clilalmkan secara triplo.

e. Ke clalam seluruh tabung masing-masing dimasukkall

0,5 cc RBC 0,5% dar i tabq.ng ke-1 sampai tabung ke-13.

f. Diadal,an pengocokan dengan menggoyangkan rak. Setelah itu didiaml{a11 pada temperatur kamar selama 15 -30 menit untuk dibaca hasilnya. Hasil dikatakan po-sitU bila ter jadi age;lutinasi yang lwmplit dari RBC dimana akan terlihat bentul, kasar seperti pasir di bae;ian pinggir clasar tablmg.

IV. HASIL PENELITIAN

A. Hasil Panen Pemupulmn Telur Tertunas

Hasil pemupukan pada :15 .butir telur tertunas dengan VND dan lima butir telur tertunas sebagai lwntrol, dipero-leh cairan allantois yang masine-masing ditampung dalam wadah terpisah, dihomogenkan dan diukur pHnya dengan pH meter digital. Basil yang diperoleh :

Pada suhu l,amar 260 C

pH aquade.s ₌₌ 6,83

pH PBS _'" 7,31

pH cairan allantois VND ₌₌ 8,16

pH cairan allantois !control _'" 7,32 Uji HA cairan allantois VND

'"

1280 HAU Uji HA cairan allantois l,ontrol ₌₌

o

HAU B. HasH uji HA pada minggu 0, minggu !ce-1 sampai minggu

ke-16 (Tabel 1-4) dan lmrva yang diambil berdasarl,an nilai titer yang paling banyak muncul/ Modus

(Lampir-an 1-3)

Pada teml)eratur refrigerator (4 - 90 C) titer awal dari cairan allantois VND dengan formaldehyde 0,1% adalah 640 HAU, yaitu pada ],urva 10g29,322. Pada minggu ke-7 titer lIA 1280 HAU, pada Imrva 10g210,322. l'ada minggu ke-8 sampai minggu ke-10 titer HA 640 HAU pada kurva 10g2'

ke-13 sampai minggu ke-16 titer Ell. 160 HAU pada lmrva log2

7 ｾＳＲＲＮ＠ Nilai titer HA dari VND yang telah diinaktivasi dengan formaldehyde dapat dilihat pada Tabel 1 dan kurva log2 dapat diliha t pada Lamp iran 1.

Tabel 1. Titer Ell. pada Temperatur Refrigerator

/

Formaldehyde

ｾＭＭＭＢＧｾＭＭＢＭｾＧＭＧＭＭＧＮＭｾＭ ＭＬＬｾＮＭＭＭＭＭＭＭＭＭ

No. _{110 M7 M8 M9} r-l

10 H11 . 1'112 M13 M14 M15 M16

ＮＮＭＭＢＮＭｾＮ＠

1 • 64·0 1280 64·0 640 640 320 320 80 160 320 320 2. 640 1280 640 640 640 320 160 160 160 320 160 3. 61\.0 1280 640 640 320 160 320 160 160 320 160

4·.

640 1280 64·0 640 640 320 320 160 160 320 160 5. 640 . '\280 640 640 640 320 160 160 160 160 160 6. ＶｾＰ＠ 1280 640 640 320 320 160 80 160 160 160 7. 1280 1280 640 640 640 320 320 160 160 160 160 8. 640 1280 640 640 640 320· 160 160 160 160 160 9. 640 640 640 640 320 320 160 80 160 160 320

..

ｾＭＧＭＭＭＧＧＧＭＧＭＧＧｾＭＧＧＭＭＧＭＭｾＧＧＧｾＭＭＧＭＧＧ＠

._---

..

_--ｾｬ､＠ 640 1280 640 640 640 320 320 160 160 160 160

Keterangan

.

.

1,2,3 = VNIl1!' I

4·,5,6

=

VNDF II' 7,8,9

=

VNDF III 1M

'"

110dus

Pada temperatur freezer (-4 - _80 C) titer avTal pe-nyilnpanan da.ri cairan allantois VND dengan formaldehyde 0,1% ac1alah 640 HAU, yaitu pada kurva 10g29,322. Pada minggu ke-7 1280 HAD pada Imrva log210,322. Titer Ell.

32

ｾｬｩｮｧｧｵ＠ 1I:e-15 dan minggu kO-16 titer HA turun men jadi 20 HAU dan terletak pada 1I:urva 10g24,322. Tabel 2 memperli-hatlwn nilai titer HA dari VND yang diinakt;ivasi dengan formaldehyde pada penyimpanan temperatur freezer, dan pada Lampiran 2 memper1ihatkan modus titer rIA pada kurva

Tabel 2. Titer H! pada Temperatur Frezer/ ｆｯｲｭ｡ｬ､･Ｇｾ＠

hyde

---

._-_._--No.

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8. 9. 640 640 640 640 640 640 1280 640 640

1280 160 1280 160 1280 160 '1280 160 1280 160 640 320 1280 320 1280 160 1280 320

160 160 160 80 80 80 80 80 80

ＶｾＰ＠ 1280 160 80

320 320 160 40 40 40 40 40 80 40 80 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 20 20 40 20 20 40 80 40 40 40 20 20 40 20 40 40 40 20 40

4·0

40 40 40 40 40 40 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20

40

40 20 20 20 10 20 10 10 20

---.---Keterangan : 1,2,3

=

VNDF I

4,5,6 0= VNDF II

7,8,9

=

VNDF III

1M

=

IVIodus

Pada penyimpanan temperatur refrigerator, cairan al-lru1tois VND dengan PBS titer HA awa1 ada1ah 640 HAU pada kurva 10g29. 322 dan pada minggu ]I:e-7 titer HA 1280 HAU pa-da 1I:urva 10g

Nilai titer HA dari VND dengan PBS pada penyiropanan tem-peratur refrigerator dapa-t diliha-t; pada Tabel 3, dan pada - Lampiran 1 dapat dilihat kurva log2 modus titer HA.

'rabel 3. Titer HA pada Temperatur Refrigerator/

PBS

' - - - - " - -

- - - .

-No. _{NO r17} l'l _{8 ＱｾＹ＠ NlO M11 M12 N13 M14 f'1 15 N16}

- - - '

1 • 640 1280 1280 640 640 640 640 640 640 640 320 2. 640 1280 1280 640 640 64-0 64-0 640 320 640 320

3.

640 640 1280 320 320 320 640 320 320 640 640 4. 640 640 1280 320 640 640 640 64-0 640 640 640

5.

640 640 1280 640 640 640 640 640 640 640 64-0

6,

640 640 1280 320 640 640 6,1-0 64-0 64-0 640 640 7. 1280 1280 1280 640 640 640 640 640 640 640 640 8. 1280 1280 1280 640 640 640 640 640 640 640 320 9. 640 1280 1280 640 320 640 320. 640 640 640 320

... Ｌｾ＠ ...

---

---..._ .

140. 640 1280 1280 640 640 640 640 640 640 640 640

.. _ _ .. r _ _ ···' _ _ _ _ _ · _ｾ＠...

--.

_{ｾＭＬＭＬＭＭＭＭＭＭ}

..

_{ＭＭＮＬｾＭＭＭＭＭＭ}

Keterangan : 1,2,3 '" VNDP I

4,5,6 '" VNDP I I

7,8,9 '" VNDP III

110. '" l1oo.us

1 • 2. 3.

4.

5.

6,

7.

8.

9.

34

Tabel

4.

Titer HA pada Temperatur Freezer/ PBS

640

640

640

640

640 640 640

1280

'1280

640

1280

640

1280

1280

,640

1280

640

640

640

640

640

640

640 640

640

640

640

640

640

320

640

640

640

640

640

640

640

640

320

640

640 640 640

640

320

.

__

._-_._---_._-640

640

640

640

640

640

640

640

640

640

640

640

640

320

320

640

320

320

640

640

640

320

320

320

640

640

64·0

640

640

640

320

640 320

640

640

320

640

640

320

640

640 640

640

640

320

640

320

320

640

640

640

640

640

320

-_

..

_-.-

....

__

..•

-._-_.

__

...

_---l'ID

640 640 640

640 640

640 640

640

640 640

640

---,,-_

..

_-,,-_._

.•

_---_._--

---Keterangan:

1,2,3

=

VNDP I 4,5,6

=

VN])P II 7,8,9

=

VN])P III l'ld = Nodus [image:47.600.75.537.102.416.2]

Unit virus de\'lasa at au virion terdiri dari gen yaitu asam inti di bagian tenga11 dan dike1ilingi ole11 1apisan protein sebagai pe1:Uldung. Protein dari VND merupall:an mo-lekul besar yang terdiri dari rantai polipeptida dan ter-bentuk dari berbagai a8am am:Ulo yang terdiri gJlgus amino dan gugus karbolmil.

VIm

hanya mengandung 8atu molekul a-sam inti yang berserabut tunggal yang berfungsi untul{ in-formasi genetik.

Inaktivasi VND dengan formaldehyde mencakup reak8i dengan protein dan asam inti. Formaldehyde ini akan ber-realwi terutama dengan menggantikan atom II pada gugus

ami-no ya:llg menghal3ilkall l3enyon.,a metilol dan dimetilol. Reak-l3i lili ber jalan cepat dan berl3ifat dapat balik. Reaksinya l3e bagai berikut :

-R -

CH - CO

I

NH 2

Gugus Amino

+ HCHO

'"

lcormaldehyde

>

R - CH

I

HOCI-I

-2 N

Dimetilo1

,

_R

-CH - COO

-

+ HCHO

I

NE - CH₂0H

metilol formaldehyde

berlangSUl1g lebih lambut. Senyavra metilol yang terbentuk akB.n bereaksi dengan amida atau guanidil pada 8isi lain yang al,an menghasill;:W1 gugus metilen, reaksi ini membentul\: ilwt811 silang dan bersifat tidal, dapat balik. Terbentuk-nya gugus metilen ini menyebabl;:an terjadiTerbentuk-nya pengerasan protein yang membentul, struktur yang Imlm berupa pemben-tuk)<:an membran at au ter jadinya penyamakan. Reaksinya da-pat dilihat sebagai berilmt :

11etilo1

N

-I

R

Amida

C eo ｒｾｒ＠ -

NH-°

Metilel1

CH 2 .. N -

I

R

C .. R

°

HasH penelitian yang telah dilalmkan dengan menggu-nalmn formaldehyde 0,1% untuk inaktivasi ｖＱｾｄ＠ pada penyim-panan temperatur freezer menunjukkan titer HA setelah pe-nyirnpanan selama enam minggu terjadi kenaikal1 menjadi 1280 HAU. Kenail;:an ini dapat tel.' jadi karena pada saat me-lakull:an uji rIA awal penyimpanan banyak terdapat hasil-ha-sil pencernaan protein pada cairan allantois yaDg tentunya mempel1garuhi pada saat uji dilakukan, sedangkan pada ming-gu ke-7 banya!\: vil'ion-vrion yang terbebas dari gangming-guan 11asi1-hasil pencernaan protein pada cairal1 all811tois.

1280 HAU menun julckan bahwa terdapat 1280 x 106 unit parti-kel virus. Pada minggu ke-8, minggu ke-9 dan minggu ke-10 ter jadi penUrU11a:ll nUai titer HA yang menyolok, yaitu ber-rut-ttll'ut 160 HAU, 80 HAU dan 40 HAU. Penurunan nUai ti-ter IrA ini menunjul;:lmn bahwa makin bel'kul'angnya jum1ah partilcel virus yang masih memilild strul<tur antigen HA, sehingga berlmrang pula kemampuan untuk mengadaka:l1 hemag-glutlllasi dan terlihat dari nUai titer ya:llg diperoleh da-ri uji HA ya:l1g dilalmli:an. Berkurangnya jumlah partilml virus yang masih memiliki struktur antigen HA dapat dise-bablean oleh beberapa hal yaitu pengaruh sinar matahari pa-. da ssat melakulca:ll uji HA, sinar ma·t;ahal'i mengandung sinal' ul traviolet ya:llg dapat merusak asam inti dar i virus

38

merusak partikel virus YEmg te1ah tersamak 01eh forma1de-hyde. Formaldehyde 0,1% yang digunakan pada penelitian ini menyebabkan lcerapuhan dari virus, sehingga pada saat tel' jadi pengaruh fisik seperti per1akuan freeeze-thawing partike1 virus yang sebagian besar terdiri dari protein akan terpecah rantai-rantai asam aminonya. Keadaan ini dapat dibandingkan dengan virus yang tidak diinal,tivasi dengan formaldehyde yang disimpan pada temperatur freezer dan di1akukan freeze-thawing (Lampiran 2). Kerusal{an struktur antigen HA VND dapat juga karen a penyirnpanan yang terlalu lama' ､ｩｭｾｕＱ｡＠ virus merupakan bahan bio1ogis yang dapat rusak oleh l'Jengaruh v/aktu.

Pada penyimpal1an refrigerator didapatkan hasil pada mll1ggu Im-7 nilai titer HA adalah 1280 HAU yang menun juk-Imn bahwa terd81'Jat se jum1ah 1280 x 106 unit partike1 vi-rus yang masih marnpu mengadal{an hemagg1utinasi, l{enaikan titer HA j11i tel' jadi 1,arena ban yak virus yang terbebas da-ri hasil-hasi1 pencernaan protein dan tidak meratanya se-baran antigen pada saat melalmkan uji HA pada minggu: ke-7

bahan kimia dalam hal ini adalah formaldehyde 0,1%, keGu-ali pengaruh freeze-thawing karen a pada penyimpanan tem-peratur refr' gerator tidak dilalmkan freeze-thawing. Se-lan jutnya pada minggu ke-13 sampai minggu ke-16 nilai ti-ter antigen EiI. VND stabil yaitu 160 EAU" Kestabilan nilai titer Ell. dapat tercapai I,embali, dapat disebablcan karen a virus-virus yang tidak rusal, oleh pengaruh-pengarull seper-t i seper-telah di jelaslmn masill .mampu memperseper-tahanlmn sseper-trukseper-tur al1tigen HA dan mampu menetralisir pengaruh-pengaruh yang menyebabka11 kerusa1l:a11.

Dengan rusalmya struktur antigen HA yang terdapat pa-da envelope virus Im1.'ena pengarull-pengaruh di atas, maka virus tidak mampu lagi untuk mengikat sel darah merah (RBC) pada bagian reseptor sehingga tidak alcan terbentuk agglutil1asi dan tentunya akan mengurangi nilai titer Ell. pa.da saat dilalmkan uji hemagglutinasi.

Pada kontrol cairan allantois VND pada peny'impanan temperatur refrigerator maupun ternperatur freezer

VI. KES]]"lPULAN DAN SARAN

Kesim]2ulan

·Pengg1.ll1aan formaldehyde ill1tuk menstabilkan antigen lIA dapat dilihat dari kestabilan nilai titer HA dengan mengglll1akan uji hemagglutinasi.

Pada penyimpanan temperatur refrigerator, stabilitas antigen lIA virus ND galur La Sota yang telah diinaktivasi dengan fo:rmaldehyde 0,1% dapat bertahan stabil sampai pada minggu ke-10 dan mn1ggu l,e-13 sampai minggu l,e-16. Pada

temperatur freezer stabilitas antigen lIA dapat stabil sam-pai l)ada minggu ke-7 dan minggu 1I:e-10 sampai minggu ke-14.

Stabilitas antigen HA virus Newcastle Disease galur La. Sota yang telah diinaktivasi dengan formaldehyde 0,1

%

dapat dirusak oleh pengaruh fisik luar seperti sinaI' ul-traviolet, perubahan pH, Imhadiran non protein virus, ha-sil-hasi1 pencernaan protein atau asam-asam amino bebas dan per1alman freeze-thawing •

.

ＹＮｾｅＮｾＮ＠

DAFTAR PUSTAKA

Anonimous. 1978. Pedoman Pengendalian Penya],it Hewan r·lenular. Jilid I. Direktorat Kesehatan Hel'ran, Direktorat Jenderal Peternakan, DelJartemen Perta-nian. Jakarta.

Bang, F. B. 1964. Phatogenesis in The Embrio in R. P. Hanson. edition. Nevlcastle Disease Virus. The University of Wisconsin Press ｾｬ｡､ｩｳｯｮ＠ and Milwauke. Barteling, S. J., and R. \'loor"t;meyeJ.'. 1984.

Formaldehy-de Inaktivation of 1<'oot-and-l'Iouth Disease Virus. Condition for the Preparation of safe Vaccine. Ar-chive of Virology 80 ; 103 - 117

Beard, C. \'I., and R. P. Hanson. se in H. S. Hofstad et al. poultry. Eighth editIon; Press, Ames. 1ovra. USA.

1984. Newcastle Disea-edition. Disease of Iowa State University

Buxton, A., and G. Fraser. 1977. AnimallHcrobiology. Volume 2. Blackwell Scientific Publications Ox-ford London Edinburg. Melbourne.

Chopp in , Purnell if., and Ricard iI. Compans. 1975. Re-production of Paramyxovirus in Fraenkel-Conrat and Robert R. \'Iag.ner. edition. Comprehensive Virology. Plenum Press. New York.

Cross, Gary M. 1988. NeVlcastle Disease - Vaccine 1'ro-duct ion in D. J. Alexander. edition. 'Newcastle Disease. --'Kluwer Academic Publishers. Boston. Dulbecco, R., ang H. S. Ginsberg. 1984. Virology.

Har-per and RoVl, PUbliS.her Philadelphia. J!'oye, O. VI. 1976.

cond edition.

Principles of IfJedicinal Chemistry. Se-Lea and Febiger. Philadelphia.

1<'reshney, R. I. 1986. Animal Cell Culture: A Practical ApIlroach, 1RL Press. Oxford.

Felmer, F., Peter A., E. Paul J. Gibbs, Prederick A. Mur-phy, ｉｾｩ｣ｨ｡･ｬ＠ J. Studdert, ang David O. White. 1987. Veterinary Virology : Immtmozation Agains Viral Di-sease. Academic Press, Inc. London Ltd.

Hanson, F. P. 19 72. Newcastle Disease in Hofstad et aI, edition. Disease of Poultry. Sixth edition. ｾ･ﾭ

Hill, VI., cond lis.

and ｾＱＮ＠ J?eigl. 1984. Chemistry and Life. Se-cdj,tion. BurGcss loublishing Company

Hinncapo-Minne so ta.

Huber, 'II. G. 1982. Chemotherapy of l'iicrobial, Fungal, and Viral Disease. Ｌｾ＠ Nicholas H. Booth, 1. E. ]\1c 'Donald. editin. Veterinary Pharmacology and, The-rapeutics. j<'ifth edition. The Iowa state Univer-sity Press/ Ames.

Knight, C. A. 1975. Ohemistry of Viruses. Second edi-tion. Springer-Verlag \'lien. New York.

Lurj,a, S. lE. 1953. Ha.emagglutination Phenomena and Vi-rus Growth Summary on ViVi-rus Reproduction in General Virology. Jolm Wiley and Sons, INC •• NeV/York -London.

ｾｬ｡ｬｯｬ･Ｌ＠ ]\lartin B. 1988. Virology. Pusat Antal' Univer-sitas. Institut Pertania11 Bogor. Bogor.

Ratanparl,he, P., S. K. Tanl1ani., an(l. P. N. Pathal,. 1982. A Note on The Haemagglutination Activity as an Aid

ｃｨ｡ｊｾ｡｣ｴ･ｲｩｺｩｮｧ＠ Newcastle Disease Virus Strains. Indian. J. of Nicrobiology 22 (2) : 141-143.

Shortridge, 1(, F., W. H. Allan, and D. J. Alexander. 1982. Hev/castle Disease Laboratory Diagnosis and Vaccine Evaluation. IIonglmnc; University Press.

Spranbrow, P. D. 1987. Newcastle.' Disease - An Ove.L'view in John Vi. Copland. edition. Newcastle Disease

ill

Poultry. Australian Centre for International

Agri-culture Hesearch. Canberra.

Stone,

n.

D. '1985. Determjnan of Haemagglutination Ac-tivity Recovered from Oil-Ernul tion Newcastle Disease Vaccjnes as a Prediction of Efficacy. Avian Disease

29 (3) : 721-728.

Thornton, Denise H. 1988. Quality Control of Vaccines in D. J. Alexander. edition. Newcastle Disease.

ICluwer Academic Publisher. Boston/ IJondonj· :!lordrecht. Tizard, Ian. 1982. An Introduction to Veterinary

nWlill10-10E-Y. Second Edition. 'tl. B. Saill1ders Company. Phi+.-ladephia. London. R5_0. Sydney. rrokyo.

Umino, Y., T. Kohama, T. A. Sato, and A. Sugiura. Protective ｊｾｦｦ･｣ｴ＠ Of l'lonoclonal Antibodies to castle Disease Virus il1 Passive Immunization. 11al of General Virology 71 ; 1199-1203.

1990.

Jour-44

ｌ｡ｭｰｩｲ｡ｾ｟ＱＮ＠

Modus Titer HA pada Temperatur

Refrige-rator

- Log

₂

(THer)

-A-11

10

9

8

7

6

5

3

2

----.----,·-·-··-..

_{ＮＮＮＭＭﾷＭﾷＭＭﾷＭｾﾷＭﾷＭＷ＠}

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

ｾＱｩｬＱｧｧｵ＠

=

PBS

=

Formaldehyde 0, 1

%

•

Keterangan : •

•

Lamp:Lran 2. Hodus Ti-cer Hi\. pada Temperatur Freezer

11

10

--- - - ""'--- - -

-

- - -

-9

8

7

6

5

4

:3

2 ＭｾＮＮＮＮＮＭＭＮ＠ , , "---" , , • , • • . .-...+

15

16 0 1 2

:3

4 5 6 7 8 9 10 i-I 12 13 14

IUnggu

Keterangan

.

.

_{• • • =} PBS

46

Lampirall 3. Hodus Titer HA VND Formaldehyde 0,1%

. Log

2 (Titer)

1 1

10. /

x

.-9

8

7

6

5

4

3

2 ｾ＠

.

_ＮＭｾ＠

...

-.

_ＭｾＬ＠ ,

• •

• • •

_•

"

°

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

15

16 Minggu

Keterangan

.

.

_{• • •}

=

Refrigerator

ltan

mat

juga seper'brimu

. .

.

Ire

(Q.S,

G : S 8 )

Terun.i;uk yang t e r c i n t a :

nyah, Ibu, Mbak Biltik,

Mas

Y m , Mbak I i k , hi, E"ck dm

Am

PENGARUH

PEMBERl AN FORMALDEHYDE 0.1

X

TERWADAP

S T A B l t l P A S ANTIGEN HA

VIRUS NEWCASTLE DISEASE GAlUR L A S I

Oleh

SARASTINA

B 22,1253

ta,

(Bibaaah bimbtagm

DR. M, B,

M,

MaloXe d a D r h , Su- racbmi S e - t y m hgslih),

P e n e l i - t i m

jlii

b e r t u

ju,m un-l;uk rne1lllaa-b

pengaruh

darl. gembepian formaldehyde dengan k o n s e n t r a s i 0 , 1 ;& t e r h a d n p s t a b i l i e a s dari v i r u s

ND

g a l m

La

Sota selama Icwun

waktu

t e r t s n t u

pada

penyimpanan

temperatur

f r e e z e r d m tempera-

t u p

refrigera-tor. I'itras i antigen HA d i l a k u k a n dengan u-

ji

hemagglutinasi,

'enelli-t

i m 3'13

i

dilalc~~lcas?

selama

empat bulan

,

menggu- nakalz -t;elul- ' I - e r t ~ u i a s

umur

10

hari

sebanyalr 20

b u - t i r *

Pe- n~upulzan lnenggunakan v i r u o ND galur La

S O " ~

ddegan route j ~ ~ o k u l a s i suang allcan-tois,

.15

butrir d i i n o k u l a s i dan lima

b u ' t i r

sebagai

kon-trol,

Caircm

allan'-l;ois di.panen pada ha-

ri

1ceeaa.m sel;ekah pemupulran, dikumpul1ca.n dalam

s a t u

wadah,

dihornogenkai, d i s e n ' t r i f u g e dan d i u k u r pK

s e r t a

dilalctakan

u

ji. hcrnagglu.f;;inasi,

Formaldehyde ycmg ciigunakalz adalah 40% p r o a n a l i t i k , D e n g a ~ menggunalran larubl;an Phosphat B u f f e r Saline (PBS)

,

diencerlcan men j a d i 0,2:4. ICemudian formaldehyde 0,276 h i

dicampur

dengan

cairax

a l l m t o i s

dengm

volume

yang a m a

secara homogen selama

satu

jam,

sehjngga

didapatlcan

v i r u s

d.ihomogenkan ltembali selama s a t u jsm. _{Homogenisasi i n i}

dilakulran dengan inengguuakan a l a i n a m e s t i r . S e t e l a h i t u dilalculcan u j i hernagglutinasi untuii mengetahui t i t e r awal penyimpanan, kemudian dimasukkai d:llam tabung-tabung f l a - Iton t e r t u t u p dan disimpan dalam dua t e m p e r a t u r penyin~pa- nan y a i t u t e q e r a t u r r e f r i g e r a t o r

( 4

-

9' C ) dab tempera- .bur f r e e z e r

(-4

-

-8' 6 ) . U j i IIA dilakukan s e t i a p minggu d-imulai pada m i n g p ke-7 sampai minggu ke-16 pada kedua t e m p e r a t u r penyimpanan.

H a s i l ycmg d i p e r o l e h menun jukkan pada penyimpanan 'kemperatur f r e e z e r s t a b i l i t a s a n t i ,en HA d a p a t b.ertdilzan selnpai minggu lte-7 dan minggu k e l O s~mpai minggu ke-14. Pada penyimpalian tempera-t;ur r e f r i g s r a t o r

,

h a s i l yang d i

-

pero:l-ell menu juklran bnh.\ia s t a b i l i t a s a n t i g e n HA d a p a t ber- tahan sampai minggu Ice-10 dan minggu he-13 sampai minggu ice-1G.

Da.ri b a . s i l p e n e l i t i a n d a p a t d i t a r i k kesimpulan bahwa

f ormaldel~yde 0,1

Fi

m.mpu menstahilkan a n t i g e n I-@ v i r u s ND

VIRUS XEblCASTLE DISXASE GALUR

LA

tSOTA

SKRIPSI

D i a jukan S e b a g a i S a l a h S a t u S y a r a t Untulc

J U D n SKRDSI : PEMGAEUH I J E 3 m E R W FOMAI;IIEKYIXE 0,1%

TERHADAP STABILITAS ARTI@N

KA

V I R U S NEWCASTILT DISEASB GmUR Lg

SOTA

NAMA MAEASISWA : SAliASiCINA

NOMOR POKOK : B 2 2 . 7 2 5 3

.,

ayahnda S jarkawi dan ibunda S r i Widati.

P e n u l i s menyelesaikan pendidikan s e k o l a h d a s a r d i SI)

Negeri Pelcuncen I Pasuruan pada tahun 1979, selrolah mene- ngah pertama d i SMP Negeri I Pasuruan pada t a h u n 1982 dan

s e k o l a h meneagah a t a s d i SiqA Wegeri I Pasuruan pada tahun 1985.

Pada tahun 1985 p e n u l i s d i t e r i m a s e b a g a i maliasiawi d i I n s L - i t u t P e r t m i a n Bogor m e l a l u i j a l u r Penelusuran M i -

na"can IZernampuan (PIDIC) dan pada tahun 1986 d i t e r i m a se- b a g a i mahasiswi d i Falrultas Kedokkerm EIewan Z n s t i t u t Per- t a n i a n Dogor.