PENGARUH ph DAN NaCl TERHADAP PRODUKSI DIEIBITOR PROTEASE Eschericlzin coli DARI Acinetobncfer baurnnnii (bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

PENGARUH

pH

DAN

NaCl

TERHADAP PRODUKSI DIEIBITOR

PROTEASE

Eschericlzin coli

DARI Acinetobncfer baurnnnii

(bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

Oleh :

.

Rini Suwardinni C03400047

PROGRAM STUD1 TEICNOLOGI HASIL PERIKANAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN

ILMU

KELAUTAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2006

RIM SUWARDINNI. C03400047. Pengaruh p H dan NaCl terhadap Produksi Inhibitor Protease Escltericltia coli dari Acinetobacter bnumanii (bakteri yang bersimbiosis dengan sponge). Dibawah bimbingan TAT1

NUREIAYATI dan DESNIAR.

Protease adalah enzim yang dapat menghidrolisa ikatan peptida dan protein. Protease banyak diaplikasikan sebagai katalisator hayati khususnya dalam bidang industri pangan, deterjen dan kulit. Walazpm ?emiki~n protease yang dihasilkan bakteri patogen dapat digunakan sebagai target senyawa obat bagi penyakit-penyakit yang disebabkan oleh bakteri dan virus seperti kanker;.mor, malalia, SARS, dan juga penyakit degeneratif Alzheimer. Inhibitor alamiah protease diketahui tersebar luas pada makhluk hidup, dan dapat diproduksi dari

-

mikroorganis~e. Penelitian lebih lanjut menunjukkan telah banyak inhibitor protease yang berhasil diisolasi dari mikroba dan digunakan untuk mempelajari mekanisme enzimatik d& aktivitas farmakologis. Namun belum dilakukan penelitian untuk meningkatkan a k t ~ t a s inhibitor protease tersebut. Oleh karena itu perlu dilakukan variasi pH dan NaCl pada medium sehhgga diarapkan aktivitas inhibitor ini dapat menghambat protease secara optimal. Adapun bakteri yang digunakan adalah Acinetobacter baumannii.

Penilitian

ini

dilakukan untuk mengetahui pengamh NaCl dan pH medium terhadap produksi inhibitor protease Escherichia coli dari A. baumanii. . Penelitian

ini

dilakukan dengan memodifikasi media pertumbuhau bakteii laut Acinetobacter baumannii dengan variasi NaCl (0%, 2% dan 4%) dan juga pH (6, 7 d m 8). Penelitian ini dilakukan dengan tiga tahap yaitu penentuan waktu propagasi bakteri laut, produksi protease kasar serta produksi inhibitor protease. Adapun parameter yang diukur adalah OD, p w penentuan a k t i t a s protease, penentuan a l r t ~ t a s inhibitor protease dan penentuan konsentrasi protease kasar.

Aktivitas inhibitor protease tertinggi untuk perlakuan NaCl 0% terjadi pada jam ke-20 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar 1,81 unit/& OD sebesar 0,355, pH sebesar 7,70, konsentrasiprotein 0,118 mdml an aktivitas protease sebesar 0,035 IUImnt. Untuk NaCl 2% a k t ~ t a s inhibitor ertingg protease terjadi pada jam ke-28 berada pad fase loga~itmik dengan

B " .

aktivitas sebesar 1,93 unit14 OD sebesar 0,667, pH sebesar 7,28, konsentrasi protein 0,101 mglml dan aktivitas protease sebesar 0,032 IUImnt. Sedangkan untuk NaCl 4% aktivitas inhibitor tertinggi terjadi pada jam ke-24 yang berada pada fase logaritmik dengan aktivitas sebesar 1,90 unitlml, OD sebesar 0,790, pH sebesar 7,77, konsentrasi protein 0,104 mgtml dan aktivitas protease sebesar 0,022 IUImnt. NaCl 2% merupakan perlakuau terbaik dengan nilai penghambatan teitinggi yaitu sebesar 1,93 Unitlml. Kemudian dari perlakuan terbaik (NaCl2%) dilanjutkan dengan perlakuan pH (6,7 dan 8).

Aktiitas inhibitor protease tertinggi uutuk pH 6 terjadi pada jam ke-24 dan ke-32 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan yang sama sebesar 1,69 unit14 OD masing-masimg sebesar 0,786 dan 1,532, pH masing- masing sebesar 6,71 dan 7,06, konsentrasi protein masing-masing 0,120 mglml dan 0,083 mdml dan aktivitas protease masing-masing sebesar 0,019 IUImnt dan 0,008 IUImnt. Untuk pH 7 a k t ~ t a s inhibitor tertinggi terjadi pada jam ke-16 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar 1,64 u n i t l d OD sebesar 0,792, pH sebesar 6,89, konsentrasi protein 0,154 mgtml dan aktivitas protease sebesar 0,011 IUImnt. Sedangkan untuk pH 8 a k t i t a s tertinggi terjadi pada jam ke-28 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar 1,82 uuitlml, OD sebesar 0,752, pH sebesar 7,85, konsentrasi protein 0,142 mdml '*n aktivitas protease sebesar 0,002 IUlmut. pH 8 me~upakan perlakuan terbaik

PENGARUH

p H

DAN NaCl TERHADAP PRODUKSI l[N16IBITOR

PROTEASE Escherichin coli

DARI

Acinetobacter bnumnnii

(bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

Sebagai salah satu syarat memperolah gelar Sarjana Perikanan pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan

Institut Pertanian Bogor

Oleh :

Rini Suw~rdinni

~03400047

DEPARTEMEN TEKNOLOGI

HASDL

PElUKANAN

FAKULTAS PEFUKANAN DAN

lLMU

KELAUTAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

Judul Skripsi _- : PENGARUH pH DAN NaCl TEHADAP PRODUKSI

INHIBITOR -PROTEASE Esclzericlzia coli DARI

Acinetobacter baumanii @akteri yang bersimbiosis dengan sponge)

Nama Mahasiswa : Rini Suwardinni

Nomor Pokok : C03400047

Menyetujui, Pembirnbing 1

-+-\

Tati Nurhayati. %Pi, M.Si. NIP. 132 149 436

Pembimbing 2

Desniar, S.Pi, M.Si. NIP. 132 150 705

&anan dan Ilmu Kelautm

adarwan Soewardi. NIP. 130 805 031

KATA PENGANTAR

Alltamdulillaaltirobbil'aalamiin. Segala puji dan syukur hanya bagi AUah SWT. Atas segala rahmat, hidayah, dan inayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang sebesar-besarnya kepada :

1. rou Tati Nurhayati, S.Pi, MSi. selaku dosen pembimbing I yang telah memberikan tknbingan, pengarahan dan masukan selama penelitian dan penyusunan skripsi.

2. Ibu Desniar, S.Pi MSi selaku dosen pembimbing

II

atas segala masukan selama penynsunan skripsi.

3. Ibu Ir. Winarti Zahiruddin, MS dan ibu Ir. Anna C. Erungan, MS sebagai dosen penguji yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji penulis.

4. Orang tua penulis bapak dan ibu untuk kash sayang, semangat dan doa yang tak pernah putus serta dukungan baik moral maupun mated, kakakhv Suzan Suwartini dan adik-adikku Ristri Mulia Utami, Rizbi Satria Utama untuk semangat dan doanya.

5 . Sahabat-sahabatku S i Lely, Dwi, Rikah, T e 4 Warda, Eko, Diki, Ismail, Nab4 Slamet, Venol, Nano, Edi dan juga teman-tema THP 37

semuanya.

6 . Bu Ika, Mba Dewi, Lia, Pak Ahmed, Intan yang telah banyak membantu penulis dalam melakukan penelitian.

7. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-saw yang telah memberikan bantuan, dukungan, dan doanya kepada penulis.

Akhir kata, tak ada sesuatu yang sempuma di semesta ini kecuali Allah Ta'alla. Kiranya skripsi ini dengan segala kelebihan dan kekurangannya dapat bermanfaat bagi pembaca dan pihak la$ yang membutuhkan serta bagi kemajuan ilmu pengetahuan.

Bogor, Maret 2006

FUWAYAT HIDUP

Penulis bemama lengkap Rini Suwardinni. Dilahirkan di Sukabumi, Jawa Barat pada tanggal 14 Agustus 1982. Penulis melupakan anak kedua dari empat bersaudara dari pasangan Royani dan Yunengsih. Pendidikan formal penulis dimulai pada saat mulai duduk di bangku SDN Cisaat I1 (1988- 1994). Kemudian penulis melanjutkan pendidikan di SLTPN I Cisaat (1994-1997), dan tiga tahun berikutnya (1997-2000) penulis menempuh pendidikan formal di SMUN 2 Sukabumi. Pada tahun 2000 penulis diterima di Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor melalui jdur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI).

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana pada Departemen Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, penulis melakukan penelitian dengan judul Pengaruh pH dun NaCl terhadap Produksi Inhibitor Protease Escherichia coli dari

Acinetobacter baumanii (bakteri yang bersimbiosis dengan sponge) dibawah

DAF'TAR

IS1

Halaman

DAFTAR TABEL

...

vii

...

...

DAFTAR GAMBAR

vlu

DAFTAR LAMPIRAN

...

ix

1.1. Latar Belakang

...

1

. .

1.2. Tujuan Penehtlan

...

2

...

1.3. Waktu dan Tempat Penelitian 2 2

.

TINJAUAN PUSTAKA

...

3

2.1. Protease Mikroba

...

3

2.2. Protease sebagai Faktor Virulensi

...

5

2.3. Protease Bakteri Escherichia coli

...

6

...

2.4. Media Fermentasi 7

...

2.5. Pertumbuhan Mikroba 9 2.5.1. Tahapan pe~tumbuhan mikroba

...

10

2.5.2. Penentuan waktu propagasi

...

11

2.6. Klasifikasi Acinetobacter baunlanii

...

12

2.7. Inhibitor Protease

...

13

2.7.1. Mekanisme kerja inhibitor protease

...

13

2.7.2. Inhibitor protease mikroba

...

14

3

.

METODOLOGI

...

16

3.1. Bahan dan Alat

...

.

.

...

16

.

.

3.2. Metode Peneht~an

... : ...

16

3.2.1. Penentuan waktu propagasi bakteri laut

...

16

3.2.2. Produksi protease kasai

...

17

3.2.3. Produksi inhibitor protease

...

17

3.3. Analisa Parameter

...

18

3.3.1. Penentuan aktivitas protease (Bergmeyer 1984) dari E

.

coli

...

18

3.3.2. Penentuan aktwitas inhibitor protease (Anson (1983) dalanz Imada et a1

.

(1985b) yang dimodiiasiNurhayati 2004) dari Acinetobacter baunla~mii

...

19