UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.): KAJIAN TERHADAP SISTEM HEMATOLOGI PADA TIKUS JANTAN DAN BETINA
SKRIPSI
Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Ilmu Farmasi
Oleh:
Imelda Maria Korbafo NIM : 098114012
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
ii
PERSETUJUAN PEMBIMBING
UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRSAK (Annona muricata L.): KAJIAN TERHADAP SISTEM HEMATOLOGI
PADA TIKUS JANTAN DAN BETINA
Skripsi yang diajukan oleh: Imelda Maria Korbafo
NIM: 098114012
Telah disetujui oleh:
Pembimbing:
iii
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Ketakutan kita terdalam adalah bukan karena kita tidak cakap. Ketakutan kita terdalam adalah kekuatan kita dalam mengukur. Kita bertanya pada diri kita sendiri: siapa aku sehingga aku cerdas, hebat, berbakat dan menakjubkan?
Sebenarnya, Siapa sebenarnya dirimu? Kita dilahirkan untuk membuat manifestasi kemuliaan Tuhan dalam diri kita. Dan begitu kita biarkan cahaya kita menyala. Kita tanpa sadar berikan orang lain kesempatan untuk lakukan hal yang sama.
(Kutipan dari Film “Akeelah and the Bee”)
Aku mengasihi engkau dengan kasih yang kekal (Kitab Yeremia 31:3b)
Kupersembahkan karya ini kepada:
Hati Kudus Yesus dan Hati Kudus Maria atas cinta kekal yang senantiasa menyertai peziarahan saya
Persaudaraan konggregasi Franciscanae Filiae Sanctissimae Cordis Jesus et Mariae (FCJM) atas dukungan doa, kepercayaan serta kesempatan pada saya untuk mengembangkan diri
Bapak, mama dan adik-adik yang mendoakan dan mengasihiku Para sahabat yang Tuhan hadiahkan bagi saya
v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.
Apabila di kemudian hari ditemukan indikasi plagiarisme dalam naskah ini, maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai peraturan perundang-undangan yang berlaku.
Yogyakarta, 20 Mei 2013 Penulis
vi
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
Yang bertanda tangan dibawah ini saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma Nama : Imelda Maria Korbafo
NIM : 098114012
Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul:
”Uji Toksisitas Subkronis Infusa Daun Sirsak (Annona muricata L.): Kajian Terhadap Sistem Hematologi Pada Tikus Jantan dan Betina”
Dengan demikian saya memberikan kepada perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis.
Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.
Dibuat di Yogyakarta Pada tanggal: 23 Mei 2013 Yang menyatakan
vii
PRAKATA
Puji dan syukur pada Tuhan Yesus dan Bunda Maria atas berkat dan kasih setia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Toksisitas Subkronis Infusa Daun Sirsak (Annona Muricata L.): Kajian Terhadap Sistem Hematologi Pada Tikus Jantan dan Betina” sebagai salah satu syarat memperoleh gelar sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Dalam rasa syukur ini pula, penulis mengucapkan terima kasih berlimpah kepada semua pihak yang dengan ketulusan hatinya berkenan membimbing dan menyemangati penulis hingga selesainya penulisan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Dekan Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2. Ibu Phebe Hendra M. Si., Ph.D.,Apt., selaku Dosen Pembimbing utama yang telah memberikan bimbingan, arahan dan masukan yang bermanfaat hingga terselesainya skripsi ini.
3. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan masukan, perhatian, kritik dan saran demi penyempurnaan skripsi ini.
viii
5. Para karyawan dan laboran Farmakologi-Toksikologi (Mas Kayat, Mas Parjiman dan Mas Heru) dan laboran-laboran lainnya, yang telah banyak membantu selama penelitian ini.
6. Persaudaraan Kongregasi FCJM dan Dewan Pimpinan Provinsi Indonesia yang telah memberikan kesempatan untuk menimba ilmu, dukungan doa. 7. Teman-teman angkatan 2009 khususnya kelas A, spesial teman-teman tim
Annona muricata L. (Veronica Dita Ayuningtyas, Niken Ambar Sayekti, Apriliawati Galuh, Christiana Lambang Kristanti, Elisabeth Raras Pramudita, Meita Eryanti) yang baik hatinya memberikan senyum ceria dan semangat kebersamaan. Semangat jiwa muda yang pantang menyerah dalam menggapai cita dan mimpi masing-masing diberkati oleh Yang Maha Kuasa.
8. Semua pihak yang terlibat, yang tak dapat penulis sebutkan satu persatu. Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, segala kritik dan saran demi penyempurnaan skripsi ini sangat diharapkan. Akhir kata, semoga penelitian ini dapat menjadi sumbangan kecil bagi ilmu kefarmasian.
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ... vi
PRAKATA ... vii
DAFTAR ISI ... ix
DAFTAR TABEL ... xiv
DAFTAR GAMBAR ... xx
DAFTAR LAMPIRAN ... xxiv
INTISARI ... xxvi
ABSTRACT ... xxvii
BAB I. PENGANTAR ... 1
A. Latar Belakang ... 1
1. Perumusan masalah ... 4
2. Keaslian penelitian ... 5
x
B. Tujuan Penelitian ... 6
1. Tujuan umum ... 6
2. Tujuan khusus ... 6
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA... 7
A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.) ... 7
1. Daerah asal dan penyebaran ... 7
2. Nama daerah ... 7
3. Jenis tanaman sirsak di Indonesia ... 8
4. Sistematika ... 9
5. Morfologi ... 9
6. Kandungan kimia ... 11
7. Khasiat dan kegunaan ... 12
8. Efek samping ... 13
B. Sediaan Infusa ... 14
1. Pengertian infusa ... 14
2. Pembuatan infusa ... 14
C. Sistem Hematologi ... 15
D. Jenis-Jenis Sel Darah ... 15
1. Sel darah merah (eritrosit) ... 15
2. Sel darah putih (leukosit) ... 17
xi
E. Cairan Plasma Darah ... 21
F. Pemeriksaan Terhadap Sistem Hematologi (Hitung Darah Lengkap) ... 22
1. Tes sel darah merah ... 23
2. Tes sel darah putih ... 25
3. Pemeriksaan trombosit ... 26
G. Toksisitas ... 26
1. Definisi toksikologi ... 27
2. Asas umum toksikologi ... 28
3. Mekanisme, wujud, dan sifat efek toksik racun ... 28
4. Faktor-Faktor yang mempengaruhi ketoksikan racun ... 29
5. Uji ketoksikan ... 30
H. Toksisitas Subkronis ... 30
I. Darah Sebagai Target Efek Toksik ... 32
J. Keterangan Empiris ... 33
BAB III. METODE PENELITIAN... 34
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 34
B. Variabel dan Definisi Operasional ... 34
1. Variabel penelitian ... 34
2. Definisi Operasional ... 35
C. Alat dan Bahan Penelitian ... 36
1. Alat penelitian ... 36
xii
D. Tata Cara Penelitian ... 38
1. Determinasi daun sirsak... 38
2. Pengumpulan bahan uji daun sirsak ... 38
3. Pembuatan simplisia serbuk daun sirsak ... 39
4. Penetapan kadar air daun sirsak... 39
5. Penetapan dosis infusa daun sirsak ... 39
6. Pembuatan infusa daun sirsak... 41
7. Penyiapan hewan uji ... 41
8. Prosedur pelaksanaan penelitian ... 41
9. Pengamatan ... 42
E. Analisis dan Evaluasi Hasil Penelitian ... 42
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 44
A. Hasil Determinasi Tanaman ... 44
B. Penetapan Kadar Air Daun Sirsak ... 45
C. Hasil Uji Toksisitas Subkronik Infusa Daun Sirsak Terhadap Sistem Hematologi Tikus Jantan dan Betina... 46
1. Hasil pemeriksaan sistem hematologi pada tikus jantan ... 48
2. Hasil pemeriksaan kadar hematologi secara lengkap pada tikus betina ... 80
xiii
E. Pengamatan Terhadap Jumlah Konsumsi Makan Akibat Perlakuan
Infusa Daun Sirsak ... 111
F. Pengamatan Terhadap Jumlah Konsumsi Minum Akibat Perlakuan Infusa Daun Sirsak ... 113
G. Rangkuman Pembahasan ... 115
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 124
A. Kesimpulan ... 124
B. Saran ... 124
DAFTAR PUSTAKA ... 125
LAMPIRAN ... 128
xiv
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel I. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar hemoglobin tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 51 Tabel II. Hasil uji Scheffe kadar hemoglobin tikus jantan setelah pemberian infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 52 Tabel III. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
eritrosit darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 53 Tabel IV. Hasil uji Scheffe kadar eritrosit setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 54 Tabel V. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
hematokrit tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk mean±SEM ... 55 Tabel VI. Hasil uji Scheffe kadar hematokrit setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 56 Tabel VII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
leukosit darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 57 Tabel VIII. Hasil uji Scheffe kadar leukosit tikus jantan setelah pemberian infusa
xv
Tabel IX. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar MCV darah tikus jantan tiap kelompok dalam bentuk Mean±SEM ... 60 Tabel X. Hasil uji Scheffe kadar MCV setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 60 Tabel XI. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
MCH darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 61 Tabel XII. Hasil uji Scheffe kadar MCH setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 62 Tabel XIII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
MCHC darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 64 Tabel XIV. Hasil uji Scheffe kadar MCHC setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 64 Tabel XV. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
RDW darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam benttuk Mean±SEM ... 66 Tabel XVI. Hasil uji Scheffe kadar RDW setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 67 Tabel XVII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
xvi
Tabel XVIII. Hasil uji Scheffe kadar trombosit (PLT) setelah pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 69 Tabel XIX. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
limfosit darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 71 Tabel XX. Hasil uji Scheffe kadar limfosit setelah pemberian infusa daun sirsak
selama 30 hari ... 72 Tabel XXI. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
monosit tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 73 Tabel XXII. Hasil uji Scheffe kadar monoosit setelah pemberian infusa daun
sirsak selama 30 hari ... 74 Tabel XXIII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
neutrofil darah tikus jantan tiap kelompok... 76 Tabel XXIV. Hasil uji Mann-Whitney kadar neutrofil setelah pemberian infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 76 Tabel XXV. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
eosinofil darah tikus jantan tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 77 Tabel XXVI. Hasil uji Mann-Whitney kadar eosinofil tikus jantan setelah
xvii
Tabel XXVII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar hemoglobin tikus betina tiap kelompok perlakuan disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 81 Tabel XXVIII. Hasil uji Scheffe kadar hemoglobin tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari... 81 Tabel XXIX. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
eritosit (RBC) tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 85 Tabel XXX. Hasil uji Scheffe kadar eritrosit (RBC) tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari ... 85 Tabel XXXI. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
hematokrit (HCT) tikus betina tiap kelompok perlakuan disajikan dlm bentuk Mean±SEM ... 87 Tabel XXXII. Hasil uji Scheffe kadar hematokrit (HCT) tikus betina setelah
pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 87 Tabel XXXIII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
leukosit (WBC) tikus betina tiap kelompok ... 89 Tabel XXXIV. Hasil uji Scheffe kadar leukosit (WBC) tikus betina setelah
pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 90 Tabel XXXV. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
xviii
Tabel XXXVI. Hasil uji Scheffe kadar MCV tikus betina setelah pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 92 Tabel XXXVII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p
kadar MCH tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 93 Tabel XXXVIII. Hasil uji Scheffe kadar MCH tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari ... 94 Tabel XXXIX. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
MCHC tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 95 Tabel XL. Hasil uji Scheffe kadar MCHC tikus betina setelah pemberian infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 96 Tabel XLI. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
RDW tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 97 Tabel XLII. Hasil uji Scheffe kadar RDW tikus betina setelah pemberian infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 98 Tabel XLIII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
Trombosit (PLT) tikus betina tiap kelompok ... 99 Tabel XLIV. Hasil uji Scheffe kadar trombosit (PLT) tikus betina setelah
pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 100 Tabel XLV. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
xix
Tabel XLVI. Hasil uji Scheffe kadar limfosit tikus betina setelah pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari ... 102 Tabel XLVII. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
neutrofil tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 103 Tabel XLVIII. Hasil uji Scheffe kadar neutrofil tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari ... 104 Tabel XLIX. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
monosit tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean±SEM ... 105 Tabel L. Hasil uji Mann-Whitney kadar monosit tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari ... 105 Tabel LI. Nilai pre dan post pemberian infusa daun sirsak serta nilai p kadar
eosinofil darah tikus betina tiap kelompok disajikan dalam bentuk Mean ± SEM ... 106 Tabel LII. Hasil uji Mann-Whitney kadar eosinofil tikus betina setelah pemberian
infusa daun sirsak selama 30 hari... 107 Tabel LIII. Purata berat badan±SEM tikus jantan hari ke-0, ke-7, ke-14, ke-21,
dan ke-28 akibat perlakuan infusa daun sirsak dan kontrol aquadest ... 108 Tabel LIV. Purata berat badan±SEM Tikus Betina hari ke-0, ke-7, ke-14, ke-21,
xx
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 1. Diagram batang rata-rata±SEM pengaruh pemberian infusa daun sirsak terhadap kadar hemoglobin tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 51 Gambar 2. Diagram batang rata-rata±SEM pengaruh pemberian infusa daun sirsak
terhadap kadar eritrosit tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 54 Gambar 3. Diagram batang rata-rata ± SEMpengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar hematokrit tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 56 Gambar 4. Diagram batang rata-rata±SEM pengaruh pemberian infusa daun sirsak
terhadap kadar leukosit tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 58 Gambar 5. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar MCV tikus jantan antar kelompok perlakuan .. 60 Gambar 6. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar MCH tikus jantan antar kelompok perlakuan .. 62 Gambar 7. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar MCHC tikus jantan antar kelompok perlakuan 64 Gambar 8. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar RDW tikus jantan antar kelompok perlakuan .. 67 Gambar 9. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
xxi
Gambar 10. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun sirsak terhadap kadar limfosit tikus jantan antar kelompok perlakuan 71 Gambar 11. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar monosit tikus jantan antar kelompok perlakuan74 Gambar 12. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar neutrofil tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 76 Gambar 13. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar eosinofil tikus jantan antar kelompok perlakuan ... 77 Gambar 14. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar hemoglobin tikus betina antar kelompok perlakuan ... 81 Gambar 15. Diagram batang rata-rata±SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar eritrosit tikus betina antar kelompok perlakuan 85 Gambar 16. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar hematokrit (HCT) tikus betina antar kelompok perlakuan ... 87 Gambar 17. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar leukosit (WBC) tikus betina antar kelompok perlakuan ... 89 Gambar 18. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
xxii
Gambar 19. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun sirsak terhadap kadar MCH tikus betina antar kelompok perlakuan .. 94 Gambar 20. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar MCHC tikus betina antar kelompok perlakuan 96 Gambar 21. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar RDW tikus betina antar kelompok perlakuan .. 98 Gambar 22. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar trombosit (PLT) tikus betina antar kelompok perlakuan ... 100 Gambar 23. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar limfosit tikus betina antar kelompok perlakuan ... 102 Gambar 24. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar neutrofil tikus betina antar kelompok perlakuan ... 103 Gambar 25. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar monosit tikus betina antar kelompok perlakuan ... 105 Gambar 26. Diagram batang rata-rata ± SEM pengaruh pemberian infusa daun
sirsak terhadap kadar eosinofil tikus betina antar kelompok perlakuan ... 106 Gambar 27. Grafik perubahan berat badan tikus jantan selama pemberian infusa
xxiii
Gambar 28. Grafik perubahan berat badan tikus betina selama pemberian infusa daun sirsak hari ke-0 sampai hari ke-28 pada sesuai kelompok dosis ... 110 Gambar 29. Grafik jumlah asupan makan tikus jantan akibat perlakuan infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 112 Gambar 30. Grafik jumlah asupan makan tikus betina akibat perlakuan infusa
daun sirsak selama 30 hari ... 112 Gambar 31. Grafik jumlah asupan minum tikus jantan akibat perlakuan infusa
daun sirsak ... 114 Gambar 32. Grafik jumlah asupan minum tikus betina akibat perlakuan infusa
xxiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi ... 128 Lampiran 2. Hasil kunci determinasi tanaman sirsak (Annona muricata L.) ... 129 Lampiran 3. Gambar tanaman sirsak dan daun sirsak... 129 Lampiran 4. Foto serbuk kering simplisia daun sirsak dan infusa daun sirsak ... 130 Lampiran 5. Gambar rangkaian alat destilator (destilasi toluen) ... 130 Lampiran 6. Surat keterangan Ethical Clearence ... 131 Lampiran 7. Perhitungan bobot tetap daun sirsak ... 132 Lampiran 8. Perhitungan rendemen daun sirsak ... 132 Lampiran 9. Perhitungan kadar air dalam daun sirsak ... 132 Lampiran 10. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa daun sirsak pada tiap
kelompok perlakuan ... 132 Lampiran 11. Uji Normalitas Sistem Hematologi Tikus Jantan Sesudah Perlakuan
Infusa Daun Sirsak Selama 30 Hari ... 134 Lampiran 12. Uji Normalitas Sistem Hematologi Tikus Betina Sesudah Perlakuan
Infusa Daun Sirsak Selama 30 Hari ... 134 Lampiran 13. Uji T-Test Kadar Eritrosit (RBC) Tikus Jantan... 135 Lampiran 14. Uji statistik one way Anova kadar eritrosit (RBC) tikus jantan ... 136
Oneway 136
Lampiran 15. Uji T-Test Kadar Eritrosit (RBC) Tikus Betina ... 137 Lampiran 16. Uji statistik One Way Anova kadar eritrosit (RBC) tikus betina .. 138
xxv
Lampiran 17. Uji Paired T-Test Kadar Eosinofil Tikus jantan ... 140 Lampiran 18. Analisis statistik dengan uji Kruskal-Wallis kadar eosinofil tikus
jantan ... 141 Lampiran 19. Uji statistik menggunakan uji Mann-Whitney pada kadar eosinofil
tikus jantan ... 142 Lampiran 20. Uji Paired T-Test Kadar Eosinofil Tikus Betina ... 151 Lampiran 21. Analisis statistik dengan uji Kruskal-Wallis kadar eosinofil tikus
betina ... 151 Lampiran 22. Uji statistik menggunakan uji Mann-Whitney pada kadar eosinofil
xxvi
INTISARI
Makin maraknya penggunaan daun sirsak di masyarakat sebagai obat terutama untuk pengobatan kanker, menjadikan masyarakat mengkonsumsi daun sirsak dalam jangka panjang. Namun belum diketahui secara ilmiah tentang keamanan daun sirsak bila dikonsumsi dalam jangka waktu panjang. Untuk itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui wujud efek toksik infusa daun sirsak pada sistem hematologi secara subkronis.
Penelitian menggunakan metode eksprimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Subjek uji yang digunakan adalah tikus putih galur Sprague Dawley umur 2-3 bulan, kisaran berat badan 150-250 gram. Sebanyak 50 ekor tikus dibagi secara acak menjadi 5 kelompok, yaitu empat kelompok perlakuan dan satu kelompok kontrol, setiap kelompok terdiri dari 5 jantan dan 5 betina. Kelompok perlakuan diberikan infusa daun sirsak dengan dosis 108; 180; 301; 503 mg/kgBB dan kontrol aquadest 8333 mg/kgBB, selama 30 hari. Dilakukan pemeriksaan sistem hematologi pada hari ke-0 dan hari ke-31 dan pengamatan terhadap berat badan, asupan makan dan minum setiap harinya. Analisis menggunakan One wayAnova dan uji scheffe (distribusi data normal), uji Kruskal Wallis dan Mann-Whitney (distribusi data tidak normal).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian infusa daun sirsak selama 30 hari tidak memberikan perubahan yang signifikan terhadap perubahan sistem hematologi dan tidak ditemukan adanya hubungan kekerabatan antara dosis dengan spektrum efek toksik.
xxvii
ABSTRACT
Increasing usage of Annona muricata L. leaves by people as medicine especially for cancer treatment makes people consume it for long period. But, it has not been examined scientifically for its safety when it is being consumed for long period. So, this study is intended to identify subchronic effect of soursop leaves infusion toxicity upon hematology system.
This study uses pure experimental method with complete direct current random plan pattern. Subject research is white Sprague-Dawley rat, 2-3 months of age, 150-250 gram in weight. Fifty rats are divided into 5 groups randomly, four treatment-groups and one control-group. Every group consists of 5 female and 5 male. Treatment groups are given soursop leaves infusion with 108; 180; 301; 503 mg/kg body weight dose and water (aquadest) for control group for 30 days. Examination on hematology system is done on 0th and 31th day and weight
observation, meal, and drink examinations are done daily. The analysis uses one way Anova and Scheffe test (normal data distribution), Kruskal Wallis test, and Mann-Whitney (abnormal data distribution).
The research result shows that soursop leaves infusion treatment for 30 days does not give significant change on hematology system and no relationship is found between the dosage and toxic effect spectrum.
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Indonesia merupakan negara yang kaya akan tanaman obat-obatan. Hal ini didukung oleh kondisi alam yang subur sehingga tanaman mudah tumbuh dengan baik di berbagai daerah di Indonesia. Penggunaan tanaman sebagai obat tradisional makin marak dimasyarakat khususnya masyarakat dengan tingkat ekonomi menengah ke bawah. Selain itu dengan adanya isu back to nature di dunia barat yang kembali mengakui tradisi pengobatan timur khususnya Asia yakni pengobatan menggunakan tanaman sebagai obat atau pengobatan menggunakan bahan alam menyebabkan meluasnya penggunaan tanaman-tanaman yang berkhasiat obat.
antidiare, antidiabetes, dan memiliki efek hepatoprotektif (Arthur, Woode, Terlabi dan Larbie 2011).
Pengetahuan masyarakat tentang obat tradisional dapat mencegah, menyembuhkan, memulihkan kesehatan dan meningkatkan kesehatan menjadikan masyarakat mengkonsumsi obat tradisional tersebut secara terus-menerus. Padahal tidak menutup kemungkinan bahwa penggunaan terus-menerus dari obat tradisional tersebut dapat menyebabkan toksisitas.
Telah dilakukan penelitian mengenai kegunaan dan kandungan kimia daun sirsak oleh Mc. Laughin, Liau, dan Alali, (1999) terutama sebagai antikanker karena mengandung senyawa acetogenins. Kebiasaan masyarakat mengkonsumsi air rebusan daun sirsak dalam jangka waktu yang lama tanpa pengetahuan mengenai dosis yang benar. Belum banyak penelitian yang dilakukan untuk mengetahui seberapa besar dosis yang aman jika daun sirsak dikonsumsi dalam jangka waktu yang lama.
yang dikonsumsi dalam dosis besar yang menyebabkan ketoksikan sistem hematologi/darah maka akan sangat mempengaruhi fungsi dan peranannya tersebut.
Pengaruh efek toksik dari senyawa-senyawa dapat berupa perubahan kadar sistem hematologi/darah baik peningkatan maupun penurunan kadar yang tidak sesuai dengan range normal. Sebagai contoh, salah satu komponen darah yakni leukosit. Leukosit berperan dalam sistem kekebalan tubuh. Jika terjadi peningkatan leukosit (leukositosis) menyebabkan inflamasi/radang akut. Peningkatan leukosit yang sangat tinggi dapat djumpai pada penderita kanker post operasi. Jika terjadi penurunan jumlah leukosit (leukopenia) sistem kekebalan tubuh berkurang untuk melawan kuman penyakit. Leukopenia biasanya disebabkan oleh infeksi virus, leukemia atau disebabkan oleh konsumsi obat antimetabolit, antibiotik, kemoterapi, dan antikonvulsan. (Depkes RI, 2011).
Penelitian Arthur et al, (2011) telah melaporkan mengenai uji toksisitas akut dan subkronis ekstrak air daun sirsak (Annona muricata Linn.) yang diberikan pada mencit selama 14 hari. Hasil penelitian ini menunjukkan terjadi peningkatan limfosit seiring dengan peningkatan dosis namun perubahan tersebut tidak signifikan baik pada jumlah limfosit maupun jumlah White Blood Cell (WBC).
hematokrit, RDW (red blood cell distribution width), MCV (mean corpuscular volum), MCH (mean corpuscular hemoglobin), MCHC (mean corpuscular hemoglobin concentration), trombosit (PLT), leukosit, limfosit, eosinofil, monosit, neutrofil, basofil, LED jam I dan LED jam II.
Adapun perubahan sistem hematologi merupakan perubahan/kekacauan biokimia yang merupakan salah satu wujud efek toksik. Wujud efek toksik berupa perubahan biokimia ini, dapat menyebabkan peningkatan atau pengurangan aktivitas pada sistem hematologi. Perubahan/kekacauan biokimiawi biasanya merupakan salah satu tahap awal menuju perubahan/kekacauan struktural akibat efek toksik (Donatus, 2001).
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bagi masyarakat luas agar dapat mengetahui efek toksik yang dapat ditimbulkan pada sistem hematologi/darah akibat konsumsi infusa daun sirsak secara berulang dalam jangka waktu yang lama dengan mengevaluasi perubahan kadar pada sistem hematologi/ darah.
1. Perumusan masalah
a. Seberapa besar wujud efek toksik yang dapat ditimbulkan infusa daun sirsak berupa perubahan/kekacauan biokimia sistem hematologi tikus jantan dan betina yang dievaluasi dari perubahan kadar sistem hematologi?
2. Keaslian penelitian
Penelitian-penelitian yang telah dipublikasikan tentang penggunaan sirsak adalah sebagai berikut:
a. Sirsak (Annona muricata L.): Hematologi Darah dan Biokimia Serum pada Tikus Sprague Dawley (Syahida, Maskat, Suri, Mamot, and Hadijah, 2012). Penelitian ini dilakukan secara in vivo, yang dilakukan selama 28 hari pada dosis bertingkat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daging buah Annona muricata L. tidak menimbulkan efek negatif terhadap sistem hematologi meskipun terdapat adanya peningkatan secara signifikan secara statistik (p<0,05) pada platelet. Hasil uji biokimia serum menunjukkan bahwa ekstrak Annona muricata L. tidak menimbulkan gagal hati dan ginjal. Total antioxidant status (TAS) menunjukkan peningkatan signifikan seiring peningkatan dosis. Namun, peningkatan ini masih dalam batas normal.
Perbedaan dengan penelitian ini adalah penelitian dilakukan dengan menggunakan bahan uji ekstrak daging buah sirsak sedangkan penelitian yang dilakukan menggunakan bahan uji berupa infusa daun sirsak.
b. Uji toksisitas akut dan subkronik ekstrak air Annona muricata Linn. terhadap hewan (Arthur et al., 2011). Penelitian ini dilakukan hanya dalam waktu 14 hari. Hasil penelitian ini menunjukkan terjadi peningkatan limfosit seiring dengan peningkatan dosis namun perubahan tersebut tidak signifikan baik pada jumlah limfosit maupun jumlah WBC (white blood cell).
dimasyarakat dalam jangka waktu lama lebih dari 14 hari. Dan berdasarkan penelusuran, sejauh penulis ketahui belum dilakukan penelitian uji toksisitas subkronis infusa daun sirsak (Annona muricata L.): kajian terhadap sistem hematologi pada tikus jantan dan betina selama 30 hari.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis. Memberikan informasi mengenai toksisitas subkronis infusa daun sirsak terhadap sistem hematologi.
b. Manfaat praktis. Memberikan informasi pada masyarakat luas, mengenai keamanan infusa daun sirsak yang dikonsumsi dalam jangka waktu lama tentang wujud efek toksik berupa perubahan/kekacauan biokimia terhadap sistem hematologi yang dievaluasi dari perubahan kadar sistem hematologi dan menilai hubungan efek toksik dan dosis.
B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan ada tidaknya efek toksik infusa daun sirsak yang diberikan secara subkronik.
2. Tujuan khusus
a. Untuk mengungkapkan wujud efek toksik infusa daun sirsak berupa perubahan/kekacauan biokimia terhadap sistem hematologi yang dievaluasi dari perubahan kadar sistem hematologi.
7
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Tanaman Sirsak (Annona muricata L.) 1. Daerah asal dan penyebaran
Tanaman sirsak merupakan tanaman tahunan yang dapat tumbuh dan berbuah sepanjang tahun. Tanaman sirsak ini diperkirakan berasal dari Karibia, Amerika Tengah, dan Amerika Selatan. Tanaman sirsak kemudian menyebar hampir ke seluruh benua (Muktiani, 2011).
Di Indonesia, tanaman sirsak tumbuh baik pada dataran rendah beriklim kering maupun daerah beriklim basah pada ketinggian 1000 meter dari permukaan laut. Tanaman sirsak yang terdapat di Indonesia didatangkan oleh pemerintah kolonial Belanda pada abad ke-19. Oleh karena itu, sebutan atau nama lain yang dari tanaman sirsak di Indonesia dikenal dengan nangka belanda atau durian belanda (Muktiani, 2011).
2. Nama daerah
3. Jenis tanaman sirsak di Indonesia
Ada 4 jenis sirsak yang dikenal di Indonesia yang memiliki rasa yang berbeda yakni: sirsak Ratu, sirsak biasa, sirsak Bali, sirsak Mandalika. Jenis sirsak Ratu dikembangkan di pelabuhan Ratu, Sukabumi (Jawa Barat), sehingga akhirnya dikenal sebagai sirsak Ratu. Buah sirsak Ratu memiliki rasa yang manis. Pada jenis sirsak biasa bercita rasa masam manis dan memiliki kemiripan tampilan seperti sirsak Ratu. Ciri khas (spesifikasi) sirsak Ratu adalah buahnya berukuran kecil sampai besar, berkulit licin dan berduri, dengan daging buah bertepung. Perubahan warna kulit buah sirsak Ratu dari stadium mentah ke stadium matang (masak) berlangsung lambat (Rukmana dan Yuniarsih, 2001 ).
Selanjutnya sirsak Bali dikenal dengan nama sirsak gundul karena berkulit licin, tidak berduri dan memiliki rasa masam manis. Karakteristik sirsak Bali buahnya berukuran kecil dengan berat per buah berkisar antara 200-300 gram. Stadium matang ditandai dengan kulit buah yang berwarna coklat kekuning-kuningan. Sirsak Bali berasal dari Bali. Laju pertumbuhan sirsak Bali lebih cepat dibandingkan dengan jenis sirsak lainnya (Rukmana dan Yuniarsih, 2001 ).
Sirsak Mandalika memiliki karakteristik amat mirip dengan sirsak Ratu atau sirsak biasa berasa manis namun berbeda dalam hal jarak duri-duri kulit buah yang jarang dan berbiji banyak (Rukmana dan Yuniarsih, 2001).
4. Sistematika
Sistematika tanaman sirsak (Annona muricata L.) sebagai berikut: Kingdom : Plantae (tanaman)
Subkingdom : Tracheobionta (tanaman berpembuluh) Superdivisio : Spermatohyta (menghasilkan biji) Divisio : Magnoliophyta (tanaman berbunga)
Kelas : Magnoliopsida/Dicotyledonae (berkeping dua) Subkelas : Magnoliidae
Ordo : Magnoliales Family : Annonaceae Genus : Annona
Species : Annona muricata L.
(Plantamor, 2008).
5. Morfologi
permukaan licin agak mengkilat, tulang daun menyirip, ibu tulang daun menonjol pada permukaan bawah (Depkes RI, 1995).
Pemerian daun sirsak secara mikroskopik meliputi: penampang melintang melalui tulang daun tampak sel epidermis atas bentuk empat persegi panjang dengan dinding bergelombang, kutikula tebal; sel epidermis bawah lebih kecil dari pada atas, bentuk tidak beraturan dengan dinding bergelombang, terdapat stomata, rambut penutup bentuk lurus, terdiri dari 2 sel sampai 3 sel, ujung tumpul (Depkes RI, 1995).
Serbuk daun sirsak berwarna kehijauan. Fragmen pengenalnya adalah epidermis atas bentuknya tidak beraturan, dinding bergelombang terdapat stomata tipe anomositik, rambut penutup panjang, dinding tebal, lumen tebal, fragmen pembuluh kayu dengan penebalan tangga, sel batu bundar, fragmen mesofil dengan palisade; mesofil dengan sel sekresi bentuk bundar dinding tebal; fragmen parenkim bernokhtah (Depkes RI, 1995).
Bunga tanaman sirsak termasuk bunga tunggal (flos simplex). Dalam satu bunga terdapat banyak putik. Bunga berukuran besar, dengan mahkota berjumlah 6 dan sepalum yang terdiri atas 2 lingkaran. Tiga daun mahkota lingkar luar lebih tebal dan besar sedangkan tiga daun mahkota lingkar dalam berukuran lebih kecil. Bunga berwarna kuning keputih-putihan (Muktiani, 2011).
Bentuk buah bagian ujung agak membulat dengan diameter ± 5 cm, diameter bagian tengah ± 7 cm, serta panjang buah ± 17 cm. Kerapatan duri maksimal 4 cm (diukur pada bagian buah yang durinya paling jarang). Buah yang sudah tua/matang berwarna hijau agak kekuningan dan mengkilap (Muktiani, 2011).
Biji berwarna coklat kehitaman, keras, berujung tumpul, permukaan halus mengkilat dengan ukuran panjang kira-kira 16,8 mm dan lebar 9,6 mm. Batang tanaman sirsak berkayu keras dengan arah cabang tidak menentu. Ketinggian batang mencapai 8-10 meter dengan diameter batang 10-30 cm. Akar tanaman sirsak dapat menembus tanah hingga kedalaman 2 meter, memiliki akar samping yang banyak dan kuat (Muktiani, 2011).
6. Kandungan kimia
Pada kulit batang mengandung senyawa tanin, fitosterol, Ca-oksalat, muricine dan alkaloid. Biji sirsak mengandung reticuline, solamin, anomuricin, anomurine. Buah sirsak yang kaya serat mengandung karbohidrat. Salah satu jenis karbohidrat yang terkandung dalam buah sirsak adalah gula pereduksi (glukosa dan fruktosa) dengan kadar 81,9-93,6 persen dari kandungan gula total (Muktiani, 2011).
Melalui analisis kualitatif fitokimia pada serbuk daun sirsak, Pathak, Saraswathy, Vora dan Savai (2010), telah melaporkan bahwa daun sirsak mengandung metabolit sekunder berupa steroid, tannin dan glikosida jantung. Penelitian lain yang dilakukan oleh Mc Laughin et al. pada tahun 1999, daun sirsak mengandung acetogenins yang merupakan kumpulan senyawa aktif seperti muricatosin A, muricatosin B, annomuricin E, muricapentocin, annopentocin A,
annopentocin B, dan annopentocin C.
7. Khasiat dan kegunaan
Semua bagian tanaman sirsak mempunyai khasiat dan kegunaan, mulai dari kulit kayu, akar, daun, daging buah, hingga bijinya. Buah sirsak merupakan sumber vitamin dan mineral dengan rasa yang menyegarkan. Buah sirsak yang kaya serat dapat bermanfaat untuk melancarkan pencernaan (antisembelit), meningkatkan nafsu makan, anti-skorbut (kekurangan vitamin C) (Rukmana, 2001).
Di negara Brazil, bunga sirsak digunakan untuk mengobati penyakit saluran pernapasan (bronchitis). Kombinasi bunga, daun dan akar dapat menyembuhkan sakit di dada. Kulit batang yang direbus dapat memperbaiki kerja jantung, mengobati hipertensi sedangkan biji sirsak bermanfaat untuk mengatasi masuk angin dan dapat digunakan sebagai pestisida nabati (Muktiani, 2011). .
kanker paru-paru, sel kanker payudara, sel kanker usus, sel kanker ginjal, sel kanker prostat dan sel kanker pankreas (Mc Laughin et al., 1999).
Daun sirsak mengandung minyak esensial dengan efek parasitisidal, anti-diare, rheumatological dan anti-neuralgik. Infusa air matang daun memiliki sifat anti-plasmodik, membantu mengobati diabetes dan gangguan lambung, penyakit kuning dan digunakan dalam mengobati aliments ginjal. Daunnya juga memiliki sifat hepatoprotektif terhadap kerusakan yang diinduksi oleh karbontetraklorida dan acetaminophen (Arthur et al., 2011).
Acetogenins menghambat proses mitosis sel kanker dengan menghambat pembentukan adenosin trifospat (ATP) dengan cara menempel pada reseptor dinding sel dan merusak ATP di dinding mitokondria yang dapat menyebabkan produksi energi dalam sel kanker terhenti, dengan demikian sel kanker mengalami kematian (Mc Laughin et al., 1999).
8. Efek samping
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, diketahui bahwa konsumsi sirsak ditoleransi dengan baik namun konsumsi dosis tinggi sirsak dapat menyebabkan gangguan pencernaan, hipotensi, disfungsi saraf yang menyebabkan gangguan neurologis, dan myeloneuropathy dari saraf optik. Selain itu, dilaporkan bahwa sirsak menunjukkan aktivitas stimulan rahim dalam studi hewan (tikus) oleh karena itu tidak boleh digunakan selama kehamilan (Rain tree, 2012).
atau teh yang terbuat dari berbagai jenis daun sirsak, dapat menimbulkan peningkatan parkinson atipikal. Berdasarkan penelitian terhadap tikus, neurotoksin yang terdapat dalam sirsak meliputi alkaloid, acetogenins (termasuk annonacin), dan senyawa isoquinolone. Dalam studi ini, konsentrasi tinggi annonacin melintasi penghalang darah-otak dan memasuki parenkim otak, penurunan adenosin trifosfat (ATP) tingkat otak dan merusak ganglia basal dan inti batang otak. Konsumsi sirsak dapat mempotensiasi obat depresan antihipertensi dan jantung (Rain tree, 2012).
B. Sediaan Infusa 1. Pengertian infusa
Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 900 C selama 15 menit. Infusa dapat
diminum panas atau dingin (BPOM RI, 2010).
2. Pembuatan infusa
Pembuatan infusa merupakan cara yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak misalnya daun dan bunga. Pembuatan infusa dapat dilakukan dengan cara mencampur simplisia derajat halus yang sesuai dalam panci dengan air secukupnya, kemudian memanaskannya diatas penangas air selama 15 terhitung mulai suhu mencapai 900C sambil sesekali diaduk-aduk.
C. Sistem Hematologi
Hematologi adalah ilmu yang mempelajari tentang sel-sel darah dan faktor-faktor yang memengaruhi fungsinya (WHO, 2003). Darah merupakan jaringan cair yang terdiri atas dua bagian yakni sel-sel darah dan plasma darah. Darah terdapat didalam pembuluh darah. Sel-sel darah ini tersuspensi didalam plasma darah. Sel-sel darah terdiri dari tiga komponen penting yakni eritrosit (sel darah merah), leukosit (sel darah putih) dan trombosit (butir pembeku). Plasma darah tersusun dari air (91%), protein (8 %), mineral (0,9%), bahan organik (0,1%), hormon, enzim, antigen, gas oksigen dan karbondioksida (Pearce, 2009).
Peranan darah amat penting yakni untuk pengangkutan sari-sari makanan dan pasokan oksigen, membantu mempertahankan suhu tubuh, mengangkut hormon-hormon dan melawan infeksi. Sel-sel otak secara khusus membutuhkan pasokan oksigen yang konstan, jika pasokan oksigen terhenti maka akan menimbulkan kematian pada sel-sel otak dalam waktu yang singkat. Jenis-jenis sel darah yang bertanggung jawab untuk transportasi oksigen dan karbondioksida adalah platelet, limfosit, sel darah putih, dan sel darah merah (Ganong, 2008).
D. Jenis-Jenis Sel Darah 1. Sel darah merah (eritrosit)
pucat, tetapi bila dalam jumlah banyak akan kelihatan berwarna merah (Pearce, 2009).
Ukuran eritrosit ± 7-8 µm dan konsentrasi normalnya sekitar 4-5 x 1012
per liter (4-5 x 106 per mm3) darah. Produksi sel darah merah (eritrosit) terdapat
didalam sumsum tulang merah, limpa dan hati. Eritrosit mengandung hemoglobin yang mengikat dan mengangkut oksigen dari paru-paru ke berbagai jaringan dan kemudian mengangkut karbondioksida dari jaringan ke paru-paru untuk dieksresikan (WHO, 2003).
Umur sel darah merah normal adalah 120 hari, hal ini berarti bahwa setiap hari terjadi pergantian kurang dari 1% populasi sel darah merah (200 milyar sel atau 2 juta per detik). Umur sel darah merah yang sangat singkat terjadi pada keaadaan anemia hemolitik, pada keadaan ini sumsum tulang berupaya memproduksi jumlah sel darah muda ke dalam sirkulasi untuk mencapai keadaan homeostasisnya (Murray, Granner, and Rodwell, 2006).
Hemoglobin merupakan pigmen merah pembawa oksigen dalam sel darah merah vertebrata yaitu suatu protein dengan dengan berat molekul 64.450. Hemoglobin berbentuk molekul bulat dan terdiri atas empat subunit. Tiap-tiap sub unit mengandung satu gugus heme yang terkonyugasi suatu polipeptida. Heme adalah suatu derivat porfirin yang mengandung besi. Polipeptida-polipeptida yang terkonyugasi pada heme secara kolektif disebut sebagai globin dari molekul hemoglobin (Ganong, 2008).
mengandung 141 residu asam amino dan rantai β yang masing masing mengandung 146 residu asam amino. Jadi, hemoglobin A diberi kode α2β2 . Tidak semua hemoglobin didalam darah orang dewasa normal berupa hemoglobin A. Ada derivat hemoglobin A dalam jumlah kecil yang terkait erat dengan hemoglobin A dan merupakan hemoglobin terglikasi. Salah satunya adalah hemoglobin A1c (HbA1c) yang mempunyai satu glukosa yang menempel pada
valin terminal di setiap rantai β. Hemoglobin ini sangat menarik karena jumlahnya dalam darah meningkat pada diabetes melitus yang tidak terkontrol (Ganong, 2008).
Hemoglobin memiliki afinitas terhadap oksigen dan dengan oksigen membentuk oksihemoglobin didalam sel darah merah. Dengan cara tersebut, maka oksigen dapat dibawa dari paru-paru ke seluruh jaringan. Jumlah hemoglobin dalam dalam darah normal kira-kira 15 gram tiap 100 ml darah (Pearce, 2009).
2. Sel darah putih (leukosit)
Sel darah putih (leukosit) berupa sel bulat berinti dengan sitoplasma yang granuler. Ukurannya sekitar 9-20 µm. Pada pemeriksaan mikroskopik leukosit dapat dengan mudah dibedakan dengan eritrosit karena leukosit memiliki inti (WHO, 2003).
Pada keadaan normal, darah manusia mengandung 4.000-11.000 sel darah putih per mikroliter. Dari jumlah ini, jenis sel terbanyak adalah granulosit (polimorfonukleus, PMN) (Ganong, 2009).
yakni sel netrofil (polimorfonuklear), eosinofil dan basofil beserta monosit membentuk kelompok fagosit (Hoffbrand, Pettit, and Moss, 2005).
Sel netrofil memiliki inti padat khas yang terdiri atas dua sampai lima lobus dan sitoplasma yang pucat, dengan garis batas yang tidak beraturan mengandung banyak granula merah muda-biru (azurofilik) atau warna kelabu-biru. Prekursor netrofil secara normal tidak tampak dalam darah tepi normal tetapi tedapat dalam sumsum tulang. Prekursor paling awal dapat dikenali adalah mieloblas (Hoffbrand et al, 2005).
Waktu paruh rata-rata sel netrofil dalam sirkulasi adalah 6 jam. Untuk dapat mempertahankan kadar normal dalam peredaran darah diperlukan pembentukkan lebih dari 100 miliar neurofil per hari (Ganong, 2008). Neutrofil dalam pewarnaan berwarna ungu/netral karena dapat menyerap pewarna asam maupun basa, sehingga tampaknya berwarna ungu (Pearce, 2009).
Monosit biasanya berukuran lebih besar dari leukosit darah tepi lainnya dan mempunyai inti sentral atau berlekuk dengan kromatin yang menggumpal. Sitoplasmanya yang banyak berwarna biru dan mengandung banyak vakuol halus. Prekursor monosit dalam sumsum tulang (monoblas dan promonosit) (Hoffbrand et al, 2005).
Eosinofil memiliki waktu paruh dalam sirkulasi yang singkat, dan ditarik ke permukaan endotel oleh selektin berikatan dengan integrin yang melekatkan sel ini ke dinding pembuluh serta masuk ke jaringan melalui diapedesis. Eosinofil akan mengeluarkan berbagai protein, sitokin dan kemokin yang menimbulkan peradangan dan mampu membunuh organisme yang masuk kedalam tubuh (Ganong, 2008).
Basofil jarang ditemukan dalam darah tepi normal. Sel ini mempunyai granula sitoplasma yang gelap menutupi inti serta mengandung heparin dan histamin (Hoffbrand et al, 2005). Basofil menyerap pewarna basa dan pada pengamatan berwarna biru. Peranan basofil memasuki jaringan dan membebaskan beberapa protein dan sitokin. Jumlahnya lebih sedikit dibanding sel leukosit lainnya (Pearce, 2009).
membuangnya. Dengan cara demikian, jaringan yang sakit atau terluka dapat diperbaiki (Pearce, 2009).
Limfosit dihasilkan dari jaringan sistem retikuloendotelial dan kelenjar limfe. Bentuknya ada yang besar dan kecil, jumlahnya sekitar 20-25 % (Ganong, 2009). Limfosit merupakan sel yang kompeten secara imunologik dan membantu fagosit dalam pertahanan tubuh terhadap infeksi dan invasi asing lain. Limfosit terdiri dari dua jenis yakni sel B dan T. Pada manusia, sel B berasal dari sel induk sumsum tulang dan pada sel T awalnya berasal dari sel induk sumsum tulang tetapi bermigrasi ke timus tempat berdiferensiasi menjadi sel T matur (Hoffbrand et al, 2005).
3. Trombosit
Trombosit dihasilkan dalam sumsum tulang melalui fragmentasi sitoplasma megakariosit. Pengatur utama produksi trombosit adalah trombopoietin yang dihasilkan oleh ginjal dan hati. Lama hidup trombosit yang normal sekitar 7-10 hari ( Hoffbrand et al, 2005).
Trombosit adalah fragmen megakariosit yang ditemukan pada darah tepi dan berperan dalam proses pembekuan darah. Ukuran trombosit sekitar 2-5 µm. Pada orang dewasa jumlah normal trombosit adalah 150-300 x 109 trombosit per
E. Cairan Plasma Darah
Plasma darah adalah cairan berwarna kuning yang dalam reaksi bersifat sedikit alkali. Komposisi plasma dan bahan-bahan yang terkandung didalam plasma adalah sebagai berikut: air, protein (albumin, fibrinogen, protrombin, globulin), mineral (natrium klorida, natrium bikarbonat, garam dari kalsium, fosfor, magnesium dan besi), bahan organik (asam urat, kreatinin, lemak, glukosa, urea, kolestrol, asam amino), gas (oksigen, karbondioksida), hormon, enzim, antigen (Pearce, 2009).
Hampir 90% plasma terdiri atas air. Volume plasma normal adalah sekitar 5% dari berat badan. Plasma menggumpal bila didiamkan dan tetap berwujud cair jika ditambahkan antikoagulan. Bila darah lengkap dibiarkan menggumpal dan gumpalanya diambil, maka sisa cairannya disebut serum. Pada dasarnya plasma dan serum memiliki komposisi yang sama namun ada beberapa kandungan protein yang tidak ada pada serum. Perbedaan plasma dan serum yakni, pada serum tidak terdapat fibrinogen dan pada plasma masih ada fibrinogen (Ganong, 2008).
Fungsi plasma darah adalah sebagai medium/pengantara untuk penyaluran makanan, mineral, lemak, glukosa, dan asam amino ke jaringan dan medium untuk mengangkut bahan buangan misalnya urea, asam urat (Pearce, 2009).
untuk jaringan. Protein plasma yang lain lagi adalah globulin, fibrinogen dan protrombin. Globulin merupakan antibodi yang melindungi tubuh. Fibrinogen berperan dalam koagulasi/pembekuan darah. Protrombin, sebagai prekursor terbentuknya trombin dalam mekanisme pembekuan darah (Pearce, 2009).
F. Pemeriksaan Terhadap Sistem Hematologi (Hitung Darah Lengkap)
Hasil pemeriksaan laboratorium merupakan informasi yang berharga untuk membedakan diagnosis, mengkonfirmasi diagnosis, menilai status klinik pasien, mengevaluasi efektivitas terapi dan munculnya reaksi obat yang tidak diinginkan (Depkes RI, 2011).
Interpretasi hasil pemeriksaan laboratorium oleh apoteker bertujuan untuk:
a. Menilai kesesuaian terapi (contoh: indikasi obat, ketepatan pemilihan obat, kontraindikasi obat, penyesuaian dosis obat, risiko interaksi obat),
b. Menilai efektivitas terapi (contoh: efektivitas pemberian kalium diketahui melalui kadar kalium dalam darah, efektifitas allopurinol di ketahui dari menurunnya kadar asam urat),
c. Mendeteksi dan mencegah reaksi obat yang tidak dikehendaki (contoh: penurunan dosis siprofloksasin hingga 50% pada kondisi klirens kreatinin <30mL/menit),
e. Mencegah interpretasi yang salah terhadap hasil pemeriksaan (Depkes RI, 2011).
Hasil pemeriksaan laboratorium dapat dinyatakan sebagai angka kuantitatif, kualitatif atau semikuantitatif. Hasil kuantitatif berupa angka pasti atau rentang nilai. Hasil kualitatif dinyatakan sebagai nilai positif atau negatif tanpa menyebutkan derajat positif atau negatifnya. Hasil semikuantitatif adalah hasil kualitatif yang menyebutkan derajat positif atau negatif tanpa menyebutkan angka pasti (contoh: 1+, 2+, 3+) (Depkes RI, 2011).
Tes labotratorium yang paling umum dilakukan adalah hitung darah lengkap (HDL). Tes ini dilakukan untuk memeriksa jenis sel dalam darah termasuk sel darah merah, sel darah putih, dan trombosit (The Aids InfoNet, 2012).
1. Tes sel darah merah
Sel darah merah yang disebut juga sebagai eritrosit berfungsi untuk mengangkut oksigen dari paru ke seluruh jaringan tubuh. Fungsi ini dapat dapat diukur melalui beberapa macam tes yaitu:
a. Hitung sel darah merah b. Tes hemoglobin
c. Tes hematokrit
mengukur presentase sel darah merah dalam seluruh volume darah. Eritrosit, hemoglobin dan hematokrit yang sangat rendah menunjukkan adanya anemia (The Aids InfoNet, 2012).
Hitung sel darah merah dapat dilakukan dengan menghitung/mengukur MCV, RDW, MCH, dan MCHC. Red Blood Cell Distribution Width (RDW) mengukur kisaran ukuran sel darah merah. Hasil tes ini dapat membantu mendiagnosis jenis anemia dan kekurangan beberapa vitamin (The Aids InfoNet, 2012)
Mean Corpuscular Volume (MCV) adalah indeks untuk menentukan ukuran sel darah merah. Rentang normal MCV antara 80-100 fl bermanfaat untuk menggolongkan anemia kedalam anemia mikrositik (MCV <80 fl), normositik (MCV=80-100 fl), atau makrositik (MCV>100 fl) (Waterbury, 1998).
Implikasi klinik MCV dapat berupa penurunan maupun peningkatan MCV yang signifikan dari range normal. Penurunan nilai MCV terlihat pada pasien anemia kekurangan besi, anemia pernisiosa dan talasemia, disebut juga anemia mikrositik. Peningkatan nilai MCV terlihat pada penyakit hati, alcoholism, terapi antimetabolik, kekurangan folat/vitamin B12, dan terapi valproat, disebut juga anemia makrositik. Pada anemia sel sabit, nilai MCV diragukan karena bentuk eritrosit yang abnormal. Perhitungan/ rumus MCV adalah sebagai berikut: MCV (femtoliter) = 10 x Hct (%) : Eritrosit (106 sel/μL) ( Depkes RI, 2011).
darah merah. MCH dapat digunakan untuk mendiagnosa anemia ( Depkes RI, 2011).
Implikasi Klinik MCH dapat berupa peningkatan atau penurunan MCH yang ekstrim dari batas nilai normal. Peningkatan MCH mengindikasikan anemia makrositik sedangkan penurunan MCH mengindikasikan anemia mikrositik. Perhitungan : MCH (picogram/sel) = hemoglobin/sel darah merah (Depkes RI, 2011).
Indeks Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC) merupakan indeks untuk mengukur konsentrasi Hb rata-rata dalam sel darah merah. Perhitungan MCHC tergantung pada Hb dan Hct. Rumus perhitungan MCHC adalah: MCHC = hemoglobin/hematokrit dan nilai normal MCHC adalah: 32 – 36 g/dL (Depkes RI, 2011).
Implikasi Klinik dari MCHC adalah adanya penurunan MCHC pada pasien kekurangan besi, anemia mikrositik, anemia karena piridoksin, talasemia dan anemia hipokromik dan peningkatan MCHC pada sferositosis, bukan anemia pernisiosa (Depkes RI, 2011).
2. Tes sel darah putih
atau sitopenia, berarti tubuh kurang mampu melawan infeksi. Hitung Jenis (differential) menghitung lima jenis sel darah putih: limfosit, monosit, neutrofil, eosinofil, basofil (Waterbury, 1998).
Persentase masing-masing hitung jenis leukosit (limfosit, monosit, neutrofil, eosinofil, basofil) dikalikan leukosit untuk mendapatkan jumlah absolut. Perhitungannya adalah jumlah absolut = total sel darah putih x persen diferensial masing-masing tipe sel. Misalnya, dengan limfosit 30% dan leukosit 10.000, limfosit mutlak adalah 30% dari 10.000 = 3000 (Waterbury, 1998).
3. Pemeriksaan trombosit
Pemeriksaan/uji fungsi trombosit berguna untuk mengukur aktivitas agregasi/pembekuan trombosit (Hoffbrand, 2005). Peningkatan trombosit (trombositosis) berhubungan dengan kanker, polisitemia vera, sirosis, dan rheumatoid artritis. Penurunan trombosit (trombositopenia) berhubungan dengan anemia hemolotik, anemia aplastik, anemia pernisiosa, leukemia dan multiple myeloma. Obat-obatan seperti heparin, kinin, asam valproat, antineoplastik, penisilin dapt menyebabkan trombositopenia (Depkes RI, 2011).
G. Toksisitas
toksisitas memberikan informasi tentang bahaya kesehatan akibat paparan senyawa/bahan tertentu pada tubuh (Dandan, 2012).
Manusia biasanya terpejan banyak jenis bahan alami maupun bahan sintesis. Pada keadaan tertentu, pajanan ini berefek buruk bagi kesehatan, yang mungkin menyebabkan kematian atau hanya menimbulkan perubahan biologik saja. Keracunan terjadi ketika ada pemejanan senyawa toksik pada tubuh mahkluk hidup. Setelah pemejanan senyawa toksik akan mengalami proses absorbsi, distribusi, metabolisme dan eliminasi. Pemejanan senyawa toksik ini akan terabsorbsi dari tempat pemejanan, kemudian racun/metabolitnya akan mengalami distribusi ke tempat sel sasaran/reseptor tertentu. Di tempat aksi inilah kemudian terjadi interaksi antara senyawa toksik/metabolitnya dengan komponen penyusun sel sasaran atau dengan resptor. Semua efek toksik ini terjadi karena interaksi biokimiawi antara senyawa toksik/metabolit toksik dengan struktur reseptor tertentu dalam tubuh (Lu, 1995).
Ketoksikan suatu senyawa ditentukan oleh keberadaan (kadar dan lama tinggal) senyawa toksik atau metabolitnya ditempat aksi dan keefektifan interaksinya (mekanisme aksi). Hal ini tergantung pada kondisi pemejanan dan kondisi makhluk hidup (Donatus, 2001).
1. Definisi toksikologi
kekerapan efek yang ditimbulkan oleh xenobiotika sehubungan dengan pemejanannya. (Lu, 1995).
2. Asas umum toksikologi
Asas umum toksikologi meliputi kondisi pemejanan dan kondisi makhluk hidup. Kondisi pemejanan merupakan semua faktor yang menentukan keberadaan racun ditempat aksi tertentu dalam tubuh, yang berkaitan dengan pemejanannya pada diri makhluk hidup. Kondisi pemejanan meliputi jenis, jalur, lama kekerapan dan saat takaran pemejanan racun. Ada dua jenis pemejanan yakni pemejanan akut dan pemejanan kronis. Jenis pemejanan ini berkaitan erat dengan lama dan kekerapan pemejanan yang merupakan batas kurun waktu pemejanan terhadap makhluk hidup. Lama dan kekerapan pemejanan dapat mempengaruhi wujud dan ketoksikan racun (Donatus, 2001).
Kondisi mahkluk hidup adalah keadaan fisologi serta patologi makhluk hidup yang dapat mempengaruhi ketersediaan racun di sel sasaran dan keefektifan antaraksi antara keduanya (keadaan fisiologi dan patologi makhluk hidup). Keadaan fisilogi mencakup berat badan, umur, jenis kelamin, kehamilan, suhu tubuh, kecepatan pengosongan lambung, kecepatan alir darah, status gizi, genetika, irama siskardian dan diurnal, sedangkan keadaan patologi meliputi keadaan penyakit yang dialami makhluk hidup (Donatus, 2001).
3. Mekanisme, wujud, dan sifat efek toksik racun
penumpukan racun dalam gudang penyimpanan tubuh. Respons efek toksik merupakan sesuatu proses dimana sel, jaringan, dan organ menanggapi adanya luka dan kerusakan dalam diri komponen-komponen tubuhnya (Donatus, 2001)..
Wujud efek toksik adalah hasil akhir dari respons toksik. Pada dasarnya wujud efek toksik sesuatu racun dapat berupa perubahan atau kekacauan biokimia, fungsional dan struktural. Ketiga wujud efek toksik ini memiliki sifat yang khas yakni terbalikkan dan tak terbalikkan. Respon biokimiawi dan fungsional bersifat timbal balik atau terbalikkan sedangkan respon struktural terbalikan atau tak terbalikan (Donatus, 2001).
4. Faktor-Faktor yang mempengaruhi ketoksikan racun
Pada dasarnya, aneka ragam faktor yang dapat mempengaruhi ketoksikan racun dapat digolongkan menjadi dua, yakni faktor yang bersal dari racun (faktor intrinsik racun) dan faktor yang berasal dari makhluk hidupnya (faktor intrinsik makhluk hidup).
Racun merupakan zat kimia. Karena itu ketoksikan racun tak lepas dari sifat fisika dan sifat kimia bawaan racun tersebut. Faktor intrinsik racun meliputi faktor kimia, kondisi pemejanan, pengolahan, pengawetan, pengentalan, dan pengepakkan. Bergantung pada sifat dan berbagai proses yang dapat mempengaruhi sifat racun maka berbagai faktor tersebut dapat mempengaruhi keefektifan translokasi atau antaraksi racun dengan tempat aksinya.
kehamilan, genetika, irama siskardian, irama diurnal) dan kondisi patologi pada makhluk hidup (penyakit) (Donatus, 2001).
5. Uji ketoksikan
Uji ketoksikan dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu uji ketoksikan khas dan uji ketoksikan tak khas. Uji ketoksikan tak khas merupakan uji ketoksikan yang dirancang untuk mengevaluasi keseluruhan atau spektrum efek toksik suatu senyawa pada aneka ragam jenis hewan uji. Uji ketoksikan tak khas meliputi uji ketoksikan akut, subkronis, dan kronis. Uji ketoksikan khas sendiri merupakan uji yang dirancang untuk mengevaluasi secara rinci efek yang khas suatu senyawa pada aneka jenis ragam hewan uji. Yang termasuk pada golongan ini adalah uji potensiasi, uji kekarsinogetikan, kemutagenikan, keteratogenikkan, reproduksi, kulit dan mata, dan perilaku (Donatus, 2001).
H. Toksisitas Subkronis
Uji ketoksikan subkronis (biasanya disebut juga uji ketoksikan subakut). Uji ketoksikan ini merupakan uji ketoksikan sesuatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji tertentu, selama kurang lebih tiga bulan (Donatus 2001). Meskipun demikian beberapa peneliti menggunakan jangka waktu yang lebih pendek, misalnya pemberian zat selama 14 hari dan 28 hari (Lu, 1995).
memperlihatkan apakah spektrum efek toksik senyawa uji tersebut berkaitan denagn takaran dosis (Donatus, 2001).
Takaran dosis yang diberikan pada hewan uji terdiri dari beberapa peringkat dosis. Setiap kelompok perlakuan harus menerima dosis toksik yang dapat membunuh beberapa hewan uji atau yang memperlihatkan gejala- gejala toksik yang nyata. Sedangkan kelompok lainnya harus menerima takaran dosis yang sama sekali tidak menimbulkan efek atau gejala toksik. Takaran dosis senyawa ini, diberikan sekali sehari selama kurun waktu uji ketoksikan subkronis berlangsung, melalui jalur pemberian sesuai dengan yang biasanya digunakan oleh manusia (Donatus, 2001).
Pengamatan dan pemeriksaan yang dilakukan dalam uji ketoksikan subkronis meliputi:
1. Perubahan berat badan yang diperiksa paling tidak 7 hari sekali
2. Asupan makan untuk masing-masing hewan atau kelompok hewan diukur paling tidak 7 hari sekali
3. Gejala-gejala klinis umum yang diamati setiap hari
4. Pemeriksaan hematologi paling tidak diperiksa dua kali, pada awal dan pada akhir uji coba
5. Pemeriksaaan kimia darah, diperiksa pada awal dan pada akhir uji coba 6. Analisis urin paling tidak sekali
7. Pemeriksaan histopatologi pada akhir uji coba (Donatus, 2001).
dipengaruhinya. Selain itu, dapat juga memberikan informasi tentang perkembangan efek toksik yang lambat berkaitan dengan takaran dosis yang tidak teramati pada uji ketoksikan akut, kekerabatan antar kadar senyawa dalam darah dan jaringan terhadap perkembangan luka toksik dan keterbalikan (reversibilitas) efek toksik. Selanjutnya hasil yang diperoleh dari uji ketoksikan subkronis dapat digunakan untuk merancang uji ketoksikan kronis (Donatus, 2001).
I. Darah Sebagai Target Efek Toksik
Ada banyak zat yang dapat mengganggu fungsi eritrosit misalnya karbonmonooksida (CO), timbal (Pb), nitrit, nitrat, amin aromatis,dan senyawa klorat dapat mengoksidasi besi yang ada pada hemoglobin, yang kemuadian membentuk methemoglobin. Arsen, metilen blue, naftalen, fenilhidrazin dan primaquin dapat mengikat membran eritrosit dan dapat mendenaturasi hemoglobin (Priyanto, 2009).
Platelet berperan dalam pembekuan darah, hal ini terjadi bila kehilangan darah akibat cedera. Beberapa zat dapat mengganggu proses pembekuan darah misalnya obat-obatan anti kanker yang mendepresi sum-sum tulang belakang sehingga menghambat produksi platelet, warfarin mencegah pembentukkan fibrin dan asam salisilat mengurangi agregasi trombosit (Priyanto,2009).
proliferasi leukosit berlebihan akibatnya fungsi leukosit menjadi terganggu (Priyanto, 2009).
J. Keterangan Empiris
34
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian uji toksisitas Subkronik daun sirsak (Annona muricata L.): kajian terhadap sistem hematologi pada tikus jantan dan betina termasuk penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan penelitian acak, lengkap, pola searah.
B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel penelitian
a. Variabel bebas
Dosis infusa daun sirsak. Dosis infusa daun sirsak adalah sejumlah mg serbuk daun sirsak dalam bentuk sediaan infusa, tiap satuan kilogram berat badan subyek uji.
b. Variabel tergantung
c. Variabel pengacau terkendali 1) Hewan uji
Hewan uji terdiri dari tikus putih jantan dan betina galur Sprague Dawley, berat badan 170-280 gram, berumur 2-3 bulan, keadaan fisik berstatus sehat, diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2) Bahan uji
Daun sirsak yang dipilih adalah daun antara pucuk dan pangkal daun, memiliki warna yang hijau dan segar. Daun sirsak yang diperoleh dari Jalan Kaliurang, Km 10, Sleman-Propinsi Daerah Istimewa Yogyakarta pada bulan Mei-Juni, 2012.
d. Variabel pengacau tak terkendali
Keadaan fisiologi dan patologi hewan uji: walaupun keadaan fisik subjek uji dalam keadaan sehat, hal ini belum menjamin bahwa sistem hematologi juga berstatus sehat/normal.
2. Definisi Operasional
a. Infusa daun sirsak
Infusa daun sirsak diperoleh dengan cara merebus serbuk kering daun sirsak sebanyak 6,0 gram dalam pelarut aquadest 100,0 ml pada suhu 900C selama 15
menit, kemudian disaring menggunakan kain flannel. b. Uji ketoksikan subkronis
c. Sistem hematologi
Sistem hematologi mencakup komponen-komponen darah rutin lengkap meliputi kadar hemoglobin, kadar eritrosit, kadar hematokrit, leukosit, MCV, MCH, MCHC, RDW, trombosit (PLT), hitung jenis ( limfosit, monosit, neurofil, eosinofil, basofil), LED jam I, dan LED jam II.
C. Alat dan Bahan Penelitian 1. Alat penelitian
a. Alat-alat gelas (pyrex) yang terdiri dari beaker glass, batang pengaduk, gelas ukur, corong digunakan dalam penyiapan dan pembuatan infusa daun sirsak b. Blender digunakan untuk menghancurkan daun sirsak menjadi serbuk c. Panci infusa digunakan untuk membuat sediaan infusa daun sirsak
d. Timbangan (analytical balance) untuk penimbangan berat badan tikus dan pakan tikus
e. Kandang tikus (metabolic cage) sebagai tempat karantina tikus selama proses penelitian
f. Jarum suntik per oral yang digunakan sebagai media pemberian infusa daun sirsak secara per oral
g. Kamera untuk mendokumentasikan hal-hal penting terkait penelitian
h. Pipa kapiler untuk pengambilan darah tikus jantan dan betina melalui sinus orbitalis
