i
SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF
ANTIFUNGI DALAM MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH
HIJAU (
Piper betle
L.) DENGAN VARIASI KETINGGIAN
TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP
Candida albicans
ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE
KLT BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
I GUSTI AYU ARYA TRISNADEWI
1208505089
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI DALAM
MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) DENGAN VARIASI KETINGGIAN TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP
Candida albicans ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE KLT
BIOAUTOGRAFI” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada:
1. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
iv
iv
3. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
5. Seluruh dosen dan staff pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama penyusunan skrispi ini.
6. Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, I Gusti Ngurah Agung, S.E. dan Gusti Ayu Warni yang telah mengasuh dan membesarkan penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skrispi ini.
7. Kakak kandung saya yaitu I Gusti Ayu Ngurah Lestari, S.E., I Gusti Ayu Agung Adi Putri, S.Pd., dan adik kandung saya I Gusti Ngurah Agung Pengalasan yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
v
9. Teman terdekat I Nyoman Triadnyana, S.Ikom., yang telah memberikan motivasi, dukungan, doa, dan selalu setia membantu dalam penyusunan skripsi ini.
10.Para laboran Kak Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak membantu dalam penyusunan skrispi ini.
11.Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan skrispi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skrispi ini masih belum sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga skrispi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan.
Bukit Jimbaran, Mei 2016
vii
2.5.2. Morfologi dan Karakteristik ... 13
viii
viii
b. Pembuatan Suspensi ... 21
3.7.3. Penyiapan Sampel Uji... 21
3.7.4. KLT Bioautigrafi Kontak ... 21
a. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis... 21
b. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi ... 22
c. Uji Aktivitas Antifungi ... 23
3.8. Analisis Data ... 23
3.9.Skema Penelitian ... 24
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 26
4.1. Determinasi Tanaman ... 26
4.2. Ekstraksi Minyak Atsiri dari Daun Sirih Hijau ... 26
4.3. Optimasi Jumlah Penotolan Sampel Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau ... 30
4.4. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis ... 31
4.5. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi ... 32
4.6. Uji Aktivitas Antifungi ... 34
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 39
5.1. Kesimpulan ... 39
5.2. Saran ... 39
DAFTAR PUSTAKA ... 40
ix
DAFTAR SINGKATAN
AIDS : Acquired Immune Deficiency Syndrome ATS 4 : Automatic TLC Sampler 4
ATTC : American Type Culture Collection C. albicans : Candida albicans
CFU : Colony FormingUnit
GC : Gas Chromatography
HIV : Human Immunodeficiency Virus
hRf : Hundred Retardation Factor
KLT : Kromatografi Lapis Tipis LAF : Laminar Air Flow
MIC : Minimum Inhibition Concentration
MTCC : Microbial Type Culture Collection
MS : Mass Spectrometry
p.a. : pro analisis
P. betle L. : Piper betle Linn pH : Power of Hydrogen
SDA : Saboraud Dextrose Agar
SDB :Saboraud Dextrose Broth
UPCC : University of Portsmouth Culture Collection
UV : Ultraviolet
x
x
DAFTAR ISTILAH
Kandidiasis : Istilah yang dipakai untuk infeksi kulit dan selaput lendir yang disebabkan oleh jamur dari genus Candida.
Candiduria : Invasi Candida pada saluran kemih yang dapat diketahui dengan ditemukannya Candida pada urin.
Gastrointestinal
candidiasis
: Penyakit jamur Candida yang mengenai saluran pencernaan.
Fungi opportunistik : Organisme yang biasanya tidak menyebabkan penyakit pada seseorang dengan sistem kekebalan tubuh yang normal, tetapi dapat menyerang seseorang dengan sistem kekebalan tubuh yang buruk.
Hifa : Struktur biologis berupa berkas-berkas halus yang merupakan bagian dari tubuh vegetatif berbagai fungi.
Blastospora : Tunas yang tumbuh menjadi spora.
Pseudohifa : Rantai-rantai pertunasan yang memanjang dari blastospora.
xi
meminimkan kehilangan air.
Resistensi : Perlawanan yang terjadi ketika jamur secara bertahap kehilangan kepekaan terhadap obat yang sebelumnya membunuh mereka.
Autoklaf : Alat pemanas tertutup yang digunakan untuk mensterilkan suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi (121oC, 1 atm) selama kurang lebih 15 menit.
Bioautografi : Suatu metode yang spesifik untuk mendeteksi bercak pada kromatogram hasil kromatografi lapis tipis atau kromatografi kertas yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri, antifungi, dan antiviral.
Inkubasi : Suatu teknik perlakuan bagi mikroorganisme yang telah diinokulasikan pada media (padat atau cair), kemudian disimpan pada suhu tertentu untuk dapat melihat pertumbuhannya. Inokulasi : Suatu proses penenaman jamur atau
memindahkan jamur dari suatu media ke media lainnya.
Patogen : Agen biologis yang menyebabkan penyakit pada inangnya.
xii
xii
terjadi dalam organisme hidup, dimana substrat diubah menjadi senyawa lain (produk) yang biasanya memiliki struktur lebih kompleks
Pour plate : Mencampur sejumlah suspensi bahan pada media agar yang dicairkan, lalu dituang pada cawan petri steril secara aseptik dan dibiarkan memadat
xiii
DAFTAR TABEL
xiv
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 2.1 Tanaman sirih hijau (P. betle L.) ... 6 Gambar 2.2 Candida albicans dan Ilustrasi morfologi Candida ... 12 Gambar 3.1 Skema Umum Prosedur Penelitian ... 24 Gambar 3.2 Skema Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ... 47
Lampiran 2 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ... 48
Lampiran 3 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang ... 49
Lampiran 4 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang ... 50
Lampiran 5 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan ... 51
Lampiran 6 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan ... 52
Lampiran 7 Sterilisasi Alat dan Bahan ... 53
Lampiran 8 Pembuatan Media ... 54
Lampiran 9 Perhitungan Pembuatan Fase Gerak (eluen) ... 55
Lampiran 10 Perhitungan Pembuatan Pereaksi Pendeteksi ... 56
Lampiran 11Perhitungan Persentase Rendemen Hasil Optimasi Metode Ekstraksi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau ... 57
xvi
xvi ABSTRAK
Daun sirih hijau memiliki aroma khas yang berasal dari minyak atsiri dengan kandungan golongan senyawa fenol dan terpenoid. Kandungan senyawa minyak atsiri dipengaruhi oleh variasi ketinggian tempat tumbuh. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa minyak atsiri daun sirih hijau memiliki potensi sebagai antifungi terhadap C. albicans, sehingga pada penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif antifungi minyak atsiri daun sirih hijau dengan variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali terhadap C. albicans
menggunakan metode KLT bioautografi kontak.
Penelitian ini bersifat eksploratif laboratorik untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif antifungi dalam minyak atsiri daun sirih hijau terhadap C. albicans. Pemisahan kromatografi lapis tipis dilakukan menggunakan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak toluene:etilasetat (93:7)v/v. Selanjutnya,
karakterisasi golongan senyawa bioaktif dilakukan menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu, FeCl3, dan Anisaldehid-asam sulfat. Sedangkan uji bioautografi kontak
dilakukan dengan menempelkan plat pada medium yang berisi suspensi C. albicans selama 1 jam kemudian plat diambil dan media diinkubasi selama 18 jam suhu 37oC. Nilai hRf hasil karakterisasi dibandingkan dengan nilai hRf KLT bioautografi kontak.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat pengaruh variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali dengan sampel pada dataran rendah, dataran sedang, dan pegunungan. Hal tersebut dapat dilihat dari profil golongan senyawa yang sama, yaitu golongan senyawa terpenoid dan fenol pada hRf 52 dan 66, golongan senyawa fenol dengan inti katekol pada hRf 52 dan 66, dan golongan senyawa fenol sederhana pada hRf 66. Jadi golongan senyawa bioaktif dalam minyak atsiri daun sirih hijau yang berfungsi sebagai antifungi terhadap C. albicans adalah golongan senyawa fenol dan terpenoid.
xvii ABSTRACT
Piper betel leaf has a distinctive aroma that comes from its essential oil which contain phenol and terpenoids compound (monoterpenes and sesquiterpenes). The essential oil in a plant was affected by environmental conditions. Previous study reported that P. betel essential oil has good potential as an antifungal agent against C. albicans, so in this study aims to determine the Furthermore, the characterization of bioactive compounds was conducted using detection reagent such as, Folin – Ciocalteu, FeCl3, and anisaldehyde-sulfuric acid and test bioautografi contact is made by placing the plate on a medium which already contains the suspension for 1 hour and then the plate is taken and the media were incubated for 18 hours at 37°C. HRF value detection reagent characterization results are then compared with the value HRF bioautografi TLC contact inhibition zone.
1 BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Kandidiasis adalah istilah yang dipakai untuk infeksi kulit dan selaput lendir yang disebabkan oleh jamur dari genus Candida (Brown dan Burns, 2005). Sebanyak lebih dari 150 spesies Candida telah diidentifikasi (Anaissie, 2016). Infeksi Candida pada manusia telah ditemukan sebanyak 70% yang disebabkan oleh C.albicans dan sisanya adalah disebabkan oleh C. tropicalis, C. guillermondii, C. kruzei, dan beberapa spesies Candida yang lebih jarang (Keyser
et al., 2005). C. albicans dikenal secara normal ada pada saluran pencernaan, saluran pernafasan bagian atas dan mukosa genital pada mamalia. Terdapat sekitar 30-40% C. albicans pada rongga mulut orang dewasa sehat, 45% pada neonatus, 45-65% pada anak-anak sehat, 50-65% pada pasien yang memakai gigi palsu lepasan, 65-88% pada orang yang mengkonsumsi obat-obatan jangka panjang, 90% pada pasien leukemia akut yang menjalani kemoterapi, dan 95% pada pasien HIV/AIDS (Langlais, 1998).
pada patogenitas dan proses infeksi dari C. albicans adalah menurunnya sistem imun, pengobatan antibiotik spektrum luas, perubahan dari bentuk khamir ke bentuk filamen dan produksi enzim ektraselular (Naglik et al., 2004).
Dalam beberapa tahun terakhir, mikroorganisme patogen yang ada pada tubuh manusia telah berkembang menjadi semakin resisten. Perea and Patterson (2002) menyatakan bahwa pasien dengan kandidiasis osofaring yang diakibatkan oleh spesies jamur C. albicans ditemukan telah resisten terhadap obat flukonazol sebanyak 21% pada pasien karena penggunaan jangka panjang. Selain itu, penelitian Srihartati (2011) juga melaporkan bahwa resistensi C. albicans
ditemukan sebanyak 16,7% terhadap itrakonazol dan 5,6% resisten terhadap flusitosin. Sebagai alternatif resistensi tersebut diperlukan pencarian obat antifungi baru yang salah satunya dapat diajukan suatu pengembangan obat yang secara empiris sudah sering digunakan oleh masyarakat, yaitu sirih hijau.
atsiri daun sirih hijau memiliki aktivitas antifungi terhadap C. albicans (MTCC 227), dimana pada konsentrasi 100 µL mampu menghasilkan zona hambat sebesar 24 mm dengan menggunakan metode difusi disk. Pada penelitian lain juga melaporkan bahwa dengan 100 µL minyak atsiri daun sirih hijau mampu menghasilkan zona hambat sebesar 90 mm terhadap C. albicans (UPCC 2168) dengan menggunakan metode difusi sumur dan diperoleh nilai MIC minyak atsiri daun sirih hijau terhadap C. albicans (UPCC 2168) pada konsentrasi 250 µg/mL dengan menggunakan metode dilusi (Adeltrudes and Osi, 2010). Selain itu, telah dilaporkan bahwa isolat hidroksikavikol dalam fraksi kloroform hasil isolasi dari ekstrak air daun sirih hijau efektif dalam menghambat C. albicans (ATCC 90028, ATCC 10231 dan 23 isolat klinikal) hingga 8 x MIC (250 μg/ml) serta mampu menghambat pertumbuhan biofilm yang dihasilkan oleh fungi C. albicans (Ali et al., 2010).
atau daerah dataran rendah, metabolit sekunder pada tanaman akan banyak terakumulasi karena adanya biosintesis melalui jalur fenilpropanoid yang akan menginduksi produksi senyawa fenol. Selain itu, menurut Hui and Evranuz (2015), pada suhu yang tinggi atau daerah dataran rendah juga akan meningkatkan produksi golongan senyawa terpenoid karena adanya biosintesis melalui jalur asam mevelonat.
Pembagian wilayah di Indonesia berdasarkan letak geografisnya dibagi menjadi beberapa ketinggian, yaitu dataran rendah 0 – 200 mdpl, dataran sedang 200 – 1000 mdpl, dan pegunungan 1000 – 2000 mdpl (Sarpian, 2003). Pemilihan sampel pada penelitian ini akan mengacu pada pembagian letak geografis tersebut dengan mengambil sampel dari daerah Bali, yaitu pada daerah dataran rendah (166 mdpl) ; daerah dataran sedang (668 mdpl) ; dan daerah pegunungan (1099 mdpl).
Pada penelitian ini, untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif minyak atsiri daun sirih hijau sebagai antifungi terhadap C. albicans digunakan metode KLT bioautografi. Penggunaan metode bioautografi mempunyai keuntungan, yaitu dapat mengetahui aktivitas biologi secara langsung dari senyawa kompleks, terutama yang terkait dengan kemampuan suatu senyawa untuk menghambat pertumbuhan mikroba (Kusumaningtyas dkk., 2008).
Berdasarkan latar belakang tersebut, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif penghambat C. albicans secara KLT bioautografi serta dilakukan karakterisasi dengan pereaksi pendeteksi senyawa golongan fenol dan terpenoid yang merupakan komponen penyusun minyak atsiri.
1.2 Rumusan Masalah
Bagaimana profil golongan senyawa bioaktif yang terkandung dalam minyak atsiri daun sirih hijau dengan variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali yang berfungsi sebagai antifungi terhadap C. albicans ?
1.3 Tujuan
Untuk mengetahui profil golongan senyawa bioaktif dalam minyak atsiri daun sirih hijau dengan variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali yang berfungsi sebagai antifungi terhadap C. albicans.
1.4 Manfaat
6 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Sirih Hijau (P. betle L.)
Gambar 2.1 Tanaman sirih hijau (P. betle L.) (Armando, 2009) 2.1.1Klasifikasi
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta Kelas : Dicotyledonae Ordo : Piperales Famili : Piperaceae Genus : Piper
Spesies : Piper betle L.
7
7
Nama daerah : Suruh, sedah (Jawa); seureuh (Sunda); base (Bali); donile, parigi (Sulawesi); dan bido, gies (Maluku)
(Syamsuhidayat dan Hutapea, 1991) 2.1.2Deskripsi tanaman
Sirih Hijau merupakan perdu yang tumbuh merambat dengan panjang mencapai puluhan meter. Batang berkayu, berbentuk bulat, berbuku-buku, beralur, dan berwarna hijau kecokelatan. Daun tunggal, berbentuk pipih menyerupai jantung, tangkai agak panjang, permukaan licin, pertulangan menyirip, dan berwarna hijau tua. Bunga majemuk dengan bulir, berbentuk bulat panjang, panjang daun pelindung 1 mm, bulir jantan panjangnya 1,5 - 3 cm, benang sari dua dan pendek, bulir betina panjangnya 1,5 – 6 cm, kepala putik, dan warna bunga hijau kekuningan. Buah buni, berbentuk bulat, dan berwarna hijau keabuan (Agromedia, 2008).
2.1.3Kandungan kimia
Daun sirih hijau mengandung berbagai macam kandungan kimia yaitu minyak atsiri terpinen, seskuiterpen, fenilpropan, dan terpen (Depkes RI, 1980). Daun sirih hijau mengandung 4,2% minyak atsiri yang komponen utamanya terdiri dari betel fenol dan beberapa derivatnya diantaranya eugenol alilpirokatekol 26,8 – 42,5% ; sineol 2,4 – 4,8% ; metil eugenol 4,2 – 15,8% ;
terpinen, diastase 0,8 – 1,8% ; dan tanin 1 – 1,3% (Sastroamidjojo, 2001 : Darwis, 1992)
Daun sirih hijau mengandung asam amino kecuali lisin, histidin, dan arginin. Asparagin terdapat dalam jumlah yang besar, sedangkan glisin dalam bentuk gabungan, kemudian prolin dan ornitin. Daun sirih hijau yang lebih muda mengandung minyak atsiri (pemberi bau aromatik khas), diastase dan gula yang jauh lebih banyak dibandingkan daun yang lebih tua, sedangkan kandungan tanin pada daun muda dan daun tua dalah sama (Sastroamidjojo, 2001 : Darwis, 1992 : Syamsuhidayat dan Hutapea, 1991).
2.2 Minyak Atsiri
Minyak atsiri atau yang disebut juga dengan essential oils, ethereal oils, atau
9
minyak atsiri umumnya tidak berwarna. Namun, pada penyimpanan lama minyak atsiri dapat teroksidasi. Untuk mencegahnya, minyak atsiri harus disimpan dalam bejana gelas yang berwarna gelap, diisi penuh, ditutup rapat, serta disimpan di tempat yang kering dan sejuk (Gunawan & Mulyani, 2004).
2.3 Minyak Atsiri Daun Sirih(P. betle L.)
2.3.1Sifat fisika kimia
Menurut Dutt (1957), minyak atsiri sirih mempunyai berat jenis sebesar (0,9408 – 1,0482), indeks bias (1,5048 - 1,5088), bilangan asam (4,2 – 14,8) dan bilangan penyabunan minyak atsiri sirih (5,84 – 8,36). Minyak atsiri sirih berwarna kuning kecoklatan, mempunyai rasa getir, berbau wangi dan larut di dalam pelarut organik seperti alkohol, eter dan kloroform serta tidak larut dalam air. Minyak atsiri sirih merupakan komponen yang penting dan memberikan bau aromatik dan rasa pedas yang khas.
2.3.2Kandungan kimia
Menurut penelitian Saxena et al., (2014), minyak atsiri daun sirih hijau yang diidentifikasi menggunakan GC-MS memiliki beberapa kandungan utama, yaitu
eugenol, metil eugenol, sabinene, β-salinene, α-salinene, hidroksikavikol, eugenol
asetat, α-farnesene, safrole, iso-safrole, metal isoeugenol, caryophyllene. Selain
2.3.3Aktifitas antifungi
Pengujian aktivitas antifungi minyak atsiri daun sirih hijau telah dilaporkan dalam beberapa penelitian. Pada penelitian Sugumaran et al., (2011), aktivitas antifungi minyak atsiri dari daun sirih hijau dilakukan menggunakan konsentrasi 25 µL, 50 µL, dan 100 µL, dimana seiring dengan meningkatnya konsentrasi, terjadi pula peningkatan penghambatan terhadap jamur C. albicans (MTCC 227) danS. Cerevisiae (MTCC 740), dengan metode difusi disk. Selain itu, telah dilaporkan juga bahwa nilai MIC minyak atsiri daun sirih berturut-turut terhadap
C. albicans (UPCC 2168) dan T. mentagrophytes (UPCC 4193) diperoleh pada konsentrasi 250 µg/mL dan 1,95 µg/mL menggunakan metode dilusi dan mempunyai nilai zona hambat yang sama, yaitu sebesar 90 mm dengan metode difusi disk yang menunjukkan bahwa minyak atsiri daun sirih hijau adalah agen antifungi yang sangat potensial (Adeltrudes and Osi, 2010).
2.4 Kandidiasis
Kandidiasis adalah istilah yang dipakai untuk infeksi kulit dan selaput lendir yang disebabkan oleh jamur dari genus Candida (Brown dan Burns, 2005).
Candida merupakan jamur komensal yang antara lain hidup dalam rongga mulut, saluran pencernaan, dan vagina. Akan tetapi, jika keseimbangan flora normal seseorang terganggu ataupun pertahanan imunnya menurun, maka sifat komensal
11
kandidiasis vagina (vaginitis), kandidiasis kulit yang sifatnya sistemik (Tjay dan Rahardja, 2003).
Kandidiasis dapat terjadi secara eksogen dan endogen. Kandidiasis yang bersifat eksogen disebabkan oleh infeksi Candida yang berasal dari luar tubuh.
2.5 Candida albicans
Gambar 2.2 Candida albicans (A) dan ilustrasi morfologi C. albicans (B) (Jawetz et al., 1996 ; Hendriques, 2007)
2.5.1Klasifikasi
Kingdom : Fungi Phylm : Ascomycota Subphylm : Saccharomycotina Class : Saccharomycetes Order : Saccharomycetales Family : Saccharomyceteae Genus : Candida
Species : Candida albicans
(Baker, 2012)
13
2.5.2Morfologi dan karakteristik
C. albicans secara morfologi mempunyai beberapa bentuk elemen jamur yaitu sel ragi (yeast), hifa, dan bentuk pseudohif. Sel-sel ragi berbentuk bulat sampai oval dan mudah terpisah dari satu sama lain. Pseudohifa tersusun memanjang, berbentuk elips yang tetap menempel satu sama lain pada bagian septa yang berkonstriksi dan biasanya tumbuh dalam pola bercabang yang berfungsi untuk mengambil nutrisi yang jauh dari sel induk atau koloni. Hifa sejati berbentuk panjang dengan sisi paralel dan tidak ada konstriksi yang jelas antar sel. Perbedaan antara ketiganya adalah pada derajat polarisasi pertumbuhan, posisi dari septin, derajat pergerakan nukleus serta derajat kemampuan melepas sel anak dari sel induk secara individual (Berman and Sudbery, 2015). Pertumbuhan optimum terjadi pada pH antara 2,5 – 7,5 dan temperatur berkisar 20oC – 38oC. C. albicans merupakan jamur yang pertumbuhannya cepat yaitu sekitar 48–72 jam. Kemampuan C. albicans tumbuh pada suhu 37oC merupakan karakteristik penting untuk identifikasi. Spesies yang patogen akan tumbuh secara mudah pada suhu 25oC– 37oC, sedangkan spesies yang cenderung saprofit kemampuan tumbuhnya menurun pada temperatur yang semakin tinggi (Tjampakasari, 2006). Rippon (1974) mengemukakan bahwa bentuk blastospora diperlukan untuk memulai suatu lesi pada jaringan. Sesudah terjadi lesi, dibentuk hifa untuk melakukan invasi.
Morfologi koloni C. albicans pada medium padat sabouraud dekstrosa agar
kadang sedikit berlipat terutama pada koloni yang telah tua. Besar kecilnya koloni dipengaruhi oleh umur biakan. Warna koloni C. albicans putih kekuningan (krim lembut) dan berbau khas (Tjampakasari, 2006).
2.6 Destilasi Air
Destilasi air merupakan metode yang umum dipakai untuk mengekstrak minyak atsiri dari suatu tanaman (Guenther, 1998). Pengolahan minyak atsiri dengan metode destilasi air dikenal sebagai metode konvensional yang didasarkan pada prinsip bahwa campuran (uap minyak dan uap air) mempunyai titik didih sedikit lebih rendah dari titik didih uap air murni, sehingga campuran uap mengandung minyak memiliki jumlah yang lebih besar. Dengan pengurangan kecepatan kohobasi, maka kandungan minyak dalam destilat akan lebih besar disebabkan oleh uap yang keluar akan lebih jenuh oleh uap minyak. Rendemen yang diperoleh dari metode destilasi air sangat ditentukan oleh beberapa faktor antara lain ukuran bahan, jumlah (rasio) bahan dan air yang digunakan, perlakuan pengadukan serta waktu proses (Djafar dkk., 2010).
15
2.7 Bioautografi Kontak
Bioautografi sering digunakan untuk mendeteksi antibiotik yang dapat dianalisis dengan KLT atau kromatografi kertas. Pada umumnya, efek biologi senyawa yang dapat dikatakan menghambat pertumbuhan organisme dinyatakan sebagai zona hambat (Touchstone dan Dobbins, 1983). Dari kromatogram KLT dapat diketahui jumlah komponen dalam sampel yang ditotolkan berdasarkan jumlah noda (dengan penampak noda yang sesuai), sedang data bioautogram memberikan informasi jumlah komponen sampel yang memiliki aktivitas terhadap mikroba uji (Isnaeni, 2005).
Salah satu keuntungan metode bioautografi dibandingkan dengan metode lain seperti difusi agar dan pengenceran adalah dapat digunakan untuk mengetahui aktivitas biologi secara langsung dari senyawa yang komplek, terutama yang terkait dengan kemampuan suatu senyawa untuk menghambat pertumbuhan mikroba, selain untuk pemisahan dan identifikasi, kelebihan lainnya metode bioautografi tersebut cepat, mudah untuk dilakukan, murah, hanya membutuhkan peralatan sederhana dan interpretasi hasilnya relatif mudah dan akurat (Kusumaningtyas, dkk., 2008).
