PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER.

(1)

Malya, Irine Y. 2014

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER

Universitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)

TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI

MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Sebagian dari Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Sains Program Studi Biologi

Oleh

IRINE YUNHAFITA MALYA

1000361

PROGRAM STUDI BIOLOGI

JURUSAN PENDIDIKAN BIOLOGI

FAKULTAS PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

(2)

2014

Pengaruh Ekstrak Rimpang Temulawak

(

Curcuma xanthorrhiza

_{Roxb.) Terhadap}

Perkembangan Embrio Praimplantasi

Mencit (

Mus musculus

_{) Swiss Webster}

Oleh

Irine Yunhafita Malya

Sebuah skripsi yang diajukan untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana pada Fakultas Pendidikan Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Oktober 2012

(3)

Skripsi ini tidak boleh diperbanyak seluruhya atau sebagian, dengan dicetak ulang, difotokopi, atau cara lainnya tanpa ijin dari penulis.

LEMBAR PENGESAHAN

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)

TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI

MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER

Oleh

Irine Yunhafita Malya 1000361

DISETUJUI DAN DISAHKAN OLEH:

Pembimbing I

Dr. Didik Priyandoko, S.Pd, M.Si. NIP.196912012001121001

Pembimbing II

Dr. Hernawati, S.Pt, M.Si. NIP. 197003311997022001

Mengetahui,

(4)

Dr. H. Riandi, M.Si. NIP.196305011988031002

PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi dengan judul Pengaruh Ekstrak Rimpang

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) Terhadap Perkembangan Embrio

Praimplantasi Mencit (Mus musculus) Swiss Webster ini beserta seluruh isinya adalah

benar-benar karya saya sendiri, dan saya tidak melakukan penjiplakan atau pengutipan dengan cara-cara yang tidak sesuai dengan etika keilmuan yang berlaku dalam masyarakat keilmuan. Atas pernyataan ini, saya siap menanggung sanksi yang dijatuhkan kepada saya apabila kemudian ditemukan adanya pelanggaran terhadap etika keilmuan dalam karya saya ini atau ada klaim dari pihak lain terhadap keaslian karya saya ini.

Bandung, Oktober 2014 Yang membuat pernyataan,

(5)

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTERUniversitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu

Pengaruh Ekstrak Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) terhadap

Perkembangan Embrio Praimplantasi

Mencit (Mus musculus) Swiss Webster

ABSTRAK

Berdasarkan hasil berbagai penelitian, temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) dipercaya memiliki berbagai macam khasiat dan manfaat pada bidang kesehatan. Temulawak juga diketahui memiliki potensi sebagai anti proliferasi, anti implantasi dan anti fertilitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak rimpang temulawak terhadap perkembangan embrio praimplantasi, terbentuknya embrio abnormal dan ukuran diameter blastokista mencit (Mus musculus) Swiss Webster. Ekstrak rimpang temulawak didapatkan melalui proses ekstraksi air. Ekstrak rimpang temulawak diberikan secara gavage setiap hari dengan dosis 0 mg/kg BB, 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB atau 700 mg/kg BB pada enam mencit dara untuk setiap dosisnya atau 24 ekor untuk seluruhnya. Perlakuan tidak dilakukan secara serentak, namun hanya dilakukan pada mencit yang telah ditemukan vaginal plug sekitar 1-3 ekor per harinya. Perkembangan embrio praimplantasi diamati pada usia kebuntingan ke 3,5 hari setelah dikawinkan secara alami dengan metode flushing menggunakan larutan Phosphate

Buffered Saline (PBS) untuk proses koleksi embrionya. Hasil pengamatan terhadap

embrio praimplantasi yang didapatkan menunjukkan terjadinya hambatan perkembangan embrio tahap blastokista pada tahap morula dan terbentuknya embrio abnormal di setiap dosisnya. Pemberian ekstrak dengan dosis 280 mg/kg BB atau 700 mg/kg BB secara signifikan (p<0,05) menurunkan jumlah embrio yang akan mencapai tahap blastokista dibandingkan dengan kontrol. Sementara itu, pemberian ekstrak rimpang temulawak dosis 700 mg/kg BB juga secara signifikan (p<0,05) meningkatkan jumlah embrio abnormal dibandingkan dengan kontrol. Selain itu, pemberian ekstrak rimpang temulawak dosis 140 mg/kg BB memiliki ukuran diameter horizontal blastokista yang lebih kecil secara signifikan (p<0,05) dibandingkan kontrol. Pemberian ekstrak dosis 140 mg/kg atau BB 280 mg/kg BB memiliki ukuran diameter vertikal blastokista yang lebih kecil secara signifikan (p<0,05) dibandingkan kontrol. Berdasarkan hasil penelitian ini, ekstrak rimpang temulawak menyebabkan terjadinya hambatan perkembangan embrio praimplantasi, terbentuknya embrio abnormal dan menyebabkan ukuran diameter blastokista lebih kecil jika dibandingkan dengan kontrol. Kata Kunci : Temulawak, Embrio Praimplantasi, Embrio Abnormal, Diameter

(6)

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTERUniversitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu

The Effects of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) Rhizome Extract in

Embryo Preimplantation Development of Mice (Mus musculus L.) Swiss Webster

ABSTRACT

Based of many researches, Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) has been believed of a great advantages for human health. Temulawak is also known exhibit an effect of anti proliferation, anti implantation and anti fertility. In the present study, an attempt has been made to analyze the effects of temulawak rhizome extract in embryo preimplantation development, the abnormality and blastocyst diameter measurement of virgin mice (Mus musculus L.) Swiss Webster. Temulawak rhizome extract was extracted by aquous extraction method. The extract was given in six virgin mice for each doses or in 24 mice for all doses, these are 0 mg/ kg b.wt. (as a control), 140 mg/ kg b.wt., 280 mg/ kg b.wt. and 700 mg/ kg b.wt. which given by gavage method everyday. The treatment were doing while vaginal plug was found after natural conception, it’s about 1-3 mice in a day. The embryo preimplantation development was analyzed at the 3,5 day of pregnancy. The embryo was collected by flushing method with PBS solution. The temulawak rhizome extract was arrested the development of embryo preimplantation in each doses at morula stage. The extract was significantly (p<0,05) decreased the total number of blastocyst at 280 mg/ kg b.wt. and 700 mg/ kg b.wt. dose toward the control. The extract was significantly (p<0,05) induced the development of abnormal embryo at 700 mg/ kg b.wt. dose toward the control. In addition, the blastocyst diameter measurement at 140 mg/ kg b.wt. for horizontal diameter was significantly (p<0,05) smaller than control and at 140 mg/ kg b.wt. and 280 mg/ kg b.wt for vertical diameter too. Thus, the results in present study indicate that the temulawak rhizome extract has the effects to induce arresting of embryo preimplantation development, increasing of the total of abnormal embryo and changing of blastocyst diameter.

.

(7)

(8)

PENGARUH EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) TERHADAP PERKEMBANGAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER Universitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu

DAFTAR ISI

Halaman

ABSTRAK ... ... i

KATA PENGANTAR ... ... iii

DAFTAR ISI ... ... v

DAFTAR TABEL ... ... viii

DAFTAR GAMBAR ... ... ix

DAFTAR LAMPIRAN ... ... x

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang... 1

B. Rumusan Masalah... 3

C. Batasan Masalah... 4

D. Tujuan ... 5

E. Manfaat ... 5

F. Asumsi... 5

G. Hipotesis... 6

BAB II TEMULAWAK DAN EMBRIO PRAIMPLANTASI MENCIT (Mus musculus) SWISS WEBSTER A.Temulawak (Curcuma xanthorrhisa Roxb.)... 7

B. Komponen yang Terkandung dalam Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorrhisa Roxb.) dan Khasiatnya... 10

C.Komponen Ekstrak Air (Aqueous) Rimpang Temulawak dan Khasiatnya. 15 D. Perkembangan Embrio pada Tahap Praimplantasi... 17

E. Pengaruh Beberapa Zat Terhadap Perkembangan Embrio... 22

(9)

BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian... 32

B. Desain Penelitian... 32

C. Populasi dan Sampel... 34

D. Waktu dan Lokasi Penelitian... 34

E. Prosedur Penelitian... 34

1. Tahap Pra-Penelitian... 34

a. Penyiapan Alat dan Bahan... 34

b. Pembuatan Ekstrak Rimpang Temulawak... 35

c. Penentuan Dosis... 36

d. Persiapan Mencit dan Aklimatisasi... 37

2. Tahap Penelitian... 37

a. Mengawinkan Mencit... 37

b. Perlakuan Terhadap Mencit... 38

c. Koleksi Embrio... 39

d. Pengamatan dan Analisis Embrio Praimplantasi... 39

3. Analisis Data... 40

4. Alur Penelitian... 41

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Penelitian... 42

1. Hasil Analisis Tahapan Perkembangan Embrio Praimplantasi ... 42

2. Rata-rata Hasil Pengukuruan Diameter Blastokista... 48

B. Pembahasan... 52

(10)

B. Saran... 62

DAFTAR PUSTAKA... 64

LAMPIRAN... 71

(11)

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Komposisi Pati Temulawak... 11

2.2 Khasiat Temulawak Berdasarkan Komponen... 14

2.3 Khasiat Temulawak Berdasarkan Pelarut Ekstraksi... 16

2.4 Waktu Pembelahan pada Mammalia (jam ke-)... 19

2.5 Pengaruh Beberapa Senyawa Kimia Terhadap Embrio... 22

2.6 Karakteristik Biologi Mencit (Mus musculus)... 27

3.1 Hasil Randomisasi Mencit... 33

3.2 Penempatan Mencit Berdasarkan Hasil Randomisasi... 33

4.1 Hasil Pengamatan Tahapan, Jumlah dan Persentase Embrio Praimplantasi yang telah Diberi Ekstrak Rimpang Temulawak Secara Gavage Pada Usia Kebuntingan ke-3,5 Hari ... 43

(12)

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Rimpang Temulawak... 8

2.2 Struktur Komponen Kurkuminoid... 12

2.3 Diagram Presentase Kandungan Minyak Atsiri pada Beberapa Marga Curcuma... 13

2.4 Pembentukan Embrio Mus musculus, Tahap 2, 4, 8 dan 16 sel... 18

2.5 Masa Perkembangan Embrio Selama Pembelahan dari Tahap 1 sel Hingga Blastokista... 19

2.6 Perkembangan Embrio Menuju Tahap Implantasi... 20

2.7 Perkembangan Embrio Praimplantasi pada Saluran Reproduksi... 21

2.8 Embrio Abnormal... 25

2.9 Mencit Betina (Mus musculus) Swiss Webster... 26

2.10 Hapusan Vagina Siklus Estrus... 28

2.11 Vaginal plug atau Sumbat Vagina... 30

2.12 Alat Reproduksi Mencit Betina... 31

3.1 Gavage... 39

3.2 Metode Flushing... 39

(13)

Ekstrak Rimpang Temulawak pada Kelompok Dosis 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB dan 700 mg/kg BB... 45 4.2 Tahap-tahap Perkembangan Embrio Praimplantasi yang Ditemukan

pada Hari Kebuntingan Ke-3,5 Setelah Diberi Ekstrak Rimpang Temulawak... 47 4.3 Embrio Abnormal yang Ditemukan pada Hari Kebuntingan Ke-3,5

Setelah Diberi Ekstrak Rimpang Temulawak... 48 4.4 Perhitungan Ukuran Diameter Blastokista Menggunakan Lensa

Objective Micrometer yang Telah Dikalibrasi Menggunakan Oculer

Micrometer... 49

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Data Jumlah Embrio Praimplantsai Mencit pada Setiap Induk dan Tahapan Perkembangan Setelah Diberi Ekstrak Rimpang

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)... 71

2. Data Diameter Embrio Praimplantasi Tahap

Blastokista... 73 3. Uji Statistik Data Jumlah Embrio Praimplantasi Pada Setiap

Tahapannya Setelah Diberi Ekstrak Rimpang Temulawak

(Curcuma xanthorrhiza Roxb.) Menggunakan SPSS 16... 75 4. Perkembangan Embrio Praimplantasi Mencit yang Ditemukan

Setelah 3 Hari Pemberian Ekstrak Rimpang Temulawak (Curcuma

xanthorrhiza Roxb.) Secara Gavage... 81 5. Tabel Berat Badan Mencit Selama Aklimatisasi dan

(14)

(15)

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Indonesia merupakan negeri yang memiliki kekayaan dan keanekaragaman hayati yang tinggi, baik di darat maupun di laut. Indonesia adalah negara yang diapit oleh dua benua, yaitu Asia dan Australia, terdiri dari beribu pulau dan terletak di bawah garis khatulistiwa. Posisi ini menjadikan Indonesia salah satu negara yang memiliki kekayaan keanekaragaman hayati terbesar di dunia. Sebagai negara megabiodiversity, keanekaragaman hayati Indonesia terdiri dari 515 spesies mamalia, 511 spesies reptilia, 1.531 spesies burung, 270 spesies amfibi, 2.827 spesies invertebrata dan sebanyak ± 38.000 spesies tumbuhan, diantaranya 1.260 jenis yang bernilai medis (Kementrian Negara Lingkungan Hidup, 2010).

Di antara sekian banyak sumber alam hayati yang berpotensial dalam bidang medis, temulawak memiliki prospek baik untuk dikembangkan sebagai obat atau bahan obat. Temulawak termasuk pada kelompok lima besar tanaman obat yang berpotensial. Temulawak dapat dikembangkan untuk menjadi bahan obat tradisional, fitoterapi, sumber pangan ataupun sebagai komoditi ekspor. Hal ini didasarkan pada kenyataan bahwa rimpang temulawak mengandung komponen-komponen kimia yang telah banyak diuji manfaat dalam berbagai bidang melalui berbagai penelitian (Sidik et al., 1995; Purnomowati dan Yoganingrum,1997; Departemen Pertanian, 2007).

(16)

2

anti bakteri, anti jamur, anti tumor, anti inflamasi, anti oksidan dan lain-lain (Sidik et

al., 1995; Purnomowati dan Yoganingrum, 1997; Rukayadi et al., 2006; Sembiring et

al., 2006).

Kandungan temulawak digolongkan dalam tiga jenis, yaitu fraksi pati, minyak atsiri dan kurkuminoid. Setiap turunannya memiliki khasiat tersendiri. Fraksi pati merupakan kandungan yang terbesar dan biasa digunakan sebagai bahan makanan (Sidik et al., 1995; Purnomowati dan Yoganingrum, 1997). Golongan minyak atsiri memiliki turunan yang berkhasiat sebagai anti tumor dan anti proliferasi, misalnya α -kurkumen, β-atlanton, xanthorrhizol dan artumeron (Sidik et al., 1995; Purnomowati dan Yoganingrum, 1997; Choi et al,. 2004; Cheah et al., 2006; Cheah et al., 2008; Katrin et al., 2011). Kurkuminoid memiliki turunan yang memiliki efek anti inflamasi, anti oksidan dan anti proliferasi pada sel kanker (Sidik et al., 1995; Purnomowati dan Yoganingrum, 1997; Chattophadhyay et al., 2004; Anand et al., 2008; Itokawa et al., 2008; Kunnumakkara et al., 2009; Cahyono et al., 2011; Hayakawa et al., 2011). Selain itu, rimpang temulawak mengandung komponen lain, seperti flavonoid, fenol dan terpenoid lainnya. Senyawa-senyawa ini berpotensi sebagai anti proliferasi dan bersifat sitotoksik (Quint et al., 1996; Fotsis et al., 1997; Yang dan Dou, 2010; Afzal et al., 2013).

(17)

3

anti implantasi pada kurun awal kehamilan, tetapi tidak mempengaruhi jumlah fetus tikus (Aritonang, 1986).

Pada masa awal kehamilan, atau masa setelah fertilisasi, terjadi proses pembelahan sel untuk persiapan implantasi. Pada proses pembelahan awal yang disebut cleavage, terjadi pembelahan sel fase S (sintesis DNA) dan fase M (mitosis) pada siklus sel, namun seringkali melewatkan fase G1 dan G2. Pada fase ini hanya sedikit sintesis protein atau bahkan tidak terjadi sama sekali (Campbell dan Reece, 2010). Sel telur yang dibuahi akan menjadi zigot dan akan membelah hingga terbentuk blastula atau blastokista yang selanjutnya akan berpindah dengan bantuan silia oviduk menuju uterus dan terjadi nidasi atau implantasi (Yatim, 1994) . Pada proses pembelah ini, sel membutuhkan nutrisi dan hasil metabolisme yang cukup untuk memenuhi energi selama pembelahan (Gerking, 1969). Pada masa perkembangan embrio praimplantasi ini merupakan fase yang krusial untuk kesuksesan perkembangan embrio tahap pasca implantasi (Warner et al., 1998).

Pengaruh berbagai zat terhadap perkembangan embrio praimplantasi telah banyak diteliti. Namun, efek temulawak terhadap perkembangan embrio praimplantasi belum diketahui pasti. Berdasarkan uraian di atas, rimpang temulawak memiliki efek anti proliferasi, baik pada blastokista maupun sel kanker secara in vitro, dapat diartikan bahwa temulawak dapat menghambat pembelahan sel aktif. Selain itu, ekstrak rimpang temulawak memiliki efek anti implantasi dan anti fertilitas. Maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui, menganalisis dan membuktikan bagaimana pengaruh ekstrak rimpang temulawak terhadap perkembangan embrio praimplantasi yang merupakan tahapan awal sebelum implantasi dan sedang mengalami tahapan sel-sel sedang membelah aktif.

B. Rumusan Masalah

(18)

4

Berdasarkan rumusan masalah yang ada, maka dapat diuraikan menjadi beberapa pertanyaan penelitian sebagai berikut:

1. Apakah pemberian ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) berpengaruh terhadap tahapan perkembangan, jumlah dan persentase embrio praimplantasi mencit (Mus musculus) Swiss Webster?

2. Apakah pemberian ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) memicu terbentuknya embrio praimplantasi yang abnormal pada mencit (Mus

musculus) Swiss Webster?

3. Apakah pemberian ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) berpengaruh terhadap rata-rata diameter blastokista mencit (Mus musculus) Swiss Webster?

C. Batasan Masalah

Adapun batasan masalah pada penelitian ini sebagai berikut:

1. Bahan utama ekstrak yang digunakan adalah rimpang temulawak (Curcuma

xanthorrhiza Roxb.) berumur 11-12 bulan, yang didapatkan dari BALITRO

Lembang.

2. Ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) yang dipakai merupakan ekstrak rimpang menggunakan metode ekstrak air (aqueous

extract).

3. Mencit yang digunakan adalah mencit betina (Mus musculus) Swiss Webster berumur 8-12 minggu, memiliki berat yang konstan 25-30 gr.

4. Parameter yang diamati adalah tahapan jumlah dan presentase embrio pada setiap tahapan perkembangan embrio praimplantasi, jumlah embrio abnormal dan ukuran diameter embrio praimplantasi mencit (Mus musculus) Swiss Webster yang telah diberi ekstrak rimpang temulawak.

(19)

5

D. Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) terhadap tahapan perkembangan embrio praimplantasi, terbentuknya embrio praimplantasi abnormal dan ukuran diameter blastokista pada mencit (Mus musculus) Swiss Webster.

E. Manfaat Penelitian

Adapun manfaat hasil penelitian ini dapat memberikan informasi baru mengenai pengaruh ekstrak rimpang temulawak terhadap perkembangan embrio praimplantasi bagi para peneliti dan mahasiswa untuk memberikan ide dan melakukan penelitian lebih lanjut. Selain itu, hasil penelitian ini dapat menjadi referensi dan saran bagi para wanita yang akan memprogram kehamilan untuk tidak atau meminum jamu yang mengandung ekstrak rimpang temulawak. Informasi yang didapatkan diantaranya agar para wanita yang sedang hamil muda agar berhati-hati untuk meminum obat atau jamu yang mengandung ekstrak rimpang temulawak.

F. Asumsi

Adapun asumsi yang dijadikan landasan penelitian ini sebagai berikut:

1. Temulawak mengandung komponen kurkumin, xanthorrhizol, fenol, flavonoid dan minyak atsiri lainnya diketahui memiliki potensi anti proliferasi sel hingga terjadi hambatan pembelahan sel bahkan apoptosis atau nekrosis (Quint et al., 1996; Fotsis et al., 1997; Aggarwal et al., 2003; Cheah

et al.,. 2006; Cheah et al.,. 2008; Yang dan Dou, 2010; Afzal et al., 2013).

2. Kurkumin diketahui dapat menghambat proliferasi sel dan menyebabkan apoptosis sel blastokista secara in vitro (Chen et al., 2010).

(20)

6

4. Jumlah embrio yang implantasi dapat menurun akibat pengaruh ekstrak air rimpang Curcuma longa, tumbuhan satu genus dengan temulawak, yang diberikan pada usia kehamilan tikus 1-5 hari (Yadav et al., 2010).

5. Embrio tahap blastokista normalnya terbentuk pada 66 - 82 jam (Rugh, 1967).

G. Hipotesis

(21)

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

Penelitian yang dilakukan ini termasuk ke dalam jenis penelitian eksperimental. Pada kelompok eksperimen, dilakukan sebuah perlakuan terhadap subjek penelitian atau variabel yang hendak diteliti (variabel terikat) kehadirannya sengaja ditimbulkan dengan memanipulasi suatu perlakuan sesuai dengan kebutuhan. Data yang diperoleh berasal dari hasil perlakuan terhadap subjek penelitian dan dibandingkan terhadap kontrol yang tidak diberi perlakuan (Nazir, 1988; Jaenud, 2011). Subjek penelitian pada penelitian ini adalah kelompok perlakuan yang diberi ekstrak rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) dan kelompok kontrol yang tidak diberi ekstrak rimpang temulawak. Objek yang akan diteliti adalah perkembangan embrio praimplantasi mencit betina dara (Mus musculus) Swiss Webster.

B. Desain Penelitian

Penelitian ini menggunakan desain penelitian Rancangan Acak Lengkap (RAL). Desain ini biasa digunakan pada percobaan yang bersifat homogen dan terdapat perlakuan yang dibandingkan dengan kontrol (Nazir, 1988). Desain penelitian ini digunakan untuk mengelompokan mencit yang akan digunakan ke dalam empat kelompok, yaitu satu kelompok kontrol dan tiga kelompok perlakuan. Ketiga kelompok perlakuan diberi tiga dosis yang berbeda selama tiga hari kebuntingan, yaitu 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB dan 700 mg/kg BB.

Berdasarkan rumus Federer (1963), mencit betina yang digunakan sebanyak 24 ekor, berikut adalah perhitungannya:

(n-1) (t-1)≥15 (n-1) (4-1) ≥15

(22)

33

Keterangan: t=jumlah perlakuan n=jumlah pengulangan

Setelah itu, dilakukan randomisasi untuk pengelompokkan. Pengelompokkan dilakukan dengan tujuan untuk menghilangkan bias. Pengelompokkan dilakukan dengan memberi kode 1-24 pada mencit yang akan menempati kandang yang telah diberi kode A-D sebagai kode setiap dosis. Hasil pengelompokkan terdapat pada Tabel 3.1

Tabel 3.1 Hasil Randomisasi Mencit

Berdasarkan hasil randomisasi mencit, maka didapatkan penempatan mencit pada setiap kandangnya yang dapat dilihat pada Tabel 3.2.

Tabel 3.2 Penempatan Mencit Berdasarkan Hasil Randomisasi

Kandang Dosis Kode Mencit

A 0 mg/kg BB (kontrol) 5 13 2 7 21 17

B 140 mg/kg BB 16 8 11 10 19 18

(23)

34

D 700 mg/kg BB 24 4 12 23 15 20

C. Populasi dan Sampel

Populasi pada penelitian ini adalah mencit betina dara (Mus musculus) Swiss Webster. Sedangkan sampel pada penelitian ini adalah mencit betina dara sebanyak 24 ekor. Mencit yang digunakan adalah mencit betina yang siap kawin, yaitu mencit betina yang berumur sekitar 8-12 minggu. Mencit betina yang dipakai adalah mencit betina yang memiliki bobot konstan 25-30 gr lalu diamati perkembangan embrio praimplantasi setelah diberi ekstrak rimpang temulawak secara oral dengan jarum gavage selama 3 hari usia kebuntingan. Embrio praimplantasi didapatkan dari mencit betina yang telah diberi perlakuan pemberian ekstrak rimpang temulawak dengan cara flushing. Embrio praimplantasi ini dianalisis jumlah dan persentase setiap tahapan perkembangan, embrio abnormal dan ukuran diameter embrio praimplantasi yang telah mencapai tahap blastokista.

D. Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari sampai dengan September 2014. Pelaksanaan penelitian bertempat di Laboratorium Struktur Hewan, Fakultas Pendidikan Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam dan Rumah Hewan, Kebun Botani, Universitas Pendidikan Indonesia, Bandung. Pemeliharaan mencit dilakukan di Rumah Hewan, sedangkan pengamatan embrio praimplantasi dilakukan di Laboratorium Struktur Hewan.

E. Prosedur Penelitian

1. Tahap Pra-Penelitian

a. Penyiapan Alat dan Bahan

(24)

35

betina dara yang telah diberi ekstrak temulawak. Pada proses pemeliharan dibutuhkan kandang mencit berukuran 30 x 20 x 12 cm beserta tutupnya. Kandang yang dibutuhkan sebanyak enam kandang berisi satu hingga empa mencit betina. Total mencit yang dibutuhkan adalah 24 ekor mencit betina. Selain itu, dibutuhkan juga sekitar enam ekor mencit jantan untuk dipakai dalam proses mengawinkan.

Pembuatan ekstrak dibutuhkan satu kilogram rimpang temulawak yang digiling oleh penggilingan atau blender. Pemberian ekstrak temulawak menggunakan jarum gavage dan syringe 1 ml. Ekstrak temulawak yang telah ditimbang menggunakan timbangan Dial-O-Gram dilarutkan dalam 0,3 ml aquades pada setiap dosisnya.

Analisis pengaruh ekstrak temulawak terhadap perkembangan embrio praimplantasi membutuhkan syringe 1 ml dengan jarum 26 G untuk melakukan

flushing uterus. Pelaksanaan flushing ini menggunakan larutan PBS (phosphate

buffered saline) (komposisi pada Lampiran 8) yang ditampung di kaca arloji.

Analisis pengaruh ekstrak temulawak terhadap perkembangan embrio menggunakan Mikroskop Listrik Binokuler.

Alat dan bahan pada penelitian ini dapat dilihat secara lengkap pada Lampiran 7.

b. Pembuatan Ekstrak Rimpang Temulawak

(25)

36

dilakukan Yadav dan Jain (2010 dan 2011) yang mengekstraksi Curcuma longa dengan metode ekstraksi air yang diindikasi memiliki efek anti implantasi.

Langkah pembuatan ekstrak diawali dengan proses pembuatan serbuk rimpang temulawak. Satu kilogram rimpang temulawak yang masih segar dicuci bersih. Setelah itu, rimpang temulawak dirajang hingga menjadi potongan kecil dengan ketebalan kurang lebih 1-2 mm. Selanjutnya, hasil rajangan dihilangkan kandungan airnya secara tradisional, yaitu dengan menjemur hasil rajangan di bawah sinar matahari hingga kering (Cahyono et al., 2011). Rajangan rimpang temulawak yang telah kering digiling menggunakan

blender hingga halus. Untuk mendapatkan serbuk yang halus, hasil gilingan

diayak menggunakan ayakan dapur. Setelah proses pengayakan, hasil serbuk rimpang temulawak diekstrak menggunakan air.

Ekstraksi air serbuk temulawak dilakukan menggunakan metode Halim (2012) dengan beberapa modifikasi. Proses awal ekstraksi adalah dengan mencampurkan air panas (60oC) dan serbuk temulawak dengan perbandingan air (ml) dan serbuk (gr) 16:1. Proses pencampuran dilakukan selama 30 menit dan dilakukan pengadukan agar tidak terjadi pengendapan. Setelah itu, dilakukan penyaringan menggunakan kain. Penggunaan kain sebagai penyaring dengan alasan kain memiliki ukuran pori-pori yang kecil, sehingga serbuk dapat tertahan dan menghasilkan filtrat yang halus. Ekstraksi dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan. Hasil ekstraksi disatukan dan diendapkan dengan cara didedahkan pada udara. Endapan kental yang terbentuk dikeringkan lalu dihancurkan menggunakan blender hingga mendapatkan serbuk halus. Serbuk dimasukkan ke dalam plastik dan disimpan di kulkas dan siap digunakan.

c. Penentuan Dosis

(26)

37

penelitian ini, hewan percobaan yang digunakan adalah mencit betina dara (Mus

musculus) Swiss Webster, maka dilakukan perhitungan konversi dosis dengan

nilai konversi 0,14 untuk tikus putih 200 gr ke mencit 20 gr. Nilai konversi berdasarkan tabel konversi Laurence & Bacharach (1964) (dalam Daud, 2012) (Lampiran 6). Perhitungan konversi dapat dilihat di Lampiran 6.

d. Persiapan Mencit dan Aklimatisasi

Mencit yang digunakan dalam penelitian ini didapatkan dari PAU ITB. Mencit dipelihara di Rumah Hewan Botani UPI. Rumah hewan memiliki suhu minimum 25oC dan suhu maksimum 29oC dengan suhu rata-rata 26,57oC. Kelembaban relatif ruangan mencapai titik minimum 76 % dan titik maksimum 92 % dengan kelembaban relatif rata-rata 82,86 %. Mencit betina yang dipakai berumur 8-12 minggu (Haryono, 1996; Sumarmin, 1999; Priyandoko, 2004), sedangkan mencit jantan yang digunakan berumur 8-14 minggu. Mencit betina yang dipakai memiliki bobot konstan 25-30 gr (Sumarmin, 1999).

Mencit betina yang memasuki umur reproduksi ditempatkan di kandang baru dengan sekam yang bersih. Penempatan mencit betina di dalam kandang menggunakan desain RAL. Kandang yang digunakan berukuran 30 x 20 x 12 cm, terbuat dari plastik dan bening. Kandang ditutup dengan kawat penutup. Dasar kandang diberikan sekam dan diganti seminggu seminggu sekali.

Mencit betina dan jantan yang digunakan diaklimatisasi selama 7 hari dalam kandang yang terpisah. Mencit diberi makan berupa pakan standar untuk anak babi CP 551, produksi PT Charoen Pokphand Indonesia secara ad libitum, begitu pula dengan pemberian minum (Rugh, 1967; Priyandoko, 2004). Setelah 7 hari aklimatisasi, mencit betina yang memiliki bobot yang konstan dipisahkan. Setiap mencit betina dikawinkan dengan mencit jantan. Jika keesokan harinya terjadi perkwinan maka dilanjutkan pada tahap perlakuan.

2. Tahap Penelitian

a. Mengawinkan Mencit

(27)

38

hormon dengan komposisi perbandingan jantan dan betina 1:4 untuk setiap dosisnya (Samah dan Almahdy, 1992). Keesokan harinya setiap betina diperiksa sumbat vagina (vaginal plug) yang menandakan telah terjadinya proses perkawin oleh jantan dan ditetapkan sebagai usia kebuntingan ke-0 hari (Rugh, 1967; Taylor, 1987 dalam Haryono, 1996; Sumarmin et al., 1999; Priyandoko, 2004; Schwiebert, 2007). Mencit betina yang terdapat sumbat vagina dipisahkan ke dalam kandang baru, lalu perlakuan dimulai. Perlakuan tidak dilakukan secara serentak hanya mencit betina yang terdapat sumbat vagina saja yang dimulai perlakuannya. Perlakuan dilakukan pada kurang lebih 1-3 ekor yang ditemukan sumbat vagina pada setiap harinya. Jika belum terjadi perkawinan dan tidak ditemukan sumbat vagian maka dilakukan proses pengawinan kembali.

b. Perlakuan Terhadap Mencit

Setelah proses perkawinan berhasil, mencit betina mulai diberi ekstrak rimpang temulawak sesuai dosis pada setiap pagi mulai usia kebuntingan ke-0 hari sampai ke-3 (Haryono, 1996; Sumarmin, 1999). Masing-masing dosis yang diberikan adalah dosis 0 mg/bb, 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB dan 700 mg/kg BB. Setiap dosis ditimbang menggunakan timbangan Dial-O-Gram, lalu dilarutkan dalam aquades sebanyak 0,3 ml. Ekstrak diberikan pada mencit betina dengan metode oral dengan menggunakan syringe 1 ml dan jarum

gavage setiap pagi (Gambar 3.1) (Priyandoko, 2004). Untuk dosis 0 mg/bb dikelompokkan sebagai kontrol. Maka perlakuannya diberi aquades 0,3 ml tanpa ekstrak rimpang temulawak.

(28)

39

Gambar 3.1 Gavage (Sumber: Schwiebert, 2007)

c. Koleksi Embrio

Setelah pembedahan mencit, oviduk dan uterus diisolasi. Lalu dibersihkan dari darah dan lemak di dalam larutan NaCl 0,96% (larutan fisiologis) yang ditempatkan di cawan Petri. Embrio diambil dengan metode flushing menggunakan cairan Phosphate Buffered Saline (PBS ) pH 7,2. Flushing menggunakan syringe 1 ml dengan jarum ukuran 26 G. Flushing dilakukan di atas kaca arloji yang telah dibersihkan menggunakan alkohol (Hogan, 1987; Dye, 1993). Proses flushing embrio dapat dilihat pada Gambar 3.2.

Gambar 3.2 Metode Flushing; a) Cara Memasukkan Jarum ke Ujung Oviduk, b)

Flushing Embrio di Atas Kaca Arloji (Sumber: Dye, 1993; Priyandoko,

2004).

d. Pengamatan dan Analisis Embrio Praimplantasi

Setelah koleksi embrio didapatkan, lalu dilakukan analisis tahap-tahap embrio praimplantasi. Tahap-tahap praimplantasi dilakukan dengan melihat morfologi embrio. Embrio dikelompokkan berdasarkan tahapannya, yaitu embrio yang mengalami kelambatan perkembangan atau belum mencapai tahap blastokista, embrio yang tidak mengalami kelambatan perkembangan dan

a) b) pinset

Jarum 26 G yang dipasang pada syringe 1 ml berisi medium PBS

Cawan arloji berisi embrio dan medium PBS

(29)

40

embrio abnormal. Embrio yang mengalami kelambatan perkembangan adalah embrio tahap pembelahan (1-8 sel), morula tidak mampat dan morula mampat. Sedangkan, embrio yang tidak mengalami kelambatan perkembangan, yaitu blastokista saja (Sumarmin et al., 1999; Priyandoko, 2004). Selain itu, jumlah setiap tahapan embrio dihitung. Setelah dihitung jumlah tahapannya, blastokista yang didapatkan dipisahkan ke cawan Petri lain, lalu dihitung diameter horizontal dan vertikal menggunakan lensa objective micrometer yang telah dikalibrasi menggunakan oculer micrometer. Tujuan penghitungan diameter adalah untuk mengetahui rata-rata diameter blastokista setiap dosis. Pengamatan dilakukan dengan menggunakan bantuan mikroskop listrik binokuler.

3. Analisis Data

Analisis data dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Analisis data secara kualitatif dilakukan dengan cara melihat morfologi untuk menentukan tahapan embrio praimplantasi. Selain menentukan tahapan, analisis morfologi dilakukan untuk menentukan abnormalitas embrio. Analisis kuantitatif dilakukan dengan cara menghitung jumlah, rata-rata dan persentase embrio praimplantasi baik setiap tahapan maupun total keseluruhan.

Analisis data kuantitatif pun dilakukan dengan pengujian hipotesis. Pengujian hipotesis dilakukan dengan softwarer SPSS 16. Pengujian hipotesis dilakukan menggunakan One way ANOVA jika data terdistribusi normal (parametrik). Pengujian hipotesis akan dilakukan menggunakan uji statistik Wilcoxon’s rank sum test, jika data tidak terdistribusi normal (non parametrik).

(30)

41

4. Alur Penelitian

TAHAP PRA PENELITIAN

Pembuatan ekstrak temulawak Aklimatsasi mencit selama tujuh hari

Proses pengawinan mencit yang siap kawin

Pengamatan sumbat vagina

Jika ada:

Perlakuan dengan memberi ekstrak temulawak secara gavage selama 3,5 hari kebuntingan

Jika tidak ada: Pengawinan kembali

Analisis tahapan embrio dan perhitungan jumlah embrio praimplantasi

Pengukuran diameter blastokista

Analisis data

Penysunan Skripsi Gambar 3.3 Alur Penelitian

Pembedahan dan isolasi oviduk dan uterus Pembuatan Proposal

Persiapan Alat dan Bahan

TAHAP PENELITIAN

(31)

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian pengaruh ekstrak rimpang temulawak (Curcuma

xanthorrhiza Roxb.) terhadap perkembangan embrio praimplantasi mencit (Mus

musculus) Swiss Webster dengan kelompok dosis 140 mg/kg BB, 280 mg/kg BB dan

700 mg/kg BB yang diamati pada umur kebuntingan ke-3,5 terjadi pengaruh hambatan perkembangan embrio praimplantasi yang mencapai tahap blastokista. Pengaruh ekstrak rimpang temulawak menurunkan rata-rata jumlah embrio praimplantasi yang mencapai tahap blastokista secara signifkan (p<0,05) pada kelompok dosis 280 mg/kg BB dan 700 mg/kg BB. Hambatan perkembangan terjadi pada embrio praimplantasi tahap morula dan terbentuknya embrio abnormal. Embrio abnormal yang ditemukan adalah zona pelusida tanpa embrio, embrio tanpa zona pelusida, embrio dengan blastomer terfragmentasi dan embrio dengan blastomer terdegenerasi. Jumlah embrio abnormal yang terbentuk meningkat seiring dengan peningkatan dosis yang diberikan. Rata-rata jumlah embrio abnormal yang terbentuk berbeda secara signifikan (p<0,05) pada kelompok dosis 700 mg/kg BB dibandingkan dengan kontrol. Selain itu, ekstrak rimpang temulawak mempengaruhi rata-rata ukuran diameter blastokista. Ukuran diameter horizontal pada kelompok dosis 140 mg/kg BB dan ukuran diameter vertikal pada kelompok dosis 140 mg/kg BB dan 280 mg/kg BB lebih kecil secara signifikan (p<0,05) jika dibandingkan dengan kontrol.

B. Saran

(32)

63

(33)

DAFTAR PUSTAKA

Afzal, A., Oriqat, G., Khan, M. A., Jose, J. dan Afzal, M. (2013). Chemistry and Biochemistry of Terpenoids from Curcuma and Related Species. Journal of

Biologically Active Products from Nature, 3 (1), hlm. 1-55.

Aggarwal, B. B., Kumar, A. dan Bharti, A. C. (2003). Anticancer Potential of Curcumin: Preclinical and Clinical Studies. Anticancer Research, 23, hlm. 363-398.

Aggarwal, B. B., Kumar, A., Aggarwal, M. S. dan Shishodia, S. (2004). Curcumin

Derived from Turmeric (Curcuma longa): a Spice for All Seasons. CRC Press

LLC.

Akram, M., Uddin, S., Ahmed, A., Usmanghani, K., Hannan, A., Mohiuddin, E. dan Asif, M. (2010). Curcuma longa and Curcumin: A Review Article. Rom. J.

Biol. – Plant Biol, 55 (2), hlm. 65-70.

Anand, P., Sundaram, C., Jhurani, S., Kunnumakkara, A.B. dan Aggarwal, B. B. (2008).

Curcumin and Cancer: An ‘‘Old-age” Disease with an ‘‘Age-old” Solution.

Cancer Letters, 267, hlm. 133-164.

Annisa, Sumarno dan Sarosa, H. (2011). Pengaruh Ekstrak Kunir Putih (Curcuma alba) terhadap derajat Diferensiasi Sel Adenokasinoma Mammae. Prosiding Semnas

Herbs for Cancer (hlm.213-219). Semarang: FK UNISSULA.

Aritonang, H. (1986). Uji Efek Anti Implantasi Post Koitus Ekstrak Kering Batang

Bratawali dan Ekstrak Kental Rimpang Temulawak terhadap Tikus Hamil.

(Skripsi). Jurusan Farmasi FMIPA ITB, Bandung.

Ashfahani, E. D., Wiratmini, N. I. dan Sukmaningsih, A. A. S. A. (2010). Motilitas Viabilitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) setelah Pemberian Ekstrak Temu Putih (Curcuma zedoaria (Berg.)). Jurnal Biologi, 17 (1), hlm. 20-23. Backer, C.A. dan Brink, B. V. D. 1968. Flora of Java (Spermatophytes Only), Vol. III.

Netherlands: N. V. P. Noordhoff: Groningen.

Badan POM RI. (2005). Informasi Temulawak Indonesia. Jakarta: Badan POM RI. Batan, I. W., Boediono, A., Djuwita, I., Lay, B. W. dan Supar. (2007). Perlakuan

(34)

65

Bhardwaj, P., Alok, U. dan Khanna, A. (2013). in vitro Cytotoxicity of Essential Oils: A Review. International Journal of Research in Pharmacy and Chemistry, 3 (3), hlm. 671-681.

Cahyono, B., Huda, M. D. K. dan Limantara, L. (2011). Pengaruh Proses Pengeringan Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorrhiza ROXB) terhadap Kandungan dan Komposisi Kurkuminoid. Reaktor, 13 (3), hlm 165-171.

Campbell, N.A. dan Reece, J. B. (2010). Biologi, Edisi Kedelapan, Jilid 3. Jakarta: Erlangga.

Cancer Chemoprevention Research Center. (2011). Mekanisme dan Regulasi Apoptosis. Yogyakarta, Universitas Gajah Mada

Chattopadhyay I., Biswas K., Bandyopadhyay U. and Banerjee R.K. (2004). Turmeric and curcumin: Biological Actions and Medicinal Applications. Current

Science. 87 (1), hlm. 44-53.

Cheah, Y. W., Azimahtol, H. L. P. dan Abdullah, N. R. (2006). Xanthorrhizol Exhibits Antiproliferative Activity on MCF-7 Breast Cancer Cells via Apoptosis Induction. Anticancer Research, 26, hlm. 4527-4534.

Cheah, Y. W., Nordin, F. J., Tee, T. T., Azimahtol, H. L. P., Abdullah, N. R. dan Ismail, Z. (2008). Antiproliferative Property and Apoptotic Effect of Xanthorrhizol on MDA-MB-231 Breast Cancer Cells. Anticancer Research, 28, hlm. 3677-3690. Chen, C., Hsieh, M., Hsuw, Y., Huang, F. dan Chan, W. (2010). Hazardous Effects of Curcumin on Mouse Embryonic Development through a Mitochondria-Dependent Apoptotic Signaling Pathway. International Journal of Molecular

Sciences, 11, hlm. 1-20.

Chen, C. C. dan Chan, W. H. (2012). Injurious Effects of Curcumin on Maturation of Mouse Oocytes, Fertilization and Fetal Development via Apoptosis.

International Journal of Molecular Sciences, 13, hlm. 4655-4627.

Choi, M. A., Kim, S. H., Chung, W. Y., Hwang, J. K. dan Park, K. K. (2004). Xanthorrhizol, A Natural Sesquiterpenoid from Curcuma xanthorrhiza, Has An Anti-metastatic Potential in Experimental Mouse Lung Metastasis Model.

Biochemical and Biophysical Research Communications, 326, hlm 210-217.

Daud, N. (2012). Appendix. (Tesis). Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan.

Departemen Pertanian. (2007). Prospek Dan Arah Pengembangan Agribisnis Tanaman

Obat. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian.

(35)

66

Standardized Ethanolic Extract of The Rhizome of Curcuma xanthorrhiza Roxb. Molecules, 15, hlm. 2925-2934.

Devaraj, S., Ismail, S., Ramanathan, S., Marimuthu, S. dan Fei, M. Y. (2010b). Evaluation of The Hepatoprotective Activity of standardized ethanolic extract of Curcuma xanthorrhiza Roxb. Journal of Medicinal Plants Research, 4 (23), hlm. 2512-2517.

Dye, F. (1993). Obtaining Early Mammalian Embryos. Proceeding. (hlm. 97-112) Connecticut: Department of Biological and Environmental Sciences Western Connecticut State University.

Federer, W. T. (1963). Experimental Design,Ttheory and Application. New Delhi: Oxford and IBH Publ. Co.

Fotsis, T., Pepper, M. S., Aktas, E., Breit, S., Rasku, S., Adlercreuts, H., Wahala, K., Montesano, R. dan Schweigerer, L. (1997). Flavonoids, Dietary-derived Inhibitors of Cell Proliferation and in Vitro Angiogenesis. Cancer Research, 57, hlm. 2916-2921.

Gerking, S. D. (1969). Biological Systems. Japan: Toppan Company.

Giri, A. K. (1991). Food Dyes of India: Mutagenic and Clastogenic Potential. Proc.

Indian natn. Sci. Acad, (3 dan 4), hlm. 183-189.

Goel, A., Kunnumakkara, A. B. dan Aggarwal, B. B. (2008). Curcumin as

‘‘Curecumin’’: From kitchen to clinic. Biochemical Pharmacology, 75, hlm.

787-809.

Halim, M. R. A., Tan, M. S. M. Z., Ismail, S. dan Mahmud, R. (2012). Standarization and Phytochemical Studies of Curcuma xanthorrhiza ROXB. International

Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4 (3), hlm. 606-610.

Handayani, T., Sakinah, S., Nallappan, M. dan Pihie, A. H. L. (2007). Regulation of p53-, Bcl-2- and Caspase-dependent Signaling Pathway in Xanthorrhizol-induced Apoptosis of HepG2 Hepatoma Cells. Anticancer Research, 27, hlm. 965-972.

Hartshorne, G. (2000). The Embryo. Human Reproduction, 15 (4), hlm. 31-41.

Haryono, A. (1996). Pengaruh T-2 Toksin yang Diberikan pada Tahap Praimpalntasi

Terhadap Perkembangan Embrio Praimplantasi dan Fetus Hidup Mencit Swiss Webster. (Tesis). Pascasarjana, Biologi ITB, Bandung.

Haryono, A., Surjono, T. W. dan Sudarwati, S. (2007). Efek Toksin T-2 terhadap Perkembangan Embrio Praimplantasi dan Fetus Mencit Swiss Webster. Hayati

(36)

67

Hayakawa, H., Minaniya, Y., Ito, K., Yamamoto, Y. dan Fukuda, T. (2011). Difference of Curcumin Content in Curcuma longa L. (Zingiberaceae) Caused by Hybridization with Other Curcuma Species. American Journal of Plant

Sciences, 2, 111-119.

Hayani, E. (2006). Analisis Kandungan Kimia Rimpang Temulawak. Temu Teknis

Nasional Tenaga Fungsional Pertanian. (hlm. 309-312). Bogor: Balai

Penelitian Tanaman Rempah dan Obat.

Helmita, R., Djuwita, I., Purnawantara, B. dan Winarto. (2007). Aktivitas NADH- Tetrazolium Reductase Sel Sel Trofoblas pada Blastosis yang Mengalami Hatching dan Gagal Hatching. Jurnal Anatomi Indonesia, 2 (1) , hlm. 1-7. Hogan, B., Constantini, F., dan Lacy, E. (1986). Manipulating The Mouse Embryo a

Laboratory Manual. New York, USA: Cdd-Spring Laboratory.

Huang, F. J., Lan, K. C., Kang, H. Y., Liu, Y. C., Hsuw, Y. D., Chan, W. H. dan Huang, K. E. (2013). Effect of Curcumin on in vitro Early Post-implantation Stages of Mouse Embryo Development. European Journal of Obstetrics & Gynecology

and Reproductive Biology, 166, hlm. 47-51.

Itokawa, H., Shi, Q., Akiyama, T., Natschke, M. dan Lee, K. H. (2008). Recent Advances in The Investigation of Curcuminoids. Chinese Medicine,3 (11), hlm. 1-13.

Jaenud, A. (2011). Metodologi Penelitian Eksperimental. Yogyakarta: Universitas Negeri Yogyakarata.

Jantan, I., Saputri, F. C., Qaisar, M. N. dan Buang, F. (2012). Correlation between Chemical Composition of Curcuma domestica and Curcuma xanthorrhiza and Their Antioxidant Effect on Human Low-Density Lipoprotein Oxidation.

Hindawi Publishing Corporation,hlm. 1-11.

Katrin, E., Susanto dan Winarno, H. (2011). Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Temulawak (Curcuma xanthorrizha Roxb.) Iradiasi yang Mempunyai Aktivitas Antikanker.

Jurnal Ilmiah Aplikasi Isotop dan Radiasi, 7 (1), hlm. 41-52.

Kementrian Negara Lingkungan Hidup. (2010). Pembangun Taman Keanekaragaman

Hayati. Bandung: BPLHD Jabar.

Kim, M. B., Kim, C., Song, Y. dan Hwang, J. K. (2004). Antihyperglycemic and Anti-Inflammatory Effects of Standardized Curcuma xanthorrhiza Roxb. Extract and Its Active Compound Xanthorrhizol in High-Fat Diet-Induced Obese Mice.

Hindawi Publishing Corporation, hlm. 1-10.

(37)

68

Involvement of Reactive Oxygen Species. Korean J Physiol Pharmacol, 14, hlm. 391-397.

Kunnumakkara, A. B., Guha, S., dan Aggarwal, B.B. (2009). Curcumin and Colerectal Cancer: Add Spice to Your Life. Laporan Colerecteral Cancer. (hlm. 5-14). Houston: University of Texas M.D. Anderson Cancer Center Houston USA. Kurniawati. (2006). Perbandingan Tingkat Keberhasilan Perkembangan Eembrio Hasil

Fertilisas In Vitro pada Oosit Mencit (Mus musculus l.) Strain Swiss Webster dengan Menggunakan Spermatozoa Epididimis dan Spermatozoa Hasil Kriopreservasi. (Skripsi). Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

Lumongga, F. (2008). Apoptosis. Medan: Universitas Sumatera Utara.

Magli, M. C., Gianaroli, L., Ferraretti, A. P., Lappi, M., Ruberti, A. dan Farfalli, V. (2006). Embryo Morphology and Development are Dependent on The Chromosomal Complement. Fertility and Sterility, 87 (3), hlm. 534-541. Makarevich, A. V., Chrenek, P. dan Fl’ak, P. (2006). The Influence of Microinjection of

Foreign Gene into the Pronucleus of Fertilized Egg on the Preimplantation Development, Cell Number and Diameter of Rabbit Embryos. Asian-Australia

Journal Animal Science, 19 (2), hlm. 171-175.

Mujahid, R. Awal, P. K. D. Dan Nita, S. (2012). Maserasi Sebagai Alternatif Ekstraksi

pada Penetapan Kadar Kurkuminoid Simplisia Temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb). Tawangmangu: Balai Besar Litbang Tanaman Obat dan

Obat Tradisional Tawangmangu.

Nazir. (1988). Metode Penelitian. Ghalia Indonesia: Jakarta.

Nugroho, B., Malau, D. P., Rokhmanto, F. dan Laili, N. (2008). Pengaruh Suhu

Ekstraksi terhadap Kandungan Kurkuminoid dan Air Serbuk Temulawak (Curcuma xanthorrhiza). Bogor: LIPI.

Nurcholis, W., Purwakusumah, E. D., Rahardjo, M. dan Darusman, L. K. (2012). Variasi Bahan Bioaktif dan Bioaktivitas Tiga Nomor Harapan Temulawak pada Lokasi Budidaya Berbeda. J. Agron. Indonesia, 40 (2) , hlm. 153 – 159. Panigoro, R., Surialaga, S. dan Dhianawaty, D. (2013). Comparison of curcumin level

in fresh and decoction of dried Curcuma xanthorrhiza Roxb. Rhizome.

International Journal Research Pharmaceutical Sciences, 4 (2), hlm. 256-259.

Priamboro. (2001). Temulawak. [Online]. Tersedia:

http://www.warintek.ristek.go.id/pertanian/temulawak.pdf [26 November 2013] Pribadi, G. A. (2008). Penggunaan Mencit dan Tikus Sebagai Hewan Model Penelitian

(38)

69

Priyandoko, D. (2004). Efek Asam Metoksiasetat Terhadap Perkembangan Embrio

Praimplantasi dan Kualitas Blastokista Mencit (Mus musculus) Swiss Webster.

(Tesis). Biologi ITB, Bandung.

Purnomowati, S. dan Yoganingrum, A. (1997). Tinjauan Literatur:Temulawak

(Curcuma xanthorrhiza Roxb.). Jakarta: LIPI.

Quint, U., Vanhofer, U., Herastrick, A. dan Muller, R. T. (1996). Cytotoxicity of Phenol

to Musculoskeletal Tumors. Germany: British Editorial Society of Bone and

Joint Surgery.

Rahardjo, M. (2010). Penerapan SOP Budidaya Untuk Mendukung Temulawak Sebagai Bahan Baku Obat Potensial. Perspektif, 9 (2), hlm. 78 – 93.

Rahminiwati, M., Djuwita, I., Darusman, L. K. dan Sa’diah, S. (2012). Neuroprotective Effect of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza) on Braine Nerve Cell Damage Induced by Lipopolysaccharide (LPS). Proceedings of The Second

International Symposium on Temulawak, hlm. 134-137.

Rasad, S. D. (2012). Modul Praktikum Reproduksi Ternak.

Redha, A. (2010). Flavonoid: Struktur, Sifat Antioksidatif dan Peranannya dalam Sistem Biologis. Jurnal Belian, 9 (2), hlm. 196-202.

Rini, C., Widjajanto, E. dan Loekito, Rm. 2011. Peranan Curcumin terhadap Proliferasi, Apoptosis dan Diferensiasi Hepatosit Mice Balb/C yang Dipapar dengan Benzapyrene. J.Exp. Life Sci., 1(2), hlm. 56-110.

Riyanto. (2007). Efek Bererapa Senyawa Kimia Terhadap Indeks Mitosis dan Aberasi Kromosom mamalia. Forum Mipa, 10 (2), hlm. 1-8.

Rugh, R. (1967). The Mouse; Its Reproduction and Development. Columbia: Burgess Publishing Company.

Rukayadi, Y., Yong, D. dan Hwang, J. K. (2006). In vitro anticandidal activity of xanthorrhizol isolated from Curcuma xanthorrhiza Roxb.. Journal of

Antimicrobial Chemotherapy, 57, hlm. 1231-1234.

Rustam, E., Atmasari, I. Dan Yawirasti. 2007. Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Kunyit (Curcuma domestica Va.) pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar. Jurnal

Sains dan Teknologi Farmasi, 12 (2), hlm. 112-115.

Samah, A. dan Almahdy. (1992). Pengaruh Ekstrak Metanol Kulit Batang Tumbuhan

(39)

70

Sari, D. L. N., Cahyono, B., dan Kumoro, A. C. (2013). Pengaruh Jenis Pelarut pada Ekstraksi Kurkuminoid dari Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb). Chem Info,1 (1), 101 – 107.

Schwiebert, R. (2007). The Laboratory Mouse. Singapur: National Universityof Singapore.

Sembiring, B.B, Ma’mun, dan Ginting, E.I. (2006). Pengaruh Kehalusan Bahan dan Lama Ekstraksi terhadap Mutu Ekstrak Temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb). Bul. Littro, 17 (2), hlm. 53 – 58.

Setyawan, A. A. (2003). Keanekaragaman Kandungan Minyak Atsiri Rimpang Temu-temuan (Curcuma). Biofarmasi 1 (2), hlm.44-49.

Sidik, Moelyono, dan Mutadi, A. (1995). Temulawak; Curcuma xanthorrhiza Roxb. Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alam Phyto Medica.

Siswanti, T., Astirin, P., O. dan Widiyani, T. (2003). Pengaruh Ekstrak Temu Putih (Curcuma zedoaria Rosc.) terhadap Spermatogenesis dan Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.). B i o S MART 5, hlm. 38-42.

Smith, E. T. (1959). The Science of Living Things; Exploring Biology. Fifth Edition. New York: Harcourt, Brace & World, Inc.

Sumarmin, R., Surjono, T.W, dan Sudarti, S. (1999). Efek Perlakuan Ru Bratoksin B Padat terhadap Perkembangan Embrio Praimplantasi dan Fetus mencit ( Mus musculus) Swiss Webster. Proc ITB, 31 ( 3), hlm. 105-111.

Warner, C. M., Cao, W., Exley, G. E., McElhinny, A. S., Alkani, M., Cohen, J., Scott, R. T. dan Brenner, C. A. (1998). Genetic Regulation of Egg and Embryo Survival. Boston: Institute for Reproductive Medicine and Science of Saint Barnabas Weisz, P. B. 1959. The Science of Biology. London: McGraw-Hill Book Company, Inc. Yadav, R., dan Jain, G.C. (2010). Post-Coital Contraceptive Effeciency of Aqueous

Extract of Curcuma longa Rhizome In Female Albino Rats.

Pharmacologyonline, 1, hlm. 507-517.

Yadav, R., dan Jain, G.C. (2011). Effect of Contragestative Dose of Aqueous Extract of Curcuma Longa Rhizome on Uterine Biochemical Milieu of Female Rats.

Indian Journal of Fundamental and Applied Life Sciences, 1 (3), hlm 183-187.

Yang, H. dan Dou, Q. P. (2010). Targeting Apoptosis Pathway with Natural Terpenoids: Implications for Treatment of Breast and Prostate Cancer. National Institute of

Health, 11 (6), hlm. 733-744.

(40)

71

Zhang, Y., Dou, H., Li, H., He, Z. dan Wu, H. (2014). The Citrus Flavonoid Nobiletin Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis in Human Pancreatic Cancer Cells