SKRIPSI
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
Oleh :
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
2005
DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
Pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Oleh:
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
2005
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
Pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Oleh:
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
Dilahirkan pada tanggal 4 Juli 1983 di Kudus
Tanggal lulus : 27 Oktober 2005
Menyetujui, Bogor, November 2005
Ir. Endang Prangdimurti, M.Si. Dosen Pembimbing
Mengetahui,
Kurniawati Wulan Sari. F24101008. Studi Kemampuan Pengikatan Kolesterol oleh Ekstrak Daun Suji (Pleomele angustifolia N. E. Brown) dalam Simulasi Sistem Pencernaan In vitro. Di bawah bimbingan Ir. Endang Prangdimurti, M.Si.
RINGKASAN
Penyakit degeneratif merupakan penyakit yang dapat disebabkan karena pola konsumsi yang salah. Tingginya konsumsi lemak dan kolesterol akan berakibat tingginya kolesterol darah dan memicu terjadinya aterosklerosis. Upaya penanggulangan penyakit degeneratif ini dapat dilakukan dengan mengkonsumsi senyawa-senyawa bioaktif yang memiliki kemampuan hipokolesterolemik. Meskipun masih sangat terbatas dan belum jelas mekanismenya, namun beberapa penelitian mengindikasikan adanya kemampuan hipokolesterol dari klorofil. Studi atau hasil penelitian mengenai efek penurunan kolesterol oleh klorofil secara in vivo telah dikemukakan oleh Vlad et al (1995). Penelitiannya menunjukkan bahwa pemberian cuprofilin selama 90 hari secara nyata menurunkan kadar kolesterol, trigliserida dan lipida serum darah tikus yang sebelumnya memperlihatkan indikasi terkena aterosklerosis. Penelitian Alsuhendra (2002) menunjukkan bahwa konsumsi zinkofilin atau seng-feofitin dari daun singkong dengan dosis sebanyak 100.2 mg/hari/ekor bersama-sama dengan kolesterol 0.1% secara nyata menurunkan kadar total kolesterol dan LDL serum kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi. Diduga bahwa klorofil atau derivatnya dapat berikatan dengan kolesterol maupun garam empedu dalam saluran pencernaan.
Oleh karena itu perlu penelitian untuk membuktikan dugaan adanya pengikatan antara kolesterol dengan klorofil. Dalam penelitian ini akan pelajari mengenai kemampuan pengikatan kolesterol oleh ekstrak daun suji sebagai sumber klorofil. Dari penelitian ini diharapkan diperoleh data tentang kemampuan pengikatan kolesterol oleh ekstrak daun suji sehingga dapat dimanfaatkan sebagai pencegahan aterosklerosis. Sebagai pembanding digunakan SCC (Sodium Copper Chlorophyllin) yang merupakan klorofil larut air yang telah diteliti memiliki aktivitas biologis.
Dalam penelitian ini ekstrak suji sebesar 0.1 g/ ml dan SCC 2.35 mM dilalukan dalam simulasi sistem pencernaan secara in vitro pada dua taraf konsentrasi kolesterol murni ( 0 % dan 2 %). Parameter yang diukur yaitu kadar klorofil, kadar kolesterol dan separasi pigmen menggunakan TLC (Thin Layer Chromatography) masing-masing pada fraksi awal, fraksi gastric, fraksi digesta dan fraksi dialisat. Banyaknya klorofil dan kolesterol yang tidak terserap ke dalam kantung dialisis menunjukkan dugaan adanya kapasitas pengikatan kolesterol oleh klorofil.
daun suji sebesar 5.76 %. Adapun persentase klorofil terdialisis dari SCC dengan perlakuan tanpa kolesterol lebih tinggi dibanding suji yaitu rata-rata sekitar 19.78% (p < 0.05).
Pada perlakuan dengan penambahan kolesterol, nilai klorofil yang terdialisis kedua sampel yaitu ekstrak daun suji dan SCC menurun bila dibandingkan perlakuan tanpa kolesterol. Namun, secara statistik pada ekstrak daun suji tidak terdapat perbedaan yang signifikan (p>0.05) sedangkan pada SCC signifikan (p<0.05). Nilai klorofil yang terdialisis dari ekstrak daun suji dengan penambahan kolesterol lebih rendah bila dibandingkan dengan klorofil yang terdialisis dari SCC (p>0.05).
Hasil analisis kadar kolesterol diperoleh keterangan bahwa baik sampel ekstrak daun suji maupun sampel larutan SCC keduanya menunjukkan adanya fitosterol pada fase awal. Hal ini karena reagen kit kolesterol dapat mengukur fitosterol juga. Pengukuran kadar kolesterol dialisat dari ekstrak daun suji yang ditambah kolesterol menunjukkan tidak ada kolesterol yang terukur (0%). Sedangkan untuk SCC yang ditambah kolesterol, banyaknya kolesterol terdialisis ke dalam kantung dialisis rata-rata sebesar 3.92%. Sebagai pembanding, kolesterol terdialisis pada sampel pelarut suji (0.75 % Tween 80 dalam Na sitrat) sangat besar dibandingkan ekstrak suji ataupun SCC yaitu 112 %. Hal ini adanya penambahan kolesterol dari ekstrak bile. Diduga bahwa terdapat komponen dalam ekstrak daun suji maupun SCC yang mampu menahan penyerapan kolesterol.
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di salah satu kota kecil di Jawa Tengah yaitu Kudus tepatnya pada tanggal 4 Juli 1983. Penulis merupakan anak pertama dari tiga bersaudara pasangan Ibunda Sularni dan Ayahanda Sukis Djasimin, BSc. Penulis mengawali karir akademiknya di TK Pertiwi Kedungdowo pada tahun 1988-1989. Kemudian dilanjutkan dengan menempuh pendidikan dasar di SDN Kedungdowo I Kaliwungu Kudus pada tahun 1989-1995. Jenjang pendidikan menengah penulis tempuh di SMP Muhammadiyah I Kudus hingga tahun 1998. Pada tahun tersebut juga, penulis kemudian melanjutkan pendidikan ke SMU Muhammadiyah I Kudus.
Pada tahun 2001 penulis mendapatkan kesempatan belajar sebagai mahasiswa di Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor yang diterima melalui jalur USMI. Selama menempuh pendidikan di IPB, penulis aktif dalam berbagai kegiatan kemahasiswaan baik intra maupun ekstra kampus. Diantaranya di DPM TPB IPB (2001-2002), DPM Fateta IPB (2002-2003), Badan Pengawas HIMITEPA (2002-2003) dan anggota UKM Tapak Suci IPB. Hingga saat ini penulis masih aktif di Pimpinan Cabang Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah (IMM) Kab./Kota Bogor (2004-2006) sebagai ketua bidang kader, Komunitas Pendidikan Pemberdayaan Masyarakat Mustadh’afiin “PERAMU” (2004-sekarang) dan juga masih tercatat sebagai staf pengajar Kimia di SMA Muhammadiyah Ciampea Bogor.
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji hanya untuk Allah SWT yang telah memberikan kekuatan Islam, iman dan ukhuwah sehingga terselesaikannya karya kecil ini. Shalawat dan salam kepada nabi Muhammad SAW sebagai panutan dan ikutan terbaik bagi umat yang membawa cahaya Islam. Selama penelitian sampai dengan tersusunnya skripsi ini, penulis banyak mendapatkan bantuan baik moral maupun material dari berbagai pihak. Pada kesempatan ini dengan hati yang tulus dan ikhlas penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada:
1. Ibu dan Bapak atas segala cinta kasih dan do’a yang tak pernah putus diberikan, semangat dan pengertian serta perjuangan yang telah dilakukan. 2. Ibu Ir. Endang Prangdimurti, MSi selaku dosen pembimbing yang telah
meluangkan waktu dan pikiran dalam membimbing dan mengarahkan hingga terselesaikannya skripsi ini.
3. Ir. Sutrisno Koswara, Msi dan Antung Sima, STP selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan evaluasi.
4. Laboran Departemen ITP (Pak Wahid, Pak Sobirin, Pak Gatot, Bu Rubiah, Teh Ida, Pak Yahya, Pak Rozak, Pak Sidik dan mbak Darsi) atas segala ilmu dan bantuannya demi kelancaran penelitian ini.
5. Keluarga tercinta di Kudus dan Surabaya, dik Ulil dan dik Abid, Mbak Yanti, Mas Ayik, Mas Ed dan Mas Andik serta mbah putri yang selalu memberikan semangat dan dukungan.
6. Teman seperjuangan Immawan/Immawati Rini, Nunik, Tito, Fikri dan Torik atas indahnya ukhuwah kebersamaan selama ini (we are a great team). 7. Kakak-kakakku dalam “Keluarga kecil” di Bogor yang penuh kekeluargaan
dan selalu mengayomi, Mas Topik, Mas supreh, Mbak rifa, Mbak kus, Mbak Mutia dan Mbak Susi atas semua pengertian dan bimbingannya.
menggapai ridho-Nya di TPG. Tidak lupa juga, Kakak dan adik kelas TPG 36, 37, 39 dan 40.
9. Adik-adikku di IMM Ayu, Iin, Ambar, Citta, Didik, Icha, Vebi, Muad, Udin dan Budi (You’re all the inspiration). Selamat berfastabiqul khoirot.
10.Keluarga besarku di KKB (Keluarga Kudus-Bogor) khususnya Dasa, Avi, Zule, Itok, Heni dan Udin serta adik-adik KKB’ers.
11.Kawan-kawan di PERAMU yang telah menunjukkan realitas sosial.
12.Palma family dan Sausan atas kebersamaan, keceriaan dan ‘gangguan’ selama ini.
13.Saudara jauhku, Fia, Ita, Leli, Evi, Mbak Lela, Adnan dan Rudi. Terimakasih atas doanya.
14.Ustadz Prapto dan kawan-kawan PIR XXI dan XXII serta Kawan-kawan di JIMM-PTN, milis yang selalu membawa pencerahan. Semoga Bangsa ini semakin beradab.
15.Bapak dan Ibuku di Bogor, Pak Muhyidin, Pak Adang dan Bu Pri, terimakasih atas segala nasehatnya.
Hanya karya kecil ini yang bisa penulis persembahkan untuk Bangsaku dalam rangka ikut membangun peradaban ilmu pengetahuan. Penulis hanya berharap semoga karya kecil ini mendapatkan ridho-Nya dan bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan. Akhirnya hanya ucapan terima kasih yang dapat penulis haturkan kepada semua pihak yang mungkin terlupa untuk disebutkan. Sesungguhnya Allah-lah sebaik-baik pembalas segala kebaikan kalian.
Fastabiqul khoirot
Jazakumullahu khairan katsiran.
DAFTAR ISI Hal KATA PENGANTAR... DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... DAFTAR LAMPIRAN... I. PENDAHULUAN... A. LATAR BELAKANG... B. TUJUAN... C. HIPOTESIS... II. TINJAUAN PUSTAKA...
A. DAUN SUJI... B. KLOROFIL...
1. Klorofil dan Turunannya... 2. Pencernaan dan Penyerapan Klorofil... 3. Manfaat dan Aktivitas Biologis Klorofil... C. KOLESTEROL... D. SEPARASI PIGMEN... III. METODOLOGI PENELITIAN...
A. BAHAN DAN ALAT... B. METODE PENELITIAN...
1. Pembuatan Ekstrak Daun Suji... 2. Pembuatan Sampel SCC... 3. Uji Klorofil dan Kolesterol Terdialisis Secara in vitro
C. PROSEDUR
ANALISIS...
1. Analisis Kadar Klorofil... 2. Analisis Total Kolesterol... 3. Analisis Separasi Pigmen... IV. HASIL DAN PEMBAHASAN...
A. PEMBUATAN EKSTRAK DAUN SUJI... B. PEMBUATAN LARUTAN SCC... C. PROFIL EKSTRAK DAUN SUJI DAN SCC SELAMA
PENCERNAAN IN VITRO... 1. Profil Kadar Klorofil Selama Pencernaan in vitro... 2. Profil Kadar Kolesterol Selama Pencernaan in vitro... 3. Persentase Klorofil dan Kolesterol Terdialisis Secara in
vitro... D. SEPARASI PIGMEN... V. KESIMPULAN DAN SARAN... A. KESIMPULAN... B. SARAN... DAFTAR PUSTAKA... LAMPIRAN...
30 32
33 35 41
SKRIPSI
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
Oleh :
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
2005
DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
Pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Oleh:
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
2005
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
STUDI KEMAMPUAN PENGIKATAN KOLESTEROL OLEH EKSTRAK DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown) DALAM SIMULASI
SISTEM PENCERNAAN IN VITRO
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
Pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Oleh:
KURNIAWATI WULAN SARI F24101008
Dilahirkan pada tanggal 4 Juli 1983 di Kudus
Tanggal lulus : 27 Oktober 2005
Menyetujui, Bogor, November 2005
Ir. Endang Prangdimurti, M.Si. Dosen Pembimbing
Mengetahui,
Kurniawati Wulan Sari. F24101008. Studi Kemampuan Pengikatan Kolesterol oleh Ekstrak Daun Suji (Pleomele angustifolia N. E. Brown) dalam Simulasi Sistem Pencernaan In vitro. Di bawah bimbingan Ir. Endang Prangdimurti, M.Si.
RINGKASAN
Penyakit degeneratif merupakan penyakit yang dapat disebabkan karena pola konsumsi yang salah. Tingginya konsumsi lemak dan kolesterol akan berakibat tingginya kolesterol darah dan memicu terjadinya aterosklerosis. Upaya penanggulangan penyakit degeneratif ini dapat dilakukan dengan mengkonsumsi senyawa-senyawa bioaktif yang memiliki kemampuan hipokolesterolemik. Meskipun masih sangat terbatas dan belum jelas mekanismenya, namun beberapa penelitian mengindikasikan adanya kemampuan hipokolesterol dari klorofil. Studi atau hasil penelitian mengenai efek penurunan kolesterol oleh klorofil secara in vivo telah dikemukakan oleh Vlad et al (1995). Penelitiannya menunjukkan bahwa pemberian cuprofilin selama 90 hari secara nyata menurunkan kadar kolesterol, trigliserida dan lipida serum darah tikus yang sebelumnya memperlihatkan indikasi terkena aterosklerosis. Penelitian Alsuhendra (2002) menunjukkan bahwa konsumsi zinkofilin atau seng-feofitin dari daun singkong dengan dosis sebanyak 100.2 mg/hari/ekor bersama-sama dengan kolesterol 0.1% secara nyata menurunkan kadar total kolesterol dan LDL serum kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi. Diduga bahwa klorofil atau derivatnya dapat berikatan dengan kolesterol maupun garam empedu dalam saluran pencernaan.
Oleh karena itu perlu penelitian untuk membuktikan dugaan adanya pengikatan antara kolesterol dengan klorofil. Dalam penelitian ini akan pelajari mengenai kemampuan pengikatan kolesterol oleh ekstrak daun suji sebagai sumber klorofil. Dari penelitian ini diharapkan diperoleh data tentang kemampuan pengikatan kolesterol oleh ekstrak daun suji sehingga dapat dimanfaatkan sebagai pencegahan aterosklerosis. Sebagai pembanding digunakan SCC (Sodium Copper Chlorophyllin) yang merupakan klorofil larut air yang telah diteliti memiliki aktivitas biologis.
Dalam penelitian ini ekstrak suji sebesar 0.1 g/ ml dan SCC 2.35 mM dilalukan dalam simulasi sistem pencernaan secara in vitro pada dua taraf konsentrasi kolesterol murni ( 0 % dan 2 %). Parameter yang diukur yaitu kadar klorofil, kadar kolesterol dan separasi pigmen menggunakan TLC (Thin Layer Chromatography) masing-masing pada fraksi awal, fraksi gastric, fraksi digesta dan fraksi dialisat. Banyaknya klorofil dan kolesterol yang tidak terserap ke dalam kantung dialisis menunjukkan dugaan adanya kapasitas pengikatan kolesterol oleh klorofil.
daun suji sebesar 5.76 %. Adapun persentase klorofil terdialisis dari SCC dengan perlakuan tanpa kolesterol lebih tinggi dibanding suji yaitu rata-rata sekitar 19.78% (p < 0.05).
Pada perlakuan dengan penambahan kolesterol, nilai klorofil yang terdialisis kedua sampel yaitu ekstrak daun suji dan SCC menurun bila dibandingkan perlakuan tanpa kolesterol. Namun, secara statistik pada ekstrak daun suji tidak terdapat perbedaan yang signifikan (p>0.05) sedangkan pada SCC signifikan (p<0.05). Nilai klorofil yang terdialisis dari ekstrak daun suji dengan penambahan kolesterol lebih rendah bila dibandingkan dengan klorofil yang terdialisis dari SCC (p>0.05).
Hasil analisis kadar kolesterol diperoleh keterangan bahwa baik sampel ekstrak daun suji maupun sampel larutan SCC keduanya menunjukkan adanya fitosterol pada fase awal. Hal ini karena reagen kit kolesterol dapat mengukur fitosterol juga. Pengukuran kadar kolesterol dialisat dari ekstrak daun suji yang ditambah kolesterol menunjukkan tidak ada kolesterol yang terukur (0%). Sedangkan untuk SCC yang ditambah kolesterol, banyaknya kolesterol terdialisis ke dalam kantung dialisis rata-rata sebesar 3.92%. Sebagai pembanding, kolesterol terdialisis pada sampel pelarut suji (0.75 % Tween 80 dalam Na sitrat) sangat besar dibandingkan ekstrak suji ataupun SCC yaitu 112 %. Hal ini adanya penambahan kolesterol dari ekstrak bile. Diduga bahwa terdapat komponen dalam ekstrak daun suji maupun SCC yang mampu menahan penyerapan kolesterol.
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di salah satu kota kecil di Jawa Tengah yaitu Kudus tepatnya pada tanggal 4 Juli 1983. Penulis merupakan anak pertama dari tiga bersaudara pasangan Ibunda Sularni dan Ayahanda Sukis Djasimin, BSc. Penulis mengawali karir akademiknya di TK Pertiwi Kedungdowo pada tahun 1988-1989. Kemudian dilanjutkan dengan menempuh pendidikan dasar di SDN Kedungdowo I Kaliwungu Kudus pada tahun 1989-1995. Jenjang pendidikan menengah penulis tempuh di SMP Muhammadiyah I Kudus hingga tahun 1998. Pada tahun tersebut juga, penulis kemudian melanjutkan pendidikan ke SMU Muhammadiyah I Kudus.
Pada tahun 2001 penulis mendapatkan kesempatan belajar sebagai mahasiswa di Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor yang diterima melalui jalur USMI. Selama menempuh pendidikan di IPB, penulis aktif dalam berbagai kegiatan kemahasiswaan baik intra maupun ekstra kampus. Diantaranya di DPM TPB IPB (2001-2002), DPM Fateta IPB (2002-2003), Badan Pengawas HIMITEPA (2002-2003) dan anggota UKM Tapak Suci IPB. Hingga saat ini penulis masih aktif di Pimpinan Cabang Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah (IMM) Kab./Kota Bogor (2004-2006) sebagai ketua bidang kader, Komunitas Pendidikan Pemberdayaan Masyarakat Mustadh’afiin “PERAMU” (2004-sekarang) dan juga masih tercatat sebagai staf pengajar Kimia di SMA Muhammadiyah Ciampea Bogor.
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji hanya untuk Allah SWT yang telah memberikan kekuatan Islam, iman dan ukhuwah sehingga terselesaikannya karya kecil ini. Shalawat dan salam kepada nabi Muhammad SAW sebagai panutan dan ikutan terbaik bagi umat yang membawa cahaya Islam. Selama penelitian sampai dengan tersusunnya skripsi ini, penulis banyak mendapatkan bantuan baik moral maupun material dari berbagai pihak. Pada kesempatan ini dengan hati yang tulus dan ikhlas penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada:
1. Ibu dan Bapak atas segala cinta kasih dan do’a yang tak pernah putus diberikan, semangat dan pengertian serta perjuangan yang telah dilakukan. 2. Ibu Ir. Endang Prangdimurti, MSi selaku dosen pembimbing yang telah
meluangkan waktu dan pikiran dalam membimbing dan mengarahkan hingga terselesaikannya skripsi ini.
3. Ir. Sutrisno Koswara, Msi dan Antung Sima, STP selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan evaluasi.
4. Laboran Departemen ITP (Pak Wahid, Pak Sobirin, Pak Gatot, Bu Rubiah, Teh Ida, Pak Yahya, Pak Rozak, Pak Sidik dan mbak Darsi) atas segala ilmu dan bantuannya demi kelancaran penelitian ini.
5. Keluarga tercinta di Kudus dan Surabaya, dik Ulil dan dik Abid, Mbak Yanti, Mas Ayik, Mas Ed dan Mas Andik serta mbah putri yang selalu memberikan semangat dan dukungan.
6. Teman seperjuangan Immawan/Immawati Rini, Nunik, Tito, Fikri dan Torik atas indahnya ukhuwah kebersamaan selama ini (we are a great team). 7. Kakak-kakakku dalam “Keluarga kecil” di Bogor yang penuh kekeluargaan
dan selalu mengayomi, Mas Topik, Mas supreh, Mbak rifa, Mbak kus, Mbak Mutia dan Mbak Susi atas semua pengertian dan bimbingannya.
menggapai ridho-Nya di TPG. Tidak lupa juga, Kakak dan adik kelas TPG 36, 37, 39 dan 40.
9. Adik-adikku di IMM Ayu, Iin, Ambar, Citta, Didik, Icha, Vebi, Muad, Udin dan Budi (You’re all the inspiration). Selamat berfastabiqul khoirot.
10.Keluarga besarku di KKB (Keluarga Kudus-Bogor) khususnya Dasa, Avi, Zule, Itok, Heni dan Udin serta adik-adik KKB’ers.
11.Kawan-kawan di PERAMU yang telah menunjukkan realitas sosial.
12.Palma family dan Sausan atas kebersamaan, keceriaan dan ‘gangguan’ selama ini.
13.Saudara jauhku, Fia, Ita, Leli, Evi, Mbak Lela, Adnan dan Rudi. Terimakasih atas doanya.
14.Ustadz Prapto dan kawan-kawan PIR XXI dan XXII serta Kawan-kawan di JIMM-PTN, milis yang selalu membawa pencerahan. Semoga Bangsa ini semakin beradab.
15.Bapak dan Ibuku di Bogor, Pak Muhyidin, Pak Adang dan Bu Pri, terimakasih atas segala nasehatnya.
Hanya karya kecil ini yang bisa penulis persembahkan untuk Bangsaku dalam rangka ikut membangun peradaban ilmu pengetahuan. Penulis hanya berharap semoga karya kecil ini mendapatkan ridho-Nya dan bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan. Akhirnya hanya ucapan terima kasih yang dapat penulis haturkan kepada semua pihak yang mungkin terlupa untuk disebutkan. Sesungguhnya Allah-lah sebaik-baik pembalas segala kebaikan kalian.
Fastabiqul khoirot
Jazakumullahu khairan katsiran.
DAFTAR ISI Hal KATA PENGANTAR... DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... DAFTAR LAMPIRAN... I. PENDAHULUAN... A. LATAR BELAKANG... B. TUJUAN... C. HIPOTESIS... II. TINJAUAN PUSTAKA...
A. DAUN SUJI... B. KLOROFIL...
1. Klorofil dan Turunannya... 2. Pencernaan dan Penyerapan Klorofil... 3. Manfaat dan Aktivitas Biologis Klorofil... C. KOLESTEROL... D. SEPARASI PIGMEN... III. METODOLOGI PENELITIAN...
A. BAHAN DAN ALAT... B. METODE PENELITIAN...
1. Pembuatan Ekstrak Daun Suji... 2. Pembuatan Sampel SCC... 3. Uji Klorofil dan Kolesterol Terdialisis Secara in vitro
C. PROSEDUR
ANALISIS...
1. Analisis Kadar Klorofil... 2. Analisis Total Kolesterol... 3. Analisis Separasi Pigmen... IV. HASIL DAN PEMBAHASAN...
A. PEMBUATAN EKSTRAK DAUN SUJI... B. PEMBUATAN LARUTAN SCC... C. PROFIL EKSTRAK DAUN SUJI DAN SCC SELAMA
PENCERNAAN IN VITRO... 1. Profil Kadar Klorofil Selama Pencernaan in vitro... 2. Profil Kadar Kolesterol Selama Pencernaan in vitro... 3. Persentase Klorofil dan Kolesterol Terdialisis Secara in
vitro... D. SEPARASI PIGMEN... V. KESIMPULAN DAN SARAN... A. KESIMPULAN... B. SARAN... DAFTAR PUSTAKA... LAMPIRAN...
30 32
33 35 41
DAFTAR TABEL
Hal Tabel 1.
Tabel 2. Tabel 3.
Tabel 4.
Tabel 5. Tabel 6.
Kandungan klorofil beberapa jenis daun... Jenis-jenis senyawa turunan klorofil... Standar nilai Rf dan posisi relatif tiap-tiap komponen pada
plate TLC selulosa... Persentase penurunan kadar klororil terhadap fraksi awal selama pencernaan in vitro ... Rata-rata persentase klorofil terdialisis... Persentase kolesterol terdialisis...
8 9
22
DAFTAR GAMBAR
Hal Gambar 1.
Gambar 2. Gambar 3. Gambar 4. Gambar 5. Gambar 6. Gambar 7. Gambar 8. Gambar 9. Gambar 10. Gambar 11. Gambar 12. Gambar 13. Gambar 14. Gambar 15. Gambar 16.
Tanaman suji jenis minor... Daun tanaman suji jenis minor... Rumus bangun klorofil a dan b... Perubahan klorofil menjadi beberapa senyawa turunannya.. Reaksi feofitinisasi...... Pengaruh pH terhadap kadar klorofil... Struktur kimia kolesterol... Skema pembuatan ekstrak daun suji... Skema pencernaan in vitro ... Kurva standar SCC... Histogram kandungan klorofil ekstrak daun suji dan SCC tanpa perlakuan penambahan kolesterol selama pencernaan
in vitro ... Histogram kandungan klorofil ekstrak daun suji dan SCC dengan perlakuan penambahan kolesterol selama
pencernaan in vitro... Ekstrak daun suji selama pencernaan in vitro ... Larutan SCC selama pencernaan in vitro ... Histogram kadar kolesterol ekstrak daun suji dan SCC tanpa perlakuan penambahan kolesterol selama pencernaan
in vitro ... Histogram kadar kolesterol ekstrak daun suji dan SCC dengan perlakuan penambahan kolesterol selama
pencernaan in vitro ...
DAFTAR LAMPIRAN
Hal Lampiran 1.
Lampiran 2.
Lampiran 3. Lampiran 4. Lampiran 5. Lampiran 6. Lampiran 7.
Contoh cara perhitungan kadar klorofil………... Cara perhitungan persentase penurunan kadar klorofil terhadap fraksi awal………... …………... Contoh cara perhitungan persentase klorofil terdialisis... Contoh cara perhitungan persentase kolesterol terdialisis.. Uji statistik data klorofil terdialisis... Nilai Rf separasi pigmen... Separasi pigmen ekstrak daun suji selama pencernaan in vitro dengan TLC...
57 58 59 60 61 62 63
I.PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Penyakit degeneratif merupakan penyakit yang dapat disebabkan karena pola konsumsi yang salah. Saat ini tingkat kejadian penyakit degeneratif semakin tinggi. Salah satu penyakit degeneratif yang ditakuti orang adalah PJK (penyakit jantung koroner). Data pada tahun 1999 menunjukkan prevalensi penyakit jantung koroner tercatat sedikitnya 55,9 juta kematian di seluruh dunia disebabkan oleh penyakit jantung atau setara dengan 30,3% dari total kematian di dunia. Di Indonesia sendiri, angka kematian dan kesakitan karena penyakit jantung cenderung terus meningkat. Menurut hasil Survey Kesehatan Nasional tahun 2001, tiga dari 1.000 penduduk, menderita penyakit jantung koroner atau 4% dari masyarakat.
Sebagian besar PJK terjadi akibat penurunan suplai oksigen pada otot jantung lantaran penyempitan pembuluh koroner oleh pengerasan di dinding dalam pembuluh koroner yang disebut plak aterosklerosis. Telah diketahui bahwa aterosklerosis disebabkan oleh kadar LDL (lipoprotein berdensitas rendah) serum yang tinggi (>130 mg/dl) dan diperparah oleh kondisi stress oksidatif. Dalam tahapan aterogenesis, makrofag melakukan endositosis terhadap LDL yang teroksidasi dan berubah menjadi sel busa, yang merupakan cikal bakal ateroma. Oleh karena itu, upaya pencegahan aterosklerosis akan lebih efektif apabila upaya penurunan kadar LDL atau kolesterol secara umum dilakukan bersamaan dengan upaya peningkatan kapasitas antioksidan dalam tubuh. Berkaitan dengan hal tersebut, klorofil dalam beberapa studi dilaporkan memiliki kapasitas antioksidan dan hipokolesterol, sehingga diperkirakan suplemen pangan kaya klorofil dapat membantu mengurangi potensi aterosklerosis.
tikus yang sebelumnya telah memperlihatkan indikasi terkena aterosklerosis. Selain itu pada aorta tikus yang diberi cuprofilin juga menampakkan infiltrasi lipid yang berkurang secara nyata. Hal ini menunjukkan bahwa klorofil atau derivatnya berpengaruh terhadap metabolisme kolesterol. Penelitian Alsuhendra (2002) menunjukkan bahwa konsumsi zinkofilin atau seng-feofitin (turunan klorofil yang ion Mg2+ pada inti porfirinnya telah digantikan oleh Zn2+) pada dosis 100,2 mg/hari/ekor bersama-sama dengan kolesterol 0.1% secara nyata menurunkan kadar total kolesterol dan LDL serum kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi.
Studi mengenai mekanisme penurunan kolesterol darah belum jelas, karena itu perlu lebih banyak diteliti. Diduga bahwa klorofil atau derivatnya dapat berikatan dengan kolesterol maupun garam empedu dalam saluran pencernaan. Ma dan Dolphin (1999) menemukan adanya struktur ester klorin-kolesterol di sedimen permukaan danau. Strukturnya memperlihatkan posisi kolesterol menggantikan gugus fitol dalam berikatan dengan klorin. Sedangkan Ferruzi et al (2001) menduga adanya kemampuan pengikatan derivat klorofil dengan garam empedu. Klorofilin adalah derivat klorofil yang telah kehilangan gugus fitol.
Penelitian ini dilakukan untuk melihat kemungkinan terjadinya pengikatan kolesterol oleh klorofil dalam sistem pencernaan yang dilakukan secara in vitro. Sebagai sumber klorofil digunakan daun suji. Daun suji memiliki keunggulan yaitu merupakan produk lokal yang mudah dibudidayakan dan biasa digunakan sebagai pewarna hijau alami untuk pangan sehingga aman dikonsumsi, memiliki flavor yang mild sehingga dapat diaplikasikan dengan konsentrasi tinggi pada produk, serta secara tradisional berkhasiat sebagai obat.
B. TUJUAN
Tujuan dari penelitian ini adalah meneliti secara in vitro kemampuan pengikatan kolesterol oleh ekstrak daun suji dibandingkan dengan SCC (Sodium Copper Chlorophyllin), suatu turunan klorofil.
C. HIPOTESIS
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. DAUN SUJI (Pleomele angustifolia N. E. Brown)
Tanaman Suji (Pleomele angustifolia, N. E. Brown) merupakan tanaman perdu atau pohon kecil tegak dengan tinggi berkisar antara 2 hingga 8 meter. Tanaman suji biasa tumbuh secara liar atau ditanam disekitar halaman dan untuk pagar-pagar. Tanaman suji dapat tumbuh dengan baik pada daerah dengan ketinggian sampai 1200 m diatas permukaan laut. Berdasarkan klasifikasi botaninya, tanaman suji termasuk ke dalam divisi Spermatophyta, sub divisi Angiospermai, kelas Monocotiledoneae, ordo Liliflorae, famili
Liliaceae, genus Pleomele, dan jenis Pleomele angustifolia N. E. Brown (Keng, 1969). Jenis lain dari suji adalah Cordyline Rumphii MIQ dan
Dracaena angustifolia ROXB (Heyne, 1987).
Gambar 1. Tanaman suji jenis minor (Pleomele angustifolia, N.E.Brown)
Gambar 2. Daun tanaman suji jenis minor
Jenis-jenis tanaman suji yang ditemukan di Jawa dikelompokkan menjadi dua forma pokok yaitu forma typica dan forma minor. Ciri dari forma typica yaitu memiliki malai bunga yang besar dan berdaun panjang hingga 60 cm serta lebar. Forma minor memiliki ciri dengan malai bunga yang kecil dan daun-daun yang lebih pendek serta ciut. Forma pertama ditemukan tumbuh liar di Jawa di bawah ketinggian 500 m, terutama di bagian sebelah barat pulau Jawa. Jenis forma minor didapat liar atau menjadi liar di daerah-daerah kediaman, tetapi terutama ditanam orang di daerah dengan ketinggian hingga 1000 m diatas permukaan laut, ditanam dipagar-pagar dan di sekitar perigi-perigi. Di Sulawesi telah ditemukan forma-forma alihan dengan malai-malai bunga yang besar dan daun-daun kecil (Heyne, 1987). Tanaman suji dapat diperbanyak dengan stek atau bisa juga dengan biji.
Di setiap daerah di Indonesia, tanaman suji mempunyai nama daerah yang berbeda antara lain Jejuang bukit atau Pendusta utan (Ambon); Ngase kolotide (Ternate); Jingkang, Hanjuwang merak atau Suji (Jawa Barat); Semar (Jawa Tengah dan Jawa Timur); Kopoi (Ponos), Popopok im bolai, Rereindeng im bolai, Tawaang im bolai (Minahasa) (Heyne, 1987)
Selain sebagai pewarna dan penyubur rambut, tanaman suji juga dapat digunakan di bidang pengobatan. Air rebusan akar tanaman suji dapat digunakan sebagai campuran obat sakit gonorrhoe. Di Ambon, daun tanaman suji dimanfaatkan untuk mengobati penyakit beri-beri dengan cara menggosokkan kuat-kuat daun yang telah dipanaskan pada anggota tubuh penderita. (Heyne, 1987).
B. KLOROFIL
1. Klorofil dan Turunannya
Klorofil (chlorophyll) adalah zat pembawa warna hijau pada tumbuh-tumbuhan. Klorofil berasal dari bahasa Yunani: khloros (hijau kekuningan) dan phullon (daun). Nama klorofil pada mulanya diberikan pada pigmen-pigmen hijau yang berperan pada proses fotosintesis tanaman tingkat tinggi, yang kemudian diperluas kepada semua golongan pigmen porfirin fotosintetik (Francis, 1985).
Secara kimiawi, klorofil adalah porfirin yang mengandung cincin dasar tetrapirol, dimana keempat cincin berikatan dengan ion Mg2+. Cincin isosiklik yang kelima berada dekat dengan cincin pirol ketiga. Dalam cincin keempat, subtituen asam propionat diesterifikasi oleh diterpen alkohol fitol (C20H39OH) yang bersifat hidrofobik, dan jika dihilangkan menjadi hidrofilik (Gross, 1991). Molekul klorofil terdiri dari sebuah porfirin sebagai kepala, yang bersifat polar (larut dalam air), yang terbentuk dari cincin tetrapirol dengan sebuah atom Mg dan sebuah fitol sebagai ekor (Hall dan Rao, 1986).
Beberapa jenis klorofil telah diketahui seperti klorofil a, b, c, d, bakterioklorofil a dan b, dan klorobium klorofil (Clydesdale et al., 1976). Beberapa tipe klorofil tersebut distribusinya kecil. Hanya dua yang perlu diperhatikan karena peranannya dalam warna hijau daun pada tanaman yaitu klorofil-a dan b.
Klorofil a adalah suatu struktur tetrapirol melalui ikatan Mg, dengan subtitusi metil pada posisi 1, 3, 5 dan 8, vinil pada posisi 2, etil pada posisi 4, propionat yang diesterifikasi dengan fitil alkohol (fitol) pada posisi 7, keto pada posisi 9 dan karbometoksi pada posisi 10. Rumus molekul klorofil-a adalah C55H72N4O5Mg. Klorofil–b memiliki struktur yang sama dengan klorofil-a, kecuali pada posisi 3 terdapat gugus formil, bukan gugus metil yang dimiliki klorofil a. Rumus empiris dari klorofil-b adalah C55H70N4O6Mg. Rumus struktur dari klorofil ditentukan oleh Fischer (1940) di Jerman dan ditegaskan melalui sintesis molekul yang lengkap oleh Woodward (1960) di Harvard. Struktur molekul klorofil-a dan b dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Rumus bangun klorofil a (R = CH3) dan klorofil b (R = CHO) (Hutchings, 1994).
Kandungan klorofil pada beberapa tanaman sekitar 1% basis kering. Pada semua tanaman hijau, sebagian besar klorofil berada dalam dua bentuk yaitu klorofil-a dan klorofil-b dengan perbandingan 3:1 (Robinson, 1991). Tabel 1. memperlihatkan kandungan klorofil dari beberapa jenis daun. Klorofil-a terdapat sekitar 75% dari pigmen hijau tanaman. Dengan analisis yang sama, Hakim (2005) menyebutkan bahwa total klorofil daun suji sebesar 3773 µg/g bahan dengan rasio klorofil a dan klorofil b sebesar 2:1.
Tabel 1. Kandungan klorofil beberapa jenis daun (Alsuhendra, 2004) Kandungan klorofil (µg/g bahan)
Jenis
a b Total Rasio a:b
Daun singkong 2853.2 1114.3 3967.5 2.6:1
Daun katuk 1688.1 513.9 2202.0 3.3:1
Daun poh-pohan 1495.4 587.1 2013.5 2.9:1
Daun kangkung 1493.6 519.9 2013.5 2.9:1
Daun bayam 1205.0 255.9 1460.9 4.7:1
Daun kemangi 842.9 479.8 1322.7 1.8:1
Caisin 815.0 393.1 1208.1 2.1:1
Selada 482.7 148.6 631.3 3.2:1
Alang-alang 1831.2 495.1 2326.3 3.7:1
Rumput gajah 2123.7 549.5 2673.2 3.9:1
Tabel 2. Jenis-jenis senyawa turunan klorofil (Robinson, 1991)
Jenis Turunan
Keterangan
Klorin Dihidroporfirin
Rodin Dihidroporfirin dengan karbonil berdampingan dengan cincin pirol
Forbin Dihidroporfirin dengan cincin karboksilik tambahan Forbida Ester dari forbin
Feoforbida Ester metil dari forbin Fitin Ester fitil dari forbin
Feofitin Ester metil dan fitil dari forbin
Filin Turunan magnesium dari salah satu senyawa diatas Klorofilin Turunan magnesium dari fitin
Klorofilida Turunan magnesium dari feoforbida
Perubahan klorofil menjadi senyawa derivatnya terjadi akibat ketidakstabilan senyawa klorofil sehingga terdegradasi. Menurut Eskin (1979) secara umum senyawa klorofil dapat terdegradasi secara kimia menjadi turunannya melalui salah satu atau lebih dari proses-proses berikut yaitu reaksi feofitinisasi, reaksi pembentukan klorofilid dan reaksi oksidasi. Hubungan dari reaksi-reaksi perubahan klorofil menjadi senyawa turunannya digambarkan dengan skema pada Gambar 4.
klorofilase
Klorofil + H2O Klorofilid + Fitol
Klorofil - fitol Klorofilid
-Mg2+ -Mg2+
- fitol
Feofitin Feoforbid
-CH2CH3 -CH2CH3
Pirofeofitin - fitol Pirofeoforbid
[image:32.612.201.445.514.656.2]Reaksi feofitinisasi adalah reaksi pembentukan feofitin yang berwarna hijau kecoklatan. Reaksi feofitinisasi disebut juga dengan demetalasi atau reaksi pelepasan ion Mg. Reaksi ini terjadi karena ion Mg di pusat molekul klorofil terlepas dan diganti oleh ion H. Denaturasi protein pelindung dalam kloroplas mengakibatkan ion magnesium mudah terlepas dan diganti ion hidrogen membentuk feofitin. Ion magnesium dari klorofil akan semakin banyak lepas dengan proses pemanasan serta pengaruh keasaman. Menurut Gross (1991), feofitin adalah derivat klorofil bebas magnesium. Feofitin-a dan b mudah didapat dari klorofil dengan perlakuan asam, sehingga melepaskan magnesium. Reaksi terjadi 1 sampai 2 menit dan konsentrasi HCl yang digunakan 13 % . Mac Kinney dan Joslyn (1938) menemukan bahwa kecepatan pembentukan feofitin merupakan reaksi ordo pertama terhadap konsentrasi asam.
Reaksi feofitinisasi yang biasa terjadi dapat dilihat pada proses perebusan sayuran yang mengandung klorofil. Klorofil terdapat dalam bentuk terikat secara kompleks dengan molekul protein. Pada proses perebusan tersebut, protein dari senyawa kompleks tersebut akan mengalami denaturasi, sehingga klorofil akan dibebaskan. Klorofil yang bebas ini sangat tidak stabil, dan ion magnesium yang terdapat didalamnya dapat dengan mudah digantikan oleh ion hidrogen. Akibatnya warna sayuran yang semula hijau berubah menjadi kecoklatan karena terbentuknya feofitin (Muchtadi, 1992). Disamping itu, bila pada proses perebusan tersebut wadahnya tertutup, maka asam-asam volatil dari sayuran yang dikeluarkan pada awal perebusan tidak dapat keluar dan akhirnya bereaksi dengan klorofil. Hal inilah yang mengakibatkan terjadinya perubahan klorofil menjadi feofitin.
Gambar 5. Reaksi feofitinasi (Kyzlink, 1990)
Beberapa peneliti melaporkan bahwa klorofil-a mengalami perubahan menjadi feofitin-a sebesar 5-10 kali lebih cepat dibandingkan dengan kecepatan perubahan klorofil-b menjadi feofitin-b. Mac Kinney dan Joslyn (1940) melaporkan bahwa dalam pelarut aseton, pelepasan magnesium dari klorofil-a lebih cepat sembilan kali lipat dibandingkan dengan klorofil-b.
Reaksi pembentukan klorofilid dapat terjadi melalui hidrolisis klorofil menjadi klorofilid dan fitol baik dalam kondisi asam maupun basa. Oleh karena itu, reaksi pembentukan klorofilid disebut juga dengan reaksi pelepasan fitol. Pembentukan klorofilid dikatalisis secara enzimatik oleh adanya enzim klorofilase. Enzim klorofilase biasa ditemukan dalam jaringan tanaman hijau. Enzim klorofilase dapat menghidrolisis gugus fitol dari klorofil sehingga terlepas membentuk klorofilid. Penghilangan gugus fitol dari klorofil akan menghasilkan molekul klorofilid yang bersifat polar dan larut dalam air. Klorofilid juga dapat kehilangan ion magnesium yang diganti dengan ion hidrogen membentuk feoforbid (Clydesdale et al., 1976).
Enzim klorofilase (klorofil klorofilid hidrolase, E.C.3.1.1.14) termasuk jenis enzim esterase. Enzim ini memiliki sifat dapat mengkatalisis hidrolisis ikatan ester antara residu asam 7-propionat pada cincin IV makrosiklik dengan fitol, baik pada klorofil maupun feofitin.
yang secara fisik terikat kuat pada lipoprotein lamela. Menurut laporan Mac Kinney dan Weast (1940) bahwa aktifitas maksimum dari enzim klorofilase adalah 750C. Jones et al. (1963) melaporkan bahwa blansir pada suhu 1000C selama 4 detik secara nyata menginaktivasi enzim klorofilase. Hal ini ditandai dengan sedikitnya atau tidak ada perubahan ke arah pembentukan klorofilid atau feoforbid.
Salah satu upaya untuk mempertahankan warna hijau dari jaringan tanaman antara lain dilakukan dengan cara mengubah klorofil menjadi klorofilid. Clydesdale et al. (1976) menggunakan digitonin 0.1% pada pure bayam untuk membebaskan klorofil dan klorofilase dari ikatannya dengan lipoprotein dalam kloroplas. Surfaktan atau detergen non-ionik ini mampu melindungi warna hijau seperti halnya penambahan MgCO3 0.35% untuk membuat suasana alkali.
Enzim klorofilase hanya mampu menghidrolisis klorofil 40% dalam kompleks klorofil-protein bayam. Namun, dengan adanya detergen hampir semua klorofil dapat dihidrolisis (Gross, 1991). Jika reaksi hidrolisa gugus fitol oleh enzim klorofilase terjadi dalam pelarut-pelarut tertentu seperti etanol atau metanol, maka akan terjadi penukaran gugus fitol oleh pelarut, misalnya membentuk etil klorofilid (Aronof, 1958).
perebusan dedaunan. Proses otoksidasi klorofil dapat dihambat dengan karotenoid.
Reaksi oksidasi dapat dibagi menjadi reaksi oksidasi non enzimatik dan reaksi oksidasi enzimatik. Reaksi oksidasi non enzimatik terjadi karena pemanasan dan selama penyimpanan. Menurut Eskin (1979), kecepatan degradasi oksidatif meningkat sejalan dengan lamanya pertambahan waktu blansir dan penyimpanan. Pengaruh blansir tampak dalam dua hal. Pertama, blansir menginaktivasi enzim-enzim yang membantu degradasi klorofil sehingga klorofil lebih stabil selama penyimpanan. Kedua, blansir dalam waktu yang lama, meskipun menginaktivasi enzim, tetapi merangsang reaksi oksidasi yang mengakibatkan kehilangan klorofil. Waktu blansir yang paling optimum adalah 45 detik sampai satu menit, dimana aktivitas enzim dan perangsang reaksi oksidasi dihambat.
Reaksi oksidasi enzimatik terjadi dengan adanya enzim lipoksigenase (linoleat oksidoreduktase) yang terdapat di sebagian besar sayuran dan buah-buahan. Enzim lipoksigenase diidentifikasi sebagai enzim yang memberikan pengaruh pemucatan pada klorofil a dan klorofil b dengan kehadiran lemak dan oksigen. Enzim ini mengkatalisa reaksi oksidasi klorofil jika diinkubasi dengan asam linoleat atau linolenat. Klorofil sangat peka terhadap cahaya. Sinar dalam ruangan lemah, jika mengenai klorofil kurang dari satu detik dapat mengakibatkan reaksi protopigmen (Holden, 1976) yang dikutip oleh Oktaviani (1987). Pengerjaan klorofil dan penyimpanan zat warna harus dilakukan dalam ruang gelap atau ruang redup dengan cahaya yang aman dan sejuk.
Klorofil-a dan feofitin-a larut dalam alkohol, eter dan aseton. Dalam keadan murni sedikit larut dalam petroleum eter dan tidak larut dalam air. Klorofilid dan feoforbid–a tidak larut dalam pelarut organik tetapi larut dalam air (Clydesdale et al., 1976)
memberikan ligan tambahan. Pemanasan dapat mengakibatkan denaturasi protein sehingga klorofil menjadi tidak terlindung lagi yang dikutip oleh Oktaviani (1987). Selama pemanasan, asam-asam organik dalam jaringan dibebaskan yang mengakibatkan pembentukan feofitin. Pemanasan juga memberi pengaruh terhadap aktivitas enzim klorofilase dan enzim lipoksigenase. Pengaruh blansir pada sayuran hijau terhadap pembentukan klorofilid dan feoforbid menunjukkan bahwa blansir pada suhu 82.20C meningkatkan aktivitas enzim klorofilase, tetapi blansir pada suhu 1000C membuat klorofilase inaktif.
2. Pencernaan dan Penyerapan Klorofil
Hasil penelitian Ferruzi et al (2001) menyatakan bahwa studi mengenai absorbsi dan metabolisme klorofil belum banyak dilakukan. Sifat klorofil yang mudah terdegradasi oleh asam, panas, cahaya dan oksigen menjadi salah satu kendala dalam studi-studi absorpsi klorofil. Dikatakannya bahwa hanya dalam waktu ½ jam pada fase lambung (pH 2) lebih dari 95% klorofil-a dan klorofil-b berubah menjadi bentuk feofitinnya. Selanjutnya feofitin dimetabolisme oleh mikroflora usus antara lain menjadi feoforbid.
Ek s tr ak Bayam s e gar
klorof il a , 77% klorof il
b, 23%
p H 2
f e of itin b, 30%
[image:38.612.202.503.77.337.2]f e of itin a, 70% pH 4 klorofil a , 72% klorofil b, 22% feo a, 5% feo b, 1% pH 6 klorofil a , 77% klorofil b, 23%
Gambar 6. Pengaruh pH terhadap kandungan klorofil (Ferruzi et al, 2001)
Bukti bahwa klorofil dapat diserap oleh sel usus dikemukakan oleh Ferruzi et al (2001). Dalam penelitiannya secara in vitro, mereka menggunakan pure bayam yang dicerna menggunakan enzim-enzim pencernaan dan diinkubasi bersama sel Caco-2 sebagai model sel enterosit manusia untuk melihat penyerapannya. Klorofil alami terdegradasi selama pencernaan. Derivat-derivat klorofil terakumulasi dalam sel sebanyak 5-10%.
SCC merupakan campuran berwarna hijau terang yang berasal dari klorofil alami yang telah digunakan sebagai suplemen pangan dan pewarna. SCC komersial dibuat dari ekstrak klorofil menggunakan NaOH-metanol dan diikuti dengan penggantian atom Mg oleh logam Cu.
Didasari oleh penelitian Egner et al. tersebut, maka Ferruzi et al
(2002a) melanjutkan studi absorbsi klorofil menggunakan SCC. SCC komersial yang digunakan terdiri dari komponen utama Cu(II)klorin e4 (81%), Cu(II)klorin e6 (10%), Cu(II)rhodin g7 (3%) dan Cu(II)feoforbid (1%). Untuk melihat tingkat ketersediaan SCC digunakan sel Caco-2. SCC diinkubasi dalam kultur sel dengan konsentrasi 0.5-60 ppm (atas dasar pertimbangan konsumsi SCC: 1,0-100 mg SCC dalam 2 liter cairan usus dan lambung) pada 370C selama 4 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 45-60% SCC terserap dalam sel. Rasio Cu(II)klorin e4 terhadap Cu(II)klorin e6 yang terserap intrasel sama dengan rasionya didalam media uji. Dengan kata lain penyerapan derivat-derivat klorofil berlangsung proporsional dengan konsentrasi didalam media. Transpor porfirin ke dalam sel enterosit diduga dimediasi oleh suatu reseptor.
Selain itu dari studi tersebut diketahui bahwa Cu(II)klorin e4 merupakan komponen utama dalam fraksi digesta. Cu(II)klorin e6 memiliki kestabilan yang rendah selama pencernaan, namun dapat ditingkatkan kestabilannya apabila berada dalam matriks saus apel. Hal ini diduga karena adanya antioksidan lain dan matriks apel yang melindungi keberadaannya.
3. Manfaat dan Aktivitas Biologis Klorofil
Dari berbagai studi yang telah dilakukan, aktivitas biologis klorofil umumnya diperlihatkan oleh klorofilin yaitu derivat klorofil yang telah kehilangan gugus fitol dan metil sehingga memiliki kelarutan yang tinggi dalam air. Klorofilin komersial yang banyak digunakan dalam berbagai studi yang telah dilakukan adalah SCC yang sebagian besar berisi senyawa klorin. Baik klorin maupun rhodin adalah bentuk derivat klorofil yang teroksidasi yang ditandai dengan putusnya cincin isosiklik (cincin kelima). Hal ini mengindikasikan dugaan bahwa oksidasi klorofil belum tentu menurunkan aktivitas biologis klorofil.
Telah dilaporkan bahwa klorofil dan derivatnya memiliki kemampuan antimutagenik, antikarsinogenik, antioksidan dan hipokolesterolemik. Dalam kaitannya dengan pencegahan aterosklerosis diperlukan data-data mengenai kapasitas antioksidan dan hipokolesterolemik.
Kemampuan hipokolesterolemik dikemukakan oleh Vlad et al
(1995) yaitu pemberian Cuprofilin (kompleks Cu (II)-klorofil) selama 90 hari yang secara nyata dapat menurunkan kadar kolesterol, trigliserida dan lipida serum darah tikus yang sebelumnya telah memperlihatkan indikasi terkena aterosklerosis. Selain itu pada aorta tikus yang diberi cuprofilin juga menampakkan infiltrasi lipid yang berkurang secara nyata. Hal ini menunjukkan bahwa klorofil atau derivatnya berpengaruh terhadap metabolisme kolesterol. Penelitian Alsuhendra (2002) menunjukkan bahwa konsumsi zinkofilin atau seng-feofitin (turunan klorofil yang ion Mg2+ pada inti porfirinnya telah digantikan oleh Zn2+) pada dosis 100,2 mg/hari/ekor bersama-sama dengan kolesterol 0.1% secara nyata menurunkan kadar total kolesterol dan LDL serum kelinci New Zealand White jantan setelah 4 minggu diintervensi. Akibat lebih lanjut adalah pembentukan plak aterosklerosis aorta kelinci dapat dicegah, sehingga luas plak yang terbentuk relatif kecil serta frekuensi kejadian relatif rendah.
ditemukannya beberapa ester klorin-kolesterol di sedimen permukaan danau. Strukturnya memperlihatkan posisi kolesterol menggantikan gugus fitol dalam berikatan dengan klorin.
C. KOLESTEROL
Kolesterol merupakan komponen essensial dari membran sel dan merupakan komponen utama sel-sel otak dan jaringan syaraf (Krause dan Mahan, 1984). Sedangkan menurut Mayes et al., (1987) kolesterol adalah produk khas dari metabolisme hewan dan oleh karenanya terdapat dalam makanan yang berasal dari hewan seperti daging, hati, otak dan kuning telur. Sebagian besar kolesterol berasal dari sintesis (kira-kira 1 g/hari) sedangkan sekitar 0.3 g/hari dilengkapi dari konsumsi makanan. Menurut Sitepoe (1993) bila ditinjau dari sudut kimiawi, kolesterol diklasifikasikan ke dalam golongan lipid (lemak), berkomponen alkohol steroid, sebagian besar berfungsi sebagai sumber kalori serta memberikan nilai tambah terhadap cita rasa makanan.
Kolesterol diperlukan oleh tubuh antara lain untuk (a) sintesis asam/garam empedu yang diperlukan untuk proses pencernaan lemak atau minyak, (b) sintesis vitamin D dan (c) sebagai komponen membran sel (Muchtadi, 1996). Page (1989) menyatakan bahwa kolesterol mempunyai fungsi yang sangat penting dalam tubuh karena tidak hanya merupakan pembentuk membran sel, tetapi juga merupakan pelopor biosintesa umum lain, termasuk hormon steroid dan asam empedu. Selanjutnya Muchtadi et al
(1993) menambahkan bahwa kolesterol juga sebagai prekursor dari pengeluaran asam empedu yang disintesa dalam hati dan berfungsi untuk menyerap trigliserida (triasilgliserol) dan vitamin larut lemak dari makanan, serta sebagai prekursor dari hormon steroid, estrogen dan testosteron.
semua sel yang mengandung nukleus, tetapi yang terbesar terjadi pada hati, usus, korteks, adrenal dan jaringan reproduktif (Martin et al., 1984). Pada kondisi normal kolesterol disintesa dalam tubuh sejumlah dua kali dari kadar kolesterol di dalam makanan yang dimakan (Sitepoe, 1993). Muchtadi et al
(1993) menyatakan bahwa jumlah laju sintesis kolesterol de novo berhubungan dengan jumlah kolesterol yang berasal dari makanan, jika jumlah kolesterol di dalam diet meningkat maka sintesis kolesterol dalam hati dan usus akan menurun, sebaliknya jika jumlah kolesterol dari makanan berkurang maka sintesis kolesterol di dalam hati dan usus akan meningkat.
Kolesterol yang disintesa diubah menjadi jaringan, hormon dan vitamin yang kemudian beredar ke dalam tubuh melalui darah (Sitepoe, 1993). Namun demikian, kolesterol ada yang kembali ke hati untuk diubah menjadi asam empedu dan garam. Sitepoe (1993) menyatakan bahwa dalam keadaan normal bila terjadi gangguan konsumsi kolesterol, maka akan terjadi mekanisme untuk mempertahankan keseimbangan kolesterol dengan semua faktor sebagai mekanisme pertahanan.
[image:42.612.252.417.531.624.2]Linder (1992) menyatakan bahwa orang dewasa rata-rata membutuhkan 1.1 gram kolesterol untuk kebutuhan tubuhnya Dari jumlah itu, 25-40% atau 200-300 mg secara normal berasal dari makanan dan selebihnya dari endogen (biosintesis) terutama oleh hati kemudian oleh usus kecil. Kadar kolesterol normal dalam plasma pada orang dewasa normal sebesar 3.1 sampai 5.7 mmol/l (120-220 mg/dl). Biasanya kadar kolesterol yang melebihi batas ini dianggap sebagai hiperkolesterolemia.
Gambar 7. Struktur kimia kolesterol
adalah penurunan kalori yang dikonsumsi, penurunan konsumsi lemak jenuh dan lemak tidak jenuh, penurunan konsumsi kolesterol, pengaruh penurunan kadar lipoprotein, pengaruh konsumsi serat pangan larut air (SDF) serta akibat dari beberapa jenis bahan kimia. Beberapa bahan kimia yang diindikasikan memiliki potensi hipokolesterolemik tersebut adalah sitosterol, niasin, vitamin C, vitamin E dan karoten.
Adapun mekanisme penurunan kolesterol oleh serat pangan adalah : kolesterol yang disintesa maupun yang yang berasal dari makanan beredar dalam darah. Sebagian kolesterol akan diubah menjadi asam empedu, masuk ke dalam usus dan berubah menjadi feses, kemudian diekskresikan ke luar. Semakin banyak kolesterol tubuh yang diekskresikan melalui empedu, semakin banyak pula kolesterol dikurangi dari darah. Hal inilah yang menyebabkan penurunan kadar kolesterol di dalam darah. Peranan serat pangan adalah meningkatkan produksi asam empedu dan mengeliminasi ke dalam usus untuk diekskresikan sebagai feses. Pengaruh serat pangan terhadap penurunan kadar kolesterol apabila telah terjadi peningkatan kolesterol di dalam darah. Linder (1992) menyatakan bahwa peningkatan ekskresi asam empedu dalam feses dapat menyebabkan penurunan kadar kolesterol plasma sekitar 10-25%.
Orten dan Neuhaus (1975), menyatakan bahwa defisiensi vitamin C dapat menurunkan produksi asam empedu pada guinea pig. Hal ini akibat dari reaksi hidroksilasi mikrosom derivat-derivat kolesterol pada lintasan untuk sintesis asam empedu yang mungkin melibatkan vitamin C. Pada vitamin E, fungsi yang paling utama adalah sebagai antioksidan dan anti radikal bebas. Bila defisiensi vitamin E terjadi pada hewan dan manusia, maka akan terjadi proses oksidasi lipid, terutama peroksidasi antara lain asam-asam lemak tidak jenuh dan kolesterol dalam membran sel dan ditempat lain dimana ada akumulasi lemak (Linder, 1992).
darah dengan jalan mengikatnya dan diekskresikan melalui alat pencernaan (Sitepoe, 1993).
Menurut Ikeda dan Sugano (1998) bahwa mekanisme fitosterol dalam menurunkan kolesterol darah yaitu dengan menurunkan kelarutan kolesterol dalam fase minyak, dan menggantikan kolesterol di asam empedu. Selanjutnya dibuang ke feses sehingga asam empedu yang terserap sedikit. Oleh karena itu, dibutuhkan kolesterol darah untuk membuat asam empedu yang pada akhirnya kolesterol darah mengalami penurunan. Heinemann et al (1991) menyatakan bahwa sitostanol lebih efisien dalam mengurangi penyerapan kolesterol dari pada sitosterol. Ditambahkan oleh Becker et al (1993) yang menunjukkan bahwa 1.5 g/hari sitostanol meningkatkan ekskresi feses dan asam steroid lebih efisien (88%) dibandingkan dengan sitosterol sebanyak 6 g/hari (45%). Ester sitostanol pada level 2-3 g/hari menunjukkan mengurangi LDL kolesterol sebesar 10-15% (Nguyen, 1999).
D. SEPARASI PIGMEN
Pemisahan dan pemurnian ekstrak dapat dilakukan dengan menggunakan salah satu dari empat teknik kromatografi atau gabungan teknik tersebut. Keempat teknik kromatografi tersebut adalah kromatografi kertas (PC), kromatografi lapis tipis (TLC), kromatografi gas cair (GLC), dan kromatografi cairan kerja tinggi (HPLC) (Harborne, 1987). Pada penelitian klorofil untuk tujuan kualitatif maupun kuantitatif, kromatografi lapis tipis (TLC) dan kromatografi cairan kerja tinggi (HPLC) sering digunakan , terutama HPLC. Hal ini karena efisiensi dan dan selektifnya teknik tersebut. Selain itu juga metode HPLC memungkinkan pemisahan yang cepat dengan resolusi dan sensitivitas yang tinggi. Keuntungan lainnya yaitu dimungkinkan untuk mengumpulkan sampel yang telah di elusi dari kolom kromatografi (Nur dan Adijuwana, 1989).
dan smith (di dalam Mosquera dan Fernandez, 1989). TLC dapat dilakukan pada selulosa MN 300 dalam gelap memakai eter minyak bumi-aseton-n propanol (90:10:0.45) dengan perambatan selama 30 menit (Bacon, 1967). Identifikasi pigmen setelah dilakukan separasi dengan TLC selulosa, yaitu dengan menggunakan standar nilai Rf dan panjang gelombang maksimum seperti yang tertera pada Tabel 3.
Tabel 3. Standar nilai Rf dan posisi relatif tiap-tiap komponen pada plate TLC selulosa
Nilai Rf
No. Komponen Warna
Ia IIb
1. â-karoten orange, kuning 0.98
2. Feofitin a abu-abu 0.90 0.93
3. Changed klorofil a-1 bebas Mg abu-abu
4. Lutein kuning
5. Feofitin b kuning 0.73 0.80
6. Changed klorofil a-2 bebas Mg abu-abu 7. Changed klorofil b-1 bebas Mg kuning
8. Klorofil a’ biru-hijau
9. Violasantin kuning
10. Klorofil a biru-hijau 0.54 0.60
11. Changed klorofil b-2 bebas Mg kuning 12. Changed klorofil a-1 biru-hijau
13. Klorofil b’ kuning-hijau
14. Etil klorofilid a biru-hijau
15. Klorofil b kuning-hijau 0.31 0.35
16. Changed klorofil a-2 biru-hijau
17. Metil klorofilid a biru-hijau
18. Changed klorofil b-1 kuning-hijau
19. Etil klorofilid b kuning-hijau
20. Neosantin kuning
21. Feoforbid a abu-abu 0.18
22. Changed klorofil b-2 kuning-hijau
23. Metil klorofilid b kuning-hijau
24. Feoforbid b kuning, coklat 0.08
25. Klorofilid a biru-hijau 0.03
26. Klorofilid b kuning 0.01
a
Bacon et al (1967) *
b
Stahl (1969) *
III. METODOLOGI PENELITIAN
A. BAHAN DAN ALAT 1. Bahan
Bahan baku yang digunakan untuk pembuatan ekstrak adalah daun suji yang diperoleh dari pekarangan rumah di Bogor. Sebagai pelarut digunakan Tween 80 dan larutan Tri Na-sitrat dihidrat. Untuk pengujian kapasitas pengikatan kolesterol secara in vitro diantaranya dipakai enzim pepsin (P-7000) yang berasal dari mukosa lambung babi dengan aktivitas enzim 2200 unit/mg protein; enzim pankreatin (P-1750) yang berasal dari pankreas babi, dengan aktivitas ekuivalen dengan 4X U.S.P; ekstrak bile (B-8631) yang berasal dari babi dan lipase yang kesemuanya didapat dari Sigma Chemical Company, USA. Bahan lain yang digunakan juga adalah kolesterol (Sigma), kit kolesterol, SCC (Sodium Copper Chlorophyllin), CaCO3, aseton, NaHCO3, aquades, air bebas ion, HCl, plate TLC selulosa (Merck), petroleum eter, 1-propanol dan diethyl eter serta bahan-bahan kimia lainnya yang diperoleh dari stock room Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
2. Alat
B. METODE PENELITIAN
Penelitian diawali dengan pembuatan ekstrak daun suji dan persiapan sampel lainnya. Dilanjutkan dengan uji klorofil dan kolesterol terdialisis secara in vitro dan analisis kadar klorofil serta kadar kolesterol dari tiap fraksi.
1. Pembuatan Ekstrak Daun Suji
Pembuatan ekstrak daun suji mengikuti prosedur Prangdimurti et al
(2005). Proses pembuatan ekstrak daun suji diawali dengan pencucian daun suji dengan menggunakan air. Daun yang telah dicuci kemudian dibersihkan dengan lap dan dikering-anginkan. Proses selanjutnya adalah pemotongan daun suji dalam bentuk yang kecil-kecil dengan ukuran + 1 cm. Potongan daun suji tersebut ditambah larutan Tween 80 0.75% dalam Na sitrat 12 mM dengan perbandingan 1:10 kemudian dihancurkan atau diekstrak dengan menggunakan blender selama beberapa menit. Setelah itu, hancuran daun suji diinkubasi pada suhu 750C selama 30 menit. Proses berikutnya adalah penyaringan ekstrak daun suji yang masih kasar dengan menggunakan kain saring. Ampas daun suji dibuang, sedangkan filtratnya disentrifuse selama 10 menit dengan kecepatan 3500 rpm sehingga diperoleh ekstrak daun suji.
2. Pembuatan Sampel SCC
[image:48.612.246.503.88.385.2]
Gambar 8. Skema pembuatan ekstrak daun suji
3. Uji Klorofil dan Kolesterol Terdialisis Secara in vitro a. Persiapan bahan
1. Suspensi pepsin
Pepsin sebanyak 1.6 gram dilarutkan dalam 10 ml 0.1 N HCl. Suspensi dibuat sewaktu akan digunakan.
2. Pankreatin - bile
Pankreatin sebanyak 1.0 gram dan 6.25 gram ekstrak bile didispersikan dalam NaHCO3 0.1 M dan ditepatkan volumenya menjadi 250 ml. Campuran ini dibuat sewaktu akan digunakan.
Disaring dengan kain saring
Ampas
Ekstrak Daun Suji Dikering-anginkan
Ditimbang
Dihancurkan menggunakan blender
Diinkubasi 75oC, 30 menit
Tween 80 0.75% dalam Na-sitrat 12 mM (1:10)
Dicuci
Dipotong kecil-kecil
3. Kantung dialisis
Kantung dialisis yang digunakan adalah Spectrapor I yang berukuran 6000-8000 MWCO dipotong dengan panjang 15 cm kemudian direndam dalam air bebas ion sampai akan digunakan.
b. Persiapan sampel
Disiapkan masing–masing sampel sebanyak 100 ml meliputi 2 jenis sampel yaitu ekstrak daun suji dan sampel larutan SCC serta sebagai kontrol atau pembanding adalah larutan Tween 80 dalam Na-sitrat (pelarut ekstrak daun suji).
c. Prosedur
separasi pigmen. Selain itu dilakukan perhitungan persentase klorofil dan kolesterol terdialisis dengan perhitungan sebagai berikut :
%Klorofil terdialisis = kadar klorofil fraksi dialisat X 100 % kadar klorofil fraksi awal (F0)
% Kolesterol terdialisis = kadar kolesterol fraksi dialisat X 100% kadar kolesterol fraksi awal+kolesterol (F1)
[image:50.612.176.520.241.619.2]C. PROSEDUR ANALISIS
1. Analisis Kadar Klorofil (Yoshida et al., 1976)
Sampel dihomogenisasi dengan 100 ml aseton 85% dengan penambahan 0.01 g CaCO3 dan kemudian didiamkan di ruang gelap selama 1 malam untuk memperoleh kelarutan klorofil yang lebih baik. Setelah itu disentrifuse dengan 3500 rpm selama 10 menit. Berikutnya dilakukan pembacaan absorbansi filtrat pada 663,0 nm dan 645,0 nm atau 652 nm. Karena kurva serapan kuantitatif klorofil a dan b dalam aseton 80% saling potong pada 652 nm.
Perhitungan kadar klorofil dilakukan dengan menggunakan rumus: Total Klorofil (mg/L) = 0.0202 A645.0 nm + 0.00802 A663.0 nm
Klorofil –a = 0.0127 A663.0 nm – 0.00269 A645.0 nm Klorofil – b = 0.0229 A645.0 nm – 0.00468 A663.0 nm
atau
Total klorofil = A652nm x 1000 /34.5
2. Analisis Total Kolesterol (Randox Kits)
Kadar kolesterol total diukur dengan metode CHOD-PAP dengan prinsip pengujian secara enzimatis kalorimetri berdasarkan reaksi :
Kolesterol ester + H2O kolesterol esterase kolesterol + asam lemak Kolesterol + O2 kolesterol oksidase kolesterol-3-one + H2O2
2 H2O2 + fenol+ 4-aminoanthipyrine peroksidase red quinine + 4 H2O Prosedur analisis:
Sampel atau standar diambil sebanyak 0.01 ml dan dicampurkan dengan 1.00 ml reagent (kit komersial) kemudian dimasukkan ke dalam tabung lalu dicampurkan sampai homogen. Setelah campuran homogen kemudian diinkubasi pada suhu 370C selama 5 menit. Setelah itu dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 500 nm. Perhitungan kadar kolesterol total dilakukan dengan menggunakan rumus :
3. Separasi Pigmen
Separasi pigmen dilakukan dengan metode TLC menggunakan plate TLC selulosa (Bacon dan Holden, 1967). Larutan pengembang yang digunakan adalah petroleum eter ringan-aseton-n-propanol dengan perbandingan volume 90:10:0.45. Plate diaktifkan dalam oven bersuhu 105oC selama minimal 45 menit. Ekstrak diteteskan (dispot) pada plate sebanyak 20 ì l kemudian dimigrasi dalam ruang gelap
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A.PEMBUATAN EKSTRAK DAUN SUJI
Jenis daun suji yang digunakan pada pembuatan ekstrak daun suji adalah daun suji tipe minor. Proses pembuatan ekstrak daun suji diawali dengan pembersihan daun suji dari kotoran dengan cara dicuci menggunakan air bersih. Daun suji yang telah dibersihkan dan dikeringanginkan kemudian dipotong kecil-kecil sebesar 1 cm. Hal ini dilakukan untuk memudahkan proses penghancuran daun suji, sehingga waktu yang dibutuhkan lebih singkat.
Proses penghancuran daun suji dilakukan dengan menggunakan blender
stainless steel. Penggunaan blender jenis tersebut dimaksudkan untuk meminimalisir klorofil yang terdegradasi oleh cahaya. Karena sifat klorofil yang sangat rentan terhadap cahaya. Menurut Holden (1976) yang dikutip oleh Oktaviani (1987) menyatakan bahwa sinar dalam ruangan yang lemah, jika mengenai klorofil kurang dari satu detik dapat mengakibatkan reaksi protopigmen. Daun suji diekstrak dengan menggunakan blender.
Daun suji diekstrak dengan menggunakan pelarut Tween-Na sitrat dengan perbandingan 1: 10 (daun suji : larutan pengekstrak). Penggunaan larutan pengekstrak tersebut adalah berdasarkan hasil penelitian dari Prangdimurti et al. (2005). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Prangdimurti et al. (2005) tersebut dinyatakan bahwa penggunaan Tween 80 0.75 % dalam larutan Na-sitrat 12 mM dan proses inkubasi pada suhu 75oC selama 30 menit menghasilkan ekstrak cair yang memiliki kadar klorofil dan kapasitas antioksidan tertinggi di antara larutan pengekstrak lain yang diuji (Na2CO3 0-0.5%, NaHCO3 0-0.5%, Tween 80 0-1% dalam larutan Na-sitrat 12 mM).
kehadiran Na-sitrat dalam uji aktivitas enzim klorofilase, aktivitasnya turun sampai 50% (Lopez et al, 1992). Pelepasan gugus fitol akan mengubah hidrofobisitas klorofil menjadi hidrofilik (Gross, 1991) dan disinyalir dapat meningkatkan aktivitas antioksidan klorofil (Ferruzi, 2002).
Daun suji yang telah diekstrak kemudian diinkubasi dalam penangas air selama 30 menit dengan suhu 750 C. Tahap ini dilakukan untuk mengaktifkan enzim klorofilase. Aktifitas enzim klorofilase tersebut dapat membantu menghidrolisis rantai fitol dari klorofil yang membentuk klorofilid. Enzim klorofilase merupakan jenis enzim esterase yang aktif pada suhu kamar dan hanya aktif jika ada pelarut-pelarut organik. Menurut hasil penelitian Sibarani (1994), diperoleh keterangan bahwa suhu optimum enzim klorofilase daun suji yang diekstrak dengan pelarut organik (aseton) adalah 39oC. Sedangkan dalam pelarut air, menurut Isabel et al (1993) fungsi enzim akan optimum pada kisaran suhu 70oC selama 45 menit.
Garcia et al (1980) dan Lopez et al (1992) melaporkan bahwa pada selang waktu 30 menit, laju reaksi klorofilase dapat dianggap sebagai laju awal. Reaksi yang melibatkan enzim klorofilase ini merupakan reaksi yang berlangsung lambat (Klein dan Vishniac, 1961). Salah satu faktor yang mempengaruhi adalah ukuran molekul enzim yang besar sehingga membutuhkan waktu yang lebih lama agar terjadi interaksi antara substrat dan molekul enzim (Scopes, 1982). Waktu inkubasi yang lebih lama dapat menurunkan laju reaksi karena salah satu produk hidrolisis yaitu fitol dapat bertindak sebagai inhibitor reaksi terutama pada tahap awal berlangsungnya reaksi sehingga akan terjadi penyimpangan terhadap aktivitas yang diperoleh (Garcia et al, 1980).
Dalam penelitian ini, upaya untuk menghindari sinar yang berlebihan yang akan merusak klorofil dilakukan dengan membungkus wadah dengan kertas aluminium foil selama proses pembuatan ekstrak. Demikian pula penyimpanan ekstrak daun suji ini dalam ruangan yang sejuk dan gelap.
B. PEMBUATAN LARUTAN SCC
Penggunaan larutan SCC (Sodium Copper Chlorophyllin) dalam penelitian ini dimaksudkan sebagai pembanding untuk larutan ekstrak daun suji. Telah diketahui bahwa SCC merupakan ekstrak klorofil komersial yang selama ini dimanfaatkan pada bahan pangan sebagai pewarna maupun suplemen pangan. SCC memiliki penampakan warna hijau terang yang berasal dari klorofil alami. Pada umumnya SCC komersial dibuat dari ekstrak klorofil dengan menggunakan NaOH-metanol dan diikuti dengan penggantian atom Mg oleh logam seperti Cu.
Pada penelitian ini larutan SCC digunakan sebagai pembanding bagi ekstrak daun suji. Oleh karena itu, kandungan klorofil di fraksi awal pada SCC disetarakan dengan kandungan klorofil di fraksi awal pada ekstrak daun suji. Penentuan konsentrasi SCC perlu dilakukan agar perbedaan kadar klorofil antara SCC dengan daun suji tidak terlalu jauh.
Penentuan konsentrasi SCC yang memiliki kandungan klorofil awal setara dengan kandungan klorofil awal dari ekstrak daun suji dilakukan dengan pembuatan kurva standar SCC. Nilai kadar klorofil awal pada ekstrak daun suji yang telah diukur kemudian diplotkan pada kurva standar SCC yang telah dibuat sehingga didapatkan nilai konsentrasi SCC yang setara dengan kadar klorofil ekstrak daun suji.
potong pada 652 nm, sehingga jumlah keseluruhan klorofil juga bisa diperoleh dengan menghitung konsentrasinya pada panjang gelombang 652 nm (Harborne, 1987). Hasil pembacaan absorbansi larutan SCC dan kurva standar SCC diperlihatkan pada Gambar 10 di bawah ini.
K urva S tandar S C C
y = 0 .5 7 3 x + 0 .0 0 3 1
R2 = 0 .9 9 4
0 0 .0 5 0 .1 0 .1 5 0 .2 0 .2 5 0 .3 0 .3 5
0 .0 0 0 .1 0 0 .2 0 0 .3 0 0 .4 0 0 .5 0 0 .6 0
K onse ntrasi SCC (mM )
[image:56.612.155.503.181.362.2]N ila i A b s o rb a n s i
Gambar 10. Kurva standar SCC
Berdasarkan kurva standar SCC, ekstrak daun suji memiliki kesetaraan kadar klorofil dengan SCC 2.35 mM. Untuk memastikan kesetaraan konsentrasi SCC sebesar 2.35 mM dengan kadar klorofil awal ekstrak daun suji maka dilakukan pengukuran kembali kadar klorofil dari SCC dengan konsentrasi 2.35 mM. Larutan SCC dengan konsentrasi sebesar 2.35 mM tersebut yang selanjutnya digunakan sebagai sampel larutan SCC dalam penelitian ini.
C. PROFIL EKSTRAK DAUN SUJI DAN SCC SELAMA PENCERNAAN IN VITRO
Simulasi sistem pencernaan ini terdiri dari dua fase yaitu fase lambung dan fase usus halus. Pengujian dilakukan berdasarkan sistem pencernaan in vitro
yang dikembangkan oleh Barbara et al. (1998) dan Ferruzi et al. (2002) yang telah dimodifikasi dengan penggunaan kantung dialisis sebagai model penyerapan.
Perlakuan yang diberikan pada penelitian ini adalah sampel dengan penambahan kolesterol dan tanpa penambahan kolesterol. Kolesterol yang ditambahkan sebanyak 2% dari sampel yaitu 200 mg. Hal ini berdasarkan konsumsi kolesterol diet maksimum pada bahan pangan telur. Simulasi sistem pencernaan pada fase lambung atau fase gastric yaitu dengan mengatur kondisinya menjadi pH 2 seperti kondisi pH yang terdapat di lambung. Penambahan asam klorida (HCl 4 N) dilakukan untuk mengatur pH menjadi pH 2. Selain dengan pengaturan pH, pada fase lambung juga ditambahkan enzim pepsin. Penambahan enzim ini dilakukan agar sesuai dengan kondisi di lambung. Kemudian, setelah dilakukan pengaturan pH 2 dan penambahan enzim pepsin, selanjutnya sampel diinkubasi selama 1 jam pada suhu 370C di dalam penangas air bergoyang. Proses inkubasi ini dilakukan untuk memberi kesempatan enzim pepsin bekerja.
2.534
1.522 1.45
0.381
2.457
0.041 1.193
0.384
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
k
ada
r k
lo
ro
fi
l (
m
g
/g
)
F0 F2 F3 F4 F0 F2 F3 F4
Suji SCC
Setelah proses netralisasi berlangsung, selanjutnya dilakukan penambahan enzim pankreatin, lipase dan bile ekstrak serta perlakuan inkubasi selama 2 jam pada suhu 370C. Penambahan enzim-enzim tersebut adalah enzim –enzim yang terdapat dalam usus.
1. Profil Kadar Klorofil Selama Pencernaan in vitro
[image:58.612.169.507.328.529.2]Berdasarkan hasil analisis kandungan total klorofil selama pencernaan in vitro pada ekstrak daun suji maupun SCC dengan perlakuan tanpa kolesterol dapat dilihat pada Gambar 11 dan 12. Adapun cara perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 1. Pada perlakuan tanpa penambahan
