INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (FHEMM) pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat peningkatan kadar albumin serta mengetahui adanya kekerabatan antara dosis pemberian FHEMM pada penggunaan jangka panjang dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus betina galur Wistar, umur 2-3 bulan, dan berat ± 130-180 g. Tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan. Kelompok I (kontrol negatif) diberi CMC-Na 1% (137,14 mg/kgBB p.o). Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi karbon tetraklorida 2 mL/KgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol fraksi) diberi FHEMM Macaranga tanarius L. dosis 137,14 mg/kgBB tanpa pemberian karbon tetraklorida. Kelompok IV,V, dan VI (perlakuan) berturut-turut diberikan FHEMM M. tanarius L. dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB secara peroral sekali sehari selama enam hari berturut-turut dan pada hari ketujuh semua perlakuan diberi karbon tetraklorida dosis 2 mL/KgBB secara i.p. Darah diambil setelah 24 jam dari sinus orbitalis mata untuk diukur kadar albumin serum. Data kadar albumin dianalisis dengan uji Shapiro-Wilk dilanjutkan analisis dengan
Kruskal-Wallis lalu uji Mann-Whitney untuk mengetahui perbedaan kadar
albumin serum antar kelompok.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian jangka panjang FHEMM mempengaruhi kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan tidak adanya kekerabatan antara dosis FHEMM dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
ABSTRACT
This study investigated the long-term influences of the hexane-ethanol fraction methanol-water extracts of Macaranga tanarius L. leaves (FHEMM) againts carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats. The albumin level in serum were measured for the evaluation of hepar function. This study also determined the relationship between the dose administration of FHEMM on the use of long-term with increased level of albumin serum in rat induced by carbon tetrachloride.
This research was done with purely experimental with a completely randomized design pattern undirectional. This research used 30 female Wistar rats, 2-3 months old, and weighing 130-180 grams. The rats were divided into six groups of five each. Group I (negative control) were treated with CMC-Na 1% (137.14 mg/kgBW p.o). The second group (hepatotoxin control) were additionally treated with carbon tetrachloride 2 mL/kgBW intraperitoneally. The third group (fraction control) received the FHEMM (137.14 mg/kgBW p.o) without carbon tetrachloride. The fourth until sixth group (treatment) were given FHEMM dose 34.28; 68.57; and 137.14 mg/kgBW orally once a day for six days successively and then in the seventh day all of the treatments group were given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW by i.p. Twenty-four hours later, blood was collected from the orbital sinus eye to be measured albumin serum. Data of albumin level which obtained were analyzed using Shapiro-Wilk and continued analyze used
Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test was used to determine the differences in
albumin serum level of each group.
The result showed that extended of FHEMM influences albumin serum level in rats which induced carbon tetrachloride and there wasn’t relationship between the three doses of FHEMM dose with increased levels of albumin in rats induced by carbon tetrachloride.
PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PANJANG FRAKSI HEKSAN-ETANOL DARI EKSTRAK MHEKSAN-ETANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius
(L) Müll. Arg. TERHADAP KADAR ALBUMIN PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Cinthya Anggarini
NIM : 128114137
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
i
PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PANJANG FRAKSI HEKSAN-ETANOL DARI EKSTRAK MHEKSAN-ETANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius
(L) Müll. Arg. TERHADAP KADAR ALBUMIN PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Cinthya Anggarini
NIM : 128114137
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
ii
cINTHYA
iii
Cinthya
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Akhir dari upaya terbaik kita adalah awal dari campur tangan Tuhan. Maka bekerjalah sebaik mungkin, lalu bersabarlah seyakin mungkin.
I CAN DO EVERYTHING THROUGH HIM GIVES ME STRENGTH.
Precious Lord, take my hand
Lead me on, let me stand
I am tired, I am weak and I am worn
Through the storm, through the night
Lead me on to the light
(
Precious Lord, Take My Hand – Lyrics by Thomas A. Dorsey)Kupersembahkan tulisan ini untuk
Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria sumber kekuatan,
pengharapan dan penuntun jalanku,
Papa, Mama, Kak Edine, Iwang yang selalu mendukungku,
v
CINTHYA
vi
SEMOGA
vii
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan kasih-Nya
yang berlimpah, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
“PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PANJANG FRAKSI
HEKSAN-ETANOL DARI EKSTRAK MHEKSAN-ETANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius (L) Müll. Arg. TERHADAP KADAR ALBUMIN PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA” dengan
baik dan lancar. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat
memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm) Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Dalam menyelesaikan skripsi ini, penulis menyadari bahwa dalam proses
pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini ada banyak pihak yang telah memberi
bantuan dan dukungan, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena
itu, penulis mengucakan terima kasih kepada:
1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan
penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi.
2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen
Penguji pada skripsi ini yang telah memberikan waktunya untuk
membimbing penulis dengan sabar, memberikan dukungan, memberi
viii
3. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah
memberikan masukan dan motivasi yang begitu berharga sehingga penulis
bisa menyelesaikan skripsi dengan baik.
4. Dr. Erna Tri Wulandari., M.Si., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah
menuntun penulis dengan masukan dan semangat yang diberikan, serta setia
dalam membimbing penulis menyelesaikan skripsi.
5. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas
Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas
laboratorium untuk kepentingan dan keberlangsungan skripsi.
6. Bapak Heru, Bapak Suparjiman, Bapak Kayat, Bapak Agung, Bapak
Wagiran, Bapak Kunto, dan Bapak Parlan selaku Laboran Laboratorium
Fakultas Farmasi atas bantuan dan dukungannya kepada penulis selama
proses pengerjaan skripsi.
7. Keluargaku Papa Deddy Ferdinand, Mama Vinsensia Sudiyati, Kak Edine,
Iwang, atas segala cinta, doa, nasihat, dukungan, dan bantuan yang selalu
mengiringiku.
8. Evan Michael Atmaja sebagai teman, sahabat, dan kekasih yang selalu
memberi motivasi, mendampingi, mengajariku, dan membantu dalam
banyak hal.
9. Rekan-rekan Tim Macaranga tanarius L : Novita, Cyndi, Ria, Ayu, Penina,
ix
10. Sahabat kecilku Laurensia Maria Nindia Bernita dan Devita Widyana Putri,
atas motivasi, dukungan dan selalu mendengarkan keluh kesahku selama
proses pengerjaan skripsi.
11. Seluruh dosen dan teman-teman FKK B 2012, FSM D 2012, dan seluruh
teman-teman seangkatan 2012 atas kebersamaan selama masa studi.
12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu oleh penulis
yang telah membantu, baik dalam doa, motivasi, saran, hingga akhirnya
penulis dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik dan lancar.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih terdapat kekurangan
mengingat keterbatasan pengetahuan dan kemampuan yang dimiliki penulis,
karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun.
Penulis juga berharap semoga tulisan ini dapat memberikan manfaat bagi
perkembangan ilmu pengetahuan terutama pada bidang farmasi maupun
masyarakat.
Yogyakarta, 7 Januari 2016
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... v
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ... vi
PRAKATA ... vii
DAFTAR ISI ... x
DAFTAR TABEL ... xv
DAFTAR GAMBAR ... xvi
DAFTAR LAMPIRAN ... xvii
INTISARI ... xviii
ABSTRACT ... xix
BAB I. PENGANTAR ... 1
A. Latar Belakang ... 1
1. Rumusan masalah ... 6
2. Keaslian penelitian ... 6
3. Manfaat penelitian ... 7
a. Manfaat teoritis ... 7
b. Manfaat praktis ... 8
xii
BAB III. METODE PENELITIAN ... 28
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 28
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ... 28
xiii
2. Penetapan lama pemejanan FHEMM daun M. tanarius L. ... 44
3. Penetapan waktu pencuplikan darah ... 44
D. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Jangka Panjang FHEMM Terhadap Kadar Albumin Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida ... 50
1. Kontrol Negatif (CMC-Na 1%) ... 54
2. Kontrol Hepatotoksin ... 55
3. Kontrol FHEMM Dosis III ... 56
4. Kelompok perlakuan jangka panjang FHEMM dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ... 57
xiv
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 65
A. Kesimpulan ... 65
B. Saran ... 65
DAFTAR PUSTAKA ... 66
LAMPIRAN ... 73
xv
DAFTAR TABEL
Tabel I. Komposisi dan konsentrasi reagen Albumin
BCG ... 31
Tabel II. Nilai purata ± SE aktivitas serum ALT darah tikus setelah pemberian karbon tetraklorida
dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24
dan 48 jam ... 44
Tabel III. Perbedaan kenaikan aktivitas serum ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24
dan 48 ... 47
Tabel IV. Nilai purata ± SE aktivitas serum AST darah tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis
2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ... 47
Tabel V. Perbedaan kenaikan aktivitas serum AST setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24
dan 48 ... 50
Tabel VI. Purata kadar albumin ± SE pemberian FHEMM secara jangka panjang terhadap tikus terinduksi
karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB ... 52
Tabel VII. Hasil uji Mann-Whitney kadar albumin tikus
setelah pemberian karbon tetraklorida dosis
xvi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Anatomi Hati ... 10
Gambar 2. Anatomi Mikroskopik Hati ... 11
Gambar 3. Struktur Jaringan Hati ... 12
Gambar 4. Struktur Karbon tetraklorida (CCl4) ... 17
Gambar 5. Daun Macaranga tanarius L. ... 19
Gambar 6. Senyawa ellagitannins dari ekstrak etanol daun M. tanarius : mallotinic acid (1), corilagin (2), macatannin A (3), chebulagic acid (4), and macatannin B (5) ... 21
Gambar 7. Diagram batang purata aktivitas serum ALT darah tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ... 45
Gambar 8. Diagram batang purata aktivitas serum AST darah tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ... 48
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Foto daun M. tanarius L. ... 74
Lampiran 2. Foto serbuk daun M. tanarius L. ... 74
Lampiran 3. Foto fraksi kental heksan etanol daun M. Tanarius ... 75
Lampiran 4. Foto larutan FHEMM ... 75
Lampiran 5. Hasil uji determinasi M. tanarius L. ... 76
Lampiran 6. Surat Ethical Clearance ... 77
Lampiran 7. Surat IBM SPSS Statistics 22 Lisensi UGM ... 78
Lampiran 8. Analisis statistik data aktivitas ALT uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah diinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB ... 79
Lampiran 9. Analisis statistik data aktivitas AST uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah diinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB ... 83
Lampiran 10. Analisis statistik data kadar albumin kelompok Perlakuan ... 86
Lampiran 11. Perhitungan penetapan peringkat dosis FHEMM pada kelompok perlakuan ... 98
Lampiran 12. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ... 100
Lampiran 13. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius L. ... 101
xviii
INTISARI
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (FHEMM) pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat peningkatan kadar albumin serta untuk mengetahui adanya kekerabatan antara dosis pemberian FHEMM pada penggunaan jangka panjang dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus betina galur Wistar, umur 2-3 bulan, dan berat ± 130-180 g. Tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan. Kelompok I (kontrol negatif) diberi CMC-Na 1% (137,14 mg/kgBB p.o). Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi karbon tetraklorida 2 mL/KgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol fraksi) diberi FHEMM Macaranga tanarius L. dosis 137,14 mg/kgBB tanpa pemberian karbon tetraklorida. Kelompok IV,V, dan VI (perlakuan) berturut-turut diberikan FHEMM M. tanarius L. dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB secara peroral sekali sehari selama enam hari berturut-turut dan pada hari ketujuh semua perlakuan diberi karbon tetraklorida dosis 2 mL/KgBB secara i.p. Darah diambil setelah 24 jam dari sinus orbitalis mata untuk diukur kadar albumin serum. Data kadar albumin dianalisis dengan uji Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi datanya kemudian dilanjutkan analisis dengan Kruskal-Wallis lalu uji Mann-Whitney untuk mengetahui perbedaan kadar albumin serum antar kelompok.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian jangka panjang FHEMM mempengaruhi kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan tidak adanya kekerabatan antara dosis FHEMM dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
xix
ABSTRACT
This study investigated the long-term influences of the hexane-ethanol fraction methanol-water extracts of Macaranga tanarius L. leaves (FHEMM) againts carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats. The albumin level in serum were measured for the evaluation of hepar function. This study also determined the relationship between the dose administration of FHEMM on the use of long-term with increased level of albumin serum in rat induced by carbon tetrachloride.
This research was done with purely experimental with a completely randomized design pattern undirectional. This research used 30 female Wistar rats, 2-3 months old, and weighing 130-180 grams. The rats were divided into six groups of five each. Group I (negative control) were treated with CMC-Na 1% (137.14 mg/kgBW p.o). The second group (hepatotoxin control) were additionally treated with carbon tetrachloride 2 mL/kgBW intraperitoneally. The third group (fraction control) received the FHEMM (137.14 mg/kgBW p.o) without carbon tetrachloride. The fourth until sixth group (treatment) were given FHEMM dose 34.28; 68.57; and 137.14 mg/kgBW orally once a day for six days successively and then in the seventh day all of the treatments group were given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW by i.p. Twenty-four hours later, blood was collected from the orbital sinus eye to be measured albumin serum. Data of albumin level which obtained were analyzed using Shapiro-Wilk test to look at data distribution and continued analyze used Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test was used to determine the differences in albumin serum level of each group.
The result showed that extended of FHEMM influences albumin serum
level in rats which induced carbon tetrachloride and there wasn’t relationship
between the three doses of FHEMM dose with increased levels of albumin in rats induced by carbon tetrachloride.
Keywords : Macaranga tanarius, hepatoprotective, carbon tetrachloride, albumin, long-term.
1
BAB I PENGANTAR
A. Latar Belakang
Hati merupakan kelenjar terbesar dalam tubuh manusia dengan berat
kurang lebih 1,5 kg (Junqueira, 2007). Hati dianggap sebagai organ metabolisme
utama yang memiliki berbagai fungsi, yaitu proses metabolisme karbohidrat,
protein, lemak, pengaturan koagulasi dan detoksifikasi dari substansi toksik (The
Association of Physicians of India, 2012). Hati dapat mengalami kerusakan yang diakibatkan oleh infeksi virus, obat-obat yang merusak hati, maupun induksi
senyawa kimia (Chandrasoma and Taylor, 1995). Adanya hepatotoksik akan
menyebabkan kerusakan hati berupa penurunan kadar albumin. Albumin
merupakan protein penting yang berfungsi untuk proses metabolisme dalam
tubuh. Adapun fungsi dari uji albumin, yaitu untuk mengukur kemampuan hati
dalam sintesis protein (Singh, Bhat, and Sharma, 2011). Pemeriksaan fungsi hati
memiliki beberapa parameter yang harus diperhatikan, antara lain aktivitas Alanin
Aminotransferase (ALT) yang akan meningkat 2-3 kali nilai normal, Aspartate Aminotransferase (AST) yang akan meningkat 3-4 kali nilai normal, kadar
bilirubin meningkat, Gamma-Glutamyl Transferase (GGT) meningkat, Alkaline
Phosphatase (ALP) meningkat, dan penurunan kadar albumin (Thapa dan Wilia,
2007). Oleh karena itu uji kadar albumin dapat digunakan sebagai salah satu
Salah satu contoh kerusakan hati yang saat ini cukup serius di kalangan
masyarakat yaitu perlemakan hati (steatosis). Steatosis merupakan hasil
penumpukan lemak dalam bentuk droplet di dalam sitoplasma sel hepatosit
(Brunt, 2001). Salah satu penyakit hati steatosis adalah Non-Alcoholic Fatty Liver
Disease (NAFLD) yang terjadi pada penderita yang tidak mengkonsumsi alkohol.
NAFLD adalah adanya perlemakan hati secara makrovesikular akibat kurang
mengkonsumsi 20 g alkohol perhari. Hal ini merupakan penyakit yang paling
umum terjadi di Amerika Serikat (Clark and Brancati, 2002) dan memiliki
spektrum luas dari berbagai macam penyakit hati dari NAFLD yang berujung
Non-Alcoholic Steato Hepatitis (NASH), dan pada akhirnya menyebabkan sirosis
dengan hipertensi portal (Marchesini and Bugianesi, 2003). Sebagian besar
NAFLD disebabkan atau berhubungan erat dengan satu atau beberapa komponen
sindroma metabolik (SM), yaitu resistensi insulin, intoleransi glukosa atau
diabetes melitus, dan hipertensi (Dowman, Tomlinson, and Newsome, 2011).
Pada masa kini prevalensi NAFLD di seluruh dunia mengalami
peningkatan yang signifikan. Berdasarkan data epidemiologi, prevalensi NAFLD
di negara bagian barat sekitar 20-40%. Pada penderita obesitas di negara maju,
didapatkan 60% mengalami perlemakan hati sederhana, 20-25% mengalami
NASH, dan 2-3% mengalami sirosis. Pada penderita diabetes melitus tipe 2,
terdapat 70% pasien mengalami NAFLD dan 50-60% mengalami NAFLD pada
pasien dislipidemia (Sofia, Nurdjanah, and Ratnasari, 2009). Di beberapa negara
Asia seperti Jepang, menyebutkan prevalensi NAFLD pada populasi umum
sekitar 5%-28%, dimana obesitas sentral dan diabetes merupakan faktor
predisposisi yang paling sering terjadi (Amarapurkar, Hashimoto, Lesmana,
Sollano, Chen, and Goh, 2007). Prevalensi NAFLD di China sekitar 15% (Fan
and Farrell, 2009). Di Indonesia, prevalensi NAFLD diperkirakan sekitar 30%
berdasarkan studi di lingkungan urban (Sumantri, 2013). Di RSUP dr. Kariadi
Semarang dengan pemeriksaan USG hati pada tahun 2005-2009 didapatkan
peningkatan kasus perlemakan hati dari tahun ke tahun, masing-masing pertahun
adalah 4; 4,5; 5; 6, dan 7% (Sasdesi and Purnomo, 2010).
Hepatotoksin merupakan senyawa yang dalam penggunaan jangka
panjang atau pada dosis berlebih dapat menimbulkan gangguan hati (Zimmerman,
1978). Salah satu contoh senyawa model hepatotoksin yaitu karbon tertraklorida.
Pemberian dosis rendah karbon tetraklorida dapat menyebabkan perlemakan hati
dan kerusakan sitokrom P450. Karbon tetraklorida dimetabolisme oleh sitokrom
P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas triklorometil, radikal ini dapat
bereaksi dengan oksigen membentuk radikal triklorometilperoksidasi yang sangat
reaktif (Timbrell, 2009). Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh (Ahmed,
Alam, Varshney, and Khan, 2002) melaporkan bahwa pemejanan karbon
tetraklorida menyebabkan meningkatnya purata aktivitas ALT serum serta terjadi
penurunan purata kadar albumin serum sebesar 25,87% dari kontrol. Spektrum
efek toksik karbon tetraklorida pada hati inilah sehingga karbon tetraklorida
digunakan sebagai senyawa model hepatotoksin pada penelitian ini.
Antioksidan merupakan senyawa pemberi elektron (electron donor).
berkembangnya reaksi oksidasi, dengan cara mencegah terbentuknya radikal.
Antioksidan juga merupakan senyawa yang mampu menghambat senyawa yang
dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan mengikat radikal bebas dan molekul
yang sangat reaktif, akibatnya kerusakan sel akan dihambat. Cara yang mudah
untuk mencegah atau mengurangi resiko yang ditimbulkan oleh aktivitas radikal
bebas yaitu dengan mengkonsumsi makanan atau suplemen yang mengandung
antioksidan (Winarsi, 2007).
Berbagai tanaman dapat dikatakan sebagai pengobatan alternatif untuk
mengobati berbagai macam penyakit kronis, seperti gangguan ginjal, gangguan
hepar dan bahkan kanker. Salah satunya adalah Macaranga tanarius L. atau yang
disebut dengan daun senu yang tersebar di seluruh daerah tropis di dunia seperti
Filipina, Laos, Thailand, serta Indonesia (World Agroforestry Centre, 2002).
Menurut penelitian Lim, Lim, dan Yule (2009) dibuktikan bahwa daun M.
tanarius L. memiliki beberapa manfaat, yaitu sebagai antipiretik, antitusif, agen
emetik, dan antiinflamasi. Berdasarkan penelitian Matsunami, Takamori,
Shinzato, Aramoto, Kondo, dan Otsuka (2006), tanaman M. tanarius memiliki
aktivitas antioksidan yang sangat bermanfaat untuk kesehatan. Ditemukan juga
kandungan glikosida yaitu macarangaioside A-C dan mallophenol B dari ekstrak
metanol-air yang menunjukkan aktivitas penangkapan radikal bebas terhadap
DPPH.
Penelitian ekstrak metanol-air-air daun M. tanarius telah dilakukan oleh
Windrawati (2013) dengan penginduksi karbon tetraklorida praperlakuan jangka
penelitian tersebut terbukti bahwa tanaman ekstrak metanol-air baik jangka
panjang maupun jangka pendek dengan penginduksi karbon tetraklorida memiliki
efek hepatoprotektif. Kumazawa, Murase, Momose and Fukumoto (2014) telah
melakukan penelitian pada daun M. tanarius dan didapatkan bahwa ekstrak
metanol-air M. tanarius L. memiliki senyawa prenylflavonoids yang berfungsi
sebagai antioksidan. Selain itu, telah dibuktikan dari penelitian Gunawan-Puteri
dan Kawabata (2010), bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius L. memiliki
senyawa ellagitannins yaitu mallotinic acid, corilagin, macatanin A, chebulogic
acid¸dan macatanin B. Senyawa tanin adalah senyawa fenolik yang terdapat pula
pada M. tanarius L. juga berpotensi sebagai antioksidan.
Pemilihan heksan dan etanol sebagai pelarut fraksi karena memiliki
lipofilisitas yang sama dengan kandungan senyawa tanin yang terdapat pada daun
M.tanarius. Berdasarkan perhitungan lipofilisitas heksan-etanol menggunakan
aplikasi Marvin Sketch didapatkan lipofilisitas sebesar 2,97 dan campuran
senyawa tanin yang memiliki lipofilisitas mendekati heksan-etanol yaitu
macatanin B (2,94), macatanin A (2,76), dan chebulogic acid (2,64). Sehingga
pada penelitian ini heksan-etanol digunakan sebagai pelarut fraksi M. tanarius
untuk mendapatkan antioksidan.
Lama pemejanan jangka panjang selama enam hari FHEMM mengacu
pada penelitian Windrawati (2013) mengenai ekstrak metanol:air (50:50) daun M.
tanarius L yang dilakukan selama enam hari berturut-turut mampu memberikan
Oleh karena itu, penelitian ini menarik untuk diteliti lebih lanjut
mengenai pemberian FHEMM dengan penginduksi karbon tetraklorida jangka
panjang.
1. Perumusan masalah
Permasalahan yang diajukan dalam penelitian ini adalah :
1. Apakah pemberian FHEMM dalam penggunaan jangka panjang dapat
memberikan pengaruh terhadap kadar albumin pada tikus betina galur
Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida?
2. Apakah ada kekerabatan antara dosis pemberian FHEMM dengan
kenaikan kadar albumin pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi
karbon tetraklorida?
2. Keaslian penelitian
Phomart, Sutthivaiyakit, Chimnoi, Ruchirawat, dan Sutthivaiyakit (2005)
melaporkan bahwa flavonoid dari ekstrak n-heksan dan kloroform daun M.
tanarius mempunyai aktivitas antioksidan terhadap DPPH. Macarangaoside A-C
yang diisolasi dari ekstrak metanol-air M. tanarius menunjukkan aktivitas yang
poten terhadap DPPH (Matsunami, et al., 2006). Pada penelitian in vivo
menunjukkan bahwa ekstrak metanol-air daun M. tanarius mempunyai aktivitas
hepatoprotektif pada tikus terinduksi parasetamol (Adrianto, 2011).
Penelitian ekstrak metanol-air daun M. tanarius telah dilakukan oleh
panjang dan jangka pendek oleh Tiala (2013) pada waktu yang bersamaan. Dari
penelitian tersebut terbukti bahwa tanaman ekstrak metanol-air baik jangka
panjang maupun jangka pendek dengan penginduksi karbon tetraklorida memiliki
efek hepatoprotektif. Penelitian yang dilakukan oleh Todingbua (2014) mengenai
efek antiinflamasi topikal ekstrak metanol-air daun M. tanarius L. pada mencit
betina terinduksi karagenin membuktikan bahwa ekstrak daun M. tanarius
memiliki efek antiinflamasi topikal dengan konsentrasi optimum yang
menunjukkan efek antiinflamasi topikal sebesar 3,75%.
Sejauh studi pustaka yang dilakukan oleh peneliti, penelitian terkait
dengan pengaruh pemberian jangka panjang FHEMM terhadap kadar albumin
pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida belum pernah
dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi pengembangan
ilmu pengetahuan bagi masyarakat, khususnya ilmu kefarmasian mengenai
pengaruh pemberian fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun M. tanarius L.
b. Manfaat praktis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada
masyarakat mengenai manfaat daun M. tanarius L. yang dapat menaikkan kadar
albumin, terlebih albumin mampu membentuk jaringan baru pasca operasi.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Untuk mengetahui pengaruh FHEMM terhadap kenaikan kadar albumin
pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang FHEMM terhadap
kadar albumin pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida.
b. Mengetahui adanya kekerabatan dosis pemberian FHEMM dengan
kenaikan kadar albumin pada tikus betina galur Wistar terinduksi
9
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Hati 1. Anatomi hati
Hati merupakan kelenjar terbesar pada tubuh manusia, dengan berat
sekitar 1.500 g atau 2,5% dari total berat tubuh manusia dewasa. Organ ini
terletak di kuadran kanan atas rongga abdomen, di bawah diafragma (Kahle,
Leonhardt, and Platzer, 1995). Di dalam hati terjadi proses-proses penting bagi
kehidupan kita, yaitu proses penyimpanan energi, pembentukan protein dan asam
empedu, pengaturan metabolisme kolesterol, dan penetralan racun atau obat yang
masuk dalam tubuh (Gerard and Bryan, 2009). Dalam keadaan segar hati
berwarna merah tua atau merah cokelat, warna ini disebabkan karena adanya
darah yang sangat banyak (Guyton and Hall, 2006).
Hati bertekstur lunak, lentur, dan terletak di bagian atas cavitas
abdominalis tepat di bawah diphragma. Sebagian besar hati terletak di profunda
arcus costalis dextra dan hemidiaphragma dextra memisahkan hati dari pleura,
pulmo, pericardium, dan cor. Hati terbentang ke sebelah kiri untuk mencapai
hemidiaphragma sinistra (Snell, 2006).
Hati memiliki dua lobus, yaitu lobus kanan dan lobus kiri. Berdasarkan
ukurannya, lobus kanan memiliki ukuran yang lebih besar dibandingkan dengan
lobus kiri (Gambar 1). Kedua lobus tersebut dipisahkan oleh ligamentum
Gambar 1. Anatomi hati (Misih and Bloomston, 2010).
Seluruh permukaan hati dilapisi oleh kapsul Glisson, jaringan ikat padat
irreguler yang melekat longgar pada seluruh permukaan hati, kecuali pada area
porta hepatika (Gartner and Hiatt, 2001). Porta hepatika yang terletak pada
permukaan interior hati merupakan saluran tempat masuknya
pembuluh-pembuluh darah yang mendarahi, disamping tempat keluar duktus hepatikus
dekstra dan sinistra yang menyalurkan empedu ke kandung empedu (Sherwood,
2004).
Secara makroskopik, struktur hati menggambarkan suatu sistem yang
kompleks yang terdiri dari beberapa sel dan pembuluh darah (Gambar 2). Secara
fisiologis, jaringan hati terbagi menjadi unit-unit fungsional berbentuk segitiga
yang dikenal sebagai asimus hati. Sebuah asimus hati tersusun atas 3 traktus
portalis, masing-masing terletak di sudut “segitiga” asimus, dan sebuah vena
sentralis di pusatnya (Gartner and Hiatt, 2001). Hepatosit di area dekat vena
hepatika terminalis terletak paling jauh dari suplai darah, dan karenanya berada di
yang berasal dari traktus portalis yang mempenetrasi jaringan hati. Di dalam
asimus, parenkim dibagi menjadi 3 zona (Gambar 2), dengan zona 1 terletak
paling dekat dengan suplai vaskuler dari traktus portalis, zona 3 di sekeliling vena
hepatika, dan zona 2 berada di antaranya. Zona ini terbagi secara metabolik,
karena adanya gradien aktivitas lobuler untuk enzim-enzim hati. Selain itu,
berbagai bentuk kerusakan hati juga memiliki distribusi berdasarkan zona
(Crawford, 2005).
Gambar 2. Anatomi mikroskopik hati (Crawford, 2005).
Pembuluh darah yang berperan dalam menyuplai darah untuk hati yaitu
arteri hepatika dan vena porta. Arteri hepatika membawa darah yang kaya akan
oksigen (kejenuhan oksigen 95-100%) dengan kecepatan aliran ±500 mL/menit.
Vena porta membawa darah yang mengandung oksigen (kejenuhan oksigen 70%),
usus, pankreas, dan limpa) dengan kecepatan aliran darah ±1000 mL/menit (Tso
and McGill, 2003).
Gambar 3. Struktur jaringan hati (Encyclopedia Britannica, Inc. 2003)
Jaringan hati terdiri dari massa sel batang melalui saluran empedu dan
pembuluh darah. Kelompok kedua sel yang disebut sel Kupffer (Gambar 3)
merupakan garis saluran kecil sistem vaskular partikel asing. Parenkim hati
tersusun atas lempeng-lempeng hepatosit yang saling beranastomosis
(Encyclopedia Britanica, Inc, 2003).
Hepatosit yang berbatasan langsung dengan traktus portalis disebut
sebagai lempeng pembatas, yang membentuk batas inkotinu di sekeliling
mesenkim traktus portalis. Hepatosit tersusun radial di sekeliling vena hepatika
terminalis. Di antara jalinan hepatosit, terdapat sinusoid vaskuler. Darah melewati
sinusoid kemudian menuju vena hepatika terminalis. Setiap hepatosit berada di
antara sinusoid dengan pendarahan yang berasal dari vena porta hepatika dan
hepatosit salah satu sel yang paling kaya perfusi sekaligus tahan terhadap iskemia
(McPhee and Ganong, 2006).
Sinusoid dilapisi oleh sel-sel endotelial yang berpori dan inkontinu, yang
membatasi celah ekstrasinuoidal, celah Disse. Ke dalam celah Disse, mikrovilli
hepatosit berprotusi. Tersebar dan menempel di permukaan luminal sel-sel
endotelial adalah sistem fagosit monosit yang dikenal sebagai sel-sel Kupffer. Di
celah Disse banyak terdapat sel-sel stelata perisinusoidal yang berperan dalam
penyimpanan dan metabolisme vitamin A. Jika terjadi proses inflamasi pada
parenkim hati, sel-sel stelata ini berubah menjadi myofibroblast yang
memproduksi kolagen (Gartner and Hiatt, 2001).
2. Fisiologi hati
Fungsi utama hati adalah membentuk dan mengeksresikan empedu;
saluran empedu mengangkut empedu sedangkan kandung empedu menyimpan
dan mengeluarkan empedu ke dalam usus halus sesuai kebutuhan (Price and
Wilson, 2005).
Menurut Guyton and Hall (2008), hati memiliki beberapa fungsi yaitu:
a. Metabolisme karbohidrat, fungsi hati dalam metabolisme karbohidrat adalah
menyimpan glikogen dalam jumlah besar, mengkonversi galaktosa dan
fruktosa menjadi glukosa.
b. Metabolisme lemak, yaitu mengoksidasi asam lemak untuk menyuplai energi
bagi fungsi tubuh yang lain, membentuk sebaian besa kolesterol, fosfolipid
c. Metabolisme protein, fungsi hati yaitu deaminasi asam amino, pembentukan
ureum untuk mengeluarkan amonia dari cairan tubuh, pembentukan protein
plasma dan interkonversi beragam asam amino dan membentuk senyawa lain
dari asam amino.
d. Lain-lain, fungsi hati yang lain diantaranya hati merupakan tempat
penyimpanan vitamin, hati sebagai tempat menyimpan besi dalam bentuk
feritin, hati membentuk zat-zat yang digunakan untuk koagulasi darah dalam
jumlah banyak dan hati mengeluarkan atau mengekresikan obat-obatan,
hormon dan zat lainnya.
Fungsi detoksifikasi hati dalam tubuh dilakukan oleh enzim hati dengan
cara oksidasi, hidrolisis, reduksi atau konjugasi senyawa-senyawa berbahaya bagi
tubuh yang selanjutnya diubah menjadi bentuk tidak aktifnya (DiPiro, Robert,
Gary, Gary, Barbara, and Michael, 2008). Hati yang normal mempunyai kapasitas
cadangan yang besar untuk melakukan fungsinya. Dalam keadaan normal, 80%
bagian dari hati dapat dihentikan aktivitasnya tanpa harus mengurangi fungsinya
(Chandrasoma and Taylor, 1995).
3. Kerusakan hati
Kerusakan hati disebabkan karena adanya kerusakan yang parah pada
sel-sel hepatosit atau kerusakan berulang sel parenkim. Hati memiliki kapasitas
cadangan sehingga manifestasi klinis dari kerusakan hati baru muncul ketika telah
terjadi kerusakan hati mencapai 80-90%. Kerusakan hati dibagi menjadi tiga
kategori, yaitu kerusakan hati akut, kerusakan hati kronis dan disfungsi hati tanpa
Berdasarkan manifestasi klinik dan pola spesifik pada histopatologi
kerusakan hati, dibagi menjadi:
a. Perlemakan hati (Steatosis), kerusakan sel hati yang ditandai dengan
penumpukan lemak pada sel hati. Obat-obat yang dapat menyebabkan
terjadinya steatonecrosis dengan cara mempengaruhi proses oksidasi asam
lemak di mitokondria.
b. Phospholipidosis, merupakan akumulasi dari fosfolipid sebagai pengganti
asam lemak. Fosfolipid dapat menelan badan lisosom pada sel hati.
c. Nekrosis sentrolobuler, sering terjadi pada induksi obat hepatotoksik yang
bergantung pada dosis. Nekrosis sentrolobuler biasanya terjadi karena
produksi metabolit beracun dari suatu senyawa. Kerusakan yang terjadi
menyebar ke luar mulai dari tengah lobus.
d. Nekrosis hepatoseluler tergeneralisasi, hampir mirip dengan terjadinya
perubahan karena adanya infeksi hati oleh virus. Waktu terjadinya satu
minggu setelah terinduksi zat beracun (DiPiro et al., 2008) .
e. Kolestasis, didefinisikan sebagai disorder sekresi empedu dan kolepoiesis
yang menyebabkan kemacetan saluran empedu intrahepatik maupun
ekstrahepatik. Kolestasis dapat menimbulkan penyakit kuning. Kolestasis
ditandai dengan meningkatnya asam empedu, enzim spesifik, dan
kolesterol dalam serum (Kuntz and Kuntz, 2008).
4. Perlemakan hati
Perlemakan hati dapat ditandai dengan adanya timbunan lemak melebihi
hati terjadi karena adanya akumulasi lipid terutama dalam bentuk trigliserida pada
hepatosit yang merupakan akibat kelebihan suplai asam lemak dari jaringan
adiposa. Perlemakan hati ditandai dengan meningkatnya enzim-enzim biokimia
dalam darah seperti AST dan ALT. Gangguan ini dapat terjadi akibat dari
gangguan sintesis protein, penurunan sintesis fosfolipid, dan gangguan pada
transfer VLDL melalui membran sel (Hodgson, 2009).
Penumpukan lemak pada hati dapat menimbulkan beberapa hal yang
tidak diinginkan diantaranya peningkatan apoptosis, pengingkatan regulasi TNF-ɑ
yang merupakan faktor pro-inflammatory dan pro-steatotic, disfungsi
mitokondria yang dapat meningkatkan reactive oxygen species (ROS) dan
menginduksi peroksidasi lipid pada membran sel (Tolman and Dalpiaz, 2007).
B. Hepatotoksin
Hepatotoksin adalah senyawa yang dapat menyebabkan kerusakan atau
gangguan pada sel-sel hati. Senyawa atau obat-obat yang dapat menyebabkan
kerusakan sel hati dibagi menjadi 2, yaitu:
a. Hepatotoksin teramalkan (Tipe A), yaitu senyawa yang memiliki efek
hepatotoksik hampir pada seluruh populasi yang terpejankan senyawa
tersebut. Contohnya tetrasiklin, asetaminofen, karbon tetraklorida dan alkohol
b. Hepatotoksin tak teramalkan (Tipe B), yaitu senyawa yang memiliki efek
hepatotoksik pada sebagian kecil populasi yang terpejankan senyawa tersebut.
Beberapa bergantung pada dosis pemberian, dan frekuensi kejadiannya sangat
jarang. Contoh agen hepatotoksik tak teramalkan adalah fenitoin, isoniazid
C. Karbon Tetraklorida
Karbon tetraklorida merupakan senyawa berupa cairan jernih yang
mudah menguap, tidak berwarna, memiliki bau khas, memiliki bobot molekul
153,82 dan sangat sukar larut dalam air (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat
dan Makanan, 1995). Struktur kimia ditunjukkan pada gambar 4.
Gambar 4. Struktur karbon tetraklorida (CCl4)
(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995).
Karbon tetraklorida merupakan xenobiotik yang lazim digunakan untuk
menginduksi peroksidasi lipid dan keracunan (Panjaitan, Handharyani, Chairul,
Masriani, Zakiah, and Manalu, 2007). Dalam endoplasmik retikulum hati, karbon
tetraklorida dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) yang menjadi
radikal bebas triklorometil, selanjutnya triklorometilperoxi menyebabkan
peroksidasi lipid sehingga mengganggu homeostatis Ca2+, dan akhirnya
menyebabkan kematian sel (Shanmugasundaram and Venkataraman, 2006).
Jenis kerusakan hati yang timbul akibat pemberian karbon tetraklorida
yang sering terjadi adalah perlemakan atau steatosis. Steatosis terjadi karena lipid
yang terbentuk akan menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi
lipoprotein sehingga transport lipid terganggu dan akan menyebabkan akumulasi
D. Albumin
Albumin merupakan protein yang paling banyak ditemukan di dalam
darah manusia. Albumin berfungsi sebagai sumber asam amino pada kasus
malnutrisi dan berguna untuk transport protein seperti bilirubin, urobilin, asam
lemak, hormon dan substansi asing, seperti penisilin, sulfonamid dan merkuri.
Albumin diproduksi oleh hati dan mewakili 50% dari produksi protein hepatik
(Atara and Lanza, 2002).
Sintesis albumin terutama di hati yitu ebanyak 12-25 g/hari pada manusia
dewasa normal dan merupakan 25% dari total protein hati setiap hari.
Katabolisme albumin terjadi di sel hati, dimana sebanyak ± 15% albumin yang
sudah tua usianya akan diurai kembali menjadi berbagai komponen asam amino
yang dibutuhkan tubuh. Distribusi albumin terjadi di dalam pembuluh darah
maupun di luar pembuluh darah (cairan intertitial). Pada penderita sirosis hati
akan dijumpai rendahnya produksi albumin (Kakizaki, Sohara, Yamazaki,
Horiguchi, Kanda, and Kenji, 2008).
Penilaian kerusakan fungsi hati dapat dilakukan dengan pemeriksaan
antara lain kadar enzim AST-ALT, kadar albumin, bilirubin dalam sampel darah,
dan faktor pembekuan (Lee, 2012). Albumin memainkan peranan penting dalam
kesehatan dan penyakit. Albumin merupakan penyumbang utama untuk tekanan
onkotik koloid (COP), mengikat endogen dan eksogen molekul, menengahi
koagulasi, dan membantu untuk mempertahankan permeabilitas mikrovaskuler
Nilai normal albumin pada manusia dewasa sekitar 3,8-5,1 g/dL atau
52-68% protein total, untuk anak-anak 4,0-5,8 g/dL, lalu untuk bayi 4,4-5,4 g/dL, dan
untuk bayi baru lahir berkisar 2,9-5,4 g/dL (Sutedjo, 2006). Sedangkan serum
albumin normal pada tikus yaitu 3,0-3,5 mg/dL (Triznarizki, 2007). Penurunan
albumin dapat dilihat bersamaan dengan pemeriksaan lain yaitu kenaikan ALT.
Seiring dengan kenaikan ALT pada kondisi hati yang tidak normal, albumin juga
mengalami penurunan (Sivakrishnan and Kottaimuthu, 2014).
E. Macaranga tanarius L. 1. Morfologi
M. tanarius L. merupakan pohon kecil dengan dahan agak besar (Gambar
5). Daun berseling agak membundar seperti jantung, tipis, dengan stipula besar
yang luruh, ujung daun bergerigi halus, dengan pangkal bulat. Perbungaan
bermulai di ketiak, bunga ditutupi oleh daun gagang. Buah kapsul berkokus 2, ada
kelenjar kekuningan di luarnya (Heim, 2015). Ukuran daun berkisar 8-32 x 5-28
cm. Panjang tangkai daun 6-27 cm (World Agroforesty Centre, 2002).
2. Taksonomi
Kerajaan : Plantae
Subkerajaan : Tracheobionta (tumbuhan berpembuluh)
Divisi : Spermatophyta (menghasilkan biji)
Sub-divisi : Magnoliophyta (tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)
Sub-kelas : Rosidae
Ordo : Euphorbiales
Suku : Euphorbiaceae
Marga : Macaranga
Jenis : Macaranga tanarius (L) Müll. Arg.
(World Agroforesty Centre, 2015)
3. Sinonim
Ricinus tanarius L., Macaranga molliuscula, Macaranga tomentosa
Druce, Mappa tanarius Blume (Starr, Star, and Loope, 2003).
4. Nama daerah
Tutup ancur (Jawa), mapu (Batak), mara (Sunda) (Proseanet, 2012).
5. Kandungan kimia
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Kumazawa, Murase,
Momose, dan Fukumoto (2014) melaporkan bahwa ekstrak metanol air M.
tanarius L. memiliki senyawa prenylflavonoids yang berfungsi sebagai
Berdasarkan penelitian Matsunami, et al., (2006) melaporkan bahwa
dalam daun M. tanarius mengandung macarangiosida A, macarangiosida B,
macarangiosida C, macarangiosida D dan mallophenol B, lauroside E, methyl brevifolin carboxylate, dan hyperin dan isoquercitrin. Pada tahun 2009, Matsunami, et al., menemukan tiga kandungan glukosida baru yaitu
(+)-pinoresinol 4-O-[6”-O-galloyl]-β-D-glukopiranoside, macarangioside E dan
macarangioside F.Penelitian yang dilakukan oleh Gunawan-Puteri dan Kawabata (2010) yang melaporkan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius L. memiliki
senyawa ellagitannins yaitu mallotinic acid, corilagin, macatannin A, chebulogic
acid, dan macatannin B (Gambar. 6).
6. Khasiat dan kegunaan
Macaranga merupakan genus besar yang diklasifikasikan lebih dari 30
spesies. Secara tradisional, bioaktivitas dari berbagai macam spesies Macaranga
dapat dijadikan sebagai pengobatan tradisional di wilayah tropis. Pengobatan
tradisional di Malaysia dan Thailand, dekok dari akar M. tanarius dimanfaatkan
sebagai antipiretik dan antitusif. Akar keringnya digunakan sebagai antiemetik,
dan daun segarnya dimanfaatkan sebagai antiinflamasi (Chulabhorn, Prawat,
Prachyawarakorn, and Ruchirawat, 2002). Di China, tanaman M. tanarius
dikomersilkan dalam pembuatan produk, seperti minuman sehat, dan ekstraknya
dimanfaatkan untuk pembuatan pasta gigi (Grosvenor, Gothard, Mc William,
Supriono, and Gray, 1995).
Berdasarkan penelitian Fukumoto dan Goto (2007), dikembangkan agen
antimikroba yang mengandung ekstrak M. tanarius, sebagai bahan aktif yang
berguna dalam produk oral untuk mencegah dan mengobati karies gigi, gingivitis,
dan peradangan gusi. Fukumoto dan Goto (2007) juga mengembangkan
penggunaan ekstrak M. tanarius dalam makanan dan minuman sehat dalam
mencegah dan mengobati kanker. Menurut penelitian (Matsunami, et al., 2006)
dibuktikan bahwa ekstrak metanol M. tanarius juga menunjukkan penangkapan
aktivitas radikal dari DPPH.
Berdasarkan penelitian lain yang dilakukan oleh Windrawati (2013)
mengenai efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air daun M.
(2011) melaporkan bahwa ekstrak metanol-air daun M. tanarius dapat
menurunkan kadar glukosa darah pada tikus yang terbebani glukosa.
7. Penyebaran dan budidaya
M. tanarius tersebar luas, dari Kepulauan Andaman dan Nicobar,
Indo-Cina, Cina Selatan, Taiwan dan Kepulauan Ryukyu, seluruh Malaysia, sampai ke
Australia Utara dan Timur. Jenis ini umum dijumpai di daratan Asia Tenggara
(Thailand Selatan, Semenanjung Malaya), dan pada banyak pulau di Malaysia.
Selain itu M. tanarius ditemukan di daerah bersemak di sepanjang Asia Selatan
dan Timur, khususnya bagian Selatan Cina, Korea, dan Okinawa, Jepang (World
Agroforesty Centre, 2011).
F. Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi merupakan proses pemisahan senyawa kimia yang terdapat
pada tanaman atau hewan ataupun komponen lain dengan menggunakan pelarut
yang sesuai. Senyawa kimia yang didapatkan dari proses ekstraksi merupakan
campuran dari hasil metabolit ataupun senyawa lain yang terdapat pada tanaman
(Khoddami, Wilkes, and Roberts, 2013).
Metode ekstraksi memiliki beberapa metode ekstraksi, yaitu ekstraksi
cara dingin dan ekstraksi cara panas. Dengan cara ini bahan kering hasil
penyerbukan diekstraksi pada suhu kamar secara berturut-turut dengan pelarut
yang kepolarannya makin tinggi: pertama heksana (atau petroleum eter),
kemudian kloroform (atau diklorometana), etil asetat, aseton, metanol dan
Hasil dari proses ekstraksi disebut ekstrak yang merupakan sediaan pekat
yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut
diuapkan dan masa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga
memenuhi baku yang ditetapkan (Departemen Kesehatan RI, 1995).
Fraksinasi adalah suatu metode pemisahan senyawa organik berdasarkan
kelarutan senyawa-senyawa tersebut dalam dua pelarut yang tidak saling
bercampur, biasanya antara pelarut air dan pelarut organik. Metode ini merupakan
ekstraksi suatu senyawa dari satu fasa ke fasa yang lain. Teknik pemisahan
ekstraksi cair-cair biasanya dilakukan dengan menggunakan corong pisah
(Separatory funnel). Ekstraksi akan semakin efektif bila dilakukan berulang kali
menggunakan pelarut dengan volume yang sedikit demi sedikit (Adijuwana and
Nur, 1989). Metode maserasi digunakan untuk menyari simplisia yang
mengandung komponen kimia yang mudah larut dalam cairan penyari tidak
mengandung benzoin, tiraks dan lilin (Sudjadi, 1986).
Fraksinasi bertingkat umumnya diawali dengan pelarut yang kurang
polar dan dilanjutkan dengan pelarut yang lebih polar. Tingkat polaritas pelarut
dapat ditentukan dari nilai konstanta dielektrik pelarut. Tahapan fraksinasi
bertingkat dengan menggunakan tiga macam pelarut yaitu n-heksan sebagai
pelarut non-polar, etil asetat sebagai pelarut semi polar, dan air yang berperan
G. Antioksidan
Secara biologis pengertian antioksidan adalah senyawa yang mampu
menangkal atau meredam dampak dari oksidan dalam tubuh. Antioksidan adalah
senyawa pemberi elektron. Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu
elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa
oksidan tersebut bisa dihambat (Winarsi, 2007).
Peran antioksidan pada penyakit hati adalah terjadinya stress oksidatif
yang diperantarai oleh radikal bebas. Beberapa penyakit hati seperti hepatitis
(A,B, dan C), serta perlemakan hati melibatkan stress oksidatif. Proses tersebut
dapat menyebabkan kerusakan sel sekunder dimana progresivitas dan regresivitas
yang berlangsung tergantung pada keseimbangan antara oksidasi dan antioksidasi
(Manco, Devito, Marcellini, Mingrone, and Nobili, 2008).
H. Landasan Teori
Hati merupakan salah satu organ terbesar di dalam tubuh terletak di
dalam rongga perut sebelah kanan (Wibowo, 2008). Salah satu peranan penting
hati di dalam tubuh adalah mendetoksifikasi senyawa-senyawa toksik yang masuk
dalam tubuh (Seifter, Ratner and Sloane, 2005). Kerusakan hati terjadi karena
adanya kerusakan yang parah pada sel-sel hepatosit atau kerusakan berulang pada
sel parenkim (Crawford and Liu, 2010). Salah satu kerusakan hati yang sering
terjadi adalah perlemakan (steatosis) yang merupakan penumpukan trigliserida di
hepatosit.
Kerusakan hati ditandai dengan peningkatan nilai ALT-AST, kadar ALP,
menyebabkan penurunan produksi albumin di hati. Albumin merupakan protein
penting yang berfungsi untuk proses metabolisme dalam tubuh. Adapun fungsi
dari uji albumin, yaitu untuk mengukur kemampuan hati dalam sintesis protein
(Singh dkk., 2011). Oleh karena itu uji kadar albumin dapat digunakan sebagai
salah satu parameter untuk mengetahui kerusakan yang terjadi di hati.
Karbon tetraklorida merupakan senyawa model hepatotoksin yang
menginduksi kerusakan hati khususnya steatosis. Karbon tetraklorida
dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas
triklorometil. Triklorometil dengan oksigen akan membentuk radikal
triklorometilperoksi yang sangat reaktif, radikal ini dapat menyerang lipid
membran endoplasmik retikulum yang menyebabkan gangguan homeostatis Ca2+
dan akhirnya akan menyebabkan kematian sel (Timbrell, 2009).
Pada penelitian Matsunami, et al., 2006 melaporkan kandungan dari M.
tanarius yang diisolasi dari ekstrak metanol daun M. tanarius mempunyai
aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH yang dapat berpotensi sebagai zat
antioksidan. Penelitian ekstrak metanol-air daun M. tanarius telah dilakukan oleh
Windrawati (2013) dengan penginduksi karbon tetraklorida praperlakuan jangka
panjang dan jangka pendek oleh Tiala (2013) pada waktu yang bersamaan dan
terbukti bahwa tanaman ekstrak metanol-air dengan penginduksi karbon
tetraklorida memiliki efek hepatoprotektif. Berdasarkan penelitian sebelumnya
mengenai efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air daun M. tanarius sudah pernah
dilakukan, untuk itu penelitian ini akan mengembangkan penelitian sebelumnya
dengan pemberian FHEMM kadar albumin pada tikus terinduksi karbon
tetraklorida dapat dinaikkan dan melihat apakah ada kekerabatan antara
peningkatan dosis FHEMM dengan peningkatan kadar albumin.
I. Hipotesis
Pemberian oral FHEMM secara jangka panjang dapat meningkatkan
kadar albumin dan adanya kekerabatan dosis FHEMM dengan kenaikan kadar
28
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni yang
dilakukan perlakuan terhadap sejumlah variabel penelitian. Rancangan penelitian
ini termasuk rancangan acak lengkap pola searah.
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional
Variabel-variabel yang digunakan adalah sebagai berikut :
1. Variabel utama
a. Variabel bebas. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah variasi
dosis pemberian FHEMM yang dibuat dalam 3 peringkat dosis.
b. Variabel tergantung. Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah
kadar albumin serum tikus betina galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida setelah pemberian jangka panjang FHEMM.
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali. Hewan uji yang digunakan yaitu tikus
betina galur Wistar dengan berat badan 130-180 g dan berumur 2-3
bulan, frekuensi pemberian FHEMM satu kali sehari selama enam
hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama, cara
pemberian FHEMM secara per oral dan karbon tetraklorida secara
intraperitonial, dan bahan uji yang digunakan berupa daun M.
tanarius L. yang diperoleh dari daerah Paingan, Depok, Sleman,
b. Variabel pengacau tak terkendali. Kondisi patologis dari tikus betina
galur Wistar yang digunakan sebagai hewan uji.
3. Definisi operasional
a. Ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Ekstrak kental yang diperoleh
dengan mengekstraksi serbuk kering daun M. tanarius seberat 40,0 g
yang dilarutkan dalam 200,0 mL pelarut metanol-air secara maserasi
selama 24 jam. Kemudian disaring dengan kertas saring, dievaporasi
dan diuapkan dalam oven selama 24 jam pada suhu 50ºC, hingga
bobot pengeringan tetap.
b. Fraksi heksan-etanol daun M. tanarius. Fraksi dihasilkan dari proses
maserasi ekstrak metanol-air daun M. tanarius L. Sejumlah ekstrak
pekat yang diperoleh, ditimbang dan dilarutkan dengan pelarut
heksan-etanol 1:1 dimana perbandingan antara pelarut dan ekstrak
pekat adalah 1:5. Setelah dilarutkan dalam labu erlenmeyer,
dilakukan penggojogan menggunakan shaker selama 24 jam.
Kemudian disaring menggunakan corong buchner yang dilapisi
kertas saring dengan bantuan pompa vakum lalu dioven selama 24
jam pada suhu 50°C hingga bobot pengeringan tetap.
c. Kadar albumin. Kemampuan FHEMM pada dosis tertentu untuk
meningkatkan kadar albumin yang signifikan dibanding kontrol
hepatotoksin pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon
d. Jangka panjang. Pemberian FHEMM satu kali sehari selama enam
hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama.
C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama
a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus betina
galur Wistar dengan berat badan 130-180 g dan umur 2-3 bulan yang
diperoleh dari dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
b. Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius L. yang diperoleh
dari daerah Paingan, Depok, Sleman, Yogyakarta.
2. Bahan kimia
a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang
diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
b. Kontrol negatif yang digunakan CMC-Na 1%.
c. Pelarut hepatotoksin digunakan olive oil (Bertolli®).
d. Pelarut ekstrak digunakan metanol teknis dan aquadest yang diperoleh
dari toko CV General Labora dekat rs. Sardjito Yogyakarta.
e. Etanolteknis diperoleh dari toko CV General Labora dekat rs. Sardjito
Yogyakarta
f. Heksan teknis diperoleh dari toko CV General Labora dekat rs.
Sardjito Yogyakarta
Komposisi dan konsentrasi dari reagen Albumin BCG (Thermo Scientific) yang
digunakan adalah sebagai berikut.
Tabel I. Komposisi dan konsentrasi reagen Albumin BCG
Komposisi Konsentrasi
Brom Cresol Green 0,27 mmol/L
TRIS 55 mmol/L
Succinic Acid 100 mmol/L
D. Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain oven, timbangan
analitik, mesin penyerbuk, sendok kayu, ayakan, beaker glass, gelas ukur, batang
pengaduk, cawan porselin, penangas air, rotary evaporator, shaker, corong
Buchner, erlenmeyer, stopwatch, kertas saring, labu alas bulat, labu ukur, pipet
tetes, pipet volume, pipa kapiler, spuit injeksi per oral, syringe 3 cc Terumo®,
syringe 1 cc Terumo®, moisture balance, dan syringe 6 cc Terumo®.
E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi tanaman M. tanarius
Determinasi tanaman M. tanarius dilakukan dengan mencocokkan
ciri-ciri morfologi M. tanarius dengan buku acuan determinasi. Determinasi
dilakukan di Unit II Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
2. Pengumpulan bahan
Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius yang masih segar dan
diperoleh dari daerah Paingan, Depok, Sleman, Yogyakarta pada bulan
Februari.
3. Pembuatan serbuk
Daun M. tanarius dicuci bersih dibawah air mengalir. Setelah bersih,
daun diangin-anginkan atau dilap dengan lap bersih hingga daun tidak tampak
basah kemudian dilakukan pengeringan menggunakan oven. Tujuan dari
pengeringan adalah melindungi daun dari kerusakan sinar matahari langsung.
Pengeringan dengan oven dilakukan pada 40ºCselama 72 jam.Setelah kering
daun diremas kecil-kecil dan dibuat serbuk lalu diayak dengan ayakan nomor
50. (Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1989) supaya
kandungan fitokimia yang terkandung dalam daun M. tanarius lebih mudah
terekstrak karena luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut semakin
besar.
4. Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius
Penetapan kadar air dilakukan termopan, yaitu dengan menguji susut
penguapan dari simplisia serbuk daun M. tanarius berdasarkan Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia (1989),
penetapan kadar air secara sederhana menggunakan alat moisture balance.
Pengujian dilakukan dengan cara memasukkan sampel kurang lebih 5 g
sampel dan menimbang bobot serbuk sebagai bobot sebelum pemanasan
(bobot a). Kemudian alat dipanaskan pada suhu 110ºC selama 15 menit, dan
setelah itu menimbang bobot serbuk setelah pemanasan (bobot b). Selisih
kadar air dilakukan perhitungan pada serbuk setelah pemanasan untuk
memenuhi standarisasi simplisia yang ditentukan. Penetapan kadar air pada
ekstrak dan fraksi tidak dilakukan dalam penelitian.
5. Pembuatan FHEMM
Sebanyak 40,0 g serbuk kering daun M. tanarius diekstraksi secara
maserasi dengan melarutkan serbuk dalam 100 mL pelarut metanol dan 100
mL pelarut aquadest pada suhu kamar selama 24 jam. Tujuan dilarutkan
dalam pelarut metanol-air agar senyawa kimia yang terkandung dalam daun
M. tanarius dapat larut dalam pelarut. Setelah itu dilakukan perendaman dan
penggojogan menggunakan shaker, hasil maserasi disaring menggunakan
corong buchner dilapisi kertas saring. Larutan hasil saringan dipindahkan
dalam labu alas bulat untuk dievaporasi. Tujuan proses evaporasi adalah
menguapkan cairan penyari pada proses maserasi. Prinsip alat vaccum
evaporator adalah menguapkan pelarut dengan suhu rendah dan berputar
dengan menggunakan tekanan tinggi untuk membantu proses penguapan.
Hasil evaporasi dituangkan dalam cawan porselin yang telah ditimbang
sebelumnya, agar mempermudah perhitungan rendemen ekstrak yang akan
diperoleh. Cawan porselin yang berisi larutan hasil maserasi dimasukkan
dalam oven untuk diuapkan selama 24 jam dengan suhu 50ºC untuk
mendapatkan ekstrak metanol-air daun M. tanarius yang kental dengan bobot
pengeringan ekstrak yang tetap.
Selanjutnya pembuatan FHEMM dilakukan secara maserasi
dilarutkan dengan pelarut heksan-etanol 1:1 ke dalam labu erlenmeyer
dimana volume pelarut disesuaikan dengan bobot ekstrak 1:5. Hasil maserasi
disaring menggunakan kertas saring dan corong buchner dengan bantuan
pompa vakum. Hasil saringan diuapkan menggunakan rotary evaporator dan
kemudian dimasukkan dalam oven selama 24 jam pada suhu 50°C hingga
didapat bobot tetap fraksi.
Menghitung rata-rata rendemen enam replikasi ekstrak metanol-air
daun Macaranga tanarius kental yang telah dibuat.
Rendemen ekstrak = berat cawan ekstrak kental – berat cawan kosong
Rata-rata rendemen =
6. Pembuatan larutan sediaan FHEMM
Larutan FHEMM dilarutkan dalam CMC-Na 1% dengan perbandingan
1:5. Sebanyak 0,6 g FHEMM dilarutkan dalam 20 mL CMC-Na 1%,
kemudian dimasukkan dalam labu ukur 25 mL, dan diadd sampai tanda batas.
7. Pembuatan larutan CMC-Na 1% sebagai pelarut FHEMM
Ditimbang sebanyak 5,0 gram CMC-Na, kemudian dilarutkan
menggunakan aquadest 400,0 mL dan didiamkan selama 24 jam hingga
CMC-Na mengembang. Larutan tersebut kemudian diadd dengan aquadest
hingga 500,0 mL pada labu ukur 500,0 mL.
8. Pembuatan larutan karbon tetraklorida (CCl4)
Larutan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida,
dibuat dalam konsentrasi 50% dengan perbandingan karbon tetraklorida dan
9. Uji pendahuluan
a. Penetapan dosis toksin karbon tetraklorida. Dosis karbon tetraklorida
sebagai hepatotoksik yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada
penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), bahwa dosis 2mg/kgBB terbukti
mampu meningkatkan aktivitas serum ALT dan AST dan penurunan
kadar albumin pada tikus bila diberikan secara intraperitonial.
b. Penetepan dosis FHEMM. Penetapan dosis FHEMM dapat ditentukan
dengan melakukan orientasi dosis. Dosis tertinggi yang dapat ditetapkan
yaitu 137,14 mg/kgBB. Peringkat dosis II ditetapkan dengan menurunkan
seperdua dari dosis tertinggi (½ x (2 mL/350 gBB=68,57 mg/kgBB) dan
peringkat dosis I ditetapkan dengan menurunkan seperdua dari peringkat
dosis II (½ x 1 mL/350 gBB= 34,28 mg/kgBB).
c. Penetapan waktu pencuplikan darah. Penetapan waktu pencuplikan darah
ditentukan melalui orientasi dengan tiga kelompok perlakuan waktu, yaitu
pada jam ke–0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Setiap
kelompok perlakuan terdiri dari 5 hewan uji yang pengambilan darahnya
dilakukan melalui pembuluh sinus orbitalis mata. Kemudian aktivitas
ALT serum tikus yang terinduksi karbon tetraklorida diukur.
10. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji
Sejumlah tiga puluh ekor tikus betina galur Wistar dibagi secara acak ke
