i
INISIASI KALUS EMBRIOGENIK
STROBERI (Fragaria sp.) DENGAN PEMBERIAN
IBA (Indolebutyricacid) DAN BAP (Benzylaminopurine
)
SKRIPSI
Skripsi ini Diajukan sebagai salah satu syarat
untuk memperoleh gelar Sarjana Pertanian
pada Fakultas Pertanian Universitas Udayana
Oleh
Agung Widya Antasari Dewi
NIM. 1005105057
KONSENTRASI AGRONOMI DAN HORTIKULTURA
PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS UDAYANA
ii
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA SKRIPSI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan
tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Saya bersedia
dikenakan sanksi sebagaimana diatur dalam aturan yang berlaku apabila terbukti
bahwa skripsi ini bukan hasil karya saya sendiri atau mengandung tindakan
plagiarism.
Demikian pernyataan ini dibuat dengan sebenarnya untuk dapat
dipergunakan seperlunya.
Denpasar, 5 Januari 2016
Yang menyatakan
Agung Widya Antasari Dewi
iii ABSTRAK
AGUNG WIDYA ANTASARI DEWI. NIM. 1005105057. Inisiasi Kalus Embriogenik Stroberi (Fragaria sp.) dengan Pemberian IBA (Indolebutyricacid) dan BAP (Benzylaminopurine). Pembimbing I Ida Ayu Putri Darmawati, SP., M.Si. Pembimbing II Ir. Cokorda Gede Alit Semarajaya, M.S.
Mikropropagasi atau perbanyakan secara in vitro merupakan salah satu metode perbanyakansecara vegetatif yang dapat menghasilkan bibitdalam jumlah banyak dalam waktu relatif cepat, memiliki sifat yang sama dengan induknya, dengan proses pembibitan tidak tergantung musim. Pembentukan bibit pada stoberi dapat dilakukan secara tidak langsung dengan kalus.
Penelitian ini bertujuan untuk menemukan pengaruh zat pengatur tumbuh IBA (Indolebutyricacid) dan BAP (Benzylaminopurine) dan menemukan kombinasi terbaik dalam induksi kalus stroberi.
Penelitian ini dilakukan di Unit Pelaksanaan Teknis (UPT) Kultur Jaringan Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Udayana. Bahan tanam menggunakan pangkal daun stroberi (Fragaria sp.)
Zat pengatur tumbuh IBA dan BAP pada media Murashige Skoog (MS) mampu menginisiasi proses pembentukan kalus pada eksplan daun. Penggunaan 0,5 ppm IBA + 0,5 ppm BAP dan 1 ppm IBA + 1 ppm BAP paling efektif dalam pelengkungan maka pelengkungan relatif cepat (2,6 hari). Penggunaan 1 ppm IBA + 1 ppm BAP pada media MS paling efektif dalam pembengkakan (6,3 hari) namun dalam 30 hari pengamatan belum mampu menumbuhkan kalus.
Perlu dikaji metode sterilisasi untuk meminimalisasi kontaminasi dan browning pada eksplan daun stroberi dan alat yang digunakan serta dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mendapatkan konsentrasi yang tepat dengan kombinasi IBA dan BAP untuk mendapatkan kalus.
iv ABSTRACT
AGUNG WIDYA ANTASARI DEWI. NIM. 1005105057. Initiation Of Callus Embiogenik Strawberries with Administration IBA (Indolebutyricacid) and BAP (Benzylaminopurine). Pembimbing I Ida Ayu Putri Darmawati, SP., M.Si. Pembimbing II Ir. Cokorda Gede Alit Semarajaya, M.S.
Micropropagation or multiplication method by vegetative that could produce seedling in the high number and in a short time, had the same character as its mains, with a progress that not depends on the weather.
This research intend to find the effect of grow regulator IBA
(Indolebutyricacid) and BAP (Benzylaminopurine) and to find the best
combination on producing callus strawberry. This research done in Unit Pelaksanaan Teknis (UPT) kultur jaringan Program Study Agroekoteknologi, Faculty of Agriculture, Udayana University. The materials use by the base of strawberry leaf.
Growth regulators IBA and BAP on Murashige Skoog (MS) could grown a callus. Usage 0,5 ppm IBA + 0,5 ppm BAP is the most effective in deflexion. Relative fast in deflexion (2,6 days). Usage 1 ppm IBA + 1 ppm BAP on MS is the most effective in expansion (6,3 days) but in 30 days mandating its not grown any callus.
It require toned to study the sterilisasion method to minimize the contamination and browning in explants strawberry leaf and a tool that in use to do research more to get the right concentration with IBA and BAP combination to get the callus.
v
RINGKASAN
AGUNG WIDYA ANTASARI DEWI. NIM. 1005105057. Inisiasi Kalus Embriogenik Stroberi (Fragaria sp.) dengan Pemberian IBA (Indolebutyricacid) dan BAP (Benzylaminopurine). Pembimbing I Ida Ayu Putri Darmawati, SP., MSi. Pembimbing II Ir. Cokorda Gede Alit Semarajaya, M.S.
Stroberi (Fragaria x ananassa Duch) merupakan salah satu komoditas
buah-buahan yang penting didunia, terutama untuk negara-negara beriklim
subtropis. Stroberi dapat tumbuh dan berproduksi dengan baik dalam kondisi
iklim seperti di Indonesia. Varietas stroberi introduksi yang dapat ditanaman di
Indonesia salah satunya adalah varietas rosalinda karena memiliki hasil panen
tinggi dengan aroma buah yang kuat. Mendapatkan bibit tanaman stroberi dengan
jumlah banyak yang berkualitas dan dengan waktu yang relatif singkat
dibutuhkan upaya dari segi budidaya.
Perbanyakan tanaman stroberi secara konvensional dengan runner atau
biji, mempunyai banyak kelemahan diantaranya menghasilkan bibit dengan waktu
yang lama, jumlah bibit sedikit dan bergantung dengan cuaca. Untuk mengatasi
kelemahan tersebut, perbanyakan dapat dilakukan secara mikropropagasi.
Mikropropagasi atau perbanyakan secara in vitro merupakan salah satu metode
perbanyakansecara vegetatif yang dapat menghasilkan bibit dalam jumlah banyak
dalam waktu relatif cepat, memiliki sifat yang sama dengan induknya, dengan
proses pembibitan tidak tergantung musim
Salah satu metode perbanyakan planlet dalam kultur in vitro adalah
melalui produksi induksi kalus. Kalus adalah sekumpulan sel amorphous (belum
terdiferensiasi) yang terbentuk dari sel-sel yang membelah terus menerus secara in
vitro atau di dalam tabung.
Faktor penentu keberhasilan kultur jaringan adalah penggunaan zat
pengatur tumbuh (ZPT) pada media. Jenis konsentrasi ZPT sangat tergantung
pada jenis tanaman dan tujuan kulturnya. Penelitian ini bertujuan untuk
vi
(Benzylaminopurine) dan menemukan kombinasi terbaik dalam menginduksi
terbentuknya kalus stroberi.
Penelitian ini dilakukan di Unit Pelaksanaan Teknis (UPT) Kultur Jaringan
Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Udayana mulai
bulan November 2014 - Februari 2015. Bahan taman menggunakan pangkal daun
stroberi, media dasar MS, Bahan tambahan lainnya agar (SWALLOW GLOBE
BRAND), gula, dan air mineral steril (aquades), zat pengatur tumbuh IBA dan
BAP, bahan sterilan benlate, clorox, detergent, dan alkohol. Peralatan yang
digunakan meliputi pisau, panci, gelas ukur, timbangan analitik, magnetic stirrer,
pipet, botol infus, plastik, karet gelang, sendok, autoklaf, pinset, spatula, petridish,
Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), korek, pH Meter, dan lampu Bunsen.
Percobaan ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktor
tunggal dengan enam ulangan. Perlakuan yang dicobakan adalah kombinasi
konsentrasi IBA (Indolebutyric acid) dan BAP (Benzylaminopurine) pada media
MS sebagai berikut : P0 = 0,0 ppm IBA + BAP, P1 = 0,5 ppm IBA + 0,5 ppm BAP, P2 = 1 ppm IBA + 1 ppm BAP, P3 = 1,5 ppm IBA + 1,5 ppm BAP, P4 = 2
ppm IBA + 2 ppm BAP, P5 = 2,5 ppm IBA + 2,5 ppm BAP.
Hasil analisis statistik menunjukan pemberian zat pengatur tumbuh ZPT
IBA dan BAP berpengaruh nyata terhadap variabel saat pelengkungan eksplan,
saat pembengkakan dan persentase pembengkakan, Namun sampai akhir
pengamatan (30 hst) perlakuan zat pengatur tumbuh IBA dan BAP tidak
menunjukan pertumbuhan terhadap kalus.
Penggunaan 0,5 ppm IBA + 0,5 ppm BAP pada media MS terjadinya
pelengkungan lebih cepat (2,6 hari) dengan persentase 100%. Sedangkan
penggunaan 1 ppm IBA + 1 ppm BAP pada media MS terjadinya pembengkakan
lebih cepat (6,3 hari) dengan persentase 100%.
Perlu dikaji metode sterilisasi untuk meminimalisir kontaminasi dan
browning pada eksplan daun stroberi dan alat yang digunakan serta dilakukan
penelitian lebih lanjut untuk mendapatkan konsentrasi yang tepat dengan
vii
INISIASI KALUS EMBRIOGENIK
STROBERI (Fragaria sp.) DENGAN PEMBERIAN
IBA (Indolebutyricacid) DAN BAP (Benzylaminopurine
)
Agung Widya Antasari Dewi
NIM. 1005105057
Menyetujui,
Pembimbing I
Ida Ayu Putri Darmawati, SP., M.Si NIP. 19710915 200003 2 003
Pembimbing II
Ir. Cokorda Gede Alit Semarajaya, MS NIP.19571217 198601 1 001
Mengesahkan, Dekan Fakultas Pertanian
Universitas Udayana
Prof. Dr. Ir. I Nyoman Rai, MS NIP : 19630515 198803 1 001
viii
INISIASI KALUS EMBRIOGENIK
STROBERI (Fragaria sp.) DENGAN PEMBERIAN
IBA (Indolebutyricacid) DAN BAP (Benzylaminopurine
)
Dipersiapkan dan diajukan oleh
Agung Widya Antasari Dewi NIM. 1005105057
Telah diuji dan dinilai oleh Tim Penguji Pada tanggal 13 Januari 2016
Berdasarkan SK Dekan Fakultas Pertanian Universitas Udayana No : 07/UN14.1.23/DL/2016
Tanggal : 13 Januari 2016 Tim Penguji Skripsi adalah :
Ketua : Dr. Ir. I Dewa Nyoman Nyana, M.Si Anggota
1. Ir. I Putu Dharma, M.Si
ix
RIWAYAT HIDUP
Agung Widya Antasari Dewi lahir di Denpasar,
pada tanggal 3 Oktober 1992. Penulis merupakan anak
pertama dari pasangan I Nyoman Sumantara dengan A.A
Nana Antarini.
Penulis menempuh pendidikan di TK Bakti (1997-1998),
pendidikan dasar di SDN 17 Kesiman (1998-2004), pendidikan menengah
pertama di SMP Cipta Dharma (2004-2007), dan pendidikan menengah atas di
SMA Dwijendra Denpasar (2007-2010). Selanjutnya penulis melanjutkan
pendidikan di program studi Agroekoteknologi, konsentrasi Agronomi dan
x
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Ida Sang Hyang Widhi Wasa,
karena berkat dan rahmat-Nya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Inisiasi Kalus Embriogenik Stroberi (Fragaria Sp.) dengan Pemberian IBA
(Indolebutyricacid) Dan BAP (Benzylaminopurine).” tepat pada waktunya.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana
Pertanian pada Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas
Udayana.
Penulis menyadari bahwa selesainya penulisan Skripsi ini tidak terlepas dari
bimbingan, perhatian, bantuan dan arahan Pembimbing, Bapak dan Ibu Dosen
serta teman-teman yang telah bersedia meluangkan waktunya. Pada kesempatan
ini, penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Prof. Dr. Ir. I Nyoman Rai, M.S. selaku Dekan Fakultas Pertanian
Udayana Denpasar Bali
2. Ir. I Nyoman Puja, M.S. selaku Ketua Jurusan/Program Studi
Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Udayana atas segala
fasilitas yang diberikan pada penulisan Skripsi ini.
3. Dr. Ir. Rindang Dwiyani, M.Sc. Selaku kepala Unit Pelaksanaan Teknis
(UPT) Kultur Jaringan Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas
Pertanian, Universitas Udayana atas fasilitas yang diberikan kepada
penulis selama menyelesaikan percobaan di laboraturium kultur jaringan
ini.
4. Ida Ayu Putri Darmawati, SP.,M.Si. selaku pembimbing I yang telah
banyak memberikan bimbingan, arahan, nasehat serta motivasi sehingga
penulis dapat menyelesaikan Skripsi ini.
5. Ir. Cokorda Gede Alit Semarajaya, M.S. selaku pembimbing II yang telah
memberikan arahan, bimbingan, saran, serta nasehat selama pelaksanaan
penelitian hingga penulis dapat menyelesaikan Skripsi ini
6. Prof. Dr. Ir. I Nengah Netera Subadiyasa, M.S. selaku pembimbing
xi
7. Keluarga tercinta ayah, ibu, adik-adikku, dan sanak saudara yang saya
cintai dan banggakan atas dukungan do’a moril, dan materiil selama
penelitian berlangsung sampai penyelesaian penulisan Skripsi ini.
8. I Komang Alit Darmawan yang setia menemani, membantu dan
memberikan semangat selama penelitian hingga penyelesaian Skripsi ini.
9. Kepada teman-teman baik ku “Rumah Kecil” serta pihak-pihak yang tidak
mungkin disebutkan satu persatu yang memberi semangat dan telah
membantu dalam penyelesaian Skripsi ini.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan Skripsi ini,
terdapat kesalahan dan kekurangan yang disebabkan karena keterbatasan
kemampuan serta pengalaman penulis. Oleh karena itu, penulis mengharapkan
adanya kritik dan saran dari pembaca yang sifatnya membangun demi
kesempurnaan Skripsi ini. Akhir kata dengan kerendahan hati penulis berharap
semoga Skripsi ini bermanfaat, terutama bagi pembaca yang memerlukan
informasi yang berkaitan dengan penelitian ini.
Denpasar, Januari 2016
1
I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Stroberi (Fragaria x ananassa Duch) merupakan salah satu komoditas
buah-buahan yang penting didunia, terutama untuk negara-negara beriklim subtropis yaitu
bumi yang berada di utara dan selatan setelah wilayah tropis yang dibatasi oleh garis
balik utara dan garis balik selatan pada lintang 23,5° utara dan selatan. Stroberi dapat
tumbuh dan berproduksi dengan baik dalam kondisi iklim seperti di Indonesia.
Varietas stroberi introduksi yang dapat ditanam di Indonesia salah satunya adalah
varietas rosalinda karena memiliki aroma buah yang kuat (Rohmayanti, 2013).
Mendapatkan bibit tanaman stroberi dengan jumlah banyak yang berkualitas dan
dengan waktu yang relatif singkat dibutuhkan upaya dari segi budidaya. Perbanyakan
tanaman stroberi secara konvensional dengan runner atau biji, mempunyai banyak
kelemahan diantaranya menghasilkan bibit dengan waktu yang lama dan bergantung
dengan cuaca. Untuk mengatasi kelemahan tersebut, perbanyakan dapat dilakukan
secara mikropropagasi. Mikropropagasi atau perbanyakan secara in vitro merupakan
salah satu metode perbanyakansecara vegetatif yang dapat menghasilkan bibit dalam
jumlah banyak dalam waktu relatif cepat,memiliki sifat yang sama dengan induknya,
denganproses pembibitan tidak tergantung musim(Suryowinoto, 1996).
Salah satu metode perbanyakan planlet dalam kultur in vitro adalah melalui
kalus. Kalus adalah sekumpulan sel amorphous (belum terdiferensiasi) yang
terbentuk dari sel-sel yang membelah terus menerus secara in vitro atau di dalam
2
Secara histologi, kalus berasal dari pembelahan berkali-kali sel-sel parenkim di
sekitar berkas pengangkut dan beberapa elemen penyusun berkas pengangkut kecuali
xilem (Sudarmadji, 2003; Moega, 1991).
Faktor penentu keberhasilan dalam kultur in vitro salah satunya ditentukan oleh
keberadaan Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) dalam media. ZPT yang umum digunakan
dari golongan sitokinin dan auksin. Auksin banyak digunakan dalam kultur jaringan
untuk perpanjangan sel, pembentukan akar adventif, dan menghambat pembentukan
tunas adventif dan tunas ketiak. IBA (indolebutyricacid) termasuk dalam golongan
auksin, sedangkan sitokinin adalah senyawa turunan adenine dan berperan dalam
pengaturan pembelahan sel dan morfogenesis. Sitokinin digunakan untuk merangsang
diferensiasi tunas adventif dari kalus menjadi organ serta aktivitas utamanya adalah
mendorong pembelahan sel, dengan salah satu jenisnya adalah BAP
(Benzylaminopurine) (Karjadi dan Buchory, 2008 ; Abbas, 2011).
Kombinasi zat pengatur tumbuh IBA dan BAP sudah pernah diteliti terhadap
viabilitas stek vanili (Vanilla planifolia Andrews) secara kultur air. Pemberian ZPT
IBA 0,2 sampai 0,6 ppm dapat meningkatkan jumlah daun, meningkatkan kandungan
klorofil pada daun tunas dan pada diameter batang pada tunas vanili (Dedystiawan,
2008). Zat pengatur tumbuh BAP juga dapat dikombinasikan dengan ZPT NAA pada
media MS untuk mikropropagasi tunas stroberi (Sitepu, 2009). Pemanfaatan zat
pengatur tumbuh IBA dan BAP pada pembentukan kalus stoberi belum banyak
3
1.2 Rumusan Masalah
1. Apakah pemberian zat pengatur tumbuh IBA (Indolebutyricacid) dan BAP
(Benzylaminopurine) mampu menginduksi kalus stroberi ?
2. Kombinasi IBA (Indolebutyricacid) dan BAP (Benzylaminopurine) yang mana
mampu menumbuhkan kalus storberi ?
1.3 Tujuan Penelitian
1. Mengetahui pengaruh pemberian zat pengatur tumbuh yaitu IBA
(Indolebutyricacid) dan BAP (Benzylaminopurine) terhadap induksi kalus
stroberi.
2. Menemukan kombinasi terbaik zat pengatur tumbuh IBA (Indolebutyricacid)
dan BAP (Benzylaminopurine) dalam produksi kalus stroberi.
1.4 Hipotesis
1. Pemberian zat pengatur tumbuh IBA (Indolebutyricacid) dan BAP
(Benzylaminopurine) mampu menginduksi terbentuknya kalus stroberi.
2. Kombinasi tertentu zat pengatur tumbuh IBA (Indolebutyricacid) dan BAP
(Benzylaminopurine) akan memberikan pertumbuhan terbaik terhadap
1
II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Morfologi Tanaman Stroberi (Fragaria sp)
Stroberi merupakan tanaman buah berupa herba yang ditemukan pertama kali di
Chili, Amerika. Salah satu spesies tanaman stroberi yaitu Fragaria chiloensis
menyebar ke berbagai negara Amerika, Eropa dan Asia. Selanjutnya spesies lain,
yaitu F. vesca L. lebih menyebar luas dibandingkan spesies lainnya. Jenis stroberi ini
pula yang pertama kali masuk ke Indonesia.
Morfologi tanaman stroberi terdiri dari akar, batang, daun, bunga, dan buah.
Klasifikasi botani tanaman stroberi menurut Lawrence (1960) adalah sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Keluarga : Rosaceae
Genus : Fragaria
Spesies : Fragaria spp
Struktur akar tanaman stroberi terdiri atas pangkal akar (collum), batang akar
(corpus), ujung akar (apeks), bulu akar (pilus radicalis), dan tudung akar (calyptras).
Tanaman stroberi berakar tunggang (radix primaria), akarnya terus tumbuh
2
tersebut hanya menembus lapisan tanah atas sedalam 15-45 cm, tergantung jenis dan
kesuburan tanahnya (Harianingsih, 2010).
Gambar 2.1. Tanaman Stroberi (Fragaria x ananassa Duch, var. Rosalinda)
Tanaman stroberi (Gambar 2.1) memiliki batang yang pendek seolah-olah tidak
berbatang dan bersifat merayap yang dapat hidup sampai bertahun-tahun. Namun,
kadang-kadang hanya ditumbuhkan sebagai tanaman semusim. Beberapa jenis ada
yang selalu berdaun, namun ada juga yang meranggas, tergantung tempat
dibudidayakan (Ashari, 2006). Stroberi memiliki batang utama yang tersusun dengan
daun-daun yang melingkari batang dengan jarak yang sangat rapat. Batang stroberi
sangat pendek, bertekstur lunak dan tidak berkayu. Batangnya pun bersembunyi
diantara tangkai-tangkai daun stroberi (Kurnia, 2005).
Daun pada tanaman stroberi berfungsi sebagai tempat fotosintesis, transpirasi,
dan sebagai alat pernapasan. Daun stroberi dengan tepi bergigi merupakan daun
trifoliate (Gambar 2.2). Bagian-bagian daun terdiri epidermis, jaringan palisade,
jaringan spons dan berkas pembuluh angkut daun. Masa pertumbuhan vegetatif
membentuk daun-daun baru 8-12 hari dan bertahan 1-3 bulan kemudian kering.
3
Gambar 2.2. Daun Stroberi (Fragaria x ananassa Duch, var. Rosalinda)
Bunga tanaman stroberi memiliki lima sepal (kelopak bunga), lima petal (daun
mahkota), 20 - 35 stamen dan ratusan putik yang menempel pada dasar receptacle
(dasar bunga) (Gunawan, 1992). Bunga yang pertama kali mekar adalah bunga
primer, kemudian disusul oleh bunga sekunder, tersier dan kuartener.
Buah stroberi berwarna merah dimana pigmen warna merah tersebut berasal dari
anthosianin (Ashari, 2006). Buah sejati yang berasal dari ovul telah terserbuki
berkembang menjadi buah kering dengan biji keras. Struktur buah keras ini disebut
achene (Gunawan, 1992). Buah ini berukuran kecil dan menempel pada receptacle
yang membesar. Bentuk buah stroberi sangat bervariasi. Bentuk-bentuk ini ditentukan
oleh sifat genetik. Terdapat delapan bentuk buah yang umum pada stroberi, yaitu
oblate, globose, globose conic, conic (Gambar 2.3), long conic, necked, long wedge
4
Gambar 2.3. Buah Stroberi yang Berbentuk Conic
2.2 Perbanyakan Vegetatif
Perbanyakan tanaman dapat berlangsung dengan dua cara yaitu generatif dan
vegetatif. Perbanyakan secara generatif yaitu sebagai hasil dari perkawinan antara 2
individu atau bagian dari individu yang terpisah, sehingga sifat-sifat dari induknya
bercampur, misalnya dengan spora atau dengan biji. Perbanyakan secara vegetatif
yaitu perbanyakan dengan memakai bagian dari tanaman (Sianipar dan Philippus,
1981).
Keuntungan penggunaan teknik pembibitan secara vegetatif antara lain keturunan
yang didapat mempunyai sifat genetik yang sama dengan induknya, tidak
memerlukan peralataan khusus, alat dan teknik yang tinggi kecuali untuk produksi
bibit dalam skala besar, produksi bibit tidak tergantung pada ketersediaan
benih/musim buah, bisa dibuat secara kontinyu dengan mudah sehingga dapat
diperoleh bibit dalam jumlah yang cukup banyak, meskipun akar yang dihasilkan
5
namun lama kelamaan akan berkembang dengan baik seperti tanaman dari biji,
umumnya tanaman akan lebih cepat bereproduksi dibandingkan dengan tanaman
yang berasal dari biji (Pudjiono, 1996). Menurut Khan (1994) pembibitan secara
vegetatif sangat berguna untuk program pemuliaan tanaman yaitu untuk
pengembangan bank klon (konservasi genetik), kebun benih klon, perbanyakan
tanaman yang penting hasil persilangan terkendali, misalnya hybrid atau steryl hybrid
yang tidak dapat bereproduksi secara seksual, perbanyakan masal tanaman terseleksi.
Jenis-jenis perbanyakan vegetatif meliputi : teknik mencangkok, teknik
sambungan, teknik stek pucuk dan kultur jaringan. Untuk perbanyakan vegetatif
secara kultur jaringan mendapatkan hasil perbanyakan yang baik selain perlu
memperhatikan media tumbuh, diperlukan zat pengatur tumbuh (zpt) untuk
menunjang pertumbuhan dan perkembangannya (Dian dan Sudiarta, 2009)
2.3 Kultur Jaringan
Kultur jaringan dalam bahasa asing disebut sebagai tissue culture, weefsel
cultuurs atau gewebe culture. Kultur adalah budidaya dan jaringan adalah
sekelompok sel yang mempunyai bentuk dan fungsi yang sama (Hendrayono dan
Wijayani, 1994). Kultur jaringan adalah suatu metode mengisolasi bagian tanaman
seperti protoplasma, sel, sekelompok sel, jaringan, dan organ, serta menumbuhkannya
dalam kondisi aseptik, sehingga bagian-bagian tersebut dapat memperbanyak diri dan
beregenerasi menjadi tanaman kembali (Gunawan, 1992).
Potensi kultur jaringan dalam pemuliaan tanaman somaklonal mencakup semua
6
manipulasi genetik tanaman tanpa melibatkan siklus seksual. Pada dasarnya kultur
somaklonal merupakan satu proses perbanyakan sel, jaringan organ atau protoplas
dengan teknik steril (Nasir, 2002).
Menurut Hendrayono dan Wijayani (1994) kultur jaringan akan lebih besar
persentasenya bila menggunakan jaringan meristem. Jaringan meristem adalah
jaringan muda, yaitu jaringan yang terdiri dari sel-sel yang selalu membelah,
dindingnya tipis, belum mempunyai penebalan dari zat pektin, plasmanya penuh dan
vakuolanya kecil-kecil. Parnata (2005) menyatakan bahwa dalam kultur jaringan,
sel-sel meristematik yang belum berdiferensiasi akan dipacu untuk mendiferensiasikan
diri dimulai dengan pembentukan meristem baru yang akan berkembang menjadi
organ tanaman, seperti akar, batang, tunas, dan daun, sehingga tumbuh menjadi
tanaman yang sempurna dengan memodifikasi media tumbuh dengan menambah
zat-zat hara yang dapat memacu pertumbuhan tanaman.
2.4 Zat Pengatur Tumbuh
Secara umum zat pengatur tumbuh (ZPT) penting ditambahkan ke dalam
medium untuk mendapatkan pertumbuhan yang baik. ZPT yang banyak digunakan
untuk kultur jaringan adalah kelompok auksin, sitokinin, dan giberelin. Santoso dan
Nursadi (2004) mengemukakan bahwa zat pengatur tumbuh adalah senyawa organik
bukan nutrisi yang dalam konsentrasi rendah mampu mendorong, menghambat, atau
secara kualitatif mengubah pertumbuhan dan perkembangan tanaman.
Zat pengatur tumbuh yang biasa digunakan adalah dari golongan sitokinin
7
tumbuh auksin dan sitokinin dapat diberikan bersama-sama atau auksin saja ataupun
sitokinin saja, penambahan ini tergantung dari tujuannya (Hendrayono dan Wijayani,
1994).
Benzylaminopurine (BAP) merupakan salah satu jenis zat pengatur tumbuh
sitokinin yang dapat mendorong terjadinya pembelahan sel-sel tumbuhan. Sitokinin
alami dihasilkan pada jaringan tumbuh aktif terutama pada akar, embrio, dan buah.
Sitokinin yang diproduksi di akar selanjutnya diangkut oleh xylem menuju sel-sel
target pada batang. Sitokinin dapat meningkatkan pembelahan, pertumbuhan dan
perkembangan kultur sel tanaman. Sitokin juga menunda penuaan daun, bunga dan
buah. Penuaan pada daun melibatkan penguraian klorofil dan protein-protein,
kemudian produk tersebut diangkut oleh floem ke jaringan meristem yang
membutuhkannya (Gardner dkk., 1991).
BAP ini mempengaruhi proses fisiologis di dalam tanaman. Proses-proses
pembelahan sel pada sel-sel meristem akan dihambat oleh pemberian BAP eksogen,
dimana efek yang menghambat maupun yang mendorong proses pembelahan sel oleh
BAP tergantung dari adanya fitohormon lainnya. Selain itu BAP berpengaruh di
dalam perkembangan embrio, menghambat proses penghancuran butir-butir klorofil
pada daun-daun yang terlepas dari tanaman, serta memperlambat proses senescence
pada daun, buah dan organ-organ lainnya (Wattimena, 1987).
Istilah auksin diberikan pada sekelompok senyawa kimia yang memiliki fungsi
utama mendorong pemanjangan kuncup yang sedang berkembang. Beberapa auksin
dihasilkan secara alami oleh tumbuhan, misalnya IAA (indoleacetic acid), PAA
8
merupakan auksin sintetik, misalnya IBA (indolebutyricacid), NAA (Napthalene
acetic acid), 2,4-D (2,4 dicholorophenoxyacetic) dan MCPA (2-methyl-4
chlorophrnoxyacetic).
IBA merupakan salah satu hormon tanaman yang dapat meregulasi banyak
proses fisiologi, seperti pertumbuhan, pembelahan, dan diferensisasi sel serta sintesa
protein (Darell dkk, 1986). IBA diproduksi dalam jaringan meristematik yang aktif
(tunas, daun muda, dan buah) (Gardner dkk, 1991). Kemudian menyebar luas dalam
seluruh tubuh tanaman, dimana penyebar luasnya dengan arah dari atas ke bawah
hingga titik tumbuh akar, melalui jaringan pembuluh tapis (floem) atau jaringan
parenkhim (Rismunandar, 1988). IBA merupakan istilah generic untuk substansi
pertumbuhan yang khusus merangsang perpanjangan sel, sehingga dapat
didefinisikan sebagai zat pengatur tumbuh yang mendorong elogasi. Pengaruh
fisiologs dari IBA ini berperan pada berbagai aspek pertumbuhan dan perkembangan
tanaman, antara lain : pembesaran sel (batang, akar, daun), menghambat pertumbuhan
mata tunas samping yang diproduksi pada meristem apikal yang diangkut secara
basepetal, adanya pengguguran daun yang terjadi sebagai akibat dari proses absisi
yang terjadi di daerah absisi, mendorong pembelahan sel-sel cambium (pertumbuhan
skunder), dan merangsang pertumbuhan akar (Wattimena, 1987).
Pemakaian auksin dan sitokin dalam media lebih banyak diperlukan untuk
mengatur pertumbuhan dan pembentukan organ. Auksin dan sitokinin yang diberikan
pada waktu bersamaan akan menimbulkan pengaruh kerjasama yang berdampak
9
perbandingan sitokinin dan auksin yang bagaimana yang merangsang atau
menghambat pembelahan sel (Wattimena, 1987).
2.5 Kalus
Kalus adalah suatu kumpulan sel amorphous atau belum terdiferensiasi yang
terjadi dari sel – sel jaringan yang membelah diri secara terus menerus secara in vitro
atau di dalam tabung dan tidak terorganisasi sehingga memberikan penampilan
sebagai massa sel yang bentuknya tidak teratur. Kalus dapat diperoleh dari jaringan
tanaman yang berasal dari akar, batang, dan daun. Penelitian pembentukan kalus pada
jaringan terluka pertama kali dilakukan oleh Sinnott pada tahun 1960. Pembentukan
kalus pada jaringan luka dipacu oleh zat pengatur tumbuh auksin dan sitokinin
endogen (Dodds & Roberts, 1983). Secara in vivo, kalus pada umumnya terbentuk
pada bekas-bekas luka akibat serangan infeksi mikro organisme seperti
Agrobacterium tumefaciens, gigitan atau tusukan serangga dan nematoda. Kalus juga
dapat terbentuk sebagai akibat stress (George & Sherrington, 1993).
Kalus secara in vitro terbentuk melalui 3 tahapan yaitu induksi, pembelahan sel,
dan diferensiasi. Pembentukan kalus ditentukan oleh sumber eksplan, komposisi
nutrisi pada medium dan faktor lingkungan. Eksplan yang berasal dari jaringan
meristem berkembang lebih cepat dibandingkan dengan jaringan dari sel-sel
berdinding tipis dan mengandung lignin. Untuk memelihara kalus maka dilakukan
subkultur secara bertahap. Sumber kontaminasi pada kultur kalus dapat melalui media
tanam yang tidak steril, lingkungan kerja dan pelaksanaan yang tidak hati-hati,
eksplan yang disterilisasi secara tidak sempurna serta serangga atau hewan kecil yang
10
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan kalus antara lain bahan
sterilisasi, kandungan unsur kimia dalam media, hormon yang digunakan, substansi
organik yang ditambahkan dan terang gelapnya saat inkubasi. Dalam kultur kalus sel
atau irisan jaringan tanaman yang disebut eksplan secara aseptik diletakkan dan
dipelihara dalam media padat atau media cair yang cocok dan dalam keadaan steril.
Dengan demikian sebagian sel pada permukaan irisan akan mengalami proliferasi dan
membentuk kalus (Zulkarnain, 2009).
Kalus mempunyai pertumbuhan yang abnormal dan berpotensi untuk
berkembang menjadi akar, tunas dan embrioid yang nantinya akan dapat membentuk
plantlet. Beberapa kalus ada yang mengalami pembentukan lignifikasi sehingga kalus
tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak. Namun ada kalus yang tumbuh
terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen yang kecil, kalus yang demikian dikenal
dengan kalus remah (friable). Warna kalus dapat bermacam-macam tergantung dari
jenis sumber eksplan itu diambil, seperti warna kekuning-kuningan, putih, hijau.
Dalam kultur kalus, kalus homogen yang tersusun atas sel-sel parenkim jarang
dijumpai kecuali pada kultur sel Agave dan Rosa (Narayanaswany,1977 dalam Dodds
& Roberts, 1983).
Untuk memperoleh kalus yang homogen maka harus menggunakan eksplan
jaringan yang mempunyai sel – sel yang seragam. Dalam pertumbuhan kalus,
Citodiferensiasi terjadi untuk membentuk elemen trachea, buluh tapis, sel gabus, sel
sekresi dan trikoma. Kambium dan periderm sebagai contoh dari proses hitogenesis
11
atau nodul vaskular yang nantinya menjadi pusat dari pembentukan tunas apikal,