# Ko r e sp o n d e nsi: Balai Pe n elit ian d an Pe n ge m b an g an Bu d id aya Air Tawar. Jl. Se m p u r No . 1 , Bo g o r 1 6 1 54 , Ind o n e sia.
Te l.: + (0 2 5 1 ) 8 3 1 3 2 0 0 E-m ail: hest a_ biot ek@ yahoo.com
Tersedia online di: ht t p://ej ournal-balit bang.kkp.go.id/index.php/j ra
UJI IN VITRO BAKTERI ANTI QUORUM SENSING PENDEGRADASI ACYL HOM OSERINE LACTONEAeromonas hydrophila
Hessy Novita*)#, Iman Rusmana**), M unti Yuhana**), Fachriyan Hasm i Pasaribu**), dan
Angela M ariana Lusiast uti*)
*) Balai Pene litian dan Pe ngemb angan Bu didaya Air Tawar
**) In stit ut Pertanian Bogor
ABSTRAK
Ant i quorum sensing (AQS) adalah proses inaktivasi atau degradasi molekul sinyal quorum sensing (QS) yaitu
acyl homoserine lact one (AHL) tanpa memengaruhi pertumbuhan bakteri. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melakukan uji kultur bersama dan uji penghambatan faktor virulensi secara in vit ro antara bakteri AQS dengan Aeromonas hydrophila sebagai patogen yang menyebabkan M ot ile Aeromonad Sept icaemia (MAS) pada ikan air tawar. Hasil penelitian menunjukkan bahwa uji in vit ro dengan kultur bersama antara bakteri AQS Bacillus sp. dan A. hydrophila tidak ada penghambatan pertumbuhan pada kedua bakteri, tetapi bakteri AQS dapat menghambat produksi faktor virulensi dari A. hydrophila yaitu protease dan hemolisin. AQS merupakan salah satu strategi yang potensial untuk diaplikasikan dalam pengendalian penyakit infeksius atau bakteri patogen resisten antibiotik pada budidaya ikan air tawar.
KATA KUNCI: Anti Quorum Sensing (AQS); M otileAeromonad Septicaemia (M AS); faktor virulensi; kultur bersama; Aeromonas hydrophila
ABSTRACT: In Vitro Assay of anti quorum sensing bacteria degrading acyl homoserine lactone of Aeromonas hydrophila. By: Hessy Novita, Iman Rusmana, M unti Yuhana, Fachriyan Hasmi Pasaribu, and Angela M ariana Lusiastuti
Ant i quorum sensing (AQS) was process of inact ivat ion or degradat ion of Quorum sensing signal molecules of acyl homoserine lact one (AHL) wit hout affect ing growt h of t he bact eria. The aim of t he reseach was t o st udy in vit ro assay of co-cult ure and inhibit ion of virulence fact ors bet ween AQS bact eria which Aeromonas hydrophila as pat hogen caused mot ile aeromonad sept icaemia (M AS) in fresh wat er fish. The result showed t hat in vit ro assay of co cult ure bet ween AQS bact eria Bacillus sp. and A. hydrophila wit hout inhibit ed of growt h in bot h bact eria but bact eria AQS could suppressed product ion A. hydrophila virulence fact ors, prot ease, and hemolysin. The AQS is one of pot ent ial st rat egies t o inhibit QS for applicat ion t o cont rol of infect ious diseases or ant ibiot ic resist ant bact erial pat hogens in fresh wat er aquacult ure.
KEYW ORDS: Anti Quorum Sensing (AQS); M otile Aeromonad Septicaemia (M AS); virulence factor; co culture; Aeromonas hydrophila
PENDAHULUAN
Quorum sensing merupakan mekanisme komunikasi di ant ara sel bakt eri secara int erselule r, t ergant ung pada kepadatan jumlah sel yang berperan penting dalam regulasi ekspresi gen. Bakt eri memanfaat kan quorum sensing unt uk regulasi pemben t ukan bio film, fakt o r vir u le n s i, s in t e s is a n t ib io t ik , s p o r u la s i, d a n
bio luminesen (Gallo way et al., 2011). Quorum sensing diperant arai o leh suat u mo lekul sinyal ekst raseluler yait u aut oinducer. Mo lekul aut oinducer akan didet eksi d an d ir e sp o n s o le h se l ke t ika ko n se n t ras in ya d i lingkungan t inggi. Bakt eri menghasilkan aut oinducer den gan jenis yang ber variasi. Bakt eri Gram negat if m e n g h a s ilk a n au t oi n du cer ya n g d is e b u t N-Acyl Homoserine Lact one (AHL) (Hent zer et al., 2002).
dilakukan dengan menggunakan ant ibio t ik. Namun penggunaan senyawa t ersebut secara t erus-menerus a k a n m e n im b u lk a n s ifa t r e s is t e n p a d a b a k t e r i. Alt ernat if yang dapat dilakukan untuk mengendalikan b a k t e r i p a t o g e n ya it u m e n g g u n a k a n qu or u m quenching at au Ant i-QS. Ant i-QS merupakan senyawa at au mo lekul yang d apat mendegradasi aut oinducer pada bakt eri, sehingga dapat mencegah t erjadinya QS pada bakteri. Prinsip pengendalian pato genit as bakt eri Gram negat if dengan AQS ialah mencegah akumulasi AHL. Pen cegahan akumulasi AHL dilakukan dengan m en de grad asi AHL o le h bakt e ri. Salah sat u en zim pendegradasi AHL ialah N-acyl homoserin lact onase (AHL-lak t o n a s e ) (Mo lin a et al., 2 0 0 3 ). AHL-la k t o n a s e mendegradasi ikat an lakt o n pada mo lekul AHL. Cincin ho mo serin lakt o n t anpa adanya ikat an lakt o n t idak dapat difungsikan lagi. Mekanisme QS t erhambat dan gen-gen pat o genet ik t idak diekspresikan o leh bakt eri pat o gen (Do ng et al., 2002).
He n t ze r & Givsko v (2 0 0 3 ) m e n yat akan b ah wa a p lik a s i qu or u m qu en ch i n g a t a u AQS s a n g a t mengunt ungkan karena dapat mengurangi munculnya s ifat r e s ist e n p ad a b ak t e ri, t an p a m e m e n ga r u h i kelangsungan hidup sel secara individual, t et api lebih kepada sifat virulen dari po pulasi secara keseluruhan. Ko n sent rasi m o leku l AHL meru pakan fakt o r ut ama yan g me m e ngaruh i e kspre si ge n viru len seh in gga degradasi mo lekul AHL menjadi sasaran ut ama dari quorum quenching at au anti quorum sensing. Bakt eri dari k e lo m p o k Gr a m p o s it if s e p e r t i Baci l l u s s p . , Lysinibacillus, memiliki akt ivit as degradasi AHL yang t inggi dan berpo t ensi sebagai agen bio ko nt ro l karena spesialisasi dari sifat ko mpet ennya. Ho mo lo g enzim lakt o nase t elah berhasil diident ifikasi pada B. cereus and B. t huringiensis, yang memiliki kemampuan unt uk mendegradasi AHL (Anzho u et al.,2013).
Alt ernat if pengendalian bakt eri pat ogen pada ikan dapat dilakukan dengan mengganggu sistem QS dengan p e n gh am b at an b io sin t e sis m o le ku l sin yal m e lalu i se n ya wa an a lo g . Ap likas i se n yaw a a n t a go n is QS misalnya furano n terhalogenasi, inaktivasi secara kimia t erhadap sinyal QS, dan bio degradasi mo lekul sinyal o leh enzim (Defo irdt et al., 2004). Degradasi mo lekul sinyal AHL o leh enzim merupakan cara yang efekt if d alam m e n gh am b at p ro se s QS. Be b e r ap a e n zim pendegradasi AHL yait u AHL lakto nase dan AHL asilase. Enzim t ersebut disandikan o leh gen yang be rbeda-beda pada masing-masing spesies. AHL lakt o nase dan AHL asilase dapat dihasilkan o leh bakteri Gram po sit if maupun Gram negat if (Defo irdt et al., 2004). Tujuan dari penelit ian ini adalah melakukan uji in vit ro ant ara bakt eri AQS Bacillus sp. dengan Aeromonas hydrophila melalui uji kultur bersama dan uji penghambatan fakt or vir u le n s i. Po t e n s i b a k t e r i p e n d e g r a d a s i N -a cyl
homoser ine lact ones (AHL) se b agai age n b io ko n t ro l dalam pengendalian bakteri patogen pada ikan budidaya dan aplikasi bakteri pendegradasi AHL diharapkan juga dapat mengurangi dampak penggunaan antibio tik yang dapat membuat bakteri bersifat resist en. Pemanfaatan b a k t e r i AQS m e r u p a k a n la n g k a h a w a l u n t u k m e n g a p lik a s ika n b ak t e ri t e rs e b u t s e b ag a i ag e n bio ko ntrol pada budidaya ikan dalam menekan bakt eri p at o ge n se h in gga d ih arap kan d apat m e n cipt akan akuakult ur yang ramah lingkungan.
BAHAN DAN M ETODE
Kultur Bakt eri
Iso lat bakt eri yang digunakan dalam penelit ian ini t erdiri at as bakt eri AQS yait u Bacillus sp., Chromobac-t erium violaceum, Aeromonas hydrophila (iso lat ko leksi Inst alasi Penelit ian dan Pengembangan Pengendalian Penyakit Ikan, Depo k). Semua isolat diremajakan pada media TSB (Tr ypt icase Soy Brot h) dan diperbanyak TSA (Tr ypt icase Soy Agar). In ku b asi ku lt u r Bacil lus s p . dilakukan selama 48 jam pada suhu 30°C. sedangkan inkubasi C. violaceum (sampai kult ur ber warna ungu) dan A. hydrophila dilakukan selama 24 jam pada suhu 30°C.
Verifikasi Akt ivitas Degradasi AHL
Kult ur cair Bacillus sp. umur 48 jam disent rifugasi s e la m a 3 0 m e n it p a d a k e ce p a t a n 1 2 .0 0 0 r p m .
Sebanyak 100 µL supernatan diteteskan pada Paper
disc (diamet er 6 mm) yang dilet akkan di permukaan media TSA semi-padat yang t elah diino kulasi dengan 1% kult ur cair C. violaceum. Cawan t ersebut kemudian diinku basi pada su hu 30°C selama 24 jam. Ko nt ro l Kult ur bersama bakt eri AQS dan A. hydrophila dilakukan b e r d as a rk a n m e t o d e Gr a m et al. (1 9 9 9 ). Se car a t erpisah, Bacillus sp. dan A. hydrophila dikult ur di TSB (Tr ypt icase Soy Brot h) 1 00 m L p ad a suh u 3 0°C dan dinkubasi selama 24 jam pada inkubat o r bergo yang pada 120 rpm. A. hydrophila dalam 100 mL TSB, dengan ke pad at an 1 06
107 CFU/m L berdasarkan hasil TPC. Kult ur b ersama diinkubasi pada 30°C dalam inkubat or bergoyang (120 rpm) selama 24 jam. Hasil kult ur disebar pada media TSA dan diinkubasi selama 24 jam dan 48 jam. Ko lo ni bakteri dihit ung dengan met ode t otal plat e count (TPC) dan dibandingkan dengan kult ur t unggal A. hydrophila yang dihit ungsebagai t ot al Aeromonas count (TAC). Dan m a s in g -m a s in g k u lt u r t u n g ga l b a k t e r i AQS d a n A. hydrophila juga digores berdampingan untuk melihat sifat ant ago nis kedua bakt eri t ersebut .
Uji Penghambat an Faktor Virulensi A. hydrophila
Unt u k m elihat ke mam pu an b akt eri AQS d alam menekan fakt o r virulensi pada A. hydrophila, dilakukan uji pro t e ase dan hem o lisin . Sup ernat an dari kult ur bersama ant ara bakt eri AQS dan A. hydrophila dengan cara disent rifugasi selama 30 menit pada kecepat an 12.000 rpm. Sebanyak 100 µL supernatan diteteskan pada paper disk kemudian dilet akkan pada permukaan media agar darah unt uk uji hemo lisin dan pada media skim milk 2% unt uk uji pro t ease. Hal yang sama juga dilakukan t erhadap supernat ant A. hydrophila (t anpa p en amb ah an bakt e ri AQS) un t uk me m ban d in gkan akt ivit as virulensinya.
HASIL DAN BAHASAN
Akt ivitas Degradasi AHL
Ba k t e ri AQS Bacil l us s p . d ive r ifik a s i k e m b a li k e m a m p u a n n ya d a la m m e n d e g r a d a s i AHL p a d a Chromobact erium violaceum sebagai bio indikat o rnya. Akt ivit as degradasi AHL dit andai dengan zo na t idak b e r war n a u n gu d i se k it ar paper disc p ad a k u lt u r C. violaceum (Gambar 1). Akt ivit as degradasi AHL o leh bakt eri AQS t ersebut menghasilkan zo na degradasi AHL sebesar 24 mm.
Difu si AHL lakt o n as e ya n g t e rk an d u n g d alam supernat an bakt eri AQS dari paper disc ke media di
sekit arnya menyebabkan degradasi senyawa AHL dari C. violaceum se hingga C. violaceum yang t u mbuh di se kit ar paper disc t id ak d ap at b erko mu nikasi yan g menyebabkan pigmen violacein tidak dapat dipro duksi. AHL-lakt o nase secara spesifik menghidro lisis cincin lakt o n pada mo lekul AHL (Wang et al., 2004). Salah sat u st rat egi unt uk mendegradasi mo lekul sinyal AHL adalah dengan enzim, ant ara lain AHL lakt o nase, AHL asilase, o ksido redukt ase, dan parao kso nase (Uro z et al., 2 0 0 5 ). En z im in i b e r p e r an se b ag a i s e n yaw a ant i QS.
Kultur Bersama Bakt eri AQS dengan A. hydrophila
Penghambat an AHL dengan met ode kult ur bersama ant ara bakt e ri AQS dan A. hydrophila ad alah unt uk m e lih at in t e rak si ke d u a b akt e ri m e lalu i akt ivit as an t ago n is dan ko mp e t isi d i m an a h asil u ji kult u r bersama kedua bakt eri menunjukkan bahwa adanya interaksi dan pertumbuhannya terus meningkat selama 24 jam dalam lingkungan dan nut risi yang t erbat as dengan bert ambahnya ko nsent rasi. Tot al plat e count (TPC) kedu a bakt eri pada kult ur be rsama dan t ot al aeromonas count (TAC) yang dapat dilihat pada Tabel 1. Tet api A. hydrophila pada perco baan kult u r t unggal walaupun dapat tumbuh optimal selama 24 jam karena t idak adanya ko mpet isi nut risi dan ruang t api set elah 48 jam, baik kult ur bersama dan kult ur t unggal dari A. hydrophila mengalami penurunan pert umbuhan. Hal ini d ise b ab kan kare n a ke t erb at asan n u t risi d alam media sebagai lingkungan t umbuhnya.
Pad a Tab e l 1 m e n u n ju kkan b ah wa Bacil lus s p . mendegradasi AHL yang akan digunakan o leh bakt eri pat o ge n se irin g de ngan be rt am bahn ya ko nse nt rasi p e rlaku an p ada u ji ku lt ur b e rsam a se cara in vit r o (Tabel 1). Hasil dari degradasi AHL dari A. hydrophila dimanfaat kan o leh bakt eri AQS sebagai sumber C dan N unt uk mempert ahankan pert umbuhannya sehingga t idak t erjadi ko mpet isi nut risi dan ruang dari kedua
Gambar 1. Ve rifikasi akt ivit as de gradasi AHL C. violaceum o le h (a) bakt eri AQS Bacillus sp. (b) ko nt ro l negat if media TSB
Figure 1. Verificat ion of act ivit y AHL degradat ion C. violaceum by (a) AQS bact eria Bacillus sp. (b) negat ive cont rol TSB medium
a b
C. violaceum
b a k t e r i t e r s e b u t . Se d a n g k a n p a d a b a k t e r i A. hydr ophila, ke mampu an nya unt uk m enghasilkan fakt o r virulensi t erhambat t api masih dapat t umbuh secara o pt imal.
Hasil uji ant ago nis ant ara bakt eri AQS Bacillus sp. dengan A. hydrophila yang dit umbuhkan dengan cara m e n g g o r e s k a n n ya s e ca r a b e r d a m p in g a n t id a k menunjukkan penghambat an pertumbuhan yang dapat dilih at pada Gambar 2 di m ana t idak adan ya zo na bening ant ara kedua bakt eri t ersebut . Uji ini dapat m e n u n ju k k a n a p a k a h is o la t b a k t e r i AQS d a p a t menghambat pert umbuhan A. hydropihla at au t idak. Sepert i pada penelit ian ini, evaluasi akt ivit as AQS in vit ro m erupakan p ersyarat an yang harus dilakukan sebelum dilakukan evaluasi akt ivit as AQS secara in vivo. Adanya senyawa AQS mengindikasikan adanya pro duksi enzim pendegradasi AHL pada Bacillus sp.
Ba kt e r i AQS d ap at m e n g h a silk an e n zim ya n g d igu n a kan se b a gai st r at e g i p e rt a h an a n t e rh ad ap p at o ge n . Bakt e ri AQS m am p u m e m an faat kan d an mendegradasi enzimat ik AHL sebagai sumber t unggal karbo n dan nit rogen. Anzho u et al. (2013) menyat akan b ah wa p ro d u ks i AHL-lak t o n a se o le h Bacil l us sp . merupakan salah sat u bentuk st rat egi bert ahan hidup dalam lingkungan st res karena flukt uasi ko ndisi fisik dan ket erse diaan nu t risi yang t erbat as. Bacillus sp. me nggu nakan akt ivit as an t i-QS agar m en dapat kan lebih banyak nutrisi, melalui penggangguan sinyal AHL
sebagai b ent uk ko mpet isi dengan bakt eri lain at au degradasi mo lekul AHL sebagai sumber energi. Bakt eri Bacillus sp . m e ru p akan b akt eri Gram p o sit if yan g m a m p u m e m b e n t u k e n d o s p o r a p a d a k o n d is i lingkungan yang tidak mengunt ungkan sehingga dapat b e rt ah an h id u p . Ke m am p u an d alam m e m b e n t u k endo spo ra menjadikan Bacillus sp. banyak digunakan dalam indust ri secara ko mersil karena dapat bert ahan lama dan beradapt asi dengan formula dan bahan-bahan kimia yang diaplikasikan dalam akuakult ur (Bai et al., 2003).
Uji Penghambat an Faktor Virulensi A. hydrophila
Hasil inakt ivasi AHL menunjukkan bahwa bakt eri AQS Baci l l u s s p . d a p a t m e n g h a m b a t Q S p a d a C. violaceum, d an karen a it u, su pe rn at an d ari AQS dilakukan pengujian penghambat an fakt o r virulensi d e n g a n A. h yd r op h i l a. A. h yd r op h i l a d e n g a n kemampuannya unt uk mengeluarkan beberapa enzim hemo lisin dan pro t ease ke lingkungan, yang dikaitkan dengan virulensi pat o gen o po rt unist ik A. hydrophila. Ekspresi fakt o r virulensi ini berada di bawah kendali sist em QS. Dengan demikian, dampak dari supernat an AQS d alam me n gham b at p ro t e o lit ik d an akt ivit as hemo lit ik A. hydrophila dapat dilihat pada Gambar 3. Degradasi AHL dari Bacillus sp. dalam perco baan kultur bersama memiliki efek pad a fakt o r-fakt o r virule nsi Tabel 1. Tot al plat e count (TPC) dan t ot al aeromonas count (TAC) pada kult ur bersama bakt eri AQS dan
A. hydrophila
Table 1. The t ot al plat e count (TPC) and t ot al aeromonas count (TAC) in t he co cult ure syst em AQS bact eria and A. hydrophila
24 j am (hour s) 48 j am (hours) 24 j am (hour s) 48 j am (hours)
1 x 1 05 6 .54 x 1 07 5.3 4 x 1 07 4 .35 x 1 06 1.1 5 x 1 07
1 x 1 06 7 .54 x 1 08 5.2 5 x 1 08 4 .25 x 1 08 2.2 5 x 1 08
1 x 1 07 7 .32 x 1 09 4 .8 x 1 09 3 .55 x 1 09 2.3 3 x 1 09 TAC (CFU/m L) TPC (CFU/m L)
Pel akuan
Tr eatments
Gambar 2. Has il k u lt u r b e r s am a b a kt e r i AQS d a n A. hydrophila (Ah)
Figure 2. Result of co cult ure bet ween AQS bact eria and A. hydrophila (Ah)
AQS
yang dihasilkan oleh A. hydrophila. Pelemahan beberapa fa k t o r vir u le n s i (s e p e r t i p r o t e a s e , b io film , d a n h em o lisin ) set elah ku lt ur b ersam a de ngan bakt eri pen degrad asi AHL-ju ga dilapo rkan o leh Chan et al. (2009).
Aktivitas prot ease dengan penambahan supernatan AQS mengakibat kan pengh ambat an dalam akt ivit as pro t ease, sedangkan d ari sup ern at an A. hydr ophila t anpa supernat an AQS set elah 24 jam menghasilkan h id ro lisis pro t e ase de ngan zo na b en in g d i se kit ar paper disc yan g m e nu n jukkan akt ivit as p ro t eo lit ik (Gam bar 3 A). Be git u ju ga d en gan su p ern at an d ari bakt eri AQS dapat menekan akt ivit as β-hemolyt ic dari A. h yd r oph i l a, p a d a m e d ia a g a r d a r a h ya n g m e n u n ju kk an p e n gh am b at an ak t ivit as h e m o lit ik A. hydr ophi l a (Ga m b a r 3 B). Uji fa k t o r vir u le n s i A. hydrophila o leh bakt eri AQS menunjukkan bahwa b ak t e ri AQS m am p u m e n e k an at au m e n gh am b at produksi fakt o r virulensi yait u pro t ease dan hemo lisin dari A. hydrophila. Akt ivit as bakt eri AQS menyebabkan sinyal AHL dari A. hydrophila unt uk mencapai quorum t erganggu dan t idak dapat berko munikasi sehingga menyebabkan fakt o r virulensi t idak dapat diproduksi.
A. hydr ophila ad alah b akt e ri o p o rt u n ist ik yan g p e n t in g p a d a p a t o g e n ika n d e n g a n hem or r hagi c sept icemia di mana sist em QS yait u dengan AhyR/I, yang analo g dengan LuxR/I pada A. hydrophila menunjukkan b a h wa C4 -HSL a d alah m o le ku l sin ya l u t am a d an m e n g at u r e k sp r e s i fak t o r vir u le n si, p e m a t a n g an bio film, dan ekst raseluler pro t ease (Bi et al., 2007). Bakt eri gram negat if yang pat o gen pada ikan sepert i Vibrio sp. dan A. hydrophila menggunakan AHL sebagai m o le ku l sin yal (Bru h n et al., 2 0 0 5 ), d an s t rat e gi quor um quenching a t a u AQS e fisie n m e n g o n t r o l pat o gen ini (Czajko wski & Jafra, 2009).
Aplikasi bakt eri AQS di bidang perikanan dapat dimanfaat kan unt uk menekan penggunaan ant ibio t ik yait u mengembangkan penggunaan pro bio t ik dengan mekanisme AQS pendegradasi AHL sebagai bio kont ro l
ya n g d a p a t d ib e r ik a n m e la lu i p a k a n ya n g dibio en kapsu lasi mau pu n m elalu i med ia bu did aya. Mekan ism e an t i-QS be rp o t e nsi seb agai salah sat u met o de alami unt uk mengendalikan pat o gen karena a n t i-QS m e m ilik i car a ke r ja ya n g s e le kt if u n t u k menghambat mikro ba pat o gen daripada penggunaan ant ibio tik yang dapat memunculkan sifat resist en pada pat o gen (Anzho u et al., 2013).
KESIM PULAN
Hasil uji in vit ro kult ur bersama ant ara bakt eri AQS Bacillus sp. dan A. hydrophila t idak ada penghambat an pe rt um buhan pada kedu a bakt eri d an b akt e ri AQS d a p a t m e n e k a n p r o d u k s i fa k t o r vir u le n s i d a r i A. hydrophila yait u pro t ease dan hemo lisin.
UCAPAN TERIM A KASIH
Te rima kasih kam i sam paikan ke pad a In st alasi Penelit ian dan Pengembangan Pengendalian Penyakit Ikan, Depo k, yang t elah memberikan banyak bant uan pada penelit ian ini.
DAFTAR ACUAN
Anzho u, M., Di, L., Xuliang, Z., & Guo qiang, Z. (2013). Quo rum q ue n ch ing in cu lt urable p h yllo sp h ere bact eria fro m t o bacco . Int . J. M ol. Sci.,14, 14607-14619.
Bai, Y., Zho u, X., & Smit h, D.L. (2003). Enhanced so y-bean plant gro wt h result ing fro m co ino culat io n o f Bacillus st rains wit h Bradyrhizobium j aponicum. Crop. Sci., 43, 1774-1781.
Bi, Z.X., Liu, Y.J., & Lu, C.P. (2007). Co nt ribut io n o f AhyR t o virulence o f Aeromonas hydrophila J-1. Res. Vet . Sci., 83, 150-156.
Bruhn, J.B., Dalsgaard, I., Nielsen, K.F., Buchho lt z, C., Larsen, J.L., & Gram, L. (2005). Quo rum sensing signal mo lecules (acylat ed ho mo serine lact o nes) in gram-ne gat ive fish pat h o gen ic b act e ria. Dis. Aquat . Organ., 65, 43-52.
Gambar 3. Akt ivit as pro t ease (A) dan hemo lisin (B) pada media skim milk dan agar darah, (1) AQS + Ah, (2) Ah (A. hydrophila)
Figure 3. Act ivit y of prot ease (A) and hemolysis (B) in skim milk and blood agar medium (1) AQS + Ah, (2) Ah (A. hydrophila)
2 1
A
1 2
Chan, K.G., Yin, W.F., Sam, C.K., & Ko h, C.L. (2009). A n o ve l m e d iu m fo r t h e is o la t io n o f N-acylhomo serine lact o ne-degrading bact eria. J. Ind. M icrobiol. Biot echnol., 36, 247-251. do i: 10.1007/ s10295-008-0491-x.
Czajko wski, R., & Jafra, S (2009). Quenching o f acyl-ho mo serine lact o ne-dependent quo rum sensing by enzymat ic disrupt io n o f signal mo lecules. Act a Biochim. Pol., 56, 1–16.
De fo ird t , T., Bo o n, N., Bo ssie r, P., & Ve rst raet e , W. (2004). Disrupt io n o f bact erial quo rum sensing: an u n e xp lo re d st ra t e gy t o figh t in fe ct io n s in aqu acu lt ure . Aquacult ure, 2 40 (1-4 ), 6 9-8 8. d o i: 10.1016/j.aquacult ure.2004.06.03.
Do ng, Y.H., Gust i, A.R., Zhang, Q., Xu, J.l., & Zhang, L.H. (2002). Ident ificat io n o f quo rum quencing N-acyl h o mo serine lact o nes fro m Bacillus Species. Appl. Environ. M icrobiol., 68(4), 1754-1759. Gram, L., Melchio rsen, J., Spanggaard, B., Huber, I., &
Nielsen, T.F. (1999). Inhibitio n of Vibrio anguillarum b y Pseud om on as f l u or escen s AH2 , a p o s s ib le pro bio t ic t reat ment o f fish. Applied and Environ-ment al M icrobiology, 65, 969–973.
Gallo way, W.R.J.D., Ho dgkinso n , J.T., Bo wden , S.D., Welch, M., & Spring, DR. (2011). Quo rum sensing in gram-negat ive bact eria: small-mo lecule mo du-lat io n o f ahl and AI-2 quo rum sensing pat hways. Chem. Rev., 111, 28-67. do i:10. 1021/cr100109t . Hent zer, M., Givsko v, M., & Parsek, M.R. (2002).
Tar-get ing quo rum sensing fo r t reat ment o f chro nic bact erial bio film infect io ns. Lab. M edicine, 33, 295-303.
Hent zer, M., & Givsko v, M. (2003). Pharmaco lo gical inhibit io n o f quo rum sensing fo r t he t reat ment o f chro nic bact erial infect io ns. J. Clin. Invest., 112, 1300-1307. doi: 10.1172/JCI200320074.
McCle an , K.H., Win so n , M.K., Fish , L, Taylo r, A., Chhabra, S.R., Camara, M., Daykin, M., Lamb, J.H., Swift , S., Bycro ft , B.W., St ewart , G.S.A.B., & Wil-liams, P. (1997). Quo rum sensing and Chromobac-t erium violaceum: explo it at io n o f vio lacein pro duc-t io n a n d in h ib iduc-t io n fo r duc-t h e d e duc-t e cduc-t io n o f N -acylho moserine lact o nes. M icrobiology, 143, 3703-3711.
Mo lina, L., Co nst ant inescu, F., Michel, L., Reimmann, C., Duffy, B., & Defago , G. (2003). Degradat io n o f p at h o g e n q u o r u m -se n s in g m o le cu le s b y s o il bact eriaa prevent ive and curat ive bio lo gical co n-t ro l mechanism. FEM S M icrobiol. Ecol., 45, 71-81. doi: 10.1016/S0168-6496(03)00125-9.
So t o , M.J., Sanjuan, J., & Olivare, J. (2006). Rhizo bia and plant pat ho genic bact eria: co mmo n infect io n we ap o n s. M i cr obi ol og y, 1 5 2 , 3 1 6 7 -3 1 7 4 . d o i: 10.1099/mic.0.29112-0.
Uro z, S., Chhabra, S.R., Camara, M., Williams, P., Oger, P., & Dessaux, Y. (2005). N-acylho mo serine lact o ne quo rum-sensing mo lecules are mo dified and de-grad ed by Rhodococcus er yt hropolis W2 by b o t h amidolytic and no vel o xido reduct ase act ivit ies. Mi-crobiology, 1 5 1 (1 0 ), 3 3 1 3 -3 3 2 2 . d o i: 1 0 .1 0 9 9 / mic.0.27961-0.
