pengaruh komposisi media terhadap kandun

(1)

Pengaruh Komposisi Media terhadap

Produksi Senyawa Flavonoid pada

Kultur Sel

Ficus deltoidea

BY : S.L. ONG1, A.P.K. LING2*, R. POOSPOORAGI3, S. MOOSA4

1 Department of Science, Faculty of Engineering and Science, Tunku Abdul Rahman University (UTAR), Setapak, KL, MY

2 Department of Human Biology, International Medical University (IMU), KL, MY

3 School of Science & Mathematics, INTI College Subang Jaya, MY 4 Agrotechnology and Bioscience Division, Malaysian Nuclear Agency,

Selangor, MY

* Corresponding Author, Fax: 603-8656 7229, Phone: 603-27317222

(2)

(3)

PENDAHULUAN

• Manipulasi nutrien media merupakan hal yang paling penting untuk meningkatkan zat metabolit sekunder pada tanaman kultur jaringan

• Tabat barito (Ficus deltoidea Jack), merupakan tanaman obat yang digunakan sebagai bahan afrodisiak wanita, menghambat pertumbuhan sel tumor, antioksidan, antibiotik.

• Salah satu hasil metabolit sekunder yang dapat dihasilkan F. deltoidea adalah senyawa favonoid

(4)

(5)

Penetapan Sel Kultur

• _{Kalus diambil dari eksplan daun}_{F. deltoidea}_yang

telah dipelihara dalam media MS konsentrasi tinggi dan ditambah 4.14 µM picloram. Kalus disubkultur setiap rentang waktu 4 minggu. Setelah melewati beberapa tahap, kalus yang bagus digunakan untuk penetapan suspensi kultur sel.

• _{Singkatnya, kultur kemudian dipertahankan dalam}

(6)

Manipulasi Komposisi Media

• _{Dalam studi ini semua perlakuan diinisiasi dengan}

(7)

Ekstraksi Flavonoid

• _{Semua sampel kering dihaluskan dan diekstraksi}

(8)

Analasis HPLC Senyawa

Flavonoid

• Identifkasi dan kuantifkasi dilakukan dengan menggunakan analisis HPLC. Total dari 20µL ektraksi sampel diinjeksikan kedalam sistem HPLC yang terdiri dari sistem pengontrol CBM-20A, Shimadzu), Unit pengiriman pelarut pompa biner (LC-20A, Shimadzu) sebuah degasser secara online (DGA-20A, Shimadzu) dan detektor photodiode array (SPD-M(DGA-20A, Shimadzu).

• Pemisahan dicapai pada fase terbalik kolom yang disediakan dengan kolom penjagaC18. Fase gerak terdiri air

prapenyaringan dan HPLC asetonitril (Merck, Jerman) naik secara gradient dengan asetonitril 20% sampai 40% sampai air dideionisasi 0-21 menit. laju aliran dijaga konstan pada 1 mL / menit dan puncak dideteksi menggunakan UV pada gelombang 324 nm. suhu kolom dipertahankan pada 360 C

(9)

• _{konsentrasi favonoid yang ditargetkan (rutin,}

(10)

Konfrmasi Senyawa

Flavonoid

• _{Tiga favonoids yang ditargetkan dalam sampel}

dikonfrmasi dengan melakukan ionisasi elektrospray ion positif - spektrometri massa (ESI-MS) menggunakan Teknologi Agilent 6320 Perangkap Ion kromatograf cair / spektrometri massa (Santa Clara, CA, USA), dengan Kolom Agilent Eclipse XDB-C18 (5 m, 4.6 x mm id),

(11)

• _{Parameter MS untuk setiap standar dioptimalkan}

(12)

Analisis Statistik

• _{Semua data dinyatakan sebagai mean dari tiga}

percobaan terpisah dengan 3 ulangan untuk

setiap pengulangan. Data dianalisis dengan One Way Analysis of Variance (ANOVA) dengan

menggunakan software statistik SPSS. Cara

pengobatan dianalisis dengan tes post hoc Tukey Honestly Signifcant Diference (HSD) . Istilah

(13)

(14)

Identifkasi dan Kuantifkasi

Senyawa Flavonoid

• _{Identitas dan jenis favonoid ( rutin ,quercetin, dan}

(15)

• _{Fragmentasi pada rutin memunculkan puncak dasar pada} 611 m/z dimana intensitas puncak mencapai 100%, sesuai dengan penambahan proton ekstra [M + H]+ ke

(16)

(17)

(18)

Pengaruh Sumber Karbon yang

Berbeda Pada Produksi Flavonoid

• _{Dalam studi ini , walaupun perlakuan dengan}

(19)

(20)

Pengaruh Hormon Auksin yang

• _{Sebaliknya , produksi quercetin sangat sedikit}

pada semua konsentrasi 2,4- D , produksi tertinggi ditunjukkan pada 4.52μM 2,4-D dan terendah ditunjukkan pada dan 9.04μM 2,4-D.

• _Pemberian _2,4-D _menunjukkan _produksi

(21)

(22)

• _{Selanjutnya, kultur sel yang diberikan 10.74 pM NAA}

mencatat

akumulasi rutin tertinggi dengan konsentrasi

rutin( 39.13 ± 3.00 mg/g BK ), sekitar 7 kali lebih tinggi bila dibandingkan dengan kontrol.

• _{Perlakuan dengan memberikan NAA pada kultur sel}

menunjukkan rendahnya akumulasi quercetin

dibandingkan kontrol

• _{Produksi naringenin umumnya meningkat di semua}

konsentrasi NAA. Produksi naringenin yang tertinggi dalam sel terdapat pada pemberian NAA dengan

konsentrasi10.74μM, yang 60

(23)

(24)

Pengaruh Sitokinin yang Berbeda

pada Produksi Flavonoid

• _{Tidak seperti pada perlakuan menggunakan 2 hormon}

auksin, akumulasi rutin yang menggunakan BAP justru tidak lebih tinggi dibandingkan kontrol. Quercetin dan naringeninlah yang menunjukkan efek terhadap BAP.

• _{Akumulasi rutin tertinggi ditunjukkan pada pemberian}

(25)

• _{Konsentrasi quercetin tertinggi terdapat pada}

media yang ditambah dengan 13.32μM BAP . Hal ini diikuti oleh sel-sel yang diberikan dengan 8.88μM dan 22.20μM BAP , yang mencatat nilai 11 dan 13 % lebih rendah dari pemberian BAP terbaik

• _{Kandungan naringenin yang diberikan 4.44μM BAP}

(26)

(27)

• _{Secara umum, semua lima konsentrasi kinetin memberikan}

produksi yang sangat rendah terhadap rutin, konsentrasi rutin tertinggi yang dapat dicapai hanya 0,33 ± 0,19 µg/g BK, pada konsntrasi kinetin 9.29μM.

• _{Pada 4.65μM kinetin, akumulasi quercetin merupakan}

tertinggi di antara semua perlakuan regulator pertumbuhan tanaman yang diuji dalam penelitian ini. Dalam perlakuan ini, sel-sel mencapai total 3,92 ± 0,44 mg/g BK dari konsentrasi quercetin.

• _{Akumulasi naringenin pada perlakuan ini menjadi yang}

tertinggi (8,65 ± 3,03 mg / g BK) di antara semua regulator pertumbuhan tanaman yang diuji ketika sel-sel diinkubasi dalam media yang mengandung konsentrasi kinetin sebesar 4.65μM. Namun, akumulasi naringenin menurun drastis ketika konsentrasi kinetin meningkat, nilai terendah ditandai pada

(28)

(29)

KESIMPULAN

• _{Dengan meningkatnya keberhasilan kultur sel} _F.

deltoidea yang mengandung senyawa favonoid