i
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN
FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU
(Acanthus ilicifolius)
MENGGUNAKAN METODE YEAST ESTROGEN SCREEN
ASSAY
DESSY NUR WULANDARI
1008010052
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO
HALAMAN PERSETUJUAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN
METODE YEAST ESTROGEN SCREEN ASSAY
DESSY NUR WULANDARI 1008010052
Diperiksa dan disetujui oleh :
Pembimbing I Pembimbing II
Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt Susanti, M. Phil., Apt
iii
HALAMAN PENGESAHAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI
ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YEAST ESTROGEN SCREEN ASSAY
DESSY NUR WULANDARI 1008010052
Telah dipertahankan di depan Panitia Ujian Skripsi Pada hari Sabtu 30 Agustus 2014
SUSUNAN PANITIA
Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt
NIK. 2160392
PERNYATAAN
Yang bertanda tangan dibawah ini, saya :
Nama : Dessy Nur Wulandari
NIM : 1008010052
Program studi : Farmasi
Fakultas/Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari proses penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian yang benar dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan dari hasil karya orang lain atau terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan disuatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan orang lain kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Demikian pernyataan ini, apabila kelak dikemudian hari terbukti ada unsur penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggung jawabkan sesuai dengan ketentuan yang berlaku.
Purwokerto, Juli 2014 Yang menyatakan,
v
ABSTRAK
DESSY NUR WULANDARI. Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Akar Jeruju (Acanthus ilicifolius) Menggunakan Metode YES assay
Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan SUSANTI
Latar Belakang: Kekurangan hormon estrogen pada lansia dapat mengakibatkan osteoporosis. Efek biologis estrogen diperantarai oleh reseptor estrogen (ER) α dan β. Fitoestrogen memiliki interaksi yang mirip dengan interaksi estrogen dan ER. Kandungan senyawa dari bagian akar jeruju adalah triterpenoid saponin. Triterpenoid saponin dari tanaman lain contohnya ginsenosida dapat beraksi sebagai ligan fungsional untuk mengaktivasi reseptor hormon steroid yang berbeda. Ginsenosida mungkin memediasi beberapa aksi pada kardiovaskular dan sistem endokrin dengan berikatan dengan reseptor estrogen.
Tujuan Penelitian: Untuk menentukan aktivitas estrogenik dan profil KLT dari fraksi air dan etil asetat akar jeruju (Acanthus ilicifolius) dengan metode YES assay.
Metode Penelitian: Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan rancangan randomized block design dengan menguji konsentrasi fraksi air dan fraksi etil asetat 50, 100, 200, 400, 800, 1000, 1200, 1600, dan 2000 µg/ml yang terlarut dalam DMSO terhadap aktivitas estrogenik. Aktivitas estrogenik ditandai dengan ekspresi β- galaktosidase pada sel dengan terbentuknya intensitas warna kuning dari oNPG menjadi oNP setelah sel lisis. Intensitas warna kuning diukur absorbansinya menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 400 nm.
Hasil: Penentuan aktivitas esterogenik menggunakan metode YES assay menunjukkan bahwa fraksi air dan etil asetat akar jeruju (Acanthus ilicifolius) mempunyai aktivitas esterogenik yang rendah dibandingkan dengan kontrol positif estradiol dan genistein. Nilai EC50 dari fraksi air yang ditentukan dengan
YES-hERα adalah 1628 µg/ml dan YES-hERβ 671,1 µg/ml dan etil asetat akar jeruju yang ditentukan dengan YES-hERα EC50nya tidak dapat dihitung, dan
YES-hERβ memiliki EC50 6,84x10-33 µg/ml. Dari hasil uji analisis KLT
menunjukkan fraksi air akar jeruju mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid, serta mengandung senyawa saponin setelah dilakukan reaksi penyabunan dan fraksi etil asetat mengandung senyawa terpenoid, saponin dan alkaloid.
Kesimpulan: Fraksi air akar jeruju mempunyai aktivitas estrogenik yang rendah sedangkan fraksi etil asetat akar jeruju tidak memiliki aktivitas estrogenik. Profil KLT pada fraksi air akar jeruju mengandung senyawa alkaloid dan flavonoid, serta mengandung senyawa saponin setelah dilakukan reaksi penyabunan dan fraksi etil asetat mengandung senyawa terpenoid, saponin dan alkaloid.
Kata Kunci : Akar jeruju, YES assay, estrogenik
ABSTRACT
DESSY NUR WULANDARI. Estrogenic Activity Determination of Water Fraction and Ethyl Acetat Fraction of Sea holly (Acanthus ilicifolius) using method YES assay
Under Supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI
Background: Lack of hormone estrogen in the elderly can lead to osteoporosis. Biological effects of estrogen mediated by estrogen receptors ((ER) α and β. Phytoestrogens have a similar interaction with ER. Compounds from the roots of sea holly are triterpenoid saponins. Triterpenoid saponins from other plants such as ginsenosida can act as a functional ligand receptor to activate different steroid hormone. Ginsenosida may mediate some of the action on the cardiovascular and endocrine system to bind to estrogen receptors.
Objective: This research was aimed to determine Estrogenic Activity and TLC profile of water fraction and ethyl acetat fraction of sea holly (Acanthus ilicifolius) using method YES assay.
Methods: The study design was an experimental with randomized block design. The concentration used for this research was 50, 100, 200, 400, 800, 1000, 1200, 1600, and 2000 µg/mL dissolved in DMSO on estrogenic activity. Estrogenic activity was determined by expression β- galactosidase on cell with the formation of intensity of the yellow color from oNP after cell lysis. The intensity of the yellow color can be measured using its absorbance at 400 nm.
Result: Estrogenic activity determination using method YES assay indicated that water and ethyl acetate fraction of root sea holly (Acanthus ilicifolius) showed a low estrogenic activity compared with the positive control of genistein and estradiol. EC50 values of water fraction was determined by YES-hERα 1628
µg/ml and YES-hERβ 671,1 µg/ml and ethyl acetate fraction of sea holly root determined by YES-hERα had no EC50 value and EC50 of YES-hERβ 6,84x10-33
µg/ml. The TLC analysis test resulted that water fraction of sea holly root contain alkaloids, flavonoids, also saponin after saponification test and ethyl acetate fraction contain terpenoids, saponins and alkaloids.
Conclusion: Water fraction of sea holly root has low estrogenic activity whereas ethyl acetate fraction of sea holly root has no estrogenic activity. TLC Profile from water fraction of the root of sea holly contain alkaloids, flavonoids, also saponin after saponification test and ethyl acetate fraction of sea holly contain terpenoids, saponins and alkaloids.
Keywords: Sea holly root, YES assay, estrogenic
vii
MOTTO
“..
Barangsiapa yang bertakwa kepada Allah niscaya Dia akan membukakan jalan keluar
baginya, Dan Dia memberinya rezeki dari arah yang tidak disangka-sangkanya. Dan barangsiapa
bertawakal kepada Allah, niscaya Allah akan mencukupkan (keperluan)nya. Sesungguhnya
Allah melaksanakan urusan-Nya. Sesungguhnya Allah telah mengadakan ketentuan bagi tiap-tiap
sesuatu.”
QS. ath-Thalaq (65) : 2 , 3
You’ve
got to live like SUCCES is your only option
PERSEMBAHAN
Alhamdulillahirabbil’alamin, ya Allah terima kasih atas segala nikmat dan rahmatMu yang maha agung, dengan ini saya persembahkan skripsi ini untuk Bunda (Sutarsih) terima kasih atas limpahan doa dan kasih sayang yang tak
terhingga sepanjang masa dan perjuanganmu seorang diri yang selalu memberikan yang terbaik.
Bapah yang berada di sisi Allah (Warsono), walaupun telah lama kau tiada aku tau kau selalu menyayangiku dan semoga bapah bahagia melihatku disana
Kakak ku (Erni), (Danu), (Beni), kakak ipar (Susilo) dan keponakan (Jauza Zia) dan keluargaku yang paling aku sayangi, terimakasih tiada tara atas segala
support yang telah diberikan selama ini.
Untuk sahabat-sahabatku, Linda, Kokom, Dita, Dian, Ardiana terima kasih buat kalian untuk masa-masa kebersamaan selama ini, mendengarkan keluh
kesahku, dan tumpangan kosannya yang sering aku berantakin
Teman-teman farmasi B dan FSOA angkatan 2010 senasib, seperjuangan dan sepenanggungan, terimakasih atas gelak tawa dan solidaritas yang luar biasa sehingga membuat hari semasa kuliah lebih berarti, semoga tak ada lagi duka
nestapa di dada tapi suka dan bahagia juga tawa dan canda.
Teman-teman seperjuanganku, Meisty, Dian, Dina, Ergi, Johari, Titi, Anna, Icha terimakasih atas kerjasama, dan semangatnya selama penelitian hingga
pembuatan skripsi ini selesai.
Semoga Allah SWT membalas jasa budi kalian dikemudian hari dan memberi kemudahan dalam segala hal, amin.
ix
PRA KATA
Puji syukur alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat ALLAH SWT atas segala rahmat, hidayah dan karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul ―PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN FRAKSI ETIL ASETAT AKAR JERUJU (Acanthus ilicifolius) MENGGUNAKAN METODE YES ASSAY‖. Skripsi ini disusun untuk memenuhi syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Melalui kesempatan ini dengan segala kerendahan hati, penulis ingin mengucapkan rasa terima kasih kepada : memberikan bimbingan, arahan dan nasehat dalam penyusunan skripsi.
4. Susanti, M.Phil., Apt selaku dosen pembimbing II, yang telah memberikan bimbingan, arahan dan nasehat dalam penyusunan skripsi.
5. Seluruh dosen dan Staf Fakultas Farmasi UMP yang telah memberikan ilmunya sehingga dapat membantu penulis dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini.
6. Seluruh laboran Fakultas Farmasi terutama Mas Mamat, dan Bu Titi terima kasih atas waktu, bantuan dan bimbingannya.
7. Bundaku tercinta atas jasa-jasanya, kesabaran, do’a, dan tidak pernah lelah dalam mendidik dan memberi cinta yang tulus dan ikhlas kepada penulis semenjak kecil.
8. Kakak-kakakku Erni, Danu, Beni yang telah banyak memberikan dorongan, semangat, kasih sayang dan bantuan baik secara moril maupun materiil demi lancarnya penyusunan skripsi ini.
9. Sahabat-sahabatku Linda, Kokom, Dita, Dian, dan Ardiana terimakasih atas dukungan serta kebersamaannya selama ini dalam suka maupun duka.
10.Teman-teman satu angkatan farmasi 2010 B dan FSOA terimakasih atas dukungan serta kebersamaannya selama ini dalam suka maupun duka.
11.Semua pihak yang telah membantu selama penulis melakukan penelitian dan penulisan skripsi ini hingga selesai yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu, terimakasih atas semua bantuannya.
Semoga Allah SWT memberikan balasan yang berlipat ganda dan pahala yang sebesar-besarnya kepada semua pihak yang telah membantu penyelesaian skripsi ini.
Demi perbaikan selanjutnya, penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun guna perbaikan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi.
Purwokerto, Juli 2014 Penulis
xi
RIWAYAT HIDUP
A. IDENTITAS
Nama : Dessy Nur Wulandari
NIM : 1008010052
Tempat / Tanggal lahir : Banyumas / 9 Desember 1992
Agama : Islam
Jenis Kelamin : Perempuan
Alamat : Jl. Semingkir 42 RT 04 / RW 07, Kel.
Rejasari Kec. Purwokerto Barat Kab.
Banyumas
B. RIWAYAT PENDIDIKAN
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi UMP
2. SMA / Tahun Lulus : SMAN 3 Purwokerto / Tahun 2010
3. SMP / Tahun Lulus : SMPN 2 Purwokerto / Tahun 2007
4. SD / Tahun Lulus : SDN 4 Rejasari / Tahun 2004
5. TK / Tahun Lulus : TK Diponegoro
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... ii
HALAMAN PERSETUJUAN ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ...iii
HALAMAN PERNYATAAN ... iv
ABSTRAK ... ... v
ABSTRACT ... ... vi
MOTTO... vii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... ... viii
PRA KATA ... ... ix
RIWAYAT HIDUP ... xi
DAFTAR ISI ... ... xii
DAFTAR TABEL ... ... xiv
DAFTAR GAMBAR ... xv
DAFTAR LAMPIRAN ... xvii
BAB I PENDAHULUAN ... 1
A. Latar Belakang Masalah ... 1
B. Perumusan Masalah ... . 3
C. Tujuan Penelitian... . 3
D. Manfaat Penelitian ... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 4
A. Tanaman Jeruju ... 4
B. Uji Hayati untuk Penentuan Aktivitas Estrogenik... 8
C. Estrogen ... 9
D. KLT... 10
BAB III METODE PENELITIAN ... 10
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 12
B. Variabel Penelitian ... 12
xiii
D. Waktu dan Tempat... 13
E. Bahan dan Alat... 14
F. Cara Penelitian ... ... 14
G. Analisis Hasil ... ... 17
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... ... 18
A. Pembuatan Ekstrak Etanol Akar Jeruju ... 18
B. Pembuatan Fraksi Air dan Etil Asetat Akar Jeruju ... 18
C. Analisis Kualitatif Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Acanthus ilicifolius dengan Menggunakan KLT ... 19
D. Penentuan Aktivitas Estrogenik Menggunakan Metode YES assay ... 28
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... ... 34
A. Kesimpulan ... 34
B. Saran... 34
DAFTAR PUSTAKA ... 35
LAMPIRAN... ... 41
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Senyawa kimia yang dilaporkan pada Acanthus ilicifolius ... 9 Tabel 2. Identifikasi fraksi air akar jeruju dengan KLT ... 21 Tabel 3. Identifikasi fraksi etil asetat akar jeruju dengan KLT ... 26
xv Gambar 4. Kromatogram KLT fraksi air untuk identifikasi senyawa setelah
disemprot peraksi a.Dragendorf untuk identifikasi senyawa alkaloid setelah disemprot pereaksi di bawah pengamatan sinar tampak, b. Sitroborat untuk identifikasi senyawa flavonoid setelah disemprot pereaksi di bawah pengamatan sinar UV λ 366 nm ... 21 Gambar 5. Kromatogram KLT Preparatif Fraksi Air Akar Jeruju Di Bawah
Pengamatan Sinar UV λ 366 nm ... 22 Gambar 6. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat dengan Pengamatan di
a. Sinar UV λ 366 nm, b. Sinar tampak ... 23 Gambar 7. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa
Terpenoid Setelah Disemprot Pereaksi Liebermann Burchard Di
Bawah Pengamatan a. Sinar tampak,
b. Sinar UV λ 366 nm ... ... ... 24 Gambar 8. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa
Alkaloid Setelah Disemprot Pereaksi Dragendrof Di Bawah Pengamatan a. Sinar tampak, b. Sinar UV λ 254 nm... ... 25 Gambar 9. Kromatogram KLT Fraksi Etil Asetat untuk Identifikasi Senyawa
Terpenoid Setelah Disemprot Pereaksi Anisaldehid Asam Sulfat Di
Bawah Pengamatan a. Sinar Tampak,
b. Sinar UV λ 366 nm... ... 25 Gambar 10. Kromatogram Hasil KLT Preparatif Fraksi Etil Asetat Akar Jeruju
Sinar UV λ 366 nm... 27
Gambar 11. Grafik Hubungan Antara Log Konsentrasi Estradiol dengan Unit β- galaktosidase (Miller Unit) pada YES-hERα dan YES-hERβ ... 29 Gambar 12. Grafik hubungan antara log konsentrasi genistein dengan unit β
-galaktosidase (Miller Unit) pada YES-hERα dan YES-hERβ ... 30 Gambar 13. Grafik hubungan antara log konsentrasi fraksi air akar jeruju dengan
unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERα dan YES-hERβ... .... ... 31 Gambar 14. Grafik hubungan antara log konsentrasi fraksi etil asetat akar jeruju
dengan unit β-galaktosidase (miller unit) pada YES-hERα dan YES-hERβ... ... ... 32
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Gambar Proses Fraksinasi ... 42
Lampiran 2. Perhitungan Rendemen Ekstrak ... 42
Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Fraksi ... 42
Lampiran 4. Perhitungan Konsentrasi Sampel ... 42
Lampiran 5. Perhitungan pembuatan buffer fosfat ... 47
Lampiran 6. Perhitungan pembuatan Z-buffer ... 47
Lampiran 7. Perhitungan pembuatan Na2CO3 ... 47
Lampiran 8. Uji Aktivitas Estrogenik ... 49
Lampiran 9. Hasil perhitungan EC50 dengan menggunakan graphad prism versi 4 ... 52
Lampiran 10. Perhitungan Rf Hasil KLT Identifikasi Senyawa ... 54
Lampiran 11. Penggojogan fraksi air menggunakan aquades ... 54
