xvii INTISARI
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang mempunyai elektron tidak berpasangan sehingga dapat masuk ke dalam tubuh dan menyerang sel-sel yang sehat. Untuk mencegah efek negatif radikal bebas terhadap tubuh tersebut diperlukan senyawa yang disebut antioksidan. Antioksidan alami banyak terdapat di alam, salah satunya dalam obat tradisional.
Salah satu jamu yang cukup banyak dikonsumsi adalah jamu kunyit asam. Jamu kunyit asam umumnya digunakan untuk memperlancar haid, selain itu dapat digunakan sebagai antioksidan alami. Jamu kunyit asam mengandung kurkumin dan
anthocyanin yang berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar dengan menggunakan metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Penetapan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dinyatakan dengan nilai IC50
(Inhibition Concentration 50).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa jamu kunyit asam instan mempunyai aktivitas antioksidan lebih rendah dengan nilai IC50 22.736,79 µg/mL dibandingkan
jamu kunyit asam ramuan segar dengan nilai IC50 sebesar 7.163,20 µg/mL. Keduanya
tergolong dalam aktivitas antioksidan lemah.
ABSTRACT
Free radical is an atom or molecule that has unpaired electrons that can enter the body and attack healthy cells. To prevent the negative effects of free radicals on the body the necessary compounds called antioxidants. Many natural antioxidants found in nature, one of them in traditional medicines.
One of the herbs that usually consumed is sour turmeric tonic. Sour turmeric tonic is commonly used to lessen the pain during menstruation, but it can be used as natural antioxidants. Sour turmeric tonic contains curcumin and anthocyanins that potent as antioxidants. This research aims to compare the antioxidant activity of fresh blend sour turmeric tonic and instant sour turmeric tonic by using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Determination of antioxidant activity by DPPH method is showed by IC50 value (Inhibition Concentration 50).
The results showed that the instant sour turmeric tonic have a lesser antioxidant activity with IC50 value of 22.736,79 mg/mL than fresh blend sour
turmeric tonic with IC50 value of 7.163,20 mg/mL. Both of them have a weak antioxidant activity.
PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN JAMU KUNYIT ASAM INSTAN DAN JAMU KUNYIT ASAM RAMUAN SEGAR DENGAN METODE
2,2-DIFENIL -1-PIKRILHIDRAZIL (DPPH)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Fransisca Kurnianingsih NIM: 078114084
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA
PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN JAMU KUNYIT ASAM INSTAN DAN JAMU KUNYIT ASAM RAMUAN SEGAR DENGAN METODE
2,2-DIFENIL -1-PIKRILHIDRAZIL (DPPH)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Fransisca Kurnianingsih NIM: 078114084
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Ketika aku ingin hidup kaya, aku lupa bahwa hidup adalah kekayaan
Ketika aku takut memberi, aku lupa bahwa semua yang aku miliki adalah pemberian
Ketika aku ingin jadi yang terkuat, aku lupa bahwa dalam kelemahan, Tuhan memberikanku
kekuatan
Ketika aku takut rugi, aku lupa bahwa hidupku adalah sebuah keberuntungan karena
anugerahNya
Ternyata hidup ini sangat indah ketika kita selalu bersyukur kepadaNya
Bukan karena hari ini indah kita bahagia, tetapi karena kita bahagia hari ini menjadi indah
Bukan karena tak ada rintangan kita menjadi optimis, tetapi karena kita optimis rintangan
menjadi tak terasa
Bukan karena mudah kita yakin bisa, tetapi karena kita yakin bisa semuanya menjadi mudah
Bukan karena semua baik kita tersenyum, tetapi karena kita tersenyum maka semua menjadi
baik
Kupersembahkan karya ini untuk:
Jesus Christ and My Holy Marry
Papa, Mama, dan kakak-kakakku tercinta
vi PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan karena berkat rahmat dan anugerah-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Perbandingan Daya Antioksidan Jamu Kunyit Asam Instan Dan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar Dengan Metode 2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil (DPPH)” sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini penulis telah mendapat banyak bantuan dan dukungan dari berbagai pihak sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Pembimbing yang telah menyediakan waktu untuk membimbing penulis dalam penyusunan skripsi ini.
2. Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji atas kritik dan saran untuk skripsi ini.
3. Jeffry Julianus, M.Si., selaku Dosen Penguji atas kritik dan saran untuk skripsi ini.
4. Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
diberikan kepada penulis. Thank you for always being here for me, loving me unconditionally.
6. My beloved uncle, Romo Rosarius Sapto Nugroho, Pr untuk penguatan, peneguhan dan ujub misanya.
7. Sahabat-sahabatku Fransisca Yesie Ravendra, Bonaventura Susetyo Agung Nugroho, Venantious Mery Wijayanto, Ashita Retno Suryani. Thank you for beautiful and fool moments that we had; every smile, laugh, love, attention,
motivation; our wonderful friendship; and every lesson that we learn.
Terimakasih sudah menjadi bagian dari proses pendewasaan diriku.
8. Teman-temanku 12 Dewi, Tiwi Anggraini, Hendrika Toi Doja, Damianus Listantya Edhi Sambada, Yosafat Rubbyanto, Andy Kurniawan, Bernadeta Sukesi, Markus Totok, Aditya Prasetya, Fetri Anastasia atas semua kebersamaan, suka duka, doa, semangat, waktu untuk diskusi dan nasehat kepada penulis selama penelitian ini. Thank you for being my friend in every single way.
9. Teman-teman Farmasi 2007 kelas B, teman-teman FKK B atas kebersamaan selama ini.
10.Adik-adik kostku Paulina Hani, Angelina Dwi, Friska Widjaya, Kurniasih Susi, Agnes, Maria Dominika Efi, dan Regina yang selalu mendukung penulis. Terimakasih untuk keceriaan dan kebersamaan selama ini.
viii
Akhir kata, penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna karena keterbatasan yang dimiliki. Oleh karena itu, kritik dan saran yang membangun sangat diperlukan, semoga skripsi ini dapat bermanfaat demi perkembangan ilmu pengetahuan.
Yogyakarta, 22 Januari 2013
x DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ... iv
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS……… v
PRAKATA ... vi
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... ix
E. Tujuan Penelitian ... 6
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA... 7
A. Obat Tradisional ... 7
B. Kunyit ... 8
1. Keterangan botani ... 9
2. Nama daerah... 9
3. Morfologi tanaman ... 9
4. Kandungan kimia ... 9
C. Asam Jawa ... 12
1. Keterangan botani ... 12
2. Nama daerah... 12
3. Morfologi tanaman ... 12
4. Kandungan kimia ... 13
5. Kegunaan ... 13
D. Radikal Bebas ... 14
E. Antioksidan ... 15
1. Antioksidan primer ... 16
2. Antioksidan sekunder ... 16
3. Antioksidan tersier ... 16
F. Pengukuran Aktivitas Antioksidan ... 17
xii
3. Pengujian dengan asam tiobarbiturat atau TBA... 18
G. Metode DPPH ... 18
H. Spektrofotometri Visibel ... 21
I. Landasan Teori ... 22
J. Hipotesis ... 23
BAB III. METODE PENELITIAN ... 24
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 24
B. Variabel Penelitian ... 24
3. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan ... 27
4. Uji aktivitas antioksidan ... 28
G. Analisis Hasil ... 29
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 30
A. Pembuatan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar ... 30
B. Hasil Optimasi Uji Aktivitas Antioksidan ... 31
2. Penentuan maksimum ... 32
C. Hasil Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH ... 33
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 43
A. Kesimpulan ... 43
B. Saran ... 43
DAFTAR PUSTAKA ... 44
LAMPIRAN ... 49
xiv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Tingkat Daya Antioksidan dengan Metode DPPH ... 20
Tabel II. Hasil scanning maksimum DPPH ... 33
Tabel III. Hasil % Penghambatan Jamu Kunyit Asam Instan ... 36
Tabel IV. Hasil % Penghambatan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar ... 37
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Rimpang Kunyit (Kirman, 2011) ... 8
Gambar 2. Kurkumin, Demetoksikurkumin, Bis-demetoksikurkumin (Aggarwal, et al., 2006) ... 10
Gambar 3. Struktur Senyawa Kurkumin (Majeed, 1995) ... 11
Gambar 4. Buah Asam Jawa (Khikmah, 2013) ……….. . 12
Gambar 5. Struktur Anthocyanin (Sullivan,1998) ... 13
Gambar 6. Reaksi Radikal DPPH Dengan Antioksidan (Widodo, 2001) ... 20
Gambar 7. Resonansi DPPH dan Gugus Kromofor serta Auksokrom Yang Terbentuk ... 34
Gambar 8. Ikatan Rangkap Terkonjugasi pada DPPH ... 34
Gambar 9. Reaksi Radikal DPPH dengan Kurkumin ... 35
Gambar 10. Kurva Persamaan Regresi Linear Aktivitas Antioksidan Jamu Kunyit Asam Instan ... 38
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Gambar Jamu Kunyit Asam ... 49
Lampiran 2. Data Penimbangan Bahan ... 50
Lampiran 3. Perhitungan Konsentrasi Larutan DPPH, Larutan Uji Jamu Kunyit Asam Instan dan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar ... 52
Lampiran 4. Scanning Pengkoreksi ... 55
Lampiran 5. Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan... 56
Lampiran 6. Uji Aktivitas Antioksidan DPPH ... 59
Lampiran 7. Nilai IC50 Jamu Kunyit Asam Instan Dan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar ... 62
INTISARI
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang mempunyai elektron tidak berpasangan sehingga dapat masuk ke dalam tubuh dan menyerang sel-sel yang sehat. Untuk mencegah efek negatif radikal bebas terhadap tubuh tersebut diperlukan senyawa yang disebut antioksidan. Antioksidan alami banyak terdapat di alam, salah satunya dalam obat tradisional.
Salah satu jamu yang cukup banyak dikonsumsi adalah jamu kunyit asam. Jamu kunyit asam umumnya digunakan untuk memperlancar haid, selain itu dapat digunakan sebagai antioksidan alami. Jamu kunyit asam mengandung kurkumin dan
anthocyanin yang berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar dengan menggunakan metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Penetapan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dinyatakan dengan nilai IC50
(Inhibition Concentration 50).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa jamu kunyit asam instan mempunyai aktivitas antioksidan lebih rendah dengan nilai IC50 22.736,79 µg/mL dibandingkan
jamu kunyit asam ramuan segar dengan nilai IC50 sebesar 7.163,20 µg/mL. Keduanya
tergolong dalam aktivitas antioksidan lemah.
xviii ABSTRACT
Free radical is an atom or molecule that has unpaired electrons that can enter the body and attack healthy cells. To prevent the negative effects of free radicals on the body the necessary compounds called antioxidants. Many natural antioxidants found in nature, one of them in traditional medicines.
One of the herbs that usually consumed is sour turmeric tonic. Sour turmeric tonic is commonly used to lessen the pain during menstruation, but it can be used as natural antioxidants. Sour turmeric tonic contains curcumin and anthocyanins that potent as antioxidants. This research aims to compare the antioxidant activity of fresh blend sour turmeric tonic and instant sour turmeric tonic by using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). Determination of antioxidant activity by DPPH method is showed by IC50 value (Inhibition Concentration 50).
The results showed that the instant sour turmeric tonic have a lesser antioxidant activity with IC50 value of 22.736,79 mg/mL than fresh blend sour
turmeric tonic with IC50 value of 7.163,20 mg/mL. Both of them have a weak antioxidant activity.
BAB I PENGANTAR
A. Latar Belakang Masalah
Pada saat ini ditemukan bahwa ternyata radikal bebas berperan dalam terjadinya berbagai penyakit. Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang mempunyai elektron tidak berpasangan. Elektron tidak berpasangan tersebut menyebabkan radikal bebas sangat reaktif yang kemudian akan menangkap atau mengambil elektron dari senyawa lain seperti protein, lipid, karbohidrat dan DNA untuk menetralkan diri. Radikal bebas dapat masuk ke dalam tubuh dan menyerang sel-sel yang sehat dan menyebabkan sel-sel tersebut kehilangan fungsi dan strukturnya (Sofia, 2005; Kumalaningsih, 2007). Kerusakan sel yang disebabkan radikal bebas merupakan faktor resiko terjadinya penuaan dini dan penyakit degeneratif seperti jantung koroner, stroke, dan kanker (Percival, 1998).
Menurut Pokorny (2001) antioksidan dibagi menjadi dua kelompok, yaitu antioksidan alami dan antioksidan sintetik. Antioksidan alami berasal dari hasil ekstraksi bahan alami yang berpotensi menangkap radikal bebas, sedangkan antioksidan sintetik diperoleh dari hasil sintesis secara kimia. Antioksidan sintetik yang diijinkan untuk makanan dan penggunaannya meluas yaitu butil hidroksi anisol (BHA), butil hidroksi toluen (BHT), propil galat, ter-butil hidroksi kuinon (TBHQ), dan tokoferol. Antioksidan sintetik sangat efektif dalam menghambat terjadinya oksidasi pada minyak atau lemak. Namun, adanya kekhawatiran terhadap efek samping penggunaan antioksidan sintetik menyebabkan banyak penelitian tentang potensi antioksidan alami salah satunya di dalam obat tradisional (Hasslberger, 2007; Saleh, Clark, Woodard, Deolu, 2010).
Menurut Undang-Undang No.23 tahun 1992 tentang kesehatan, obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun menurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (Depkes RI, 1992).
menggunakan produk jamu instan dilatarbelakangi oleh berbagai alasan baik tingkat ekonomi, pendidikan, maupun budaya.
Jamu kunyit asam merupakan salah satu produk jamu yang cukup banyak digunakan oleh masyarakat, baik dalam bentuk instan maupun ramuan segar dan telah dikenal luas secara turun-temurun. Jamu kunyit asam umumnya digunakan untuk memperlancar haid serta mengurangi nyeri haid. Selain itu, jamu kunyit asam dapat digunakan sebagai antioksidan alami yang membantu menjaga kecantikan dan kehalusan kulit (Olivia, 2006). Jamu kunyit asam dapat digunakan sebagai antioksidan alami karena adanya kandungan kurkumin pada kunyit (Soedibyo, 1998). Aktivitas antioksidan tersebut disebabkan oleh kemampuan donor atom hidrogen untuk menetralkan radikal bebas, sehingga kerusakan sel terutama pada sel kulit dapat terhambat dan tidak terjadi penuaan (Mukarromah, 2010). Menurut Masuda dan Jitoe (1996), kunyit mempunyai aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan dengan lengkuas, temulawak dan kapulaga.
Sedangkan pada jamu kunyit asam ramuaan segar mengandung 5 g rimpang kunyit dan 2,5 g asam jawa. Berdasarkan perbedaan komposisi tersebut maka memungkinkan daya antioksidan yang dimiliki oleh jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar juga berbeda. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan jamu kunyit asam ramuan segar dan instan.
Metode yang digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan ramuan segar ini adalah metode DPPH ( 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl). Dalam metode DPPH, penangkapan radikal bebas ditunjukkan dengan perubahan warna ungu menjadi kuning dan terjadinya penurunan absorbansi. Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC50 (Inhibition Concentration 50), yaitu
konsentrasi bahan uji yang diperlukan untuk menangkap 50% radikal DPPH. Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, sensitif, dan akurat untuk mengukur aktivitas antioksidan pada senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Prakash, Rigelhof, and Miller, 2010).
B. Permasalahan
C. Keaslian Penelitian
Sejauh pengamatan penulis, penelitian tentang aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar dengan metode 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) belum pernah dilakukan. Adapun penelitian yang pernah dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Kadar dan aktivitas antioksidan minuman kunyit dan asam yang manis oleh Septiana, 2004 yang menguji pengaruh proporsi kunyit dengan asam jawa dan jenis gula terhadap kadar dan aktivitas antioksidan minuman kunyit dan asam. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pada proporsi kunyit asam (60% : 40%), aktivitas antioksidan meningkat.
2. Uji daya analgesik jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar pada mencit putih betina oleh Rahmawati, 2009 yang menunjukkan hasil daya analgesik kunyit asam ramuan segar adalah 49,57% pada dosis 5.460mg/g BB dan daya analgesik kunyit asam instan adalah 70,68% pada dosis 18.200mg/g BB.
D. Manfaat Penelitian 1. Manfaat teoritis
penggunaan obat tradisional yang mempunyai daya antioksidan salah satunya, yaitu jamu kunyit asam.
2. Manfaat praktis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat mengenai daya antioksidan jamu kunyit asam instan dibandingkan dengan jamu kunyit asam ramuan segar sehingga dapat membantu masyarakat dalam memilih penggunaan obat tradisional ramuan segar atau instan dan atau membuat obat tradisional.
E. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum
Untuk menambah informasi mengenai khasiat jamu kunyit asam yang bersifat antioksidan.
2. Tujuan khusus
Untuk mengetahui adanya perbandingan daya antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar yang dinyatakan dengan IC50 (Inhibition
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Obat Tradisional
Menurut Undang-Undang No.23 tahun 1992 tentang kesehatan bab I pasal 1 ayat (10) obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun menurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (Depkes RI, 1992). Obat tradisional telah diterima secara luas di negara-negara yang tingkat rendah sampai sedang. Bahkan di beberapa negara berkembang obat tradisional telah dimanfaatkan dalalm pelayanan kesehatan terutama dalam pelayanan kesehatan strata pertama. Sementara itu di banyak negara maju penggunaan obat tradisional makin popular (Depkes RI, 2007).
pra klinik dan uji klinik, bahan baku dan produk jadinya telah distandarisasi (BPOM RI, 2004).
Menurut Suharmiati dan Handayani (2001), jamu ramuan segar merupakan jamu yang diolah dengan cara sederhana dan tradisional, yang secara umum pengolahannya dibedakan menjadi dua macam, yaitu dengan merebus seluruh bahan atau dengan cara mengambil / memeras sari yang terkandung dalam jamu kemudian dicampur dengan air matang. Soedibyo (1998) mengemukakan bahwa saat ini, produk-produk jamu telah diolah berdasarkan modernisasi teknologi dan industrialisasi yang memenuhi standar ketat kualitas dan keamanan, sehingga jamu bisa berbentuk ekstrak dalam kemasan pil, serbuk/puyer, dan kapsul, yang siap dikonsumsi masyarakat.
B. Kunyit
1. Keterangan botani
Kunyit (Curcuma domestica Val) termasuk dalam familia Zingiberaceae, juga dikenal dengan sinonimnya C domestica Rumph dan C. longa Auct. Nama umum disebut turmeric (Inggris), namun di Indonesia dikenal sebagai kunyit (Rukmana, 1999).
2. Nama daerah
Di Sumatera disebut kakunye, kunye, kinung, odil, ondil. Di Jawa Tengah disebut kunyir, konye, kunir, temu kuning. Di Kalimantan dikenal sabagai henda, cahang, dio, kalesiau. Di Nusa Tenggara disebut kunyik, wingira, kemunyi, kunik, guni, kunir. Di Sulawesi disebut uinida, alawahu, pagidon, uni, kuni. Di Maluku disebut kurlai, lulu malai, ulin, tum, kunine, gogohiki (Depkes RI, 1977).
3. Morfologi tanaman
Kunyit merupakan tanaman semak, mempunyai batang pohon semu dan basah, tingginya sekitar 1 m dan bunganya muncul dari pucuk batang semu dengan panjang sekitar 10-15 cm dan berwarna putih (Soedibyo, 1998). Setiap tanaman berdaun 3 sampai 8 helai, panjang tangkai daun beserta pelepah daun sekitar 70 cm. helaian daun berbentuk lanset lebar, ujung daun lancip dan keseluruhannya berwarna hijau atau hanya bagian atas dekat tulang utama berwarna agak keunguan. Rimpang terbentuk dengan sempurna, bercabang-cabang, berwarna jingga (Depkes RI, 1977). 4. Kandungan kimia
kunyit adalah kurkuminoid dan minyak atsiri. Kandungan kurkuminoid dalam rimpang kunyit sebesar 3-5% yang terdiri dari kurkumin, demetoksikurkumin, dan bis-demetoksikurkumin. Sedangkan kandungan minyak atsiri dalam rimpang kunyit sebesar 2-7% yang terdiri dari turmeron, zingiberon, seskuiterpen alkohol (Soedibyo, 1998; Bisset and Wichtl, 2001; Wahyuni, Hardjono, dan Paskalina, 2004).
Kurkuminoid merupakan senyawa kandungan utama tanaman kunyit, yang terkait secara kimia dengan bahan utamanya, yaitu kurkumin. Kurkumin murni sangat sulit diperoleh langsung dari kunyit karena sering kali tercampur dengan dua turunannya, yaitu demetoksikurkumin, bis-demetoksikurkumin (Bone dan Mills, 2000). Ketiganya memberikan warna kuning pada Curcuma domestica, terutama pada rhizomanya (Majeed, 1995).
Kurkumin memiliki aktivitas biologi yang tinggi meliputi aktivitas antioksidan, aktivitas antikanker, aktivitas antiangiogenesis, aktivitas antiinflamasi, aktivitas analgesik, dan lain-lain (Olivia, 2006). Mekanisme antioksidan pada kurkumin dihubungkan dengan adanya atom H dari gugus fenolik (Majeed, 1995). Kurkumin menunjukkan aktivitas sebagai penangkap radikal hidroksi, radikal superoksid, dan oksigen singlet. Dengan aktivitas penangkap radikal tersebut, kurkumin dapat berfungsi sebagai penangkap spesi reaktif yang menyebabkan terjadinya kerusakan lipid, hemoglobin, dan DNA yang menjadi faktor pencetus berbagai macam penyakit (Wulandari, 2009). Pengukuran aktivitas penangkapan radikal DPPH oleh kurkumin menunjukkan IC50 sebesar 22,3 µg/mL. Hasil tersebut
menunjukkan nilai IC50 lebih kecil dibanding demetoksikurkumin,
bis-demetoksikurkumin, maupun diasetil kurkumin (Majeed, 1995).
Gambar 3. Struktur senyawa kurkumin (Majeed, 1995). Keterangan gambar:
C. Asam Jawa
Gambar 4. Buah Asam Jawa (Khikmah, 2013) 1. Keterangan botani
Asam jawa (Tamarindus indica L.) termasuk dalam familia Leguminose. Nama umum biasa disebut tamarind (Inggris), tamarinier (Perancis), sedangkan di Indonesia lebih dikenal dengan nama asam jawa (Arisandi, 2006).
2. Nama daerah
Tumbuhan Asam Jawa mempunyai nama yang berbeda-beda di beberapa daerah. Di Sumatera dikenal dengan nama bak me, acam lagi, acam Jawa, kayu asam, menceloki, dan cumalagi. Di Jawa dikenal dengan nama tangkal asam, wit asem, dan acem. Di Kalimantan dikenal dengan nama asam Jawa. Di Maluku dikenal dengan nama tobe laki dan asam jawaka (Depkes RI, 1985).
3. Morfologi tanaman
pertulangan menyirip, halus, hijau, tangkai panjang ± 0,2 cm. bunga majemuk, bentuk tandan, di ketiak daun, tangkai panjang ± 0,6 cm, kuning, kelopak bentuk tabung, hijau kecoklatan, benang sari jumlahnya banyak, putih, putik putih, mahkota kecil, kuning, buah polong, panjang ± 10 cm, hijau kecoklatan. Biji bentuk kotak, pipih. Akar tunggang coklat kotor (Hutapea, 1994).
4. Kandungan kimia
Daging buah asam antara lain mengandung asam sitrat, asam malat, asam suksinat, asam tartrat, dan pektin, juga didapati gula invert (Tampubolon, 1981). Bahan lain yang dapat diperoleh dari buah ini adalah xyloglycans, tannins, saponins,
sesquiterpenes, alkaloids, dan phlobatannins (Pauly, 1999). Selain agen-agen yang dapat ditemukan di atas, ternyata baru-baru ini juga ditemukan agen aktif yang sangat bermanfaat dalam bidang medis, yaitu anthocyanin (Nair, et al., 2004).
Gambar 5. Struktur Anthocyanin (Sullivan,1998) 5. Kegunaan
mengobati sakit perut, mengobati sariawan, mengobati wasir dan rematik (Soedibyo, 1998).
D. Radikal Bebas
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan sehingga menjadi komponen yang tidak stabil dan sangat reaktif. Dalam rangka mendapatkan stabilitas kimia, radikal bebas memiliki kecenderungan untuk mencari pasangan. Radikal bebas akan menyerang molekul stabil yang terdekat dan mengambil elektron. Zat yang terambil elektronnya akan menjadi radikal bebas juga sehingga akan memulai suatu reaksi berantai yang akhirnya terjadi kerusakan sel (Arief, 2006; Winarsi, 2007). Senyawa radikal tersebut timbul akibat berbagai proses kimia kompleks dalam tubuh, berupa hasil sampingan dari proses oksidasi atau pembakaran sel yang berlangsung pada waktu bernafas; metabolisme sel, 90% ROS digunakan sel untuk transport elektron oleh mitokondria; peradangan, terjadi fagositosis oleh sel darah putih, karena mekanisme terbunuhnya virus dan bakteri serta denaturasi protein asing (antigen); metabolisme xenobiotik (zat asing yang berasal dari luar tubuh, seperti obat, toksikan); atau ketika tubuh terpapar polusi lingkungan (Percival, 1998).
akan merusak senyawa lemak pada membran sel sehingga kulit kehilangan ketegangannya (rigor) dan menjadi keriput (Mukarromah, 2010).
Target utama radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein, serta unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari molekul-molekul tersebut, yang paling rentan terhadap serangan radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh (Winarsi, 2007).
Diantara jenis radikal bebas, radikal hidroksil merupakan jenis yang paling reaktif dan bereaksi sengat cepat dengan hampir semua tipe molekul dalam sel hidup (Halliwell dan Gutterdge, 1999).
E. Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang diperlukan tubuh untuk menetralisir radikal bebas dan mencegah kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas terhadap sel normal, protein, dan lemak. Antioksidan memiliki berat molekul kecil akan menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas (Gsianturi, 2006; Winarsi, 2007).
terbentuknya, antioksidan ini dibedakan menjadi dua, yakni intraselular dan ekstraselular ataupun dari makanan. Dari sini antioksidan dapat dikelompokkan menjadi tiga yakni:
1. Antioksidan primer
Antioksidan primer ini bekerja untuk mencegah terbentuknya radikal bebas dan mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang berkurang dampak negatifnya, sebelum radikal bebas ini sempat bereaksi. Contoh antioksidan ini adalah enzim SOD (Superoksida dismutase) yang mengubah anion superoksida menjadi hidrogen peroksida yang kurang toksik sehingga tidak bereaksi untuk menimbulkan efek atau radikal yang lebih reaktif; glutation peroksidase yang mengubah hidrogen peroksida dan lipid peroksida menjadi molekul yang kurang berbahaya sebelum terbentuk radikal bebas; serta protein pengikat metal seperti feritin dan ceruloplasmin yang mencegah terbentuknya ion ferro (Fe++) yang dapat membentuk radikal hidroksil (Dalimartha, 1999; Elvina, 1997).
2. Antioksidan sekunder
Antioksidan ini berguna untuk menangkap radikal bebas dan mencegah terjadinya reaksi berantai. Kelompok ini termasuk antioksidan ekstraselular yang kebanyakan berasal dari makanan seperti vitamin E, vitamin C, beta karoten, asam urat, bilirubin, dan albumin (Dalimartha, 1999; Elvina, 1997).
3. Antioksidan tersier
sulfoksidan reduktase. Adanya enzim-enzim perbaikan DNA ini berguna untuk mencegah penyakit kanker (Dalimartha, 1999;Elvina, 1997).
Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi menjadi dua kelompok, yaitu antioksidan alami dan antioksidan sintetik.
(a) Antioksidan alami
Antioksidan alami merupakan antioksidan yang diproduksi langsung oleh tanaman atau tubuh, contohnya: senyawa polifenol flavonoid, tanin, katalase, dan glutation peroksidase (Pervical, 1998). Aktivitas antioksidan alami bergantung pada struktur kimia senyawa penyusunnya dan kemampuan senyawa tersebut untuk menangkap radikal kemudian menstabilkannya selama reaksi berlangsung (Pokorny, Ynisshilieva, and Gordon, 2001).
(b) Antioksidan sintetik
Antioksidan sintetik adalah antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesis secara kimia. Terdapat lima antioksidan sintetik yang digunakan untuk makanan yang penggunaannya meluas, yaitu butil hidroksi anisol (BHA), butil hidroksi toluena (BHT), propil galat, ter-butil hidroksi kuinon (TBHQ), dan tokoferol (Pokorny, Ynisshilieva, and Gordon, 2001).
F. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
1. Pengujian penangkapan radikal DPPH
Pengujian dengan cara ini dilakukan dengan mengukur penangkapan radikal sintetik dalam pelarut organik polar seperti metanol atau etanol pada suhu kamar. Penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa diikuti dengan mengamati penurunan absorbansi pada 517 nm.
2. Pengujian aktivitas antioksidan dengan sistem linoleat-tiosianat.
Asam linoleat merupakan asam lemak tidak jenuh dengan dua buah ikatan rangkap yang mudah mengalami oksidasi membentuk radikal peroksida. Senyawa antioksidan akan berperan dalam mengkelat logam fero dan menangkap radikal peroksida.
3. Pengujian dengan asam tiobarbiturat atau TBA (Thio Barbituric Acid).
Pengujian ini berdasarkan adanya malonaldehid yang terbentuk dari asam lemak bebas tidak jenuh dengan paling sedikit memiliki 3 ikatan rangkap dua. Malonaldehid selanjutnya bereaksi dengan asam tiobarbiturat membentuk produk kromogen yang berwarna merah muda yang diukur absorbansinya pada panjang gelombang 532 nm. Adanya senyawa yang bersifat antioksidan akan menghambat terbentuknya malonaldehid dari asam lemak bebas tidak jenuh.
G. Metode DPPH
sebagai penangkap radikal bebas atau donor hidrogen. Metode DPPH dapat digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan dari senyawa dalam bentuk aslinya ataupun dalam campuran (Prakash, Rigelhof, and Miller, 2010). Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, sensitif, dan akurat untuk mengukur aktivitas antioksidan pada senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Koleva, van Beek, Linssen, de Groot, dan Evstatieva, 2002: Prakash, Rigelhof, and Miller, 2010).
Gambar 6. Reaksi Radikal DPPH dengan Antioksidan (Widodo, 2011).
Data absorbansi yang diperoleh pada pengukuran menggunakan spektrofotometer visible dibuat persamaan regresi linear yang menyatakan hubungan antara konsentrasi bahan uji (x) dengan % IC (y) dari suatu seri replikasi pengukuran. Nilai IC50, yaitu konsentrasi bahan uji yang diperlukan untuk menangkap 50% radikal
DPPH dapat ditentukan menggunakan persamaan regresi linear tersebut. Semakin kecil nilai IC50 semakin tinggi daya antioksidan suatu senyawa, demikian sebaliknya.
Menurut Ariyanto cit Nusarini (2007), tingkat kekuatan antioksidan senyawa uji menggunakan metode DPPH dapat digolongkan menurut nilai IC50nya (Tabel I):
Tabel I. Tingkat daya antioksidan dengan metode DPPH
Intensitas Nilai IC50
Sangat kuat < 50 µg/mL
Kuat 50-100 µg/mL
Sedang 101-150 µg/mL
H. Spektrofotometri Visibel
Spektrofotometri visibel adalah suatu teknik analisis fisika-kimia yang mengamati tentang interaksi atom atau molekul dengan radiasi elektromagnetik sinar tampak pada panjang gelombang 380-780 nm dengan memakai instrumen spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995).
Bila cahaya jatuh pada suatu senyawa, maka sebagian dari cahaya tersebut akan diserap oleh molekul-molekul sesuai dengan struktur dari molekul. Setiap senyawa memiliki energi yang sama dengan perbedaan energi antara keadaan tingkat dasar dan energi keadaan tereksitasi, maka elektron-elektron pada keadaan tingkat dasar akan dieksitasi ke tingkat energi eksitasi dan sebagian energi cahaya yang sesuai dengan panjang gelombang ini diserap. Frekuensi yang diserap setiap senyawa sangat spesifik karena perbedaan energi antara tingkat dasar dan tingkat eksitasi setiap senyawa juga spesifik (Sastrohamidjojo, 2001).
Interaksi antara senyawa yang mempunyai gugus kromofor dengan radiasi elektromagnetik dan spektra absorbansi elektromagnetik. Spektrum visibel mempunyai absorbansi antara 400-800 nm, sedangkan spektrum UV mempunyai absorbansi antara 100-400 nm (Fessenden dan Fessenden, 1995).
dari satu orbital molekul dengan tingkat energi elektronik tertentu ke orbital lain dengan tingkat energi elektronik yang lebih tinggi (Fessenden dan Fessenden, 1995).
I. Landasan Teori
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang mempunyai elektron tidak berpasangan. Radikal bebas sangat reaktif dan tidak stabil sehingga akan menstabilkan diri dengan menyerang molekul stabil terdekat dan mengambil elektronnya. Zat yang terambil elektronnya juga akan menjadi radikal bebas sehingga akan terjadi suatu reaksi berantai yang menyebabkan kerusakan sel. Kerusakan sel tersebut akan menimbulkan berbagai macam penyakit. Oleh karena itu, diperlukan senyawa untuk menetralisir radikal bebas dan mencegah kerusakannya, yaitu antioksidan. Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi menjadi dua kelompok yaitu antioksidan alami dan antioksidan sintetik. Namun, adanya kekhawatiran terhadap efek samping penggunaan antioksidan sintetik menyebabkan banyak penelitian tentang potensi antioksidan alami di dalam obat tradisional.
jamu kunyit asam disebabkan oleh adanya senyawa kurkumin pada kunyit. Senyawa antioksidan mampu mengubah lipid peroksida menjadi molekul kurang berbahaya sehingga memperlambat proses penuaan. Perbedaan proses pembuatan serta komposisi dari jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar memungkinkan adanya perbedaan daya antioksidannya.
Aktivitas antioksidan dapat diuji dengan metode DPPH karena merupakan metode yang mudah, cepat, sensitif, dan akurat untuk mengukur aktivitas antioksidan pada senyawa tertentu atau ekstrak tanaman. Prinsip metode ini didasarkan pada kemampuan suatu antioksidan untuk mengurangi intensitas warna ungu. Ketika elektron pada radikal bebas DPPH berpasangan dengan senyawa antioksidan, maka warna larutan berubah dari ungu menjadi kuning dan absorbansinya menurun secara stoikiometri sesuai dengan jumlah elektron yang diambil pada panjang gelombang maksimum 517 nm. Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC50, yaitu konsentrasi
bahan uji yang diperlukan untuk menangkap 50% radikal DPPH.
J. Hipotesis
24
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian non-eksperimental dengan rancangan penelitian deskriptif. Rancangan penelitian bersifat deskriptif karena hanya mendeskripsikan keadaan yang ada.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar.
2. Variabel tergantung dari penelitian ini adalah aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar dilihat dari persen IC.
3. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kualitas kunyit dan asam jawa, bahan kimia dan alat-alat yang digunakan selama penelitian
1. Jamu kunyit asam instan adalah jamu Kunyit Asam instan produksi PT SM. 2. Jamu kunyit asam ramuan segar adalah jamu kunyit asam yang dibuat dengan
cara merebus rimpang kunyit yang telah diparut dan daging buah asam segar, kemudian diperas untuk memisahkan sari jamu kunyit asam dari ampasnya.
D. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini: rimpang kunyit yang diperoleh dari Pasar Beringharjo dan buah asam yang diperoleh dari daerah Kulon Progo untuk membuat jamu kunyit asam ramuan segar, jamu kunyit asam instan produksi PT SM,
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) (Sigma Chem. Co., USA), metanol p.a (Merck), kertas aluminium foil, dan aquadest.
E. Instrumen Penelitian
1. Preparasi sampel
a. Pembuatan larutan kunyit asam ramuan segar
Pembuatan larutan kunyit asam ramuan segar berdasarkan komposisi ekstrak kunyit : asam = 20% : 10% dalam kunyit asam instan produksi PT “SM”. Dalam satu sachet kunyit asam instan mempunyai bobot 25 g.
Kunyit : 20% x 25 g = 5 g Asam : 10% x 25 g = 2,5 g
Pembuatan dilakukan dengan cara rimpang kunyit yang akan digunakan dibersihkan terlebih dahulu, dikupas dan dicuci. Kemudian rimpang diparut dan ditimbang sebanyak 5 g, sedangkan buah asam jawa dipisahkan dari bijinya kemudian daging buah asam jawa ditimbang sebanyak 2,5 g. Setelah itu parutan rimpang kunyit dan daging buah asam jawa yang telah ditimbang kemudian direbus dengan 100 mL air mendidih selama 10 menit. Setelah 10 menit, larutan jamu dipisahkan dari ampasnya dengan cara disaring dan didiamkan sampai dingin.
b. Pembuatan larutan kunyit asam instan
a. Pembuatan larutan DPPH
Sebanyak 5,500 mg DPPH ditimbang dan dilarutkan ke dalam metanol p.a sehingga diperoleh larutan DPPH dengan konsentrasi 0,139 mM. Larutan ditutup dengan aluminium foil.
b. Pembuatan larutan uji
i. Larutan uji jamu kunyit asam ramuan segar
Sebanyak 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0 mL larutan jamu kunyit asam diambil kemudian ditambahkan metanol sampai 25,0 mL, sehingga diperoleh konsentrasi larutan uji sebesar 18.000,0; 24.000,0; 30.000,0; 36.000 ,0 dan 42.000,0 µg/mL.
ii. Larutan uji jamu kunyit asam ramuan instan
Sebanyak 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0 mL larutan jamu kunyit asam diambil kemudian ditambahkan metanol sampai 25, 0 mL, sehingga diperoleh konsentrasi larutan uji sebesar 60.000,0; 80.000,0; 100.000,0; 120.000,0 dan 140.000,0 µg/mL.
3. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan
a. Penentuan operating time (OT) metode uji aktivitas antioksidan
tersebut ditambahkan dengan metanol hingga batas. Larutan tersebut kemudian divortex kemudian diukur pada panjang gelombang 517 nm selama 1 jam. Selanjutnya, dilakukan demikian juga untuk larutan kunyit asam ramuan instan. b. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum (λ maksimum) metode uji
aktivitas antioksidan
Sebanyak 0,4; 1,2 dan 2,0 mL larutan DPPH ditambahkan metanol sampai tanda batas pada labu ukur 10,0 mL. Selanjutnya, larutan dihomogenkan dengan
vortex, diamkan selama OT, kemudian dilakukan scanning λ maksimum dengan
spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 400-600 nm.
4. Uji aktivitas antioksidan
a. Pengukuran absorbansi kontrol
Pada labu ukur 10,0 mL, dimasukkan sebanyak 2 mL larutan DPPH. Larutan tersebut ditambah dengan metanol hingga tanda batas, kemudian dihomogenkan dengan vortex dan diukur absorbansinya saat OT dan λ
maksimum. Pengerjaan dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
b. Pengukuran absorbansi larutan uji jamu kunyit asam ramuan segar dan jamu kunyit asam instan
selama OT. Larutan diukur absorbansinya pada λ maksimum dengan
spektrofotometri visibel. Pengerjaan dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
G. Analisis Hasil
Aktivitas antioksidan dihitung dengan menggunakan rumus:
% IC = ���������� ������� ������� –���������� ������� ������
���������� ������� ������� x 100%
Data absorbansi senyawa uji dan senyawa kontrol digunakan untuk menghitung IC50 dengan menggunakan persamaan garis regresi linear antara
masing-masing konsentrasi jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar (sumbu x) dengan % IC (sumbu y). Selanjutnya dilakukan uji statistika menggunakan uji T tidak berpasangan untuk menentukan signifikansi perbedaan nilai IC50 jamu
kunyit asam ramuan segar dan jamu kunyit asam instan. Data IC50 jamu kunyit asam
instan dan jamu kunyit asam ramuan segar kemudian dibandingkan dengan IC50
30
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar
Pada penelitian ini digunakan jamu kunyit asam ramuan segar sebagai
senyawa uji yang merupakan campuran dari rimpang kunyit dan daging buah asam
jawa. Rimpang kunyit diperoleh dari Pasar Beringharjo dan buah asam jawa
diperoleh dari daerah Kulonprogo.
Bagian kunyit yang diambil sebagai bahan uji pada penelitian ini adalah
bagian empu yang merupakan bagian utama rimpang. Bagian ini dipilih karena
berwarna lebih kuning dibandingkan dengan bagian lainnya sehingga diperkirakan
mengandung lebih banyak senyawa kurkumin. Selanjutnya, bagian tersebut dikupas
kemudian dicuci. Pencucian tidak boleh terlalu lama karena warna kuning dapat
terbawa oleh air sehingga mempengaruhi kadar kurkumin yang terdapat di dalam
rimpang. Setelah dicuci, kunyit diparut kemudian ditimbang, sedangkan untuk asam
jawa bagian yang diambil adalah dagingnya. Daging buah asam dipisahkan dari
bijinya kemudian ditimbang. Setelah dilakukan penimbangan untuk parutan kunyit
dan daging buah asam jawa, campuran tersebut direbus bersama dalam air mendidih
B. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
DPPH memberikan serapan yang kuat pada panjang gelombang 517 nm
(Dehpour, Ebrahimzadeh, Fazel, dan Mohammad, 2009). Oleh karena itu,
sebelumnya dilakukan orientasi untuk mengetahui serapan jamu kunyit asam ramuan
segar dan jamu kunyit asam instan pada panjang gelombang 517 nm. Scanning juga
dilakukan pada metanol sebagai pelarut. Hal ini dilakukan karena apabila terdapat
serapan jamu kunyit asam ramuan segar dan jamu kunyit asam instan ataupun
metanol pada panjang gelombang tersebut akan mengganggu pengukuran DPPH
sehingga pengukuran menjadi tidak akurat. Hasil orientasi menunjukkan bahwa tidak
terdapat serapan jamu kunyit asam ramuan segar dan jamu kunyit asam instan
ataupun metanol pada panjang gelombang 517 nm (lampiran 4). Untuk menguji
aktivitas antioksidan jamu kunyit asam ramuan segar dan jamu kunyit asam instan
terlebih dahulu dilakukan penentuan Operating Time (OT) dan panjang gelombang
maksimum.
1. Penentuan Operating Time (OT)
Operating Time adalah waktu dilakukannya pembacaan serapan dengan
spektrofotometer visibel, dimana larutan uji sudah mereduksi radikal DPPH dengan
sempurna sehingga didapat nilai absorbansi yang stabil. Penentuan OT dilakukan
dengan mengukur hubungan antara serapan larutan dan waktu pengukuran.
Pada penelitian ini dilakukan penentuan OT sebanyak dua kali, yaitu OT
ramuan segar. OT pada penelitian ini diukur dari menit ke-5 sampai menit ke-60 pada
panjang gelombang teoritis 517 nm. Hasil pengukuran OT antara sampel jamu kunyit
asam instan dan OT dengan sampel jamu kunyit asam ramuan segar menunjukkan
perbedaan waktu. Hasil pengukuran absorbansi pada OT dengan sampel jamu kunyit
asam instan menunjukkan pada menit 25 dengan absorbansi stabil, yaitu 0,342,
sedangkan OT dengan sampel jamu kunyit asam ramuan segar menunjukkan pada
menit 20 dengan absorbansi stabil, yaitu 0,304 (Lampiran 5). Dari hasil penelitian
dipilih OT yang paling lama untuk meminimalkan variasi serapan yang cukup besar
dan memiliki tingkat reprodusibilitas yang tinggi pada pengukuran ulang.
2. Penentuan maksimum
Tujuan penentuan panjang gelombang maksimum dalam penelitian ini adalah
untuk menentukan panjang gelombang dimana larutan DPPH mempunyai serapan
yang maksimum. Kondisi percobaan dan alat yang digunakan tidak selalu sama
sehingga panjang gelombang maksimum yang dihasilkan pada setiap penelitian
kemungkinan berbeda. Apabila pengukuran dilakukan pada panjang gelombang
maksimum, maka dengan adanya perubahan kecil dari kadar larutan yang hendak
dianalisis dapat memberikan perbedaan hasil serapan yang besar. Dengan begitu,
sensitivitas dari metode akan semakin meningkat.
Penentuan panjang gelombang serapan maksimum dilakukan dengan
mengukur panjang gelombang dari tiga seri konsentrasi DPPH yang berbeda, yaitu
pada panjang gelombang 400 nm sampai 600 nm. Rentang panjang gelombang ini
dipilih untuk melihat adakah pergeseran panjang gelombang maksimum apabila
dibandingkan dengan panjang gelombang maksimum teoritis, yaitu pada 517 nm.
Dari ketiga seri larutan DPPH tersebut diperoleh panjang gelombang maksimum
yaitu pada 516 nm (Tabel II).
Tabel II. Hasil scanning maksimum DPPH
C. Hasil Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH
Pengukuran aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit
asam ramuan segar dilakukan pada berbagai konsentrasi. Hal ini dilakukan untuk
mengetahui pengaruh konsentrasi terhadap aktivitas antioksidan. Semakin besar
konsentrasi jamu kunyit asam instan dan ramuan segar yang ditambahkan, semakin
banyak pula atom hidrogen yang didonasikan maka aktivitas antioksidan semakin
besar. DPPH adalah radikal yang stabil berwarna ungu gelap yang memiliki
absorbansi kuat pada panjang gelombang 517 nm (Molyneux, 2004). Warna ungu
gelap ini terbentuk karena radikal DPPH mampu beresonansi sehingga terbentuk
Gambar 7. Resonansi DPPH dan gugus kromofor serta auksokrom yang terbentuk
Ketika elektron pada radikal bebas DPPH berpasangan dengan senyawa
antioksidan, maka absorbansinya akan turun dan larutan menjadi berwarna kuning.
Penurunan intensitas warna yang terjadi disebabkan berkurangnya ikatan rangkap
terkonjugasi pada DPPH. Apabila satu elektron berpasangan dengan senyawa
antioksidan maka tidak ada kesempatan elektron tersebut untuk beresonansi (Widodo,
2011).
OH3C
Tabel III. Hasil % penghambatan jamu kunyit asam instan
Replikasi Konsentrasi
14.878,67 0,621 30,77
18.598,32 0,573 35,47
22.317,98 0,467 47,41
26.037,65 0,349 60,70
II
14.894,34 0,616 30,47
18.617,92 0,563 36,46
22.341,50 0,456 48,53
26.065,09 0,351 60,38
III
14.888,58 0,602 32,05
18.610,72 0,551 37,81
22.332,86 0,465 47,52
Tabel IV. Hasil % penghambatan jamu kunyit asam ramuan segar
Dilihat dari tabel III dan tabel IV, dapat dilihat bahwa larutan kontrol
mempunyai absorbansi yang lebih tinggi dibandingkan dengan larutan uji yaitu
larutan jamu kunyit asam instan dan ramuan segar. Hal ini dikarenakan larutan
kontrol hanya berisi DPPH saja dan tidak mengandung senyawa yang mempunyai
aktivitas antioksidan. Aktivitas antioksidan ditetapkan berdasarkan kurva persamaan
replikasi sehingga diperoleh persamaan regresi linear. Dari ketiga persamaan regresi
linear tersebut dipilih persamaan yang paling linear. Linieritas dinyatakan sebagai
koefisien korelasi (r). Persamaan regresi linear yang dipilih untuk jamu kunyit asam
instan yaitu y = 0,0027 x -11,4898 dengan nilai r = 0,9948. Sedangkan persamaan
regresi linear yang dipilih untuk jamu kunyit asam instan, yaitu y = 0,0104 x
-26,1921 dengan nilai r = 0,9963. Hubungan korelasi antara konsentrasi dan % IC
yang diperoleh dapat dilihat pada gambar (9) dan (10) berikut.
Gambar 10. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan jamu kunyit asam
Gambar 11. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan jamu kunyit asam ramuan segar
Daya antioksidan dinyatakan dengan IC50 yaitu konsentrasi antioksidan yang
diperlukan untuk menangkap 50% radikal DPPH. Semakin kecil nilai IC50, semakin
sedikit konsentrasi yang dibutuhkan untuk menangkap 50% radikal bebas.
Berdasarkan persamaan regresi linear antara masing-masing konsentrasi jamu kunyit
asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar dengan % IC dapat diketahui nilai
Tabel V. Nilai IC50 jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar
Jamu kunyit
Instan 23.188,15 22.774,00 22.248,21 22.736,79 471,07 2,07
Ramuan
segar 7.326,16 7.183,00 6.980,45 7.163,20 173,70 2,42
Dari tabel VII diketahui bahwa jamu kunyit asam instan mempunyai nilai IC50
sebesar 22.736,79 µg/mL, sedangkan untuk jamu kunyit asam ramuan segar sebesar
7.163,20 µg/mL. Untuk mengetahui adanya perbedaan bermakna antara nilai IC50
jamu kunyit asam instan dan ramuan segar maka dilakukan uji statistik yaitu uji T
tidak berpasangan. Uji T tidak berpasangan mempunyai syarat bahwa data harus
terdistribusi normal. Oleh karena itu, langkah pertama yang dilakukan adalah uji
normalitas menggunakan uji Shapiro-Wilk. Uji ini mempunyai syarat sampel ≤ 50.
Sampel yang digunakan dalam penelitian adalah 6 data. Hasil yang diperoleh dari uji
Shapiro-Wilk menunjukkan nilai p untuk jamu kunyit asam instan sebesar 0,218 dan
untuk ramuan segar sebesar 0,121. Maka dapat disimpulkan bahwa nilai %IC jamu
kunyit asam instan maupun ramuan segar mengikuti distribusi normal karena nilai p
lebih besar dari 0,05 (taraf kepercayaan 95%).
Langkah selanjutnya dilakukan analisis untuk melihat signifikansi nilai IC50
antara jamu kunyit asam instan dan ramuan segar dengan uji T tidak berpasangan.
Hipotesis alternatif yang digunakan adalah nilai IC50 jamu kunyit asam instan
jamu kunyit asam instan tidak berbeda dengan jamu kunyit asam ramaun segar. Hasil
yang diperoleh nilai signifikansi 0,000 antara jamu kunyit asam instan dan ramuan
segar. Apabila dibandingkan dengan nilai signifikasi yang ditentukan yaitu 0,05 maka
H0 ditolak karena 0,000 < 0,05. Maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan
nilai IC50 yang signifikan antara jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam
ramuan segar.
Dari nilai IC50 jamu kunyit asam instan sebesar 22.736,79 µg/mL ± 471,07
µg/mL dan jamu kunyit asam ramuan segar sebesar 7.163,20 µg/mL ± 173,70 µg/mL,
keduanya memiliki aktivitas antioksidan yang lemah karena mempunyai IC50 > 150
µg/mL. Pada penelitian ini digunakan IC50 kurkumin teoritis sebagai pembanding,
yaitu sebesar 8,2064 µg/mL. Berdasarkan nilai IC50 itu diketahui bahwa kurkumin
memiliki aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan jamu kunyit asam instan dan
jamu kunyit asam ramuan segar. Hal ini kemungkinan disebabkan pada saat
pembuatan jamu digunakan air sebagai pelarut sehingga kurkumin tidak terekstraksi
sempurna. Selain itu adanya interaksi antara kandungan kunyit dan asam
dimungkinkan juga dapat menyebabkan penurunan aktivitas antioksidan jamu kunyit
asam. Semakin kecil IC50 maka daya antioksidannya semakin besar karena dengan
konsentrasi kecil sudah dapat menimbulkan efek.
Dilihat dari kandungan zat pada jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit
asam ramuan segar kemungkinan yang memiliki peranan paling besar pada aktivitas
segar lebih besar dibandingkan dengan jamu kunyit asam instan karena jamu kunyit
asam instan mengalami proses pengerjaan yang berbeda dan juga mengalami proses
penyimpanan sehingga kemungkinan terjadi degradasi kurkumin yang menyebabkan
aktivitas kurkumin sebagai zat antioksidan berkurang.
Kelemahan penelitian ini adalah tidak ditetapkannya kadar kurkumin pada
jamu kunyit asam. Kadar kurkumin diperlukan untuk mengetahui seberapa banyak
kurkumin sebagai zat yang bertanggungjawab terhadap aktivitas antioksidan dari
jamu kunyit asam instan maupun jamu kunyit asam ramuan segar. Selain itu tidak
dilakukan pengukuran pH untuk mengetahui pengaruh asam dalam sediaan jamu
kunyit asam tersebut. Menurut Septiana, 2004 terdapat pengaruh penambahan asam
pada campuran kunyit asam. Penambahan asam dapat menurunkan aktivitas
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Jamu kunyit asam instan (IC50 22.736,79 µg/mL) mempunyai aktivitas
antioksidan lebih rendah dibandingkan dengan jamu kunyit asam ramuan segar (IC50
7.163,20 µg/mL).
B. Saran
1. Perlu dilakukan penetapan kadar kurkumin sebagai zat yang bertanggungjawab terhadap aktivitas antioksidan jamu kunyit asam instan maupun jamu kunyit asam ramuan segar
2. Perlu dilakukan pengukuran pH untuk mengetahui pengaruh asam pada sediaan jamu kunyit asam
Daftar Pustaka
Aggarwal, B.B., Bhatt, I.D., Ichikawa, H., Ahn, K.S., Sethi, G., Sandur, S.K., 2006,
Curcumin-Biological and Medicinal Properties, http://www.indsaff.com/10%20Curcumin%20biological.pdf diakses tanggal 30 Mei 2011.
Arief, S., 2006, Radikal Bebas http://www.pediatrik.com/buletin/06224113752-x0zu6l.pdf diakses tanggal 28 Mei 2011.
Australian Pesticides & Veterinary Medicines Authority, 2004, Guidelines For The Validation of Analytical Methods For Active Constituent, Agricultural and Veterinary Chemical Products, http://www.apvma.gov.au , diakses tanggal 23 Juni 2011.
Bisset , N.G. and Wichtl, M., 2001, Herbal Drugs and Phytopharmaceuticals, Edisi 2, CRC Press, New York, pp 174.
Bone, K., dan Mills, S., 2000, Principles and Practice of Phytotherapy, Churchill Livingstone, New York, pp. 569, 571.
BPOM RI, 2004, Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia No. HK.00.05.4.2411 tentang Ketentuan Pokok Pengelompokan dan Penandaan Obat Bahan Alam Indonesia, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta.
Dalimartha, 1999, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jilid 1, Trubus Agriwidya, Jakarta, pp. 136-138.
Dehpour, A.A., Ebrahimzadeh, M.A., Fazel, N.S., and Mohammad, N.S., 2009, Antioxidant Activity of Methanol Extract of Ferula assafoetida and Its Essential Oil Composition, Grasas Aceites, 60(4), 405-412.
Depkes RI, 1977, Materia Medika Indonesia, Jilid I, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 47, 51.
Depkes RI, 1985, Tanaman Obat Indonesia, Jilid II, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 101.
Depkes RI, 2007, Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia no.381/menes/SK/III/2007 tentang Kebijakan Obat Tradisional Nasional, Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Elvina, K., 1997, Antioksidan, Resep Sehat & Umur Panjang, http://www.indomedia.com/intisari/1997/Juni/antioks.htm., diakses pada tanggal 10 April 2011.
Fessenden, R.J. dan Fessenden, J.S., 1995, Kimia Organik, Jilid II, edisi 3, Penerbit Erlangga, Jakarta, pp. 119-210.
Gsianturi, 2006, Antioksidan Memerangi Radikal Bebas,
http://www.suarapembaruan.com/News/2006/01/17/index.html diakses tanggal 9 April 2010.
Halliwell, B. dan Gutteridge, J.M.C., 1999, Free Radicals in Biology and Medicine, 3th ed., Oxford University Press, New York, pp. 368-369.
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi dan Cara Perhitungan, Departemen FMIPA UI, Depok, pp.5-13.
Hasslberger, Sepp, 2007, Synthetic Antioxidants 'Can Harm Your Health', http://www.newmediaexplorer.org/sepp/2007/02/28/synthetic_antioxidants_ca n_harm_your_health.htm diakses tanggal 24 April 2011.
Hutapea, J.R., 1994, Inventaris Tanaman Obat Indonesia, jilid III, Depkes RI, Jakarta, pp. 287-289.
Jovanovic, S. V., Boone, C. W., Steenken S., Trinoga, M., dan Kasley, R. B. 2001. How Curcumin Works Prefentially With Water Soluble Antioxidants., J. Am. Chem. Soc. 123, 3064-3068.
Kumalaningsih, S., 2007, Antioksidan Alami, Penangkal Radikal Bebas, Trubus Agrisarana, Surabaya, pp.2-22
Khikmah, 2013, Buah Asam Jawa, http://www.flexmedia.co.id/?attachment_id=3116 diakses tanggal 12 Januari 2013.
Majeed, 1995, Curcuminoids: Antioxidant Phytonutrients, Nutrisciecs Publisher Inc, New Jersey, pp. 9, 24, 33-63, 67.
Meronda, R.G., 2008, Bahan Tambahan Makanan Antioksidan dan Sekueteran, Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin, Makasar.
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol., 26(2), 211-219.
Mukarromah, S.B., 2010, Dampak Radikal Bebas dan Antioksidan Terhadap Kesehatan Tubuh, http://blog.unnes.ac.id/sitibaitul/archives/33 diakses tanggal 26 Juli 2011.
Mulja, H.M., dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga University Press, Surabaya, pp.26-33.
Mulja, M., dan Hanwar, ., 2003, Prinsip-Prisip Cara Berlaboratorium yang Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Airlangga, Vol III (2), pp.71-76.
Nair, M.G., Wang, H., Dewitt, D.L., Krempin, D.W., Mody, D.K., Qian, Y., Groh, D.G., Davies, A.J., Murray, M.A., Dykhouse, R., and Lemay, M., 2004,
Dietary Food Supplement Containing Natural Cyclooxygenase Inhibitors and Methods for Inhibiting Pain and Inflammation, http://www.freepatentsonline.com/6818234.html. diakses tanggal 16 Juni 2011.
Nusarini, R., 2007, Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Aseta Ekstrak Metanolik Herba Ketul (Bidens pilosa L.), Skripsi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Olivia, F., Alam, S., dan Hadibroto, I., 2006, Seluk Beluk Food Supplement, PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta, pp. 166.
Palgunadi, Jelliarko, 2009, Kunyit, Obat Anti Kanker Masa Kini, http://www.chem-is-try.org/artikel_kimia/kimia_pangan/kunyit-obat-anti-kanker-masa-kini/ diakses tanggal 16 juli 2011.
Pauly, G., 1999, Use of Tamarind Seeds Rich in Xycloglycans and Cosmetic or Pharmaceutical Product Containing such Extracts, http://www.freepatentsonline.com/5876729.html. diakses tanggal 16 Juni 2011.
Percival, M., 1998, Antioxidant, Advanced Nutrition Publication, Inc, http://acudoc.com/Antioxidants.PDF, diakses 18 Januari 2011.
Prakash, A., Rigelhof, F., and Miller, E., 2010, Antioxidant Activity, http://www.medallionlabs.com, diakses tanggal 29 Juni 2011.
Rahmawati, I., 2009, Uji Daya Analgesik Jamu Kunyit Asam Instan dan Jamu Kunyit Asam Ramuan Segar Pada Mencit Putih Betina, Skripsi, USD, Yogyakarta. Rohdiana, D., 2001, Aktivitas Daya Tangkap Radikal Polifenol dalam Daun Teh,
Majalah Farmasi Indonesia, Vol.12 (1), 53-58. Rukmana , R., 1999, Kunyit, Kanisius, Yoyakarta, pp. 13-15.
Saleh, M.A., Clark, S., Woodard, B., Deolu, S.A., 2010, Antioxidant and Free Radical Scavenging Activities Of Essential Oils diakses tanggal 20 April 2011.
Septiana, A.T., 2004, Kadar dan Aktivitas Antioksidan Minuman Kunyit dan Asam yang Manis, Agritech., 24 (2), 92-95.
Soedibyo, M., 1998, Alam Sumber Kesehatan Manfaat dan Kegunaan, Balai Pustaka, Jakarta, pp. 230-231.
Sofia, D., 2005, Antioksidan dan Radikal Bebas, http://www.chem-is-try.org/artikel_kimia/berita/antioksidan_dan_radikal_bebas/ diakses tanggal 10 April 2010.
Suharmiati, dan Handayani, L., 2001, Bahan Baku, Khasiat, dan Cara Pengolahan Jamu Gendong Studi Kasus di Kotamadya Surabaya, Pusat Penelitian dan Pengembangan Pelayanan Kesehatan, Departemen Kesehatan RI, www.tempo.co.id diakses tanggal 13 Maret 2011.
Sullivan,J.,Anthocyanin,1998,http://www.charliesweb.com/specialtopics/anthocyanin. html diakses tanggal 28 Juli 2011.
Tampubolon, O.T., 1981, Tumbuhan Obat Bagi Pecinta Alam, Penerbit Bhratara Karya Aksara, Jakarta, pp. 3.
Wang, H., Nair, M.G., Strasburg, G.M., Chang, Y.C., Booren, A.M., Gray, J.I., and Dewitt, D.L., 1999, Antioxidant and Antiinflamatory Activities of Anthocyanins and Their Aglycon, Cyanidin, from Tart Cherries, http://berriervet.com/Antioxidant%20and%20Antiinflammatory%20Activities -Anthocyanins%20from%20Tart%20Cherry%20MSU.pdf diakses tanggal 25 Juli 2011.
Widodo, Y.R., 2011, Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH) dan Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Daun Selasih (Ocimum sanctum L.), Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Winarsi, W., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Penerbit Kanisius, Yogyakarta, pp.13-15, 77-81.
Wisely, 2008, Studi Tentang Pemahaman Obat Tradisional Berdasarkan Informasi pada Kemasan dan Alasan Pemilihan Jamu Ramuan Segar atau Jamu Instan pada Masyarakat Desa Maguwoharjo, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
1. Jamu kunyit asam instan
1. DPPH
Penimbangan Replilkasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Bobot kertas 0,2348 g 0,2187 g 0,2513 g
3. Kunyit asam instan
Replikasi 1
Penimbangan Kunyit Asam jawa
Bobot cawan 55,4827 g 56,5046 g
Bobot cawan + zat 60,5057 g 59,0050 g Bobot cawan + sisa 55,5027 g 56,5048 g
Bobot zat 5,0030 g 2,5002 g
Σ kunyit asam 7,5032 g
Replikasi 2
Penimbangan Kunyit Asam jawa
Bobot cawan 56,3145 g 55,5315 g
Bobot cawan + zat 61,3205 g 58,0321 g Bobot cawan + sisa 56,3182 g 55,5319 g
Bobot zat 5,0023 g 2,5002 g
Σ kunyit asam 7,5025 g
Replikasi 3
Penimbangan Kunyit Asam jawa
Bobot cawan 56,6218 g 56,2230 g
Lampiran 3. Perhitungan konsentrasi larutan DPPH, larutan uji jamu kunyit
asam instan dan jamu kunyit asam ramuan segar
1. DPPH
Seri konsentrasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Seri 1 2,5 µg/mL 2,6 µg/mL 2,4 µg/mL
Konsentrasi larutan stok rebusan = 2,5��
10 �� = 250 µg/mL
Konsentrasi larutan intermediet (seri 1) V1 x C1 = V2 x C2
V1 x C1 = V2 x C2
2 mL x 12,5 µg/mL = 10 mL x C2 C2 = 2,5 µg/mL
3. Larutan kunyit asam ramuan segar
Seri konsentrasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Seri 1 3.601,536 µg/mL 3.601,2 µg/mL 3.601,92 µg/mL Seri 2 4.802,048 µg/mL 4.801,6 µg/mL 4.802,56 µg/mL Seri 3 6.002,560 µg/mL 6.002 µg/mL 6.003,2 µg/mL Seri 4 7.203,072 µg/mL 7.202,4 µg/mL 7.203,84 µg/mL Seri 5 8.403,584 µg/mL 8.402,8 µg/mL 8.404,48 µg/mL
Contoh perhitungan:
Konsentrasi larutan stok rebusan = 7,5032 �
100 �� =
7503200 µg
100 �� = 75.032 µg/mL
Konsentrasi larutan intermediet (seri 1) V1 x C1 = V2 x C2
6 mL x 75.032 µg/mL = 25 mL x C2 C2 = 18.007,68 µg/mL
Seri konsentrasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Seri 1 11.158,99µg/mL 11.170,75 µg/mL 11.166,43 µg/mL Seri 2 14.878,67 µg/mL 14.894,34 µg/mL 14.888,58 µg/mL Seri 3 18.598,32 µg/mL 18.617,92 µg/mL 18.610,72 µg/mL Seri 4 22.317,98 µg/mL 22.341,50 µg/mL 22.332,86 µg/mL Seri 5 26.037,65µg/mL 26.065,09 µg/mL 26.055,01 µg/mL
Contoh perhitungan:
Konsentrasi larutan stok rebusan = 23,2479 �
100 �� =
23247900 µg
100 �� = 232.479 µg/mL
Konsentrasi larutan intermediet (seri 1) V1 x C1 = V2 x C2
6 mL x 232.479 µg/mL = 25 mL x C2 C2 = 55.794,96 µg/mL
Konsentrasi larutan uji (seri 1) V1 x C1 = V2 x C2
1. Scanning metanol
Lampiran 5. Optimasi metode uji aktivitas antioksidan
1. Penentuan OT rutin
Waktu Konsentrasi rutin (µg/mL) 12,5 37,5 62,5
5 0,768 0,498 0,224
50 0,738 0,473 0,200 55 0,738 0,473 0,200 60 0,738 0,473 0,200
2. Penentuan OT jamu kunyit asam
Waktu Konsentrasi instan (µg/mL) Konsentrasi ramuan segar(µg/mL) 55.794,96 92.991,60 130.188,24 18.007,68 30.012,80 42.017,92
5 0,813 0,602 0,404 0,766 0,501 0,383
10 0,804 0,586 0,391 0,741 0,485 0,357
15 0,785 0,560 0,367 0,718 0,454 0,304
20 0,759 0,547 0,342 0,709 0,432 0,304
25 0,747 0,539 0,342 0,709 0,432 0,304
30 0,747 0,539 0,342 0,709 0,432 0,304
35 0,747 0,539 0,342 0,709 0,432 0,304
40 0,747 0,539 0,342 0,709 0,432 0,304
45 0,723 0,539 0,342 0,709 0,432 0,304
50 0,723 0,539 0,342 0,707 0,432 0,298
55 0,723 0,539 0,341 0,707 0,432 0,298
a. DPPH spektra 0,0056 mM
Lampiran 6. Uji aktivitas antioksidan DPPH
1. Rutin Replikasi 1
Konsentrasi Abs kontrol Absorbansi % IC 2,5 µg/mL
0,893
0,743 16,79
5 µg/mL 0,621 30,46
7,5 µg/mL 0,467 47,70
10 µg/mL 0,320 64,17
y = Bx + A
y = 6,1684 x + 0,969 r = 0,9988
Contoh perhitungan % IC
% IC = ���������� ������� −���������� ������� ���
���������� ������� x 100% = 0,893−0,743
0,893 x 100 %
= 16,79 %
2. Kunyit asam ramuan segar Replikasi 1
% IC = ���������� ������� −���������� ������� ���
���������� ������� x 100%
= 0,732−0,655
0,732 x 100 %
= 10,52 % 3. Kunyit asam instan
Replikasi 1
Konsentrasi Abs kontrol Absorbansi % IC 11.158,99 µg/mL
0,888
0,725 18,36
14.878,67 µg/mL 0,621 30,77
18.598,32 µg/mL 0,573 35,47
22.317,98 µg/mL 0,467 47,41
26.037,65 µg/mL 0,349 60,70
Persamaan regresi linear: y = Bx + A
y = 0,0027x – 12,6080
% IC = ���������� ������� −���������� ������� ���
���������� ������� x 100%
= 0,888− 0,725
0,888 x 100 %
= 18,36 %
Lampiran 7. Nilai IC50 rutin, jamu kunyit asam instan dan jamu kunyit asam
ramuan segar
Instan 23.188,15 22.774,00 22.248,21 22.736,79 471,07 2,07 Ramuan
segar 7.326,16 7.183,00 6.980,45 7.163,20 173,70
2,42
Persamaan regresi linear dari konsentrasi dengan %IC adalah y = Bx + A y = aktivitas antioksidan
x = konsentrasi (µg/mL)
IC50 adalah nilai x pada saat y sebesar 50 %
Contoh perhitungan nilai IC50 jamu kunyit asam instan replikasi 1
IC50 kurkumin teori = 22,3 µM
BM kurkumin = 368 Massa = Molar x BM = 22,3 µM x 368
= 8206,4 µg/mL = 8,2064 µg/L
Lampiran 8. Uji statistik aktivitas antioksidan dengan PASW Statistic 18
1. Uji statistik aktivitas antioksidan antara jamu kunyit asam instan dan jamu
kunyit asam ramuan segar.
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
ICinstan .127 15 .200* .924 15 .218
ICrebusan .163 15 .200* .907 15 .121
a. Lilliefors Significance Correction
