PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU BIJI
(Psidium guajava) TERHADAP EFEK ANTIPROLIFERASI MELALUI
MODULASI SIKLUS SEL FIBROBLAST NIH3T3
SKRIPSI
NUR FINA MAFAZAH 1308010004
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU BIJI
(Psidium guajava) TERHADAP EFEK ANTIPROLIFERASI MELALUI
MODULASI SIKLUS SEL FIBROBLAST NIH3T3
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat Untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
NUR FINA MAFAZAH 1308010004
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
MOTTO
Orang-orang yang sukses telah belajar membuat diri mereka melakukan hal yang harus dikerjakan ketika hal itu memang harus dikerjakan, entah mereka
menyukainya atau tidak." (Aldus Huxley)
Hanya karena alasan saya punya Allah, saya tetap berani bermimpi (Ori Rabowo)
HALAMAN PERSEMBAHAN
Dengan segenap rasa syukur atas rahmat dan ridho-Nya kepada Allah SWT, karya ini dipersembahkan untuk :
1. Kedua orang tuaku bapak H.A. Rochim dan Ibu Hj. Nur Aeni yang selalu mencurahkan kasih sayang, doa restu, motivasi, semangat dan dukungan yang tiada henti.
2. Terimakasih untuk ketujuh kakaku tersayang (Ka sufyan, Ka masitoh, Ka Hasan, Ka Uswah, Ka Nurul, Ka Alfi, Ka Nisa) selalu memberikan semangat mendengarkan keluh kesah dan selalu memberikan nasehat. 3. Terimakasih untuk dosen-dosen fakultas farmasi, terutama kedua
pembimbingku (Ibu Nunuk dan Ibu Elza) yang tidak pernah lelah membimbing dan sabar dalam memberikan arahan.
4. Terimakasih untuk bu Sari, mas Arif, dan mas Mamat, yang selalu setia mendengarkan keluh kesah dan selalu memberikan nasehat serta semangat.
5. Terimakasih untuk kamu partner skripsi Tim Kultur yang telah mau melewati susah, seneng bareng selama penelitian.
6. Untuk teman-teman kos Rina, Grevi, Mba Galuh, Anna dan yang tidak bisa disebutkan satu persatu terimakasih sudah mau mendengarkan keluh kesah dan tak pernah bosan memberikan semangat.
7. Terimakasih teman-teman farmasi angkatan 2013 sudah menemani dan berjuang bersama, khususnya anak-anak kelas farmasi B dan FSOA canda tawa selalu hadir dalam waktu 4 tahun terakhir di Purwokerto
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat ALLAH SWT atas segala rahmat, hidayah serta inayahNya, sehingga dapat menyelesaikan penelitian skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava) Terhadap Efek Antiproliferasi Melalui Modulasi Siklus Sel Fibroblast NIH3T3”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi syarat dalam memperoleh gelar S1 Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak dapat menyelesaikan tugas ini dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H. Selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto
2. Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto
3. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing I yang telah memberikan arahan, masukan dan bimbingan dalam penyusunan skripsi. 4. Elza Sundhani, M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing II yang telah
memberikan arahan, masukan dan bimbingan dalam penyusunan skripsi. 5. Seluruh dosen Fakultas Farmasi UMP yang telah memberikan ilmunya
sehingga dapat membantu penulis dalam menyelesaikan penulisan skripsi. 6. Kedua orang tua tercinta yang selama ini telah memberikan usaha berupa doa
dan dukungan dari segala aspek
7. Kakak-kakak tersayang (Ka sufyan, Ka masitoh, Ka Hasan, Ka Uswah, Ka Nurul, Ka Alfi, Ka Nisa) yang selalu mendukung dan setia mendengarkan keluh kesah adiknya.
8. Sahabat-sahabat tersayang yang tak dapat disebutkan satu per satu disini, terima kasih atas bantuan, doa dan dukungan kalian selama ini yang selama ini telah mewarnai perjalanan hidup penulis.
9. Tim Kultur yang telah berjuang bersama, terimakasih atas kerjasama, kesabaran serta suka dukanya selama penelitian berlangsung.
Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih jauh dari kata sempurna, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi perbaikan penelitian di masa mendatang.
Semoga Allah SWT senantiasa membalas amal baik yang telah Bapak/Ibu/Saudara berikan, dan harapan penulis semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis sendiri pada khususnya dan bagi semua pihak yang membutuhkan..
Purwokerto, 09 Juni 2017 Penulis
RIWAYAT HIDUP
Nama : Nur Fina Mafazah
Tempat, Tanggal Lahir : Tegal, 5 Mei 1995
Orang Tua : H.A Rochim (Ayah), Hj. Nur Aeni (Ibu)
Pendidikan
a. SD : SN Negeri Kajen 01
b. SMP : SMP Ihsaniyah kota Tegal
c. SMA : SMK Nusaputera 2 Semarang
d. S1 : Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Kegiatan Ilmiah Mahasiswa
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU BIJI
(Psidium guajava) TERHADAP EFEK ANTIPROLIFERASI MELALUI
MODULASI SIKLUS SEL FIBROBLAST NIH3T3
Nur Fina Mafazah1, Nunuk Aries Nurulita2, Elza Sundhani3
ABSTRAK
Keloid merupakan jaringan perut yang tumbuh secara abnormal yang biasanya akan muncul pada penyembuhan luka yang tidak disempurna. Penyebab munculnya keloid adalah proliferasi sel fibroblas yang abnormal. Terapi keloid masih terbatas dan berefek samping. Pencarian obat baru untuk mengatasi keloid terus berkembang. Kandungan senyawa yang telah diteliti sebagai anti keloid salah satunya adalah quersetin dan asam oleonolat dan daun jambu biji memiliki kandungan tersebut. Untuk itulah penelitian ini dilakukan, untuk melihat potensi ekstrak daun jambu biji terhadap aktifitas sitotoksiknya, menghambat proliferasi dan memperkirakan penghambatannya pada siklus sel. Percobaan dilakuakan dengan cara serbuk daun jambu biji diekstraksi secara perkolasi dengan menggunakan pelarut etanol 70%. Penelitian ini menggunakan ekstrak etanol daun jambu biji dengan konsentrasi 1000,500, 250, 125, 50 µg/ml. Konsentrasi tersebut digunakan dalam pengujian sitotoksik dengan metode MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2‚5-diphenyl tetrazolium bromide] hasil dari uji sitotoksik diperoleh IC50 sebesar 268 µg/ml. Uji proliferasi dilakukan dengan dosis 33,5, 67,
134 µg/ml dengan waktu inkubasi 0, 24, 48, dan 72 hasilnya penghambatan proliferasi terbaik pada dosis 134 µg/ml. Uji Siklus sel dilakukan dengan metode flowcytometry, dari hasil pengamatan siklus sel menunjukan ekstrak etanol daun jambu biji konsentrasi 33,5µg/ml dan 134 µg/ml mampu memicu akumulasi sel pada fase G0-G1.
THE EFFECT OFGUAVA (Psidii guajava) LEAVES EXTRACTS ON ANTI-PROLIFERATIVE EFFECT THROUGH NIH3T3 FIBROBLAST
CELL CYCLE MODULATION.
Nur Fina Mafazah1, Nunuk Aries Nurulita2, Elza Sundhani3
ABSTRACT
Keloid is a tissue of abdomen growing abnormally; it is usually resulted from an imperfect wound healing. The factor for it is a proliferation of an abnormal fibroblas cell. Its therapy is still limited and has a negative side effect. Finding a new medicine for it is necessary. One of the compounds investigated as an antikeloid is quersetin and oleonolat acid, and guava leaves contain these substances. This study is to find out the potential of guava leave extracts to inhibit the sitotoxic activity, proliferation, and to determine its block over cell cycles. The experiment was done by extracting the powder of the leaves in the form of percolation by ethanol solvent of 70%. The ethanol extracts of guava leaves have various concentration from 1000, 500, 250, 125, and 50 µg/ml. The concentrations were analyzed by sitotoxic testings using a method of MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2‚5-diphenyl tetrazolium bromide]. The result of the test shows IC50of 268 µg/ml. The proleferation test was done using the substance at
the dosage of 33,5, 67, 134 µg/ml with an incubation times of 0, 24, 48, and 72. It indicates that the best dosage to inhibit the proliferation is 134 µg/ml.The test of cell cycle uses flowcytometry. The observation on the cell cycle shows that the ethanol extracts of guave leaves at the concentrations of 33,5µg/ml and 134 µg/ml can trigger the cell accummulation at the G0-G1 phase.
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINILITAS ... iv
MOTTO ... v
LEMBAR PERSEMBAHAN ... vi
KATA PENGANTAR ... vii
B. Perumusan Masalah ... 3
C. Tujuan Penelitian... 3
D. Manfaat Penelitian... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 4
A. Penelitian Terdahulu ... 4
B. Landasan Teori ... 5
1. Deskripsi dan Klasifikasi tanaman jambu biji (Psidii guajava) ... 5
a. Klasifikasi Tanaman Jambu Biji ... 5
b. Deskripsi Daun Jambu Biji ... 5
c. Kegunaan Daun Jambu Biji ... 6
d. Kandungan Daun Jambu Biji ... 6
2. Keloid ... 6
a. Definisi Keloid ... 6
b. Mekanisme Pembentukan Keloid ... 7
c. Pengobatan Keloid ... 8
BAB III METODE PENELITIAN ... 17
A. Jenis dan Rancangan Penlitian ... 17
B. Variabel Penelitian ... 17
C. Definisi Variabel Operasional ... 18
D. Waktu dan Tempat Penelitian ... 18
E. Alat dan Bahan Penelitian ... 18
1. Identifikasi Daun Jambu Biji ... 19
2. Pembuatan Ekstrak ... 19
3. Identifikasi Golongan Senyawa Dengan KLT ... 19
4. Uji Sitotoksik ... 20
5. Uji Proliferasi ... 20
6. Uji Siklus sel dengan metode Flowcytometry ... 21
G. Analisis Hasil ... 22
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 24
A. Identifikasi Tanaman ... 24
B. Pembuatan Simplisia ... 24
C. Pembuatan ekstrak etanol daun jambu biji ... 25
D. Hasil Idenrtifikasi Golongan senyawa Kimia Ekstrak Etanol daun Jambu biji ... 26
E. Uji Sitotoksik Menggunakan Metode MTT ... 29
F. Uji proliferasi Sel pada sel fibroblas ... 32
G. Uji Siklus Sel dengan metode Flowcytometry ... 34
H. Keterbatasan Penelitian ... 37
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 38
A. Kesimpulan... 38
B. Saran ... 38
DAFTAR PUSTAKA ... 39
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Tanaman Daun Jambu Biji ... 5
Gambar 2.2 Mekanisme Pembentukan Keloid ... 8
Gambar 2.3 Skema siklus sel ... 13
Gambar 2.4 Kerangka Konsep ... 15
Gambar 4.1 Hasil ekstraksi daun jambu biji ... 26
Gambar 4.2 Hasil KLT senyawa flavonoid ... 27
Gambar 4.3 Hasil KLT senyawa terpenoid pada sinar tampak ... 28
Gambar 4.4 Reduksi MTT menjadi formazon ... 30
Gambar 4.5 Kurva hasil Uji Sitotoksik ... 32
Gambar 4.6 Kurva hasil uji proliferasi ... 33
DAFTAR TABEL
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Cara kerja sistematis ... 45
Lampiran 2. Hasil identifikasi tanaman daun jambu biji ... 46
Lampiran 3. Tahapan pembuatan ekstrak etanol daun jambu biji ... 47
Lampiran 4. Hasil identifikasi golongan senyawa kimia ... 48
Lampiran 5. Mapiing uji sitotoksik, proliferasi dan siklus sel ... 50
Lampiran 6. Perhitungan seri konsentrasi ekstrak etanol daun jambu biji untuk uji sitotoksik pada sel fibroblast ... 51
Lampiran 7. Perhitungan (%) viabilitas sel fibroblas dengan perlakuan ekstrak etanol daun jambu biji ... 54
Lampiran 8. Perhitungan IC50 ekstrak etanol daun jambu biji (waktu inkubasi 24 jamb) dengan metode probit dengan menggunakan program SPSS16.0 for windows ... 56
Lampiran 9. Perhitungan seri konsentrasi ekstrak etanol daun jambu biji untuk uji proliferasi ... 60
Lampiran 10. Hasil uji proliferasi sel fibroblas dengan perlakuan ekstrak etanol daun jambu biji dengan waktu inkubasi jam 0,24,48,72 ... 63
Lampiran 11. Perhitungan untuk uji siklus sel dengan metode Flowcytometry ... 64
DAFTAR SINGKATAN
DMEM (Dulbeco’s Modified Eagle Medium) DMSO (Dimethyl Sulfoxide)
EEDJB (ekstrak etanol daun jambu biji) ELISA (Enzym-Linked Immunosorben assay) FBS (Fetal Bovine Serum)
IC 50 (Inhibition Concentration 50)
LAF (Laminar air Flow)
MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2‚5-diphenyl tetrazolium bromide) PBS (Phosphate Buffer saline)
