i
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI ETIL ASETAT DAN FRAKSI AIR DAUN JERUJU (Acanthus ilicifoliusL.) MENGGUNAKAN
YEAST ESTROGEN SCREEN(YES)ASSAY
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1
Diajukan Oleh
ERGIA ADANG SUGIANTORO 100801010016
Kepada
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO
HALAMAN PERSETUJUAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI ETIL ASETAT DAN FRAKSI AIR DAUN JERUJU (Acanthus ilicifoliusL.) MENGGUNAKAN
YEAST ESTROGEN SCREEN(YES)ASSAY
ERGIA ADANG SUGIANTORO 1008010016
Diperiksa dan disetujui oleh
Mengetahui
Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II
Binar Asrining Dhiani. M.Sc., Apt Susanti. M.Phil., Apt
iii
HALAMAN PENGESAHAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI ETIL ASETAT DAN FRAKSI AIR DAUN JERUJU (Acanthus ilicifoliusL.) MENGGUNAKAN
YEAST ESTROGEN SCREEN(YES)ASSAY
Ergia Adang Sugiantoro 1008010016
Telah dipertahankan di depan Panitia Ujian Skripsi Pada hari Rabu tanggal 20 Agustus 2014
SUSUNAN PANITIA
Mengetahui Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Dr. Nunuk Aries Nurulita, S.Si., M.Si., Apt NIK 2160217
PERNYATAAN
Yang bertandatangan di bawah ini, saya:
Nama : Ergia Adang Sugiantoro
NIM : 1008010016
Program Studi : Farmasi
Fakultas/Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari
proses penelitian saya yang telah dilakukan dengan prosedur penelitian yang
benar dengan arahan dari dosen pebimbing dan bukan hasil penjiplakan dari karya
orang lain. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan
maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan
dicantumkan dalam daftar pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Demikian pernyataan ini, dan apabila kelak dikemudian hari terbukti ada
unsur penjiplakan maka saya bersedia mempertanggungjawabkan sesuai dengan
ketentuan yang berlaku.
Purwokerto, Agustus 2014
Yang Menyatakan
v INTISARI
ERGIA ADANG SUGIANTORO.Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Daun Jeruju (Acanthus ilicifoliusL.) MenggunakanYeast Estrogen Screen(YES)Assay
Dibawah BimbinganBINAR ASRINING DHIANIdanSUSANTI
Latar belakang : Estrogen merupakan hormon yang bertanggung jawab dalam mengatur seluler kompleks terkait dengan diferensiasi, fungsi dan pengaturan jaringan reproduksi wanita. Penggunaan Hormone Replacement Therapy (HRT) dapat mencegah gejala defisiensi estrogen, namun bila digunakan jangka waktu panjang berisiko terjadinya proliferasi endometrium berlebihan dan mungkin kanker endometrium. Fitoestrogen merupakan dekomposisi alami pada tumbuhan yang memiliki banyak kesamaan dengan estradiol, bentuk alami estrogen yang paling poten. Tanaman Acanthus ilicifolius mengandung senyawa glukosida, alkaloid, flavonoid, asam lemak, steroid, lignan, dan komponen fenol dan terpenoid. Berdasarkan landasan tersebut, maka penelitian aktivitas estrogenik Jeruju (Acanthus ilicifoliusL.) dilakukan.
Tujuan Penelitian : Penelitian ini bertujuan untuk menentukan fraksi etil asetat dan fraksi air dari daun Acanthus ilicifolius memiliki aktivitas estrogenik yang ditentukan menggunakanYeast Estrogen Screen(YES)Assay.
Metode Penelitian : Penelitian dilakukan dengan menggunakan Yeast Estrogen Screen(YES)Assay. Uji ini dilakukan secara in vitro, kontrol yang digunakan 17-β-estradiol dengan konsentrasi 10-4M, 10-6 M, 10-8M, 10-10M, 10-12M, 10-14M, dan 10-16 M dalam DMSO dan genistein dengan konsentrasi 10-5M, 10-7 M, 10 -9
M, 10-11M, 10-13M, 10-15M, dan 10-17 M. Sampel fraksi etil asetat dan fraksi air daun jeruju (Acanthus ilicifoliusL.) dengan konsentrasi 50 µg/ml, 100 µg/ml, 200 µg/ml, 400 µg/ml, 800 µg/ml, 1000 µg/ml, 1200 µg/ml, 1600 µg/ml, dan 2000 µg/ml dalam DMSO.
Hasil : EC50 17-β-estradiol YES-hERα yaituno response, sedangkan pada
YES-hERβyaitu 2,0094x109M. EC50 genistein pada YES-hERαyaitu 7,8219x10-17M, sedangkan YES-hERβ yaituno response. EC50 pada fraksi etil asetat pada
YES-hERα yaitu 28712 µg/ml, sedangkan YES-hERβ yaitu 1327 µg/ml. EC50 pada fraksi air YES-hERαdan YES-hERβyaituno response
Kesimpulan : Fraksi etil asetat daun jeruju (Acanthus ilicifolius L.) memiliki aktivitas estrogen yang rendah sedangkan fraksi air daun jeruju yang tidak memiliki aktivitas estrogen. Kandungan senyawa pada fraksi etil asetat daun jeruju meliputi alkaloid, flavonoid, terpenoid, tanin dan saponin, sedangkan fraksi air daun jeruju meliputi flavonoid dan tanin.
ABSTRACT
Background: Estrogen is the hormone responsible for regulating cellular complex associated with differentiation, function and regulation of female reproductive tissues. Use of Hormone Replacement Therapy (HRT) can prevent these symptoms, but when used long term excessive risk of endometrial proliferation and endometrial cancer as possible. Phytoestrogens are natural decomposition of the plant that has many similarities with estradiol, a natural form of estrogen that is most potent.Acanthus ilicifoliusplants contain compounds glucoside, alkaloids, flavonoids, fatty acids, steroids, lignans, and phenolic components and terpenoids. Based on these premises, then the weeds research estrogenic Acanthus ilicifolius.
Objective: This study aimed to determine the fraction of ethylacetate and water fraction of leaves Acanthus ilicifolius have estrogenic activity were determined using theYeast Estrogen Screen(YES)Assay.
Methods: The study was conducted using byYeast Estrogen Screen(YES)Assay. The test is performed in vitro, the controls used 17-β-estradiol and genistein were made with a concentration 10-4M, 10-6M, 10-8M, 10-10M, 10-12M, 10-14M, 10-16 M in DMSO and genistein with a concentration 10-5M, 10-7M, 10-9M, 10-11M, 10 -13
M, 10-15M, dan 10-17 M Samples ethyl acetate fraction and water fraction leaf Acanthus ilicifolius L. is made with a concentration of 50ug/ml, 100ug/ml, 200µg/ml, 400ug/ml, 800ug/mL, 1000 µg/mL, 1200 µg/mL, 1600 µg/mL and
2000µg/ml in DMSO.
Results: EC50 of 17-β-estradiol YES-hERα is no response, where as in the YES-hERβ is 2,0094x109 M. EC50 of genistein YES-hERα is 7,8219x10-17 M, where as in the YES-hERβ is no response. EC50 in ethyl acetate fraction of the YES-hERα is 28712 µg/ml , where as the YES-hERβ is 1327 µg/ml. EC50 in water fraction YES-hERα and YES-hERβ is no response.
Conclusion: Ethyl acetate fraction of the leaf Acanthus ilicifoliusL. had estrogen activity but lower than the fraction of leaf water weeds that do not have estrogen activity. The content of the compound in the ethyl acetate fraction include alkaloids, flavonoids, terpenoids, tannins and saponins, while the water fraction leaf weeds including flavonoids and tannins.
vii MOTTO
“...istaii’nu bisshobri wassholatinnallaha ma asshobiriin...”artinyaMohonlah pertolongan dengan sabar dan shalat, sesungguhnya Allah adalah beserta
orang-orang yang sabar (Al Baqarah : 153)
Karena suatu cita-cita yang tinggi tidak akan pernah dicapai tanpa kita sabar dalam berjuang, sabar dalam berkorban, sabar dalam menderita dan sabar dalam menunggu hasil. Dengan shalat ketenangan pun datang. Tidak perlu ada yang kita
takutkan? karenaAllah beserta kita.
Dalam hidupku tidak ada kata “masa depan”, hanyalah ada kata “lakukan yang terbaik pada detik ini, menit ini, jam ini dan hari ini dengan
Taqwa dan Memohon ampunan kepada Allah SWT” Karena sebaik-baiknya bekal hidup di dunia dan akhirat adalah
Taqwa kepada Allah SWT dan karena ajal tak mengenal usia maka mohonlah ampunan setiap saat kepada Allah SWT.
“Hasil adalah suatu usaha dan doa yang kita lakukan” Keduanya berbanding lurus, apabila hasil tidak memuaskan
PERSEMBAHAN
Skripsi ini saya persembahkan untuk kedua Orang Tua dan Alm. Adik saya serta pada kesempatan ini, selebihnya saya ingin mengucapkan Terimakasih kepada
teman-teman saya.
Hanya kepada Allah SWT, sembah sujud syukur ini kupersembahkan. Karena dengan izin-Nya saya diberi nikmat kesehatan jasmani dan rohani, kemudahan
berpikir, kesabaran dan kelapangan hati dalam mengerjakan skripsi ini. Ampuni hamba Yaa Allah, dalam mengerjakan skripsi ini hamba lalaikan
Dhuha-Mu, Dzikir-Mu dan Al Quran-Mu
Syukron Yaa Allah, saya telah dilahirkan dari rahim seorang Ibu Aat Djumiati yang Sholehah. UntukIbu, Ibu, dan Ibu...terimakasih atas kasih sayang, doa dan ilmu agama yang selalu engkau berikan selama perjalanan hidupku dalam menempuh
pendidikan.
Syukron Yaa Allah, saya memiliki seorang Bapak Endang Iriyanto. Untuk Bapak, terimakasih atas rasa tanggung jawab, semangat, motivasi dan modal
pendidikan yang selalu engkau berikan selama hidupku ini. Semangat Bapak akan selalu aa tiru.
Syukron Yaa Allah, saya pernah memiliki seorang Adik Alm. Erika Oktaviani. Yaa Allah terima segala amal ibadahnya, tempatkan di Surga-Mu, ampuni dosanya, bebaskan dari siksa kubur-Mu, pedihnya sakaratul maut-Mu dan siksa api neraka-Mu. Maafkan Aa belum bisa menjadi Kakak yang dewasa selama hidupmu.
Syukron Yaa Allah, saya memiliki kekasih Irma Prastika. Untuk Irma, terimakasih atas segala bantuan tenaga pikiran, motivasi dan perhatian yang selalu
diberikan kepada mamas disaat titik jenuh serta kondisi lelah.
Syukron Yaa Allah, Engkau telah menghadirkan sahabat dan teman yang selalu membantu dan memotivasi selama ini. Yaa Allah, berkahi selalu kesehatan serta limpahkan kesuksesan dunia dan akhirat kepada sahabat dan teman saya. Aamiin. Terimakasih untuk sahabat saya Sacandra Aji Rivaldi. Terimakasih untuk partner
penelitian saya Hari, Dian, Dina, Karimah dan Desi. Terimakasih untuk teman-teman saya Mba Anggriyana, Mba Maretha, Mba Wina, Mas Bangkit, Gilang, Rizka Dewi, Bety, Mey, Agil, Restu, Roni, Yadi, Yusron, Kokom, Meidyawati,
ix PRAKATA
Alhamdulillah, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah
SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis mampu
menyelesaikan skripsi ini yang berjudul “Penentuan Aktivitas Esterogenik Fraksi
Etil Asetat Dan Fraksi Air Daun Jeruju (Acanthus ilicifolius L.) Menggunakan
Yeast Estrogen Screen (YES) Assay”. Skripsi ini disusun guna memenuhi
persyaratan untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu
Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt dan Ibu Susanti, M.Phil., Apt yang telah
berkenan membimbing dan mengarahkan penulis dalam menyelesaikan skripsi
ini. Ucapan terima kasih dan penghargaan juga penulis sampaikan kepada :
1. Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas
Muhammadiyah Purwokerto.
2. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt sebagai Dekan dari Fakultas Farmasi.
3. Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt sebagai Dosen Pembimbing Akademik.
4. Rochmadi, Amd. sebagai Laboran Biologi Farmasi dari Fakultas Farmasi.
5. Kurniawan, M.Si sebagai Laboran Mikrobiologi dari Fakultas Keguruan Ilmu
Pendidikan.
6. Semua dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Purwokerto yang telah memberikan bekal bagi kehidupan.
7. Endang Irianto dan Aat Djumiati selaku orangtua atas bimbingannya dengan
penuh kesabaran serta kasih sayang yang sangat besar, juga dukungan yang
disertai doa yang mengiringi setiap langkah perjalananku.
8. Teman-teman Farmasi Sains dan Obat Alam dan Farmasi angkatan 2010
terima kasih dukungannya, selalu tetap semangat.
9. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menulis skripsi ini.
Besar harapan penulis, penulisan skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis
skripsi ini tidak akan berjalan baik. Semoga skripsi ini dapat berguna untuk setiap
orang yang membacanya. Aamiin.
Purwokerto, Agustus 2014
xi
RIWAYAT HIDUP
Nama : Ergia Adang Sugiantoro
NIM / Angkatan : 1008010016 / 2010
Tempat / Tanggal Lahir : Cirebon / 8 Mei 1992
Jenis Kelamin : Laki-laki
Agama : Islam
Alamat : Jl. Cipto MK, No. 104B RT 04 /RW 03 Kota
Cirebon, Propinsi Jawa Barat
Riwayat Pendidikan :
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto
(Angkatan 2010)
2. SMA / Tahun Lulus : SMF Muhammadiyah 1 Cirebon / Tahun 2010
3. SMP / Tahun Lulus : SMP Negeri 2 Cirebon / Tahun 2007
4. SD / Tahun Lulus : SD Kartika III-6 Cirebon / Tahun 2004
Organisasi :
1. Pengurus Badan Eksekutif Mahasiswa (BEM) 2011
2. Anggota Ikatan Senat Mahasiswa Farmasi Se-Indonesia (ISMAFARSI)
Joglosepur 2011
Prestasi :
1. Mendapat dana hibah PKM-K tahun 2011
2. Mendapat dana hibah PKM-GT tahun 2013
3. Mendapat beasiswa BBM Universitas Muhammadiyah Purwokerto tahun 2013
4. Asisten Praktikum Farmakologi dan Toksikologi, Asisten Praktikum
Mikrobiologi dan Virologi, Asisten Praktikum Biokimia, Asisten Praktikum
Farmakognosi, Asisten Praktikum Analisis Instrument I, Asisten Praktikum
Analisis Farmasi, Asisten Praktikum Biofarmasetika, Asisten Praktikum
DAFTAR ISI A. Latar Belakang Masalah ... 1
B. Perumusan Masalah... 3
C. Tujuan Penelitian... 3
D. Manfaat Penelitian... 3
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA A. Tanaman Jeruju ... 4
1. Karakteristik Umum Tanaman ... ... 4
2. Sistematika Tanaman ... 5
3. Habitat Tanaman ... ... 5
4. Kandungan Kimia Tanaman ... ... 6
xiii
2. Senyawa Aktivitas Estrogenik ... 8
3. Gangguan Kekurangan Hormon Estrogen ... 8
4. Reseptor Estrogen ... 8
D. Kromatografi Lapis Tipis ... 9
1. Definisi dan Prinsip KLT ... 9
2. Fase Diam (lapisan penjerap) ... 9
3. Fase Gerak (pelarut pengembang) ... 9
4. Bejana Pemisah, Penjenuhan, Aras Pengirisan ... 10
5. Deteksi Senyawa ... 10
6. Penilaian Kromatogram ... 11
BAB 3. METODE PENELITIAN A. Jenis dan Racangan Penelitian... 12
B. Variabel Penelitian ... 12
C. Definisi Variabel Operasional ... 12
D. Waktu dan Tempat Penelitian ... 13
E. Bahan dan Alat ... 14
F. Cara Penelitian ... 14
G. Analisis Hasil ... 17
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Jeruju... 18
B. Pembuatan Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Daun Jeruju ... 18
C. Penentuan Aktivitas Estrogenik Menggunakan Yeast Estrogen Screen(YES)Assay... 19
1. Aktivitas Estrogenik Estradiol dan Genistein ... 19
2. Aktivitas Estrogenik Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Daun Jeruju ... 22
D. Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi Etil Asetat Daun Jeruju dengan Menggunakan Metode KLT ... 24
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ... 41
B. Saran ... 41
DAFTAR PUSTAKA ... 42
xv
DAFTAR TABEL
halaman Tabel 1. Senyawa Estrogenik ... 8
Tabel 2. Nilai Rf Fraksi Etil Asetat Daun Jeruju (Acanthus ilicifoliusL.)... 25
Tabel 3. Hasil Identifikasi Fraksi Etilasetatpada KLT
dengan Pereaksi Penampak Bercak ... 32
Tabel 4. Nilai Rf Fraksi Air Daun Jeruju (Acanthus ilicifoliusL.) ... 34
Tabel 5. Hasil Identifikasi Fraksi Air pada KLT
DAFTAR GAMBAR
halaman
Gambar 1. Tanaman Jeruju (Acanthus ilicifoliusL.) ... 5
Gambar 2. Prinsip MetodeYES Assay ... 7
Gambar 3. Grafik hubungan antara log konsentrasi Estradiol dengan Miller unit pada YES-hERαdan YES-hERβ ... 20
Gambar 4. Grafik hubungan antara log konsentrasi beberapa senyawa dengan Miller unit ... 20
Gambar 5. Grafik hubungan antara log konsentrasi Genistein dengan Miller unit pada YES-hERαdan YES-hERβ... 21
Gambar 6. Grafik hubungan antara log konsentrasi Fraksi etil asetat daun Jeruju dengan Miller unit pada YES-hERαdan YES-hERβ ... 22
Gambar 7. Grafik hubungan antara log konsentrasi Fraksi air daun Jeruju dengan Miller unit pada YES-hERαdan YES-hERβ... 23
Gambar 8. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat daun Jeruju ... 25
Gambar 9. Kromatogram KLT Preparatif Fraksi etil asetat daun Jeruju ... 26
Gambar 10. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat Identifikasi Alkaloid ... 28
Gambar 11. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat Identifikasi Flavonoid ... 29
Gambar 12. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat Identifikasi Terpenoid ... 30
Gambar 13. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat Identifikasi Tanin ... 31
Gambar 14. Kromatogram KLT Fraksi etil asetat Identifikasi Saponin ... 32
Gambar 15. Kromatogram KLT Fraksi air daun Jeruju ... 34
Gambar 16. Kromatogram KLT Preparatif Fraksi air daun Jeruju ... 35
Gambar 17. Kromatogram KLT Fraksi air Identifikasi Alkaloid ... 36
Gambar 18. Kromatogram KLT Fraksi air Identifikasi Flavonoid ... 37
Gambar 19. Kromatogram KLT Fraksi air Identifikasi Terpenoid ... 38
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
halaman
Lampiran 1. Komposisi Media SC dan dropout mixture... 46
Lampiran 2. Komposisi Media SD ... 46
Lampiran 3. Komposisi 0,1 M Phosphate buffer pH 7,0 ... 46
Lampiran 4. Komposisi Z-buffer ... 46
Lampiran 5. Pembuatan Konsentrasi Fraksi Etil Asetat dan Air ... 47
Lampiran 6. Pembuatan Konsentrasi Estradiol dan Genistein ... 47
Lampiran 7. Foto YES-hERβ dalam medium SC... 48
Lampiran 8. Foto YES-hERα dalam medium SC... 48
Lampiran 9. Foto YES dalam medium SD ... 48
Lampiran 10. Foto Alat Sinar UV ... 49
Lampiran 11. Foto Alat Elisa Reader ... 49
Lampiran 12. Foto Ekstrak Daun jeruju ... 49
Lampiran 13. Foto Fraksi Air daun Jeruju... 49
Lampiran 14. Foto Fraksi Etil Asetat dan Air ... 49
Lampiran 15. Foto Konsentrasi Larutan uji KLT ... 49
Lampiran 16. Hasil Subfraksi KLT Preparatif Fraksi etil asetat daun Jeruju . 49 Lampiran 17. Hasil Subfraksi KLT Preparatif Fraksi air daun Jeruju ... 49
