LAPORAN PRAKTIKUM INSTRUMENTASI ANALITIK SPEKTROFOTOMETRI UV
SEMESTER GENAP TAHUN AJARAN 2014
MODUL : SPEKTROFOTOMETRI UV
PEMBIMBING : Dra.Dewi Widyaningsih, MT
DISUSUN OLEH
KELOMPOK : 4
IRFANTY WIDIASTUTI 131411012 IRMA NURFITRIANI 131411013 ISHNA NUR FATHONAH 131411014
M. AGUNG FURQON 131411015
KELAS : 1A
PROGRAM STUDI DIPLOMA III TEKNIK KIMIA JURUSAN TEKNIK KIMIA
POLITEKNIK NEGERI BANDUNG 2014
LAPORAN INSTRUMENTASI ANALITIK PEMBUATAN : 3 APRIL 2014
MODUL PRAKTIKUM : SPEKTROFOTOMETRI UV NAMA PEMBIMBING : Dra.Dewi Widyaningsih, MT TANGGAL PRAKTEK : 3 APRIL 2014
TANGGAL PENYERAHAN : 10 APRIL 2014 A. Tujuan Percobaan
Menentukan konsentrasi kafein B. Dasar Teori
1. Spektrofotometri UV (ultraviolet)
Berbeda dengan spektrofotometri visible, pada spektrofotometri UV berdasarkan interaksi sample dengan sinar UV. Sinar UV memiliki panjang gelombang 190-380 nm. Sebagai sumber sinar dapat digunakan lampu deuterium.
Deuterium disebut juga heavy hidrogen. Dia merupakan isotop hidrogen yang stabil yang terdapat berlimpah di laut dan daratan. Inti atom deuterium mempunyai satu proton dan satu neutron, sementara hidrogen hanya memiliki satu proton dan tidak memiliki neutron. Nama deuterium diambil dari bahasa Yunani, deuteros, yang berarti ‘dua’, mengacu pada intinya yang memiliki dua pertikel.
Karena sinar UV tidak dapat dideteksi oleh mata kita, maka senyawa yang dapat menyerap sinar ini terkadang merupakan senyawa yang tidak memiliki warna. Bening dan transparan.
Oleh karena itu, sample tidak berwarna tidak perlu dibuat berwarna dengan penambahan reagent tertentu. Bahkan sample dapat langsung dianalisa meskipun tanpa preparasi. Namun perlu diingat, sample keruh tetap harus dibuat jernih dengan filtrasi atau centrifugasi. Prinsip dasar pada spektrofotometri adalah sample harus jernih dan larut sempurna. Tidak ada partikel koloid apalagi suspensi.
Sebagai contoh pada analisa protein terlarut (soluble protein). Jika menggunakan spektrofotometri visible, sample terlebih dulu dibuat berwarna dengan reagent Folin, maka bila menggunakan spektrofotometri UV, sample dapat langsung dianalisa.
Ikatan peptide pada protein terlarut akan menyerap sinar UV pada panjang gelombang sekitar 280 nm. Sehingga semakin banyak sinar yang diserap sample (Absorbansi tinggi), maka konsentrasi protein terlarut semakin besar.
Spektrofotometri UV memang lebih simple dan mudah dibanding spektrofotometri visible, terutama pada bagian preparasi sample. Namun harus hati-hati juga, karena banyak kemungkinan terjadi interferensi dari senyawa lain selain analat yang juga menyerap pada panjang gelombang UV. Hal ini berpotensi menimbulkan bias pada hasil analisa.
2. Kafein
Kafein adalah basa sangat lemah dalam larutan air atau alkohol tidak terbentuk garam yang stabil. Kafein terdapat sebagai serbuk putih, atau sebagai jarum mengkilat putih, tidak berbau dan rasanya pahit. Kafein larut dalam air (1:50), alkohol (1:75) atau kloroform (1:6) tetapi kurang larut dalam eter. Kelarutan naik dalam air panas (1:6 pada 80°C) atau alkohol panas (1:25 pada 60°C) (Wilson and Gisvold, 1982). Berikut ini adalah struktur dari kafein :
Struktur Kafein
Kafein merupakan alkaloid yang terdapat dalam teh, kopi, cokelat, kola, dan beberapa minuman penyegar lainnya. Kafein dapat berfungsi sebagai stimulant dan beberapa aktifitas biologis lainnya. Kandungan kafein dalam teh relative lebih besar daripada yang terdapat dalam kopi, tetapi pemakaian teh dalam minuman lebih encer dibandingkan dengan kopi (Sudarmi, 1997).
Kafein merupakan perangsang susunan saraf pusat yang dapat menimbulkan dieresis, merangsang otot jantung dan melemaskan otot polos bronchus. Secara klinis biasanya digunakan berdasarkan khasiat sentralnya, merangsang semua susunan saraf pusat mula-mula korteks kemudian batang otak, sedangkan medulla spinalis hanya dirangsang dengan dosis besar.
C. Prosedur Kerja a. Alat
No Nama Alat Spesifikasi Jumlah 1 Labu ukur 100ml 1 bh 2 Labu ukur 50ml 8 bh 3 Gelas kimia 50 ml 1 bh 4 Gelas kimia 400 ml 1 bh 5 Botol semprot 1 bh 6 Pipet tetes 1 bh 7 Pipet ukur 10 ml 2 bh 8 Pipet ukur 5 ml 1 bh 9 Bola hisap 2 bh 10 Spatula 1 bh 11 Corong 1 bh 12 Batang pengaduk 1 bh D. Skema Kerja A Persiapan Larutan
Membuat Larutan Induk (100 ppm) dalam larutan
HCl 0,1 N.
Membuat larutan standar dengan konsentrasi yang berbeda dalam larutan HCL 0,1 N dalam labu takar 50 mL
0,5 ppm 2 ppm 4 ppm 6 ppm 8 ppm 10 ppm
B Pengukuran dengan Spektrofotometer UV-1700 SHIMADZU
a). Menyalakan Alat
b). Pengukuran Spektrum
c). Pengukuran Photometric Mengeluarkan silica gel
dari ‘sampel compartement’ Menekan tombol yang berada di samping kanan Menunggu sampai proses inisialisasi selesai
hingga keluar tampilan ‘mode menu’
Membuka monitor, setelah layar tampak biru, memutar tombol
sebelah kanan
Mengatur parameter lalu memasukkan kuvet pada reference sample pada sample compartement (keduan-duanya
larutan blanko) Memilih menu ‘spectrum’
lalu menekan angka 2
Menekan tombol ‘data Procc’ F2; ‘peak’(3) untuk mengetahui panjang gelombang maksimum
dan absorbansi Menekan tombol ‘start’
maka akan
munculspektrum antara Abs dengan wavelength
Mengganti kuvet blanko pada posisi ‘sample’ (pada bagian
depan) dengan kuvet isi larutan standar
yang diinginkan Menekan tombol ‘Base Corr’ F1, sampai dengan 0,000 A (Alat berbunyi bip)
(Untuk mengukur A atau %T, jika panjang gelombang maksimum sudah diketahui)
.
Pengukuran Quantitative
Pembuatan Kurva Kalibrasi
Pilih menu Photometric, tekan 1, Go to WL, isi nilai panjang
gelombang
Masukan kuvet yang berisi larutan blanko (keduanya)
Tekan tombol auto zero, tunggu sampai A : 0,000 A
(dan bunyi bip)
Ganti isi kuvet blanko dengan larutan sampel yang akan di analisis Tekan tombol start lalu ulangi
dengan larutan sampel yang lain
Masukkan kuvet isi larutan blanko pada kedua sisi ‘reference sample’ Lalu
Tekan autozero tunggu sampai dengan 0.000A
Muncul tampilan : NO ǀ Conc ǀ ABS Pilih menu quantitative
dengan cara tekan (3)
Atur parameter: Meas : lamda 1, isikan panjang gelombang
tekan enter
Method : multi point (3), isi dengan jumlah standar yang digunakan, tekan enter. ; orde 1
enter ; zero intept NO, enter
Ganti kuvet dengan larutan standar yang berikutnya, tekan
‘start. Lalu ulangi hingga selesai
Tekan ‘cal curve’ F1 untuk menampilkan
kurva kalibrasi Tekan start, masukkan nilai
konsentrasi larutan standar, tekan enter
Pengukuran Konsentrasi Sampel
Tekan ‘meas’(2). Lalu ganti kuvet blanko dengan larutan
standar yang pertama
Tekan ‘start’ maka akan keluar nilai ABS
Ganti kuvet dengan larutan standar yang berikutnya, tekan
‘start’. Ulangi hingga pengukuran selesai.
Tekan ‘cal curve’ F1 untuk melihat tampilan kurva
kalibrasi
Mengganti kuvet isi larutan standar dengan larutan sampel
yang akan diuji Tekan ‘start’ Menekan ‘return’ sampai
kembali ke menu utama
Mengulangi dengan beberapa sampel maka muncul tampilan konsentrasi
E. Data Pengamatan
1. Pengenceran Larutan Kafein 100 ppm
V1N1 = V2N2
100 ml . 100 ppm = V2 . 1000 ppm V2 = 10 ml
2. Konsentrasi Larutan Standar
a. Kafein 0 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 0 ppm V1 = 0 100 V1 = 0 ml b. Kafein 0,5 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 0,5 ppm V1 = 25 100 V1 = 0,25 ml c. Kafein 2 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 2 ppm V1 = 100 100 V1 = 1 ml d. Kafein 4 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 4 ppm V1 = 200 100 V1 = 2 ml e. Kafein 6 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml .6 ppm V1 = 300 100 V1 = 3 ml f. Kafein 8 ppm
V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 8 ppm V1 = 400 100 V1 = 4 ml g. Kafein 10 ppm V1N1 = V2N2 V1 . 100 ppm = 50 ml . 10 ppm V1 = 500 100 V1 = 5 ml N o . Kosent rasi (c) Absorb ansi (A) 1 . 0,00 ppm -0,001 2 . 0,50 ppm 0,105 3 . 2,00 ppm 0,306 4 . 4,00 ppm 0,577 5 . 6,00 ppm 0,873 6 . 8,00 ppm 0,983 7 . 10,0 ppm 1,214
0 0.5 2 4 6 8 10 -0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 R² = 0.99 f(x) = 0.21x - 0.27
Kurva Kalibrasi Larutan Standar
Konsentrasi (ppm) Absorbansi
Penentuan Konsentrasi Sampel Berdasarkan alat
1 1 0,513 3,8058
2 2 0,948 7,4085
3 3 1,126 8,8882
Berdasarkan perhitungan
Konsentrasi sampel berdasarkan perhitungan :
y = 0,12065 x + 0,053 R² = 0.9872 (y: absorbansi, dan x: konsentrasi) Sampel 1 → Abs = 0,513 → y = 0,12065 x + 0,053 0,513 = 0,12065 x + 0,053 x=0,513−0, 05 3 0,12065 =3,8127 ppm Sampel 2 → Abs = 0,948 → y = 0,12065 x + 0,053 0,948 = 0,12065 x + 0,053 x=0,948−0,053 0,12065 =7,4181 ppm Sampel 1 → Abs = 1,126 → y = 0,12065 x + 0,053 1,126 = 0,12065 x + 0,053 x=1,126−0,053 0,12065 =8,8934 ppm KONSENTRASI SAMPEL
Sampel Berdasarkan Alat Berdasarkan Perhitungan Berdasarkan Kurva
1 3,8058 ppm 3,8127 ppm 3,85 ppm
2 7,4085 ppm 7,4181 ppm 7,40 ppm
F. Pembahasan
Oleh : Irfanty Widiastuti
Pada percobaan kali ini, dilakukan penentuan kadar kafein dengan metode Spektrofotometri-UV. Metode spektrometri-uv ini didasarkan pada penyerapan sinar tidak tampak (panjang gelombang 190-380nm) oleh suatu larutan tidak berwarna dan pada percobaan ini larutan standar kafein dan sampel merupakan larutan tidak berwarna. Spektrofotemeter-UV yang digunakan adalah Spektrofotometer UV-1700 Shimadzu dan kuvet yang digunakan memiliki bagian yang buram dan yang bening. Bagian yang bening dengan ditandai dengan adanya tulisan “PT” dan dihadapkan pada sinar datang. Setiap proses pengukuran, kuvet dibilas dengan larutan yang diukur dan dilap dengan tisu khusus yang memiliki serat halus agar tidak menggores permukaan kuvet yang akan mempengaruhi pengukuran absobansi larutan.
Pada pengerjaan awal, dibuat terlebih dahulu larutan deret standar kafein. Pembuatan larutan standar dilakukan dengan tepat dan teliti karena larutan standar akan menjadi kurva standar pada penentuan sampel, jika pada pembuatan larutan standar tidak dilakukan secara teliti dan tepat maka penentuan kadar sampel pun akan terjadi kesalahan. Larutan blanko yang digunakan hanya larutan HCl karena pelarut/reagen yang digunakan hanya larutan HCl. Pengukuran larutan blanko yaitu untuk mengukur serapan pereaksi (HCl) sehingga jumlah serapan kafein sendiri adalah nilai absorbansi larutan standar atau sampel (mengandung pereaksi dan kafein) dikurangi serapan pereaksinya.
Dari larutan induk kafein 100 ppm ini dibuat larutan deret standar 0 (blanko) ; 0,5 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; 10 ppm. Setelah pemipetan larutan induk, kemudian kafein ditandabataskan menggunakan larutan HCl 0,1 N. Pelarutan kafein menggunakan HCl ini dikarenakan kafein dapat larut dalam HCl dan juga untuk membuat suasana asam pada larutan kafein. Kafein dibuat asam karena pada suasana asam panjang gelombang yang dihasilkan kafein maksimum. Panjang gelombang maksimum memiliki kepekaan maksimal karena terjadi perubahan absorbansi yang paling besar serta pada panjang gelombang maksimum bentuk kurva absorbansi memenuhi hukum Lambert-Beer. Pada panjang gelombang maksimum pun apabila dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan
yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil, ketika digunakan panjang gelombang maksimum (Rohman, Abdul, 2007).
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan dengan menggunakan larutan standar konsentrasi sedang, yaitu larutan standar kafein 6 ppm. Dengan spektrofotometer yang digunakan, penentuan panjang gelombang maksimum tidak perlu membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang tetapi sudah terbaca dan ditentukan oleh spektrofotometernya. Menurut literature, panjang gelombang maksimum kafein adalah 210 nm (Oxford Higher Education, 2005), namun yang ditunjukkan oleh alat ada 2 panjang gelombnag maksimum yang terukur yaitu pada 272,4 nm dan 205 nm. Pada panjang gelombnag 272,4 nm absorbansinya sebesar 0,318 sedangkan pada panjang gelombang 205 nm absorbansinya sebesar 0,896 sehingga panjang gelombang maksimum yang digunakan adlaah 205 nm karena memiliki absorbansi yang lebih besar.
Panjang gelombang maksimum yang telah didapat, digunakan pada pengukuran larutan deret standar dan sampel. Langkah pertama adalah pengukuran larutan blanko terlebih dahulu kemudian pengukuran larutan standar. Alat spektrofotometer akan mengukur dan manampilkan absorbansi setiap larutan pada display monitor.
N o . Kosent rasi (c) Absorb ansi (A) 1 . 0,00 ppm -0,001 2 . 0,50 ppm 0,105 3 . 2,00 ppm 0,306 4 . 4,00 ppm 0,577 5 . 6,00 ppm 0,873 6 . 8,00 ppm 0,983 7 10,0 1,214
. ppm
Dilihat dari data pengukuran absorbansi larutan deret standar, semakin besar konsentrasi larutan standar maka semakin besar pula absorbansinya. Hal ini sesuai dengan Hukum Lambert Beer dimana konsentrasi sebanding dengan absorbansinya :
A = a . b . c
A = absorbansi b = ketebalan medium
(kuvet)
a = absorptivitas c = konsentrasi larutan Dimana a (absorptivitas) dan b (ketebalan kuvet) sama, maka :
A = c
Setelah dilakukan pengukuran absorbansi larutan deret standar, kemudian dilakukan pengukuran konsentrasi sampel. Sampel yang digunakan ada 3 buah dimana setelah dilakukan pengukuran sampel 1 memiliki konsentrasi 3,8058 ppm, sampel 2 memiliki konsentrasi 7,4085 ppm dan sampel 3 memiliki konsentrasi 8,8882 ppm.
Oleh : Irma Nurfitriani
Percobaan dilakukan untuk menentukan kadar kafein dalam larutan sampel. Adapun metode yang digunakan pada percobaan ini adalah metode Spektrofotometri-UV. Metode ini didasarkan pada penyerapan sinar tidak tampak oleh suatu larutan tidak berwaena dan pada percobaan ini larutan kafein dan sampel yang digunakan merupakan larutan yang tidak berwarna dan alat yang digunakan pada metode ini adalah Spektrofotometer UV-1700 Shimadzu beserta kuvetnya yang memiliki bagian buram dan bagian yang bening. Bagian bening ditandai dengan adanya huruf ‘PE’. Bagian yang bening diarahkan ke arah sinar datang untuk menentukan besarnya absorbansi dan panjang gelombang dari larutan tersebut.
Larutan standar yang digunakan adalah larutan kafein dengan berbagai konsentrasi yaitu 0; 0,5 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 dan 10 ppm. Larutan 0 ppm digunakan sebagai blanko dan pelarut yang digunakan pada percobaan ini adalah HCl 0,1 N. Sebelum kuvet digunakan terlebih dahulu kuvet dibilas menggunakan larutan blanko supaya ketika larutan kafein dimasukan, konsentrasinya tidak berubah.
Pertama-tama ditentukan dahulu besarnya panjang gelombang maksimum dari larutan kafein tersebut, maka dicari larutan yang paling standar yaitu larutan dengan konsentrasi 6 ppm. Maka, diperoleh grafik yang menunjukan bahwa besarnya panjang gelombang maksimum adalah 205 nm.
Setelah ditentukan panjang gelombang maksimum ditentukan besarnya absorbansi tiap larutan dengan konsentrasi yang berbeda, maka diperoleh data sebagai berikut :
No . Kosentras i (c) Absorbansi (A) 1. 0,00 ppm -0,001 2. 0,50 ppm 0,105 3. 2,00 ppm 0,306 4. 4,00 ppm 0,577 5. 6,00 ppm 0,873 6. 8,00 ppm 0,983 7. 10,0 ppm 1,214
Hasil pengukuran tersebut dapat disimpulkan bahwa semakin besar konsentrasi larutan standar maka akan semakin besar pula nilai absrobannya. Hal ini membuktikan persamaan Lambert-Beer bahwa absorban (A) berbanding lurus dengan konsentrasi (c).
Setelah diketahui absroban masing-masing larutan standar diperoleh kurva kalibrasi yang digunakan untuk menentukan konsentrasi sampel. Namun, dengan menggunakan spektrofotometer UV-1700 Shimadzu dapat diperoleh konsentrasi sampel, selain itu digunakan dua metode penentuan konsentrasi yang lainnya, yaitu berdasarkan perhitungan dan berdasarkan kurva. Maka data yang diperoleh adalah sebagai berikut :
Sampel Berdasarkan Alat Berdasarkan Perhitungan Berdasarkan Kurva
1 3,8058 ppm 3,8127 ppm 3,85 ppm
2 7,4085 ppm 7,4181 ppm 7,40 ppm
3 8,8882 ppm 8,8934 ppm 8,85 ppm
Berdasarkan tabel diatas, nilai konsentrasi tiga buah sampel yang telah ditentukan didapatkan nilai konsentrasi hampir sama meskipun dengan menggunakan metode yang berbeda.
Pada praktikum ini digunakan larutan standar yaitu kafein, dengan konsentrasi kafein 100 ppm. Larutan standar 100 ppm diencerkan dengan berbagai variasi konsentrasi yaitu 0 ppm, 0,5 ppm, 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm dan 10ppm. Larutan standar dengan konsentrasi 0 ppm digunakan untuk larutan blanko sebagai pembanding.
Pada pengenceran larutan standar di tambahkan larutan HCl 0,1N. HCl digunakan karena dapat melarutkan kafein dan bersifat asam sehingga dapat membuat suasana kafein menjadi asam, karena pada suasana asam panjang gelombang yang dihasilkan maksimum. Media yang digunakan untuk pengukuran adalah kuvet. Sebelum proses pengukuran dilakukan, kuvet yang dipergunakan dibilas terlebih dahulu dengan larutan yang akan diukur, proses pembilasan dilakukan ± 2 kali. Setelah dibilas, larutan yang akan diukur dimasukan secukupnya ke dalam kuvet dan kuvet dilap dengan menggunakan tisu sampai tidak terdapat butiran air diluar permukaan kuvet, agar cahaya yang terserap oleh larutan maksimal. Terakhir kuvet dilap dengan menggunakan tisu khusus yang memiliki serat halus sehingga tidak merusak permukaan luar dari kuvet.
Pengukuran larutan standar dilakukan secara bertahap dari larutan dengan konsentrasi rendah sampai yang tertinggi untuk membuat kurva standar sehingga pada penentuan konsentrasi sampel, dapat diketahui kadar sampel setelah dilakukan pengukuran absorbannya berdasarkan kurva deret standar yang telah dibuat. Panjang gelombang maksimum di dapatkan dari konsentrasi larutan standar 6 ppm dengan panjang gelombang maksimum yang terukur adalah 205,0 nm.
Alat yang di gunakan pada penentuan kadar kafein adalah spektrofotometri UV Shimadzu. Hasil pengukuran absorban :
Konsentrasi (ppm) Absorban 0 -0,001 0,5 0,105 2 0,306 4 0,577 6 0,873 8 0,983 10 1,214
Hasil pengukuran tersebut dapat disimpulkan bahwa semakin besar konsentrasi larutan standar maka akan semakin besar pula nilai absrobannya. Hal ini membuktikan persamaan Lambert-Beer bahwa absorban (A) berbanding lurus dengan konsentrasi (c).
Setelah diketahui absroban masing-masing larutan standar diperoleh kurva kalibrasi yang digunakan untuk menentukan konsentrasi sampel. Namun, pada spektrofotometer UV Shimadzu dapat langsung diperoleh konsentrasi sampel sebagai berikut.
No Sampel Absorban Kosentrasi (ppm)
1 1 0,513 3,8058
2 2 0,948 7,4085
3 3 1,126 8,8882
Setelah pengukuran, hasil konsentrasi dan absorban di buat kurva kalibrasi .Kurva kalibrasi diatas memiliki R2 0,9872 hal ini di sebabkan oleh beberapa faktor antara lain larutan standar kafein yang di buat tidak tepat dan teliti dalam pembuatannya.
Oleh : M. Agung Furqon
Dalam percobaan ini, dilakukan penentuan kadar kafein menggunakan spektrofotometer ultraviolet Shimadzu. Karena percobaan ini dilaksanakan untuk menentukan kadar kafein, maka larutan standar yang digunakan dalam pengukuran pun merupakan larutan standar kafein yang telah diketahui konsentrasinya (0,5, 2, 4, 6, 8, 10 ppm). Pengukuran menggunakan spektrofotometer adalah dengan memasukkan cairan (tanpa endapan ataupun suspensi) ke dalam kuvet kuarsa yang kemudian dimasukkan ke dalam alat spektrofotometer. Cara memasukkan cairan ke kuvet adalah dengan terlebih dahulu menghomogenisasi (membilas) kuvet dengan larutan yang akan diukur, proses pembilasan dilakukan ± 2 kali. Setelah dibilas, larutan yang akan diukur dimasukan hingga tanda batas pada kuvet. Badan luar kuvet dilap dengan menggunakan tisu sampai tidak terdapat butiran air diluar permukaan kuvet, terakhir kuvet dilap dengan menggunakan kertas pembersih lensa yang memiliki serat halus sehingga tidak mengakibatkan permukaan luar dari kuvet tergores. Sebelum mengukur larutan standar, terlebih dahulu dilakukan standarisasi alat dengan memasukkan blanko, yaitu HCl 0,1 N, ke dalam 2 buah kuvet dan kemudian dimasukkan kedalam alat (spektrofotometer).
Setelah itu, kuvet yang terletak di depan diambil dan diganti isinya dengan larutan standar yang akan digunakan sebagai penentu panjang gelombang maksimum. Pada percobaan ini, digunakan larutan standar 6 ppm kemudian diikuti dengan pengukuran
larutan standar konsentrasi lainnya dari yang terendah sampai yang tertinggi. Larutan standar sendiri dibuat dari larutan induk kafein 100 ppm dan HCl 0,1 N sebagai pelarut/pengencer. HCl digunakan dengan tujuan untuk membuat kafein berada pada keadaan asam, karena keadaan asam akan membuat pengukuran panjang gelombang kafein mencapai titik maksimum. Panjang gelombang yang maksimum memiliki kepekaan maksimal karena terjadi perubahan absorbansi yang paling besar. Pengukuran panjang gelombang maksimum pada spektrofotometri Shimadzu menunjukkan bahwa didapat panjang gelombang maksimum sebesar 205,0 nm. Pada panjang gelombang maksimum pun bentuk kurva absorbansi memenuhi hukum Lambert-Beer. Apabila dilakukan pengukuran ulang, ketika panjang gelombang dalam keadaan maksimum, maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali. Larutan standar ini diukur untuk membentuk suatu kurva kalibrasi yang kemudian akan digunakan sebagai acuan untuk menentukan kadar kafein dalam sampel yang telah dibuat (dengan ekstraksi ataupun tanpa estraksi). Oleh karena itu pengukuran dan pembuatan kurva harus baik dan benar. Dari hasil pengukuran tersebut, diperoleh absorban: 0 ppm = -0,001 0,5 ppm = 0,105 2 ppm = 0,306 4 ppm = 0,577 6 ppm = 0,873 8 ppm = 0,983 10 ppm = 1,214
Hasil pengukuran tersebut dapat disimpulkan bahwa semakin besar konsentrasi larutan standar maka akan semakin besar pula nilai absrobannya. Hal ini membuktikan persamaan Lambert-Beer bahwa absorban (A) berbanding lurus dengan konsentrasi (c).
Pengukuran spektrofotometri (pengukuran larutan standar) pun telah digambarkan dalam kurva kalibrasi. Pada percobaan ini, larutan sampel dibuat 3 larutan memiliki ppm yang dibuat secara acak. Konsentrasi sampel 1 sebesar 3,8058 ppm, sampel 2 sebesar 7,4085 ppm, dan sampel 3 8,8882 ppm.
G. Kesimpulan
- Nilai panjang gelombang maksimum dengan menggunakan larutan standar 6 ppm diperoleh nilai panjang gelombang maksimum sebesar 205 nm.
- Dengan menggunakan tiga metode penentuan konsentrasi sampel maka diperoleh nilai konsentrasi sampel sebagai berikut :
Sampel Berdasarkan Alat Berdasarkan Perhitungan Berdasarkan Kurva 1 3,8058 ppm 3,8127 ppm 3,85 ppm 2 7,4085 ppm 7,4181 ppm 7,40 ppm 3 8,8882 ppm 8,8934 ppm 8,85 ppm
- Nilai absorbansi berbanding lurus dengan nilai konsentrasi, dapat dilihat dari kurva kalibrasi.
DAFTAR PUSTAKA
Petunjuk Praktikum Kimia Analitik Instrumen. 2011. Jurusan Teknik Kimia. Politekni Negeri Bandung.
Seran, Emel. 2011., Spektrofotometri UV (Ultraviolet). http://wanibesak.wordpress.com. Diakses pada tanggal 7 April 2014.
Hermanto, Sindhu. 2007., Kafein, Senyawa Bermanfaat atau Beracunkah?. http://www.chem-is-try.org. Diakses pada tanggal 7 April 2014.
Wikipedia., Kafeina. http://id.wikipedia.org. Diakses pada tanggal 7 April 2014.
Sylvana, Nina. 2012., Spektrofotometri UV. http://silvana-nina.blogspot.com. Diakses pada tanggal 7 April 2014.
Lampiran Gambar
No. Gambar Keterangan
1. Spektrofotometer UV-1700 Shimadzu
2.
Kurva penentuan panjang gelombang maksimum. Panjang gelombang maksimum yang ditunjukkan oleh kurva
ada 2 ditandai dengan ada 2 puncak pada kurva.
3.
Panjang gelombang maksimum yang ditunjukkan oleh kurva adalah 272,4 nm
dan 205 nm. Karena pada panjang gelombang 205 nm memiliki absorbansi
yang lebih besar dari 272,4 nm maka 205 nm digunakan sebagai panjang
gelombang maksimum.
4.
Pengaturan parameter
5. Pengukuran absorbansi larutan deret standar
6.
Data absorbansi larutan deret standar dimasukkan kedalam kurva kalibrasi yaitu
kurva hubungan antara absorbansi dan konsentrasi larutan standar
