UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH
ANDALIMAN (Zanthoxylum acanthopodium DC.) TERHADAP
KADAR SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
SKRIPSI
OLEH:
MARITO AISYAH DEWI
NIM 121501100
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH
ANDALIMAN (Zanthoxylum acanthopodium DC.) TERHADAP
KADAR SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
MARITO AISYAH DEWI
NIM 121501100
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH ANDALIMAN (Zanthoxylum acanthopodium DC.) TERHADAP KADAR
SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
OLEH:
MARITO AISYAH DEWI NIM 121501100
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada tanggal: 02 Desember 2016
Disetujui oleh:
Pembimbing I, Panitia Penguji,
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Prof. Dr. Urip Harahap., Apt. NIP 195103261978022001 NIP 195301011983031004
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Pembimbing II, NIP 195103261978022001
Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si., Apt. Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt. NIP 197506102005012003 NIP 197806032005012004
Marianne, S.Si., M.Si., Apt.
. NIP 198005202005012006
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan karunia
yang berlimpah sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi yang
berjudul “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Andaliman
(Zanthoxylum acanthopodium DC.) terhadap Kadar Superoksida Dismutase
(SOD) pada Tikus”. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara.
Pada kesempatan ini, dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan
terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku
Dekan Fakultas Farmasi yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis selama
perkuliahan di Fakultas Farmasi. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada
Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt., dan Ibu Dr. Poppy Anjelisa Z. Hsb, M.Si.,
Apt., yang telah meluangkan waktu dan tenaga dalam membimbing penulis
dengan penuh kesabaran dan tanggung jawab, memberikan petunjuk dan
saran-saran selama penelitian hingga selesainya skripsi ini. Ucapan terima kasih juga
penulis sampaikan kepada Bapak Prof. Dr. Urip Harahap., Apt., selaku ketua
penguji, Ibu Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt., dan Ibu Marianne, S.Si.,
M.Si., Apt., selaku anggota penguji yang telah memberikan saran untuk
menyempurnakan skripsi ini, dan Bapak Drs. Suryadi Achmad, M.Sc., Apt.,
selaku dosen pembimbing akademik serta Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas
Farmasi USU yang telah banyak membimbing penulis selama masa perkuliahan
Penulis juga mempersembahkan rasa terima kasih yang tak terhingga
kepada keluarga tercinta, Ayahanda Torkis Harahap dan Ibunda Daimmah
Nasution, kakakku, dan adik-adikku tersayang, serta sahabat hidupku tercinta atas
limpahan kasih sayang, semangat dan doa yang tak ternilai dengan apa pun.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini masih belum
sempurna, oleh karena itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang
membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga
skripsi ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang farmasi.
Medan, Desember 2016 Penulis,
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini,
Nama : Marito Aisyah Dewi Nomor Induk Mahasiswa : 121501100
Program Studi : S-1 Farmasi Reguler
Judul Skripsi :Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Terhadap Kadar Superoksida Dismutase (SOD) pada Tikus
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dari hasil pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan oleh orang lain untuk memperoleh gelar kesarjanaan di Perguruan Tinggi dan bukan plagiat karena kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka. Apabila dikemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam skripsi ini ditemukan plagiat karena kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia menerima sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara , dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk dapat digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.
Medan, November 2016 Yang membuat pernyataan,
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BUAH ANDALIMAN (Zanthoxylum acanthopodium DC.) TERHADAP KADAR
SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) PADA TIKUS
ABSTRAK
Radikal bebas adalah suatu senyawa atau molekul yang mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. Jika produksi radikal bebas berlebihan maka dapat menimbulkan kerusakan oksidatif yang berakhir pada kematian sel sehingga terjadi percepatan timbulnya berbagai penyakit degeneratif. Untuk menetralisir kerja radikal bebas dibutuhkan antioksidan dari luar. Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) merupakan salah satu sumber antioksidan alami yang mengandung senyawa flavonoid yang dapat menetralisir radikal bebas. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui aktivitas enzim superoksida dismutase (SOD) pada tikus yang diberi ekstrak etanol buah andaliman (EEBA).
Penelitian ini meliputi penyiapan sampel, pemeriksaan karakteristik simplisia, skrining fitokimia simplisia, pembuatan ekstrak, penentuan aktivitas SOD secara spektrofotometri dengan menggunakan reagen EnzyChrom Superoxide Dismutase Assay Kit pada panjang gelombang 440 nm kemudian diikuti dengan pemeriksaan histologi hati dengan pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE). Sebanyak 30 ekor tikus dibagi menjadi 6 kelompok yang terdiri dari kelompok kontrol, kelompok yang diinduksi stres, kelompok pembanding, dan tiga kelompok yang diinduksi stres dan EEBA dengan dosis masing-masing 75 mg/kg bb, 150 mg/kg bb, dan 300 mg/kg bb. Penginduksian stres dilakukan dengan pemberian EEBA selama 7 hari dan dilanjutkan pemberian EEBA bersama dengan doksorubisin selama 2 hari berikutnya. Pembanding yang digunakan adalah rutin dengan dosis 50 mg/kg bb. Data dianalisis dengan uji One Way ANOVA dan uji lanjut Post Hoc Tukey dengan program SPSS versi 17.0.
Hasil penelitian menunjukkan kadar rata-rata SOD pada kelompok kontrol adalah (4,626 ± 0,2583), kelompok doksorubisin (1,956 ± 0,0879), kelompok EEBA 75 mg/kg bb (2,444 ± 0,0844), kelompok EEBA 150 mg/kg bb (3,052 ± 0,1139), kelompok EEBA 300 mg/kg bb (3,646 ± 0,1739) dan kelompok Rutin 50 mg/kg bb (5,594 ± 0,2056). EEBA mempunyai aktivitas SOD yang lebih tinggi bila dibandingkan dengan kelompok doksorubisin. Berdasarkan hasil statistik, aktivitas SOD meningkat seiring dengan kenaikan dosis EEBA yang diberikan dan menunjukkan perbedan yang signifikan (p<0,05) antara kelompok EEBA dengan kelompok doksorubisin. Pengamatan pada jaringan hati pada kelompok yang diberi EEBA menunjukkan kondisi yang lebih baik dibanding dengan hati pada kelompok doksorubisin. EEBA mampu meningkatkan aktivitas SOD dan mencegah kerusakan hati yang disebabkan oleh doksorubisin.
ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF ANDALIMAN FRUIT (Zanthoxylum acanthopodium DC.) TO SUPEROXIDE DISMUTASE
(SOD) LEVEL IN RATS
ABSTRACT
Free radical is a compound or molecule containing one or more unpaired electrons in its outer orbital. If the free radicals produced excessively, it can cause oxidative damage that ends in cell death resulting in the acceleration of the onset of degenerative diseases. To neutralize free radicals needed antioxidants work from the outside. Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.) Is one source of natural antioxidant that contains flavonoid compounds that can neutralize free radicals. The purpose of this study to determine the activity of the superoxide dismutase (SOD) enzyme in rats fed ethanol extract of andaliman fruit (EEBA).
This study includes the preparation of samples, characterization of simplex, phytochemistry screening of simplex, production of extracts, the determination of the activity of SOD extract spectrophotometry using reagents EnzyChrom superoxide dismutase Assay Kit at a wavelength of 440 nm is then followed by examination liver histology staining with hematoxylin eosin (HE). A total of 30 rats were divided into six groups consisting of a control group, a group that induced stress, the comparison group and three groups that induced stress and given the EEBA with each dose of 75 mg/kg bw, 150 mg/kg bw, and 300 mg/kg bw. Inducing stress performed by administering EEBA for 7 days and continued provision of EEBA together with doxorubicin for 2 days next. Comparisson is used rutin at a dose of 50 mg/kg bw. The data were analyzed with One Way
ANOVA and Post Hoc Tuckey test using SPSS program version 17.0.
The result showed the average level of SOD in the control group was (4.626 ± 0.2583), doxorubicin group (1.956 ± 0.0879), EEBA group dose 75 mg / kg bw (2.444 ± 0.0844 ), EEBA dose 150 mg / kg bw group (3.052 ± 0.1139), EEBA dose 300 mg / kg bw group (3.646 ± 0.1739) and Rutin dose 50 mg / kg bw group (5.594 ± 0.2056). EEBA have SOD activity were higher when compared to the doxorubicin group. Based on the statistical results, SOD activity increased with the increase EEBA dose given and showed significantly different (p <0.05) between EEBA group with doxorubicin group. Observations on liver tissue in the group given EEBA show better conditions compared to the liver in the doxorubicin group. EEBA can increase the activity of SOD and prevent liver damage caused by doxorubicin.
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
LEMBAR PENGESAHAN ... ii
KATA PENGANTAR ... iv
SURAT PERNYATAAN ... vi
ABSTRAK ... vii
ABSTRACT ... viii
DAFTAR ISI ... ix
DAFTAR TABEL ... xiv
DAFTAR GAMBAR ... xv
DAFTAR LAMPIRAN ... xvi
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 4
1.3 Hipotesis ... 4
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat Penelitian ... 5
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 6
2.1 Uraian Tumbuhan ... 6
2.1.1 Sistematika Tumbuhan ... 6
2.1.2 Nama Daerah Tumbuhan ... 6
2.1.4 Morfologi Tumbuhan ... 7
2.1.5 Kandungan Kimia Buah Andaliman ... 7
2.1.6 Kegunaan Buah Andaliman ... 8
2.2 Ekstraksi ... 8
2.3 Radikal Bebas ... 10
2.4 Antioksidan ... 12
2.5 Superoksida Dismutase ... 14
2.6 Flavonoid ... 15
2.7 Doksorubisin ... 17
2.8 Histologi Hati ... 18
2.9 Patologi Hati ... 19
2.10 Spektofotometri Visibel ... 20
BAB III METODE PENELITIAN ... 22
3.1 Alat dan Bahan ... 22
3.1.1 Alat ... 22
3.1.2 Bahan ... 22
3.1.3 Hewan Percobaan ... 23
3.2 Pembuatan Pereaksi ... 23
3.2.1 Pereaksi Asam Klorida 2 N ... 23
3.2.3 Pereaksi Bouchardat ... 23
3.2.4 Pereaksi Dragendroff ... 23
3.2.5 Larutan Kloralhidrat ... 23
3.2.6 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 24
3.2.7 Pereaksi Mayer ... 24
3.2.8 Pereaksi Molish ... 24
3.2.9 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N ... 24
3.2.10 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ... 24
3.2.11 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ... 24
3.3 Prosedur Pembuatan Simplisia ... 25
3.3.1 Pengambilan Bahan Tumbuhan ... 25
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan ... 25
3.3.3 Pembuatan Simplisia ... 25
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 25
3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik... 25
3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 26
3.4.3 Penetapan Kadar Air ... 26
3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air ... 27
3.4.5 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol ... 27
3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total ... 27
3.5 Skrining Fitokimia Simplisia ... 28
3.5.1 Pemeriksaan Flavonoid ... 28
3.5.2 Pemeriksaan Alkaloid ... 28
3.5.3 Pemeriksaan Saponin ... 29
3.5.4 Pemeriksaan Tanin ... 29
3.5.5 Pemeriksaan Glikosida ... 29
3.5.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ... 30
3.6 Proses Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Andaliman (EEBA) 30
3.7 Pembuatan Sediaan Uji ... 31
3.7.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 1% (b/v) ... 31
3.7.2 Pembuatan Suspensi Rutin ... 31
3.7.3 Pembuatan Suspensi EEBA ... 31
3.8 Induksi Stres Pada Tikus ... 32
3.9 Pengujian EEBA dengan Metode Spektrofotometri UV-vis terhadap Aktivitas SOD pada Tikus 32 3.9.1 Penyiapan Hewan Percobaan ... 32
3.9.2 Pengambilan Darah Tikus ... 33
3.9.3 Pengambilan Serum Darah Tikus ... 34
3.9.4 Pengukuran Kadar SOD ... 34
3.11 Pemeriksaan Histologi Jaringan Hati Tikus dengan Pewarnaan
Hematoxylin Eosin (HE) ... 34
3.11.1 Pembuatan Preparat Blok Parafin ... 34
3.11.2 Pewarnaan Hematoxylin Eosin ... 35
3.12 Analisis Data ... 36
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 37
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 37
4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 37
4.2.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 37
4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 37
4.2.3 Karakteristik Simplisia ... 38
4.3 Skrining Fitokimia ... 39
4.4 Pengaruh Ekstrak Etanol Buah Andaliman terhadap Kadar SOD pada Tikus ... 40
4.5 Pemeriksaan Histologi Jaringan Hati Tikus ... 45
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN... 50
5.1 Kesimpulan ... 50
5.2 Saran ... 50
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Buah Andaliman ... 38
4.2 Hasil Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan Ekstrak Buah
Andaliman ... 39
4.3 Absorbansi Standar SOD ... 41
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
2.1 Pembentukan Radikal Bebas Doksorubisin ... 18
4.1 Kurva Standar SOD ... 41
4.2 Pengaruh Kelompok Perlakuan Terhadap Aktivitas SOD ... 43
4.3 Gambaran Histologi Hati Tikus ... 46
4.4 Sel Hati yang mengalami Kerusakan pada Kelompok yang Diberikan Perlakuan Doksorubisin ... 47
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Surat Rekomendasi Persutujuan Etik Penelitian Kesehatan .... 56
2 Surat Hasil Identifikasi Buah Andaliman ... 57
3 Gambar Makroskopik Buah Andaliman ... 58
4 Gambar Mikroskopik Serbuk Simplisia Buah Andaliman ... 59
5 Bagan Kerja Penelitian ... 60
6 Bagan Pembuatan Ekstrak ... 61
7 Perhitungan Hasil Karakterisasi Simplisia Buah Andaliman ... 62
8 Contoh Perhitungan Dosis... ... 67
9 Gambar Alat Spektrofotometri Uv-visible (Thermo scientific) dan Reagen SOD ... 69
10 Prosedur Pengujian Aktivitas SOD ... 70
11 Data Hasil Pengukuran Larutan Standar SOD ... 71
12 Data Hasil Pengukuran Aktivitas SOD Sampel ... 72
13 Perhitungan Statistik Aktivitas SOD Ekstrak Etanol Buah Andaliman ... 73
14 Gambar Organ Hati Tikus dan Preparat hati Tikus ... 79
