Elektroforesis

(1)

ELEKTROFORESIS

Dosen Pengampu Mata Kuliah:

Biologi Molekuler RPL TLM 2024/2025

PRESENTASI

DRS. REFAI, M.KES

(2)

IKHTISAR

Pengertian dan prinsip

faktor yg

mempengaruhi

Jenis elektroforesis Cara kerja

Aplikasi

Cara

perawatan dan kalibrasi

Kesimpulan

(3)

ELEKTROFORESIS

Elektroforesis merupakan suatu motode pemisahan yang memanfaatkan medan listrik yang dihasilkan dari elektroda- elektroda untuk memisahkan senyawa-senyawa yang memiliki muatan berupa kation ataupun anion.

Pemisahan didasarkan atas perbedaan migrasi komponen pada fase pendukung, karena adanya perbedaan muatan dan masa molekul. jika suatu fase zat bermuatan, diberi beda potensial, fase tersebut akan berpindah sepanjang medium yang kontinu ke arah katoda atau anoda sesuai dengan muatan partikel.

Pengertia

n Prinsip

(4)

FAKTOR YANG MEMPENGARUHI ELEKTROFORESIS

01 02

03

Sampel yang akan dipisahkan sangat memungkinkan memberi pengaruh laju perpindahan ditinjau dari muatan, ukuran, dan bentuk molekul.

larutan buffer berfungsi untuk mempertahankan pH di dalam medium pemisah, dan berfungsi sebagai media penyedia elektrolit pada proses pergerakan aliran listrik.

Sumber suatu listrik yang stabil sangat diperlukan untuk menghasilkan aliran listrik dengan tegangan yang konstan.

larutan buffer

sampel

Medan listrik

(5)

JENIS - JENIS ELEKTROFORESIS

01

02

03

Jenis elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai fase diam dan partikel yang terlarut sebagai fase gerak, terutama ion-ion kompleks. Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang sistem pemisahan.

Pemisahan DNA, RNA, atau protein dengan menggunakan medan listrik Biasanya digunakan untuk tujuan analisis, namun dapat pula digunakan sebagai Teknik prepariti untuk memurnikan molekul.

Pada elektroforesis kapiler, komponen dalam campuran ditransport melalui tabung kapiler horizontal oleh potensial dc yang tinggi sepanjang tabung. Perpindahan ukuran dan berpengaruh elektroferetik

Elektroforesis gel

Elektroforesis kertas

Elektroforesis

kapiler

(6)

CARA KERJA ELEKTROFORESIS KERTAS

• Larutan buffer dan kertas elektroforesis atau kertas selulosa asesat disiapkan.

• Kemudian kertas diberi garis vertical dibagian tengah sebagai tanda garis start.

• Kertas kemudian dimasukkan kedalam larutan buffer dan

ditempatkan kedalam

elektroforesis, di running untuk pemisahan dan warna yang teramati dicatat.

• Arus dimatikan dan kertas diangkat dari alat tersebut.

Biologi Molekuler ST4R TLM 2024/2025

(7)

CARA KERJA ELEKTROFORESIS

• Sampel disiapkan sesuai dengan sampel

GEL

yang akan digunakan.

• Disiapkan bubuk gel, dilarutkan dengan larutan buffer.

• Gel dilepaskan dari cetakan gel dengan cara mengiris keliling gel dengan menggunakan pisau.

• Gel yang telah siap kemudian diletakan secara horizontal di atas kotak elektroforesis yang telah berisi larutan penyangga elektroda.

• Visualisasi dilakukan dengan merendam gel kedalam pewarna sesuai dengan sampel yang digunakan. Kemudian diamati dibawah sinar UV.

Biologi Molekuler RPL STr TLM 2024/2025

(8)

CARA KERJA ELEKTROFORESIS KAPILER

• Siapkan tabung kapiler yang diisi buffer dengan diameter internal 10-100 m dan panjang 40-100 cm.

• Tabung berada diantara dua wadah buffer yang menyagga elektroda platina.

• Sampel dimasukkan kedalam salah satu ujung tabung dan berikan potensial Derect Current

• (dc)/Aliran Elektron sebesar 20-30 kV diantara dua elektroda selama pemisahan.

• Analit yang terpisah di amati dengan detector yang terletak pada salah satu ujung tabung yang berlawanan dengan tempat sampel dimasukkan.

(9)

APLIKASI ELEKTROFORESIS

Elektroforesis Kertas :

• Pemisahan asam amino

• Pemisahan lipoprotein dalam serum

• Pemisahan

enzim dalam darah

01

Elektroforesis Gel :

• Digunakan untuk

menganalisis struktur dan fungsi protein

• Digunakan

untuk analisis resitensi

antibiotik

02 Elektroforesis

Kapiler :

• Banyak

digunakan

dilaboratorium diagnostik dan klinis

• Digunakan

dalam bidang farmasi

03

(10)

1. Setiap selesai pemakaian alat langsung

disiram dengan aquades

2. Simpan alat di tempatnya dalam keadaan

kering.

3. Buang gel agarosa kedalam sampah khusus

limbah berbahaya

4. Setelah penggunaan, buffer running diletakkan kembali ke botol semula

5. Buang tip bekas Etidium Bromida (EtBr)

kedalam sampah khusus limbah berbahaya

CARA PERAWATAN ELEKTROFORESIS

(11)

Untuk melakukan kalibrasi alat elektroforesis, Anda perlu menggunakan standar berupa larutan dengan ukuran fragmen DNA yang diketahui. Dengan mengamati pergerakan fragmen DNA pada elektroforesis dan membandingkannya dengan standar, Anda dapat mengukur dan mengkalibrasi jarak pergerakan untuk menentukan ukuran fragmen DNA yang tidak diketahui. Proses ini penting untuk memastikan hasil elektroforesis yang akurat.

CARA KALIBRASI ELEKTROFORESIS

(12)

KESIMPULAN

Elektroforesis adalah teknik pemisahan komponen atau molekul bermuatan berdasarkan perbedaan tingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik. Medan listrik dialirkan pada suatu medium yang mengandung sampel yang akan dipisahkan.

Secara umum, elektroforesis digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan memurnikan fragmen DNA, RNA, dan protein .

Biologi Molekuler RPL STr TLM

2024/2025

(13)

TERIMA KASIH

Biologi Molekuler RPL STr TLM

2024/2-25