KHOA H p c CÒNO HOHÉ
PHAIM L A P , T U Y E I V C H O M V A K H A O S A T M O T SO VELI T O ÀIXIH HUÒIXIG CHÙIXJG V I KHUAIXI YÉIVI K H I P H U C VLJ CHO V I É C T A O CHE P H À M V I SIIVH DLJIVG T R O H G H E THOIVG X Ù LY l\IUÓC T H À I 5 I I V H H O A T C Ù A
TRUÒIXIG D A I HOC IVHA T R A I V G
Ph^m Thi Lan', VO Ngpc BòìSTràn Lién Hà^
TÓMTAT
Vi sinh vàt da duoc ùng dyng nhiéu de xù li nuóc thài sinh hogt De tao che phim dùng trong xù li nuóc thài, vièc phàn làp tuyén chpn du(?c chùng có khà nàng phàn giài protein, tinh bót, xenlulo va phàt trién nhanh trong mói truòng dóng vai trò quan trpng. Do v§y, tu 31 mIu dàt va nuóc thài tu mói truòng tu nhièn ó Khành Hòa da phàn làp dugc 30 chùng vi sinh yém khi. Trong dò chpn dupc chùng /^,jcó khà nàng sinh cà 3 loai enzym proteaza, amylaza va xenliJoza cao. Bang phuong phàp phàn tich trinh ty 16S ArDN cùa càc chùng, chùng //^j tuong dòng 99,996 vói chùng Bacillus subtilis AB110598. Két hpp vói dàc diém hình thài va sình hóa, 2 chùng này dupc xàc djnh là Bacìllus subtilis Hjj. Dìéu ki§n toì uu cho sinh tniòng va phàt trién cùa chùng B. subtihs H2.3: mói truòng LB, nguón càc bon là ri duòng, nguòn nito là bpt dàu tuong, pH 7, nhièt dò 30°C. Uiói gian 36 giò va OD 620 nm là 2,32.
Tu khóa: Amylaza, proteaza, phàn làp, Bacillus subtilis 112^^.
l.fiATVÀNBÉ
Vi sinh vàt là nhùng sinh vàt có kich thiróc nhò bé nhung toc dò sinh tnròng va phàt trién nhanh hon càc loai sinh vàt khàc va hon nùa ehùng con co khà nàng su dung rat da dang eàe nguòn thùc àn. Chinh vi vày chung dà dupc su dung nhiéu de bào ve va xù li mói truòng nói chung va su dung de xù li niróc thài sinh hoat nói riéng [2, 3,4, 51. Hièn nay, trén thè giói xuàt hièn rat nhiéu loai che pham xù ly mói tnròng, chat luong cùa chùng cùng dà dugc khàng dinh.
Dién hình là mot so che pham nhir che pham EM, RoeTech, BoakshÌ,...Dày là nhùng che pham sinh hpc xù ly nuóc thài dupc dành già là có chat lupng tòt, khòng chùa eàe vi sinh vàt bién dói gien ma ehi chùa hòn hpp càc vi sinh vàt dupc phàn làp tu mòi truòng nuòc hi ó nhièm. Che pham có khà nàng xù ly COD, BOD va nito. Két qua su dung che phim de xù ly nuòc ho cho thay, chì so BOD trong ho sau nàm thàng xù ly bang EM dà giàm tu 72 ppm xuòng ehi con 5 ppm, tue giàm hon 14 làn. Hàm lupng oxy hòa tan trong nuóc cùng tàng tu hai dén ba làn. Nuóc ho sach dàn, khóng mìd hòi thòi. Nuóc sau khi xù ly cung càp tot cho he thòng thùy Ipi [4]. Càc vi sinh vàt chù yéu dupc su dung trong eàe che phdm là: vi
Tnròng Dgi hpc Nha Trang 'Truòng DEIÌ hpc Bàch khoa Ha Npi
khuàn lactic, vi khuàn quang hpp, nàm men, Bacillus subtihs, Lactobacillus.
Cùng vói vièc tàng sò lupng sinh vién hàng nàm, Tnròng Dai hpc Nha Trang dang phàt trién nhanh ve di^n tich va quy mó xày dung nhung he thòng càp thoàt nuóc va xù ly nuòc thài chua dupc chuàn bi tòt Hàng thàng Truòng tièu thu khoàng 50.000 m^nuóc phuc vu cho v i ^ sinh hoat, hpc tàp, nghièn cùu khoa hoc va tuoi cày do khu ki tue xà, khu tàp thè giào vi^n, khu càn tìn, san vàn dóng cung nàm trong khuón vién Tnròng. Do dò nuóc thài sinh hoat eùa Tnròng thuòng có mùc ó nhièm cao, eàe thòng sò nhu COD (317 mg/1), BOD (225 mg/1) vupt qua yéu càu cho phép [6].
Vói iupng nuòc thài lón nhu vày càc nghién cuu ve xù ly nuóc thài sinh boat eùa Nhà truòng dà va dang dupc quan tàm nhiéu. Truòng dà tìén hành de tài: Xày dung va thù nghiém phuong àn xùly nuóc thài smh hoat de tài su dung trong truòng Dai hoc I^a Trang. Tuy nhién càc nghièn cùu ve xù ly nuóc thài sinh hoat b Truòng Dai hpc Nha Trang chua tao ra dupe che phàm vi sinh de bò sung vào he thòng nuóc xù ly nuóc thài dàc bièt là vi sinh vàt hiéu khi nén chi phi cho xù ly con cao va chua phù hpp vói dàc tnmg nuóc thài cùa Truòng. Tu san xuàt dupc che phàm giùp chùng ta chù dòng hon trong xù ly va ha già thành. Vi thè viéc nghièn cùu tao ra che phàm
^SNONG NGHIÈP VA PHAT TRIEN NÒNG THON - KY 1+2 - THANG 2/2013
KHOA HPC COMO WGHÉ
vi sinh de bó sung vào he thòng xù ly nuóc thài ò Tnròng là r& càn thiét, giùp nàng cao hi$u qua va giàm chi phi trong qua trinh xù ly. Xuàt phàt tu thvc tièn chùng tòi dà nghièn cùu "Phàn l$p va tuyén chQn mot so chùng vi sinh v$tyém khi phvc vfi cho viéc tao chéphim vi sinh dùngtronghé thóng xù If nuóc thài sinh hoat cùa ùiiàng Dai hoc Nha Tranf.
2 . VfT U(U VÀ PHUONS PHÀP NGHlCN CIJU 2.1. Nguyèn li^u
31 màu dàt va nuòc dupc lày ò nhiéu noi nhu:
Hòn MOt, Hòn Mun, Hòn Tàm, HÒ cà Tri Nguyèn, Hòn Chóng, va tu nuòc thài sinh ho?t Truòng Dji hpc Nha Trang.
2.2. Mòi tniòng
Mòi truòng LB (1 lit): 20 g ri duòng, 5 g cao men, 10 g pepton, nuòc càt 1000 mi pH 7-7.5; mòi truòng MRS (1 lit): pepton 10 g, nuòc màm 10 mi, cao nàm men 5 g, D-Glucoza 20 g, TweenSO 1 mi, KiHPO, 2 g; CHjCOONa 5 g, triamòni xitrat 2 g;
MgS04.7H20 0,2 g. MnSOj. H2O: 0,05 g; aga: 15-20 g, nuóc càt 1000 mi, pH: 6,5 - 7.
Mòi truòng thù hoat tinh enzym (1 lit): 1 g co chat (tinh bòt, gelatin, CMC), 15 g aga, 1000 mi nuòc càt.
2.3. Phirong phàp nghién cùu
- Phuong phàp phàn làp: theo phuong phàp pha loàng giói han [1]. Hòa tan Imi màu, do lèn dia petri da tièt trùng. Sau dò do mòi truòng LB aga (45''C) vào dia tròn déu. Khi mói tnròng dòng lai, dò thèm 1 lóp LB aga nùa, hoàc 1 lóp parafìn long phù lèn bé màL De vào tu àm 37°C, doc két qua sau 2 ngày.
- Phuong phàp xàc dinh hoat tinh enzym: dupc xàc dinh bang phuong phàp khuéch tàn trèn thach [ 1 ].
- Phuong phàp phàn loai
+ Xàc dinh càc dàc diém sinh ly sinh hoà : Kozaki va cpng su (1992), Andretta va cpng su (2004), Sharmin va Rahman (2007) [8,15,21).
+ Phàn loai dira trèn giài trình tu 16S ArDN. Xàc dinh trinh tu 16S ArDN cùa càc chiing vi khuàn theo phuong phàp cùa Sakiyama va còng su (2009) [20].
San phàm PCR dupc tinh sach va xàc djnh trình tv trèn mày dpc trinh tu tu dóng (ABI PRISM®310O.
Avant Genetic Analyzer - My). Két qua dpc ùinh ti/
dupc xù ly trén phàn mém Clustal X cùa Thompson va cóng su, 1997 [23]. Càc trinh tu dupc so sành vói trinh tu 16S ArDN cùa càc loài dà còng bò tu dù liéu cùa DDBJ, EMBL, GenBank. Cày phàt sinh dupc xày dung theo Kimura (1980) (141, su dung phuong phàp cùa Saitou va Nei (1987) [19].
I . K f r QUA VÀ THÀO LUMI
3.1. Phàn 14P va tuyén chpn càc chùng vi sioli yém khi có ho^it tinh enzym cao
Tu 31 màu dàt va màu nuòc thài chùng tói da phàn IJp dupc 30 chùng vi khuàn yém khi. Trong dò màu dàt à Hòn Chéng va màu nuóc thài phta % dupc 9, 7 chùng tuong ùng. MIu Hòn Tàm, hòn Mpt, Bài Duong phàn làp dupc 6, 5, 3 chùng. Só lupng eie chùng vi sinh v^t trong càc màu dàt, nuóc thài là kha phong phù. Sau dò, tién hành xàc dinh hoat tiili enzym cùa càc chùng vi smh v4t phàn làp dupc vói 3 lo?i co chat tinh bOt tan, CMC va gelatin.
Trong só càc chùng dà phàn làp dupc có mot so chùng có khà nàng phàn giài cà 3 loai co chat. Ty lé càc chùng có hoat tinh cà 3 enzym là khà cao (66,67%). Trong dò só chùng có hoat tinh amylaza cao nhàt 95%, tiép dò là hoat tinh xenluloza là SOS, thàp nhàt là hoat tình proteaza 75%. Sau dò chùng tói da chpn ra 10 chùng có hoat tmh enzym cao nhat de tién hành nghièn cùu tiép theo (bang 1).
Bang 1: Hojt tinh enzym ngoai bào cùa lOchiingvi khuàn
STT 1 2 3 4 5 R 7 8 9 10
Ky hiéu chùng
M„
M,, M„
M,., H„
H,,
T, T,
Duòng kinh vòng phàn giài (mm) Amylaza
14 4 5 18 9 12 8 21 15 6
Xenluloza 13 10 7 20 10 8 7 18 14 11
Proteaza 12 -i
8 Jit 8 l'i 15
7 '.*
7 "
5 ••'
16 13 8 Trong dò chùng có ki hiéu Haj có boat tinh vòng phàn giài cao nhàt là 18 mm va amylaza là 21 mm. Ta thày khà nàng phàn giài enzym cùa cac ehùng nghién cùu là rat da dang ve hoat tinh. Do QO tìép tue nghién cùu sàu ve dàc diém sinh hpc va phàn logi eùa ehùng Hgj nhàm ùng dung trong vi^ sài xuàt che phàm vi sinh yém khi dùng xù ly nuóc thài sinh hoat tnròng Dai hpc Nha Trang.
3.2. Nghién cùu d§c diém sinh hpc va phàn lo?i cùa chùng H2.3
De phàn loai càc chùng tuyén chpn su dung hai phuong phàp dàc tinh sinh hóa va sinh hpc phàn tu;
két qua thu dupc dupc the hién b bang 2 va hình 1.
78 NÒNG NGHIÉP VÀ PHÀT TRIEN NÓNG THÓN - KY 1+2 - THÀNG 2/2C13
KHOA HpC CÒNG NGHÉ
Càc ehi tìéu
Khà nàng Jiình thành en^ym ngoai bào
Amylaza Xenluloza Proteaza Nhuómgram Hình thài té bào Catalana
Khà nàng dóng hóa duòng Glucoza (dòi ehùng d u o n ^ Xyloza
Fructoza Sucaroza Lactoza Mannitol Inositol Raffinoza D-arabinoza Ri duòng
+ + + + Que + + + + + + + + + + (+ su dung tót, - khóng su dung)
Phàn loai theo 16s ArRN: De eó the phàn loai chinh xàc dén mùc loài cùa eàe ehùng, mot trinh tir khoàng 500 nucleotit tu gien ma hóa cho 16S ArRN cùa càc chùng duoc khuéch dai bang phuong phàp PCR vói 2 mói chuyén biét va duoc xàc dình trình tu nucleotìt Két qua so sành mùc dò tuong dòng trình tu cùa càc chùng vói ngàn hàng dù Uéu gien eùa NCBI bang chuong ùinh BLAST.
Càc doan trình tu 16s ArRN khoàng 500 nucleotit cùa càc chiing khi dem so sành vói ngàn hàng dù liéu gien déu eó só nucleotìt tuong dóng trèn 500 nucleotìt va mùc tuong dóng trình tu tu 99%
trò lén. Theo Hugenholtz va cóng su (1998), sò nucleotìt tuong dòng va mùc tuong dóng trình ÙJT nhu vày dù tin cày cho viéc sàp xép hinh tu nucleotìt mói trong he thòng phàt sinh chùng loài [12].
Dva vào trình tir 16S ArRN dà dupc giài tì-inh tu, rao phàn mém CLUSTAL 1.83 va vào càc trinh tu dà :ó trong ngàn hàng gien (Genbank), dà xày dung lupe cày phàt sinh chùng loai.
Sau khi so sành vói càc trinh tu 16s ArRN dà ìupc cóng bò Irén ngàn hàng gien ta thày: chùng H23
^rong dòng 99,9% vói chùng Bacillus subtihs W110598. Hon nira, dira vào càc dàe diém sinh hóa là dupc nghièn cùu b trén, ehùng này dupc xàc djnh
là Bacillus subtihs H2.3. B. subtihs dupe xem là mot vi khuàn hiéu khi nhung chùng eó thè phàt trién trong diéu kièn khóng eó oxygen va san sinh axetoin, axetat, càc axit va 2,3 - butadiendiol tu pyrovat thòng qua axetolactat B. subtihs eó thè phàt sinh NAD* tu su bién dói acetoin thành butanectìol, do dò nò có thè phàt trién Iq khi m ^ h hon. Day là hai loài có rat nhiéu chùng có ho$t tinh enzym mginh, eó khà nàng khù nitrat, nitìit, khàng dupc vi khuàn gay b^nh va an toàn dòi vói nguòi [7, 9, 10, 11, 16, 17]. Vói muc dich san xuàt che phàm vi sinh su dung ùong xù ly nuóc thài sinh ho^t truòng Dai hpc Nha Trang nèn da lua chpn ehùng Bacìllus subtihs ÌÌ23 de nghién cùu tìép theo càc diéu ki^n ành huòng tói qua trình sinh truòng cùa chùng này.
- ^
Bacillus oerius 24 K Bacillus sonorensis NRRL23154
Bacillus lichemformis EUZ1849 Bacillus pumilus AB195283 Bacillus stratosphericus Bacillus vietnamensis 151 Bacillus acidicola 1052 Streptomyces AB217603 Bacillus velezensis EF433407 Bacillus amyloliquefaciens 155 Bacillus polyfermenticu AY1494 Bacillus amyloliquefaciens AB2 Bacillus atropbaeus ÌCM9070 Bacillus mtyavensis IF01571B H2.3
Bacillus subtilis Bacillus subtilis AB11D598 Bacillus axarquiensis DQ993670 Bacillus subtilis spiziienii B Bacillus vallismoftis DSM11031
Hình 1. Cày phàt sinh chùng I09Ì cùa chùng H2jvói càc loài có quan h0 gàn gOidya vào trình tv ArDN 16S
3.3. Anh huòng cùa dièu ki^n nuòi cày dèn khà nàng sinh truòng va phàt trìén cùa chùng Bacillus subtilisìÌ23
a) Anh huòng cùa nguòn nita
Qua do thi (hình 2) ta thày chùng B. subtilis H2.3 sinh truòng manh trén mói truòng có nguòn nito hùu co là bòt dàu tuong {EDIO. pepton, cao men va trén nguòn nito vò co là (NH4)2S04. Nhung chùng tòi lua ,^ÓNG NGHIÈP VÀ PHÀT TRIEN NÓNG THÓN • KY 1+2 - THÀNG 2/2013 79
KHOA HOC CÒNG NOHÉ
chpn nguòn nita cho nghién cùu là BDT do có tình kinh té hon va de tim hon so vói càc nguón nita khàc.
Thjyj gian
Hinh 2: Ành huòng cùa nguòn nita dén toc dò sinh tìiròng cùa chùng B. subtilisMi^
b) Ành hiróng cùa nguón càc bon
Qua dò thi 3 ta tìiày chùng B. subtilis Hzj sinh truòng va sinh tòng hpp enzym manh trèn mói truòng eó nguón càc bon là: ri duòng, tình bpt, glucoza. Trong càc nguòn càc bon trén thì mòi truòng LB eó nguón càc bon là ri duóng tòt nhàt eho khà nàng sinh truòng cQng nhu sinh tóng hpp enzym. OD 620 nm dat cao nhàt 2,30.
Két qua b hinh 4 cho thày chùng B. subtilisK^
phàt tìién tòt nhàt tì-ong khoàng nhi^t dò tu 30 - 35»C thòi gian tìi 36 - 48 h. OD 620 nm dat già tri cao nhi là 2,30 à 30"C sau 36 h nuòi cày.
Két qua này phù hpp vói càc nghién cùu cui Panuwan va còng su (2002) [18], Kebabci Òzgiii (2010) [13], Rampersad va cóng su (1998) [19]. Thec càc tàc già này, khà nàng sinh proteaza va xenluloza manh cùa càc chùng vi khuàn thupc chi Bacilus^
nuòi cày b nhi^t dò 30 - 37''C.
d) Ành huóng cùa nguén pHban dàu Két qua ành huòng pH ban dàu dèn su sinh truòng va phàt trién cùa chùng B. subtUìs'^i^tm:
thè hi^n ùén hinh 5.
Hinh 3 . Anh huòng cùa nguón càc bon dén toc dò sinh truòng cùa chùng B. subtilis Hg 3 e) Ành huóng cùa nguón nhièt dò
Hmh 4. Anh huòrng cùa nhiét dò dèn khà nàng sinh tìiròng cùa chùng Bacillus subtilisH;;,
Oh 12h 24h 36h 4Sh 60h T bM g i a o
Hình 5. Anh huòng cùa pH mdì truòng dén khà nàng sinh truòng cùa chiing B. subtilisR23 Két qua cho thày, ehùng B. subtihs H2.3 có khà nàng sinh truòng trong mòi truòng có pH dao dóng tu 5 - 8, tuy nhién khà nàng sinh truòng cùa chùng vi khuàn trong mòi truòng có pH khàc nhau là khàc nhau, OD 620 nm dat cao nhàt 2,32. Chùng B.
subtihs Ho 3 có khà nàng sinh truòng tót nhàt trong mòi truòng có pH = 7. Theo nghièn cùu Panuwan va cpng sv (2002) [18] ù-èn chùng B. subtihs, màt dò quang hpc dat cuc dai trong mòi truòng eò pH=7?ói già tìi OD do dupe là 2,82 [18]. Su khàc bièt này có thè do chùng B. subtihs dupc nuòi cày trong mòi truòng hiéu khi hoàc eó thè do su khàc nhau ve mòi truòng hoàc do su khàc nhau ve càc dàc diém sinii hpc eùa càc chùng vi khuàn.
4.K£TLUAN
> Tu 31 màu dàt va nuóc thài phàn làp du9c 30 chùng vi khuàn yém khi. Trong dò dà chpn duoc 2 ehùng H23, M1.3 eó hoat tình enzym m ^ vacò khà nàng sinh ra dóng thòi 3 loai enzym vói vòng phSn giài lón.
80 NÓNG NGHllP VÀ PHÀT TRIEN NÓNG THÓN - KY 1+2 - THÀNG 2/2013
KHOA HQC CÓNG NGHÉ
> Dua ùén nhùng két qua nghién cùu ve dàc diém hinh thài, dàc diém sinh ly sinh hóa, trinh tu ADNr 16S, 2 chùng H23, Ml,3 dupc xàc dinh là Bacillus subtìlis H23, Lactobacillus casei Mi,3. Lua chpn dupc chùng Bacillus subtilis Hgjdè nghièn cùu tìép theo tao che phàm vi sinh.
> Da xàc djnh dupc diéu kièn nuói cày thich hpp nhàt eho sv sinh truòng cùa chùng Bacillus subtilis H23là: mói b^òng LB, pH tu 7, nhièt dp 30"C.
Vói nguón càc bon là ri duòng, nguón nita là bòt dàu tuong OD 620 nm dat cao nhàt 2,32.
TÀI UÉU THAM KlUO
1. Nguyèn Làn Dùng, Doàn Xuàn Mupn, Nguyèn Phung Tièn, Dàng Due Trach, Pham Vàn TV- Mpt sò phuong p h ^ nghièn cùu vi sinh vàt hpc, tàp 2. Nxb Khoa hpc Ky thuàt. Ha Nói (1972).
2. Tran Den Ha, Dang Ngoc Sam. Isolation and selection Bacillus for poUuted lake water treatment Proceeding of the 20 scientifìc confemce Hanoi University of Technology. 55-58 (2006).
3. Nguyèn Thi Thanh, Tran Lien Ha. Isolation denitrifìcation bacteria for using in polluted lake water treatment Proceeding of the 20 scientifìc confemce Hanoi University of Technology. 243-246 (2006).
4. Tran lien Ha. Strategies for waste treatment in small and medium enterprises and micro-
•enterprises in agriculture seetor. Proceedings of workshop "Enhance capacity of small and medium enterprises in agricultural setor of APEC economie".
December 2007.
5. Bào cào khoa hoc tóng két de tài " Nghién cùu cóng nghè vi sinh va he thòng thiét bj tiét kiém nàng luong de xù U nuóc thài sinh boat dò thi". De tài
>àp Nhà nuóc KC04.23/06-10.
6. Nguyèn Vàn Thp. Thiét kè che tao mò hinh nghièn cùu he thòng tìiiét bi xù ly nuòc tìiài sinh :ioat eho eàe khu tgp thè eùa truòng Dai hpc Nha Trang. Luàn vàn Cao hpc - Truòng Dai hpc Nha sirrang(2009).
7. A. Hammed, T. Keshavarz, C. S. Evan. Effect
• )f dissolved oxygen tension and pH on the production of extracellular protease from a new solate of Bacillus subtihs K2, for use in leather
processing, J. Chem. Technol. Biotechnol. 74 (1999) 5.
8. Andrena, C. W. S., R. M. Rosa, E. C. Tondo. C.
C. Gaylarde and J. A. P. Henriques, 2004.
Identification and molecular characterizatìon of a Bacillus subtilis IS13 strain involved in the biodegradatìon of 4,5,6-triehloroguaiacol.
Chemosphere 55: 631-639.
9. Araya, M.. MoreUi, L, Reid, G., Sanders, M. E.
and Stanton. C , Joint FAO/WHO Working Group Report on Guidelines for the evaluation of probiotics in food, London, Ontario.
ftp://ftp.fao.org/es/esn/food/wgreport2.pdf (2002).
10. Arici M., Bilgin B., Sagdie 0., Ozdemir C.
Some Characterìstics of Lactobacillus Isolates from Infant Feaces. Food Mierobiology, 21, pp. 19-24 (2004).
11. Harry P. Rappaport. A Bacillus subtilis Proteinase. The Journal of Biological Chemistry. Voi.
240. No. 1.(1965).
12. Hugenholtz, P., Goebel, B., Pace, N. Impact of eulture-independent studies on the merging phylogenetìc view of bacterial diversity. Journal of Bacteriology 180:47654774 (1998).
13. Kebabci Òzgiir and Cihangir Niliifer, Isolation of protease producing novel Bacillus subtihs. Journal of Biotechnology. Voi. 10( 7), pp.
1160-1164 (2010).
14. Kimura M., A simple method for estimating evolutionary rate of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. J. Moi.
Evol. 16:111-120 (1980).
15. Kozaki M-, Uchimura T & Okada S.
Experimental manual of lactìc acid bacteria.
Asakurasyoten, Tokyo, Japan (1992).
16. M. Schalbney. A. Sìngh, P. 0. Ward, Developments in the use of Bacillus species for industriai productìon. Can. J. Microbiol. 50 (2004) 1.
17. Mìshra V., Prasad D. N.. Application of In Vitro Methods for Selectìon of Lactobacillus casei Strains as Potentìal Probiotics. International Journal of Food Mierobiology, 103, pp. 109-115 (2005).
18. Panuwan Chantawannakula. Characterization of proteases of Bacillus subtihs strain 38 isolated from traditionally fermented soybean m Northem Thailand. Science Asia 28 (2002) : 241-245.
..40NG N G H l i P V A PHAT TRIEN N O N G THON - KY 1+2 - THANG 2/2013 81
KHOA HOC CÒNO MGHÉ
19. Rampersad K., Goldstone L. A., and Tivchev 22. Shannin, F. and Rahman, M., 2007. IsolaUon G. N., Study of methods for the cultivation of and characterization of protease producing Bacillus anaero'bic. Water SA. Voi. 24 No. 4 (1998). strain FS-1. Agricultural Engineering International:
20. Saitou N. and Nei M., TT,e neighbor-joming te CIGR EiourT,al. Voi. K . Aprii, 2007.
method: a new method for reconstrucUng 22. Spencer J. F. T., de Spencer A L. R., Public phylogeneUc trees. Moi. Biol. Evol. 4: 406-425 Health Mierobiology Methods and Protocols.
(1987). Methods in Molecular Biology, voi. 268. Humana
„, e , • V M i^ M T M„„„„„ M FressIncTotowa, New Jersey, USA (2004).
21. Sakiyama, Y., Nguyèn, K. N. T , Nguycn, M.
G., Miyadoh, S., Duong, V. H. & Ando, K., 23. Thompson J. D., Gibson T. J., Plewniak F, Kineosporia babensis sp. nov, isolated from plant Jeanmougin F. & Higgins D. G., The CLUSTALJC litter in Vietaam. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 59: 550- Windows interface: flexible strategies for multiple 554 (2009). sequence alignment aided by quality analysis tool.
Nucleic Acids Res. 25: 4876 - 4882 (1997).
ISOLATION AND SELECTION OF SOME ANAEROBIO STRAINS PRODUCE BIOLOGICAL PRODUCT FOR DOMESTIC WASTEWATER TREATMENT SYSTEM IN NHA TRANG
UNIVESriY
Pham Thi Lan, Vu Ngoc Boi,Tran Lien Ha Summary
From 31 soli samples and wastewater in Khanh Hoa, 30 anaerobio strains were isolated. Among them, strain H23 with highest activities of protease, amylase and cellulose were selected. By 16S rRNA analysis, the H23 strains were classilìed at species level as Bacillus subulis, respectively. And the 16S rRNA sequences of H23 is similanty with Bacillus subtilis AB110598 of 99.9%, respecUvely. The optimum condiùons for growth of strain Bacillus subtilis H23 are the carbon source: molasses, nitrogen source:
soybean, pH of 7 and temperature 30"C andthemaximumof OD620 nm of 2.32.
Key word: Amylase. protease, calalase, Bacillus subtilis H2.3, isolation.
Nguòi phàn bif n: PGS.TS. Pham Vàn Toàn Ngày nhàn bài: 25/12/2012
Ngày thòng qua phàn bijn: 28/01/2013 Ngày duy^t dàng: 05/02/2013
82 NÓNG NGHIÉP VÀ PHÀT TRIEN NÓNG THÓN - KY 1+2 - THÀNG 2/2013
