TERHADAP BAKTERI PENYEBAB JERAWAT
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
OLEH SYAIKHUL AZIZ NIM : 106102003387
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) SYARIF HIDAYATULLAH
ii NAMA : Syaikhul Aziz
NIM : 106102003387
JUDUL : UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN DAN UMBI BAKUNG PUTIH (Crinum asiaticum L.) TERHADAP BAKTERI PENYEBAB JERAWAT
Disetujui Oleh:
Pembimbing I Pembimbing II
Prof. Dr. H. Chairul, M.Chem., Apt. Azrifitria, M.Si., Apt. NIP. 195007161983012101 NIP. 197211272005012004
Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
iii
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL
DAUN DAN UMBI BAKUNG PUTIH (Crinum asiaticum L.) TERHADAP BAKTERI PENYEBAB JERAWAT
Telah disetujui, diperiksa dan dipertahankan dihadapan Tim Penguji Skripsi oleh :
Syaikhul Aziz NIM : 106102003387
Menyetujui, Pembimbing:
1. Pembimbing I Prof. Dr. H. Chairul, M.Chem., Apt. ...
2. Pembimbing II Azrifitria, M.Si., Apt. ...
Penguji:
1. Ketua Penguji Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc., Apt. ...
2. Anggota Penguji I Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc., Apt. ...
3. Anggota Penguji II Eka Putri, M.Si., Apt. ...
4. Anggota Penguji III Sabrina, M.Si., Apt. ...
Mengetahui,
Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
iv
DENGAN INI SAYA MENYATAKAN BAHWA SKRIPSI INI BENAR-BENAR HASIL KARYA SENDIRI YANG BELUM PERNAH DIAJUKAN SEBAGAI SKRIPSI ATAU KARYA ILMIAH PADA PERGURUAN TINGGI ATAU LEMBAGA PENDIDIKAN MANAPUN.
Jakarta, Agustus 2010
Syaikhul Aziz
v
BAKUNG PUTIH (Crinum asiaticum L.) TERHADAP BAKTERI PENYEBAB JERAWAT
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih (Crinum asiaticum L.) terhadap Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis, bakteri patogen yang menyebabkan jerawat. Metode difusi cakram digunakan untuk penapisan aktivitas antibakteri dan potensi relatif dari ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih. Ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih aktif terhadap semua bakteri yang diuji. Nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan nilai Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ditentukan dengan metode dilusi. Nilai KHM dan KBM ekstrak etanol daun untuk P. acnes (1,25 dan 2,5 mg/ml), S. aureus (5 dan 10 mg/ml) dan S. epidermidis ( 2,5 dan 5 mg/ml). Sedangkan nilai KHM dan KBM ekstrak etanol umbi untuk P. acnes (7,5 dan 15 mg/ml), S. aureus (7,5 dan 15 mg/ml) dan S. epidermidis (3,75 dan 7,5 mg/ml). Studi lebih lanjut dilakukan pada ekstrak etanol daun terhadap P. acnes untuk menganalisa kebocoran sel (asam nukleat dan protein) dengan spektrofotometri ultraviolet, ion logam (K+ dan Ca2+) dengan spektrometri serapan atom, dan mengamati perubahan dinding sel dengan pemindai mikroskop elektron (SEM). Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun dapat merusak dinding sel dan mempengaruhi permeabilitas membran yang ditandai dengan keluarnya asam nukleat, protein, ion logam (K+ dan Ca2+) dari dalam sel dan mengubah dinding sel P. acnes.
vi
LEAVES AND BULBS OF CRINUM LILY (Crinum asiaticum L.) AGAINST ACNE-INDUCING BACTERIA
The aim of this study was to evaluate the antibacterial activity of ethanol extract of leaves and bulbs of crinum lily (Crinum asiaticum L.) against Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis, pathogenic bacteria that cause acne. A disc diffusion method was used for screening antibacterial activity and relative potency of ethanol extract of leaves and bulbs of crinum lily. The ethanol extract of leaves and bulbs of crinum lily was active against all assayed bacteria. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) values were determined by dilution method. MIC and MBC of ethanol leaves extract were found for P. acnes (1,25 and 2,5 mg/ml), S. aureus (5 and 10 mg/ml) and S. epidermidis (2,5 and 5 mg/ml). While MIC and MBC of ethanol bulbs extract were found for P. acnes (7,5 and 15 mg/ml), S. aureus (7,5 and 15 mg/ml) and S. epidermidis (3,75 and 7,5 mg/ml). Further study was conducted on the ethanol leaves extract against P. acnes to analyze cell leakage (nucleic acid and protein) by ultraviolet spectrophotometry, metal ion (K+ and Ca2+) by atomic absorption spectrometry, and observed alteration of the cell wall by scanning electron microscopy (SEM). The results showed that ethanol leaves extract could damage the cell wall and affect the permeability of membrane which marked by release of nucleic acid, protein, metal ion (K+ and Ca2+) from the cell and alter the cell wall of P. acnes.
vii
Dengan kerendahan hati, penulis panjatkan puji serta syukur kehadirat Allah SWT yang senantiasa memberikan rahmat serta hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi, yang diajukan sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan program pendidikan tingkat strata 1 (S1) pada Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih dan penghargaan yang setinggi-tingginya kepada:
1. Bapak Prof. Dr (hc). dr. M. K. Tadjudin, Sp.And., selaku dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Bapak Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc., Apt., selaku ketua Program Studi Farmasi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Bapak Prof. Dr. H. Chairul, M.Chem., Apt., dan ibu Azrifitria, M.Si., Apt., sebagai pembimbing skripsi, yang telah mengarahkan dan memberikan masukan-masukan bagi penulis selama penelitian dan penulisan skripsi. 4. Ibu Dra. Conny R. Tjampakasari, M.Biomed., yang telah mendampingi
penulis pada saat penelitian di Laboratorium Mikrobiologi Klinis FKUI, Jakarta.
viii
penulis melakukan penelitian di Laboratorium Mikrobiologi Klinis FKUI, Jakarta.
7. Dosen-dosen, staf dan karyawan Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
8. Keluarga besar, terutama ayahanda tercinta Drs. H. Zainus Solihin dan ibunda tersayang Hj. Rosyidah yang selalu memberikan doa, dukungan, semangat, dan perhatian yang besar sehingga penulis dapat menyelesaikan studi ini.
9. Teman-teman seperjuangan Nino, Sobir, Dani, Fikri, Ardian dan teman-teman farmasi angkatan 2006 atas semua kebersamaan kita dan semoga persahabatan yang sudah terjalin tidak akan pernah berakhir.
10.Dan semua pihak yang telah membantu baik secara langsung maupun tidak langsung yang tidak dapat disebutkan satu per satu.
Penulis menyadari, sebagai seorang mahasiswa yang pengetahuannya belum seberapa dan masih perlu banyak belajar dalam penulisan skripsi, oleh karena itu, penulis sangat mengharapkan adanya kritik dan saran yang positif untuk perbaikan skripsi ini. Semoga Skripsi ini bermanfaat dan bisa memberikan sumbangsih bagi kemajuan Ilmu Pengetahuan. ”Amiin”
ix
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Bakung Putih ... 5
2.4.1 Mekanisme Kerja Antimikroba ... 14
2.4.2 Penentuan Aktivitas Antimikroba ... 16
2.5 Jerawat ... 19
2.6 Antibakteri Pembanding ... 19
BAB III KERANGKA KONSEP 3.1 Alur Penelitian ... 21
BAB IV METODOLOGI PENELITIAN 4.1 Waktu dan Tempat Penelitian ... 22
4.2 Alat dan Bahan ... 22
4.3 Prosedur Kerja ... 24
4.3.1 Penyiapan Bahan untuk Ekstraksi ... 24
4.3.2 Ekstraksi dengan Pelarut Organik ... 24
x
4.3.7 Pembuatan Larutan Uji ... 30
4.3.8 Pembuatan Stok Bakteri ... 30
4.3.9 Pembuatan Suspensi Bakteri ... 30
4.3.10Pengujian Aktivitas Antibakteri ... 31
4.3.11Penetapan Potensi Relatif ... 32
4.3.12Penentuan KHM dan KBM ... 32
4.3.13Analisis Kebocoran Asam Nukleat dan Protein ... 34
4.3.14Analisis Kebocoran Ion Logam ... 34
4.3.15Analisis Kerusakan Sel Menggunakan SEM ... 34
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN 5.1 Hasil Penelitian ... 36
5.2 Pembahasan ... 44
BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN 6.1 Kesimpulan ... 54
6.2 Saran ... 55
DAFTAR PUSTAKA ... 56
xi
Halaman Tabel 1. Hasil pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol daun dan umbi
bakung putih ... 36 Tabel 2. Hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol daun dan umbi
bakung putih ... 37 Tabel 3. Rata-rata diameter hambat dan SD hasil uji aktivitas
antibakteri ekstrak etanol daun bakung putih ... 37 Tabel 4. Rata-rata diameter hambat dan SD hasil uji aktivitas
antibakteri ekstrak etanol umbi bakung putih ... 37 Tabel 5. Rata-rata diameter hambat dan SD hasil uji daya hambat
klindamisin HCl ... 38 Tabel 6. Hasil kesetaraan ekstrak etanol daun 30 % terhadap
klindamisin HCl ... 40 Tabel 7. Hasil kesetaraan ekstrak etanol umbi 60 % terhadap
xii
Halaman Gambar 1. Rumus molekul klindamisin HCl ... 20 Gambar 2. Diagram alur penelitian ... 21 Gambar 3. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan
diameter hambat terhadap bakteri Propionibacterium acnes 39 Gambar 4. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan
diameter hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus .... 39 Gambar 5. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan
diameter hambat terhadap bakteri Staphylococcus
epidermidis ... 40 Gambar 6. Kebocoran asam nukleat dan protein pada bakteri
Propionibacterium acnes ... 42 Gambar 7. Kebocoran ion K+ dan Ca2+ pada bakteri Propionibacterium
acnes ... 43 Gambar 8. (a)Morfologi sel normal Propionibacterium acnes ... 43 Gambar 8. (b)Pengaruh ekstrak daun bakung putih pada konsentrasi 2
KHM terhadap morfologi sel Propionibacterium acnes ... 43 Gambar 9. Tumbuhan bakung putih (Crinum asiaticum L.) ... 61 Gambar 10. Penapisan alkaloid ekstrak etanol daun dan umbi bakung
putih ... 65 Gambar 11. Penapisan flavonoid ekstrak etanol daun dan umbi bakung
putih ... 65 Gambar 12. Penapisan saponin ekstrak etanol daun dan umbi bakung
putih ... 65 Gambar 13. Penapisan tanin ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih 66 Gambar 14. Penapisan steroid-triterpenoid ekstrak etanol daun dan umbi
bakung ... 66 Gambar 15. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri
Staphylococcus aureus ... 70 Gambar 16. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri
Staphylococcus epidermidis ... 70 Gambar 17. Daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri
Propionibacterium acnes ... 72 Gambar 18. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap
bakteri Propionibacterium acnes ... 76 Gambar 19. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap
bakteri Propionibacterium acnes ... 76 Gambar 20. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap
bakteri Staphylococcus aureus ... 77 Gambar 21. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap
bakteri Staphylococcus aureus ... 77 Gambar 22. KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih terhadap
bakteri Staphylococcus epidermidis ... 78 Gambar 23. KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih terhadap
xiii
Halaman
Lampiran 1. Tumbuhan bakung putih ... 61
Lampiran 2. Hasil determinasi tumbuhan bakung putih ... 62
Lampiran 3. Sertifikat baku pembanding klindamisin HCl ... 63
Lampiran 4. Perhitungan rendemen dan susut pengeringan ... 64
Lampiran 5. Hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih ... 65
Lampiran 6. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis ... 67
Lampiran 7. Uji daya hambat klindamisin HCl terhadap bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis ... 69
Lampiran 8. Perhitungan potensi relatif antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih dibandingkan dengan klindamisin HCl ... 73
Lampiran 9. Penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih ... 76
Lampiran 10. Hasil analisa kebocoran asam nukleat dan protein bakteri Propionibacterium acnes dengan spektrofotometer UV/VIS ... 79
Lampiran 11. Hasil analisa kebocoran ion K+ dan Ca2+ bakteri Propionibacterium acnes dengan Atomic Absorption Spectrometry (AAS) ... 80
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sejak peradaban manusia mulai dikenal, manusia selalu memperhatikan penampilannya. Kulit merupakan organ terluar yang membatasi manusia dari lingkungan hidupnya selalu menjadi perhatian. Namun, ketika kelainan pada kulit mulai menyerang, manusia mulai merasa resah karena berpotensi merusak penampilannya.
Jerawat adalah kelainan kulit yang biasa terjadi pada usia remaja. Meskipun jerawat bukan penyakit infeksi serius, banyak remaja yang mendapatkan jerawat mengalami depresi, kecemasan dan putus asa (Saising et al., 2008). Diagnosis klinis jerawat mudah dibuat, tetapi pengobatannya sering mengalami kesulitan. Hal ini karena penyebab jerawat bersifat multifaktorial, dan salah satu faktornya adalah bakteri (Mertaniasih dkk, 1996). Sampai saat ini belum ada cara penyembuh yang tuntas terhadap jerawat, meskipun ada beberapa cara yang sangat menolong. Salah satunya penggunaan antibiotik sebagai solusi untuk jerawat yang selama beberapa dekade ini masih banyak diresepkan (Yang et al., 2009).
pertama penyembuhan jerawat harus ditinjau kembali untuk membatasi perkembangan resistensi antibiotik (Swanson, 2003). Kondisi ini mendorong untuk melakukan pengembangan penelitian antibakteri alami terhadap tumbuhan yang ada di Indonesia, diantaranya bakung putih (Crinum asiaticum L.).
Sejauh ini di pulau jawa, bakung putih ditanam hanya sebagai tanaman hias dan tumbuh liar mulai dari dataran rendah hingga ± 700 m di atas permukaan laut. Secara empiris, terna ini sering digunakan sebagai anti racun (antidot) pada luka yang diakibatkan karena panah beracun, gigitan ular atau sengatan serangga, keracunan makanan dan obat luka (Hargono dkk, 1985; Heyne, 1987). Dengan adanya informasi penggunaan bakung putih sebagai obat luka menimbulkan dugaan bahwa bakung putih mengandung zat atau senyawa yang dapat membunuh bakteri pada luka (antibakteri).
Berdasarkan uraian diatas, untuk mempertimbangkan kemungkinan aplikasi bakung putih sebagai antibakteri alami pada pengobatan pasien berjerawat, maka diperlukan kajian mengenai aktivitas antibakterinya. Dalam hal ini, bakteri uji yang digunakan adalah Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis. Pemakaian ketiga
bakteri tersebut didasarkan keterlibatannya dalam perkembangan jerawat (Bukhart et al., 1999; Chomnawang et al., 2005; Sukatta et al., 2008; Han et al., 2010). Pada penelitian ini akan dipelajari aktivitas, potensi, Konsentrasi
pengaruh pemberian ekstrak etanol bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat.
1.2 Perumusan Masalah
a. Apakah ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri penyebab jerawat?
b. Seberapa besar potensi relatif antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat dibandingkan dengan klindamisin?
c. Seberapa besar nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat.
d. Bagaimana pengaruh pemberian ekstrak etanol bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat?
1.3 Hipotesis
a. Ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri penyebab jerawat.
b. Ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih mempunyai potensi relatif antibakteri yang sama dengan klindamisin dalam menghambat pertumbuhan bakteri penyebab jerawat.
d. Pemberian ekstrak etanol bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat dapat merusak dinding sel dan mengubah permeabilitas membran sel bakteri yang ditandai dengan keluarnya protein, asam nukleat, dan ion logam dari dalam sel serta mempengaruhi morfologi sel bakteri.
1.4 Tujuan Penelitian
a. Mempelajari aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat
b. Menentukan potensi relatif antibakteri ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat dibandingkan dengan klindamisin.
c. Menentukan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat.
d. Mengkaji pengaruh pemberian ekstrak etanol bakung putih terhadap bakteri penyebab jerawat
1.5 Manfaat Penelitian
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Bakung Putih
Bakung putih termasuk dalam terna tahunan dengan tinggi 0,5 - 1,3 m, mempunyai umbi lapis yang besar dengan diameter 5 - 10 cm. Pada ujung umbi ada batang semu dengan tunas samping yang tingginya 9 - 75 cm. Daun duduk, berbentuk pita atau lanset, panjang 3 - 120 cm, lebar 3 - 18 cm, urat-urat daun sejajar tampak jelas. Bunga tersusun dalam bentuk payung, terdiri atas 10 sampai 40 bunga yang berwarna putih dan berbentuk corong. Buahnya berupa buah kotak yang mempunyai kulit tipis, bentuknya bulat telur terbalik, merekah menjadi dua rongga bila masak, berbiji 1 - 5. Bijinya besar-besar, bentuknya bundar gepeng dan kulit bijinya berlapis lendir (Wijayakusuma, 2000).
2.1.1 Klasifikasi Bakung Putih (Anonim, 2010; Hargono dkk, 1985) Division : Magnoliophyta
Class : Liliopsida Sub Class : Monocots Order : Asparagales Family : Amaryllidaceae Tribe : Amaryllideae Genus : Crinum
2.1.2 Nama Daerah dan Nama Asing (Hargono dkk, 1985; Heyne, 1987; Nelson et al., 2007)
a. Nama Daerah : Sumatera [bakung (Melayu), bawang hutan, bawang tembaga, kajang-kajang (Palembang), bahong (Batak), semur (Bangka), bakueng (Minang-kabau)]; Jawa [bakung (Sunda, Jawa), bawang brojol (Jawa), bhakong (Madura)]; Sulawesi [bakung (Makasar, Bugis)]; Maluku [dausa, nopu ribua, takaosa, tapeusa, takebal (Ambon), rebut (Buru), pete (Halmahera utara), fete-fete (Ternate)].
b. Nama Asing : Wen chu lan (T), Lelie (B), Crinum lily, Spider lily, Seashore crinum (l), Pulb-plueng (Th), Krinum bakung (M). 2.1.3 Kandungan Kimia
Pemeriksaan pendahuluan golongan kandungan kimia ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih (Crinum asiaticum L., Amaryllidaceae) menunjukkan adanya tanin dan alkaloid pada ekstrak daun, sedangkan pada umbi terdapat saponin dan alkaloid berupa likorin (Nellasari dkk, 1984). Menurut Min et al. (2001) dari bagian umbi dapat diisolasi senyawa kriasiatisidin, pratorimin, likorin, 4-hidroksi-7-metoksiflavan. Sedangkan menurut Kim et al. (2006) dari bagian daun dapat diisolasi senyawa krinamin, likorin, norgalantamin dan epinorgalantamin.
2.1.4 Bagian Tumbuhan yang Dipakai
2.1.5 Efek Farmakologis
Bakung putih memiliki efek farmakologis sebagai perangsang muntah (emeticum), penetral racun (antidotum), peluruh keringat (diaforetik), obat cacing (antelmintik), merangsang masaknya bisul, menghilangkan pembengkakan (antiswelling), menghilangkan rasa sakit (analgesik), pelembut kulit dan obat luka (Hargono dkk, 1985; Heyne, 1987; Nelson et al., 2007). Menurut Sun et al. (2009) bagian umbi memiliki aktivitas sitotoksik. Disamping itu bakung putih dapat digunakan sebagai perangsang pertumbuhan rambut (Kim et al., 2010) dan anti-inflamasi (Samud et al., 1999; Kim et al., 2008).
2.1.6 Penyebaran
Beberapa spesies merupakan tumbuhan asli Amerika Selatan dan Hindia Barat, sedangkan bakung putih berasal dari daerah tropis (Asia). Banyak ditemukan di dataran rendah sampai 700 m di atas permukaan laut, khususnya di tempat-tempat yang lembab tanahnya dan banyak humusnya, di tepi sungai, gundukan di pantai dan sekitar danau juga di tepi hutan. Bakung dikenal sebagai tanaman hias, biasa ditanam di halaman-halaman (Heyne, 1987).
2.2 Ekstraksi (Depkes RI, 2000)
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang ditetapkan.
Dalam proses pembuatan ekstrak ada beberapa hal yang perlu diperhatikan, diantaranya:
a. Pembuatan serbuk simplisia
Proses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk simplisia kering. Dari simplisia dibuat serbuk simplisia dengan peralatan tertentu sampai derajat kehalusan tertentu. Proses ini dapat mempengaruhi mutu ekstrak. Makin halus serbuk simplisia, proses ekstraksi makin efektif dan makin efisien, namun makin halus serbuk, maka akan makin rumit secara teknologi peralatan untuk tahapan filtrasi.
b. Cairan pelarut
bekerja dan proses dengan cairan tersebut, ekonomis, ramah lingkungan, dan keamanan.
c. Separasi dan pemurniaan
Tujuan dari tahapan ini adalah menghilangkan (memisahkan) senyawa yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin tanpa berpengaruh pada senyawa kandungan yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni. Proses-proses pada tahap ini adalah pengendapan, pemisahan dua cairan tak tercampur, sentrifugasi, dekantasi, filtrasi serta proses adsorpsi dan penukar ion.
d. Pemekatan atau penguapan
Pemekatan berarti jumlah parsial senyawa terlarut (solute) secara penguapan pelarut tanpa sampai menjadi kondisi kering, ekstrak hanya menjadi kental atau pekat.
e. Rendemen
Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan simplisia awal.
2.3 Bakteri
dinding selnya mengandung mukopeptide, yang memberikan kekakuan pada sel (Pelczar et al., 1986).
Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri dapat dibedakan menjadi faktor fisik dan faktor kimia termasuk nutrisi dalam media kultur. Faktor fisik meliputi temperatur, pH, tekanan osmotik dan cahaya. Faktor kimia meliputi karbon, oksigen, mikroelemen (trace element) dan faktor pertumbuhan organik (Pratiwi, 2008).
Struktur sel bakteri diantaranya meliputi (Pelczar et al., 1986):
a. Dinding sel merupakan suatu struktur yang sangat kaku yang memberikan bentuk pada sel. Tebal dinding sel kebanyakan bakteri berkisar antara 10 - 35 nm. Komposisi kimiawi dinding sel yang menyebabkan kaku adalah peptidoglikan. Polimer yang amat besar ini terdiri dari tiga macam bahan pembangun: (1) N-asetilglukosamin (AGA); (2) asam N-asetilmuramat (AAM); dan (3) suatu peptida yang terdiri dari empat atau lima asam amino, yaitu L-alanin, D-alanin, asam D-glutamat, dan lisin atau asam diaminopimelat. Selain itu dinding sel juga mengandung komponen lain seperti, asam teoklat, protein, polisakarida, lipoprotein, dan lipopilosakarida yang terikat pada peptidoglikan.
c. Sitoplasma mengandung bagian sel: (1) daerah sitoplasma, banyak mengandung partikel-partikel RNA-protein yang disebut ribosom, terkemas padat di seluruh daerah sitoplasma. Ribosom merupakan situs biosintesis protein, dijumpai pada semua sel, baik eukariotik maupun prokariotik; (2) daerah kromatin atau nukleus, merupakan bagian yang mengandung bahan nukleus atau DNA di dalam sel bakteri menempati posisi dekat pusat sel dan terikat pada sistem mesosom-membran sitoplasma; dan (3) inklusi sitoplasma, mengandung substansi kimiawi yang membentuk granul serta globul di dalam sitoplasma.
2.3.1 Tinjauan Bakteri Uji
a. Propionibacterium acnes(Khan et al., 2009; Sugita et al., 2010) Klasifikasi bakteri Propionibacterium acnes adalah:
Order : Actinomycetales Family : Propionibacteriaceae Genus : Propionibacterium Spesies : Propionibacterium acnes
Propionibacterium acnes merupakan salah satu bakteri
P. acnes ialah agen utama etiologi inflamasi jerawat. Ia
merangsang pelepasan interleukin-1 (IL-1), IL-8, dan tumor necrosis factor-α (TNF-α) dan mengaktifkan sistem komplemen. Mikroorganisme ini juga menghasilkan asam lemak bebas melalui hidrolisis trigliserida kelenjar sebasea oleh lipase-nya. Asam lemak ini dapat mengakibatkan inflamasi jaringan ketika berhubungan dengan sistem imun dan mendukung terjadinya jerawat. Berbagai kelas antibiotik efektif melawan jerawat karena P. acnes, seperti klindamisin, eritromisin, kuinolon, dan tetrasiklin. Akan tetapi dalam dekade terakhir ini, resistensi antibiotik terhadap P. acnes semakin meningkat.
b. Staphylococcus aureus
Klasifikasi bakteri Staphylococcus aureus adalah (Syahrurachman dkk, 1994):
Order : Eubacteriales Family : Micrococcaceae Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
atau bersin. S. aureus memiliki kemampuan untuk mensintesis lipase yang dapat mengubah sebum trigliserid menjadi asam lemak bebas yang dapat merangsang inflamasi (Sukatta et al., 2008). Bakteri ini dapat menyebabkan bermacam-macam infeksi seperti pneumonia, meningitis, empiema, endokarditis, jerawat, pioderma atau impetigo (Brooks et al., 2005). Menurut Mertaniasih (1996) bakteri ini merupakan mikroba patogen yang menyebabkan pus (nanah).
c. Staphylococcus epidermidis
Klasifikasi bakteri Staphylococcus epidermidis adalah: Order : Eubacteriales
Family : Micrococcaceae Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus epidermidis
2.4 Antimikroba (Ganiswarna dkk, 1995; Katzung, 1997)
Antimikroba ialah obat pembasmi mikroba, khususnya mikroba yang merugikan manusia. Obat antimikroba yang ideal memperlihatkan “toksisitas selektif”. Istilah ini berarti bahwa obat ini merugikan parasit tanpa merugikan
inangnya. Berdasarkan jenis mikroorganisme yang dimatikan atau dihambat pertumbuhannya, antimikroba terbagi menjadi antibakteri, antifungi, antivirus, dan anti-protozoa.
Obat antimikroba sering disebut sebagai bakteriostatik atau bakterisidal. Istilah bakteriostatik menggambarkan suatu obat yang sewaktu-waktu menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Keberhasilan pengobatan ini sering bergantung pada partisipasi mekanisme pertahanan inang. Sedangkan istilah bakterisidal menggambarkan suatu obat yang menyebabkan kematian pada mikroorganisme.
2.4.1 Mekanisme Kerja Antimikroba (Brunton et al., 2006; Pratiwi, 2008) Antimikroba berdasarkan struktur kimia dan mekanisme aksi, dikelompokkan menjadi:
silang dengan peptidoglikan dinding sel bakteri, dan memblok aktivitas enzim transpeptidase yang membungkus ikatan silang polimer-polimer gula panjang yang membentuk dinding sel bakteri sehingga dinding sel menjadi rapuh dan mudah lisis. Termasuk didalamnya golongan β-laktam (misalnya, penisilin, cephalosporins, dan carbapenems) dan agen lainnya seperti cycloserine, vankomisin, dan bacitracin;
b. Agen yang bekerja secara langsung pada membran sel mikroorganisme, meningkatkan permeabilitas dan menyebabkan kebocoran senyawa intraselular. Membran plasma bersifat semipermeabel dan mengendalikan transport berbagai metabolit ke dalam dan luar sel. Adanya gangguan atau kerusakan struktur pada membran plasma dapat menghambat atau merusak kemampuan membran plasma sebagai penghalang (barrier) osmosis dan mengganggu sejumlah proses biosintesis yang diperlukan dalam membran. Termasuk didalamnya deterjen seperti polymyxin; polyene agen antijamur (misalnya, nistatin dan amfoterisin B) yang mengikat dinding sel-sterol; dan lipopeptide daptomycin;
d. Agen yang mempengaruhi metabolisme asam nukleat bakteri. Penghambatannya pada sintesis asam nukleat berupa penghambatan terhadap transkripsi dan replikasi mikroorganisme, seperti rifamycins (misalnya, rifampisin dan rifabutin) yang menghambat RNA polimerase, dan quinolon yang menghambat topoisomerase; dan
e. Antimetabolit, yaitu substansi yang secara kompetitif menghambat metabolit mikroorganisme, karena memiliki struktur yang mirip dengan substrat normal bagi enzim metabolisme. Termasuk didalamnya trimetoprim dan sulfonamid, yang menghambat enzim penting metabolisme folat.
2.4.2 Penentuan Aktivitas Antimikroba
Potensi dari suatu antimikroba diperkirakan dengan membandingkan penghambatan pertumbuhan terhadap mikro-organisme yang sensitif dari hasil penghambatan suatu konsentrasi antibiotik uji dibandingkan dengan antibiotik referensi. Bahan referensi yang digunakan dalam pengujian adalah zat yang aktivitasnya telah diketahui dengan mengacu pada Standar Internasional yang sesuai (Anonim, 2001).
dilusi termasuk didalamnya metode dilusi cair dan dilusi padat (Pratiwi, 2008).
a. Metode difusi diantaranya:
1) Metode disk diffusion (tes Kirby & Baur) menggunakan piringan yang berisi agen antimikroba, kemudian diletakan pada media agar yang sebelumnya telah ditanami mikroorganisme sehingga agen antimikroba dapat berdifusi pada media agar tersebut. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antimikroba pada permukaan media agar.
2) Metode E-test digunakan untuk mengestimasi Kadar Hambat Minimum (KHM), yaitu konsentrasi minimal suatu agen antimikroba untuk dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Pada metode ini digunakan strip plastik yang mengandung agen antimikroba dari kadar terrendah sampai tertinggi dan diletakkan pada permukaan media agar yang telah ditanami mikroorganisme sebelumnya. Pengamatan dilakukan pada area jernih yang ditimbulkannya yang menunjukan kadar agen antimikroba yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme pada media agar.
macam) digoreskan kearah parit yang berisi agen antimikroba tersebut.
4) Cup-plate technique. Metode ini serupa dengan disk diffusion, dimana dibuat sumur pada media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur tersebut diberi agen antimikroba yang akan diuji.
b. Metode dilusi diantaranya:
1) Metode dilusi cair/broth dilution test (serial dilution). Metode ini digunakan untuk mengukur Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Cara yang dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran agen antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji agen antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba, dan diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan sebagai KBM.
2.5 Jerawat (Tranggono, 1996)
Jerawat adalah peradangan yang disertai dengan penyumbatan pada saluran kelenjar minyak kulit dan rambut (saluran pilosebacea). Apabila saluran pilosebacea tersumbat, maka minyak kulit (sebum) tidak dapat keluar dan mengumpul di dalam saluran sehingga saluran membengkak, dan terjadilah komedo. Jerawat selalu dimulai dari bentuk komedo, baik komedo terbuka (blackhead) atau komedo tertutup (whitehead).
Bentuk jerawat dapat berupa komedo atau disebut jerawat tipe papulosa, dan apabila komedo tersebut mengandung nanah maka digolongkan jerawat tipe pustulosa. Jerawat yang lebih parah dan membentuk kantung nanah disebut jerawat tipe kista dan apabila kantung-kantung nanah itu bersatu membentuk saluran disebut jerawat tipe konglobata.
Jerawat cenderung mulai timbul pada usia remaja dan umumnya timbul dibagian kulit yang berminyak (seborea) yaitu hidung, pipi, dahi, dagu, dada, dan punggung. Menurut Mertaniasih dkk (1996) faktor pencetus dari jerawat bersifat multifaktorial, yaitu diet, genetik, endokrin, kosmetik, dan mikroba. Sedangkan menurut Athikomkulchai et al. (2008) faktor utama yang terlibat dalam pembentukan jerawat adalah peningkatan produksi sebum, pegelupasan dari keratinosit, pertumbuhan bakteri dan inflamasi.
2.6 Antibakteri Pembanding (Depkes RI, 1979; Ganiswarna dkk, 1995)
a. Nama Lain : L- treo- α- D- galakto- oktapiranosida, metil- 7-klor- 6,7,8- trideoksi- {[(1- metil- 4- propil- 2- pirolidinil) karbonil] amino} -1- tio, (2S- trans); monohidriklorida
b. Rumus Kimia : C18H33ClN2O5S . HCl
Gambar 1. Rumus molekul klindamisin HCl d. Pemerian : Serbuk hablur, putih, tidak berbau
e. Kelarutan : Mudah larut dalam air, dalam dimetilformamida P dan dalam metanol; larut dalam etanol (95%) P; praktis tidak larut dalam aseton P
f. Aktivitas Antibakteri : Aktif terhadap Staphylococcus aureus; Diplococcus pneumoniae; Streptococcus pyrogenes; Streptococcus
anaerobik; Streptococcus viridans; Actinomyces israelli; Bacteroides
fragilis dan kuman anaerob lainnya
BAB III
KERANGKA KONSEP
3.1 Alur Penelitian
Gambar 2. Diagram alur penelitian Bakung Putih
Determinasi Tumbuhan
Ekstrak Daun Bakung Putih
Serbuk Daun Bakung Putih Serbuk Umbi Bakung Putih
Ekstrak Umbi Bakung Putih
Pengujian Aktivitas Antibakteri
Proses ekstraksi Proses ekstraksi
Analisis Mekanisme Penghambatan Antibakteri
Analisis Kebocoran Ion Logam Ca2+ dan K+
Analisis Kerusakan Sel Analisis Kebocoran
Protein dan Asam Nukleat
Penentuan KHM dan KBM Latar Belakang
Penapisan Fitokimia
Penentuan Potensi
BAB IV
METODOLOGI PENELITIAN
4.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dari bulan April 2010 sampai dengan bulan Juli 2010 di Laboratorium Bahan Alam, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Cibinong; Laboratorium Mikrobiologi Klinis, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta; dan Pusat Laboratorium Terpadu UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
4.2 Alat dan Bahan a. Alat
b. Bahan 1) Bahan uji
Bahan uji yang digunakan adalah daun dan umbi tanaman bakung putih (Crinum asiaticum L.) yang diperoleh dari Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Kebun Raya Bogor.
2) Bakteri uji
Bakteri uji yang digunakan adalah bakteri Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 yang diperoleh dari koleksi Laboratorium Mikrobiologi Klinis, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.
3) Antibakteri Pembanding
Antibakteri pembanding yang digunakan adalah klindamisin HCl yang diperoleh dari Bagian Baku Pembanding, Badan POM RI, Jakarta.
4) Bahan Kimia
4.3 Prosedur Kerja
4.3.1 Penyiapan Bahan untuk Ekstraksi
Bahan berupa tanaman bakung putih (Crinum asiaticum L.) dalam keadaan segar dikumpulkan, dan dibersihkan dengan air. Bagian daun dan umbi bakung putih diseleksi lalu dirajang dan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan pada suhu ruang dan terhindar sinar matahari langsung. Simplisia kering digiling dan disaring dengan menggunakan mesh no.2, sehingga diperoleh serbuk daun dan umbi bakung putih.
4.3.2 Ekstraksi dengan Pelarut Organik
Serbuk daun dan umbi bakung putih masing-masing sebanyak 700 g dimaserasi dengan menggunakan etanol 70 % selama 5 hari, kemudian disaring dengan menggunakan kapas dan kertas saring. Tiap-tiap filtrat dipisahkan dari pelarutnya dengan menggunakan vaccum rotary evaporator pada suhu 50 0C, sehingga diperoleh ekstrak kental daun dan umbi bakung putih.
4.3.3 Pemeriksaan Karakteristik Ekstrak (Depkes RI, 2000) a. Organoleptik
Pengujian ini dilakukan dengan mengamati bentuk warna, bau, dan rasa dari ekstrak yang dihasilkan.
b. Rendemen ekstrak
Bobot ekstrak yang dihasilkan Bobot awal simplisia
c. Susut pengeringan
Pemeriksaan ini dilakukan dengan cara menimbang ekstrak ± 0.5 g dan dimasukan kedalam botol timbang bertutup yang sebelumnya telah ditara. Kemudian dimasukan kedalam oven pada suhu 105 0C hingga diperoleh bobot yang relatif tetap.
b – c
b – a Keterangan:
a = bobot cawan kosong
b = bobot sampel dan cawan sebelum dikeringkan dalam oven c = bobot sampel dan cawan setelah dikeringkan dalam oven 4.3.4 Penapisan Fitokimia
a. Identifikasi golongan alkaloid
Masing-masing sebanyak 1 g ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih ditambahkan 1 ml HCl 2N dan 9 ml aquadest, kemudian dipanaskan diatas tanggas air selama 5 menit, didinginkan dan kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh dibagi menjadi 2 bagian. Filtrat pertama, ditambahkan 3 tetes pereaksi dragendorff, apabila terbentuk warna endapan orange-cokelat menunjukan adanya senyawa alkaloid. Filtrate kedua, ditambahkan 3 tetes pereaksi mayer, apabila terbentuk endapan putih atau kuning yang
% Rendemen ekstrak = x 100%
ditambahkan dengan metanol kemudian endapan menjadi larut berarti menunjukan adanya senyawa alkaloid.
b. Identifikasi golongan flavonoid
Masing-masing ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih sebanyak 1 g ditambahkan 10 ml metanol (mulut tabung ditutup dengan corong yang diberi kapas yang telah dibasahi), kemudian dipanaskan diatas tanggas air selama 10 menit, kemudian disaring dalam keadaan panas, filtrat kemudian diencerkan dengan 10 ml aquadest dan didinginkan, kemudian ditambahkan 5 ml n-heksan dan dikocok hati-hati, didiamkan sesaat kemudian dipisahkan lapisan n-heksan. Lapisan metanol kemudian dipekatkan, lalu ditambahkan 5 ml etil asetat dan disaring. Filtrate etil asetat dibagi menjadi 2 bagian. Filtrate pertama, sebagai kontrol. Filtrat kedua diuapkan dalam cawan sampai kering kemudian ditambahkan 2 ml etanol, kemudian ditambahkan 0.1 mg serbuk magnesium (Mg) dan 10 tetes ml HCl 2 N, terbentuknya warna merah jingga sampai merah ungu menunjukan adanya senyawa flavonoid, sedangkan terbentuknya warna kuning jingga menunjukan adanya senyawa flavon, kalkon, dan auron.
c. Identifikasi golongan tanin
(sebagai kontrol), lalu sisa filtrat yang lainnya diuji dengan cara menambahkan 3 tetes FeCl3, kemudian dibandingkan dengan warna larutan kontrol. Warna biru hitam menunjukan adanya tanin terhidrolisis dan warna hijau kecoklatan menunjukan adanya tanin terkondensasi.
d. Identifikasi golongan saponin
Masing-masing ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih sebanyak 0,5 g ditambahkan 10 ml air panas, dan didinginkan, setelah dingin langsung dikocok kuat-kuat selama 10 detik, jika terbentuk buih yang stabil selama 10 menit setinggi 1-10 cm dan setelah ditambahkan 1 tetes HCl 2 N buihnya tidak hilang, maka menunjukan adanya senyawa saponin.
e. Identifikasi steroid dan triterpenoid
4.3.5 Sterilisasi Alat dan Bahan
Semua alat dan bahan yang digunakan untuk uji mikrobiologi disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 0C selama 15 menit, kecuali untuk bahan yang terbuat dari karet disterilkan dengan cara direndam dalam alkohol 70 % dan jarum ose disterilkan dengan cara flambir pada nyala bunsen. Pengerjaan uji mikrobiologi dilakukan secara aseptis di dalam lemari aseptis yang sebelumnya telah dibersihkan dengan alkohol 70 %, lalu disinari dengan lampu UV yang dinyalakan 15 menit sebelum digunakan.
4.3.6 Pembuatan Media Pertumbuhan a. Brucella Agar
Ditimbang 43 g Brucella Agar dan dilarutkan dengan 1 L aquadest dan dipanaskan hingga semuanya larut, kemudian ditambahkan 1 ampul vitamin K dan disterilkan dalam autoklaf. Setelah disterilkan kemudian didinginkan hingga suhu diperkirakan 47 0C lalu ditambahkan darah domba sebanyak 5 % (v/v), segera setelah tercampur homogen dituang kedalam tabung atau petri dan didiamkan hingga memadat.
Komposisi Brucella Agar (g/L): Meet pepton 10 %; Casein pepton 10 %; Sodium clorida 5 %; Yeast extract 2 %; Dextrose 1 %; Sodium bisulfit 0,1 %; dan Bacteriological agar 15 %.
b. Agar darah (Lab)
dalam autoklaf. Setelah disterilkan kemudian didinginkan hingga suhu diperkirakan 47 0C lalu ditambahkan darah domba sebanyak 5 % (v/v), segera setelah tercampur homogen dituang kedalam tabung atau petri dan didiamkan hingga memadat.
Komposisi Blood Agar Base (g/L): Beef extract 10; Balanced pepton no.1 10; Sodium clorida 5; dan Agar no.2 12.
c. Muller Hinton Agar (Lab)
Ditimbang 38 gram MHA dan dilarutkan dengan 1 L aquadest dan dipanaskan hingga semuanya larut kemudian disterilkan dalam autoklaf.
Komposisi Muller Hinton Agar (g/L): Beef infusion solids 2; Acid hydrolysed casein 17,5; Starch 1,5; dan Agar no.1 17.
d. Brain Heart Infusion (Merck)
Ditimbang 37 gram BHI dan dilarutkan dengan 1 L aquadest dan dipanaskan hingga semuanya larut lalu disterilkan dalam autoklaf. Komposisi BHI (g/L): Nutrient substrate (extracts of brain and
hearth and peptones) 27,5; D-glukose 2; Sodium chloride 5; dan
disodium hydrogen phosphate 2,5.
e. Nutrient Broth (Oxoid)
Ditimbang 13 gram NB dan dilarutkan dengan 1 L aquadest dan dipanaskan hingga semuanya larut lalu disterilkan dalam autoklaf. Komposisi Nutrient Broth (g/L): Lab-lemco powder 1; Yeast extract
4.3.7 Pembuatan Larutan Uji
Pada pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram, larutan uji dibuat dengan melarutkan ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih menggunakan etanol 70 %, dengan konsentrasi ekstrak etanol daun sebesar 30 % (b/v) dan ekstrak etanol umbi sebesar 60 % (b/v). Pada penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) menggunakan metode dilusi cair, larutan uji dibuat dengan melarutkan ekstrak etanol daun dengan gliserin dan aquadest, sedangkan ekstrak umbi dengan aquadest.
4.3.8 Pembuatan Stok Bakteri
Bakteri uji diinokulasi pada medium Brucella Agar untuk bakteri P. acnes sedangkan medium MHA untuk S. aureus dan S. epidermidis dengan cara menggoreskan bakteri menggunakan jarum
ose pada permukaan agar, kemudian diinkubasi pada suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob untuk P. acnes sedangkan untuk S. aureus dan S. epidermidis pada suhu 37 0C selama 24 jam dalam kondisi aerob.
4.3.9 Pembuatan Suspensi Bakteri
4.3.10 Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih terhadap P. acnes, S. aureus dan S. epidermidis dilakukan dengan metode difusi menggunakan kertas cakram. Kertas cakram yang digunakan dibuat dari kertas whatman no.52 dengan diameter lingkaran 5.5 mm.
Medium Brucella Agar untuk bakteri P. acnes dan medium MHA untuk S. aureus dan S. epidermidis yang masih berbentuk cairan dituang ke dalam cawan petri steril ± 20 ml dan dibiarkan memadat. Setelah agar memadat, suspensi bakteri sebanyak 100 µl disebar ke permukaan agar secara merata dengan menggunakan lidi kapas steril.
4.3.11 Penetapan Potensi Relatif
Pengujian daya hambat klindamisin HCl dilakukan menggunakan metode difusi cakram seperti pada prosedur 4.3.10. Konsentrasi klindamisin HCl yang diujikan untuk P. acnes adalah 250 µg/ml; 200 µg/ml; 150 µg/ml; 100 µg/ml; dan 50 µg/ml. Sedangkan
konsentrasi klindamisin HCl yang diujikan untuk S. aureus dan S. epidermidis adalah 20 µg/ml ; 15 µg/ml; 10 µg/ml; 5 µg/ml; dan 1 µg/ml. Sebagai kontrol negatif digunakan aquadest. Pengujian
dilakukan 3 kali pengulangan.
Penetapan potensi relatif ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih dibandingkan dengan klindamisin HCl dilakukan dengan cara memplotkan diameter hambat ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih kedalam persamaan garis hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dan daerah hambat. Potensi relatif diukur dengan membandingkan konsentrasi ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang memberikan diameter hambat yang sama pada daya hambat klindamisin HCl dengan konsentrasi ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang digunakan.
4.3.12 Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
dan S. epidermidis) dengan konsentrasi larutan uji 10; 5; 2,5; 1,25; 0,625 dan 0,3125 mg/ml untuk ekstrak etanol daun bakung putih, dan konsentrasi larutan uji 30; 15; 7,5; 3,75; 1,875; dan 0,9375 mg/ml untuk ekstrak etanol umbi bakung putih, yang kemudian ditambahkan dengan suspensi bakteri uji sebanyak 10 µl. Kemudian diinkubasi pada
inkubator goyang (200 rpm) suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob untuk P. acnes sedangkan untuk S. aureus dan S. epidermidis pada suhu 37 0C selama 24 jam dalam kondisi aerob. Sebagai pembanding digunakan lima macam kontrol yaitu:
a. Kontrol bakteri = 1 ml medium + 10 µl suspensi bakteri b. Kontrol negatif = 0,5 ml medium + 0,5 ml pelarut
c. Kontrol pelarut = 0,5 ml medium + 0,5 ml pelarut + 10 µl suspensi bakteri
d. Kontrol medium = 1 ml medium
e. Kontrol ekstrak = 0.5 ml media + 0.5 ml ekstrak
Nilai KHM dan KBM terhadap bakteri uji ditentukan setelah larutan uji tersebut ditumbuhkan kembali pada medium agar (Brucella Agar untuk P. acnes, sedangkan Agar darah untuk S. aureus dan S.
KBM dinyatakan sebagai konsentrasi terrendah ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang tidak menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri pada agar. Pengujian dilakukan 3 kali pengulangan. 4.3.13 Analisis Kebocoran Asam Nukleat dan Protein
Suspensi bakteri dari kultur murni yang telah ditumbuhkan selama 48 jam untuk P. acnes. Selanjutnya ditambahkan ekstrak etanol daun bakung putih dengan konsentrasi 0 (kontrol), 1, dan 2 KHM. Kemudian diinkubasi pada inkubator goyang (200 rpm) suhu 37 0C selama 48 jam dalam kondisi anaerob. Larutan uji disentrifus dengan kecepatan 3500 rpm selama 20 menit, kemudian dipisahkan supernatan dari endapan sel. Cairan supernatan diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV/VIS (Perkin Elmer lamda 25) pada panjang gelombang 280 dan 260 nm.
4.3.14 Analisis Kebocoran Ion Logam
Analisis kebocoran ion yang diukur adalah dalam bentuk ion K+ dan Ca2+ yang keluar dari sel bakteri akibat perlakuan dengan ekstrak etanol daun bakung putih. Sampel untuk analisis kebocoran ion logam berupa cairan supernatan yang berasal dari perlakuan pada prosedur 4.3.13. Cairan supernatan dianalisis dengan menggunakan Atomic Absoption Spectroscopy (AAS) Perkin Elmer.
4.3.15 Analisis Kerusakan Sel Menggunakan SEM (Scanning Electron Microscopy)
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1 Hasil Penelitian
a. Determinasi tumbuhan
Hasil determinasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi, LIPI - Bogor, menunjukan bahwa tumbuhan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakung putih (Crinum asiaticum L.) suku Amaryllidaceae. (lampiran 2)
b. Karakteristik ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Tabel 1. Hasil pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Karakteristik ekstrak Hasil
Daun bakung putih Umbi bakung putih Organoleptik
Bentuk Warna Bau Rasa
Ekstrak kental Coklat kehijauan Khas
Pahit
Ekstrak kental Coklat
Khas Pahit
Rendemen 12,69 % 41,24 %
c. Penapisan fitokimia ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Tabel 2. Hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih
Golongan senyawa Hasil
Daun bakung putih Umbi bakung putih
Alkaloid + +
Keterangan : (+) menunjukan reaksi positif (-) menunjukan reaksi negatif
d. Hasil uji aktivitas antibakteri
Tabel 3. Rata-rata diameter hambat dan SD hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun bakung putih
Konsentrasi (%)
Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD Propionibacterium ekstrak etanol umbi bakung putih
Konsentrasi (%)
e. Hasil penentuan potensi relatif ekstrak daun dan umbi bakung putih dibandingkan klindamisin HCl
Tabel 5. Rata-rata diameter hambat dan SD hasil uji daya hambat klindamisin HCl
Bakteri uji Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD
Propionibacterium acnes
50 3,33 ± 0,29
100 6,00 ± 0,50
150 7,50 ± 0,50
200 9,17 ± 0,29
250 14,67 ± 0,29
Staphylococcus aureus
1 0,00 ± 0,00
5 2,33 ± 0,29
10 4,67 ± 0,76
15 7,50 ± 0,50
20 10,17 ± 0,58
Staphylococcus epidermidis
1 0,00 ± 0,00
5 2,67 ± 0,29
10 5,33 ± 1,26
15 7,33 ± 0,76
Gambar 3. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan diameter hambat terhadap bakteri Propionibacterium acnes
Gambar 4. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan diameter hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 5. Kurva hubungan antara konsentrasi klindamisin HCl dengan diameter hambat terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis
Tabel 7. Hasil kesetaraan ekstrak etanol umbi 60 % terhadap klindamisin HCl
f. Hasil penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Tabel 8. Nilai KHM dan KBM ekstrak etanol daun bakung putih
Konsentrasi
Tabel 9. Nilai KHM dan KBM ekstrak etanol umbi bakung putih
Keterangan : (+) menunjukan adanya pertumbuhan (-) menunjukan tidak adanya pertumbuhan (*) KHM dan (**) KBM
g. Hasil analisis kebocoran sel
Gambar 6. Kebocoran asam nukleat dan protein pada bakteri Propionibacterium acnes
Konsentrasi ekstrak etanol daun bakung putih
absorbansi pada 260 nm
h. Hasil analisis kebocoran ion logam
Gambar 7. Kebocoran ion K+ dan Ca2+ pada bakteri Propionibacterium acnes
i. Hasil Scanning Electron Microscopy (SEM)
(a) (b)
Gambar 8. (a) Morfologi sel normal Propionibacterium acnes (15.000 x);
(b) Pengaruh ekstrak daun bakung putih pada konsentrasi 2 KHM terhadap morfologi sel Propionibacterium acnes (15.000 x)
6.55
Konsentrasi ekstrak etanol daun bakung putih
ion Ca
5.2 Pembahasan
Proses ekstraksi senyawa kimia yang terkandung dalam tumbuhan bakung putih, dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut organik. Dalam hal ini pelarut organik yang digunakan adalah etanol 70 %. Pemilihan etanol sebagai pelarut didasarkan pada sifat selektifnya dan dapat bercampur dengan air dengan segala perbandingan. Selain keekonomisan etanol, pemilihan etanol juga dikarenakan kemampuannya dalam mengekstrak sebagian besar senyawa kimia yang terkandung dalam simplisia, seperti alkaloida, minyak atsiri, glikosida, kurkumin, kumarin, antrakinon, flavonoid, steroid, damar dan klorofil sedangkan lemak, malam, tannin dan saponin hanya sedikit larut (Depkes RI, 1986). Penggunaan metode maserasi didasarkan kepraktisannya dalam pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Akan tetapi kelemahan dalam metode ini yaitu pengerjaannya yang membutuhkan waktu lama.
Proses maserasi terhadap daun dan umbi masing-masing dilakukan selama 5 hari, dan selama perendaman dilakukan pengadukan beberapa kali agar senyawa-senyawa yang terdapat pada simplisia dapat larut dengan baik. Ekstrak cair yang diperoleh kemudian diuapkan pelarutnya dengan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 50 0C, sampai diperoleh ekstrak yang kental. Karakteristik ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang diperoleh dapat dilihat pada tabel 1.
yang dilakukan terhadap ekstrak etanol daun bakung putih diidentifikasi adanya alkaloid, tanin, flavonoid, steroid dan triterpenoid, sedangkan pada ekstrak etanol umbi bakung putih diidentifikasi adanya alkaloid, tanin, steroid dan triterpenoid (tabel 2).
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi cakram. Hal ini dilakukan sebagai pengujian pendahuluan untuk ekstrak uji terhadap bakteri, sehingga dapat menggambarkan kemampuan ekstrak uji dalam hal penghambatan pertumbuahan pada masing-masing bakteri. Pembuatan larutan uji ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih dilarutkan dalam etanol 70 %. Penggunaan etanol 70 % dikarenakan sukar terlarutnya ekstrak jika dilarutkan dalam aquadest, terutama untuk ekstrak etanol daun. Hal ini diduga karena adanya senyawa yang bersifat semi polar dan atau non polar yang ikut terekstraksi dengan etanol pada saat pembuatan ekstrak. Dugaan ini dikuatkan oleh hasil penapisan fitokimia terhadap ekstrak uji yang menunjukan adanya senyawa yang bersifat semi polar (alkaloid) dan non polar (steroid dan triterpenoid).
Hasil uji daya hambat dengan pembanding klindamisin pada ketiga bakteri uji, umumnya ketiga bakteri tersebut dapat dihambat pertumbuhannya oleh klindamisin. Konsentrasi terrendah yaitu 5 µg/ml klindamisin masih dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan S. epidermidis dengan masing-masing diameter hambatan rata-rata 2,33 mm dan 2,67 mm. Sedangkan pada bakteri P. acnes, konsentrasi klindamisin harus ditingkatkan dan mulai dari konsentrasi terkecil yaitu 50 µg/ml yang memberikan diameter hambatan rata-rata 3,33 mm. Peningkatan konsentrasi uji dikarenakan pada konsentrasi 20 µg/ml untuk bakteri P. acnes belum menunjukan diameter
hambatan sedangkan untuk bakteri lainnya sudah memberikan diameter hambatan. Bakteri P. acnes yang digunakan pada penelitian, merupakan koleksi bakteri Laboratorium Mikrobiologi Klinis, FKUI yang diperoleh dari hasil isolasi bakteri pada pasien berjerawat. Bakteri ini diduga telah mengalami resistensi antibiotik terhadap klindamisin. Hal ini terjadi dikarenakan pasien tersebut diduga telah menggunakan antibiotik klindamisin untuk penyembuhan jerawatnya.
meningkatnya konsentrasi uji. Hal ini disebabkan karena meningkatnya senyawa yang bersifat antibakteri pada larutan uji tersebut.
Penentuan potensi relatif dilakukan dengan cara memplotkan diameter hambatan ekstrak daun dan umbi bakung putih kedalam persamaan garis masing-masing bakteri uji, kemudian ditentukan nilai konsentrasi ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih yang memberikan diameter hambatan yang sama dengan klindamisin. Hasil kesetaraan ekstrak dan potensi relatif dapat dilihat pada tabel 6 dan 7. Potensi penghambatan terbaik untuk ekstrak etanol daun bakung putih ditunjukkan oleh bakteri P. acnes dengan nilai potensi relatif 1 : 4.969, artinya potensi penghambatan antibakteri klindamisin setara dengan 4.969 kali ekstrak etanol daun bakung putih. Sedangkan potensi penghambatan terbaik untuk ekstrak etanol umbi bakung putih ditunjukkan oleh bakteri P. acnes dengan nilai potensi relatif 1 : 3.671, artinya potensi penghambatan antibakteri klindamisin setara dengan 3.670 kali ekstrak etanol umbi bakung putih.
menghilangkan keraguan yang ditimbulkan akibat keruhnya larutan uji karena ekstrak dan atau mikroba lain selain bakteri uji.
Penghambatan pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibakteri dapat dinyatakan dengan nilai KHM dan KBM. Nilai KHM dan KBM senyawa antibakteri dari sebuah ekstrak berbeda-beda bergantung pada jenis bakteri dan senyawa antibakteri yang terkandung didalammya. Nilai KHM dan KBM untuk ekstrak etanol daun bakung putih berkisar antara 1,25 – 10 mg/ml tergantung jenis bakteri uji (tabel 8), sedangkan nilai KHM dan KBM untuk ekstrak etanol umbi bakung putih berkisar antara 3,75 – 15 mg/ml tergantung jenis bakteri uji (tabel 9). Hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan bahwa semakin kecil konsentrasi uji, yang berarti semakin sedikit jumlah zat aktif yang terlarut di dalam ekstrak, maka semakin rendah kemampuan bahan uji dalam menghambat pertumbuhan suatu bakteri. Nilai KHM dan KBM terrendah untuk ekstrak etanol daun bakung putih ditunjukkan oleh P.acnes dengan nilai berturut-turut 1,25 mg/ml dan 2,5 mg/ml, disamping itu nilai KHM dan KBM terrendah untuk ekstrak etanol umbi bakung putih ditunjukkan oleh S. epidermidis dengan nilai berturut-turut 3,75 mg/ml dan 7,5 mg/ml.
laju difusi senyawa antibakteri pada jenis media yang berbeda. Menurut Tabak et al., (1996) yang telah membandingkan pengukuran aktivitas antibakteri menggunakan medium padat dan medium cair untuk melihat pengaruh ekstrak thyme pada bakteri Helicobacter pylori, menunjukan bahwa penghambatan pada konsentrasi ekstrak 3,5 mg/ml dengan menggunakan medium padat masih dapat teramati pertumbuhannya, sedangkan menggunakan medium cair sudah membunuh semua bakteri yang ada.
Penelitian lebih lanjut terhadap pengaruh yang diberikan ekstrak teraktif pada bakteri dilakukan dengan menganalisis kebocoran sel. Dalam hal ini bakteri uji yang digunakan adalah P. acnes. Pemilihan bakteri P. acnes untuk dilanjutkan pada tahap analisis kebocoran sel dikarenakan bakteri ini paling sensitif jika dibandingkan dengan bakteri lainnya terhadap ekstrak teraktif yaitu ekstrak etanol daun bakung putih.
kebocoran akibat rusaknya dinding sel atau terjadinya perubahan pada permeabilitas membran sel sehingga menyebabkan bakteri mati.
Hasil absorbansi kandungan total asam nukleat (260 nm) dan kandungan total protein (280 nm) di luar sel dapat dilihat pada gambar 6. Dalam hal ini, peningkatan absorbansi pada panjang gelombang 260 nm lebih besar dibandingkan pada 280 nm, yang artinya sel bakteri mengalami kebocoran senyawa asam nukleatnya atau dengan kata lain materi genetiknya. Akibat dari meningkatnya asam nukleat di luar sel bakteri, mengindikasikan ekstrak etanol daun bakung putih dapat mempengaruhi materi genetik bakteri sehingga diduga mengganggu pada proses pembelahan selnya. Menurut Kim et al. (1995) diacu dari Naufalin (2005), akibat dari gangguan terhadap asam nukleat, akan menginaktifkan atau merusak materi genetik sehingga mengganggu proses pembelahan sel.
adanya kerusakan membran sitoplasma adalah terjadinya kebocoran kandungan sitoplasma seperti ion K+, dan peningkatan K+ diluar sel merupakan tanda kerusakan permeabilitas membran (Cox et al., 2001). Menurut Suliantari (2009) ion Ca2+ berfungsi untuk menjaga kestabilan dinding bakteri dan dengan adanya keluarnya ion tersebut dari sel maka kestabilan dinding sel akan terganggu yang selanjutnya dapat mengakibatkan kematian bakteri.
Hasil penelitian menunjukkan dengan meningkatnya konsentrasi bahan uji yang dikontakkan terhadap bakteri maka keluarnya asam nukleat, protein dan ion logam juga meningkat. Hal ini sejalan dengan yang dikatakan Suliantari (2009), bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak yang dikontakkan terhadap bakteri, maka kebocoran asam nukleat, protein sel, ion logam serta perubahan morfologi pada bakteri juga semakin meningkat.
sitoplasma keluar dan tonjolan ini biasanya muncul pada daerah yang dilemahkan oleh senyawa antibakteri. Pada konsentrasi ini (2 KHM) bakteri telah mengalami kerusakan pada dinding dan membran sel. Hal ini didukung dengan adanya asam nukleat dan protein yang keluar dan dapat terabsorpsi pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm dan ion Ca2+ dan K+ diluar sel bakteri.
Secara keseluruhan diduga ekstrak etanol daun dapat mempengaruhi permeabilitas membran dan dinding sel bakteri sehingga menyebabkan keluarnya asam nukleat dan protein dari sel bakteri sehingga proses metabolisme bakteri terganggu yang akhirnya menyebabkan sel tersebut mati. Hal ini dikarenakan adanya senyawa aktif antibakteri dalam ekstrak etanol daun bakung putih.
Golongan senyawa tanin yang terdapat pada ekstrak etanol daun bakung putih diduga yang bertanggungjawab terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri. Tanin mempunyai sifat sebagai pengelat yang diduga dapat mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri. Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terhambat atau bahkan mati (Ajizah, 2004).
yang dapat mencapai 5 sampai 20 atm. Tekanan ini cukup untuk memecah sel apabila dinding sel dirusak (Brooks et al., 2005).
Golongan senyawa triterpenoid yang terdapat pada ekstrak etanol daun bakung putih juga diduga ikut berperan. Menurut Cowan et al. (1999) mekanisme penghambatan dari senyawa golongan terpen tidak diketahui secara pasti, akan tetapi diduga terlibat dalam kerusakan membran oleh gugus lipofiliknya.
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
6.1 Kesimpulan
a. Ekstrak etanol daun dan umbi bakung putih memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.acnes, S.aureus dan S. epidermidis.
b. Kesetaraan konsentrasi ekstrak etanol daun bakung putih terhadap bakteri P. acnes, S. aureus dan S. epidermidis dengan konsentrasi 30 % secara
berturut-turut sama dengan klindamisin HCl konsentrasi 60,37µg/ml; 3,73 µg/ml; dan 6,21 µg/ml. Sedangkan kesetaraan konsentrasi ekstrak etanol
umbi bakung putih terhadap bakteri P. acnes, S. aureus dan S. epidermidis dengan konsentrasi 60 % secara berturut-turut sama dengan klindamisin HCl konsentrasi 163,46 µg/ml; 7,82 µg/ml; dan 5,69 µg/ml.
c. Nilai KHM dan KBM ekstrak etanol daun masing-masing untuk P. acnes (1,25 dan 2,5 mg/ml), S. aureus (5 dan 10 mg/ml) dan S. epidermidis ( 2,5 dan 5 mg/ml). Sedangkan nilai KHM dan KBM ekstrak etanol umbi masing-masing untuk P. acnes (7,5 dan 15 mg/ml), S. aureus (7,5 dan 15 mg/ml) dan S. epidermidis (3,75 dan 7,5 mg/ml).
6.2 Saran
a. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memisahkan masing-masing senyawa penyusun ekstrak etanol bakung putih dan menentukan aktivitas antibakteri dari masing-masing senyawa tersebut.
DAFTAR PUSTAKA
Ajizah A. (2004). Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L. Bioscientiae, 1(1): 31-38.
Anonim. (2001). British Pharmacopoeia. Published on The Recommendation of The Medicines Commission. The Stationery Office, London.
Anonim. (2010). Ecology and Evolutionary Biology Plant Growth Facilitie, University of Connecticut. http://titanarum.uconn.edu/198500560.html. Diakses 21 Maret 2010 pukul 17.41
Athikomkulchai, S.; Watthanachaiyingcharoen, R.; Tunvichien, S.; Vayumhasuwan, P.; Karnsomkiet, P.; Sae-Jong, P. & Ruangrungsi, N. (2008). The Development of Anti-Acne Products from Eucalyptus globulus and Psidium guajava Oil. J Health Res, 22(3): 109-113.
Brooks, G.F.; Butel, J.S & Morse, S.A. (2005). Mikrobiologi Kedokteran. Penerjemah Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Salemba Medika, Jakarta.
Brunton, L.L.; Lazo, J.S. & Parker, K.L. (2006). Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Ed. The Mcgraw-Hill Companie, United States of America.
Burkhart, C.G.; Burkhart, C.N. & Lehmann, P.F. (1999). Acne: A Review of Immunologic and Microbiologic Factors. Postgrad Med J, 75: 328– 331.
Chomnawang, M.T.; Surassmo, S.; Nukoolkarn, V.S. & Gritsanapan, W. (2005). Antimicrobial Effects of Thai Medicinal Plants Against Acne-Inducing Bacteria. Journal of Ethnopharmacol, 10: 303-330.
Cowan, M.M. (1999). Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews, 12(4): 564-582.
Cox, S.D.; Mann, C.M.; Markham, J.L.; Gustafson, J.E.; Warmington, J.R. & Wyllie, S.G. (2001). Determining the Antimicrobial Actions of Tea Tree Oil. Molecules 6; 87-91.
Departemen Kesehatan RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
--- . (1979). Farmakope Indonesia, Edisi Ketiga. Dirjen POM, Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Ganiswarna, S.G. dkk. (1995). Farmakologi dan Terapi, Edisi IV. Gaya Baru, Jakarta.
Han, S.M.; Lee, K.G.; Yeo, J.H.; Baek, H.J. & Park, K. (2010). Antibacterial and Anti-Inflammatory Effects of Honeybee (Apis Mellifera) Venom Against Acne-Inducing Bacteria, Journal of Medicinal Plants Research, 4(6): 459-464.
Hargono, Dj.; Farouq; Santoso, S.O.; Mardiaty & Djubaedah, E. (1985). Tanaman Obat Indonesia, Jilid I. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
--- .(1985). Tanaman Obat Indonesia, Jilid II. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Heyne, K. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia. Diterjemahkan oleh Badan Litbang Kehutanan. Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta.
Katzung, B.G. (1997). Farmakologi Dasar dan Klinik, Edisi VI. Alih Bahasa, Staf Dosen Farmakologi Fakultas Kedokteran UNSRI. EGC, Jakarta. Khan, Z.Z.; Assi, M. & Moore, T.A. (2009). Recurrent Epidural Abscess Caused
by Propionibacterium acnes. Kansas Journal of Medicine: 92-95.
Kim, S.C.; Kang, J.I.; Kim, M.K.; Hyun, J.H.; Boo, H.J.; Park, D.B.; Lee, Application as a Cosmeceutical Ingredient. J Cosmet Sci, 59(5): 419-430.
Kim, Y.H.; Park, E.J.; Park, M.H.; Badarch, U.; Woldemichael, G.M. & Beutler, J.A. (2006). Crinamine from Crinum Asiaticum var. japonicum Inhibits Hypoxia Inducible Factor-1 Activity But Not Activity of Hypoxia Inducible Factor-2. Biol Pharm Bul, 29(10): 2140-2142.
