UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,
SEMI POLAR, DAN NON POLAR DAUN SIRSAK (
Annonamuricata
L.) TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Oleh:
GESTAN PUPUT HARLINDA
K100130027
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
i
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,
SEMI POLAR DAN NON POLAR DAUN SIRSAK (
Annonamuricata
L.) TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat
Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
GESTAN PUPUT HARLINDA
K100130027
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat serta hidayah-Nya penulis mampu menyelesaikan skripsi yang berjudul “UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR, SEMI POLAR, DAN NON POLAR DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP SEL HeLa”.
Penyusunan penelitian ini dimaksudkan untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Dalam kesempatan ini, perkenankan penulis untuk menyampaikan rasa terimakasih dan penghargaan kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2. Ibu Anita Sukmawati, Ph.D., Apt. selaku pembimbing akademik. 3. Ibu Maryati, Ph.D., Apt. selaku pembimbing.
4. Ibu Ratna Yuliani, M.Biotech.St. selaku penguji 1 dan Bapak Andi Suhendi, M.Sc., Apt. selaku penguji 2.
5. Bapak dan Ibuku tercinta yang senantiasa membimbing dan mendoakan keberhasilanku dalam menyelesaikan tugas akhir ini.
Wassalamu’alaikum Wr. Wb
Surakarta, 29 Desember 2016
v
BAB I. PENDAHULUAN ... 1
A.Latar Belakang Masalah ... 1
B.Rumusan Masalah ... 2
C.Tujuan Penelitian ... 2
D.Tinjauan Pustaka ... 3
1. Tumbuhan sirsak (Annona muricata L.) ... 3
2. Kanker serviks ... 4
3. Sel HeLa ... 4
E.Landasan Teori ... 5
F. Hipotesis ... 6
BAB II. METODE PENELITIAN ... 7
A.Kategori dan Rancangan Penelitian ... 7
B.Variabel Penelitian ... 7
C.Alat dan Bahan ... 7
1. Alat ... 7
2. Bahan... 7
D.Tempat Penelitian... 8
E.Jalannya Penelitian ... 8
1. Pengumpulan Bahan... 8
2. Pembuatan Serbuk ... 8
vi
4. Optimasi Fase Gerak ... 9
5. Fraksinasi ... 9
6. Uji Sitotoksik ... 10
7. Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ... 12
F. Analisa Data ... 13
1. Uji Sitotoksik ... 13
2. Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ... 14
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN... 15
A.Ekstraksi ... 15
B.Fraksinasi ... 15
C.Uji Sitotoksik ... 17
D.Uji Kromatografi Lapis Tipis ... 22
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ... 24
A.KESIMPULAN ... 24
B.SARAN ... 24
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Skema uji sitotoksik ekstrak etanol, fraksi polar, semipolar, nonpolar daun sirsak ... 12 Gambar 2. Profil KLT ekstrak etanol daun sirsak pada UV 254 nm dengan fase
gerak n-heksan:etil asetat (5:5) (A), (6:4) (B), (7:3) (C), (8:2) (D), (9:1) (E) ... 16 Gambar 3. Profil KLT ekstrak etanol daun sirsak pada UV 366 nm dengan fase
gerak n-heksan:etil asetat (5:5) (A), (6:4) (B), (7:3) (C), (8:2) (D), (9:1) (E) ... 16 Gambar 4. Profil KLT penggolongan fraksi ekstrak etanol daun sirsak dilihat
pada sinar UV 254 nm (A) dan 366 nm (B) ... 17 Gambar 5. Pengaruh perlakuan 500 g/mL ekstrak etanol (B) terhadap
morfologi sel HeLa dibandingkan dengan sel tanpa perlakuan (A) dan sel setelah diberi reagen MTT (C) ... 18 Gambar 6. Pengaruh perlakuan ekstrak etanol daun sirsak terhadap sel HeLa .... 19 Gambar 7. Pengaruh perlakuan 500 g/mL fraksi polar (A), semi polar (B), dan
non polar (C) daun sirsak terhadap morfologi sel HeLa dibandingkan dengan sel tanpa perlakuan (D). Anak panah menunjukkan sel yang hidup. Pengaruh perlakuan fraksi polar, semi polar dan non polar daun sirsak terhadap sel HeLa menunjukkan tingkat kematian sel rendah. ... 21 Gambar 8. Profil KLT ekstrak etanol daun sirsak dengan fase gerak
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Reagen deteksi senyawa... 14
Tabel 2. Rendemen hasil maserasi dan remasi ekstrak etanol daun sirsak ... 15
Tabel 3. Rendemen pada fraksi polar, semi polar, dan non polar daun sirsak ... 17
Tabel 4. Pengaruh perlakuan ekstrak etanol daun sirsak terhadap sel HeLa ... 18
Tabel 5. Pengaruh perlakuan fraksi polar daun sirsak terhadap sel HeLa ... 20
Tabel 6. Pengaruh perlakuan fraksi semi polar daun sirsak terhadap sel HeLa .... 20
Tabel 7. Pengaruh perlakuan fraksi non polar daun sirsak terhadap sel HeLa ... 21
Tabel 8. Deteksi golongan senyawa ekstrak etanol daun sirsak dengan berbagai pereaksi semprot ... 22
Tabel 9. Absorbansi kontrol sel dan media ... 36
Tabel 10. Absorbansi kontrol pelarut ... 36
Tabel 11. Absorbansi ekstrak etanol ... 36
Tabel 12. Absorbansi fraksi polar ... 36
Tabel 13. Absorbansi fraksi semi polar... 37
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Perhitungan hasil rendemen... 29 Lampiran 2. Perhitungan kepadatan sel HeLa ... 32 Lampiran 3. Perhitungan seri konsentrasi ekstrak etanol, fraksi polar, semi polar
dan non polar daun sirsak ... 33 Lampiran 4. Data uji sitotoksik dengan Metode MTT pada 96-well plate
menggunakan ELISA reader ... 35 Lampiran 5. Data uji sitotoksik ekstrak etanol, fraksi polar, semi polar dan non
polar daun sirsak (Annona Muricata l.) terhadap sel HeLa ... 36 Lampiran 6. Perhitungan persentase sel hidup akibat perlakuan dengan ekstrak
etanol daun sirsak ... 38 Lampiran 7. Perhitungan persentase sel hidup akibat perlakuan dengan fraksi
polar daun sirsak ... 40 Lampiran 8. Perhitungan persentase sel hidup akibat perlakuan dengan fraksi
x
DAFTAR SINGKATAN
DMSO : Dimethyl Sulfoxide
ELISA : Enzim Linked Immunosorbent Assay
FBS : Fetal Bovine Serum
HCl : Hidrogen Chlorida
HPV : Human Papilloma Virus
IC : Inhibitory Concentration
KCV : Kromatografi Cair Vakum
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
Rb : Retinoblastoma
RPMI : Roswell Park Memorial Institue
xi
ABSTRAK
Berdasarkan data yang ada, kanker merupakan penyebab kematian di dunia. Oleh karena itu perlu dilakukan eksplorasi bahan alam untuk pengobatan kanker. Salah satu tanaman yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai antikanker adalah daun sirsak (Annona muricata L.). Kandungan asetogenin pada daun sirsak memiliki aktivitas sitotoksik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak etanol, fraksi polar, semi polar dan non polar daun sirsak terhadap sel HeLa, serta mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak atau fraksi yang paling aktif.
Pada penelitian ini ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Fraksinasi dilakukan dengan metode Kromatografi Cair Vakum (KCV) dengan fase gerak n-heksan:etil asetat (5:5, 6:4, 6,5:3,5, 7:3, 8:2). Uji sitotoksik menggunakan metode MTT assay dengan seri konsentrasi 500; 250; 125 dan 62,5 g/mL. Untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak atau fraksi yang paling aktif digunakan uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan disemprot dengan reagen semprot Dragendorff, FeCl3, sitroborat
dan anisaldehid.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirsak memiliki aktivitas sitotoksik moderat terhadap sel HeLa dengan IC50 286,283 g/mL. Hasil
uji KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirsak mengandung alkaloid, polifenol, flavonoid dan saponin.
xii
ABSTRACT
According to the existing data, cancer is the leading cause death in the world. Therefore need to be explorate natural substances for cancer medication. One of potential plant is soursop leaf (Annona muricata L.). Acetogenin substance in soursop leaf has cytotoxic activity. The purpose of this research is to know the cytotoxic effect of etanol extract, polar, semipolar and non polar fraction of soursop leaf to HeLa cell line, and to know the compound in the extract or fraction that most active.
In this research the extraction is use maceration method with etanol 96% as solvent. Fractionationis use vacuum liquid chromatography (VLC) method with n-heksan : etil asetat as mobile phase (5:5, 6:4, 6,5:3,5, 7:3, 8:2). The cytotoxic test was conducted by MTT assay with concentration 500, 250, 125, and 62,5 µ g/mL. To determine the class of compounds that contained in extracts or fractions of the most active is use Thin Layer Chromatography (TLC).
Result showed that ethanol extract had moderate cytotoxic effects on HeLa cell line with IC50 286,283 μg/mL. Substance compounds in etanol extract of
soursop leaf are alkaloid, polivenol, flavonoid, and saponin.
