PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C TERHADAP GAMBARAN HISTOLOGIS HATI MENCIT (MUS MUSCULUS L)
YANG DIPAPARI MONOSODIUM GLUTAMATE
TESIS
OLEH:
LASMIJAN SIMANJUNTAK 077008003/BM
PROGRAM MAGISTER (S2) ILMU BIOMEDIK FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN
PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C TERHADAP GAMBARAN HISTOLOGIS HATI MENCIT (MUS MUSCULUS L) YANG DIPAPARI
MONOSODIUM GLUTAMA
TESIS
Untuk memperoleh Gelar Magister Biomedik
Dalam Program Magister (S2) Ilmu Biomedik Pada Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara
OLEH:
LASMIJAN SIMANJUNTAK 077008003/BM
PROGRAM MAGISTER (S2) ILMU BIOMEDIK FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN
Judul : PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C TERHADAP GAMBARAN HISTOLOGIS HATI MENCIT (MUS- MUSCULUS L) YANG DIPAPARI MONOSODIUM GLUTAMATE
Nama Mahasiswa : Lasmijan Simanjuntak
NIM : 077008003
Program Studi : Biomedik
Menyetujui Komisi Pembimbing
(Prof. Dr. Drs. Herbert Sipahutar, MS, MSc) (dr.Delyuzar,Sp.PA (K)
Ketua Anggota
Ketua Program Studi Dekan
(dr. Yahwardiah Siregar, PhD) (Prof. Dr. Gontar A. Siregar, SpPD, KGEH)
Telah diuji pada
Tanggal 21 September 2010
PANITIA PENGUJI TESIS
Ketua : Prof. Dr. Drs. Herbert Sipahutar, MS, MSc Anggota : 1. dr.Delyuzar,Sp.PA (K)
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam tesis ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau terbitan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebut dalam daftar pustaka.
Medan, Septembar 2010
ABSTRAK
Monosodium glutamate (MSG) adalah garam natrium dari asam glutamat (glutamic acid), berbentuk serbuk kristal murni yang dijual bebas dipasar dan telah dikonsumsi sejak tahun 1908 secara luas di seluruh dunia sebagai penambah rasa makanan, penyedap masakan untuk merangsang selera makan. MSG dalam tubuh cepat dimetabolisme sebagai sumber energi. Efek MSG dilaporkan dapat menyebabkan MSG Symptom- complek seperti rasa terbakar dan kebas di belakang leher, lengan, dada, wajah, pundak, nyeri didada, sakit kepala, mual, denyut jantung meningkat, bronchospasme, menyebabkan hiperlipidemia, hiperglikemia, dan meningkatkan oksidatif stress. Efek toksiknya terhadap hati dilaporkan meningkatkan peroxidasi lipid di dalam mikrosom hati, kerusakan hepatosit, inti sel hati menjadi kabur, dilatasi vena central, nekrosis centrilobular, atrofi serta degenerasi sel-sel hati. Pemberian vitamin C secara oral diusulkan sebagai keuntungan potensial yang dapat mengurangi peningkatan peroksidasi lipid pada jaringan hati sebagai anti oksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh MSG terhadap tingkat kerusakan sel jaringan hati secara degenerasi dan nekrosis dan pengaruh perlindungan vitamin C terhadap kerusakan tersebut. Penelitian ini adalah eksperimental mikroskopis, terdiri dari 5 kelompok, kelompok 1 diberi larutan NaCl 0,9 % sebagai kelompok kontrol. Kelompok 2, 3, 4, dan 5 diberi MSG 4 mg/g berat badan secara intrapertonial dan Vitamin C 0,2 mg/g berat badan secara oral selama 30 hari. Setelah 30 hari perlakuan, jaringan hati mencit diambil dan dilakukan pemeriksaan histopatologi pada 5 lapang pandang pada sediaan. Dari hasil pemeriksaan histopatologi tersebut dapat disimpulkan bahwa Pengaruh pemberian vitamin C terhadap degeneratif lebih besar dari pengaruh pemberian vitamin C terhadap nekrosis hati mencit yakni 67.8% (Skala 3) berbanding 16.2% (Skala 1).
ABSTRAK
Monosodium glutamate (MSG) is natrium salt from glutamic acid, essential crystal powder form selled legally in market and has been consumed since 1908 in the world imperially as extra taste, addictive to whet appetite. MSG is metabolismed quickly in the body as source energy. The effect of MSG reported can cause MSG Sympyom – complek like burning and stiff behind neck, arm, chest, face, shoulder, ache in chest, headache, quesy, heartbeat increases, bronchospasme, cause hiperlipidemia, hiperglikemia, and increases oxydative stress. The toxic effect of liver reported increases lipid peroxydation in liver microcos, hepatosit damage, liver cell nucleic blurred, dilatation of central vena, centribular necrosist, atrofi and degeneration of liver cells. Giving Vitamin C orally is suggested as potential benefit which can decrease the increase of lipid peroxydation in liver net as anti oxydant. This research is aimed to know the impact of MSG to the damage range of liver cell as degeneration and necrosist and effect of Vitamin C protection to that damage. This research is microscopic experiment, consist of 5 groups, group 1 is given NaCl 0.9 % liquid as control group. Group 2, 3, 4 and 5 is given MSG 4 mg/g weight by intrapertonial and Vitamin C 0.2 mg/g weight orrally for 30 days. After 30 days doing, the liver net of rat is taken and done the hispatology check on 5 view fields each serving. From that hispatology check, can conclude that the impact of giving Vitamin C for degenerative is bigger than the impact of giving Vitamin C for microsist rat liver, it is 67.8 % (scale 3) compare 16.2% (scale 1).
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Kuasa atas
berkatNya penulis dapat menyelesaikan tesis dengan judul “ Pengaruh
Pemberian Vitamin C Terhadap Gambaran Histologis Hati Mencit (Mus-
Musculus L) Yang Dipapari Monosodium Glutamate” sebagai salah satu syarat
untuk mencapai gelar Magister Biomedik pada Program Magister (S2) Ilmu
Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
Selama proses penulisan tesis ini penulis memperoleh banyak dukungan
dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dalam kesempatan ini penulis
ingin mengucapkan rasa terima kasih kepada :
1. Bapak Prof. Dr. Drs. Herbert Sipahutar, MS, MSc, yang telah bersedia
meluangkan waktu menjadi ketua komisi pembimbing dan memberikan
masukan serta saran selama menyusun tesis ini.
2. Bapak dr.Delyuzar,Sp.PA.(K), yang telah bersedia menyediakan waktu menjadi
anggota pembimbing dan memberikan masukan serta saran dalam menyusun
tesis ini.
3. Ibu dr.Yahwardiah Siregar,PhD, selaku Ketua Program Magister (S2) Ilmu
Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, yang turut
mendukung dan memberikan masukan dalam tesis ini.
4. Ibu Prof. Em. Dr. Yasmeini Yazir, yang telah bersedia meluangkan waktu
5. Bapak Prof. dr. Gusbakti,M.Sc, yang telah bersedia meluangkan waktu sebagai
pembanding kedua dalam seminar tesis.
6. Ibu Bidan R. Saragih Amk, AmKeb, dan ketiga putra - putri penulis yang selalu
berdoa dan memberikan motivasi dan dukungan, semangat dan cinta kasih
yang tulus dari mereka membuat penulis lebih bersemangat selama mengikuti
pendidikan program magister, hingga akhir tesis ini.
7. Buat teman – teman seangkatan di Program Magister (S2) Ilmu Biomedik
Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, terima kasih atas kerjasama
dan saling mengingatkan selama proses penulisan tesis ini.
Semoga segenap bantuan, bimbingan dan arahan yang telah diberikan
kepada penulis mendapat imbalan yang setimpal dari Tuhan Yang Maha
Memberi. Penulis dengan senang hati akan menerima masukan dan kritikan
untuk perbaikan tesis ini. Harapan penulis, tesis ini dapat bermanfaat bagi
pembaca serta bagi peningkatan pengetahuan dan pengembangan ilmu
biomedik.
Medan, September 2010
Penulis
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL... HALAMAN PENGESAHAN... HALAMAN PERNYATAAN... ABSTRAK... KATA PENGANTAR...………..
DAFTAR ISI………
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang………..
1.2.Perumusan Masalah………..
1.3.Landasan Teori……….
1.4.Tujuan Penelitian
1.4.1. Tujuan Umum...
1.4.2. Tujuan Khusus...
1.5.Hipotesis...
1.6.Manfaat Penelitian...
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Monosodium Glutamate (MSG)
2.1.1. Kimia MSG...
2.1.2. Metabolisme MSG...
2.1.3. Efek Biologis MSG...
2.1.4. Toksisitas MSG...
2.2. Asam Askorbat (Vitamin C)
2.2.1. Manfaat Vitamin C...
2.2.2. Sumber-sumber Vitamin C...
2.3. Fisiologi Hati
2.3.1. Histologi hati...
2.3.2. Degeneratif sel hati...
2.3.3. Nekrosis sel Hati... ...
BAB III METODE PENELITIAN
3.1. Tempat dan Waktu Penelitian...
3.2. Bahan dan alat Penelitian...
3.3. Disain Penelitian...
3.4. Pelaksanaan Penelitian dan pengamatan...
3.4.1. Pemberian perlakuan...
3.4.2. Pembuatan sediaan Histologi hati...
3.4.3. Pengamatan...
3.5. Analisis Data…...……….………..
BAB IV ANALISIS DAN PEMBAHASAN
4.1. Analisis data penelitian…...……….
4.2. Pembahasan………...
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan ………
ABSTRAK
Monosodium glutamate (MSG) adalah garam natrium dari asam glutamat (glutamic acid), berbentuk serbuk kristal murni yang dijual bebas dipasar dan telah dikonsumsi sejak tahun 1908 secara luas di seluruh dunia sebagai penambah rasa makanan, penyedap masakan untuk merangsang selera makan. MSG dalam tubuh cepat dimetabolisme sebagai sumber energi. Efek MSG dilaporkan dapat menyebabkan MSG Symptom- complek seperti rasa terbakar dan kebas di belakang leher, lengan, dada, wajah, pundak, nyeri didada, sakit kepala, mual, denyut jantung meningkat, bronchospasme, menyebabkan hiperlipidemia, hiperglikemia, dan meningkatkan oksidatif stress. Efek toksiknya terhadap hati dilaporkan meningkatkan peroxidasi lipid di dalam mikrosom hati, kerusakan hepatosit, inti sel hati menjadi kabur, dilatasi vena central, nekrosis centrilobular, atrofi serta degenerasi sel-sel hati. Pemberian vitamin C secara oral diusulkan sebagai keuntungan potensial yang dapat mengurangi peningkatan peroksidasi lipid pada jaringan hati sebagai anti oksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh MSG terhadap tingkat kerusakan sel jaringan hati secara degenerasi dan nekrosis dan pengaruh perlindungan vitamin C terhadap kerusakan tersebut. Penelitian ini adalah eksperimental mikroskopis, terdiri dari 5 kelompok, kelompok 1 diberi larutan NaCl 0,9 % sebagai kelompok kontrol. Kelompok 2, 3, 4, dan 5 diberi MSG 4 mg/g berat badan secara intrapertonial dan Vitamin C 0,2 mg/g berat badan secara oral selama 30 hari. Setelah 30 hari perlakuan, jaringan hati mencit diambil dan dilakukan pemeriksaan histopatologi pada 5 lapang pandang pada sediaan. Dari hasil pemeriksaan histopatologi tersebut dapat disimpulkan bahwa Pengaruh pemberian vitamin C terhadap degeneratif lebih besar dari pengaruh pemberian vitamin C terhadap nekrosis hati mencit yakni 67.8% (Skala 3) berbanding 16.2% (Skala 1).
ABSTRAK
Monosodium glutamate (MSG) is natrium salt from glutamic acid, essential crystal powder form selled legally in market and has been consumed since 1908 in the world imperially as extra taste, addictive to whet appetite. MSG is metabolismed quickly in the body as source energy. The effect of MSG reported can cause MSG Sympyom – complek like burning and stiff behind neck, arm, chest, face, shoulder, ache in chest, headache, quesy, heartbeat increases, bronchospasme, cause hiperlipidemia, hiperglikemia, and increases oxydative stress. The toxic effect of liver reported increases lipid peroxydation in liver microcos, hepatosit damage, liver cell nucleic blurred, dilatation of central vena, centribular necrosist, atrofi and degeneration of liver cells. Giving Vitamin C orally is suggested as potential benefit which can decrease the increase of lipid peroxydation in liver net as anti oxydant. This research is aimed to know the impact of MSG to the damage range of liver cell as degeneration and necrosist and effect of Vitamin C protection to that damage. This research is microscopic experiment, consist of 5 groups, group 1 is given NaCl 0.9 % liquid as control group. Group 2, 3, 4 and 5 is given MSG 4 mg/g weight by intrapertonial and Vitamin C 0.2 mg/g weight orrally for 30 days. After 30 days doing, the liver net of rat is taken and done the hispatology check on 5 view fields each serving. From that hispatology check, can conclude that the impact of giving Vitamin C for degenerative is bigger than the impact of giving Vitamin C for microsist rat liver, it is 67.8 % (scale 3) compare 16.2% (scale 1).
BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Latar belakang
Monosodium glutamate (MSG) adalah garam natrium dari asam
glutamat (glutamic acid). MSG telah dikonsumsi secara luas di seluruh
dunia sebagai penambah rasa makanan dalam bentuk L-glutamic acid (Geha
et al., 2000), dan sebagai penyedap masakan untuk merangsang selera
makan, seperti makanan beku, campuran rempah-rempah, kuah dalam
kaleng, sup-sup, pizza, saos, dan produk daging seperti sosis. Namun
pemberian MSG pada makanan yang terlalu banyak menyebabkan rasa
tidak enak pada makanan tersebut.
Rata-rata konsumsi MSG di Indonesia sekitar 0,6 g / hari ( Widharto
et al., 2000), atau 0,3-1.0 g / hari di negara industri (Geha et al., 2000).
Taiwan adalah negara yang paling tinggi konsumsi MSG per kapita,
mencapai 3 g per hari sedangkan Amerika adalah negara yang paling rendah
konsumsi MSG per kapita, hanya 0,5 g per hari (Uke, 2008). Konsumsi
tersebut bisa tergantung pada isi kandungan MSG dalam makanan dan
pilihan rasa seseorang (Geha et al., 2000), berkisar antara 0,1 % dan 0,8 %
dari makanan yang disajikan. Glutamate yang dikomsumsi secara oral
direabsorbsi di rongga usus dan masuk secara langsung melalui vena portal
konsentrasinya diubah sesuai kebutuhan. Dalam keadaan normal konsentrasi
glutamate relatif rendah 5–10 µm / 100 ml dalam darah. Sehingga pada
konsentrasi 50-70 µm /100 ml dalam darah, glutamate dianggap tinggi
(Lewis, 1973).
Telah dilaporkan bahwa pemberian MSG pada dosis 3 dan 6 g /g
berat badan pada tikus dewasa secara oral selama 14 hari berturut-turut dapat
menghambat perkembangan sel-sel hati (Eweka, 2008). Bahkan dosis oral 6
g/hari selama 14 hari terus menerus akan merangsang efek parasimpatik dan
menghasilkan asetilkolin dalam darah sehingga kolinesterase meningkat
dalam plasma, masuk ke dalam hati dan menyebabkan dilatasi vena sentral,
lisis eritrosit, kerusakan hepatosit secara akut, nekrosis serta atropi (Eweka,
2008). Dilaporkan pula pemberian MSG dosis tinggi melalui penyuntikan
dapat menyebabkan nekrosis pada neuron, kemandulan, dan berkurangnya
jumlah anak (Verity, 1981). Bahkan pemberian lebih dari 6 g /hari akan
menyebabkan terganggunya fungsi hati (Eweka, 2008).
Secara fisiologis vitamin C adalah pemakan radikal bebas yang kuat
hingga 24 % dari radikal bebas yang ada dalam plasma, jaringan mata, otak,
paru–paru, hati, jantung, sperma dan leukosit, dan berperan melindungi
sel-sel dari kerusakan oksidatif termasuk mencegah mutasi DNA, dan
memperbaiki dioksidasi residu asam amino memelihara integritas protein
(Yi, 2007).
Berbagai usaha telah dilakukan untuk meningkatkan ketahanan
Pemberian vitamin C dengan dosis 0,2 mg/g berat badan secara oral dapat
menanggalkan efek senyawa radikal bebas (Fauzi, 2008). Selain itu
pemberian vitamin C juga dapat meningkatkan glutathion sehingga dapat
mencegah kerusakan sel hati .
Vitamin C dipercaya dapat menurunkan peroksidasi lipid yang
meningkat dengan pemberian dosis 1000 mg/hari pada mencit, dan
merupakan dosis yang optimal dalam melindungi hati agar tidak terjadi
degenarasi dan nekrosis sel hati (Dedy, 2008).
Berdasarkan uraian yang telah dikemukakan, maka jelaslah bahwa
MSG dapat menyebabkan kerusakan hati dan vitamin C berpotensi sebagai
bahan pelindung hati dari pengaruh MSG tersebut. Namun belum diketahui
secara langsung peran perlindungan vitamin C terhadap fungsi hati. Selain
itu belum diketahui secara pasti kadar vitamin C yang optimal untuk dapat
melindungi hati dari pengaruh buruk MSG. Dari data Eweka, 2008 tersebut
di atas, jelas terlihat bahwa pemberian MSG memberikan pengaruh terhadap
kadar lipid peroksidasi di dalam kromosom hati. Maka penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian vitamin C terhadap
gambaran histologi hati yang mengkonsumsi MSG.
1.2. Perumusan Masalah
Bagaimana pengaruh pemberian vitamin C terhadap tingkat
1.3. Landasan Teori
Pemberian MSG pada dosis 4 hingga 8 mg/g berat badan tikus
jantan secara subkutan selama 6 hari dapat meningkatkan peroksidasi lipid
dalam mikrosom –mikrosom hati. Oleh karena vitamin C dapat bersifat
antioksidan dengan cara menurunkan kadar peroksidasi lipid, maka
diharapkan dengan pemberian vitamin C dapat mencegah terjadinya
gangguan sel jaringan hati, sehingga dengan pemberian vitamin C, sel hati
dapat dilindungi dari kerusakan yang diakibatkan pemberian MSG.
Gambar 1. Bagan kerangka teori pengaruh pemberian Vitamin C terhadap sel hati yang terpapar MSG
MSG
Kerusakan Jaringan Hati
Degenerasi Hati ? Nekrosis Hati ?
Radikal bebas
Peroksidasi lipid
1.4. Tujuan Penelitian 1.4.1.Tujuan Umum
Untuk mengetahui pengaruh MSG terhadap tingkat kerusakan sel
jaringan hati dan pengaruh perlindungan vitamin C terhadap kerusakan
tersebut.
1.4.2. Tujuan khusus
a. Untuk mengetahui pengaruh pemberian MSG terhadap gambaran sel
jaringan hati mencit.
b. Untuk mengetahui pengaruh pemberian vitamin C terhadap gambaran sel
jaringan hati mencit yang dipapari MSG
1.5. Hipotesis
Ho : a.Tidak ada pengaruh MSG terhadap gambaran sel jaringan hati mencit.
b.Tidak ada pengaruh vitamin C terhadap gambaran sel jaringan hati
mencit yang dipapari MSG.
Ha : a. Ada pengaruh MSG terhadap gambaran sel jaringan hati mencit.
b.Ada pengaruh vitamin C terhadap gambaran sel jaringan hati mencit
yang dipapari MSG.
1.6. Manfaat Penelitian
1.6.1. Bila pemberian vitamin C memberikan pengaruh terhadap gambaran
sel jaringan hati, maka hasil penelitian ini dapat menjadi bahan
1.6.2. Bila pemberian MSG memberikan pengaruh terhadap gambaran sel
jaringan hati, maka hasil penelitian ini dapat menjadi pertimbangan
kepada masyrakat dan pemerintah untuk memperhatikan dosis
penggunaan MSG dalam kehidupan sehari- hari.
1.6.3. Dapat dijadikan referensi dalam dunia kedokteran apakah ada
pengaruh pemberian vitamin C terhadap histologi hati yang terpapar
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2. 1. Monosodium Glutamate (MSG) 2.1.1. Kimia MSG
MSG pertama sekali ditemukan oleh Ritthausen (1866), dan berhasil
diisolasi dari rumput laut oleh Ikeda (1908), dengan rumus kimia MSG
adalah C5H8O4NNaH2O, terdiri atas Natrium sebanyak 12%, glutamat 78%
dan air 10%. MSG tersebut rasanya enak dan lezat, oleh karena itu Ikeda
menyebut rasa itu dengan Umami. Penemuan suatu reseptor rasa bagi
glutamat di lidah ini (Umami) menegaskan bahwa rasa glutamat, adalah rasa
yang kelima disamping rasa manis, asin, asam, dan pahit (Uke, 2008). Asam
glutamat digolongkan pada asam amino non essensial karena tubuh manusia
sendiri dapat menghasilkan asam glutamat. Glutamat dibuat dalam tubuh
manusia dan memainkan peran esensial dalam metabolisme. Hampir dua
kilogram glutamat terdapat secara alami dalam otak, ginjal, hati dan pada
jaringan lain pada tubuh manusia. Di samping itu glutamat terdapat dalam
jumlah besar di air susu ibu, sekitar sepuluh kali lipat yang terdapat dalam
susu sapi. Rata-rata seseorang mengkonsumsi antara 10 dan 20 g glutamat
terikat dan satu g glutamat bebas dari makanan yang kita makan setiap hari
terdapat pada bermacam-macam sayuran daging, seafood, dan air susu ibu.
Glutamat dalam bentuk alami didapat dari makanan seperti tomat, keju, susu,
(FDA, 1995). Menurut The Glutamic Association Amerika Serikat, protein
yang dikomsumsi sehari-hari mengandung 20-25% glutamat (Uke, 2008).
Tubuh manusia terdiri dari 14-17 % protein dan seperlimanya merupakan
asam glutamat, bila berat tubuhnya 70 kg rata-rata mengandung 2 kg
glutamat dalam protein tubuhnya (Sardjono, 1989).
Monosodium glutamat (MSG) adalah garam sodium “L glutamat
acid” yang mudah larut dalam air dan tidak berbau, dibuat melalui proses
fermentasi dari tetes-gula (molases) oleh bakteri Brevibacterium
lactofermentum. Dari fermentasi ini dihasilkan asam glutamat. Asam
glutamat kemudian ditambah soda (Natrium karbonat) sehingga terbentuk
monosodium glutamat (MSG), kemudian dimurnikan dan dikristalisasi,
sehingga merupakan serbuk kristal murni, yang siap dijual di pasar dan
merupakan ramuan makanan yang umum (Widharto et al., 2000). MSG
sendiri sebenarnya sama sekali tidak menghadirkan rasa yang enak, bahkan
sering menghadirkan rasa yang dideskripsikan sebagai rasa pahit, dan asin.
Akan tetapi ketika MSG ditambahkan dengan konsentrasi rendah pada
makanan yang sesuai maka rasa, kenikmatan dan penerimaan terhadap
makanan tersebut akan meningkat (Halpern et al., 2002). Rangsangan selera
dari makanan yang diberi MSG disebabkan oleh kombinasi rasa yang khas
dari efek sinergis MSG dengan 5 ribonukleotida yang terdapat di dalam
makanan, yang bekerja pada membran sel reseptor kecap. MSG kemudian
menjadi bahan penambah rasa yang dipakai di seluruh dunia (Geha et al,
Tenggara (Widharto et al, 2000) dan di berbagai negara maju lainnya. Total
komsumsi per tahun dan rata-rata konsumsi MSG / orang / hari ditampilkan
pada Tabel I.
Tabel 1. Total Komsunsi MSG Pertahun dan Rata-rata Komsumsi Perhari di Beberapa Negara Maju (Uke, 2008).
Negara Total per tahun
(ton)
Komsumsi
(g/orang/hari)
Taiwan 18000 3
Korea 30000 2,3
Jepang 65000 1,6
Italia 6000 0,4
Amerika 26000 0,35
Dari Tabel 1 dapat dilihat bahwa Taiwan adalah negara yang paling
besar mengkomsumsi MSG yaitu 3 g / orang / hari. Dan Amerika adalah
negara yang paling kecil mengkomsumsi MSG yaitu 0,5 g / orang / hari.
2.1.2. Metabolisme MSG
Tubuh manusia membuat sekitar 50 g glutamat bebas setiap hari.
Sebagian besar glutamat dalam makanan dengan cepat dimetabolisme dan
digunakan sebagai sumber energi. Dari sudut nutrisi, glutamat adalah asam
membuat sendiri glutamat dari sumber protein lain. Asam glutamat
merupakan metabolit yang penting dalam metabolisme asam amino dan
merupakan sumber energi utama pada sel otot jantung. MSG ditambahkan
dengan bentuk sediaan garam monosodium murni ataupun bentuk campuran
komponen asam amino dan peptida yang berasal dari asam atau enzim
hidrolisa protein (Geha et al., 2000). Metabolisme asam amino non esensial
glutamat, menyebar luas di dalam jaringan tubuh. Dilaporkan bahwa 57%
dari asam amino yang diabsorpsi dikonversi menjadi urea melalui hati, 6%
menjadi plasma protein, 23% absorpsi asam amino melalui sirkulasi umum
sebagai asam amino bebas, dan sisanya 14% tidak dilaporkan dan diduga
disimpan sementara di dalam hati sebagai protein hati /enzim. Kenyataannya
bahwa semua glutamat yang di makan dari bahan makanan hanya 4% yang
keluar dari tubuh (Uke, 2008).
Sementara itu Ohara dan kawan-kawan (2008) melaporkan bahwa
pemberian MSG dosis tunggal 1 g / kg berat badan mencit dewasa, yang
diberikan secara intraperitonial, subkutan, atau per oral selama 10 hari, 23
hari, dan 4 bulan, akan menyebabkan kadar asam glutamat plasma naik
dengan cepat mencapai nilai maksimal dalam 10-30 menit setelah pemberian
dan kembali ke normal dalam 90 menit. Kadar puncak asam glutamat setelah
pemberian per oral nyata lebih rendah dibanding dengan intraperitonial atau
subkutan. Olney (2008) juga melaporkan bahwa pemberian MSG secara
subkutan akan menyebabkan kadar glutamat plasma pada neonatus mencit
glutamat oleh hati meningkat sejalan dengan meningkatnya umur.
Kadar asam glutamat plasma yang dapat dideteksi selalu lebih tinggi
jika MSG diberi melalui minum dibanding dengan melalui makan pada dosis
yang sama ( Sardjono, 1989). Bila MSG larut dalam air ataupun ludah akan
berdisosiasi dengan cepat menjadi garam bebas dalam bentuk anion
glutamat, kemudian ion ini akan membuka saluran Ca2+ pada sel saraf yang
terdapat kuncup perasa sehingga memungkinkan ion Ca2+ memasuki sel
sehingga menimbulkan depolarisasi reseptor. Depolarisasi selanjutnya
menimbulkan potensial aksi yang sampai ke otak untuk kemudian
diterjemahkan oleh otak sebagai rasa lezat. Pemberian MSG secara
parenteral akan memberikan reaksi yang berbeda dibanding per oral karena
pada pemberian secara parenteral, MSG tidak melalui usus dan vena porta.
Sedangkan pada pemberian per oral, MSG akan melalui usus sebelum
memasuki sirkulasi porta ke hati. Selanjutnya asam glutamat di
transaminasikan dengan piruvat menjadi alanin. Alanin hasil transaminasi,
oleh asam amino dikarboksilat, diubah menjadi ketoglutarat atau
oksaloasetat. Proses ini mengakibatkan berkurangnya jumlah asam amino
dikarboksilat yang dilepas ke dalam darah porta. Asam glutamat dan asam
aspartat yang lolos dari metabolisme mukose dibawa ke hati melalui vena
porta. Sebagian asam glutamat dan aspartat dikonversi menjadi glukosa dan
laktat sebelum memasuki pembuluh darah perifer. Hati mempunyai
kemampuan terbatas memetabolisme asam glutamat menjadi metabolit lain.
metabolismenya, maka kadar glutamat plasma akan meningkat. Kadar asam
glutamat plasma tidak pernah melebihi / melampaui lima kali kadar basal
jika MSG diberi bersama makanan.
2.1.3. Efek Biologis MSG
Badan Pengawas Makanan dan Obat-obatan (Food and Drugs
administration, FDA) Amerika Serikat mengklasifikasikan MSG sebagai
bahan yang aman untuk dikonsumsi ( generally recognized as safe, GRAS)
seperti bahan makanan lainnya, misalnya garam, cuka dan pengembang kue
(FDA, 1995). Sejalan dengan itu, hasil penelitian di Indonesia juga
menunjukkan bahwa konsumsi MSG sampai dengan 1,5 - 3,0 g per hari tidak
menimbulkan efek apapun terhadap manusia (Widharto et al., 2000). Namun
demikian, berbagai penelitian juga melaporkan adanya efek yang timbul
setelah mengkomsumsi MSG. Misalnya telah dilaporkan adanya
MSG-Symptom complex yang timbul setelah satu jam mengkomsumsi MSG
sebesar 3 g melalui makanan, terutama jika dikomsumsi dalam kondisi perut
kosong (FDA, 1995). MSG-Symptom complex ditandai dengan rasa
terbakar dan kebas di belakang leher, lengan dan dada, hangat di wajah dan
pundak, rasa nyeri didada, sakit kepala, mual, denyut jantung meningkat,
bronchospasme (FDA.,1995). Selain itu Ronald (2000) juga melaporkan
bahwa komsumsi MSG dapat memicu timbulnya penyempitan saluran nafas
serta meningkatkan total lipid, trigliserida, fosfolipid dan asam lemak bebas
secara signifikan. MSG juga menyebabkan pengerasan pembuluh darah
(aterosklerosis) yang menjadi faktor risiko penyakit jantung koroner.(Akhtar,
2008)
2.1.4. Toksisitas MSG terhadap Hati
Dilaporkan bahwa pada pemberian MSG secara subkutan terhadap
anak tikus jantan dan betina yang baru dilahirkan dengan dosis
berangsur-angsur meningkat dari 2,2 g / kg berat badan sampai 4,2 g / kg berat badan
dari hari ke-2 sampai ke-11, tidak menimbulkan kerusakan histologis hati
(Uke, 2008). Sementara Chouldhary (1997) melaporkan bahwa pemberian
MSG dengan dosis 4 hingga 8 mg/g berat badan pada tikus jantan secara
subkutan selama 6 hari berturut-turut dapat meningkatkan peroxidasi lipid di
dalam mikrosom hati. Verity (1981) juga melaporkan bahwa pemberian
MSG secara oral akan merangsang efek parasimpatik dan menghasilkan
asetilkolin dalam darah sehingga kolinesterase meningkat dalam plasma dan
merusak jaringan hati. Peneliti lain juga melaporkan (Kazuko et al., 1974,
Eweka, 2008) bahwa pemberian MSG 5 % secara oral selama 30 hari akan
menyebabkan kerusakan hepatosit dan tampak inti sel hati menjadi kabur
(Gambar 2.1).(Eweka, 2008) melaporkan, bahwa pemberian MSG 3 g dan 6
g secara oral selama 14 hari akan menyebabkan dilatasi vena cebtral,
hati.
Gambar 2.1. Histologi hati tikus setelah pemberian 5 % MSG (Pewarnaan HE, pembesaran 10 x 40). Inti sel hati tampak rusak dan
menjadi kabur ( Kazuko et al, 1974, Eweka, 2008)
2.2. Asam askorbat (Vitamin C) 2.2.1. Manfaat Vitamin C
Asam askorbat adalah vitamin yang larut dalam air dan sangat
penting untuk biosintesis kolagen, karnitin dan berbagai neurotransmitter.
Kebanyakan tumbuh-tumbuhan dan hewan dapat mensintesis asam askorbat
untuk kebutuhannya sendiri. Akan tetapi manusia dan hewan primata
lainnya, tidak mampu mensintesis asam askorbat karena tidak memiliki
enzim gulonolactone oxidase, begitu juga dengan marmut dan kelelawar
pemakan buah. Oleh sebab itu, pada manusia dan hewan asam askorbat harus
disuplai dari luar tubuh terutama dari buah, sayur atau tablet suplemen
asam askorbat, misalnya sebagai anti oksidan, anti atherogenik,
imunomodulator dan mencegah flu (Naidu, 2003). Untuk dapat berfungsi
dengan baik sebagai antioksidan, maka kadar asam askorbat ini harus terjaga
agar tetap dalam kadar yang relatif tinggi dalam tubuh (Yi, 2007). Komsumsi
100 – 150 mg Vitamin C sehari sudah cukup untuk memenuhi kebutuhan
jaringan organ (Thomas et al.,1978)
2.2.1. Sumber sumber Vitamin C
Asam askorbat banyak dijumpai dalam buah-buahan dan sayuran
segar. Buah yang banyak mengandung asam askorbat diantaranya adalah
jeruk, jeruk lemon, semangka, strawberi, mangga dan nenas. Sedangkan
sayuran yang banyak mengandung asam askorbat antara lain adalah sayuran
yang berwarna hijau, tomat, brokoli dan kembang kol. Kebanyakan
tumbuhan dan hewan mensintesis asam askorbat dari glukosa-D atau
galaktosa-D. Sebagian besar hewan memproduksi asam askorbat yang relatif
tinggi dari glukosa yang terdapat di hati (Naidu, 2003).
Asam askorbat merupakan molekul yang labil, sehingga dapat hilang
dari makanan pada saat dimasak. Asam askorbat sintetis tersedia dalam
berbagai macam suplemen bentuknya bisa bermacam macam baik dalam
bentuk tablet, kapsul, tablet kunyah, bubuk kristal, dan dalam bentuk larutan.
Baik asam askorbat yang alami maupun yang sintetis memiliki rumus kimia
yang identik dan tidak terdapat perbedaan aktifitas biologi dan
2.2.2. Biokimia Vitamin C
Asam askorbat adalah merupakan 6 karbon lakton yang disintesis dari
glukosa yang terdapat dalam hati (Sebastian, 2003). Nama kimia dari asam
askorbat 2-oxo-L-threo-hexono-1,4-lactone-2,3-enediol. Bentuk utama dari
asam askorbat yang dimakan adalah L-ascorbic dan dehydroascorbic acid
(Naidu, 2003).
Vitamin C merupakan donor elektron, yang mendonorkan dua
elektron dari dua ikatan antara karbon kedua dan ketiga dari 6 molekul
karbon. Vitamin C disebut sebagai antioksidan karena dengan mendonorkan
elektronnya ia mencegah zat zat komposisi yang lain teroksidasi.
Bagaimanapun akibat dari reaksi ini secara alamiah vitamin C juga akan
teroksidasi. Setelah vitamin C mendonorkan elektronnya, dia akan
menghilang dan digantikan oleh radikal bebas semidehydroaskorbic acid
atau radikal ascorbyl, yang merupakan zat yang terbentuk akibat asam
askorbat kehilangan 1 elektronnya, bila dibandingkan dengan radikal bebas
yang lain, radikal ascorbyl ini relatif stabil dan tidak reaktif. Hal inilah yang
menyebabkan asam askorbat menjadi antioksidan pilihan, karena radikal
bebas yang reaktif dan berbahaya dapat berinteraksi dengan asam askorbat,
lalu direduksi dan radikal ascorbyl yang kemudian terbentuk
menggantikannya ternyata kurang reaktif bila dibandingkan dengan radikal
bebas tersebut. Bila radikal ascorbyl dan dehydroascorbic acid sudah
dibentuk maka dia akan dapat direduksi kembali menjadi asam askorbat
komponen yang terdapat di sistem biologi seperti glutation, akan tetapi pada
manusia hanya sebagian yang direduksi kembali menjadi asam askorbat yang
lain tidak dapat direduksi kembali menjadi asam askorbat. Dehydroascorbic
acid yang telah terbentuk kemudian dimetabolisme dengan cara hidrolisis.
2.3. Fisiologi Hati
Hati adalah organ tubuh terbesar dan mempunyai fungsi yang sangat
kompleks di dalam tubuh, dengan berat 1/36 berat badan orang dewasa yaitu
berkisar 1200 - 1600 gr. Unit fungsional dasar hati adalah lobulus hati, yang
berbentuk silindris dengan panjang beberapa milimeter dan berdiameter 0,8
sampai 2 mm. Hati manusia berisi 50.000 sampai 100.000 lobulus. Hati
terdiri dari dua lobus utama, yaitu lobus kanan yang merupakan bagian
terbesar dan lobus kiri merupakan bagian yang lebih kecil. Organ ini terlibat
dalam metabolisme zat makanan, sebagian besar obat dan toksikan.
Hepatosit (sel parenkim hati) merupakan bagian terbesar organ hati
dan bertanggung jawab terhadap peran sentralnya dalam metabolisme.
Sel-sel ini terletak diantara sinusoid yang terisi darah dan saluran empedu,
sedangkan sel Kupffer melapisi sinusoid hati dan merupakan bagian penting
dari sistem retikuloendothelial tubuh. Darah mengalir ke hati melalui vena
porta dan arteri hepatika. Vena porta membawa zat makanan karena
menerima aliran darah dari saluran cerna, limpa dan pankreas. Sedangkan
sistem saluran empedu terbentuk mulai dari kanalikuli yang kecil sekali, dan
duktula saluran empedu interlobular, dan saluran empedu yang lebih besar.
Saluran hati yang utama membungkus duktus kistik dari kandung empedu
dan membentuk saluran empedu yang mengalir ke dalam duodenum. Hati
merupakan organ yang sangat penting sebagai pusat metabolisme tubuh dan
memiliki fungsi yang banyak dan komplek (Guyton, 2002).
2.3.1. Histologi Hati
Histologi hati terdiri atas lobulus, yaitu lobulus anatomi dan
fungsional. Lobulus fungsional terdiri dari atas segi tiga Kierman sebagai
titik tengah dan vena centralis sebagai batas luar (Gambar 2.2). Tetapi dalam
mempelajari patologi maka lobulus anatomilah yang lebih penting (Gambar
2.3) terdiri dari:
a. Vena centralis sebagai titik tengah yang mengalirkan darah ke vena
sublobularis dan kemudian ke vena hepatica.
b. Parenchym hati yang terdiri lagi atas selapis sel hati dan kanal empedu
kecil-kecil.
c. Sinusoid yang berlapiskan sel Kupffer (susunan retikuloendotelial).
d. Ruang Disse yang terlatak antara sel hati dan sinusoid.
e. Segi tiga Kierman atau daerah portal sebagai batas luar lobulus.
Hati ialah alat tubuh yang tersering mengalami kerusakan dan
beruntung sekali, bahwa alat ini mempunyai cadangan fungsional yang luar
biasa, hasil percobaan pada binatang menunjukkan bahwa 10 % parenkim
manusia, kerusakan hati haruslah luas sekali untuk bisa menimbulkan gejala
klinik insufisiensi hepatik, sedangkan kelainan luas akibat intoksikasi,
infeksi virus, penyakit gizi dapat menyebabkan gangguan jaringan hati yang
cepat memburuk.
Gambar 2.2. Segi tiga Kierman (Portal triad) : 1. Vena portal, 2. Saluran empedu,
3. Arteri hepatika (Luiz, 2007)
Apabila sel hati mengalami kerusakan oleh berbagai sebab, maka
serangkaian perubahan morfologi dapat dijumpai pada hati. Perubahan
tersebut dapat berupa perubahan subletal yang sering disebut dengan
perubahan degeneratif dan perubahan letal yang disebut nekrotik. Proses
degeneratif merupakan proses yang reversibel, yaitu jika rangsangan yang
menimbulkan cedera dapat dihentikan, maka sel akan kembali sehat seperti
semula, sedangkan proses nekrosis merupakan suatu proses irreversibel,
yaitu pada saat sel telah mencapai titik dimana sel tidak dapat lagi
mengkompensasi dan tidak dapat lagi melangsungkan metabolisme atau
dengan kata lain telah terjadi kematian sel.
2.3.2. Degeneratif sel hati
Degeneratif terjadi pada sitoplasma atau inti, kadang-kadang disertai
kelainan inti sekunder, atrofi dan nekrosis sel, sehingga sel-sel menjadi
hilang karenanya.
Degeneratif pada sitoplasma ialah : a. Perlemakan.
Yaitu tampaknya lemak dalam sel hati menunjukkan, bahwa dalam
tubuh terdapat ketidak seimbangan proses normal yang
mempengaruhi kadar lemak di dalam dan di luar jaringan hati akibat
gangguan metabolisme.
b. Degeneratif amiloid.
dalam ruang Disse, yaitu antara sel hati dan sinusoid dan kadang –
kadang pada dinding pembuluh darah.
c. Degeneratif bengkak keruh .
Yaitu kerusakan hati sebelum meninggal, misalnya karena infeksi,
intoksikasi, keracunan kehamilan, mitokondria yang bengkak, asam
amino dalam sitoplasma yang bertambah, imbibisi sel oleh protein
serum dan ion natrium akibat permeabilitas dinding sel hati yang
terganggu. Sel hati bengkak dengan sitoplasma berbutir keruh
mungkin disebabkan oleh pengendapan protein, sehingga dinamai
juga albuminous degeneration. Sitoplasma tampak lebih gelap dan
sedikit bervakuola daripada biasa akibat glikogen yang berkurang.
d. Degeneratif hidropik.
Yaitu sitoplasma agaknya bervakuola dengan pulasan rutin, tetapi
tidak mengandung lemak atau glikogen. Zat asidofiliknya hanya
tampak sedikit saja sebagai gambaran halus tetapi kadang-kadang
tidak kelihatan, karena yang mengisi sitoplasma menyerupai cairan.
Degeneratif hidropik agaknya mendahului nekrosis dan masih
reversibel.
e. Degeneratif hialin.
Yaitu bergumpalnya sitoplasma yang disertai reaksi asidofilik protein
ialah tingkat lanjut degeneratif asidofilik. Gumpalan sitoplasma
asidofilik dinamai hialinisasi.
Dalam keadaan normal dengan gizi yang baik glikogen ditemukan
dalam sitoplasma sel hati, secara biopsi kelihatan sebagai buih
bergaris halus-halus, sedangkan pada autopsi kelihatan glikogen lisis
setelah kematian berlangsung.
g. Atrofi.
Atrofi umum sel hati ditemukan pada penyakit gizi, penyakit
menahun dan pada orang tua. Bila disertai pigmen lipofuscin, maka
dinamai brown atrophy.
Degeneratif pada inti sel hati : a. Vakuolisasi.
Inti tampak membesar dan bergelembung serta khoramatinnya jarang
dan tidak eosinofil. Kadang-kadang bila berbatas jelas, maka
vakuolisasi inti sukar dibedakan daripada inclusion bodies, kelainan
itu akibat infiltrasi glikogen. Vakuolisasi inti disebabkan oleh
perubahan keseimbangan cairan dalam sel hati akibat bertambahnya
cairan.
b. Inclusion bodies.
Inti sel hati kadang-kadang mengandung inclusion bodies eosinofilik,
yang berbatas jelas dari sekitarnya yang basofilik. Inclusion bodies
dapat dibedakan daripada inklusi glikogen karena tidak memberi
c. Piknosis, karioreksis, kariolisis.
Bila sel mengalami kematian (nekrosis) biasanya inti sel yang mati
itu menyusut, batasnya tidak teratur dan berwarna gelap, proses ini
dinamakan piknosis. Kemungkinan lain, inti dapat hancur dan
meninggalkan zat kromatin yang tersebar di dalam sel, proses ini
dinamakan karioreksis. Akhirnya pada beberapa keadaan inti yang
mati kehilangan kemampuan untuk diwarnai dan menghilang begitu
saja, proses ini disebut kariolisis (Susanti et al, 2002).
2.3.3. Nekrosis Sel Hati.
Kelainan ini adalah lanjutan degenerasi dan tidak reversibel, sebab
nekrosis sel hati ialah rusaknya susunan enzim daripada sel (Susanti et al,
2002), tampaknya fragmen sel atau sel hati nekrotik tanpa pulasan inti atau
tidak tampaknya sel disertai reaksi radang, kolaps atau bendungan rangka
hati dengan eritrosit. Tampak atau tidaknya sisa sel hati bergantung kepada
lamanya dan jenis nekrosis itu. Nekrosis dapat dibagi menurut lokasi dan
luasnya:
a. Nekrosis fokal.
Ialah kematian sel atau sekelompok sel kecil dimana saja dalam lobulus,
ditandai leukosit dan histiosit dengan proliferasi sel Kupffer, bagian sel
hati kecil-kecil dan bakteri kadang-kadang dapat ditemukan. Patogenesis
nekrosis fokal ialah kematian sel setempat akibat toksin, bakteri atau
penyumbatan sinusoid oleh proliferasi sel Kupffer atau trombus fibrin.
Nekrosis dapat mengenai seluruh lobulus, nekrosis zonal dapat dibagi
dalam:
a. Nekrosis sentral
Atrofi sel hati sentralobulus yang disebabkan oleh sumbatan sering
tidak dapat dibedakan daripada nekrosis toksik, keduanya
menyebabkan hilangnya sel, faktor sumbatan dan toksin sering
terjadi bersamaan. Sumbatan ditandai dengan vena centralis yang
melebar, hilangnya atau atrofi sel hati tanpa tertinggalnya sisa sel
dan sinusoid yang melebar terisi eritrosit. Sedangkan nekrosis
toksik tampak fragmen tidak berinti yang dikelilingi eksudat,
walaupun sinusoid sering melebar, namun vena centralis relatif
tidak melebar.
b. Nekrosis midzonal
Nekrosis midzonal tanpa kelainan pada daerah sentral dan tepi
lobulus jarang ditemukan pada manusia. Nekrosis midzonal terjadi
disekitar perlemakan sentral.
c. Nekrosis Tepi
Nekrosis tepi atau periportal timbul bersamaan dan mungkin
disebabkan oleh radang tepi lobulus dan susunan portal (Sutisna,
1994).
c. Nekrosis masif dan submasif.
dengan ciri khas kolaps yang tidak dapat berkembang lagi, sel hati dapat
tertinggal sebagai bayangan tanpa pulasan inti atau sebagai fragmen
kecil-kecil, diawali proliferasi sel Kupffer dan sel eksudat yang
melakukan fagositosis, tercampur dengan eritrosit didalam dan diluar
sinusoid serta menempati ruangan lebih banyak daripada lapisan hati
yang masih utuh. Selanjutnya sel darah dan eksudat yang berlebihan
hilang, sehingga lobulus hati menjadi kecil. Bila sel hati yang hancur
banyak lemak, maka warnanya kuning kelainan ini disebut acuta yellow
atropy. Bila sel hati telah lenyap dan warna eritrosit tampak pada hati
lisut yang penampangnya menyerupai limpa disebut red atropy.
d. Nekrosis anoksik
Kekurangan oksigen pada nekrosis zonal, masif atau submasif
biasanya tidak merusak rangka retikulin, sel kupffer atau sel jaringan
ikat lainnya. Sel-sel itu hanya menjadi nekrotik, bila anoxia itu lengkap
dan kemudian rangka retikulin pecah, setidak-tidaknya pada beberapa
tempat. Hal itu terjadi dekat permukaan yang kena trauma, setelah
periarteritis nodosa cabang arteri intrahepatik atau hipertensi ganas dan
pada infark anemik. Daerah nekrotik yang tidak menunjukkan inti sering
dikelilingi lekosit.
e. Kerusakan akibat obat-obatan (drug-induced injuries)
Diantaranya terdapat benar-benar hepatotoksin, seperti cinchophen dan
chloroform yang digunakan sebagai zat pelarut yang dapat menimbulkan
kerusakan jaringan hati bila diberikan dalam jumlah yang cukup.
Obat-obatan dapat juga menimbulkan kerusakan pada jaringan hati tanpa
terjadi nekrosis. Sebaliknya banyak terdapat obat yang dapat
menimbulkan kerusakan jaringan hati yang sangat sensitive, yang dikenal
dengan alergen hepatik. Mekanisme alergen hepatik ini belum diketahui
dengan pasti. Tidak diketahui pula mengapa yang satu hanya
menimbulkan nekrosis atau cholestasis dan yang lain kedua-duanya.
Agaknya reaksi ini berhubungan dengan jumlahnya yang dikomsumsi
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1. Tempat dan waktu
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Patologi Anatomi
Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara mulai dari bulan Juni – Juli
2009. Permohonan ethical clearance diajukan ke Komisi Etika Penelitian
Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara Medan, dan
telah mendapat persetujuan.
3.2. Bahan dan Alat Penelitian 3.2.1. Bahan Penelitian
Bahan biologis. Bahan biologis yang digunakan dalam penelitian ini adalah Mencit jantan (Mus musculus L) strain DD Webster dewasa berumur ± 2-4
bulan dengan berat badan 25-30 g yang diperoleh dari Unit Pra-klinik-
Universitas Gajah Mada (UGM) Yogyakarta. Sebanyak 25 ekor mencit
jantan diperoleh dari hasil perbanyakan untuk keperluan penelitian. Jumlah
hewan uji per kelompok ditentukan dengan rumus (t-1) (n-1) ≥ 15 (Federer,
1963). Jika t adalah jumlah kelompok (dalam penelitian ini ada 5 kelompok,
yaitu 1 kelompok kontrol dan 4 kelompok perlakuan), maka jumlah n yang
diharapkan (teoritis) adalah sebesar 5 ekor per kelompok.
murni (Sigma) yang dilarutkan dengan akuades. Vitamin C (Sigma) yang
dilarutkan dengan akuades. Dan sediaan histologi antara lain ; metilen blue,
buffer formalin 10 %, parafin pellet (titik leleh 56 – 58 oC), albumin Mayer
(sebagai adhesive jaringan pada permukaan gelas objek), xylol (untuk hidrasi
sayatan yang sudah ditempelkan pada slide), alkohol absolut, alkohol 95%,
80%, 70%, 50%, (untuk hidrasi sayatan dari aceton), aceton (untuk hidrasi
sayatan dari air). Semua bahan kimia yang akan digunakan adalah grade
analitik (pa grade) dan diperoleh dari Merck
Pemeliharaan Hewan Coba. Selama perlakuan, mencit ditempatkan dalam kandang plastik (ukuran 30x20x10 cm) yang ditutup dengan kawat kasa.
Dasar kandang dilapisi dengan sekam padi setebal 0,5-1 cm dan diganti
setiap tiga hari. Cahaya ruangan dikontrol persis 12 jam terang (pukul 06.00
sampai dengan pukul 18.00) dan 12 jam gelap (pukul 18.00 sampai dengan
pukul 06.00), sedangkan suhu dan kelembaban ruangan dibiarkan berada
pada kisaran alamiah. Pakan ( Pelet 05) dan minum ( PAM) disuplai setiap
hari secara berlebih
3.2.2. Peralatan Utama Penelitian
Alat utama yang digunakan dalam penelitian terdiri atas timbangan
kasar (untuk timbang berat badan mencit) merk Ohaus USA, jarum gavage
untuk memberikan Vitamin C secara oral, dissecting set, kertas saring, oven
hati), water bath, gelas objek, meja pemanas (hot plate) merk Cimarec 2
USA, gelas penutup (cover glass), dan mikroskop cahaya (Olympus, Japan).
3.3. Disain Penelitian
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimen, yang didisain
mengikuti Rancangan Acak Lengkap (RAL). Eksperimental ini terdiri dari
5 kelompok, kelima kelompok tersebut sama–sama diberi perlakuan yang
berbeda, yaitu kelompok 1 diberi larutan NaCl 0,9 % sebagai kelompok
kontrol. Kelompok 2, 3, 4, dan 5 diberi MSG 4 mg/g berat badan dan
Vitamin C 0,2 mg/g berat badan, secara lengkap disain penelitian ini
adalah sebagai berikut:
KELOMPOK
JUMLAH
MENCIT PERLAKUAN
LAMA
PERLAKUAN(hari)
P- I 5 Larutan NaCl 0,9 % 30 hari
P- 2 5 MSG kemudian Nacl 0,9 % 15 hari - 15 hari
P- 3 5 MSG 30 hari
P- 4 5 MSG kemudian Vit C 15 hari - 15 hari
P- 5 5 MSG kemudian MSG +
Vitamin C
3.4. Pelaksanaan Penelitian dan Pengamatan 3.4.1. Pemberian Perlakuan
Mencit ditempatkan ke dalam kelompok secara random.
P1
P2
P3
P4
P5
3.4.2.Pembuatan Sediaan Histologi Hati
Setelah 30 hari perlakuan, masing-masing hewan coba dieksekusi dengan cara dislokasi leher, kemudian dilakukan pembedahan laparatomi
untuk mengambil lobus kanan hati dan dibuatkan preparat hati dengan
metoda parafin dengan pewarnaan Hematoksilin Erlich dan Eosin alkohol
yang kemudian dapat diperiksa secara mikroskopis. Hematoksilin-Eosin
15 hari pertama 15 hari berikutnya
Larutan NaCl 0,9 %
MSG Larutan NaCl 0,9 %
MSG
MSG Vitamin C 0,2 mg
(HE) yang akan menyebabkan inti berwarna kebiruan dan sitoplasma
berwarna merah, Selanjutnya dilakukan pemeriksaan histopatologi dengan
menggunakan mikroskop cahaya dengan pembesaran 400 kali pada 5
lapangan pandang untuk setiap sediaan (Susanti et al., 2002). Cara
pembuatan preparat histologi hati sebagai berikut:
• Jaringan hati yang telah diambil (lobus kanan) dipotong-potong,
kemudian dimasukkan ke dalam larutan Nacl Fisiologis selama 30
menit, kemudian dipindahkan ke larutan fiksasi bouin selama 24 jam.
• Kemudian jaringan didehidrasi dengan alkohol 50%, 70%, 80%,
90%, 96%, dan alkohol absolut masing-masing selama satu jam, lalu
dijernihkan dengan memindahkan objek ke dalam larutan alkohol
absolut : xylol (1:1) dan xylol, masing-masing selama satu jam.
Kemudian objek dimasukkan ke dalam larutan infiltrasi yang
dilakukan dalam inkubator pada suhu 56-60 oC (Xylol: parafin
selama 1 jam, parafin 1 selama 1 jam, parafin 2 selama 1 jam, parafin
3 selama ½ jam).
• Penanaman (embedding) jaringan ke cetakan logam atau kertas yang
sudah berisi parafin cair yang dipanaskan dalam inkubator,
selanjutnya dibiarkan dingin dan membeku.
• Penyayatan (section) dilakukan dengan memasang blok parafin dalam
holder, kemudiaan di iris dengan mikrotom setipis mungkin (5 µm).
• Penempelan (afiniting), kaca objek digosok dengan Mayer’s albumin.
dan direntangkan di atas hot plate. Setelah kering, lalu
dideparafinisasi dengan xylol selama 30 menit.
• Pewarnaan dengan zat warna hematoksilin Erlich dan Eosin alkohol
dilakukan sebagai berikut : Alkohol 96%, 80%, 70%, dan 50%
masing-masing selama 3 menit, hematoksilin Erlich selama 1 – 5
menit, kemudian dicuci dengan air mengalir, terlihat dibawah
mikroskop inti sel sudah terwarnai.
• Kemudian dilanjutkan dengan: Alkohol 70%, 80%, dan 96%
masing-masing 3 menit, eosin alkohol selama 15 menit, alkohol 96 % (1
menit), alkohol absolut (2 menit), campuran alkohol-xylol = (1:1)
selama 2 menit, xylol selama 30 menit.
• Penutupan (mounting) dijaga agar jaringan jangan sampai kering,
ditetesi dengan perekat kemudian ditutup dengan cover glass dan
keringkan, kemudian preparat diberi label, kemudian diperiksa secara
mikroskopis (Helmi, 2007).
3.4.3. Pengamatan
Pengaruh MSG pada jaringan hati secara kwalitatif diamati pada
kerusakan vena sentralis, hepatosit, nukleus, sitoplasma, dan sinusoid, hasil
foto-foto mikroskopis dari hati merupakan gambaran data kwalitatif. Peneliti
hanya mengamati secara kwalitatif dengan melihat jaringan hati yang
berdegenerasi dan nekrosis. Secara histologi gambaran jaringan hati
lingkaran yang tidak putus, hepatosit tampak teratur dengan polihedral,
nukleus tampak bulat berwarna biru, sitoplasma tampak cerah berwarna
merah, sinusoid tampak utuh berwarna putih (Helmi, 2007). Kerusakan
jaringan hati tersebut diamati di lima lapang pandang berbeda secara acak
pada masing-masing sediaan jaringan hati. Kemudian dinilai skala
degenerasi dan nekrosis yang terdapat pada sediaan tersebut. Skala
degenerasi dan nekrosis 0 = tidak ada, 1 = 1%-25%, 2 = 26%-50%, 3 =
51%-75%, 4= 76%-100% (Jawi, 2006).
3.5. Analisis Data
Seluruh data dianalisa dengan menggunakan SPSS 16 dengan
menggunakan analisa linear berganda (Uji F) untuk mengetahui pengaruh
pemberian vitamin C terhadap degeneratif dan nekrosis dengan ketentuan
BAB IV
ANALISIS DAN PEMBAHASAN
4.1. Analisis Data Penelitian
Analisis data penelitian tentang pengaruh pemberian vitamin C
terhadap gambaran histologis hati mencit (mus musculus L) yang dipapari
monosodium glutamate dilakukan dengan menggunakan 2 bentuk pengujian
yakni 1). Uji-F Degeneratif dan 2). Uji-F Nekrosis.
4.1.1. Uji F Degeneratif
Uji-F degeneratif antara variabel independen (pemberian NaCl,
pemberian MSG, pemberian MSG +NaCl, pemberian MSG+Vit C dan
pemberian MSG+MSG +Vit C) dan variabel dependen (degeneratif)
memberikan hasil sebagai berikut :
Tabel 4.1.
Hasil Uji-F Antara Perlakuan Dengan Gambaran Degeneratif ANOVAb
26912.000 1 26912.000 48.464 .00 12772.000 23 555.304
Squares df Mean Square F Sig.
Predictors: (Constant), Perlakuan pemberian Vit C a.
Dependent Variable: Degeneratif b.
Tabel ANOVA di atas memperlihatkan bahwa nilai F-hitung = 48.464
dan nilai sig-p = 0.000. Jika dibandingkan dengan nilai F-tabel = 4.26 (yang
=0.05, terbukti bahwa F-hitung (48.464) > F-tabel (4.26) dan p (0.000) <
sig-α (0.05). Hasil analisis ini memenuhi kriteria persyaratan hipotesis pengaruh
dimana jika F-hitung > F-tabel, hipotesis diterima, maka dapat disimpulkan
bahwa pemberian vitamin C berpengaruh terhadap gambaran histologis
(degeneratif) hati mencit.
4.1.2. Uji Determinasi R Degeneratif
Besarnya pengaruh pemberian vitamin C terhadap gambaran
histologis (degeneratif) hati mencit dapat dilihat dari tabel berikut :
Tabel 4.2
Hasil Uji Determinasi R Degeneratif Model Summaryb
.824a .678 .664 23.56490 Model
Predictors: (Constant), Perlakuan pemberian Vit C a.
Dependent Variable: Degeneratif b.
Tabel di atas memperlihatkan bahwa nilai R-square = 0.678, sehingga
besarnya pengaruh pemberian vitamin C terhadap gambaran histologis
(degeneratif ) hati mencit adalah sebesar :
K = Rsquare x 100% = 0.678 x 100% = 67.8%.
Dengan demikian besarnya pengaruh variabel independen (pemberian
vitamin C) terhadap variabel dependen (degeneratif) adalah sebesar 67.8%,
sedangkan selebihnya 32.2 % dipengaruhi oleh faktor-faktor lain yang tidak
4.1.3. Persamaan Regresi
Persamaan regresi yang menyatakan pengaruh antara pemberian
vitamin C terhadap degeneratif hati mencit dapat dilihat dari tabel berikut :
Tabel 4.3.
Koefisien Persamaan Regresi
Coefficientsa
-18.200 11.053 -1.647
23.200 3.333 .824 6.962
(Constant)
Dari tabel di atas terlihat bahwa nilai koefiisien pemberian vitamin C
= 23.2, sehingga persamaan regresi yang menyatakan pengaruh antara
pemberian vitamin C dan degeneratif adalah
Y = -18.200 + 23.2X + 11.053
Persamaan ini mengasumsikan bahwa jika faktor-faktor lain dianggap tetap
maka setiap penambahan pemberian vitamin C sebesar 1%, akan
meningkatkan degeneratif hati mencit sebesar 23.2%.
4.1.4. Uji F Nekrosis
Uji-F nekrosis antara variabel independen (pemberian NaCl,
pemberian MSG, pemberian MSG +NaCl, pemberian MSG+Vit C dan
pemberian MSG+MSG +Vit C) dan variabel dependen (nekrosis)
Tabel 4.4.
Hasil Uji-F Antara Perlakuan Dengan Gambaran Nekrosis ANOVAb
62.720 1 62.720 4.442 .04 324.720 23 14.118
Squares df Mean Square F Sig.
Predictors: (Constant), Perlakuan pemberian Vit C a.
Dependent Variable: Nekrosis b.
Tabel ANOVA di atas memperlihatkan bahwa nilai F-hitung = 4.442
dan nilai sig-p = 0.046. Jika dibandingkan dengan nilai F-tabel = 4.26 (yang
diperoleh dari daftar nilai kritis uji-F untuk n=25 atau df=24) dan nilai sig-α
=0.05, terbukti bahwa F-hitung (4.442) > F-tabel (4.26) dan sig-p (0.000) < sig-α
(0.05). Hasil analisis ini memenuhi kriteria persyaratan hipotesis pengaruh
dimana jika F-hitung >F-tabel, hipotesis diterima, maka dapat disimpulkan
bahwa pemberian vitamin C berpengaruh terhadap gambaran histologis
(nekrosis) hati mencit.
4.1.5. Uji Determinasi R Degeneratif
Besarnya pengaruh pemberian vitamin C terhadap gambaran
Tabel 4.5
Hasil Uji Determinasi R Degeneratif Model Summaryb
.402a .162 .125 3.75743 Model
1
R R Square
Adjusted R Square
Std. Error of the Estimate
Predictors: (Constant), Perlakuan pemberian Vit C a.
Dependent Variable: Nekrosis b.
Tabel di atas memperlihatkan bahwa nilai R-square = 0.162, sehingga
besarnya pengaruh pemberian vitamin C terhadap gambaran histologis
(nekrosis ) hati mencit adalah sebesar :
K = Rsquare x 100% = 0.162 x 100% = 16.2%.
Dengan demikian besarnya pengaruh variabel independen (pemberian
vitamin C) terhadap variabel dependen (nekrosis) adalah sebesar 16.2%,
sedangkan selebihnya 83.8 % dipengaruhi oleh faktor-faktor lain yang tidak
diteliti.
4.1.6. Persamaan Regresi
Persamaan regresi yang menyatakan pengaruh antara pemberian
Tabel 4.6.
Koefisien Persamaan Regresi
Coefficientsa
2.320 1.762 1.316
1.120 .531 .402 2.108
(Constant)
Dari tabel di atas terlihat bahwa nilai koefiisien pemberian vitamin C
= 1.120, sehingga persamaan regresi yang menyatakan pengaruh antara
pemberian vitamin C dan degeneratif adalah
Y = 2.320 +1.12X + 1.762
Persamaan ini mengasumsikan bahwa jika faktor-faktor lain dianggap tetap
maka setiap penambahan pemberian vitamin C sebesar 1%, akan
meningkatkan nekrosis hati mencit sebesar 1.12 %.
Dari kedua hasil analisis regresi tersebut di atas dapat disimpulkan
bahwa pengaruh pemberian vitamin C terhadap degeneratif lebih besar dari
pengaruh pemberian vitamin C terhadap nekrosis hati mencit.
4.2. Pembahasan
4.2.1. Faktor Degeneratif
Hasil analisis pengaruh pemberian vitamin C terhadap degeneratif
hati mencit membuktikan adanya pengaruh signifikan sebagaimana
diindikasikan oleh nilai F-hitung (48.464) > F-tabel (4.26) dan sig-p (0.000) <
sig-α (0.05). Hal ini sesuai dengan penelitian Nurika Amalina (2009) Uji
Mencit Balb/C, dimana Uji Kruskall Wallis menunjukkan tidak didapatkan
perbedaan morfologi makroskopis hepar yang bermakna (p=1,00) dan tidak
didapatkan perbedaan volume hepar yang bermakna (p=0,363). Rerata skor
histopatologi hepar tertinggi pada P4. Skor yang dinilai meliputi perubahan
berupa degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik dan nekrosis. Uji
Anova didapatkan perbedaan yang bermakna p=0,000). Dilanjutkan uji Post
Hoc didapatkan perbedaan bermakna pada KP2( p=0,000), K-P3(p=0,000),
K-P4(p=0,000), P1-P2(p=0,000), P1-P3(p=0,000),P1-P4(p=0,000),
P2-P3(p=0,000), P2-P4(p=0,000), dan P3-P4(p=0,029).
4.2.2. Faktor Nekrosis
Hasil analisis pengaruh pemberian vitamin C terhadap nekrosis hati
mencit membuktikan adanya pengaruh signifikan sebagaimana diindikasikan
oleh nilai F-hitung (4.442) > F-tabel (4.26) dan sig-p (0.000) < sig-α (0.05). Hal
ini sesuai dengan penelitian Aditya Iqbal Maulana (2010) Pengaruh Ekstrak
Tauge (Phaseolus Radiatus) Terhadap Kerusakan Sel Ginjal Mencit (Mus
Musculus) Yang Diinduksi Parasetamol dimana Hasil uji One-Way ANOVA
menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antara keempat kelompok.
Hasil uji LSD menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antara K-P1,
K-P2, P1-P2, P1-P3, dan P2-P3; serta perbedaan tidak bermakna antara K-P3
dan menyimpulkan bahwa ekstrak tauge yang mengandung vitamin C dapat
mengurangi kerusakan sel ginjal mencit yang diinduksi parasetamol dan
kerusakan sel ginjal mencit.
A
B
C
E
Gambar 4.1. Gambaran Histologis Hati Mencit Dari Berbagai Kelompok Perlakuan.
Keterangan:
A.P - 1. Kelompok Kontrol dengan gambaran sel hati yang normal.
B. P - 2. (1). Hepatosit masih tampak berkelompok tetapi susunannya tidak beraturan lagi, (2). Inti sel ada yang mengecil dan sitoplasma tampak hidropik, (3). Sinusoid tampak tidak teratur, ada yang membesar, mengecil bahkan ada yang menghilang dengan bentuk terputus – putus tidak saling berhubungan, (4).Vena sentralis tampak putus sebagian dengan lingkaran sebagian tidak jelas).
C.P - 3. (1). Hepatosit sebagian tampak berkelompok dan berurutan dan sebagian lagi tampak tidak berkelompok dan tidak teratur, (2). Inti sel tampak rata – rata mengecil hingga menghilang, (3). Sinusoid tampak sebagian tidak utuh, mengecil, serta tidak teratur hingga menghilang, (4). Vena sentralis tampak putus dengan lingkaran tidak jelas sebagian).
BAB V
KESIMPULAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Berdasarkan hasil analisis regresi pengaruh pemberian vitamin C
terhadap degeneratif dan nekrosis hati mencit, dapat disimpulkan bahwa :
1. Pemberian vitamin C berpengaruh signifikan terhadap gambaran
degeneratif hati mencit. Hal ini diindikasikan oleh nilai F-hitung
(48.464) > F-tabel (4.26) dan sig-p (0.000) < sig-α (0.05).
2. Pemberian vitamin C berpengaruh signifikan terhadap gambaran
nekrosis hati mencit. Hal ini diindikasikan oleh nilai F-hitung
(4.442) > F-tabel (4.26) dan sig-p (0.000) < sig-α (0.05)
3. Pengaruh pemberian vitamin C terhadap degeneratif lebih besar
dari pengaruh pemberian vitamin C terhadap nekrosis hati mencit
yakni 67.8% (Skala 3) berbanding 16.2% (Skala 1).
5.2. S a r a n
Hasil penelitian ini belum memperlihatkan hasil maksimal karena
kurangnya parameter penelitian, oleh karena itu penulis menyarankan agar
penelitian sejenis dapat ditindaklanjuti dengan skala penelitian yang lebih
DAFTAR PUSTAKA
ADITYA, I.M. (2010). Pengaruh ekstrak tauge (Phaseolus radiates) terhadap kerusakan sel ginjal mencit (Mus muskulus) yang di induksi parasetamol. Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret. Surakarta. ADMINISTRATION, U.S.F.A.D.(1996) Monosodium Glutamate. FDA
Medical bulletin, 26 Number 1
ARIFIN, H., WIDIANINGSIH, I., MARUSIN, N. (2007) Pengaruh pemberian akut ekstrak etanol daun capo (blumea balsamifera (L) DC ) tehadap gambaran morfolofis dan histologis hati mencit putih jantan. J.Sains Tek. Far. 12.(2):82-88.
BERATA, I. & WINAYA, I. B. O. (2003) Pengaruh pemberian ekstraksi akar alang-alang (Imperata cylindrica) Terhadap Mencit yang Menderita Kelainan Patologis Hati. (1), 1-6.
CHOUDHARY, P., MALIK, V. B. T., PURI, S. & AHLUWALIA, P. (1995) Studies on the effects of monosodium glutamate on hepatic microsomal lipid peroxidation, calcium, ascorbic acid and glutathione and its dependent enzymes in adult male mice. Department of Biochemistry, India.
EWEKA, A. O.& OM'INIABOHS, F. (2007) Histological studies of the effects of monosodium glutamate on the small intestine of adult wistar rats. j biomed, 2, 14-18.
EWEKA, A.& OM'INIABOHS, F. (2008) Histological studies of the effects of monosodium glutamate on the liver of adult wistar rats. Journal of Gastroenterology, 2,1-9.
FAROMBI, E. O. & ONYEMA, O. O .(2006) Monosodium glutamate-induced oxidative damage and genotoxicity in the rat: modulatory role of vitamin C,vitamin E and quercetin. Human & Experimental Toxicology 25, 251-259.
FAUZI, T.M. (2008) Pengaruh pemberian timbal asetat dan vitamin c terhadap peroksidasi lipid dan kualitas spermatozoa di dalam sekresi epididimis mencit jantan ( mus musculus L) Pascasarjana, Thesis, Universitas Sumatera Utara.
FOOD STANDARTDS AUSTRALIA NEW ZEALAND. (2003) Monosodium glutamate, 20, 1-36.
GAJAWAT, S., SANCHETI, G. & GOYAL, P. K. (2006) Protection against lead-induced hepatic lesions in swiss albino mice by ascorbic acid. Pharmacologyonline, 1, 140-149.
GUYTON ,A., HALL, J. (2000) Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Jakarta, EGC, hal 1103 – 1107.
HIMAWAN, S. (1973). Kumpulan Kuliah Patolog. Bagian Patologi Anatomik. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
(1989) Histopathological effects of monosodium methanearsonate (MSMA) on new zealand white rabbits ( Oryctalagus cuniculus). Toxicol, 42, 289-293.
JACOB, R. A. & BURN, B. J. (1996) Oxidative damage and defens. Am J C/in Nutr, 63, 985S-90S.
JAWI IM., MANUABA IB., SUTIRTAYASA IWP., MURUTI G. (2006) Pemberian Glutamin Menurunkan Kadar Bilirubin Darah Serta Mengurangi Nekrosis Sel-sel Hati Setelah Pemberian Aktivitas Fisik Maksimal dan Parasetamol pada Mencit, Dexa media, 19 (4): 192-195. JENIE, U. A. (2001) Penjelasan pembuatan monosodium glutamat (MSG).
UGM, hal, 1-3.
KUSUMAWATI, D. Bersahabat dengan hewan coba, Gajah Mada University Press.
KULDIP, S. & AHLUWALIA, P. (2002) Studies on the effect of monosodium glutamate (msg) administration on the activity of xanthine oxidase, superoxide ismutase and catalase in hepatic tissue of adult male mice. Journal of clinical biochemistry, India, 17, (1), 29-33.
LI, Y. & SCHELLHORN, H. E. (2007) New developments and novel therapeutic perspectives for vitamin C. The Journal of Nutrition , Canada, 2171-2179.
LINDEMANN, B., OGIWARA, Y. & NINOMIYA, Y. (2002) The discovery of umami. Chem. Senses, 27, 843-844.
LIVINGSTONE, V. H. (1981) Current clinical findings on monosodium glutamate, Can Fam Physician, 27, 1150-1152.
LUIS C, JUNQUEIRA., JOSE CARNEIRO. (1991) Histologi dasar, Jakarta, EGC, 342-356.
LUKITO, J. S., SOEKIMIN., DELYUZAR., INTAN, T. K. (1992) Pengiriman dan pengelolaan jaringan untuk diagnosis penyakit secara histopatologik. Medan, Cermin Dunia Kedokteran, 80.
MACHO, L., JEZOVA, D., ZORAD, S., FICKOVA, M. (1999) Postnatal monosodium glutamate treatment results in attenuation of corticosterone metabolic rate in adult rats. Endokrinology, Slovakia, 61-67.
FOOD STANDARS AUSTRALIA NEW ZEALAND.(2003) Monosodium glutamate. Canberra Australia. 20, 1-36.
NAKANISHI, Y., TSUNEYAMA, K., FUJIMOTO.M., SALUNGA, T. L., NOMOTO, K., AN ,J. L., TAKANO, Y., IIZUKA, S., NAGATA, M., SUZUKI, W., SHIMADA, T., ABURADA, M., NAKANO, M., SELMI, C., GERSHWIN, M. E. (2008) Monosodium glutamate (MSG): a villain and promoter of liver inflammation and dysplasia. J Autoimmun. Japan, 30, 42-50
NIIJIMA, A. (2000). Reflex effects of oral, gastrointestinal and hepatoportal glutamate sensors. Journal of Nutrition, 971-973.
NURIKA, A. (2009). Uji toksisitas akut ekstrak valerian (Valeriana
officinalis) terhadap hepar mencit balb/c. Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro. Semarang.
