Uji Efek Imunomodulator Ekstrak N-Heksan Daun Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl) Pada Mencit Jantan

(1)

(2)

(3)

Lampiran 3. Karakteristiktumbuhan mahkota dewa

Gambar : Tumbuhan mahkota dewa

(4)

Lampiran 3 (Lanjutan)

Gambar : Daun kering mahkota dewa

(5)

Lampiran 4. Gambar hasil pemeriksaan mikroskopik

Daun segar mahkota dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl) dengan perbesaran 10 x 40

Keterangan :

1. Stomata

2. Hablur Kristal Oksalat bentuk prisma

3. Rambut Penutup

4. Silem

4

1

3

(6)

Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Perhitungan Penetapan Kadar Air

a. Sampel I

(7)

Lampiran 5. (Lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Air

a. Sampel I dalam air rata-rata

= x 100%

(8)

Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Etanol

a. Sampel I dalam air rata-rata

=

x

100 %

(9)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total

a. Sampel I

Kadar abu total rata-rata =

=

(10)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu yang Tidak Larut Asam

a. Sampel I dalam asam rata-rata

=

x

100 %

(11)

Lampiran 6. Bagan alur uji pendahuluan

Dicuci dari pengotor sampai bersih Ditiriskan

Ditimbang berat basahnya

Pemeriksaan organoleptis dan makroskopik Dirajang dan dikeringkan pada suhu ±40-

50°C

Ditimbang berat keringnya

Daun Mahkota Dewa

Simplisia

Karakterisasi 1. Makroskopik 2. Mikroskopik 3. Penetapan :

a. Kadar Air

b. Kadar Sari yang Larut Dalam Air

c. Kadar Sari yang Larut dalam Etanol

d. Kadar Abu Total e. Kadar Abu yang tidak

larut dalam asam

Senyawa golongan

• Alkaloida

• Glikosida

• Flavanoida

• Steroid/triterpenoid

• Saponin

(12)

Lampiran 7. Bagan alur pembuatan EHDMD

Dimasukkankedalamsebuahbejana Ditambahkan pelarut n-heksan sebanyak bagian

Direndamselama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sesekali diaduk

Disaring dengan kertas saring

Dicuci ampas dengan n-heksan

Disaring dengan kertas saring hingga diperoleh 100 bagian

Dipindahkan kedalam bejana tertutup

Dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung dari cahaya selama 2 hari

Dienaptuangkan atau saring

Dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 400 C

Maserat I Ampas

Serbuk simplisia Daun mahkota dewa

Ekstrak kental

Maserat II

(13)

Lampiran 8. Bagan alur penelitian

25 ekor mencit jantan

EHDMD :

Kontrol negatif : Na-CMC

1 % (5 ekor)

Kontrol positif: Imboost 32,5

mg/kg bb (5 ekor) Diberikan perlakuan selama 7 hari secara per oral

Dilakukan uji bersihan karbon pada hari ke-8 setelah 7 hari pemberian perlakuan Diambil darah melalui vena ekor pada To (sebagai blanko) sebelum pemberian suspensi karbon, darah dimasukkan kedalam tube yang berisi Na-sitrat

Diambil darah sebanyak 25 µl, dililis dengan 4 ml asam asetat.

Disuntikkan suspensi karbon sebanyak 0,1 ml/kg bb secara intra vena melalui pembuluh darah di ekor

Dilakukan pengambilan darah sebanyak 25 µl pada menit ke-5,10,15, dan 20 setelah penyuntikan tinta karbon.

Ditambahkan 4 ml asam asetat dan dimasukkan kedalam kuvet

Diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 640,5 nm

Setelah 12 jam diambil darahnya mencit dikorbankan , organ hati dan limfa mencit diambil dan ditimbang

Dihitung konstanta kecepatan eliminasi karbon (K), Indeks Fagositosis dan indeks stimulasi

(14)

Lampiran 9. Gambar alat dan bahan

Gambar: rotary evaporator

Gambar: Spektofotometer UV-Vis

(15)

Lampiran 10. Gambar Hewan

Gambar: Mencit Jantan

(16)

Lampiran 11. Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Suhardjono, 1995).

(17)

Lampiran 12. Contoh perhitungan dosis

a) Contoh perhitungan dosis CMC Na 1%

- Pembuatan CMC Na 1 %

Volume yang diberikan = 0,25ml

b) Contoh perhitungan dosis Imboost

- Dosis penggunaan imboost pada manusia (berat 70 kg) = 250 mg Konversi dosis manusia ke hewan mencit (lampiran 11) = 0,0026

• 250mg x 0,0026 = 0,65 mg (untuk 20 g mencit)

32,5 _32,5_mg/kg_bb

• Konsentrasi imboost 0,5% dalam 100 ml suspensi CMC Na menggandung 500 mg Imboost (2 tablet).

-Konsentrasi Imboost : 5mg/ml

Jumlah suspensi yang diberikan : _0,16_ml

mg/ml 5

mg

(18)

c) Contoh perhitungan dosis EHDMD Untuk dosis 100 mg/kg bb - Konsentrasi EHDMD 1 % dalam 100 ml suspensi CMC Na 1%

Konsentrasi EHDMD : 10mg/ml ml

100 mg 1000

=

- Jumlah yang diberikan : _x₂₅_g _2,5_mg

g 1000

mg

100 ₌

- Jumlah suspensi yang diberikan : _0,25_ml

mg/ml 10

mg

(19)

(20)

Lampiran 13. (Lanjutan)

(21)

(22)

(23)

(24)

Lampiran 14. Tabel contoh jumlah obat yang diberikan kepada mencit .

Kelompok No Berat (g)

Dosis (mg/kg BB)

Konsentrasi Jumlah Obat (mg)

Keterangan :

I : CMC Na 1%

(25)

Lampiran 16. Hasil perhitungan konstanta kecepatan eliminasi karbon (K), dan indeks fagositosis.

Kelompok N

(26)

Lampiran 17. Contoh perhitungan konstanta kecepatan eliminasi karbon (K). Indeks fagositosis, dan indeks stimulasi.

Misalkan EHDMD dosis 100 mg/kg bb

1. Konstanta kecepatan eliminasi karbon (K) = Log OD5 – log OD20 t2 – t1

dimana: OD5 adalah absorbansi pada menit ke-5 OD20 adalah absorbansi pada menit ke-20 T1 adalah waktu pertama pengambilan darah

T2 adalah waktu terakhir pengambilan darah (Kala, et al., 2015). Misalnya diketahui : OD5 = 0,070

OD20 = 0,029 t1 = 5 t2 = 20

K = = 0,0255

2. Indeks Fagositosis

Indeks fagositosis =

Misalnya diketahui : Berat hewan : 25,17 g berat hati + berat limfa

(27)

Lampiran 17. (lanjutan)

3. Indeks stimulasi

Indeks stimulasi =

Misalnya = Indeks fagositosis kelompok uji dosis 100 mg/kg bb = 0,1068 Indeks fagositosis kelompok kontrol negatif = 0,0314

Indeks stimulasi = = 3,4012

Indeks fagositosis kelompok uji Indeks fagositosis kelompok kontrol

(28)

Lampiran 18. Tabel rata-rata ± SE indeks fagositosis dan Nilai indeks stimulasi

Rata-rata indeks fagositosis

Kelompok

Indesk stimulasi

Kelompok Perlakuan

Indeks Stimulasi

Imboost 32,5 mg/kg bb 6,1976

EHDMD 25 mg/kg bb 1,9617

EHDMD 50 mg/kg bb 2,4617

(29)

Lampiran 19. Hasil analisis ANOVA laju eliminasi karbon

ANOVA

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Menit5 Between Groups .000 4 .000 .357 .836

Within Groups .002 20 .000

Total .002 24

Menit10 Between Groups .003 4 .001 16.490 .000

Total .004 24

Total .007 24

(30)

Lampiran 19. (lanjutan)

Multiple Comparisons

Tukey HSD

Dependent Variable

(I) kelompok perlakuan

(J) kelompok perlakuan

95% Confidence Interval

Imboost 32,5 mg/kg bb

(31)

Lampiran 19. (lanjutan)

Tukey HSD

Dependent Variable

(I) kelompok

perlakuan (J) kelompok perlakuan

Mean Difference

(I-J)

Std. Error Sig.

Imboost 32,5 mg/kg bb .012000*

.003875 .040 .00040 .02360

(32)

Lampiran 20. Data hasil analisis SPSS ANAVA satu arah Indeks Fagositosis Descriptives

Indeks Fagositosis

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Imboost 32.5 mg/kg bb

Indeks Fagositosis

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .078 4 .019 217.380 .000

(33)

Indeks Fagositosis Tukey HSD

(I) Kelompok Perlakuan

(J) Kelompok Perlakuan

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

Imboost 32.5 mg/kg bb

CMC Na 1% .1631600* .0059751 .000 .145280 .181040

EHDMD 25 mg/kg bb .1329400* .0059751 .000 .115060 .150820 EHDMD 50 mg/kg bb .1172600* .0059751 .000 .099380 .135140

(34)

Lampiran 20. (Lanjutan) Homogeneous Subsets

Indeks Fagositosis

Tukey HSDa

Kelompok Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3 4

CMC Na 1% 5 .031460

EHDMD 25 mg/kg bb 5 .061680

EHDMD 50 mg/kg bb 5 .077360

EHDMD 100 mg/kg bb 5 .106860

Imboost 32.5 mg/kg bb 5 .194620

Sig. 1.000 .103 1.000 1.000